CN101385777A - 一种药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种具有消炎作用的药物组合物及其制备方法及用途。它是由广藿香叶和猪胆粉为原料药制成的,制备方法如下:取10重量份广藿香叶进行水蒸汽蒸馏,取其挥发油成分;10重量份广藿香叶,水蒸汽蒸馏提取得广藿香叶水提液;取0.8重量份猪胆粉用30%-70%乙醇加热回流,滤过,滤液回收乙醇,减压干燥,磨成细粉,与广藿香叶挥发油和水提液混合即得。本发明主要是通过抑制炎症发生、发展过程中炎症组织中组胺、前列腺素(PGE)的含量,从而发挥抗炎作用,同时对于脾淋巴细胞和外周血白细胞具有显著的活化作用,从而提高免疫细胞能力来发挥抗炎免疫作用。
Description
技术领域:
本发明涉及一种药物组合物,具体涉及一种具有消炎作用的药物组合物及其制备方法及用途。
背景技术:
藿胆丸由藿香和猪胆汁组成,是中医临床治疗鼻渊的常用成药。其方源,《广东省药品标准》(1982年)称来源于清代《医宗金鉴》。《医宗金鉴》卷六十五“外科心法要诀”载奇授藿香丸,治疗“鼻窍中时流黄色浊涕”,用”藿香连枝带叶八两,研细末,雄猪胆汁和丸,如梧桐子大。每服五钱,食后苍耳子汤下,或黄酒下。”《中医方剂大辞典》第六册所收奇授藿香汤条,云方源为刊于清康熙四年(公元1665年)祁坤之《外科大成》卷三。华浩明认为:刊于明万历四十五年(公元1617)陈实功之《外科正宗》比《外科大成》要早面世48年,《外科大成》奇授藿香汤的组成、用法和主治与《外科正宗》奇授藿香汤大体相同。因此,《外科大成》之奇授藿香汤乃源于《外科正宗》。《外科正宗》卷四“脑漏”记载:“脑漏,又名鼻渊……奇授藿香汤治鼻渊,黄水浊涕长流,致脑户虚眩不已。用藿香连枝带叶五钱,水一碗,煎七分,加公猪胆汁一枚和匀,食后通口服之,至重不过三服。如此药苦甚不堪服用,藿香末一两,公猪胆汁熬稠膏为丸,每服二钱,食后白滚汤送下亦效。”《医宗金鉴》之奇授藿香丸即此方之又可作丸法。因此,藿胆丸实出自陈实功刊于明万历四十五年(公元1617)《外科正宗》卷四奇授藿香汤的又可制丸法。藿胆丸为2005版《中国药典》(一部)收载的中成药制剂。由广藿香叶和猪胆粉二味药材组成。功能芳香化浊,清热通窍。用于湿浊内蕴、胆经郁火所致的鼻塞、流清涕或浊涕、前额头痛。现代临床主要用于治疗鼻炎-鼻窦炎。处方简单,疗效确切。但是,现有技术并没有记载藿胆丸具有较为明显的抗炎等作用。
发明内容:
本发明涉及一种药物组合物,具体的是涉及一种药物组合物及其制备方法和用途。
该药物组合物是由广藿香叶和猪胆粉为原料药制成的:取10重量份广藿香叶进行水蒸汽蒸馏,取其挥发油成分;10重量份广藿香叶,水蒸汽蒸馏提取得广藿香叶水提液;取0.8重量份猪胆粉用30%—70%乙醇加热回流,滤过,滤液回收乙醇,减压干燥,磨成细粉,与广藿香叶挥发油和水提液混合即得。再配以适当辅料制成药剂学上可以接受的任一剂型。
优选的是:100g广藿香叶粉碎过20目,浸泡30min,加5—10倍量蒸馏水提取2—5h,滤渣再加4—8倍量蒸馏水提取1—2h,合并二次提取所得挥发油,取挥发油与1ml吐温-80混合,加蒸馏水至100ml,浓度为0.04ml/ml,备用;100g广藿香叶药材粉碎过20目,浸泡30min,加5—10倍量蒸馏水提取2—5h,滤渣再加4—8倍量蒸馏水提取1—2h,合并二次水提取液,90℃水浴浓缩至75ml,加入1ml吐温-80,加蒸馏水至100ml,浓度为1.00g/ml,备用;
8.0g猪胆粉用乙醇加热回流提取2次,每次1—2h。第一次加乙醇8—12倍量,第二次6—10倍量,合并乙醇提取液,回收乙醇,减压干燥,磨成细粉;取细粉,用蒸馏水20ml溶解,加入1ml吐温-80,加蒸馏水至100ml,浓度为0.076g/ml,备用;
取上述广藿香叶挥发油,加入20ml蒸馏水溶解的猪胆粉乙醇提取物细粉,加入75ml广藿香叶水提取浓缩液,加蒸馏水至100ml,即得。
所述的药物组合物具有消炎的作用,具体的说,其主要是通过抑制炎症发生、发展过程中炎症组织中组胺、前列腺素(PGE)的含量,从而发挥抗炎作用,同时对于脾淋巴细胞和外周血白细胞具有显著的活化作用,从而提高免疫细胞能力来发挥抗炎免疫作用。
实验资料
具体作用由以下实验数据来进一步说明:
一、对小鼠鼻炎模型炎症组织中组胺、前列腺素(PGE)含量的影响
用克雷伯肺炎杆菌滴入小鼠鼻腔,刺激鼻腔局部组织产生炎症,释放组胺、前列腺素等炎症介质,观察受试药物对小鼠鼻炎模型炎症组织中组胺、前列腺素(PGE)含量的影响。
1、实验材料
1.1试剂 高氯酸,上海金鹿化工有限公司,批号20070807
1.2药材 广藿香叶,海南万宁广藿香GAP生产基地,批号060918
猪胆粉,福建省仙游县南丰生化有限公司生产,批号070702
1.3 仪器设备
紫外分光光度计,日本岛津
荧光分光光度计,日本岛津
L420B型低速自动平衡离心机,长沙湘仪离心机仪器有限公司
SHA-B型恒温振荡器,常州国华电器有限公司
1.4 菌株
克雷伯肺炎杆菌,辽宁省人民医院提供。
1.5 实验动物
ICR小鼠,雌雄各半,体重20±2g。吉林大学基础医学院实验动物中心提供,许可证号SCXK(吉)2003-0001。
2、受试药物的制备
广藿香叶按《中国药典》一部附录方法提取挥发油,加入吐温-80混匀备用;水提取液浓缩为100%(g/ml),备用。
猪胆粉,乙醇回流提取,所得提取物细粉制成水溶液,加入上述广霍香叶挥发油和水提取液浓缩液,混和均匀,蒸馏水定容,备用。
3、对小鼠鼻炎模型炎症组织中组胺(HA)含量的影响
18~22g ICR小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只。除正常对照组外,其余小鼠双侧鼻腔滴入克雷伯肺炎杆菌菌液25ul/只,连续7d,模型小鼠出现鼻红,喷嚏,大量清涕,觅食和活动减少等鼻炎模型症状。连续灌胃给药7d,末次给药后处死小鼠,取鼻前庭组织,置0.4mol/L高氯酸5ml中,匀浆破细胞,以4000rpm低温离心15min,取上清液。采用Shore等荧光测定法并加以改良。
(1)1.6ml上清液置于已加1.5gNaCL10ml具塞试管中,再加4.0ml正丁醇和0.2ml2.5mol/LNaOH,立即混匀,置康氏震荡器震荡5min,静置后取出3.6ml正丁醇相加到已加1.2ml 0.1mol/LHCL相和2ml正庚烷的10ml具塞试管中,震荡5min,弃有机相,取1ml HCL相置入10ml具塞试管中。
(2)1mlHCL相加三蒸水3ml稀释,取2ml加0.5ml 0.4mol/L NaOH碱化,混匀并迅速加入0.1%OPT甲醇液0.1ml,立即混匀,并在21~22℃反应10min,加0.5ml 0.5mol/L HCL酸化以终止缩合反应,并使荧光物质稳定,测定荧光值(激发波长350nm,发射波长443nm),结果见表2。
(3)试剂空白:步骤2中依序加0.5ml 0.5mol/L HCL,0.1ml 0.1% OPT甲醇液,0.5ml 0.4mol/L NaOH。
结果见Tab2。
4、对小鼠鼻炎模型炎症组织中前列腺素(PGE)含量的影响
18~22g ICR小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只。除正常对照组外,其余小鼠双侧鼻腔滴入克雷伯肺炎杆菌菌液25ul/只,连续7d,模型小鼠出现鼻红,喷嚏,大量清涕,觅食和活动减少等鼻炎模型症状。连续灌胃给药7d,末次给药后处死小鼠,取鼻前庭组织,放入5ml生理盐水中浸泡1h,心取上清液0.3ml,加入氢氧化钾甲醇溶液(0.5M)2ml在50℃水浴中异构化20min,加甲醇5ml,于紫外分光光度计278nm处测定吸光度,以此吸光值来反映前列腺素的含量,结果见Tab1
Tab1 Efects of tested drugs on HA of inflammatory ti ssue on mice(n=10)
*p<0.05**p<0.01 compared with model #p<0.05 ##p<0.01 compared with control
由Tab1可以看出:与正常对照组比较,模型组小鼠组胺荧光值明显升高,具有显著差异(P<0.01)。与模型组比较,受试药物6.24g/kg剂量组、3.12g/kg剂量组能明显降低小鼠组胺荧光值,具有显著性差异(P<0.05);1.56g/kg组能降低组胺荧光值,但与模型组比较没有显著差异。与正常对照组比较,受试药物三个剂量组的组胺荧光值均未能降至正常水平。
Tab2 Effects of tested drugs on PGE of inflammatory tissue on mice(n=10)
*p<0.05**p<0.01 compared with model # p<0.05 ##p<0.01 compared with control
由Tab2可以看出:与正常对照组比较,模型组小鼠前列腺OD值明显升高,具有显著差异(P<0.01)。与模型组比较,受试药物6.24g/kg剂量组、3.12g/kg剂量组能明显降低小鼠前列腺OD值,具有显著性差异(P<0.01、P<0.05);1.56g/kg组能降低前列腺素吸光值,但与模型组比较没有显著差异。与正常对照组比较,受试药物三个剂量组的前列腺素吸光值均未能降至正常水平。
二、细胞免疫学研究
“炎症和免疫是一个问题的两个侧面,两者相互重叠不可分割”的学术观点是徐叔云1982年首次提出,并建立了抗炎免疫药理学(anti-inflammatory-immunophamraeology)药理学分支。炎症和免疫作用为机体对异物的两种不同反应,涉及了许多共同的细胞类型(巨噬细胞,淋巴细胞等),化学介质(组胺、PGE等)和发病机制(神经—内分泌调节)。在许多疾病发生的过程中,二者紧密联系,互相渗透。前文从炎症和免疫所涉及的化学介质(组胺、PGE)研究了受试药物的抗炎作用。本文从炎症和免疫所涉及的共同的细胞类型(白细胞、淋巴细胞等)研究受试药物治疗鼻炎-鼻窦炎的免疫作用。
白细胞也通常被称为免疫细胞。能吞噬异物产生抗体,在机体损伤治愈、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着重要的作用。
淋巴细胞则为具有特异性免疫功能的细胞。为白细胞的一种。由淋巴器官产生,是机体免疫应答功能的重要细胞成分。
本文主要考察了灌胃给予小鼠受试药物不同时相的含药血清对小鼠外周血白细胞活化作用、脾淋巴细胞活化的影响。探讨受试药物治疗鼻炎-鼻窦炎的作用机制。
1、实验材料
1.1 试剂
HyR改良型1640培养基:北京海克隆生化制品有限公司。批号:NSD0034
MTT:Sigma公司。
PHA:植物血凝素,上海伊华医学科技有限公司,批号:20060703
SDS:国药集团化学试剂有限公司批号:F20070523
大鼠淋巴细胞分离液:中国医学科学院生物工程研究所,批号:LTS1083.
盐酸异丙醇:沈阳化学试剂厂,批号:0703101
生理盐水:沈阳志鹰制药厂,批号:07032403
吐温80:天津科密欧化学试剂有限公司。批号20070406
1.2 药材
广藿香叶,海南万宁广藿香GAP生产基地,批号060918
猪胆粉,福建省仙游县南丰生化有限公司生产,批号070702
1.3 仪器设备
Forma Series II型水套CO2培养箱:Thermo公司生产
HF safe 1200/C型生物安全柜:上海立申科学仪器有限公司。
L420B型低速自动平衡离心机:长沙湘仪离心机仪器有限公司。
C412型多孔离心机:法国Jouan公司。
WD-9405B型水平摇床:北京市六一仪器厂沃德生物医学仪器公司。
SHA-B型恒温振荡器:常州国华电器有限公司
DFC 280倒置荧光显微镜:德国Leica公司。
Olypus CX21型光学显微镜
Anthos 2010型全自动酶标仪:奥地利安图公司
1.4 实验动物
ICR小鼠,雌雄各半,体重20±2g。吉林大学基础医学院实验动物中心提供,许可证号SCXK(吉)2003-0001。
2、受试药物的制备
广藿香叶按《中国药典》一部附录方法提取挥发油,加入吐温-80混匀备用;水提取液浓缩为100%(g/ml),备用。
猪胆粉,乙醇回流提取,所得提取物细粉制成水溶液,加入上述广霍香叶挥发油和水提取液浓缩液,混和均匀,蒸馏水定容,备用。
3、含药血清的制备
小鼠48只,随机分为6组,每组8只,0.2ml/10g ig给予受试药物(21.6g/kg)。于给药后0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h、4.0h摘眼球无菌取血,以3000r/min离心10min,经56℃、30min灭活,分离血清后过0.22μm微孔滤膜,4℃冰箱保存3日内备用。
4、空白对照血清的制备
小鼠用蒸馏水灌胃,30min后于无菌条件下取血,分离血清,56℃、30min灭活,分离血清后过0.22μm微孔滤膜,4℃冰箱保存3日内备用。
5、对小鼠白细胞活化作用的影响
5.1小鼠白细胞分离
小鼠摘眼球取外周血,肝素抗凝,在试管中加入大鼠淋巴细胞分离液,用滴管吸取抗凝血,在离分层面约1cm处沿管壁徐徐加入,叠加在IF分离液上,1500r/min离心10min,可见液体分层,上为血浆,中为分离液,下为红细胞与粒细胞,在上中层之间可见一薄层浑浊带,为单核细胞和淋巴细胞的混合物,即为所需细胞。用滴管吸出此层,移至刻度离心管中,加入5倍量左右的TrisNH4Cl,吹打静置5min,1000r/min离心5min,弃去上清,沉淀用1640液洗2次,调整细胞浓度至3.2×105ml。
5.2 白细胞leucocyte活性测定
将白细胞分装于96孔培养板中,每孔100μl,分别加入不同时相的含药血清20μl,4复孔;空白血清20μl,4复孔。轻轻震荡,37℃、5%CO2孵育2h。每孔加入MTT溶液10μl轻轻震荡,37℃、5%CO2继续孵育2h。每孔加入10%SDS溶液100μl,轻轻震荡,37℃孵育过夜,酶标仪测定492nm OD值。结果见Tab3。
6、对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响
6.1 脾淋巴细胞lymphocyte悬液制备
正常小鼠脱颈椎处死,75%酒精浸泡消毒,无菌取出脾脏,剔除脂肪及结缔组织,置盛有5~10ml Hanks液平皿的100目铜网上,轻轻捻碎,使单个细胞经网进入Hanks液中,并移吸至刻度离心管中1000r/min离心10min,经TrisNH4Cl除去红细胞,1640液洗2遍,镜下细胞记数,用1640培养液配成4×106/ml悬液。
6.2 淋巴细胞增殖活性测定
96孔培养板中每孔加入100μl脾淋巴细胞悬液,再加入100μl,1mg/μlPHA溶液及20μl不同时相的试验血清,4复孔;20μl空白血清,4复孔,37℃、5%CO2培养48~72h。培养结束前4~6h每孔加入MTT溶液10μl,培养结束弃去上清,每孔加入盐酸异丙醇100μl,充分震荡后静置20min,酶标仪测定492nm OD值。结果见Tab4。
Tab3 Activation effects on mice leucocyte of different time serumof tested drugs(n=10)
*p<0.05**p<0.01 compared with control
由Tab3可知,与正常对照组比较,小鼠按21.6g/kg体重灌胃受试药物,4.0h时相的血清对小鼠白细胞具有显著的活化作用(P<0.05);3.0h时相的血清对小鼠白细胞具有非常显著的活化作用(P<0.01),而其余时相的血清均无明显活化作用。
Tab4 Activation effects on mice spleen lymphcyte of different time serumof tested drugs(n=10)
*p<0.05**p<0.01 compared with contro l
由Tab4可知,与正常对照组比较,小鼠按21.6g/kg体重灌胃受试药物,4.0h时相的血清对小鼠脾淋巴细胞具有非常显著的活化作用(P<0.01),而其余时相的血清均无明显活化作用。
三、结论
1、组胺和前列腺素是与炎症密切相关的化学介质。克雷伯肺炎杆菌是急慢性鼻炎-鼻窦炎相关密切的细菌之一。因此采用小鼠双侧鼻腔滴入克雷伯氏肺炎杆菌菌液造成局部炎症,观察受试药物对炎症介质组胺和前列腺素的影响。试验结果表明6.24g/kg、3.12g/kg受试药物均能明显降低小鼠前列腺OD值和组胺荧光值。说明受试药物通过抑制炎症发生、发展过程中炎症组织中组胺、前列腺素的含量,从而发挥抗炎作用。
2、因中药复方所含多种成分在体内的代谢时间和过程各不相同,所以采用血清药理学方法,分别考察受试药物灌胃给药后不同时间含药血清对外周血白细胞和脾淋巴细胞的影响。结果表明:21.6g/kg受试药物4.0h时相的血清对小鼠脾淋巴细胞具有非常显著的活化作用;3.0h、4.0h时相的血清对小鼠白细胞具有显著的活化作用。受试药物活化免疫细胞发挥抗炎免疫作用。
具体实施方式:
100g广藿香叶药材(20目)浸泡30min,加8倍量蒸馏水提取3h,滤渣再加6倍量蒸馏水提取1h,合并二次提取所得挥发油(得率4%)。取挥发油与1ml吐温-80混合,加蒸馏水至100ml,浓度为0.04ml/ml,备用;100g广藿香叶药材(20目)浸泡30min,加8倍量蒸馏水提取3h,滤渣再加6倍量蒸馏水提取1h,合并二次水提取液,90℃水浴浓缩至75ml,加入1ml吐温-80,加蒸馏水至100ml,浓度为1.00g/ml,备用;8.0g猪胆粉用乙醇加热回流提取2次,每次1h。第一次加乙醇10倍量,第二次8倍量,合并乙醇提取液,回收乙醇,减压干燥,磨成细粉(得率95%),取细粉,用蒸馏水20ml溶解,加入1ml吐温-80,加蒸馏水至100ml,浓度为0.076g/ml,备用;取上述广藿香叶挥发油,加入20ml蒸馏水溶解的猪胆粉乙醇提取物细粉,加入75ml广藿香叶水提取浓缩液,加蒸馏水至100ml,即得;减压浓缩制成浸膏,与淀粉、微晶纤维素适量混匀,制粒,干燥,包衣,即得薄膜衣片。
Claims (7)
1、一种具有消炎作用的药物组合物,其是由广藿香叶和猪胆粉为原料药制成的,其特征在于是由下述方法制备而成的:取10重量份广藿香叶进行水蒸汽蒸馏,取其挥发油成分;10重量份广藿香叶,水蒸汽蒸馏提取得广藿香叶水提液;取0.8重量份猪胆粉用30%—70%乙醇加热回流,滤过,滤液回收乙醇,减压干燥,磨成细粉,与广藿香叶挥发油和水提液混合即得。
2、根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于最后所得的混合液配以适当辅料制成药剂学上可以接受的任一剂型。
3、根据权利要求1所述的药物组合物的制备方法,其特征在于是由下述步骤制成:
(1)100g广藿香叶粉碎过20目,浸泡30min,加5—10倍量蒸馏水提取2—5h,滤渣再加4—8倍量蒸馏水提取1—2h,合并二次提取所得挥发油,取挥发油与1ml吐温-80混合,加蒸馏水至100ml,浓度为0.04ml/ml,备用;100g广藿香叶药材粉碎过20目,浸泡30min,加5—10倍量蒸馏水提取2—5h,滤渣再加4—8倍量蒸馏水提取1—2h,合并二次水提取液,90℃水浴浓缩至75ml,加入1ml吐温-80,加蒸馏水至100ml,浓度为1.00g/ml,备用;
(2)8.0g猪胆粉用乙醇加热回流提取2次,每次1—2h。第一次加乙醇8—12倍量,第二次6—10倍量,合并乙醇提取液,回收乙醇,减压干燥,磨成细粉;取细粉,用蒸馏水20ml溶解,加入1ml吐温-80,加蒸馏水至100ml,浓度为0.076g/ml,备用;
(3)取上述广藿香叶挥发油,加入20ml蒸馏水溶解的猪胆粉乙醇提取物细粉,加入75ml广藿香叶水提取浓缩液,加蒸馏水至100ml,即得。
4、如权利要求1所述的药物组合物在制备具有消炎作用的药物中的应用。
5、根据权利要求4所述的应用,其消炎作用主要是指抑制中炎症组织中组胺、前列腺素(PGE)的含量的作用。
6、根据权利要求4所述的应用,其消炎作用主要是指活化脾淋巴细胞和外周血白细胞的作用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20090318 |