CN113735960B - 一种fgf重组蛋白治疗nash的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种FGF重组蛋白治疗NASH的应用，属于医药技术领域。本发明在FGF19突变体NGM282基础上进行改造，得到的新型FGF19类似物的与NGM282相比具有更长效、更稳定的效果，能更好的改善肝脏损伤及纠正代谢紊乱、胖症、超重、代谢综合征、糖尿病、血脂异常等病症，且治疗过程中均未出现原始FGF19突变体NGM282治疗过程引起胆固醇升高及饮食下降的副作用。

Description

一种FGF重组蛋白治疗NASH的应用
本申请是申请号为CN202110269910.X、申请日为2021年03月12日、发明名称为一种新型抗代谢紊乱的FGF类似物及其应用的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种FGF重组蛋白治疗NASH的应用，属于医药技术领域。
背景技术
成纤维细胞生长因子19(FGF19)是新近发现的一种代谢调节因子，由胆汁酸分泌进入肠道后刺激肠道分泌和表达。FGF19经肠道分泌后可随循环进入肝脏并与肝脏中的FGFR4结合起作用，它具有激素样作用，发挥着重要的代谢调节作用，如调节胆汁酸代谢、调节胆囊的充盈、提高能量代谢降低体质量、改善血糖等。由于前期多项研究表明FGF19具有促有丝分裂作用，FGFR4能促进FGF19在肝脏中的增殖并具有促癌作用。2014年有研究发现FGF19N末端结构域是与FGFR相互作用至关重要的区域，因此，选择性地敲除识别FGFR4受体的区域，能消除FGF19促有丝分裂的活性，因此，多篇文章集中在FGF19的N端进行突变。
NGM282是人FGF19的非致瘤性工程化变体，是属于FGF19 N端改造的一种突变体。NGM282刚刚在美国完成II期临床研究，结果显示，79％的患者达到主要治疗终点，34％的患者在12周时达到正常的肝脏脂肪含量。该突变体改善了患者肝功能、脂质代谢和纤维化的血清生物标志物，显示出治疗代谢类疾病的疗效。但是在上述临床研究中除了观察到一些常见的消化道症状、恶心和注射部位红斑外，还发现FGF19突变体NGM282注射后可以显著提高胆固醇含量，而多项研究表明胆固醇含量升高是代谢类疾病的显著高危因素之一，这对代谢类疾病治疗来说是个巨大的风险。此外，FGF19还会引起厌食，食欲降低等症状，对未来治疗过程存在一定的隐患，因此如何优化FGF19，以降低其副作用是目前推进FGF19应用于多种疾病治疗的关键问题。
发明内容
鉴此，本发明通过预测及试验，在原始非致癌序列基础上进行改造，构建出4种突变蛋白，通过优化生产及纯化工艺制备了4种具有生物学活性的FGF19突变蛋白。结果显示4种突变体均可发挥治疗肥胖症、超重、代谢综合征、糖尿病、高血糖症、血脂异常，以及非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、动脉粥样硬化、肝损伤、肝硬化、肝癌、原发性胆汁性胆管炎(PBC)及原发性硬化性胆管炎(PSC)的功效，且4种突变体治疗效果显著优于NGM282蛋白。
本发明提供了FGF19蛋白类似物，所述FGF19蛋白类似物氨基酸序列如SEQ IDNO.1～4任一所示。
在一种实施方式中，编码所述FGF19蛋白类似物的基因。
在一种实施方式中，SEQ ID NO.1～4所示氨基酸对应的编码基因核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5～8所示。
本发明提供了携带所述基因的载体和/或宿主细胞。
本发明提供了治疗糖尿病或肥胖的药物或药物组合物，含有所述FGF19蛋白类似物。
在一种实施方式中，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的载剂或辅料。
在一种实施方式中，所述治疗糖尿病或肥胖包括抑制体重增加、降低血脂和血糖、提高胰岛素敏感性。
本发明提供了治疗肝炎或相关疾病的药物或药物组合物，含有所述FGF19蛋白类似物。
在一种实施方式中，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的载剂或辅料。
在一种实施方式中，所述治疗肝炎或相关疾病包括降低肝脏重量和肝脏甘油三酯的含量、修复肝脏损伤、抑制炎症因子的表达，改善非酒精性脂肪性肝炎、动脉粥样硬化、肝损伤、肝硬化及肝癌原发性胆汁性胆管炎和/或原发性硬化性胆管炎。
本发明提供了所述FGF19蛋白类似物在制备治疗糖尿病、肥胖、肝炎或肝炎相关疾病中的一种或多种疾病的药物中的应用。
在一种实施方式中，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的载剂或辅料。
在一种实施方式中，所述FGF19蛋白类似物的剂量为1～100mg/kg。
在一种实施方式中，所述FGF19蛋白类似物的剂量为2～30mg/kg。
在一种实施方式中，所述药物的给药途径包括口服、腹腔注射、皮下注射、静脉注射或肌肉注射。
本发明的有益效果：
(1)本发明的4种新型FGF19类似物与原始FGF19突变体NGM282相比具有更长效、更稳定、更好的治疗胖症，超重，代谢综合征，糖尿病，高血糖症，血脂异常，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、动脉粥样硬化、肝损伤、肝硬化、肝癌、原发性胆汁性胆管炎(PBC)及原发性硬化性胆管炎(PSC)的功效。
(2)本发明的4种新型FGF19类似物治疗过程中均未出现原始FGF19突变体NGM282治疗过程引起胆固醇升高及饮食下降的副作用，对机体正常生命活动影响较小。
附图说明
图1是纯化后的蛋白在大肠杆菌中表达量的SDS-PAGE电泳分析图，分别为FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3、FGF19-4和NGM282蛋白；
图2是5种蛋白的体内半衰期比较图；
图3是5种蛋白对db/db小鼠体重和饮食的影响图；
图4是5种蛋白对db/db小鼠血脂的影响图；
图5是5种蛋白对db/db小鼠糖尿病相关指标的影响图；
图6是5种蛋白对NASH模型小鼠脂肪性肝炎及肝纤维化等相关指标的影响图；
图7是5种蛋白对肝癌移植瘤小鼠肿瘤增殖的影响图。
具体实施方式
实验动物及饲养：裸鼠及db/db小鼠购于上海斯莱克公司。饲养于江南大无锡医学院动物中心，每12小时交替照明，温度20±2℃。
细胞培养：肝癌细胞系HepG2由中国科学院生物化学与细胞生物学研究所提供；DMEM、0.05％Trypsin，购于博士德公司；胎牛血清购于四季青公司。
其他药品为国产分析纯。
肝癌细胞系HepG2贴壁生长于含10％胎牛血清的DMEM培养液中，于37℃，5％CO2湿化培养箱中培养，隔天传代一次。
实施例1：重组蛋白的构建、表达及纯化
(1)FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4表达载体的构建
根据计算机模拟替换及大肠杆菌密码子偏好性，设计出4种新型FGF19基因，其核苷酸序列分别如序列表中FGF19-1(核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示)、FGF19-2(核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示)、FGF19-3(核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示)、FGF19-4(核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示)所示。将这4种基因送至上海捷瑞生物公司合成，同时在各基因两端设计NdeI与BamHI两酶切位点。将4种合成的含有各自目的基因片段的载体和pET30a(+)分别用NdeI与BamHI双酶切，酶切完毕后，胶回收各自需要的目标片段。使用T4DNA连接酶将4种目的片段分别与原核表达载体pET30a(+)连接，连接反应体系为10μL，混匀，4℃连接过夜，然后各自转化至大肠杆菌DH5α中。挑取阳性克隆，经过酶切鉴定后，即分别构建得到4种重组质粒pET30a-FGF19-1、pET30a-FGF19-2、pET30a-FGF19-3和pET30a-FGF19-4。
(2)蛋白的表达及纯化
将含有正确序列的重组质粒pET30a-FGF19-1、pET30a-FGF19-2、pET30a-FGF19-3和pET30a-FGF19-4转化至表达菌株Rosseta(DE3)感受态细胞中。转化后的单菌落分别接种至20mL含Kan(50μg/mL)的LB培养基中，37℃培养8h，以体积比为1:100接种于另一20mL含Kan(50μg/mL)的LB培养基中，37℃培养，当A600在0.35左右时，加入IPTG至终浓度为0.25mmol/L进行诱导，诱导温度为30℃，5h后收获菌体，用Lysis buffer(20mmol/LTris，150mmol/LNaCl，pH8.0)重悬菌体，破碎菌体后离心，分别取上清和沉淀进行12wt％SDS-PAGE电泳分析。结果显示FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4蛋白在大肠杆菌中表达量显著增加，目标蛋白大部分以包涵体形式存在。
收集大量诱导后的菌体，向菌体中加入溶菌酶(1mg/mL)，冰上放置30min，超声波细胞破碎菌体细胞(工作1s，间隔1s，4min/次，共3次循环)。菌体破碎彻底后，利用QuixStand预处理系统(750kD超滤中空纤维柱)处理细胞破碎液，富集包涵体，弃去膜透过端液体。当总体积约为60mL时，加入100mLwashbuffer(20mmol/LTris，2mol/LUrea，150mmol/LNaCl，pH8.0)洗涤包涵体。当溶液体积为50mL，再向其中加入洗涤液100mL，重复上述实验4次。洗涤完毕后，当溶液体积为50mL，关闭透过端，向洗涤后的包涵体中加入150mL的变性液(20mmol/LTris，10mol/LUrea，150mmol/LNaCl，pH8.0)，循环变性2小时。打开透过端，膜透过端收集液即为mFGF21变性液。用5KD中空纤维柱对变性后的mFGF21进行浓缩，至体积80mL后进行复性，将装有复性液(20mmol/LTris，50mmol/LNaCl，pH8.0)的容器用胶皮管与中空纤维柱的储液器连接。储液器密封后，透过端流出液体后，由于储存器中产生负压，使复性液以一定的速度滴加至变性液中，缓慢匀速复性。当加入复性液体积为变性液6倍时，即复性完毕，8000rpm/min，4℃离心20min，收集上清。复性上清液经AKTApurifier100系统，与5倍柱体积IEXbufferA(20mmol/LTris、10mmol/LNaCl，pH8.0)平衡好的CaptoQ柱(装于XK16/20空柱，柱高10cm，流速300cm/h)完全结合后，用3-4倍柱体积IEXbufferA冲洗；当紫外曲线达到稳定的基线时，利用IEXbufferA和IEXbufferB(20mmol/LTris，1mol/LNaCl，pH8.0)混合液洗脱，15wt％和100wt％IEXbufferB液冲洗杂蛋白，18.5wt％-19wt％IEXbufferB液洗脱目标蛋白，收集各洗脱峰，并进行15wt％SDSPAGE电泳分析。结果显示纯化后蛋白纯度在95％以上，如图1所示，泳道1为蛋白标准分子量Marker；泳道2-6分别为纯化后的FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4。
实施例2：重组蛋白体内半衰期的检测
5种蛋白NGM282、FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4的体内半衰期检测。
选取体重约2kg的家兔25只，随机分为5组。每组分别皮下注射5种蛋白NGM282、FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4，剂量30mg/kg，在给药后的0h、1h、3h、5h、7h、24h，于耳缘静脉采血800μL左右。12000r/m离心10min，取上清保存于-20℃备用。ELISA间接法测定5种蛋白的体内半衰期：用稀释好不同浓度的NGM282、FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4蛋白(2μg/mL、0.2μg/mL、200ng/mL、20ng/mL和2ng/mL)分别建立蛋白浓度含量的标准曲线，将稀释后的标准蛋白和血清包被酶标板，应用ELISA间接法测定各血清中目标蛋白的含量，统计学分析并计算出6种蛋白的体内半衰期。
体内半衰期t1/2＝0.301*(t2-t1)/log(OD1/OD2)，其中OD1和OD2分别表示t1和t2时取出血清所对应酶标板上的平均光吸收值。
结果如图2所示，经公式计算出NGM282蛋白和突变改造后的蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4的体内半衰期分别约为36min、79min、66min、67min、69min，说明了4种新型FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4体内半衰期显著增加。
实施例3：重组蛋白对体重、饮食、血脂及糖尿病相关指标的影响
按照实施例1的方法制备FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4这4种蛋白。
取SPF级8周龄雄性db/db小鼠50只，预饲养1周后称重，次日禁食不禁水6h，尾静脉取血测定小鼠的空腹血糖，剔除体重异常，筛选血糖及体重值相对接近均值的成模小鼠42只，随机分为生理盐水注射组(Saline)、NGM282组、FGF19-1组、FGF19-2组、FGF19-3组和FGF19-4组，每组6只。于每天早上8点半左右给予实验组相应的受试物一次，腹腔注射，剂量2mg/kg，生理盐水组注射相同体积的生理盐水，连续给药8周。实验过程中自由饮食、饮水。期间监测小鼠饮食和体重状况。给药8周后，各实验组小鼠处死(前夜禁食)，眼球取血测定实验小鼠血糖、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)水平。所得实验数据进行统计学分析。
实验检测数据如图3～图5所示，图3结果表明，相对于生理盐水对照组，NGM282蛋白和突变改造后的4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4均可显著降低小鼠体重，但NGM282蛋白注射后可显著降低小鼠饮食，抑制其食欲，而相对于NGM282，4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4给药后不仅能更为强劲和显著的抑制体重外，且并不影响小鼠进食，表明此种突变改造成功的改善了原始FGF19饮食下降的副作用。
给药8周后，各实验组小鼠血清血脂水平结果如图4所示，相对于生理盐水组，NGM282显著升高了小鼠血清中TG、TC及LDL-c的含量，而各种HDL-c的含量无明显差异，这与之前的诸多临床报道一致，多项研究表明胆固醇及血脂含量升高是代谢类疾病的显著高危因素之一，这对代谢类疾病治疗来说是个巨大的风险。而经过多项替换改造后，4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4注射后不仅没有原始FGF19蛋白升高TG、TC及LDL-c的副作用，还可显著降低血清中TG的含量，这些结果进一步表明此种突变改造成功的改善了原始FGF19血脂升高的副作用，极大的增加了FGF19临床应用的安全性和有效性。
给药期间，分别在0周，2周，4周及8周测量空腹血糖，各实验组小鼠空腹血糖水平结果如图5A所示，治疗2周后，NGM282并无明显改善血糖效果，而FGF19-1，FGF19-3已显著降低小鼠空腹血糖；治疗4周后，NGM282才开始发挥降低血糖的作用，但治疗效果显著低于FGF19-3和FGF19-4，8周后几组之间无明显差异，结果表明突变后的重组FGF19蛋白降糖作用起效快且优于原始NGM282。给药8周后，进行了葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验，结果如图5B和5C所示，相对于NGM282蛋白，突变改造后的4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4可更为显著的改善糖尿病小鼠葡萄糖敏感性和胰岛素敏感性。
实施例4：重组蛋白对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关指标的影响
按照实施例1的方法制备FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4这4种蛋白。
取SPF级8周龄雄性C57BL/6小鼠60只，预饲养1周后喂食蛋氨酸胆碱缺失MCD饲料，喂食8周后，剔除体重异常，筛选血糖及体重值相对接近均值的成模小鼠42只，随机分为生理盐水注射组(Saline)、NGM282组、FGF19-1组、FGF19-2组、FGF19-3组和FGF19-4组，每组6只。于每天早上8点半左右给予实验组相应的受试物一次，腹腔注射，剂量2mg/kg，生理盐水组注射相同体积的生理盐水，连续给药8周。实验过程中自由饮食、饮水。给药8周后，各实验组小鼠处死(前夜禁食)，测定实验小鼠肝脏甘油三脂(TG)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)水平并进行组织切片染色和炎症指标检测。所得实验数据进行统计学分析。
实验检测数据如图6所示，图6A结果表明，相对于生理盐水对照组(Saline)，NGM282蛋白和突变改造后的4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4均可显著降低小鼠肝脏重量和肝脏甘油三酯(TG)含量，但4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4治疗效果要明显优于NGM282。图6B转氨酶结果进一步显示4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4对肝脏损伤的保护功能显著优于NGM282。此外，HE染色结果直接显示出4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4注射后可显著降低肝脏脂肪空泡，显微镜下几乎观察不到空泡，而NGM282治疗后还存在部分脂肪空泡(图6C)。图6D是天狼星红染色结果，用以观察肝脏胶原纤维沉积情况，反应肝脏纤维化，结果显示突变改造后的4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4均可逆转肝脏纤维化，而NGM282治疗会还存在部分纤维化状态，表明改造后的重组蛋白对肝脏纤维化的逆转效果显著优于NGM282。NASH的主要病理状态是肝脏存在炎症，通过qPCR检测标志性炎症因子表达情况，结果显示突变改造后的4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4均可显著抑制炎症因子表达，且抑制效果显著优于NGM282(图6E)。通过上述多项指标检测发现突变改造后的4种新型蛋白FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4针对NASH和肝脏损伤的治疗效果显著优于原始序列。
实施例5：重组蛋白对肝癌的影响
按照实施例1的方法制备FGF19-1、FGF19-2、FGF19-3和FGF19-4这4种蛋白。
将人肝癌细胞HepG2细胞按照1×106个细胞/只接种6周龄的雄性裸鼠的皮下，待肿瘤长至200mm3随机分为生理盐水注射组(Saline)、NGM282组、FGF19-1组、FGF19-2组、FGF19-3组和FGF19-4组，每组6只。于每天早上8点半左右给予实验组相应的受试物一次，腹腔注射，剂量2mg/kg，生理盐水组注射相同体积的生理盐水，连续给药21天。每天监测肿瘤体积，三周后处死小鼠，称量肿瘤重量。结果显示：5种均能抑制移植瘤体积和最终肿瘤重量，但NGM282抑制效果显著低于突变后的重组蛋白(如图7所示)。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一种FGF重组蛋白治疗NASH的应用
<130> BAA211288A
<160> 8
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 189
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Arg Asp Ser Ser Pro Leu Val His Tyr Gly Trp Gly Asp Pro Ile
1               5                   10                  15
Arg Leu Arg His Leu Tyr Thr Ser Gly Pro His Gly Leu Ser Ser Cys
            20                  25                  30
Phe Leu Arg Ile Arg Ala Asp Gly Val Val Asp Cys Ala Arg Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Ala His Ser Leu Leu Glu Ile Lys Ala Val Ala Leu Arg Thr Val
    50                  55                  60
Ala Ile Lys Gly Val His Ser Val Arg Tyr Leu Cys Met Gly Ala Asp
65                  70                  75                  80
Gly Lys Met Gln Gly Leu Leu Gln Tyr Ser Glu Glu Asp Cys Ala Phe
                85                  90                  95
Glu Glu Glu Ile Arg Pro Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Arg Ser Glu Lys
            100                 105                 110
His Arg Leu Pro Val Cys Leu Ser Ser Ala Lys Gln Arg Gln Leu Tyr
        115                 120                 125
Lys Asn Arg Gly Phe Leu Pro Leu Cys His Phe Leu Pro Met Leu Pro
    130                 135                 140
Met Val Pro Glu Glu Pro Glu Asp Leu Arg Gly His Leu Glu Ser Asp
145                 150                 155                 160
Met Phe Ser Ser Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met
                165                 170                 175
Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Ala Ser
            180                 185
<210> 2
<211> 178
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Met Arg Asp Ser Ser Pro Leu Val His Tyr Gly Trp Gly Asp Pro Ile
1               5                   10                  15
Arg Leu Arg His Leu Tyr Thr Ser Gly Pro His Gly Leu Ser Ser Cys
            20                  25                  30
Phe Leu Arg Ile Arg Ala Asp Gly Val Val Asp Cys Ala Arg Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Ala His Ser Leu Leu Glu Ile Lys Ala Val Ala Leu Arg Thr Val
    50                  55                  60
Ala Ile Lys Gly Val His Ser Val Arg Tyr Leu Cys Met Gly Ala Asp
65                  70                  75                  80
Gly Lys Met Gln Gly Leu Leu Gln Tyr Ser Glu Glu Asp Cys Ala Phe
                85                  90                  95
Glu Glu Glu Ile Arg Pro Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Arg Ser Glu Lys
            100                 105                 110
His Arg Leu Pro Val Cys Leu Ser Ser Ala Lys Gln Arg Gln Leu Tyr
        115                 120                 125
Lys Asn Arg Gly Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro
    130                 135                 140
Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser
145                 150                 155                 160
Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr
                165                 170                 175
Ala Ser
<210> 3
<211> 191
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Met Ala Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln
1               5                   10                  15
Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Arg Thr Glu Ala His Leu Glu
            20                  25                  30
Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu
        35                  40                  45
Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu
    50                  55                  60
Gly Val Arg Thr Pro Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu
65                  70                  75                  80
Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu
                85                  90                  95
Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu
            100                 105                 110
Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro
        115                 120                 125
Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Cys His Phe Leu Pro Met Leu
    130                 135                 140
Pro Met Val Pro Glu Glu Pro Glu Asp Leu Arg Gly His Leu Glu Ser
145                 150                 155                 160
Asp Met Phe Ser Ser Pro Leu Glu Thr Asp Ser Met Asp Pro Phe Gly
                165                 170                 175
Leu Val Thr Gly Leu Glu Ala Val Arg Ser Pro Ser Phe Glu Lys
            180                 185                 190
<210> 4
<211> 180
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Met Ala Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln
1               5                   10                  15
Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Arg Thr Glu Ala His Leu Glu
            20                  25                  30
Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu
        35                  40                  45
Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu
    50                  55                  60
Gly Val Arg Thr Pro Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu
65                  70                  75                  80
Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu
                85                  90                  95
Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu
            100                 105                 110
Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro
        115                 120                 125
Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu
    130                 135                 140
Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Leu Glu Thr Asp Ser
145                 150                 155                 160
Met Asp Pro Phe Gly Leu Val Thr Gly Leu Glu Ala Val Arg Ser Pro
                165                 170                 175
Ser Phe Glu Lys
            180
<210> 5
<211> 567
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
atgcgtgata gcagcccgct ggttcattat ggttggggtg atccgattcg tctgcgtcat 60
ctgtatacca gcggtccgca tggtctgagc agctgttttc tgcgtattcg tgcagatggt 120
gttgttgatt gtgcacgtgg tcagagcgca catagcctgc tggaaattaa agcagttgca 180
ctgcgtaccg ttgcaattaa aggtgttcat agcgttcgtt atctgtgtat gggtgcagat 240
ggtaaaatgc agggtctgct gcagtatagc gaagaagatt gtgcatttga agaagaaatt 300
cgtccggatg gttataatgt ttatcgtagc gaaaaacatc gtctgccggt ttgcctgagc 360
agcgcaaaac agcgtcagct gtataaaaat cgtggttttc tgccgctgtg ccattttctg 420
ccgatgctgc cgatggttcc ggaagaaccg gaagatctgc gtggtcatct ggaaagcgat 480
atgtttagca gcccgcccga tgtgggctcc tcggaccctc tgagcatggt gggaccttcc 540
cagggccgaa gccccagcta cgcttcc 567
<210> 6
<211> 537
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
atgcgtgata gcagcccgct ggttcattat ggttggggtg atccgattcg tctgcgtcat 60
ctgtatacca gcggtccgca tggtctgagc agctgttttc tgcgtattcg tgcagatggt 120
gttgttgatt gtgcacgtgg tcagagcgca catagcctgc tggaaattaa agcagttgca 180
ctgcgtaccg ttgcaattaa aggtgttcat agcgttcgtt atctgtgtat gggtgcagat 240
ggtaaaatgc agggtctgct gcagtatagc gaagaagatt gtgcatttga agaagaaatt 300
cgtccggatg gttataatgt ttatcgtagc gaaaaacatc gtctgccggt ttgcctgagc 360
agcgcaaaac agcgtcagct gtataaaaat cgtggttttc tgccgctgcc aggcctgccc 420
cccgcactcc cggagccacc cggaatcctg gccccccagc cccccgatgt gggctcctcg 480
gaccctctga gcatggtggg accttcccag ggccgaagcc ccagctacgc ttcctga 537
<210> 7
<211> 576
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
atggcagact ccagtcctct cctgcaattc gggggccaag tccggcagcg gtacctctac 60
acagatgatg cccagcgtac agaagcccac ctggagatca gggaggatgg gacggtgggg 120
ggcgctgctg accagagccc cgaaagtctc ctgcagctga aagccttgaa gccgggagtt 180
attcaaatct tgggagtccg tacaccgagg ttcctgtgcc agcggccaga tggggccctg 240
tatggatcgc tccactttga ccctgaggcc tgcagcttcc gggagctgct tcttgaggac 300
ggatacaatg tttaccagtc cgaagcccac ggcctcccgc tgcacctgcc agggaacaag 360
tccccacacc gggaccctgc accccgagga ccagctcgct tcctgccact atgccatttt 420
ctgccgatgc tgccgatggt tccggaagaa ccggaagatc tgcgtggtca tctggaaagc 480
gatatgttta gcagcccgct ggaaaccgat agcatggacc cgtttggtct ggttaccggt 540
ctggaagcag ttcgtagccc gagctttgaa aaataa 576
<210> 8
<211> 543
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
atggcagact ccagtcctct cctgcaattc gggggccaag tccggcagcg gtacctctac 60
acagatgatg cccagcgtac agaagcccac ctggagatca gggaggatgg gacggtgggg 120
ggcgctgctg accagagccc cgaaagtctc ctgcagctga aagccttgaa gccgggagtt 180
attcaaatct tgggagtccg tacaccgagg ttcctgtgcc agcggccaga tggggccctg 240
tatggatcgc tccactttga ccctgaggcc tgcagcttcc gggagctgct tcttgaggac 300
ggatacaatg tttaccagtc cgaagcccac ggcctcccgc tgcacctgcc agggaacaag 360
tccccacacc gggaccctgc accccgagga ccagctcgct tcctgccact accaggcctg 420
ccccccgcac tcccggagcc acccggaatc ctggcccccc agcccctgga aaccgatagc 480
atggacccgt ttggtctggt taccggtctg gaagcagttc gtagcccgag ctttgaaaaa 540
taa 543

Claims (8)

1.FGF19蛋白类似物，其特征在于，所述FGF19蛋白类似物氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.编码权利要求1所述FGF19蛋白类似物的基因。
3.携带权利要求2所述基因的载体和/或微生物细胞。
4.治疗糖尿病或肥胖的药物或药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述FGF19蛋白类似物。
5.治疗肝炎或相关疾病的药物或药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述FGF19蛋白类似物；所述治疗肝炎或相关疾病为改善或治疗非酒精性脂肪性肝炎，降低肝脏甘油三酯的含量、修复肝脏损伤，改善动脉粥样硬化、肝损伤、肝硬化及肝癌、原发性胆汁性胆管炎和/或原发性硬化性胆管炎。
6.权利要求1所述FGF19蛋白类似物、或权利要求3所述载体或微生物细胞在制备治疗糖尿病、肥胖、肝炎或肝炎相关疾病中的一种或多种疾病的药物中的应用；所述治疗肝炎或相关疾病为改善或治疗非酒精性脂肪性肝炎，降低肝脏甘油三酯的含量、修复肝脏损伤，改善动脉粥样硬化、肝损伤、肝硬化及肝癌、原发性胆汁性胆管炎和/或原发性硬化性胆管炎。
7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述FGF19蛋白类似物的剂量为1~100mg/kg。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物的给药途径包括口服、皮下注射、静脉注射或肌肉注射。
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