CN113786387B - 一种石杉碱甲脂质体及其在治疗阿尔兹海默症药物中的应用 - Google Patents

一种石杉碱甲脂质体及其在治疗阿尔兹海默症药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种石杉碱甲脂质体及其在治疗阿尔兹海默症药物中的应用。本发明选择磷脂和胆固醇共同作为脂质载体，能够有效防止脂质体在储藏过程中发生渗漏，降低有关物质的含量，延长药品的货架期，提高药物稳定性高。动物实验研究表明，利用本发明工艺制备的制剂能够明显缓解大鼠阿尔兹海默症的症状，升高大鼠脑组织内5‑羟色胺的含量、降低大鼠脑内乙酰胆碱酯酶含量。

Description

一种石杉碱甲脂质体及其在治疗阿尔兹海默症药物中的应用
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种石杉碱甲脂质体及其在治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
背景技术
石杉碱甲从石杉科植物石杉全草中分离得到的新结构生物碱，药理研究结果表明石杉碱甲是一种高效、可逆的胆碱酯酶抑制剂，对真性胆碱酶(AChE)有很强的抑制作用。1993年美国FDA批准.上市，1996年我国批准为二类新药，用于治疗和预防老年性痴呆及提高青少年智力记忆。临床试验证实，它能防止脑组织中乙酚胆碱的分解，提高脑力活动效率，直接改善记忆力。具有选择性高、毒性低和药效时间长等特点。
目前涉及石杉碱甲的制剂产品有片剂、胶囊和注射剂。但是石杉碱甲生物半衰期较短，容易引起的血药浓度峰谷现象，由此产生耳呜、头晕、肌束颤动、出汗腹痛、呕吐、大便增加、视力模糊、心率改变、流涎、思睡等不良反应，影响该药的治疗效果。
现有技术涉及石杉碱甲缓释微球、石杉碱甲缓释骨架片、石杉碱甲滴丸、石杉碱甲植入剂等，但是石杉碱甲脂质体现有技术研究较少。
中国专利CN101658494A公开了一种石杉碱甲固体脂质纳米粒及其制备方法，由石杉碱甲、脂质材料、乳化剂、水，采用高压乳匀法制备而成，所制备的石杉碱甲固体脂质纳米粒的粒径为10～100nm，但是存在脂质体包封率及载药量低等缺点，不符合药典规定的包封率需大于80％的规定，包封率低会直接增大药物的临床使用剂量，尤其石杉碱甲主要受众群体是老年患者，服用药物剂量的增大非常不利于老年患者送服药物。
中国专利CN102813653B公开了一种治疗脑缺血性痴呆的药物及其制备方法。该药物主要由石杉碱甲和银杏内酯B制备而成，或为石杉碱甲和银杏内酯B结合的固体脂质纳米粒，其中石杉碱甲与银杏内酯B的质量比例为0.05-0.5：5-50，但是制备成复方制剂联合应用，成分复杂，作用机理不清楚、重复性不好，副作用不明晰。
发明内容
克服现有技术的不足，本发明提供了一种石杉碱甲脂质体，通过筛选脂质体的种类和比例，解决了脂质体在储存过程中出现药物渗漏的问题，提供药物稳定性，增加包封率，从而延长了药物的保质期，制备工艺简单，有利于大规模生产。
具体而言，本发明的技术方案如下：
本发明提供了一种石杉碱甲脂质体，可以作为石杉碱甲制剂的中间体。
所述的石杉碱甲脂质体包含：(1)石杉碱甲；(2)脂质体。
所述的脂质体为磷脂和胆固醇的组合。胆固醇为中性脂质，其本身不能取脂质双层结构，但可以调节双分子层的流动性、通透性同增加包封率、防止脂质体在储存过程中出现药物渗漏。胆固醇与磷脂在脂质体中是间隔定向排列的，胆固醇的羟基基团朝向磷脂的极性头部，脂肪族链朝向平行于磷脂的两条烃链，二者的排列情况见图1(a)。
进一步的，所述磷脂和胆固醇的重量份比为1-3:1，优选为2:1。
进一步的，所述的磷脂包括甘油磷脂、鞘脂类；所述的甘油磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、缩醛磷脂；所述的鞘脂类包括鞘磷脂、鞘糖脂。
具体的，磷脂优选为缩醛磷脂。
进一步的，所述石杉碱甲和脂质体的重量份比为1:20-80，优选为1:60。
缩醛磷脂和胆固醇在溶液中形成脂质体时，其各自的疏水链指向内部，极性头部在膜的内外两个外表面，构成封闭双层结构，图1(a)。其疏水链内部包含石杉碱甲这种疏水性药物，如图1(b)。
进一步的，所述石杉碱甲脂质体还可以加入水溶性药物。加入水溶性药物，例如维生素B9这种起到辅助作用的药物，其水溶性药物位于脂质体极性头部包裹的腔室，如图1(c)，将水溶性药物和难溶于水的药物共同载入脂质体中，既解决了石杉碱甲难溶的问题，又可以起到辅助治疗的效果。
进一步的，所述石杉碱甲脂质体可与药学上可接受的辅料制成制剂，所述的制剂包括但不限于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、注射剂、缓释制剂等，所述辅料包括但不限于填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂等。
本发明的第二个目的在于提供一种制备石杉碱甲脂质体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将石杉碱甲、脂质体和/或水溶性药物溶解于有机溶剂，超声分散，于常压条件30-40℃水浴旋蒸使溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝6.0-8.0的缓冲溶液，30-45℃水合反应0.5-1h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中0-8℃冷藏。
进一步的，方法包括以下步骤：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇和/或水溶性药物溶解于无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体。
本发明的第三个目的在于提供一种石杉碱甲脂质体在制备治疗阿尔兹海默症药物中的用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明选择磷脂和胆固醇共同作为脂质载体，尤其是选用缩醛磷脂和胆固醇，并优化其比例，能够有效防止脂质体在储藏过程中发生渗漏，增加包封率，延长药品的货架期。
(2)本发明筛选石杉碱甲与脂质体的比例，优化制备方法将石杉碱甲装载入脂质体内，有效提高石杉碱甲的包封率，降低了有关物质的含量，提高了药物稳定性高，且制备工艺简单，适合大规模生产。
(3)动物实验研究表明，本发明石杉碱甲脂质体以及利用本发明石杉碱甲脂质体制成的制剂能够缓解大鼠阿尔兹海默症的症状，明显升高大鼠脑组织内5-羟色胺的含量，降低大鼠脑内乙酰胆碱酯酶含量，效果优于市售石杉碱甲制剂。
附图说明
图1：(a)磷脂与胆固醇构成脂质体的示意图；(b)石杉碱甲载入脂质体的示意图；(c)石杉碱甲与水溶性药物共同载入脂质体示意图
图2：石杉碱甲脂质体透射电镜图
图3：大鼠Morris水迷宫实验的空间探索实验目标象限距离的百分比图
图4：大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶含量表达
图5：大鼠脑组织5-羟色胺含量表达
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明做进一步的说明，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例，实施例仅用于解释本发明。本领域技术人员应该理解的是，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 200mg
胆固醇 100mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
实施例2：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 66.7mg
胆固醇 33.3mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝6.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，40℃水合反应1h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中4℃冷藏。
实施例3：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 266mg
胆固醇 134mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件40℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝8.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，30℃水合反应0.5h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中2℃冷藏。
实施例4：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
磷脂酰丝氨酸 200mg
胆固醇 100mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
实施例5：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
磷脂酰乙醇胺 200mg
胆固醇 100mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
实施例6：石杉碱甲脂质体
Figure BDA0003316345410000051
制备方法：
(1)将石杉碱甲、维生素B9、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
实施例7：片剂(100片)
Figure BDA0003316345410000061
制备方法：
(1)粉碎过筛：将处方量的微晶纤维素、滑石粉、交联聚维酮分别粉碎，过筛；
(2)混合；将步骤(1)中过筛后的微晶纤维素、交联聚维酮与实施例1石杉碱甲脂质体置于混合机中混合10min，加入滑石粉，继续混合10min；
(3)制粒、干燥、压片。
实施例8：颗粒剂(100份)
Figure BDA0003316345410000062
制备方法：
将石杉碱甲脂质体(实施例1)和将粉碎过筛后的淀粉、微粉硅胶、低取代羟丙纤维素倒入制粒机中，混合，加入适量水，制粒，挤出，滚圆，干燥，即得。
对比实施例1：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
二棕榈酰磷脂酰胆碱 200mg
胆固醇 100mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
对比实施例2：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 300mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
对比实施例3：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
大豆磷脂 300mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、大豆磷脂溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
对比实施例4：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 40mg
胆固醇 40mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
对比实施例5：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 500mg
胆固醇 250mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
对比实施例6：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 200mg
胆固醇 100mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件50℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝7.0的磷酸二氢钾缓冲溶液，20℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
对比实施例7：石杉碱甲脂质体
石杉碱甲 5mg
缩醛磷脂 200mg
胆固醇 100mg
制备方法：
(1)将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于50ml无水乙醇中，超声分散，于常压条件35℃水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
(2)向步骤(1)中加入pH＝5.0的枸橼酸缓冲溶液，35℃水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体，置于冰箱中5℃冷藏。
验证实施例
一、质量评价
1. 1、形态观察
取适量经水稀释的石杉碱甲脂质体滴加在覆盖有碳膜的铜网上，自然晾干后，在透射电镜下观察其形态，如图2所示，实施例1制备的石杉碱甲脂质体，形态饱满，脂质体表面光滑，大小均一，石杉碱甲脂质体的直径基本为50nm左右。
2.包封率
包封率是脂质体质量评价的一个重要指标，是指包入脂质体的药物量占体系总药量的百分比，
包封率＝(脂质体中包封的药物量/投入总药量)×100％
＝(投入总药量-未包入脂质体内的游离药物量)/投入总药量×100％
采用葡聚糖凝胶、超速离心法、透析法等分离方法将溶液中游离药物和脂质体分离，分别测定，计算包封率。
表1实施例与对比实施例脂质体的包封率(％)
包封率(％)
实施例1 98.92
实施例2 97.31
实施例3 97.17
实施例4 96.30
实施例5 95.67
实施例6 95.03
对比实施例1 82.31
对比实施例2 80.89
对比实施例3 74.62
对比实施例4 84.37
对比实施例5 80.52
对比实施例6 90.67
对比实施例7 91.78
通过表1可以看出，包封率与脂质体的种类、脂质体与药物的比例、水相介质等均相关。本发明所保护的技术方案制备而成的脂质体制剂中脂质体包封率均在95％以上，最佳技术方案(实施例1)的包封率高达98.92％；实施例6同时包裹了脂溶性和水溶性药物，总包封率也能够达到95.03％。而对比实施例方案制备的制剂脂质体包封率普遍较低，尤其是对比实施例3选择其他的脂质载体(大豆磷脂)包封药物，包封率仅有74.62％。
3.渗漏率
渗漏率是指脂质体在贮藏一段时间后，渗漏到介质中的药物量与贮藏前脂质体中包封的药量指比，是脂质体稳定性的一个评价指标，测定方法同包封率方法。
渗漏率(％)＝(贮藏后渗漏到介质中药物量/贮藏前脂质体中包封的药物量)×100％
表2实施例与对比实施例脂质体的渗漏率(％)
Figure BDA0003316345410000101
Figure BDA0003316345410000111
通过表2可以看出，本发明技术方案所制备的石杉碱甲脂质体渗漏率较低，稳定性较好，不同温度对脂质体的渗漏率影响较小，尤其是对于4℃和25℃的储存条件，渗漏率基本一致，说明使用本发明所保护的技术方案制备的脂质体可以在25℃的条件下贮存。而对比实施例的渗漏率普遍偏高，说明脂质体的种类和脂质体与药物的比例、水相介质缓冲剂的选择均影响脂质体的渗漏率。
4.有关物质
照高效液相色谱法(通则0512)测定。
供试品溶液：取本品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液。
对照溶液：精密量取供试品溶液适量，用0.01mol/L盐酸溶液定量稀释制成每1ml中含2.5μg的溶液。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.72g，加水1000ml溶解，用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈(86∶14)为流动相；检测波长为310nm；进样体积20μl。
系统适用性要求：理论板数按石杉碱甲峰计算不低于2000。
测定法：精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的2倍。
限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(2.5％)。
(加速试验条件：温度40℃±2％，相对湿度：75％±5％)
表3实施例与对比实施例有关物质含量(％)
Figure BDA0003316345410000121
Figure BDA0003316345410000131
通过表3有关物质含量测定可知，将石杉碱甲制成脂质体可以降低有关物质含量，提高稳定性，尤其是实施例7所制备的石杉碱甲片剂与市售制剂的有关物质对比可知，本发明的技术方案有关物质含量明显低于市售制剂。
二、药理学实验
发明人开展相关药效学试验研究以证明本发明石杉碱甲脂质体在治疗老年痴呆的功效。需要说明的是，以下实验研究均是在急性毒性试验、长期毒性试验证明药物安全性基础之上开展，实验研究中的给药剂量均在安全剂量范围之内。下述药效学试验所选取的药品为本发明具有代表性的配方所得的药品；本发明所包含的其它实施例所得制剂，发明人同样进行了药效学实验，实验结果具有相同或类似的效果，但由于篇幅限制，在此不一一列举。
1.实验动物
SD大鼠，SPF级，180-220g，实验动物许可证号：SYXK(鲁)20180008，购于鲁南制药集团股份有限公司，实验前在标准条件下适应性喂养1周。
2.方法
2.1实验动物
SD大鼠若干只，雌雄各半，SPF级，180-220g，实验前适应性饲养一周。
2.2造模方式和分组
造模原理：在D-半乳糖腹腔注射致衰老的基础上双侧海马注射Aβ25-35，建立大鼠老年性痴呆模型。
造模方法：模型组大鼠腹腔注射由生理盐水配制的1％D-半乳糖48mg/kg，空白组注射等剂量的生理盐水。6周后，3％戊巴比妥(35mg/kg)腹腔注射麻醉下，脑立体定位仪固定头部，常规消毒皮肤，在颅顶中线切剪开皮肤，暴露前囟，参照大鼠脑立体定位图谱，立体定位海马后(以前囟为零点，AP＝-3.5mm，ML＝2.0mm，DV＝3.0mm)，钻开颅骨。用生理盐水稀释成浓度为5μg/μl的Aβ25-35μl，37℃孵育1周，变为聚集状态后，用微量注射器在5min内注入海马，留针5min，去针用牙托粉填补针孔，缝合手术切口并消毒，空白组10只大鼠不作处理。最后共有58只建模成功。
实施例1组、实施例7组、市售石杉碱甲片组、模型组，共四组。每组10只建模成功的大鼠，雌雄各半，空白组10只大鼠，雌雄各半。
2.2.3给药
实施例1组：27μg/kg，配制成5ml悬浮液灌胃，每日1次，共7d；
实施例7组：27μg/kg，配制成5ml悬浮液灌胃，每日1次，共7d；
市售石杉碱甲片组：27μg/kg，配制成5ml悬浮液灌胃，每日1次，共7d；
模型组：5ml生理盐水灌胃，每日1次，共7d；
空白组：5ml生理盐水灌胃，每日1次，共7d。
2.3.统计学处理
采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用
Figure BDA0003316345410000141
表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间采用独立样本T检验方式分析。以P<0.05为差异有统计学意义。
3.实验项目与结果
3.1大鼠生存行为学观察
Morris水迷宫实验进行大鼠学习与记忆行为测试，水迷宫试验分为两部分：定位航行实验和空间探索实验。在训练期间，连续5d每天进行隐蔽平台实验，允许大鼠自由探索1min，然后将平台从池的目标象限中移出，第6天进行空间探索实验，摄像机安装在迷宫上方，用于同步记录小鼠活动。
表4各组大鼠在水迷言中寻找隐藏平台的逃避潜伏期时间(
Figure BDA0003316345410000151
n＝10)
Figure BDA0003316345410000152
注：与空白组比较，*P<0.01；
与模型组比较，#P<0.01
水迷宫实验结果发现，与空白组比较，模型组大鼠逃避潜伏期延长，且运动轨迹杂乱，造模成功。与模型组比较，实施例1组、实施例7组、市售石杉碱甲片组的大鼠逃避潜伏期相比模型组均减少，说明大鼠的空间学习能力较模型组有所改善。实施例1组、实施例7组改善大鼠的空间学习能力的效果优于市售石杉碱甲片组。(表4、图3)
3.2大鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶含量测定
取大鼠脑组织上清液为样品，按胆碱酯酶试剂盒说明书步骤测定脑组织胆碱酯酶含量。
表5各组大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶含量表达(
Figure BDA0003316345410000153
n＝10)
乙酰胆碱酯酶(μmo1/h/g)
空白组 269.46±15.64
模型组 392.45±21.48*
实施例1组 286.48±16.78*<sup>#</sup>
实施例7组 291.45±15.73*<sup>#</sup>
市售石杉碱甲片组 330.21±18.67*<sup>#</sup>
注：与空白组比较，*P<0.01；
与模型组比较，#P<0.01
由表5可知，模型组与空白组大鼠比较，模型组大鼠脑内乙酰胆碱酯酶活性明显升高，实施例1组、实施例7组、市售石杉碱甲片组与模型组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)，说明实施例1石杉碱甲脂质体、实施例7石杉碱甲脂质体片、市售石杉碱甲片均能明显降低大鼠脑内乙酰胆碱酯酶含量，但是实施例1石杉碱甲脂质体组、实施例7石杉碱甲脂质体片组降低大鼠脑内乙酰胆碱酯酶含量的效果明显优于市售石杉碱甲片组(图4)。
3.3大鼠脑组织中5-羟色胺含量的测定
将大鼠迅速处死，取脑，迅速放入冰冷的生理盐水中，去除脑膜和血管，分离海马，称重，放入预先冰冷的玻璃匀浆器中，加入正丁醇5ml和HCl(0.01mol)0.7ml，匀浆2min，倾出匀浆至离心管中，1500rpm离心10min，吸上清液2ml加入0.1mol磷酸盐缓冲液(pH6.5)1.5ml的带塞离心管中，振摇10min。吸2ml上清液到含有5ml正庚烷和0.5ml HCl(0.1mol)的带塞离心管中，振摇10min，5-HT被抽提到HCl溶液中，分别离心(300rpm/min，10min)，分开有机相和水相。0.3mlHCl溶液用邻苯二甲醛缩合法测定5-羟色胺的含量。
表6各组大鼠脑组织5-羟色胺含量表达(
Figure BDA0003316345410000161
n＝10)
5-羟色胺(μg/g)
空白组 8.64±0.39
模型组 3.21±0.13*
实施例1组 7.01±0.22*<sup>#</sup>
实施例7组 6.89±0.18*<sup>#</sup>
市售石杉碱甲片组 5.11±0.29*<sup>#</sup>
注：与空白组比较，*P<0.01；
与模型组比较，#P<0.01
由表6可知，模型组与空白组大鼠比较，模型组大鼠脑内5-羟色胺含量明显降低，实施例1组、实施例7组、市售石杉碱甲片组与模型组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)，说明实施例1石杉碱甲脂质体、实施例7石杉碱甲脂质体片、市售石杉碱甲片均能明显升高大鼠脑内5-羟色胺含量，但是实施例1石杉碱甲脂质体组、实施例7石杉碱甲脂质体片组升高大鼠脑内5-羟色胺含量的效果明显优于市售石杉碱甲片组(图5)。

Claims (4)

1.一种治疗阿尔兹海默症的石杉碱甲脂质体，其特征在于，所述的石杉碱甲脂质体包含石杉碱甲和脂质体，且石杉碱甲和脂质体的重量份比为1:20-80；所述脂质体为缩醛磷脂和胆固醇的组合，所述缩醛磷脂和胆固醇的重量份比为1-3:1；
所述石杉碱甲脂质体的制备方法包括以下步骤：
（1）将石杉碱甲、缩醛磷脂、胆固醇溶解于无水乙醇中，超声分散，于常压条件35°C水浴旋蒸使至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜后，减压蒸馏至溶剂完全挥发；
（2）向步骤（1）中加入pH=7.0的磷酸缓冲溶液，35°C水合反应0.8h得到乳浊液，超声分散后即得石杉碱甲脂质体。
2.根据权利要求1所述的石杉碱甲脂质体，所述缩醛磷脂和胆固醇的重量份比为2:1。
3.根据权利要求1所述的石杉碱甲脂质体，其特征在于，所述石杉碱甲和脂质体的重量份比为1:60。
4.根据权利要求1所述的石杉碱甲脂质体，其特征在于，所述石杉碱甲脂质体与药学上可接受的辅料制成制剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN101658494A (zh) * 2009-09-22 2010-03-03 广东药学院 一种石杉碱甲固体脂质纳米粒及其制备方法
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