CN113736733A - 一种用于体外活化免疫细胞的培养基 - Google Patents

一种用于体外活化免疫细胞的培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN113736733A
CN113736733A CN202010476477.2A CN202010476477A CN113736733A CN 113736733 A CN113736733 A CN 113736733A CN 202010476477 A CN202010476477 A CN 202010476477A CN 113736733 A CN113736733 A CN 113736733A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cells
culture medium
lag
cell
immune cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010476477.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113736733B (zh
Inventor
张顺浪
林杰良
孙境新
刘威廷
唐晓艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qianjing Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Jiya Cell Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiya Cell Technology Co ltd filed Critical Jiya Cell Technology Co ltd
Priority to CN202010476477.2A priority Critical patent/CN113736733B/zh
Publication of CN113736733A publication Critical patent/CN113736733A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113736733B publication Critical patent/CN113736733B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/90—Polysaccharides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明是关于一种用于体外活化免疫细胞的培养基，该培养基含有Muparfostat，能有效抑制自然杀伤细胞及T细胞于细胞表面表达LAG‑3，藉由阻断细胞抑制性讯号的传递，增强自然杀伤细胞及T细胞的活性。

Description

一种用于体外活化免疫细胞的培养基
技术领域
本发明是关于一种用于体外活化免疫细胞的培养基。
背景技术
免疫细胞治疗是将病人本身的免疫细胞在体外增殖和活化后，再回输至体内的一种治疗方式。目前免疫细胞治疗已逐渐被应用于癌症治疗上，成功的关键在于了解各类免疫细胞的特性和功能，并根据癌症患者的状况及基因特性来选择最合适的免疫细胞类型，例如自然杀伤细胞(NK细胞)、T细胞等。
免疫细胞存在于外周血液。自血液分离出的外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell，PBMC)中，存在数种类型的细胞，包含血球细胞、淋巴球细胞及血小板。其中，淋巴球细胞即包含NK细胞、T细胞、NKT细胞、B细胞等免疫细胞。
由于NK细胞及T细胞的活性受到活化或抑制性受体的调控。其中，表达于NK细胞及T细胞表面的LAG-3，属于抑制性的受体，亦称为免疫检查点。当LAG-3与其配体结合时，将对NK细胞或T细胞传导抑制性的讯息，进而抑制NK细胞或T细胞的活性。因此以NK细胞及T细胞进行细胞疗法的挑战在于是否能够使该细胞持续被活化，不被抑制性受体的讯息所抑制。近几年发现，使用抗LAG-3抗体能够阻断LAG-3所传导的抑制性讯息，促进NK细胞或T细胞活化。然而，抗LAG-3抗体用于培养细胞仅提供暂时性的阻断效果，不但成本高且LAG-3抗体尚于试验阶段，注射至人体内仍存在一定疑虑，因此仍极需要开发出一种方便、有效、安全的体外活化免疫细胞的培养基。
Muparfostat，又称为PI-88，是天然酵母菌发酵产物经磺化所得的磺酸化单磷酸甘露寡聚糖，已知为乙酰肝素酶抑制剂(heparinase inhibitor)，具有抑制血管新生及抑制癌细胞转移的效果。Muparfostat 应用于体外免疫细胞培养方法与效用，目前未有相关研究。
发明内容
本发明于一方面，提供一种用于体外活化免疫细胞的培养基，其包含Muparfostat。在一较佳实施例中，前述培养基中Muparfostat的浓度为300μg/ml。
在一具体实施例中，前述培养基另包含细胞激素。在一较佳实施例中，该细胞激素是白介素2。在另一较佳实施例中，该白介素2于该培养基的浓度介于500至1000IU/ml。
在一具体实施例中，前述培养基另包含基础培养基。在一较佳实施例中，前述基础培养基选自由CellGro SCGM、KBM 501、AIM-V、X-VIV015、DMEM及RPM1-1640培养基所组成的群。
在一具体实施例中，前述免疫细胞包含自然杀伤细胞及T细胞。
在一具体实施例中，经前述培养基培养后的免疫细胞其LAG-3蛋白质的表达量下降。在另一具体实施例中，经前述培养基培养后的免疫细胞其表达LAG-3蛋白质的比例下降。
前面的概述，以及本发明以下的详细描述，在结合图式一起阅读时将可以被更好地理解。为了说明本发明，所附图式示出一些，但不是所有的，可替代的具体实施例。然而，应该理解的是，本发明并不限于所示的精确安排和手段。这些图式，其被并入并构成说明书的一部分，有助于解释本发明的原理。
附图说明
图1是本发明的免疫细胞体外活化方法流程图。
图2是依本发明培养PBMC后，针对表达LAG-3的自然杀伤细胞进行数量分析。
图3是依本发明培养PBMC后，针对细胞中LAG3蛋白质的表达量进行分析。
图4是依本发明培养PBMC并将其与一癌细胞株共同培养后，针对表达LAG-3的T细胞进行数量分析。其中，图4A为PBMC与A549癌细胞株共同培养的分析结果；而图4B为PBMC与HepG2癌细胞株共同培养的分析结果。
图5是依本发明培养PBMC并将其与一癌细胞株共同培养后，针对表达LAG-3的自然杀伤细胞(NK细胞)进行数量分析。其中，图5A为PBMC与A549癌细胞株共同培养的分析结果；而图5B为PBMC与HepG2癌细胞株共同培养的分析结果。
具体实施方式
有鉴于上述待解决的问题，本发明提出一种体外活化免疫细胞的培养基，该培养基含有Muparfostat，能有效抑制自然杀伤细胞及T细胞于细胞表面表达LAG-3，藉由阻断细胞抑制性讯号的传递，增强自然杀伤细胞及T细胞的活性。
定义
除非另有定义，所有在此使用的技术及科学术语，具有与本发明本领域普通技术人员一般所理解的意义相同的意义。当有所冲突时，以本文件及其所定义者为准。
于此处所使用者，「约」、「大约」、或「大概」一般应指一特定数值或范围的20％以内，较佳10％以内，及更佳5％以内。在此所使用的数值为近似值，代表若未明示地陈述，「约」、「大约」、或「大概」等词可以被推断适用。
于本发明中，「自然杀伤细胞」(natural killer cell)或「NK细胞」是指细胞表面抗原呈现CD3-CD56+的细胞。
于本发明中，「T细胞」(T cell)是指细胞表面抗原呈现CD3+的细胞。
于本发明中，「免疫细胞」是指外周血单个核细胞中的淋巴球细胞。
于本发明中，免疫细胞被「活化」是以下列方式判断：当NK细胞或T细胞不表达LAG-3时，该NK细胞或该T细胞具有较佳的活性。
材料与方法
本发明所述外周血检体，是依据伦理委员会通过的计划，自受试者手臂采集全血，置于无菌采血管，于室温存放待后续处理。
本发明所使用的基础培养基可选用自：CellGro SCGM(CellGenix公司)、KBM 501(Kohjin Bio公司)、AIM-V(Thermo Fisher公司)、X-VIV015(Lonza公司)、DMEM或RPM1-1640等市售的基础培养基。
本发明所述培养基中，有时含有适当的蛋白质、细胞激素、抗体、血清、化合物等成分。所述细胞激素有时为白介素-2(IL-2)、白介素-3(IL-3)、白介素-7(IL-7)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)或白介素-21(IL-21)。
制备muparfostat(PI-88)及包含其中的硫化磷酸甘露聚糖成份的方法已被美国专利公开号20140135282以及P.N.Handley等人所揭示(2017年)。P.N.Handley等人发表于糖类研究446-447第68至75页的「对酵母菌Pichia(Hansenula)holstii NRRL Y2448磷酸甘露聚糖的寡糖磷酸盐级分的新结构洞悉」一文中，揭示了PI-88的硫化磷酸甘露聚糖成份的以下化学结构通式：
Figure BDA0002516033180000051
自血液检体分离外周血单个核细胞的方法
抽取7.5-8ml的血液于采血管中，该采血管含有抗凝血剂-肝素，以及Ficoll-Hypaque试剂，外加一聚脂凝胶隔层以分离前述二液体。于室温下以1800g将采血管离心20分钟。离心完成后，收集血浆分层用于后续的细胞培养，并留下5至10mm的血浆层于接口上，操作时不扰动细胞层。接着以移液器收集接口的外周血单个核细胞层至15ml圆锥形管中，以10ml磷酸盐缓冲生理食盐水(Phosphate buffer saline；简称PBS)清洗PBMC并翻转圆锥形管5次，再以400g进行离心5分钟。重复前述清洗步骤两次之后，以5ml的PBS将细胞再悬浮。计算细胞数，通常1ml全血能够分离出1.3x106的PBMC。
体外活化免疫细胞的方法
将PBMC以每孔1x106细胞的密度置于六孔细胞培养盘，并加入培养基，在37℃及5％CO2的环境下培养。所述培养基是以AIM-V培养基(Thermo Fisher Scientific公司)为基础培养基，并添加浓度范围介于500～1000IU/ml的白介素-2(Novartis公司)，以及添加浓度为300μg/ml的Muparfostat。此后，每隔二至三天观察细胞的生长状况，依细胞生长状况更换新鲜的NK细胞培养基至第18天为止。培养期间，每隔二至三天添加浓度范围介于500～1000IU/ml的白介素-2(Novartis公司)；每日添加浓度为300μg/ml的Muparfostat。最后，将培养盘中的细胞与培养基混合液移至离心管，以离心方式收集所述混合液中的细胞，再以PBS清洗，重复此步骤三次后，以PBS将细胞均匀的打散，如此即获得活化后的免疫细胞。
以流式细胞仪分析细胞表面抗原
以2x105细胞/200μl将活化后的细胞置于96孔盘，并加入3μl荧光标记的抗体于4℃反应30分钟，接着以PBS清洗3次后，加入400μl的PBS悬浮细胞，再以流式细胞仪分析细胞表面的荧光标记。上述荧光标记的抗体包含anti-CD3抗体(clone UCTH1)、anti-CD56抗体(clone HCD56)以及anti-LAG-3抗体(clone 11C3C65)。
PBMC与癌细胞株共同培养的测试
将1x106的A549癌细胞株及3x106的HepG2癌细胞株置于T25细胞培养瓶中，添加适量培养基后培养一天。隔日，将癌细胞株以PBS清洗后，与新鲜制备的3x106的外周血单个核细胞共同培养，在37℃及5％CO2的环境下培养至第四天。每日于实验组的培养基添加浓度为300μg/ml的Muparfostat；对照组则于培养期间不添加Murpafostat。第四天，将细胞与培养基混合液移至离心管，以离心方式收集所述混合液中的细胞，再以PBS清洗以2x105细胞/200μl将活化后的细胞置于96孔盘，并加入3μl荧光标记的抗体于4℃反应30分钟，接着以PBS清洗3次后，加入400μl的PBS悬浮细胞，再以流式细胞仪分析细胞表面的荧光标记。上述荧光标记的抗体包含anti-CD3抗体(clone UCTH1)、anti-CD56抗体(cloneHCD56)以及anti-LAG-3抗体(clone 11C3C65)。
以Western印迹法分析LAG-3蛋白质表达
将外周血单个核细胞以前面“体外活化免疫细胞的方法”中所述的方法培养至第18天后，以RIPA溶液(Tris-HCl 50mM pH 7.5,NaCl150mM,NP-40 1％,SDS 0.1％)裂解培养后的PBMC以及CMV3-His-LAG-3转殖的293ft细胞(阳性对照组)。以12％的SDS-PAGE分离来自PBMC及293ft细胞的蛋白质，并将蛋白质转印至PVDF膜(BIO-RAD公司)。所述PVDF膜预先以含有4％小牛血清(BSA)的PBS于室温下进行封闭一小时。接着，将PVDF模与一级抗体结合，该抗体包含anti-LAG-3(17B4)抗体(以1:1000的比例添加；Novus Biologicals公司)以及anti-GAPDH(GT239)抗体(GeneTex公司)。将PVDF膜以PBST清洗三次，每次十分钟，再加入二级抗体Peroxidase-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG+IgM(H+L)抗体(以1:10000的比例添加；Jackson ImmunoResearch Inc公司)，于室温下反应一小时。接着，将PVDF膜以PBST清洗三次后，以Trident femto WesternHRP Substrate(GeneTex公司)侦测讯号。最后以ImageJ影像分析程序判读相对的蛋白质量。
实施例
实施例1、培养基添加Muparfostat的培养结果
图2是依本发明培养PBMC后，针对表达LAG-3的自然杀伤细胞进行数量分析。由图2可发现，当培养基未添加Muparfostat，在第18天，表达LAG-3的自然杀伤细胞(即表面抗原为LAG-3+CD3-CD56+的细胞)占PBMC中NK细胞总数的83％；相较于此，当每日于培养基添加浓度为300μg/ml的Muparfostat，在第18天，LAG-3+CD3-CD56+细胞数量下降，只占NK细胞总数的64％。此结果显示，于培养基添加Muparfostat有效增加不表达LAG-3的NK细胞数，该类NK细胞具有较佳的活性。
为进一步探究Muparfostat对于活化免疫细胞的作用机制，针对细胞中LAG3蛋白质的表达量进行分析。图3是依本发明培养PBMC后，针对细胞中LAG3蛋白质的表达量进行分析。结果显示，相较于未添加Muparfostat的对照组，添加Muparfostat培养后的PBMC，其LAG-3蛋白质的表达量为对照组的58％。由图3可发现，Muparfostat有助于抑制LAG-3蛋白质于免疫细胞的表达量，进而阻断LAG-3所传递的抑制性讯息，达到活化免疫细胞的效果。
实施例2、与癌细胞株共同培养的测试结果
为模拟免疫细胞与癌细胞互动的情境，本实施例是将PBMC与癌细胞株共同培养。所述癌细胞株包含A549癌细胞株(非小细胞肺癌细胞株)以及HepG2细胞株(肝癌细胞株)。图4是依本发明培养PBMC并将其与癌细胞株共同培养后，针对表达LAG-3的T细胞进行数量分析。其中，图4A为PBMC与A549癌细胞株共同培养的分析结果，该结果显示，在未添加Muparfostat的对照组中，表达LAG-3的T细胞占PBMC总数的5.3％，而在添加Muparfostat的实验组中，表达LAG-3的T细胞数量减少，仅占PBMC总数的3.2％。图4B为PBMC与HepG2癌细胞株共同培养的分析结果，该结果显示，在未添加Muparfostat的对照组中，表达LAG-3的T细胞占PBMC总数的5.2％，而在添加Muparfostat的实验组中，表达LAG-3的T细胞数量明显减少，仅占PBMC总数的1％。
图5是依本发明培养PBMC并将其与一癌细胞株共同培养后，针对表达LAG-3的自然杀伤细胞(NK细胞)进行数量分析。其中，图5A为PBMC与A549癌细胞株共同培养的分析结果，该结果显示，在未添加Muparfostat的对照组中，表达LAG-3的NK细胞占PBMC总数的5％，而在添加Muparfostat的实验组中，表达LAG-3的NK细胞数量减少，仅占PBMC总数的3.2％。图5B为PBMC与HepG2癌细胞株共同培养的分析结果，该结果显示，在未添加Muparfostat的对照组中，表达LAG-3的NK细胞占PBMC总数的7.7％，而在添加Muparfostat的实验组中，表达LAG-3的NK细胞数量明显减少，仅占PBMC总数的1.5％。综上，于培养基添加Muparfostat有效增加不表达LAG-3的NK细胞数量及T细胞数量，该类NK细胞及T细胞具有较佳的活性，因此可达到活化免疫细胞的效果。

Claims (10)

1.一种用于体外活化免疫细胞的培养基，其包含Muparfostat。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，其中该Muparfostat的浓度为300μg/ml。
3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，其另包含细胞激素。
4.如权利要求3所述的培养基，其特征在于，其中该细胞激素是白介素2。
5.如权利要求4所述的培养基，其特征在于，其中该白介素2于该培养基的浓度是介于500至1000IU/ml。
6.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，其另包含基础培养基。
7.如权利要求6所述的培养基，其特征在于，其中该基础培养基是选自由CellGroSCGM、KBM 501、AIM-V、X-VIV015、DMEM及RPM1-1640培养基所组成的群。
8.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，其中该免疫细胞包含自然杀伤细胞及T细胞。
9.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，经该培养基培养后的免疫细胞其LAG-3蛋白质的表达量下降。
10.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，经该培养基培养后的免疫细胞其表达LAG-3蛋白质的比例下降。
CN202010476477.2A 2020-05-29 2020-05-29 一种用于体外活化免疫细胞的培养基 Active CN113736733B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010476477.2A CN113736733B (zh) 2020-05-29 2020-05-29 一种用于体外活化免疫细胞的培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010476477.2A CN113736733B (zh) 2020-05-29 2020-05-29 一种用于体外活化免疫细胞的培养基

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113736733A true CN113736733A (zh) 2021-12-03
CN113736733B CN113736733B (zh) 2023-04-25

Family

ID=78724739

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010476477.2A Active CN113736733B (zh) 2020-05-29 2020-05-29 一种用于体外活化免疫细胞的培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113736733B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009151183A1 (en) * 2008-06-10 2009-12-17 Nkbio Co., Ltd A medium composition for cultivating self activated lymphocyte
US20140135282A1 (en) * 2011-06-09 2014-05-15 Medigen Biotechnology Corp Pharmaceutical composition for use in inhibiting recurrence, aggravation and metastasis of hepatocarcinoma
WO2016046346A1 (en) * 2014-09-24 2016-03-31 Cemm Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh Monolayer of pbmcs or bone-marrow cells and uses thereof
US20160206717A1 (en) * 2015-01-16 2016-07-21 Batu Biologics, Inc. Stimulation of immunity to endothelial cells, endothelial-like cells, and intratumor vascular channels derived from tumor tissue
CN108220235A (zh) * 2016-12-22 2018-06-29 细胞邦(北京)生物技术有限公司 一种体外活化扩增人自然杀伤（nk）细胞的方法及其专用培养体系

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009151183A1 (en) * 2008-06-10 2009-12-17 Nkbio Co., Ltd A medium composition for cultivating self activated lymphocyte
US20140135282A1 (en) * 2011-06-09 2014-05-15 Medigen Biotechnology Corp Pharmaceutical composition for use in inhibiting recurrence, aggravation and metastasis of hepatocarcinoma
WO2016046346A1 (en) * 2014-09-24 2016-03-31 Cemm Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh Monolayer of pbmcs or bone-marrow cells and uses thereof
US20160206717A1 (en) * 2015-01-16 2016-07-21 Batu Biologics, Inc. Stimulation of immunity to endothelial cells, endothelial-like cells, and intratumor vascular channels derived from tumor tissue
CN108220235A (zh) * 2016-12-22 2018-06-29 细胞邦(北京)生物技术有限公司 一种体外活化扩增人自然杀伤（nk）细胞的方法及其专用培养体系

Also Published As

Publication number Publication date
CN113736733B (zh) 2023-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1399580B1 (en) Secretion of proteins by encapsulated cells
CN105754941B (zh) 一种外周血nk细胞的体外诱导扩增培养方法
EP0688223A1 (en) $i(IN VITRO) ASSAY MEASURING DEGREE OF ACTIVATION OF IMMUNE CELLS
WO2007117602A2 (en) Isolation and use of human regulatory t cells
CN111944754B (zh) 一种自然杀伤细胞的培养方法
EP1019546B1 (en) Methods for measurement of lymphocyte function
WO2022194118A1 (zh) 一种car-t细胞灌流培养方法
CN115044552A (zh) 一种自然杀伤细胞的体外培养方法及试剂盒
CN110982786A (zh) 评估人脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分泌TNF-α的方法
CN112251405A (zh) 一种体外高效诱导扩增nk细胞的方法
CN113736733B (zh) 一种用于体外活化免疫细胞的培养基
CN113736732B (zh) 一种体外活化免疫细胞的方法
TWI753442B (zh) 一種體外活化免疫細胞之方法
TWI753443B (zh) 一種用於體外活化免疫細胞之培養基
CN113293130B (zh) 一种肿瘤特异性t细胞的培养方法
CN111690606B (zh) 体外激活扩增人体自然杀伤细胞及杀伤率检测方法
Loza et al. Multiple color immunofluorescence for cytokine detection at the single-cell level
Ke et al. High-level of intratumoral GITR+ CD4 T cells associate with poor prognosis in gastric cancer
Whiteside Isolation of human NK cells and generation of LAK activity
AU2020388676A1 (en) Antibody producing microfluidic devices
CN113195706A (zh) Ciml nk细胞及其方法
EP3962604A1 (en) Systems and methods for modulating a cell phenotype
WELLS A new approach to the separation of cells at unit gravity
CN110564684A (zh) 一种体外稳定、大量扩增、高细胞毒活性的nk细胞的方法及应用
CN115161280B (zh) 一种γδT细胞培养液及γδT细胞扩增培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 100039 3rd floor, building 8, courtyard 78, West Fourth Ring Middle Road, Fengtai District, Beijing

Patentee after: Qianjing Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 100039 3rd floor, building 8, courtyard 78, West Fourth Ring Middle Road, Fengtai District, Beijing

Patentee before: Jiya Cell Technology Co.,Ltd.

CP01 Change in the name or title of a patent holder