CN113773408B - 一种昆布多糖类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体公开了一种昆布多糖类化合物及其制备方法与应用，昆布多糖类化合物为经磺酸基团修饰的昆布多糖；其制备方法，包括以下步骤：将昆布多糖、吡啶和/或吡啶衍生物加入有机溶剂中，反应后进行干燥，得固体产物；将固体产物加入到有机溶剂中溶解，得溶解液；将含磺酸基团的有机物加入有机溶剂中，然后加入溶解液混合，得反应液；将反应液进行加热，经冷却后倒入有机溶剂中，干燥后，得昆布多糖类化合物。经磺酸基团修饰的吡啶昆布多糖磺酸盐可调节肠道黏液屏障，提高黏蛋白MUC₂的表达量；清除多余的肠道自由基，维护肠道正常功能的进行，适用于制备肠道屏障修复药物。

Description

一种昆布多糖类化合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种昆布多糖类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

随着人们生活水平的不断提高，但饮食结构却越来越不合理，高糖、高脂肪、高盐食物摄入过多，膳食多糖摄入不足。这种饮食习惯的改变引发了一系列肠道问题，严重威胁肠道健康。肠道黏膜一旦破坏可导致肠通透性异常，外源性有害物质就会侵犯宿主肠道，进而导致多种肠道疾病甚至全身性反应，对人体产生非常严重的后果，如炎症性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩病等炎症性肠病，该类疾病病程漫长、难以彻底治愈、易复发、且容易诱发肿瘤。

肠道黏膜屏障是保护肠道健康的重要一环，其结构基础主要由肠上皮细胞和覆盖在上皮细胞的黏液层所组成。黏液层是杯状细胞分泌的黏蛋白，主要为黏蛋白2(MUC₂)，是一种高度糖基化的大分子蛋白。肠道黏膜一旦破坏可导致肠通透性异常，外源性有害物质就会侵犯宿主肠道，进而导致多种肠道疾病甚至全身性反应。因此肠道黏膜屏障的完整性对人体肠道健康至关重要。

肠道是物质与能量代谢十分旺盛的器官，氧化还原反应剧烈，细胞代谢产生大量自由基。一定水平的自由基对肠道免疫功能具有积极作用，但过量自由基会引起肠道损伤、脂质过氧化、导致细胞活性减弱直至老化等一系列危害，因此测定多糖对自由基的清除能力一定程度上可反应抗氧化活性的强弱。肠黏膜上皮组织及细胞受到刺激后，会产生活性氧自由基(ROS)，并引起严重的炎症反应。因此肠道自由基的适量对于肠道屏障健康至关重要。

因此，亟需研制一种对肠道具有屏障修复作用的药物，对于肠道健康具有重要意义。

发明内容

本发明提出一种昆布多糖类化合物及其制备方法与应用，以解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。

为克服上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐。

具体的，如式(1)所示的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐：

式(1)

其中：n为1-100之间的整数；优选的，n为10-30之间的整数。

本发明以昆布多糖为主体原料，通过在昆布多糖分子中加上吡啶基团，并在吡啶环上再添加上一个磺酸基团，以获得吡啶昆布多糖磺酸盐。昆布作为一种重要的药食同源性褐藻植物，具有较高的药用价值，昆布多糖(laminaran)作为昆布主要成分之一，具有多种生物活性，如抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等。而多糖的生物活性与其结构密切相关，经磺酸基团修饰，可以改变昆布多糖的空间结构，增加糖链的屈伸度，提高水溶性，并引发昆布多糖活性变化。本发明通过分析吡啶昆布多糖磺酸盐对肠道屏障的修复作用及其调控机制，证实了具有式(1)结构的吡啶昆布多糖磺酸盐能够能够调节肠道黏液屏障，提高黏蛋白MUC₂的表达量；清除多余的肠道自由基，维护肠道正常功能的进行。

作为上述方案的进一步改进，制备所述昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的原料包括昆布多糖、吡啶和/或吡啶衍生物和含磺酸基团的有机物。

优选的，所述吡啶和/或吡啶衍生物包括异烟酸甲酯；

优选的，所述含磺酸基团的有机物包括1,3-丙烷磺酸内酯或氯磺酸。

作为上述方案的进一步改进，所述昆布多糖与吡啶和/或吡啶衍生物的质量体积比为1g：(10-20)mL。

进一步优选的，所述昆布多糖与吡啶和/或吡啶衍生物的质量体积比为1g：15mL。

本发明的第二方面提供了一种昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法。

具体的，一种昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括以下步骤：

(1)将昆布多糖、吡啶和/或吡啶衍生物加入有机溶剂中，反应后进行干燥，得固体产物；

(2)将步骤(1)制得的所述固体产物加入到有机溶剂中溶解，得溶解液；

(3)将含磺酸基团的有机物加入有机溶剂中，然后加入步骤(2)制得的所述溶解液混合，得反应液；

(4)将步骤(3)制得的所述反应液进行加热，经冷却后倒入有机溶剂中，干燥后，得所述昆布多糖类化合物。

具体的，步骤(1)中，当制备原料为昆布多糖和异烟酸甲酯时，所述反应的合成过程如下，其中：Laminarin-Pyridine(LPY)为吡啶昆布多糖：

步骤(3)中，当制备原料为1,3-丙烷磺酸内酯和步骤(2)制得的溶解液时，所述反应液的合成过程如下，其中：Laminarin Zwitterion Sulfonate(LZS)为吡啶昆布多糖磺酸盐：

作为上述方案的进一步改进，步骤(1)中，所述反应的工艺条件为：温度100-140℃，充惰性气体搅拌回流24-72小时。

优选的，步骤(1)中，所述干燥的工艺条件为：在55-75℃下进行旋蒸干燥。

优选的，步骤(1)中，所述溶剂包括甲苯或无水乙醇。

作为上述方案的进一步改进，步骤(2)中，所述固体产物与所述有机溶剂的质量体积为1g：(5-20)mL。

优选的，步骤(2)中，所述固体产物与所述有机溶剂的质量体积为1g：10mL。

优选的，步骤(2)中，所述溶剂包括二甲基甲砜或二甲基甲酰胺。

作为上述方案的进一步改进，步骤(3)中，所述含磺酸基团的有机物与所述有机溶剂的体积比为1：(1-4)。

优选的，步骤(3)中，所述含磺酸基团的有机物与所述有机溶剂的体积比为1：2。

优选的，步骤(3)中，所述溶剂包括二甲基甲砜或二甲基甲酰胺。

作为上述方案的进一步改进，步骤(4)中，所述加热的工艺条件为：温度70-90℃下搅拌36-60小时；

优选的，步骤(4)中，所述加热的工艺条件为：温度80℃下搅拌48小时或54小时；

优选的，步骤(4)中，所述反应液与所述有机溶剂的体积比为1：(1-4)。

进一步优选的，步骤(4)，中所述反应液与所述有机溶剂的体积比为1：2。

优选的，步骤(4)中，所述溶剂包括丙酮或无水乙醇。

进一步优选的，步骤(4)中，所述溶剂的温度为4℃。

本发明的第三方面提供了昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的应用。

具体的，上述昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐在制备肠道屏障修复的药物中的应用。

本发明利用硫酸葡聚糖酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型，进行了基于肠道屏障结构的吡啶昆布多糖磺酸盐调控机制分析实验，结果证明：吡啶昆布多糖磺酸盐可改善了小鼠结肠损伤情况；改善小鼠的肠道黏液屏障结构；提高参与肠道屏障结构构建的蛋白的表达，加快损伤的肠道粘膜屏障的修复过程；清除多余的肠道自由基，维护肠道正常功能的进行。

优选的，所述小鼠结肠损伤情况包括：结肠充血、溃疡完整性；

优选的，所述溃疡完整性包括结肠绒毛结构完整性、上皮细胞排列情况；

优选的，改善小鼠的肠道黏液屏障结构包括：改善柱状上皮结构、补充杯状细胞、减少炎症细胞的浸润和降低组织病理学损伤。

优选的，所述参与肠道屏障结构构建的蛋白的表达包括黏蛋白MUC₂表达。

本发明的上述技术方案相对于现有技术，至少具有如下技术效果或优点：

本发明通过先向昆布多糖分子中引入一个吡啶基团得到中间产物，然后引入磺酸基团，以获得吡啶昆布多糖磺酸盐，经磺酸基团修饰的昆布多糖，改变了昆布多糖的空间结构，增加糖链的屈伸度，提高水溶性，并引发了昆布多糖活性变化。利用硫酸葡聚糖酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型，进行基于肠道屏障结构的吡啶昆布多糖磺酸盐调控机制分析实验，证实了吡啶昆布多糖磺酸盐可调节肠道黏液屏障，提高黏蛋白MUC₂的表达量；清除多余的肠道自由基，维护肠道正常功能的进行。为吡啶昆布多糖磺酸盐的生理功能研究提供了理论依据，有利于促进昆布多糖类产业的开发和推广，为肠道疾病的临床治疗提供治疗依据。同时，本发明的制备方法简单，不需要经过复杂的化学合成反应，且反应产物较为单一，产率高，适用于产业化规模生产。

附图说明

图1为昆布多糖及吡啶昆布多糖磺酸盐的红外光谱图；

图2为小鼠结肠组织H&E染色结果图；

图3为小鼠结肠组织阿利新蓝染色结果图；

图4为小鼠结肠组织免疫组化染色结果图。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解，有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围，同时，下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品，未详细提及的工艺步骤或制备方法均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。

实施例1

一种昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将昆布多糖和异烟酸甲酯加入甲苯中，其中：昆布多糖和异烟酸甲酯的质量体积比为1g：15mL，温度为120℃，充氮气作为保护气，搅拌回流48小时，然后在65℃下旋蒸，得固体产物；

(2)将步骤(1)制得的固体产物加入到二甲基亚砜中溶解，其中：固体产物与二甲基亚砜的质量体积比为1g：10mL，在室温下搅拌均匀，得溶解液；

(3)将1,3-丙烷磺酸内酯加入二甲基亚砜中，其中：1,3-丙烷磺酸内酯和二甲基亚砜的体积比为1：2，然后逐滴加入步骤(2)制得的溶解液中，混合均匀，得反应液；

(4)将步骤(3)制得的反应液在80℃下搅拌48小时，冷却至室温后将其倒入4℃的丙酮中，其中反应液和丙酮的体积比为1：2，干燥后，得到本实施例的吡啶昆布多糖磺酸盐。

本实施例制得的吡啶昆布多糖磺酸盐，产率为65％，其结构式为式(1)，其中：n的值为23。

式(1)

实施例2

一种昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将昆布多糖和异烟酸甲酯加入甲苯中，其中：昆布多糖和异烟酸甲酯的质量体积比为1g：10mL，温度为130℃，充氮气作为保护气，搅拌回流48小时，然后在65℃下旋蒸，得固体产物；

(2)将步骤(1)制得的固体产物加入到二甲基亚砜中溶解，其中：固体产物与二甲基亚砜的质量体积比为1g：15mL，在室温下搅拌均匀，得溶解液；

(3)将1,3-丙烷磺酸内酯加入二甲基亚砜中，其中：1,3-丙烷磺酸内酯和二甲基亚砜的体积比为1：1.5，然后逐滴加入步骤(2)制得的溶解液中，混合均匀，得反应液；

(4)将步骤(3)制得的反应液在90℃下搅拌36小时，冷却至室温后将其倒入4℃的丙酮中，其中反应液和丙酮的体积比为1：1.5，干燥后，得到本实施例的吡啶昆布多糖磺酸盐。

本实施例制得的吡啶昆布多糖磺酸盐，产率为63％，其结构式为式(1)，其中：n的值为18。

式(1)

实施例3

一种昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将昆布多糖和异烟酸甲酯加入甲苯中，其中：昆布多糖和异烟酸甲酯的质量体积比为1g：20mL，温度为110℃，充氮气作为保护气，搅拌回流36小时，然后在75℃下旋蒸，得固体产物；

(2)将步骤(1)制得的固体产物加入到二甲基亚砜中溶解，其中：固体产物与二甲基亚砜的质量体积比为1g：20mL，在室温下搅拌均匀，得溶解液；

(3)将1,3-丙烷磺酸内酯加入二甲基亚砜中，其中：1,3-丙烷磺酸内酯和二甲基亚砜的体积比为1：2.5，然后逐滴加入步骤(2)制得的溶解液中，混合均匀，得反应液；

(4)将步骤(3)制得的反应液在70℃下搅拌60小时，冷却至室温后将其倒入4℃的丙酮中，其中反应液和丙酮的体积比为1：2.5，干燥后，得到本实施例的吡啶昆布多糖磺酸盐。

本实施例制得的吡啶昆布多糖磺酸盐，产率为60％，其结构式为式(1)，其中：n的值为28。

式(1)

实施例4-8所采用的吡啶昆布多糖磺酸盐均为实施例1所制得的吡啶昆布多糖磺酸盐。

实施例4

本实施例为吡啶昆布多糖磺酸盐的结构分析。

取干燥的啶昆布多糖磺酸盐0.5mg与50mg干燥的溴化钾(KBr)粉末充分混合进行研磨，利用模具与压片机将粉末压制成压片。在样品测定之前先进行背景扫描去除干扰因素，在400-4000cm^-1进行红外光谱扫描(FT-IR)分析。

昆布多糖红外光谱如图1所示，图中LAMINARIN为昆布多糖对照组，作为对照组；LZS为吡啶昆布多糖磺酸盐组，作为实验组，横坐标Wavenumbers为波数。其中：LAMINARIN在3382cm^-1处具有O-H伸缩振动的特征吸收峰，由于分子内或分子内的氢键缔合而使吸收峰加宽，说明存在分子内或者分子间氢键；2893cm^-1处具有-CH₃或-CH₂基团的C-H伸缩振动吸收峰。1635cm^-1处为C＝O伸缩振动和非对称伸缩振动的特征吸收峰。

LZS在1373cm^-1、1182cm^-1、1075cm^-1和1036cm^-1处显示出的特征吸收峰主要归因于S＝O的伸缩振动，1000cm^-1-800cm^-1处的吸收峰主要归因于羟基的可变角度振动和弯曲振动。892cm^-1和1075cm^-1处的吸收峰分别表示β-构型和β-1,3键。956cm^-1区域的谱带对应于C-O-S对称拉伸振动，与C-O-SO₃基团相关，以上吸收峰与目标产物预期相符合，表明昆布多糖被磺酰化。

实施例5

本实施例为结肠炎小鼠模型的建立。

将小鼠(C57BL/6小鼠)随机分为3组(各组小鼠间体重无显著差异)，分别为空白对照组，DSS结肠炎模型组，吡啶昆布多糖磺酸盐组，每组小鼠数量为5只。在前7天时，空白对照组和DSS结肠炎组的小鼠每天被喂养生理盐水，吡啶昆布多糖磺酸盐组的小鼠每天被灌胃喂养100mg·kg^-1的吡啶昆布多糖磺酸盐。第8天起，对照组的小鼠被喂养生理盐水，持续7天；DSS组和吡啶昆布多糖磺酸盐组的小鼠被喂养2.5％的DSS水7天。第15天时，对照组和DSS组的小鼠继续喂养生理盐水连续一周，吡啶昆布多糖磺酸盐组分别恢复喂养吡啶昆布多糖磺酸盐组连续一周。在整个实验过程中，如前所述，每天观察小鼠体重、饮食、精神状态、大便次数、大便性状与隐血情况，连续14天。末次喂养后禁食24h，处死，收集结肠，结肠内容物和血清备用。

实施例6

本实施例为肠道组织形态学观察。

1.石蜡切片制作：

(1)取材：选取小鼠结肠组织，组织块的大小适宜、厚薄均匀、形状规整，夹取组织时动作轻柔，避免组织机械性损伤；

(2)固定：固定液选取10％中性福尔马林溶液，固定24-48h；

(3)脱水：在室温下，对固定后的组织进行脱水，逐级提高酒精浓度，由50％、70％、80％、90％和95％酒精各2h；100％Ⅰ和100％Ⅱ酒精各1.5h；

(4)透明：采用二甲苯在室温下进行透明组织块，让组织块在100％酒精+二甲苯(1：1)中贮藏20min，在二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各贮藏15min；

(5)浸蜡：温度控制在58℃左右，让组织块在甲苯+石蜡(1：1)中浸30min，石蜡Ⅰ、Ⅱ中各浸2-3h；

(6)包埋：在60-62℃温度条件下，将组织埋入石蜡，凝固成块；

(7)切片：使用锋利的刀片，将蜡块在切片机上固定好后，切得完整、厚薄均匀的组织切片；

(8)贴片、烤片：将切片光泽面向下铺在温水上，等切片展开后用清洁的载玻片从水中捞出，拨正位置，把贴好切片的载玻片放在染色架上竖立排水，然后立即烤片，在65℃温度下烘烤30min左右。

2.H&E染色：

染色：将切片浸入二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15min，二甲苯+100％酒精(1：1)，100％酒精Ⅰ、Ⅱ，95％酒精、90％酒精、80％酒精、70％酒精、50％酒精，蒸馏水各2min，苏木精染液5～10min，水洗后分化入1％盐酸酒精5s，自来水，1％氨水蓝化，自来水，50％，70％，80％，90％和95％酒精各2min，1％伊红染液5min，95％酒精，100％酒精Ⅰ、Ⅱ，100％酒精+二甲苯(1：1)，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各2min。

封片：待切片上的二甲苯完全干燥前就封片，并用中性树胶封固，封片后放入37℃的温箱中烤2h左右。

小鼠结肠组织H&E染色(苏木精-伊红染色法)结果如图2所示，其中：图2中的A为对照组；B为DSS介导组；C为吡啶昆布多糖磺酸盐组。由图2可知：DSS组中切片中杯状细胞大面积缺失，黏隐窝结构扭曲，炎细胞大量浸润在隐窝底部，黏液层底部，肌肉纤维出现分离。对照组呈现正常的黏膜排布，吡啶昆布多糖磺酸盐组与DSS相比杯状细胞明显，细胞黏膜正常排布，说明吡啶昆布多糖磺酸盐对于肠道屏障有一定的修复作用。

2.阿利新蓝染色

(1)切片经二甲苯脱蜡，乙醇水洗，用蒸馏水洗，风干；

(2)使用阿利新蓝液染色30min，充分水洗；

(3)1g/L中性红水溶液复染30s，水洗，风干，镜检。

小鼠结肠组织阿利新蓝染色结果如图3所示，其中：图3中的A为对照组；B为DSS介导组；C为吡啶昆布多糖磺酸盐组。由图3可知：相较于对照组细胞，DSS组切片中杯状细胞数量减少，细胞排列不紧密，细胞之间有明显炎症浸润物；而在经吡啶昆布多糖磺酸盐处理过的切片中：杯状细胞数量较DSS组较多，细胞排列更紧密，呈现正常的黏膜排列，与对照组切片结果较为相近，说明吡啶昆布多糖对肠道屏障结构有一定的修复和维护作用。

实施例7

本实施例为MUC₂免疫组化。

采用SP免疫组化技术，石蜡切片脱蜡水化，30mL/L H₂O₂室温孵育10min，以消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水洗，微波法进行抗原修复，PBS浸泡5min，100mL/L山羊血清封闭液室温孵育10min，滴加一抗4℃过夜，生物标记的二抗及辣根酶标记链霉卵白素37℃各30min，DAB显色，水洗、苏木精复染、脱水，光学显微镜下对染色结果进行评估。

小鼠结肠组织免疫组化染色结果如图4所示，其中：图4中的A为对照组；B为DSS介导组；C为吡啶昆布多糖磺酸盐组。由图4可知，DSS介导的结肠炎组中，黏蛋白MUC₂的表达量相较于空白对照组明显有所下降，组织的黏膜屏障也明显有所损伤，但吡啶昆布多糖磺酸盐组的肠道组织的染色图中，由图所示，MUC₂蛋白的表达量有所恢复，与空白对照组相比较差异不大，可得出，进一步地说明该吡啶昆布多糖磺酸盐对肠道黏液屏障有一定修复作用，能够促进MUC₂等黏蛋白的表达。

实施例8

本实施例为吡啶昆布多糖磺酸盐对于羟自由基(·OH)的清除作用实验。

参照Fenton(芬顿)反应的方法建立反应体系模型。利用H₂O₂与Fe²⁺混合后产生的存活时间短，具有很高反应活性的·OH这一性质，在反应体系中加入水杨酸就能有效捕捉·OH，并且产生有色产物，该产物在510nm处有强吸收。若加入具有清除·OH功能的昆布多糖化合物，该吡啶昆布多糖磺酸盐会与水杨酸竞争·OH，从而使得有色产物生成量减少。采用固定反应时间法，在510nm处测量含被测反应液的吸光度，并与空白液进行比较，便能测定被测物对·OH的清除作用。

反应体系：在10mL比色管中加入9mmol/L FeSO₄ 2.00mL，9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2mL，不同浓度的吡啶昆布多糖磺酸盐溶液1mL，最后加8.8mmol/L H₂O₂ 2mL启动反应，加蒸馏水定容，于37℃温度下反应1h，以蒸馏水作为参考比较，以试剂空白作比较，在510nm处测定各浓度的吸光度，考虑到提取液本身的吸光度，在10mL比色管中加9mmol/L FeSO₄2mL，9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2mL，不同浓度的吡啶昆布多糖磺酸盐提取液1mL，蒸馏水定容至刻度，37℃反应0.5h，作为样品液的本底吸收。

清除率计算公式为：

·OH清除率(％)＝[A₀-(A_X-A_X0)]/A₀×100％

式中：A₀为空白对照溶液吸光度；A_X为样品液吸光度；A_X0为不加H₂O₂样品液的本底吸光度。

吡啶昆布多糖磺酸盐与维生素C(Vc)清除·OH能力的测定结果如表1，由表1可知：吡啶昆布多糖磺酸盐具有较强的清除羟自由基(·OH)的作用，对·OH的清除能力随着其浓度的增加而增加，存在量效关系。

表1吡啶昆布多糖磺酸盐与Vc清除·OH能力的测定结果

同时，采用实施例2和3制备的吡啶昆布多糖磺酸盐进行实施例4-8的相关实验，均可获得相近的效果。

显然，上述实施例仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (6)

1.如式（1）所示的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐：

式（1）

其中：n为1-100之间的整数；

制备所述昆布多糖类化合物的原料包括昆布多糖、含磺酸基团的有机物和吡啶的衍生物；

所述含磺酸基团的有机物为1,3-丙烷磺酸内酯；所述吡啶的衍生物为异烟酸甲酯；

所述昆布多糖与吡啶的衍生物的质量体积比为1g：（10-20）mL；

所述昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）将昆布多糖、吡啶的衍生物加入有机溶剂中，在温度为100-140℃反应后进行干燥，得固体产物；

（2）将步骤（1）制得的所述固体产物加入到有机溶剂中溶解，得溶解液；

（3）将含磺酸基团的有机物加入有机溶剂中，然后加入步骤（2）制得的所述溶解液混合，得反应液；

（4）将步骤（3）制得的所述反应液在温度为70-90℃进行加热，经冷却后倒入有机溶剂中，干燥后，得所述昆布多糖类化合物。

2.根据权利要求1所述的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，步骤（1）中，所述反应的工艺条件为：充惰性气体搅拌回流24-72小时；所述干燥的工艺条件为：在55-75℃下进行旋蒸干燥。

3.根据权利要求1所述的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，步骤（2）中，所述固体产物与所述有机溶剂的质量体积为1g：（5-20）mL。

4.权利要求1至3任意一项所述的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将昆布多糖、吡啶的衍生物加入有机溶剂中，在温度为100-140℃反应后进行干燥，得固体产物；

（2）将步骤（1）制得的所述固体产物加入到有机溶剂中溶解，得溶解液；

（3）将含磺酸基团的有机物加入有机溶剂中，然后加入步骤（2）制得的所述溶解液混合，得反应液；

（4）将步骤（3）制得的所述反应液在温度为70-90℃进行加热，经冷却后倒入有机溶剂中，干燥后，得所述昆布多糖类化合物；

步骤（3）中，所述含磺酸基团的有机物与所述有机溶剂的体积比为1：（1-4）。

5.根据权利要求4所述的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述加热的工艺条件为：搅拌36-60小时；所述反应液与所述有机溶剂的体积比为1：（1-4）。

6.权利要求1至3任意一项所述的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐在制备肠道屏障修复的药物中的应用。

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