CN113749049B - 提高后备母羊抗体水平的驯化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于肉羊育种技术领域，具体涉及一种提高后备母羊抗体水平的驯化方法。针对现有后备母羊抗体水平低、免疫性能较低等问题，本发明提供了一种提高后备母羊抗体水平的驯化方法，包括以下步骤：a、在养殖场的每栋羊舍中选择6～10个点位，分别于每个点位处均采集水、粪便、残料和空气四种样品，收集样品中的微生物，并制备成菌液；b、采用上述菌液直接饲喂后备母羊，每2天饲喂1次，每次每只羊饲喂10～20mL菌液，连续饲喂20～40天，对后备母羊进行驯化。本发明通过对后备母羊饲喂环境微生物的方式进行驯化，提高了后备母羊的免疫水平，提高疾病抵抗力，减少了后备母羊养殖过程中的养殖风险，为后备母羊养殖提供了更好的方法。

Description

提高后备母羊抗体水平的驯化方法
技术领域
本发明属于肉羊育种技术领域，具体涉及一种提高后备母羊抗体水平的驯化方法。
背景技术
后备母羊是指羔羊断奶至初次配种的母羊，一般指4～18个月龄的母羊。后备母羊培育水平高低，直接关系到成年期的生产性能和繁殖性能、未来羊群的生产力和生产水平、乃至整个羊场的经济效益。后备母羊饲养管理不当，会使母羊生长发育受阻，出现体长不足、胸围小、胸宽窄、胸深浅、腿长背弓、体躯狭小、肢体比例失调、体质瘦弱、采食能力差、体重小的“僵羊”，失去种用价值。因此，如何提高后备母羊的管理，提高其机体免疫至关重要。
后备母羊处于快速发育阶段，对营养的需求水平高，在后备母羊培育过程中，日粮仍以精料为主、优质青干草为辅，同时需要注意补充维生素和微量元素添加剂或块根块茎类饲料。同时，后备母羊饲养时需要适当限制饲养：后备母羊培育有一个“吊架子”过程，一般在8～12月龄需采取限制饲养，使其有一个较大的体型，以免过于肥胖影响繁育机能。舍饲饲养的后备母羊，8月龄以后日粮能量水平不宜过高，否则会导致早熟；蛋白质质量要好，限制性氨基酸、维生素、微量元素等各种添加剂要供应充足，以保证机体器官特别是生殖系统正常发育，使其在达到配种年龄时达到种用标准，正常配种繁育。
另一方面，后备母羊的管理中还需要注意分群管理，防止偷配早配。自断奶之日起，后备公羊和后备母羊应分群单独管理。同性别的后备羊也应按年龄、体格大小重新组群、分别管理，以免群体发育不均衡、影响整体水平。有条件的还应定期(每月一次)测定体尺体重，按培育目标及时调整饲养方案。严禁公母羊混群饲养或临近放牧、饲养，以防早熟偷配、早配早孕。若欲实行早期配种，受配母羊体重须达到成年体重的70％以上(即8月龄体重达到42～52kg)。
此外，后备母羊的饲养还需建立严格的淘汰制度。后备羊须在6、12、18月龄进行体型外貌鉴定，发育不良、达不到品种标准的必须坚决淘汰。18月龄配种前后备羊(青年羊)的选留量以占现有可繁母羊总数的30％左右为宜。
根据后备羊的不同生长阶段，根据当地饲料营养能量测定情况，制定合理的饲料配方，25～50kg体重阶段后备羊日粮干物质进食量和消化能、代谢能、粗蛋白质、钙、磷、食用盐每日营养需要量可查阅当地各种物质营养含量测定情况。根据实际情况制定合理的饲料配方。
然而，通过上述方式饲养的后备母羊仍然可能存在免疫性能低下，体内抗体水平低等情况，严重影响到后备母羊抗体水平以及后代羔羊的成活率。
发明内容
本发明解决的技术问题是：现有后备母羊抗体水平低、免疫性能较低等问题。
本发明解决上述技术问题的技术方案为：提供一种提高后备母羊抗体水平的驯化方法。该方法包括以下步骤：
a、在养殖场的每栋羊舍中选择6～10个点位，分别于每个点位处均采集水、粪便、残料和空气四种样品，收集样品中的微生物制备成菌液；
b、采用上述菌液直接饲喂后备母羊，每2天饲喂1次，每次每只羊饲喂10～20mL菌液，连续饲喂20～40天，对后备母羊进行驯化。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的水样包括母羊清洗用水和母羊饮水。
进一步的，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的水样采集方法为：采集母羊清洗用水和母羊饮水均≥5L，都采用0.2μm的滤膜过滤，过滤后将滤膜转移至无菌离心管中。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的空气样品的采集方法为：在离地面50～80cm处，使用空气微生物采样器进行采样。
其中，所述的空气微生物采样器为青岛聚创环保集团有限公司公司生产的型号为FA-1型六级筛孔撞击式的空气微生物采样器。
进一步的，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，所述空气微生物采样器的通气速率为20～50L·min-1。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的水样、粪便样品、残料样品和空气样品的采集比例为：5～10L：50～100g：50～100g：500～1000L。优选的，上述水样、粪便样品、残料样品和空气样品的采集比例为：10L：50g：50g：500L。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的制备成菌液的具体方法为：先将采集的粪便样品和残料样品采用无抗0.9％生理盐水稀释，每100g样品添加500～1000mL生理盐水，搅拌10～20min至均质状态；将采集水样和空气样品的滤膜放进均质液体中，高强度混合搅拌搅拌3～5min，过滤并离心，收集上清液，向上清液中加入占其体积10～15％的甘油，混匀，液氮中保存备用。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，所述过滤依次采用单层医用纱布、孔径1.0mm的不锈钢滤网和孔径0.25mm的不锈钢滤网过滤3次。
进一步的，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，所述离心时的条件为：1800g离心10～15min。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供了一种通过对后备母羊饲喂养殖场环境中微生物来对后备母羊进行驯化的方法，环境微生物取样品种丰富，取样点多，基本能覆盖后备母羊养殖环境中的微生物种类；通过饲喂这些微生物对后备母羊进行驯化，提高了后备母羊的免疫水平，提高疾病抵抗力，减少了后备母羊养殖过程中的养殖风险，为后备母羊养殖提供了更好的方法。
附图说明
图1所示为实施例中微生物采集取样点，图片中的小圆点代表取样的羊圈，每个取样的羊圈里面分别取水、粪便、残料和空气四种样品；
图2所示为本发明驯化方法对后备母羊血清免疫球蛋白的影响。
图3所示为本发明驯化方法对后备母羊血清细胞因子的影响。
具体实施方式
本发明提供了一种提高后备母羊抗体水平的驯化方法，包括以下步骤：
a、在养殖场的每栋羊舍中选择6～10个点位，分别于每个点位处均采集水、粪便、残料和空气四种样品，收集样品中的微生物制备成菌液；
b、采用上述菌液直接饲喂后备母羊，每2天饲喂1次，每次每只羊饲喂10～20mL菌液，连续饲喂20～40天，对后备母羊进行驯化。
本发明在养殖场每栋羊舍中都进行采样，每栋羊舍都选择6～10个点位，选择点位时要尽量覆盖完整栋羊舍，于羊舍的前、中、后位置分别选取。理论上，选择点位越多越能采集到更多种类的微生物，但发明人经实验发现，选择6～10个点位时已基本能够覆盖环境中的微生物种类，因此为了综合考虑成本，以选取6～10个点位取样为宜。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的水样包括母羊清洗用水和母羊饮水。
进一步的，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的水样采集方法为：采集母羊清洗用水和母羊饮水均≥5L，都采用0.2μm的滤膜过滤，过滤后将滤膜转移至无菌离心管中。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的空气样品的采集方法为：在离地面50～80cm处，使用空气微生物采样器进行采样。其中，所述的空气微生物采样器为青岛聚创环保集团有限公司生产的型号为FA-1型六级筛孔撞击式的空气微生物采样器。
进一步的，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，为了采集更多的空气中的菌落，所述空气微生物采样器的通气速率为20～50L·min-1。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的水样、粪便样品、残料样品和空气样品的采集比例为：5～10L：50～100g：50～100g：500L～1000L。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，步骤a所述的制备成菌液的具体方法为：先将采集的粪便样品和残料样品采用无抗0.9％生理盐水稀释，每100g样品添加500～1000mL生理盐水，搅拌10～20min至均质状态，将采集水样和空气样品的滤膜放进均质液体中，高强度混合搅拌搅拌3～5min，过滤并离心，收集上清液，向上清液中加入占其体积10～15％的甘油，混匀，液氮中保存备用。
其中，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，所述过滤依次采用单层医用纱布、孔径1.0mm的不锈钢滤网和孔径0.25mm的不锈钢滤网过滤3次。
进一步的，上述提高后备母羊抗体水平的驯化方法中，所述离心时的条件为：1800g离心10～15min。
本发明首次发现：可以通过饲喂环境微生物来对后备母羊进行驯化，以提高后备母羊的免疫水平。通常，后备母羊在饲养过程中，会养殖于后备羊舍中，接触的微生物种类相对较为单一、固定。本发明通过选取养殖场中不同位置、不同种类的样品，提取样品中的微生物直接饲喂后备母羊，不同的环境微生物会对后备母羊造成刺激，经过20～40天连续驯化的过程，后备母羊对环境中的微生物适应能力明显增强，其免疫水平显著提高。本发明选择环境微生物饲喂后备母羊的这一方式、选择环境微生物的点位、样品的选择，各个样品的比例等都是发明人经过不断摸索而最终形成的。通过大量试验，发明人最终筛选得到了上述能够提高后备母羊免疫水平的驯化方法。
下面将通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例1用本发明方法对后备母羊进行驯化
实验地点为：绵阳市游仙区新桥镇一鸣畜禽养殖场内，其中养殖场面积为1500㎡，共有3栋羊舍，一栋为3羊舍，一栋为公羊舍，一栋为母羊舍，一栋为育肥羊舍。
对3栋羊舍分别进行采样，每栋羊舍采样的点位为6个，如图1所示。
在每个采样点分别采集水样10L、粪便样品50g、残料样品50g和空气样品500L。
将采取的样品制备成菌液，具体的操作方法为：先将采集的粪便样品和残料样品采用无抗0.9％生理盐水稀释，一共采集了300g粪便样品，300g残料样品，加入生理盐水3L，将上述物质混合后搅拌成均质状态，将采集水样和空气样品的滤膜放进均质液体中，高强度混合搅拌搅拌5min，过滤并离心，收集上清液，向上清液中加入其体积比10％的上甘油，混匀，液氮中保存备用。
实验选择年龄、体重相近，产期一致且健康的山羊后备母羊20只，随机分成2个处理，每个处理10个重复，每个重复1只羊。两个处理组分别为对照组、和驯化组，消毒清洗干净后开始试验。在正常日粮喂养的基础上，对照组加喂30mL生理盐水，驯化组加喂10mL的菌液+20mL生理盐水。妊娠100天时开始灌服，分别用10mL注射器由口部灌服，每间隔2天灌服1次，妊娠90天开始连续20天。
效果验证：
(1)20天后，采后备母羊的静脉血，采血后静置30min，4000r离心后，制备得到血清样品，测定血清样品中的相关指标。
血液常规委托四川金域医学检验中心有限公司检测，细胞因子和免疫球蛋白试剂盒购自于上海酶联生物科技有限公司，血清中各相关指标的测定结果如表1所示。
表1驯化对北川白羊后备母羊血清指标的影响(n＝10)
Figure BDA0003309783540000061
由表1可见，本发明的驯化方法对北川白羊后备母羊血清指标的影响很大，驯化组后备母羊血清总蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白比均高于对照组后备母羊(P<0.05)，可见采用本发明的驯化方法，提高了后备母羊的免疫水平。
驯化对后备母羊血清甘油三酯、白蛋白、白蛋白/球蛋白比、尿素氮、肌酐、葡萄糖、胆固醇浓度均无影响，上述指标可见进行驯化后，后备母羊的肝、肾功代谢正常，本发明饲喂环境微生物进行驯化的方法对后备母羊无副作用。
(2)测定实施例和对比例中后备母羊驯化后血液中抗体水平的变化(如图2所示)；由图2可看出，驯化组后备母羊试验第7、14和21天血清IgA和IgG浓度显著高于初始值，其中在第14天达最高浓度水平(P<0.05)；与对照组相比，驯化组后备母羊试验第7、14和21天血清IgA、IgG和IgM浓度均高于对照组，且IgM在试验第7天和第14天都达到了显著水平(P<0.05)，而IgA和IgG仅在试验第14天达到了显著水平(P<0.05)。驯化组后备母羊血清IgA、IgG和IgM浓度均呈现出先增加后降低的趋势，并在试验第14天时达最高水平。
可见，本发明的驯化方法提高了后备母羊血清中的抗体水平。
(3)测定实施例中的后备母羊驯化后血液中细胞因子的变化，如图3所示。由图3可看出，驯化组后备母羊血清INF-α、IL-4和IL-5浓度第14天显著高于其他测试时间点，INF-γ和IL-2浓度在第7、14和21天均显著高于初始值。与对照组相比，驯化组后备母羊血清INF-α、IL-4、IL-5、INF-γ和IL-2含量均高于对照组，其中INF-α浓度在试验第14和21天达显著水平(P<0.05)，INF-γ和IL-2浓度在试验第7、14和21天达显著水平(P<0.05)，IL-4和IL-5浓度在试验第14天达显著水平(P<0.05)。可见，本发明的驯化方法能够提高血液中细胞因子的水平，说明本发明的驯化方法对于提高后备母羊的免疫能力。

Claims (6)

1.提高后备母羊抗体水平的驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、在养殖场的每个羊舍中选择6～10个点位，分别于每个点位处均采集水样、粪便、残料和空气四种样品，收集样品中的微生物，并制备成菌液；所述的水样、粪便、残料和空气四种样品的采集比例为：5～10L：50～100g：50～100g：500～1000L；制备成菌液的具体方法为：先将采集的粪便样品和残料样品采用0.9%生理盐水稀释，每100 g样品添加500～1000mL生理盐水，搅拌10～20 min至均质状态，将采集水样和空气样品的滤膜放进均质液体中，高强度混合搅拌搅拌3～5min，过滤并离心，收集上清液，向上清液中加入占其体积10～15%的甘油，混匀，液氮中保存备用；过滤依次采用单层医用纱布、孔径1.0 mm的不锈钢滤网和孔径0.25 mm的不锈钢滤网过滤3次；
b、采用上述菌液直接饲喂后备母羊，每2天饲喂1次，每次每只羊饲喂10～20mL菌液，连续饲喂20～40天，对后备母羊进行驯化。
2.根据权利要求1所述的提高后备母羊抗体水平的驯化方法，其特征在于：步骤a所述的水样包括母羊清洗用水和母羊饮水。
3.根据权利要求1所述的提高后备母羊抗体水平的驯化方法，其特征在于：步骤a所述的水样采集方法为：采集母羊清洗用水和母羊饮水均≥5L，都采用0.2μm的滤膜过滤，过滤后将滤膜转移至无菌离心管中。
4.根据权利要求1所述的提高后备母羊抗体水平的驯化方法，其特征在于：步骤a所述的空气样品的采集方法为：在离地面50～80 cm处，使用空气微生物采样器进行采样。
5.根据权利要求4所述的提高后备母羊抗体水平的驯化方法，其特征在于：所述空气微生物采样器的通气速率为20～50L·min -1。
6.根据权利要求1所述的提高后备母羊抗体水平的驯化方法，其特征在于：所述离心时的条件为：1800 g 离心10～15 min。
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