CN113660951A - 含有抗il-6受体抗体的抑制bbb功能低下的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

提供了血脑屏障(BBB)功能降低的抑制剂，血脑屏障紧密连接的破坏的抑制剂，白细胞浸润到CNS的抑制剂，患者血液中的IgG渗透到CNS中的抑制剂，以及视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特‑小柳‑原田病的治疗剂，该治疗剂抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能，其含有：含有重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区含有具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区含有具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。

Description

含有抗IL-6受体抗体的抑制BBB功能低下的抑制剂
技术领域
本发明涉及血脑屏障(BBB)功能降低的抑制剂，血脑屏障紧密连接的破坏的抑制剂，白细胞浸润到CNS的抑制剂，患者血液中的IgG渗透到CNS中的抑制剂，以及视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病(neurosarcoidosis)、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的治疗剂，该治疗剂抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能，其包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区含有具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区含有具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。
背景技术
血脑屏障(BBB)防止外来物质或炎症细胞侵入中枢神经系统(CNS)，并在维持中枢神经系统稳态方面发挥重要作用。其基本结构由三类细胞组成，即基底膜包围的血管内皮细胞、星形胶质细胞和周细胞。内皮细胞形成紧密连接，并且周细胞通过基底膜包围血管内皮细胞。此外，星形胶质细胞的末端足沿基底膜发育形成胶质界膜(glia limitan)，并且这些紧密连接和胶质界膜充当物理屏障。除了物理屏障外，BBB还具有以下特点，例如通过BBB中表达的各种转运蛋白和受体严格控制循环血液与中枢神经系统之间的物质交换。这些特性可以防止外来物质和炎症细胞侵入中枢神经系统，并在维持中枢神经系统稳态方面发挥重要作用。当这种BBB功能因某种原因被破坏时，各种致病物质和炎症细胞可渗透到中枢神经系统中，引发严重损害神经元的炎症反应。
视神经脊髓炎相关障碍(视神经脊髓炎谱系障碍(NMOSD))是一种重度炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病，最初被称为Devic病。在2006年，Wingerchuk等人提出了NMO(至少涉及视神经炎和脊髓炎)的诊断标准，并且在2007年，除了典型的NMO病例外，单独的视神经炎或脊髓炎病例开始归入同一类别，称为NMOSD。此外，NMOSD的概念是在2015年作为广义的一组疾病提出的，目前诊断名称NMOSD被广泛且普遍使用。临床上其以视神经炎和/或横贯性脊髓炎为特征(NPL 1)，并常引起重度功能障碍，导致各种损伤，例如视力损伤(失明)、运动损伤和感觉损伤。NMOSD是反复复发和缓解的疾病，在重度复发时，可导致步态障碍、完全性截瘫、或完全感觉丧失。通常，NMO病理学不是继发性进行性的，大多数损伤由重度、单次、急性发作引起。
SA237是修饰的IgG2人源化抗人IL-6受体中和抗体，设计为通过修饰托珠单抗(其是IgG1抗体)的氨基酸序列以延长血浆半衰期。与托珠单抗相比，SA237具有以下特点：例如1)通过pH依赖性IL-6受体结合延长血浆半衰期、降低抗体等电点、和在酸性条件下增强与FcRn的结合；以及2)通过降低Fcγ受体结合能力和采用IgG2结构以降低效应器作用(例如ADCC/CDC)。
已在视神经脊髓炎谱系障碍(NPL 2至7)患者中开展SA237的临床试验。
已知自身抗体抗AQP4抗体参与视神经脊髓炎谱系障碍的发病机制，已报道浆母细胞是其产生的来源，IL-6促进浆母细胞存活和抗AQP4抗体产生能力，并且这些被抗IL-6受体抗体抑制(NPL 8)。此外，已报道IL-6参与BBB功能降低和抗AQP4抗体向CNS的转移，因为NMO患者脑脊液(CSF)中IL-6浓度很高以及与CSF中IL-6浓度相关的由CSF/血清白蛋白比评估的BBB(血脑屏障)渗透性(NPL 9)。此外，使用共培养内皮细胞和星形胶质细胞的体外BBB模型进行的评价表明，NMO-IgG(源自NMO患者的IgG)作用于星形胶质细胞以产生IL-6，并且IL-6增加内皮细胞的渗透和炎症细胞的浸润，并降低BBB功能。此外，已报道抗IL-6受体抗体可抑制NMO-IgG对炎症细胞浸润的增强(NPL 10)。
然而，目前尚不清楚SA237抑制BBB功能降低。
引用列表
[非专利文献]
[NPL 1]：Lancet Neurol.2007Sep；6(9):805-15
[NPL 2]：https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02028884
[NPL 3]：https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT02073279？show_locs＝Y#locn
[NPL 4]：https://www.clinicaltrialsregister.eu/ctr-search/search？query＝SA-307JG
[NPL 5]：https://www.clinicaltrialsregister.eu/ctr-search/trial/2015-005431-41/HR
[NPL 6]：https://s3.amazonaws.com/gjcf-wp-uploads/wp-content/uploads/2016/05/16162202/12_12_14_Chugai_Webinar_PPT_Complete_Deck_FINAL.pdf
[NPL 7]：EAN the home of neurology EPR3103(https://ipp-ean18.netkey.at/index.php？p＝recorddetail&rid＝f16c1ff3-f5ec-4b71-8a99-7c39bdc90418&t)
[NPL 8]：Chihara N et al.,Proc Natl Acad Sci USA 2011；108:3701-3706
[NPL 9]：Uchida T et al.,Mult Scler 2017；23:1072-1084
[NPL 10]：Takeshita Y et al.,Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm 2016；4:e311
发明内容
技术问题
本发明是鉴于这种情况进行的。本发明侧重于IL-6和血脑屏障功能降低可能与视神经脊髓炎谱系障碍有关的事实，检查SA237对降低的功能的作用，并通过此，目的在于提供SA237的新用途，即，其作为血脑屏障功能降低的抑制剂以及作为其中脑脊液中IL-6浓度高且血脑屏障功能降低的各种疾病的治疗剂的用途。
问题解决方案
本发明人开展了专门研究以解决上述问题。结果，他们发现SA237抑制血脑屏障功能降低。特别是，他们发现SA237抑制血脑屏障中紧密连接的破坏。
本发明基于这些发现，并且具体包括以下：
[1]一种血脑屏障功能降低的抑制剂，该抑制剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3；
[2]根据[1]的抑制剂，其中该血脑屏障功能降低是该血脑屏障紧密连接的破坏；
[3]根据[1]的抑制剂，其中该血脑屏障功能降低是白细胞浸润到CNS中；
[4]根据[1]的抑制物，其中该血脑屏障功能降低是患者血液中的IgG渗透到CNS中；
[5]根据[1]至[4]中任一项的抑制剂，其抑制患有视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的患者中该血脑屏障功能降低、该血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到CNS中、或患者血液中的IgG渗透到CNS中；
[6]一种急性视神经脊髓炎谱系障碍的治疗剂，其中该治疗剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ IDNO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3；
[7]一种用于恢复血脑屏障功能的药剂，其中该药剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3；
[8]一种视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的治疗剂，其中该治疗剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3，并且其中该治疗剂抑制该血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能；
[9]根据[8]的治疗剂，其中该血脑屏障功能降低是该血脑屏障紧密连接的破坏；
[10]根据[8]的治疗剂，其中该血脑屏障功能降低是白细胞浸润到CNS中；
[11]根据[8]的治疗剂，其中该血脑屏障功能降低是患者血液中的IgG渗透到CNS中；
[12]一种神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、或福格特-小柳-原田病的治疗剂，其中该治疗剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3；
[13]根据[1]至[12]中任一项的抑制剂或治疗剂，其中该抗体包含：包含SEQ IDNO:7的轻链可变区和SEQ ID NO:8的重链可变区的抗体；和
[14]根据[1]至[13]中任一项的抑制剂或治疗剂，其中该抗体包含：包含SEQ IDNO:9的轻链和SEQ ID NO:10的重链的抗体。
本发明还提供了以下[1A]至[2D]：
[1A]一种抑制血脑屏障功能降低(例如，血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到中枢神经系统(CNS)中、或患者血液中的IgG渗透到CNS中)的方法或恢复降低的血脑屏障功能的方法，其中该方法包括向受试者施用抗IL-6受体抗体；
[1B]一种抗IL-6受体抗体，用于抑制血脑屏障功能降低(例如，血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到中枢神经系统(CNS)中、或患者血液中的IgG渗透到CNS中)或恢复(促进恢复)降低的血脑屏障功能；
[1C]抗IL-6受体抗体在生产用于抑制血脑屏障功能降低(例如，血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到中枢神经系统(CNS)中、或患者血液中的IgG渗透到CNS中)或用于恢复降低的血脑屏障功能的药物组合物中的用途；
[1D]一种药物组合物，用于抑制血脑屏障功能降低(例如，血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到中枢神经系统(CNS)中、或患者血液中的IgG渗透到CNS中)或用于恢复降低的血脑屏障功能，其中该药物组合物包含抗IL-6受体抗体作为活性成分；
[2A]一种预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的方法，其中该方法包括向受试者施用抗IL-6受体抗体，从而抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能；
[2B]一种抗IL-6受体抗体，用于预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病，其中该抗IL-6受体抗体抑制血脑屏障功能的降低和/或恢复降低的血脑屏障功能；
[2C]抗IL-6受体抗体在生产用于预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的药物组合物中的用途，其中该抗体抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能；和
[2D]一种药物组合物，用于预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病，其中该药物组合物包含抗IL-6受体抗体作为活性成分，并且其中该药物组合物抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能。
[1A]至[2D]中所述的抗IL-6受体抗体是包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。优选为包含SEQ ID NO:7的轻链可变区和SEQ ID NO:8的重链可变区的抗体，并且更优选为具有SEQ ID NO:9的轻链和SEQID NO:10的重链的抗体。
发明效果
本发明提供了包含SA237的血脑屏障功能降低抑制剂。
附图说明
图1显示了实施例中使用的体外BBB模型的示意图。
图2显示了当使从NMOSD患者的合并血清和健康受试者的合并血清(NMOSD-IgG和正常-IgG)中纯化的IgG从体外BBB模型的星形胶质细胞侧和/或内皮细胞侧起作用时，评价对跨上皮/内皮电阻(TEER)值的作用的结果。横轴表示时间，纵轴表示跨上皮/内皮电阻(TEER)值。
图3显示了当使NMOSD-IgG和SA237从体外BBB模型的星形胶质细胞侧和内皮细胞侧同时作用时，评价对TEER的作用的结果。
图4显示了当使NMOSD-IgG和SA237从体外BBB模型的星形胶质细胞侧同时作用时，评价对TEER的作用的结果。
图5显示了当使NMOSD-IgG和SA237从体外BBB模型的内皮细胞侧同时作用时，评价对TEER的作用的结果。
图6显示了当使SA237从体外BBB模型的星形胶质细胞侧和内皮细胞侧起作用时，评价对TEER的作用的结果。
图7显示了当使NMOSD-IgG从体外BBB模型的星形胶质细胞侧起作用，并且24小时后使SA237从星形胶质细胞侧起作用时，评价对TEER的作用的结果。
图8显示了在使用3D Bioflux Flow Chamber的流速负荷下的白细胞浸润测定中，SA237对NMO-IgG诱导的白细胞浸润的作用。已穿过膜的总的外周血单核细胞(PBMC)、CD4+细胞、CD8+细胞和CD19+细胞的总数显示为与对照IgG施用组的相对值。*p<0.05，独立t检验(n＝6/组)。
具体实施方式
一方面，本公开提供了药物组合物，该药物组合物包含抗IL-6受体抗体作为活性成分。在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以通过向受试者施用以抑制血脑屏障功能降低和/或促进降低的功能恢复。因此，本发明的药物组合物还可以表现为血脑屏障功能降低抑制剂、血脑屏障功能恢复促进剂、或功能恢复剂。本发明的药物组合物含有一定量(有效量)的抗IL-6受体抗体，其能够在被施用受试者中抑制血脑屏障功能降低和/或促进降低的功能的恢复。
包含在本发明的药物组合物中的抗IL-6受体抗体的实例包括：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1(SA237的重链CDR1)、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2(SA237的重链CDR2)、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3(SA237的重链CDR3)，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1(SA237的轻链CDR1)、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2(SA237的轻链CDR2)、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3(SA237的轻链CDR3)。该抗体优选为包含SEQ ID NO:8的重链可变区(SA237的重链可变区)和SEQ ID NO:7的轻链可变区(SA237的轻链可变区)的抗体，并且更优选地，包含含有SEQ ID NO:10的序列的重链(SA237的重链)和含有SEQ ID NO:9的序列的轻链(SA237的轻链)的抗体。特别优选为SA237。如本文所用，“受试者”是血脑屏障功能降低或有血脑屏障功能降低风险的个体，并且优选为人，但也可以为非人哺乳动物。
在本说明书中，“血脑屏障功能降低”是指血脑屏障的屏障功能降低(也可以表示为屏障功能的破坏或屏障功能障碍)，并且包括，例如，血脑屏障紧密连接的破坏、外来物质或炎症细胞(例如，白细胞)浸润到CNS中、以及患者血液中的IgG渗透到CNS中。在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以通过向受试者施用以抑制选自由以下项组成的组中的一项或多项：血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到CNS中、和患者血液中的IgG渗透到CNS中。因此，本发明的药物组合物可以表现为血脑屏障紧密连接的破坏的抑制剂、白细胞浸润到CNS中的抑制剂、或患者血液中的IgG渗透到CNS中的抑制剂。白细胞的具体实例包括淋巴细胞(B细胞、辅助T细胞、调节性T细胞、杀伤性T细胞、NK细胞、NKT细胞)、粒细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、单核细胞等。白细胞优选为外周血单核细胞(PBMC)，更优选为CD4+细胞、CD8+细胞和CD19+细胞，并且特别优选为CD4+细胞和CD8+细胞。
血脑屏障的功能评价可以使用已知的BBB模型，例如，按照WO2017/179375中所述方法制备的体外BBB模型。
例如，如在本说明书的实施例中所述，血脑屏障紧密连接可以通过当各种分子(例如，从NMOSD患者和健康受试者的合并血清纯化的IgG或SA237)从内皮细胞侧加入，即图1所示的体外BBB模型的上层(对应于血管腔侧)，或从星形胶质细胞侧加入，即图1所示的体外BBB模型的下层(对应中枢神经系统侧)，或从两侧加入时，测量跨上皮/内皮电阻(TEER)值随时间的变化进行评价。例如，当通过应用本发明的药物组合物抑制由加入来自NMOSD患者的IgG(NMOSD-IgG)引起的TEER随时间的降低时，显示出血脑屏障功能降低受抑制。
此外，可以通过使NMOSD-IgG从内皮细胞侧(其是体外BBB模型的上层)起作用以评价IgG的血脑屏障渗透性，然后测量星形胶质细胞侧(其是下层)上NMOSD-IgG的量。当通过应用本发明的药物组合物减少下层侧的IgG的量时，显示出抑制血脑屏障功能降低。
流速负荷型BBB模型(akeshita Y等人，J Neurosci Methods 2014Jul 30；232:165-172)可用作另一种示例性评价方法。例如，通过使炎症细胞(例如，白细胞)等在装有微血管内皮细胞/周细胞/星形胶质细胞在其上共培养的膜的小室中流动，然后测量在例如NMOSD-IgG存在下浸润到膜外侧的外来物质或炎症细胞，该测量可用作浸润到CNS中的指标。
如本文所用，“抑制功能降低”是指通过施用本发明的药物组合物以减少血脑屏障功能的降低；例如，这表示选自血脑屏障紧密连接的破坏、外来物质或炎症细胞(例如，白细胞)浸润到CNS中、和患者血液中的IgG渗透到CNS中的一种或多种降低。抑制功能降低不一定是完全防止功能降低，与未施用本发明的药物组合物时相比，功能降低减少就足够了。因此，“抑制功能降低”也可以改述为功能降低的减弱。在本说明书中，对抑制功能降低的程度没有限制，并且本发明中“抑制功能降低”的含义包括即使部分血脑屏障功能降低被减少的情况。在具体的实施方案中，功能降低的抑制可以指血脑屏障的功能降低减少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。“抑制功能降低”包括遏制(防止)功能降低。作为更具体的实例，当在含有内皮细胞、基底膜、周细胞、插入物和星形胶质细胞的体外BBB模型的内皮细胞侧和星形胶质细胞侧加入NMOSD-IgG后120小时观察到的TEER降低，通过与NMOSD-IgG同时加入本发明的药物组合物到内皮细胞侧和星形胶质细胞侧被抑制约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％时，显示出抑制血脑屏障功能降低。
此外，如本文所用，“功能的恢复”是指通过施用本发明的药物组合物以改善血脑屏障的降低的功能；例如，它表示选自以下项中的一项或多项：恢复血脑屏障紧密连接的破坏、减少外来物质或炎症细胞(例如，白细胞)浸润到CNS中、和减少患者血液IgG渗透到CNS中。功能的恢复不一定必须是降低的功能的完全恢复，与未施用本发明的药物组合物时相比，降低的功能得到改善就足够了。在本说明书中，对功能恢复的程度没有限制，并且本发明中“功能的恢复”的含义包括即使部分降低的血脑屏障功能被改善的情况。在具体的实施方案中，恢复可以指降低的血脑屏障功能的约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％得到改善。作为更具体的实例，当在含有内皮细胞、基底膜、周细胞、插入物和星形胶质细胞的体外BBB模型的内皮细胞侧和星形胶质细胞侧加入NMOSD-IgG后(例如，24小时后)降低的TEER，在加入本发明的药物组合物的NMOSD-IgG后24小时(例如，在加入本发明的药物组合物后120小时)增加约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％时，降低的血脑屏障功能显示恢复。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物在施用于受试者时，可以抑制血脑屏障功能的降低和/或促进降低的功能恢复，因此可以预防和/或治疗脑脊液中IL-6浓度高并涉及血脑屏障功能降低的疾病。此类疾病的实例包括但不限于，视神经脊髓炎谱系障碍(包括急性视神经脊髓炎谱系障碍)、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、和福格特-小柳-原田病。因此，本发明的药物组合物还可以表示为视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的预防和/或治疗剂，其抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能。本发明的药物组合物以作为活性成分的抗IL-6受体抗体可以预防和/或治疗这些疾病的剂量施用。
在另一方面，本公开内容涉及抑制血脑屏障功能降低的方法或恢复降低的血脑屏障功能的方法，该方法包括向受试者施用有效量的抗IL-6受体抗体。可选地，本公开内容涉及通过抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能而预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎或福格特-小柳-原田的方法，该方法包括向受试者施用有效量的抗IL-6受体抗体。在一个实施方案中，该方法进一步包括向受试者施用至少一种另外的药剂。另外的药剂与抗IL-6受体抗体的联合使用涵盖联合施用(两种或多种药剂包含在相同或分开的制剂中)和单独施用，并且在单独施用的情况下，抗IL-6受体抗体施用可以在施用另外的药剂之前、同时和/或之后进行。另外的药剂的实例包括但不限于，一种或多种选自免疫抑制剂和类固醇的药剂。
在另一方面，本公开内容涉及用于抑制血脑屏障功能降低或用于恢复(促进恢复)降低的血脑屏障功能的抗IL-6受体抗体。可选地，本公开内容涉及用于预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的抗IL-6受体抗体，其抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能。可选地，本公开内容涉及抗IL-6受体抗体在抑制血脑屏障功能降低或恢复降低的血脑屏障功能中的用途。可选地，本公开内容涉及抗IL-6受体抗体在预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病中的用途，其中该抗体是抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能的抗体。
可选地，本公开内容涉及抗IL-6受体抗体在生产用于抑制血脑屏障功能降低或用于恢复降低的血脑屏障功能的药物组合物中的用途。可选地，本公开涉及抗IL-6受体抗体在生产用于预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的药物组合物中的用途，其中该抗体是抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能的抗体。可选地，本发明涉及产生用于抑制血脑屏障功能降低或用于恢复降低的血脑屏障功能的药物组合物的方法，该方法包括将抗IL-6受体抗体与药学上可接受的载体混合。可选地，本发明涉及产生用于预防或治疗视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的药物组合物的方法，包括将抗IL-6受体抗体与药学上可接受的载体混合，其中该抗体是抑制血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能的抗体。除了抗IL-6受体抗体和药学上可接受的载体之外，此类药物组合物可以包括至少一种另外的药剂。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以配制成含有有效量抗IL-6受体抗体的单位剂型。在本文中，“有效量”是指在必要剂量下和在必要时间内有效实现期望抑制、功能恢复、治疗或预防结果的量。
本发明的药物组合物的剂量可以根据施用受试者的病情、施用方法(例如施用次数、施用频率、施用时间、施用途径)等适当设定。在一个实施方案中，本发明的药物组合物中包含的抗IL-6受体抗体每次施用的量的具体实例是，以每kg体重的剂量计，2至20mg(2至20mg/kg)，优选为2至8mg(2至8mg/kg)，更优选为8mg(8mg/kg)，并且作为固定剂量，50-800mg/人，优选为80-160mg/人，更优选为120mg/人；但不限于此。
本发明的药物组合物的施用受试者是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于，家畜(例如，牛、羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物例如猴)、兔和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在特定的实施方案中，本发明的药物组合物的施用受试者是人。在另一个实施方案中，施用受试者是非人哺乳动物。
本发明的药物组合物包含作为活性成分的抗IL-6受体的抗体。
IL-6受体是配体结合蛋白，分子量为约80kD，与IL-6结合形成IL-6/IL-6受体复合物。然后，该复合物与gp130结合(gp130是分子量为约130kD的膜蛋白，参与非配体结合信号转导)，导致IL-6生物活性的细胞内转导。
本发明中使用的抗IL-6受体抗体可以使用已知方法以多克隆或单克隆抗体获得。本发明中使用的抗IL-6受体抗体特别优选为源自哺乳动物的单克隆抗体。源自哺乳动物的单克隆抗体包括由杂交瘤产生的那些和由使用基因工程方法用含有抗体基因的表达载体转化的宿主产生的那些。通过与IL-6受体结合，该抗体抑制IL-6与IL-6受体的结合，并阻断IL-6生物活性的细胞内转导。
此类抗体的实例包括MR16-1抗体(Tamura,T.等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1993)90,11924-11928)、PM-1抗体(Hirata,Y.等人，J.Immunol.(1989)143,2900-2906)、AUK12-20抗体、AUK64-7抗体、AUK146-15抗体(国际专利申请公开号WO 92-19759)、沙立芦人单抗(Sarilumab)、沃巴利珠单抗(Vobarilizumab)和BCD-089。其中，PM-1抗体被列为优选的抗人IL-6受体单克隆抗体的实例，MR16-1抗体被列为优选的抗小鼠IL-6受体的单克隆抗体的实例。
本发明的“抗IL-6受体抗体”的优选实例包括托珠单抗，其为人源化抗IL-6受体IgGl抗体，和通过修饰托珠单抗的可变区和恒定区产生的人源化抗IL-6受体抗体。具体实例包括：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDRl(SA237的重链CDRl)、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2(SA237的重链CDR2)、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3(SA237的重链CDR3)，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1(SA237的轻链CDR1)、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2(SA237的轻链CDR2)、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3(SA237的轻链CDR3)。该抗体优选为包含SEQ ID NO:8的重链可变区(SA237的重链可变区)和SEQ ID NO:7的轻链可变区(SA237的轻链可变区)的抗体，并且更优选为包含含有SEQ ID NO:10的序列的重链(SA237的重链)和含有SEQ ID NO:9的序列的轻链(SA237的轻链)的抗体。特别优选为SA237。
这些抗体可以根据例如WO2010/035769、WO2010/107108和WO2010/106812中所述的方法获得。具体地，可以使用本领域技术人员已知的基因重组技术，基于上述抗IL-6受体抗体的序列产生抗体(参见，例如，Borrebaeck CA和Larrick JW,THERAPEUTIC MONOCLONALANTIBODIES,由MACMILLAN PUBLISHERS LTD在英国出版,1990)。重组抗体可以通过以下获得：从杂交瘤或产生抗体的细胞(例如产生抗体的致敏淋巴细胞)克隆编码抗体的DNA，将DNA插入适当的载体中，并将载体导入宿主(宿主细胞)以产生抗体。
可以使用通常用于抗体纯化的分离和纯化方法来分离和纯化此类抗体，但不限于此。例如，可以通过适当选择和组合柱层析、过滤、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂萃取、蒸馏、免疫沉淀、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦、透析、重结晶等分离和纯化抗体。
本发明中使用的抗体可以是结合各种分子(例如聚乙二醇(PEG)、放射性物质和毒素)的偶联抗体。此类偶联抗体可以通过对获得的抗体进行化学修饰来获得。在本领域中已建立抗体修饰的方法。因此，本文所用的术语“抗体”涵盖此类偶联抗体。
本发明的“抗体”包括翻译后修饰的那些。翻译后修饰包括但不限于，通过焦谷氨酰甲基化(pyroglutamylation)将重链或轻链N端谷氨酰胺或谷氨酸修饰成焦谷氨酸。
本文中术语“药物组合物”(也可以表示为抑制剂、功能恢复促进剂、功能恢复剂、治疗剂和预防剂)是指一种制剂，其形式可以使其中含有的具有生物活性的活性成分发挥作用，其不含有对施用制剂的受试者具有不可接受程度的毒性的任何另外的成分。本发明的药物组合物可以包含超过一种活性成分，如果这对其抑制、功能恢复、治疗或预防目的是必要的。优选相互不产生不良影响的具有互补活性的那些。此类活性成分以对预期目的有效的量以合适的组合存在。
用于抑制、功能恢复、治疗或预防目的的本发明的药物组合物可以通过(如有必要)与合适的药学上可接受的载体、溶媒等混合来配制以产生冻干制剂或溶液制剂。合适的药学上可接受的载体和溶媒包括，例如，无菌水、生理盐水、稳定剂、辅料、抗氧化剂(例如抗坏血酸)、缓冲剂(例如磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸和其他有机酸)、防腐剂、表面活性剂(PEG和Tween)、螯合剂(例如EDTA)和粘合剂。还可以含有其他低分子量多肽、蛋白(例如血清白蛋白、明胶和免疫球蛋白)、氨基酸(例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、精氨酸和赖氨酸)、糖类和碳水化合物(例如多糖和单糖)、以及糖醇(例如甘露醇和山梨醇)。制备注射用水溶液时，可以组合使用生理盐水和包含葡萄糖和其他佐剂(例如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇和氯化钠)的等渗溶液；以及适当的增溶剂，例如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如丙二醇和PEG)和非离子表面活性剂(例如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆188和HCO-50)。通过将透明质酸酶混合到制剂中，可以皮下施用更大流体体积(Expert Opin.Drug Deliv.2007Jul；4(4):427-40)。此外，注射器可以预装本发明的药物组合物。溶液制剂可以根据WO2011/090088中所述的方法制备。
如有必要，本发明的药物组合物可以封装在微胶囊(例如，由羟甲基纤维素、明胶和聚(甲基丙烯酸)制成的那些)中，或掺入胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)(参见，例如，“Remington's Pharmaceutical Science 16thedition”，Oslo Ed.(1980))。制备作为控释药剂的药剂的方法也是已知的，并且这些方法可以应用于本发明的药物组合物(Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.15:267-277(1981)；Langer,Chemtech.12:98-105(1982)；美国专利号3,773,919；欧洲专利申请公开号EP 58,481；Sidman等人，Biopolymers 22:547-556(1983)；和EP133,988)。
本发明的药物组合物可以通过任何合适的途径施用于患者。例如，它可以通过推注(bolus injection)或通过连续输注静脉内、肌内、腹腔、脑脊髓内、透皮、皮下、关节内、舌下、滑膜内、口服、吸入、局部或外部施用于患者一段时间。在一个实施方案中，本发明的药物组合物的施用为全身施用，并且在全身手术侵入部位显示出粘附抑制作用。
本说明书中引用的所有现有技术文献均通过引用并入本文。
实施例
接下来，将通过实施例更详细地描述本发明，但本发明不限于此。
[SA237对BBB屏障功能的作用]
(实验方法)
体外BBB模型的产生
为了评价BBB的屏障功能，使用按照国际公开号WO2017/179375A1的实施例1-1、1-2、1-3和1-4中所述的方法制备的体外BBB模型。将在37℃下共培养5天的制备的BBB模型用于评价屏障功能。图1显示了本研究中使用的体外BBB模型的示意图。
屏障功能的评价
当从NMOSD患者或健康受试者的合并血清中纯化的IgG或SA237从产生的体外BBB模型的上层(其是内皮细胞侧(对应于血管腔侧))、下层(其是星形胶质细胞侧(对应于中枢神经系统侧))、或两层加入时，跨上皮/内皮电阻(TEER)值随时间的变化使用CellZscope(CellSeed Inc.,CSZ12001,CSZ24001)(其是细胞紧密连接实时监测系统)进行评价。
(结果)
使从NMOSD患者的合并血清或健康受试者的合并血清中纯化的IgG从内皮细胞侧(其是产生的体外BBB模型的上层)、星形胶质细胞侧(其是下层)、或两侧起作用，并且使用CellZscope评价TEER随时间(五天)的变化(图2)。如图2所示，与从健康受试者的合并血清中纯化的IgG(正常-IgG)组相比，当使从NMSOD患者的合并血清中纯化的IgG(NMOSD-IgG)起作用时，TEER降低。在加入NMOSD-IgG后约24小时观察到TEER降低，并持续到此后至少120小时。此外，在使NMOSD-IgG从星形胶质细胞侧和内皮细胞侧、从星形胶质细胞侧、以及从内皮细胞侧起作用的所有情况中均观察到TEER降低，并且TEER降低的程度按此顺序增大。这些结果表明，NMOSD-IgG降低内皮细胞侧和星形胶质细胞侧二者的BBB的屏障功能。
接下来，评价当使SA237与NMOSD-IgG同时起作用时对TEER的作用(图3、4和5)。如图3所示，当使NMOSD-IgG和SA237(100μg/mL)从星形胶质细胞侧和内皮细胞侧起作用时，SA237抑制由NMOSD-IgG引起的TEER降低约30％。此外，如图4和5所示，当使NMOSD-IgG和SA237(100μg/mL)分别从星形胶质细胞侧和内皮细胞侧起作用时，SA237类似地分别抑制由NMOSD-IgG引起的TEER降低约17％和约9％。这些结果表明，SA237在内皮细胞侧和星形胶质细胞侧抑制由NMOSD-IgG引起的BBB屏障功能降低(更具体地，血脑屏障紧密连接的破坏)。
最后，为了评价SA237本身是否可以影响TEER，单独使用SA237作用于体外BBB模型(图6)。如图6所示，当使SA237单独从星形胶质细胞侧和内皮细胞侧起作用时，在10、100和1000μg/mL的任何浓度下均不影响TEER。由以上结果可知，SA237本身不影响BBB屏障功能。
[改善SA237对具有屏障功能降低的BBB的作用]
以上述相同的方式，使NMOSD-IgG作用于与上述实施例中使用的体外BBB模型相同的模型，在24小时或更长时间后加入SA237，并如CellZscope所测量的评价对TEER的影响(图7)。使NMOSD-IgG和SA237均从体外BBB模型的星形胶质细胞侧(对应于中枢神经系统侧)起作用。如图7所示，与未施用SA237的组相比，在使NMOSD-IgG起作用后24小时使SA237起作用的组中TEER显著增加。该结果表明，SA237恢复因NMOSD-IgG降低的BBB屏障功能(更具体地，血脑屏障紧密连接已被破坏)。
[SA237对IgG的BBB渗透性的作用]
以与上述相同的方式，使IR-染料标记的NMOSD-IgG从内皮细胞侧(其是上述实施例中使用的体外BBB模型的上层)起作用，然后通过使用LI-COR生产的Odyssey成像系统测量星形胶质细胞侧(其是下层)上NMOSD-IgG的荧光量以评估IgG对BBB的渗透性，并评价SA237对此的作用。通过使用荧光标记的IgG并用荧光酶标仪测量荧光量以评价IgG的量。
[SA237对白细胞浸润到BBB中的作用]
将与微血管内皮细胞/周细胞/星形胶质细胞共培养的膜装在流速负荷型BBB模型的专用室上(Takeshita Y等人，J Neurosci Methods 2014Jul 30；232:165-172)，并盖上盖子且密封。将密封室置于设定为37℃的室保温器中，并使用流动泵将在水箱中保温的PBMC流入室中。通过分析此时在存在NMOSD-IgG的情况下浸润到膜外的白细胞，评价NMOSD-IgG促进白细胞浸润到BBB中的作用及与白细胞浸润相关的BBB功能，并评估SA237对其的作用。
(实验方法)
PBMC分离
使用淋巴细胞分离培养基(Mediatech,Herndon,VA)通过密度离心从健康受试者的新鲜肝素化血液中分离PBMC，这是本领域技术人员已知的方法。将PBMC以10×106个细胞重新悬浮于30ml TEM缓冲液(不含酚红，含1％牛血清白蛋白和25mM Hepes的RPMI 1640)中，并在采血后两小时内用于测定。在灌注到小室之前，根据生产商的方案，用Calcein AM(Invitrogen)对PBMC进行染色。
白细胞浸润测定
使用3D Flow Chamber Device(C.B.S.Scientific)在流速负荷下进行白细胞浸润测定(参见Takeshita Y等人，J Neurosci Methods 2014Jul 30；232:165-72)。该系统由3D流动泵、3D流动室和3D流动膜组成。3D流动泵为多达八个流动设备(0.1-200dyne/cm2)提供范围广泛的可编程剪切流。3D流动室(深度：30mm，宽度：70mm，高度：8mm)具有三个独立的储液器(reservoir)，其中3D流动膜完全适合。3D流动膜是由径迹蚀刻聚碳酸酯制成的膜，直径为8mm，具有3μm的小孔。膜包被鼠尾胶原I溶液(50μg/ml)(BD Bioscience,San Diego,CA)并置于12孔板中。人内皮细胞、人周细胞和人星形胶质细胞在这些孔中使用星形胶质细胞培养基在33℃下多层培养(multi-culture)两天。培养膜在37℃下孵育1天并转移到室中。在333,000个细胞/ml的终浓度和1.5dyne/cm2(流速负荷)的剪切应力的条件下，将保持在37℃下的PBMC灌注到室中60分钟。灌注PBMC后，通过用PBS冲洗室5分钟同时保持与测定中相同的剪切应力以去除游离细胞。从底部室收集已穿过膜的PBMC。通过使用0.5mM EDTA快速洗涤，去除粘附在膜和底部室的近腔(abluminal)侧的细胞。使用血细胞计数器对回收的PBMC细胞数进行计数。随后，收集的细胞用1％PFA固定10分钟，用PBS+0.1mM EDTA洗涤，然后用小鼠IgG封闭。细胞标记有抗人CD45 efluor 450、抗人CD8a APC-efluor 780(eBiosciences,San Diego,CA)、抗人CD3 Alexa Fluor 647(Biolegend,San Diego,CA)、抗人CD19 BV711和抗人CD4 PE-CF594(BD Biosciences)。使用BD FACSCanto II(BDBiosciences)通过流式细胞术获得数据，并使用Flowjo 10.4.1(Treestar,Ashland,OR)分析CD4+细胞、CD8+细胞和CD19+细胞的细胞数。
(结果)
与用对照IgG处理组相比，在NMOSD-IgG处理组中，已穿过到膜外的总PBMC、CD4+细胞和CD8+细胞的数量增加。另一方面，与其中使NMOSD-IgG单独起作用的组相比，在使NMOSD-IgG和SA237起作用的组中，已穿过到膜外的总PBMC、CD4+细胞和CD8+细胞的数量显著减少。(图8)。从这些结果可以看出，SA237抑制由NMSOD-IgG促进的总PBMC、CD4+细胞和CD8+细胞向膜外的移位。
工业适用性
本发明的抑制剂提供了能够对血脑屏障功能降低(例如血脑屏障紧密连接的破坏白细胞浸润到CNS中、以及患者血液中的IgG渗透到CNS中)发挥抑制作用的新手段。本发明的治疗剂提供了能够抑制血脑屏障功能降低的新手段，从而治疗涉及脑脊液中高浓度IL-6和降低的血脑屏障功能的各种疾病。
Figure IDA0003285441700000011
Figure IDA0003285441700000021
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Figure IDA0003285441700000061
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Claims (14)

1.一种血脑屏障功能降低的抑制剂，所述抑制剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。
2.根据权利要求1所述的抑制剂，其中所述血脑屏障功能降低是所述血脑屏障紧密连接的破坏。
3.根据权利要求1所述的抑制剂，其中所述血脑屏障功能降低是白细胞浸润到CNS中。
4.根据权利要求1所述的抑制剂，其中所述血脑屏障功能降低是患者血液中的IgG渗透到CNS中。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抑制剂，其抑制患有视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎、或福格特-小柳-原田病的患者中所述血脑屏障功能降低、所述血脑屏障紧密连接的破坏、白细胞浸润到CNS中、或患者血液中的IgG渗透到CNS中。
6.一种急性视神经脊髓炎谱系障碍的治疗剂，其中所述治疗剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ IDNO:2的序列的CDR2和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，所述轻链可变区包含具有SEQ IDNO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。
7.一种用于恢复血脑屏障功能的药剂，其中所述药剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。
8.一种视神经脊髓炎谱系障碍、神经白塞病、神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)、自身免疫性脑炎或福格特-小柳-原田病的治疗剂，其中所述治疗剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3，并且其中所述治疗剂抑制所述血脑屏障功能降低和/或恢复降低的血脑屏障功能。
9.根据权利要求8所述的治疗剂，其中所述血脑屏障功能降低是所述血脑屏障紧密连接的破坏。
10.根据权利要求8所述的治疗剂，其中所述血脑屏障功能降低是白细胞浸润到CNS中。
11.根据权利要求8所述的治疗剂，其中所述血脑屏障功能降低是患者血液中的IgG渗透到CNS中。
12.一种神经系统结节病、中枢神经系统狼疮(神经精神狼疮)或福格特-小柳-原田病的治疗剂，其中所述治疗剂包含：包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:1的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:2的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:3的序列的CDR3，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:4的序列的CDR1、具有SEQ ID NO:5的序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:6的序列的CDR3。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的抑制剂或治疗剂，其中所述抗体包含：包含SEQID NO:7的轻链可变区和SEQ ID NO:8的重链可变区的抗体。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的抑制剂或治疗剂，其中所述抗体包含：包含SEQID NO:9的轻链和SEQ ID NO:10的重链的抗体。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7185884B2 (ja) 2017-05-02 2022-12-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
WO2019078344A1 (ja) 2017-10-20 2019-04-25 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
AR127269A1 (es) * 2021-10-08 2024-01-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulación de anticuerpo anti-hla-dq2.5
WO2023140269A1 (en) * 2022-01-19 2023-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Treatment of autoimmune encephalitis with satralizumab

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110098450A1 (en) * 2008-09-26 2011-04-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody Molecules
CN102119174A (zh) * 2008-07-17 2011-07-06 诺瓦提斯公司 使用治疗性抗体的组合物和方法
CN104168956A (zh) * 2011-10-11 2014-11-26 瓦西尼斯公司 臂板蛋白-4d结合分子用于调节血脑屏障渗透性的用途
WO2016027859A1 (ja) * 2014-08-20 2016-02-25 中外製薬株式会社 蛋白質溶液の粘度測定方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
DE69229482T2 (de) 1991-04-25 1999-11-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Rekombinierte humane antikörper gegen den humanen interleukin 6-rezeptor
WO2010107108A1 (ja) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 関節リウマチ治療剤
SG10201703707YA (en) 2009-03-19 2017-06-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Pharmaceutical formulation containing improved antibody molecules
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
WO2017179375A1 (ja) 2016-04-15 2017-10-19 国立大学法人山口大学 血液脳関門インヴィトロモデルおよび血液脳関門インヴィトロモデルの作製方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102119174A (zh) * 2008-07-17 2011-07-06 诺瓦提斯公司 使用治疗性抗体的组合物和方法
US20110098450A1 (en) * 2008-09-26 2011-04-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody Molecules
CN104168956A (zh) * 2011-10-11 2014-11-26 瓦西尼斯公司 臂板蛋白-4d结合分子用于调节血脑屏障渗透性的用途
WO2016027859A1 (ja) * 2014-08-20 2016-02-25 中外製薬株式会社 蛋白質溶液の粘度測定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MANABU ARAKI等: ""Efficacy of the anti–IL-6 receptor antibody tocilizumab in neuromyelitis optica"", 《NEUROLOGY》, vol. 38, no. 15, pages 26 - 30 *
YASUNOBU ARIMA等: ""Regional neural activation defines a gateway for autoreactive T cells to cross the blood-brain barrier"", 《CELL》, vol. 148, no. 3, pages 2 *
张静茹等: ""视神经脊髓炎与血脑屏障"", 《中华脑科疾病与康复杂志》, vol. 6, no. 03, pages 177 - 180 *

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