CN113655217A - 磁珠、试剂盒、制备方法及用途 - Google Patents

磁珠、试剂盒、制备方法及用途 Download PDF

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Abstract

为解决现有的用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，在超声混匀的仪器上使用时，精密度较差导致临床样本测定异常的技术问题，本发明实施例提供一种磁珠、试剂盒、制备方法及用途，包括：包被有活化官能团的磁珠；以及TG抗原，通过与所述活化官能团反应包被在磁珠上。本发实施例通过TG抗原包被在包被有活化官能团的磁珠上，使在超声混匀的仪器上测定抗甲状腺球蛋白抗体时，精密度和准确度较现有的测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂更优。

Description

磁珠、试剂盒、制备方法及用途
技术领域
本发明涉及一种磁珠、试剂盒、制备方法及用途。
背景技术
甲状腺球蛋白(TG)是一种分子量为660000道尔顿的水溶性糖蛋白，由甲状腺产生，是甲状腺滤泡腔的主要成分。TG由四条肽链组成，四条肽链紧密地折叠在一起，有一定的空间构型，是甲状腺中的主要存在形式。TG的主要功能是储存和合成甲状腺激素，其机制为TG蛋白中含有140个酪氨酸残基，在甲状腺过氧化物酶(TPO)的作用下，碘化其中的40个酪氨酸残基(L-酪氨酸)用于甲状腺素(T4)和三碘甲状腺原氨酸(T3)的合成。
尽管在Hashimoto甲状腺炎、粘液水肿、毒性弥漫性甲状腺肿疾病中，通常会同时检测出Anti-T和Anti-TPO，但是有高达1％的甲状腺功能衰退疾病仅与 Anti-TG相关。测定病人Anti-TG能够确定自身免疫性甲状腺炎所引起的甲减和弥散性甲状腺肿，也有助区分Graves与病毒性结节性甲状腺肿。此外，Anti-TG 测定还可作为血清TG测定的辅助检查，提高TG测定对甲状腺肿瘤诊断的正确性。现有抗甲状腺球蛋白抗体测定试剂盒(化学发光法)在使用超声波混匀试剂的仪器时，会出现随着超声次数的增加，磁珠上包被的抗原掉落，导致试剂的精密度和准确度变差以及临床样本检测中出现的异常测值，从而影响临床的诊断和治疗。
然而，现有的抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，在超声混匀的仪器上使用时，精密度较差，导致临床样本测定异常。
发明内容
为解决现有的用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，在超声混匀的仪器上使用时，精密度较差导致临床样本测定异常的技术问题，本发明实施例提供一种磁珠、试剂盒、制备方法及用途。
本发明实施例通过下述技术方案实现：
第一方面，本发明实施例提供一种磁珠，包括：
包被有活化官能团的磁珠；以及
TG抗原，通过与所述活化官能团反应包被在磁珠上。
进一步的，所述包被有活化官能团的磁珠为链霉亲和素磁珠、环氧基磁珠、羧基磁珠或甲苯磺酰基磁珠。
进一步的，所述包被有活化官能团的磁珠为甲苯磺酰基磁珠。
进一步的，1mg包被有活化官能团的磁珠对应的TG抗原的包被质量为20ug。
第二方面，本发明实施例提供一种所述磁珠的制备方法，包括：
将所述磁珠与硼酸缓冲液混合配制成混合液；
将所述混合液涡旋、超声处理后，磁力吸附移走上清液，得到处理后的第一磁珠；
将处理后的第一磁珠与硼酸缓冲液混合、涡旋、孵育混匀，磁力吸附移走上清液，得到第二磁珠；
将硼酸缓冲液与TG抗原混合加入第二磁珠中，进行涡旋、滚动混匀得到混匀液；
将混匀液与磷酸钾水溶液混合、涡旋、滚动孵育、移走上清液得到第三磁珠；
将第三磁珠与含有牛血清白蛋白的Tris-Hcl缓冲液滚动混匀，磁力吸附移走上清液，得到TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠。
进一步的，所述硼酸缓冲液中硼酸浓度为0.1mol/L；磷酸钾水溶液中磷酸钾的浓度为3mol/L。
进一步的，所述含有牛血清白蛋白的Tris-Hcl缓冲液为含质量分数为 0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液。
第三方面，本发明实施例提供一种磁珠用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的用途。
第四方面，本发明实施例提供一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括所述磁珠。
进一步的，所述试剂盒还包括酶工作液。
本发明实施例与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
本发明实施例的一种磁珠、试剂盒、制备方法及用途，通过TG抗原包被在包被有活化官能团的磁珠上，使在超声混匀的仪器上测定抗甲状腺球蛋白抗体时，精密度和准确度较现有的测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂更优。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
在以下描述中，为了提供对本发明的透彻理解阐述了大量特定细节。然而，对于本领域普通技术人员显而易见的是：不必采用这些特定细节来实行本发明。在其他实施例中，为了避免混淆本发明，未具体描述公知的结构、电路、材料或方法。
在整个说明书中，对“一个实施例”、“实施例”、“一个示例”或“示例”的提及意味着：结合该实施例或示例描述的特定特征、结构或特性被包含在本发明至少一个实施例中。因此，在整个说明书的各个地方出现的短语“一个实施例”、“实施例”、“一个示例”或“示例”不一定都指同一实施例或示例。此外，可以以任何适当的组合和、或子组合将特定的特征、结构或特性组合在一个或多个实施例或示例中。此外，本领域普通技术人员应当理解，在此提供的示图都是为了说明的目的，并且示图不一定是按比例绘制的。这里使用的术语“和/或”包括一个或多个相关列出的项目的任何和所有组合。
在本发明的描述中，术语“前”、“后”、“左”、“右”、“上”、“下”、“竖直”、“水平”、“高”、“低”“内”、“外”等指示的方位或位置关系仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明保护范围的限制。
实施例
为解决现有的用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，在超声混匀的仪器上使用时，精密度较差导致临床样本测定异常的技术问题，第一方面，本发明实施例提供一种磁珠，包括：包被有活化官能团的磁珠；以及TG抗原，通过与所述活化官能团反应包被在磁珠上。
通过TG抗原包被在包被有活化官能团的磁珠上，使在超声混匀的仪器上测定抗甲状腺球蛋白抗体时，精密度和准确度较现有的测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂更优。
其工作原理为：当所述磁珠与溶液中的Anti-TG抗体混合时，TG抗原与 Anti-TG抗体进行特异性反应结合，从而将溶液中的Anti-TG抗体固定在磁珠上，再加入ALP标记鼠抗人IgG抗体与Anti-TG抗体结合，形成了TG抗原-Anti-TG 抗体-ALP标记鼠抗人IgG抗体复合物，再加入发光底物，酶结合物催化发光底物发射光子，使用仪器测量这些光子，光子的数量与样本中Anti-TG的浓度成正比。通过浓度-相对发光值(RLU)的校准曲线，即可计算出样本中Anti-TG的浓度。
进一步的，所述包被有活化官能团的磁珠为链霉亲和素磁珠、环氧基磁珠、羧基磁珠或甲苯磺酰基磁珠。
进一步的，所述包被有活化官能团的磁珠为甲苯磺酰基磁珠。
进一步的，1mg包被有活化官能团的磁珠对应的TG抗原的包被质量为20ug。
第二方面，本发明实施例提供一种所述磁珠的制备方法，包括：
将所述磁珠与硼酸缓冲液混合配制成混合液；
将所述混合液涡旋、超声处理后，磁力吸附移走上清液，得到处理后的第一磁珠；
将处理后的第一磁珠与硼酸缓冲液混合、涡旋、孵育混匀，磁力吸附移走上清液，得到第二磁珠；
将硼酸缓冲液与TG抗原混合加入第二磁珠中，进行涡旋、滚动混匀得到混匀液；
将混匀液与磷酸钾水溶液混合、涡旋、滚动孵育、移走上清液得到第三磁珠；
将第三磁珠与含有牛血清白蛋白的Tris-Hcl缓冲液滚动混匀，磁力吸附移走上清液，得到TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠。
进一步的，所述硼酸缓冲液中硼酸浓度为0.1mol/L；磷酸钾水溶液中磷酸钾的浓度为3mol/L。
进一步的，所述含有牛血清白蛋白的Tris-Hcl缓冲液为含质量分数为 0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液。
第三方面，本发明实施例提供一种磁珠用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的用途。
第四方面，本发明实施例提供一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括所述磁珠。
进一步的，所述试剂盒还包括酶工作液。
实施例1
一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括TG抗原包被的链霉亲和素磁珠和酶工作液。
所述TG抗原包被的链霉亲和素磁珠为：
A、取0.25mg TG抗原，用0.02M PBS(pH7.4)缓冲液5L进行2～8℃透析过夜。
B、取出透析好的TG抗原于适当容器，准确量取体积并记录，将TG抗原稀释为0.2mg/mL备用。
C、称取1.0mg的BNHS，用217μL DMSO充分溶解，配制成10mmol/L的 BNHS溶液。
D、按照BNHS与TG抗原的质量比例20：1，将BNHS溶液加入到B所得的TG抗原稀释液中，充分混匀后室温反应30min。(即1.0mg的抗体加入 10mmol/L BNHS溶液13.3μL；0.25mg加入配置好的10mmol/L BNHS溶液3.3μL)
E、取1mol/LTris缓冲液进行终止反应，加入1mol/LTris缓冲液于反应液中。加入Tris的体积为上述反应液终体积的百分之一，充分混匀，室温反应10min。
F、取出终止后的反应液装入透析袋，用0.02M PBS(pH值为7.4)缓冲液 5L进行2～8℃透析过夜。
G、将透析好的生物素抗体取出，并准确量取体积，加入等体积的丙三醇，贴签，并记录浓度，于-20℃保存，备用。
H、将生物素标记好的生物素抗体包被链霉亲和素磁珠，包被量为20μg/mg，获得TG抗原包被的链霉亲和素磁珠。用1％BSA的缓冲液Buffer稀释后，备用。
实施例2
一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括TG抗原包被的环氧基磁珠和酶工作液。
所述TG抗原包被的环氧基磁珠的制备方法为：
A.取6mg的环氧基磁珠到一支干净的管中加入0.3mL超纯水，使环氧基磁珠的浓度为20mg/mL；
B.涡旋15S，并置于水浴超声5min两次；
C.置于磁力架吸附1min，移走上清；
D.重复步骤B、C；
E.抗原用量：加入TG抗原质量为120ug(TG抗原浓度为1mg/mL,即加入体积为0.12mL的抗原)；
F.0.1M PBS的体积：加入0.18mL 0.1M PBS；
G.将E的TG抗原和F的PBS溶液混合并充分混匀，加入D所得溶液中涡旋5s；
H.向G所得溶液中加入0.2mL的3M硫酸铵溶液，涡旋混匀5s,并在37℃条件下滚动反应3h；
I.反应完成后置于磁力架吸附1min，移走上清液；
J.0.3mL100mM甘氨酸溶液(pH值为11.3)涡旋5s,置于磁力架吸附1min，移走上清液；
K.0.3mL200mM甘氨酸溶液(pH值为2.8)涡旋5s,置于磁力架吸附1min，移走上清液；
L.加入0.3mL含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，室温滚动反应10min后置于磁力架吸附1min，移走上清液；
M.加入0.3mL含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，37℃滚动反应24h后置于磁力架吸附1min，移走上清液；获得TG抗原包被的环氧基磁珠；用1％BSA的缓冲液对TG抗原包被的环氧基磁珠稀释后备用。
实施例3
一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括TG抗原包被的羧基磁珠和酶工作液。
所述TG抗原包被的羧基磁珠的制备方法，包括：
A.取5mg的羧基磁珠到一支干净的管中加入1mL 15mM MES缓冲液pH值为6.0；
B.涡旋15S，并置于滚动混运仪混匀10min；
C.重复步骤B；
D.准确称取10mgEDC加入1mL预冷水充分溶解混匀；
E.取0.08mL D所得溶液加入到0.92mL15mM MES缓冲液(pH值为6.0) 充分混匀；
F.向C所得溶液中加入E所得溶液使羧基磁珠的终浓度为5mg/mL，涡旋10s，并滚动混匀30min；
G.置于磁力架吸附1min，移走上清液；
H.抗原用量：加入1mg/mL的TG抗原100uL即抗原质量为0.1mg；
I.加入150uL15mM MES缓冲液(pH值为6.0)将TG抗原稀释至0.4mg/mL, 充分混匀；
J.将I所得溶液加入G所得溶液中，涡旋10s,并滚动孵育3h后，置于磁力架吸附1min，移走上清液；
P.向J所得溶液中加入1mL含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，使羧基磁珠浓度为5mg/mL，滚动反应10min后置于磁力架吸附1min，移走上清液；
K.重复P两次；
L.向K所得溶液中加入1mL含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，使磁珠浓度为5mg/mL在37℃条件下滚动反应24h，置于磁力架吸附1min，移走上清液；
M.获得TG抗原包被的羧基磁珠；用1％BSA的缓冲液对TG抗原包被的羧基磁珠稀释后备用。
实施例4
一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠和酶工作液。
一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠和酶工作液。
A.取6mg的甲苯磺酰基磁珠到一支干净的管中加入1.2mL0.1M硼酸缓冲液(pH值为9.5)，使磁珠的浓度为5mg/mL；
B.涡旋30s，并置于水浴超声5min两次；
C.置于磁力架吸附3min，移走上清；
D.加入1.2mL0.1M硼酸缓冲液pH 9.5，涡旋30S，并滚动孵育混匀5min；
E.置于磁力架吸附3min，移走上清；
F.重复E；
G.抗原用量：加入1mg/mL浓度的TG抗原的用量为120ug，需要使用0.1M 硼酸缓冲液(pH值为9.5)的用量为80uL；
I.将G的抗原和硼酸缓冲液混合并充分混匀，加入到F所得溶液中涡旋5s 后滚动混匀5min；
J.加入66.6uL3M磷酸钾水溶液，迅速涡旋5s并放置37℃滚动孵育24h；
K.向J所得溶液中加入1.2mL含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液滚动混匀10min；
L.置于磁力架吸附，移走上清液；
M.重复K、L两次；
N.向M所得溶液中加入1.2mL含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液,在37℃滚动孵育24h；
O.置于磁力架吸附，移走上清液；获得TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠；用1％BSA的缓冲液对TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠稀释后备用。
对比实验
实验一：链霉亲和素磁珠、环氧基磁珠、羧基磁珠及甲苯磺酰基磁珠等四种磁珠在包被同等量的TG抗原的情况下，试剂盒灵敏度比较实验。
实验材料：BNHS，DMSO，丙三醇，0.02M PBS(pH值为7.4)缓冲液， 1mol/LTris缓冲液，TG抗原，EDC，0.1M硼酸缓冲液，3mol/L硫酸铵溶液，3mol/L 磷酸钾水溶液，100mmol/L甘氨酸溶液pH11.3和200mmol/L甘氨酸溶液pH值为2.8，含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，15mmol/LMES缓冲液pH6.0,超纯水，含有1％BSA的缓冲液Buffer，ALP标记鼠抗人IgG抗体，裸磁珠，Anti-TG校准品cal-1,cal-6(Cal-1到Cal-6的浓度为0，1，5，20，40，80IU/mL)，底物液，清洗液，沃文特生物全自动化学发光免疫分析仪LA2000。
采用实施例1，实施例2，实施例3，实施例4的方法，将上述四种不同结合方式的磁珠，酶工作液共同组成试剂盒，测定Anti-TG校准品cal-1至cal-6，观察不同磁珠的测定曲线及灵敏度，并测定样本S1-S40，与罗氏值进行比较。
反应模式为：先加入校准品50μL，磁珠50μL，37℃共同孵育10min后，加入清洗液在磁场中清洗分离三次，再加入酶工作液100μL37℃孵育10min，加入清洗液在磁场中清洗分离三次后，加入底物液37℃孵育5min后，于全自动化学发光测定仪上检测。实验结果如表1所示。
表1
Figure RE-GDA0003247604880000081
Figure RE-GDA0003247604880000091
实验结论：从实验结果来看，四种磁珠组成试剂盒均能与Anti-TG校准品有较好的反应性，同等包被量的TG抗原包被的四种磁珠从灵敏度来看甲苯磺酰基磁珠>环氧基磁珠＝羧基磁珠>链霉亲和素磁珠，链霉亲和素磁珠信号较其他三种磁珠低一半左右，是由于该磁珠最大包被量在10ug/mg，所以即使包被量是 20ugTG抗原包被1mg磁珠但是实际包被到链霉亲和素磁珠的TG抗原是10ugTG 抗原包被1mg磁珠，但是四种磁珠的试剂盒曲线均能满足使用要求。
实验二：四种不同连接方式的磁珠试剂盒精密度验证实验。
参考人抗甲状腺球蛋白抗体行业标准(YY/T 1594-2018)有关精密度验证实验的方法将四种磁珠配制试剂盒分别检测Anti-TG校准品Cal-2和Cal-4各10次计算其相对偏差(CV)，CV越小证明精密度越好；用四种磁珠配制试剂盒连续测试Cal-4水平50测试，观察试剂此50测试的信号，通过信号的趋势来判断各磁珠上TG抗原的脱落情况。
实验材料：BNHS，DMSO，丙三醇，0.02M PBS(pH值为7.4)缓冲液， 1mol/LTris缓冲液，TG抗原，EDC，0.1M硼酸缓冲液，3mol/L硫酸铵溶液，3mol/L 磷酸钾水溶液，100mmol/L甘氨酸溶液pH11.3和200mmol/L甘氨酸溶液pH值为2.8，含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，15mmol/LMES缓冲液pH6.0,超纯水，含有1％BSA的缓冲液Buffer，ALP标记鼠抗人IgG抗体，裸磁珠，Anti-TG校准品cal-1,cal-6(Cal-1到Cal-6的浓度为0，1，5，20，40，80IU/mL)，底物液，清洗液，沃文特生物全自动化学发光免疫分析仪LA2000。
反应模式参照实验一。实验结果如表2和表3所示。
表2
Figure RE-GDA0003247604880000101
表3
Figure RE-GDA0003247604880000102
Figure RE-GDA0003247604880000111
实验结论：表2实验结果表明，四种磁珠的精密度为甲苯磺酰基磁珠＝环氧基磁珠＝羧基磁珠>链霉亲和素磁珠；从表3结果来看，随着测试进行，链霉亲和素磁珠和羧基磁珠信号有明显降低到趋势，而甲苯磺酰基磁珠和环氧基磁珠信号无明显降低趋势，说明磁珠上抗原的脱落量为链霉亲和素磁珠>羧基磁珠>甲苯磺酰基磁珠＝环氧基磁珠。
实验三：四种磁珠配制试剂盒，临床样本测试情况。
实验材料：BNHS，DMSO，丙三醇，0.02M PBS(pH值为7.4)缓冲液，1mol/LTris缓冲液，TG抗原，EDC，0.1M硼酸缓冲液，3mol/L硫酸铵溶液，3mol/L 磷酸钾水溶液，100mmol/L甘氨酸溶液pH值为11.3和200mmol/L甘氨酸溶液 pH2.8，含0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液，15mmol/LMES缓冲液pH6.0,超纯水，含有1％BSA的缓冲液Buffer，ALP标记鼠抗人IgG抗体，裸磁珠，Anti-TG校准品cal-1,cal-6(Cal-1到Cal-6的浓度为0，1，5，20，40，80IU/mL)，样本S1-S40，底物液，清洗液，沃文特生物全自动化学发光免疫分析仪LA2000。
反应模式参照实验一。实验结果如下表4。
表4
Figure RE-GDA0003247604880000121
Figure RE-GDA0003247604880000131
实验结论：实验结果表明，四种磁珠检测临床样本，链霉亲和素磁珠检测临床样本测试越靠后，测得的浓度呈现偏低的趋势，环氧基磁珠及羧基磁珠均测试出异常样本且测值偏高，因为使用的是相同的抗原抗体，说明测值偏高是磁珠的非特异性吸附带来的，只有甲苯磺酰基磁珠测值与罗氏测值最接近且无异常样本，说明甲苯磺酰基磁珠的非特异性吸收最少。
实验四：甲苯磺酰基磁珠热加速实验，观察试剂盒的稳定性。
实验方法：将制备好的甲苯磺酰基磁珠等体积分成两份装入试剂盒，一份于 2-8℃保存，一份于恒温培养箱中37℃保存。将两种磁珠与酶工作液配合测定 Anti-TG校准品。分别于第三天和第六天观察校准品的发光信号，计算信号保留率，验证试剂盒的稳定性。
实验结果如表5。
表5
Figure RE-GDA0003247604880000132
实验结论：甲苯磺酰基磁珠经过37℃热处理3天和6天信号保留率仍然较高，说明试剂稳定性较好。
综上四个实验可以得出：表明Anti-TG测定试剂盒在使用甲苯磺酰基磁珠时，精密度和临床样本测试较其他几种常用的磁珠有明显的提高，其临床符合率更高，准确性更高，在市场上更具有优势。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种磁珠，其特征在于，包括：
包被有活化官能团的磁珠；以及
TG抗原，通过与所述活化官能团反应包被在磁珠上。
2.根据权利要求1所述磁珠，其特征在于，所述包被有活化官能团的磁珠为链霉亲和素磁珠、环氧基磁珠、羧基磁珠或甲苯磺酰基磁珠。
3.根据权利要求2所述磁珠，其特征在于，所述包被有活化官能团的磁珠为甲苯磺酰基磁珠。
4.根据权利要求2所述磁珠，其特征在于，1mg包被有活化官能团的磁珠对应的TG抗原的包被质量为20ug。
5.一种权利要求3或4所述磁珠的制备方法，其特征在于，包括：
将所述磁珠与硼酸缓冲液混合配制成混合液；
将所述混合液涡旋、超声处理后，磁力吸附移走上清液，得到处理后的第一磁珠；
将处理后的第一磁珠与硼酸缓冲液混合、涡旋、孵育混匀，磁力吸附移走上清液，得到第二磁珠；
将硼酸缓冲液与TG抗原混合加入第二磁珠中，进行涡旋、滚动混匀得到混匀液；
将混匀液与磷酸钾水溶液混合、涡旋、滚动孵育、移走上清液得到第三磁珠；
将第三磁珠与含有牛血清白蛋白的Tris-Hcl缓冲液滚动混匀，磁力吸附移走上清液，得到TG抗原包被的甲苯磺酰基磁珠。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述硼酸缓冲液中硼酸浓度为0.1mol/L；磷酸钾水溶液中磷酸钾的浓度为3mol/L。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述含有牛血清白蛋白的Tris-Hcl缓冲液为含质量分数为0.5％BSA的Tris-Hcl缓冲液。
8.权利要求1-4任意一项所述磁珠用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的用途。
9.一种用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任意一项所述磁珠。
10.如权利要求6所述用于测定抗甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，还包括酶工作液。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024109591A1 (zh) * 2022-11-23 2024-05-30 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 蛋白磁珠包被物及其制备方法、应用和目标抗体检测方法
CN118624917A (zh) * 2024-08-08 2024-09-10 杭州佰辰医疗器械有限公司 甲状腺球蛋白检测试剂盒及其制备方法与检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103472229A (zh) * 2013-09-17 2013-12-25 武汉生之源生物科技有限公司 一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法
CN111175494A (zh) * 2020-02-27 2020-05-19 江苏泽成生物技术有限公司 一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法
CN111579772A (zh) * 2020-05-28 2020-08-25 珠海丽珠试剂股份有限公司 基于免疫磁珠法的检测试剂及其制备方法、试剂盒以及检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103472229A (zh) * 2013-09-17 2013-12-25 武汉生之源生物科技有限公司 一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法
CN111175494A (zh) * 2020-02-27 2020-05-19 江苏泽成生物技术有限公司 一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法
CN111579772A (zh) * 2020-05-28 2020-08-25 珠海丽珠试剂股份有限公司 基于免疫磁珠法的检测试剂及其制备方法、试剂盒以及检测方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024109591A1 (zh) * 2022-11-23 2024-05-30 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 蛋白磁珠包被物及其制备方法、应用和目标抗体检测方法
CN118624917A (zh) * 2024-08-08 2024-09-10 杭州佰辰医疗器械有限公司 甲状腺球蛋白检测试剂盒及其制备方法与检测方法

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