CN113648273B - 一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜及其制备方法，属于医疗美容技术领域。为解决水光针等注射疗法进行面部皮肤修复术后产生的红肿、发炎、疼痛等症状不能快速缓解的问题，本发明提供了一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，主要成分包括脂肪干细胞外泌体、载药纳米脂质体、桦树汁、尿囊素、羟乙基纤维素、甘油和去离子水。本发明的舒缓面膜以脂肪干细胞外泌体与具有消炎镇痛功效的载药纳米脂质体复配作为主要功效成分，能够促进皮肤快速吸收、利用面部皮肤修复注入的营养物质，起到消肿、消炎镇痛、抗敏抑菌的作用，快速缓解患者术后皮肤红肿疼痛、发炎过敏的症状，使面部皮肤能够尽早实现皮肤修复效果。
Description
技术领域
本发明属于医疗美容技术领域，尤其涉及一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜及其制备方法。
背景技术
皮肤及其附属器官在形态或功能上的增龄变化是人们最容易察觉到的老化现象。皮肤老化的组织学变化是表皮棘层呈空泡变形，真皮乳头变低，网状纤维消退，弹性纤维逐渐失去弹性，甚至断裂成片。胶原纤维更新变慢，细胞间质内透明质酸减少，故真皮质量降低，进而出现松弛、褶皱、色素沉着、肤色不均等。少量、细小的面部皱纹可通过针灸、理疗、激光等方法促进面部血液循环和新陈代谢进行修复，让面部重现青春活力。
水光针美容是一种新型注射类护肤疗法，将美容针剂如破尿酸、胶原蛋白注射到紧贴表皮下的真皮层，注射后能让皮肤变得水润、光亮而得名，具有保湿补水、改善肤色、收缩毛孔、祛除皱纹的功效。但使用水光针等注射疗法进行皮肤修复后会产生疼痛感，注射针口部位容易产生疤痕，术后修复部位还会出现不同程度的红肿、发炎、疼痛、过敏，需要三天到一周的时间才能慢慢恢复。常规方法一般采用冰敷进行缓解，但并不能加快修复部位的恢复。
发明内容
为解决水光针等注射疗法进行面部皮肤修复术后产生的红肿、发炎、疼痛等症状不能快速缓解的问题，本发明提供了一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜及其制备方法。
本发明的技术方案：
一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，包括面膜精华液和面膜基材，所述面膜精华液包括如下重量份的组分：脂肪干细胞外泌体0.1～2份、载药纳米脂质体10～15份、桦树汁3～5份、尿囊素0.5～1份、羟乙基纤维素0.2～1份、甘油5～10份和去离子水66～81.5份。
进一步的，所述面膜精华液包括如下重量份的组分：脂肪干细胞外泌体1.5份、载药纳米脂质体12份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
进一步的，所述脂肪干细胞外泌体为人源脂肪干细胞外泌体，粒径为20～200nm。
进一步的，所述载药纳米脂质体含有质量比为65～70：20：10～15的蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇和药物组合物，所述药物组合物包括如下组分：木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油。
进一步的，所述药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3～5：1～3：1～3：2～5：1～3。
一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、提取脂肪干细胞外泌体：
将脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基后，加入低糖DMEM培养基继续培养48h后收集上清液；所得上清液依次经300×g离心10min、2000×g离心10min、10000×g高速离心30min和14000×g超速离心90min，收集所述超速离心得到的沉淀即为脂肪干细胞外泌体；
步骤二、制备载药纳米脂质体：
根据配方将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇，所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜，将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜，将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化，对水化体系进行超声处理，使脂质体充分均匀分散在水化体系中，然后聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出得到载药纳米脂质体；
步骤三、制备面膜精华液：
将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素溶于去离子水中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到面膜精华液；
步骤四、制备舒缓面膜：
用面膜精华液浸渍面膜基材，封装即得到利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜。
进一步的，步骤一所述诱导培养基是以低糖DMEM培养基为基础，添加了如下含量的诱导剂：重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL。
进一步的，步骤一所述脂肪干细胞的获得方法为取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块，加入0.1％胶原蛋白酶I和0.25％胰酶消化30～45min，然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液，将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基，10％胎牛血清终止消化，300×g离心10min，弃上清，在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基，37℃，5％CO2恒温培养48h后换液，之后每5天换液，观察到梭形细胞长出，细胞融合度达到70～80％时即冻存得到脂肪干细胞。
进一步的，步骤二所述超声处理条件为300W超声处理10min。
进一步的，步骤二所述聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出是用孔径为200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出，反复挤出3～5次后，再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出，反复挤出2～3次后，得到粒径为100～150nm的载药纳米脂质体。
本发明的有益效果：
本发明提供的利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，以脂肪干细胞外泌体与具有消炎镇痛功效的载药纳米脂质体作为主要功效成分，一方面在脂肪干细胞外泌体作用下促进皮肤快速吸收、利用面部皮肤修复注入的营养物质，起到消肿作用；另一方面在载药纳米脂质体所载药物作用下起到消炎镇痛、抗敏抑菌的功效，能够快速缓解患者术后皮肤红肿疼痛、发炎过敏的症状。同时，面膜精华液中还复配了桦树汁、尿囊素等成分，辅以保湿补水、促进细胞生长、加速伤口愈合的作用。本发明舒缓面膜各组分相复配，起到协同增效的作用，能使面部皮肤快速恢复，尽早实现皮肤修复效果，同时各组分温和无刺激，安全无毒副作用。
本发明制备方法得到的脂肪干细胞外泌体和载药纳米脂质体均为纳米级粒径，在敷贴面膜过程中易于被细胞吸收利用，其中脂肪干细胞外泌体纯度高，活性状态稳定，经冻干再水化后仍保持膜完整性，外泌体蛋白测得量恒定，有效延长了面膜的保质期。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置，若未特别指明，本发明实施例中所用的原料等均可市售获得；若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
本实施例提供了一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，包括面膜精华液和面膜基材，所述面膜精华液包括如下重量份的主要成分：脂肪干细胞外泌体1.5份、载药纳米脂质体12份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
本实施例载药纳米脂质体中蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇与药物组合物的质量比为70：20：10，其中药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为4：2：1：2：1。
实施例2
本实施例提供了一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，包括面膜精华液和面膜基材，所述面膜精华液包括如下重量份的主要成分：脂肪干细胞外泌体2份、载药纳米脂质体10份、桦树汁3份、尿囊素0.5份、羟乙基纤维素0.2份、甘油5份和去离子水79.3份。
本实施例载药纳米脂质体中蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇与药物组合物的质量比为68：20：12，其中药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3：1：2：4：2。
实施例3
本实施例提供了一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，包括面膜精华液和面膜基材，所述面膜精华液包括如下重量份的主要成分：脂肪干细胞外泌体0.1份、载药纳米脂质体15份、桦树汁4份、尿囊素0.6份、羟乙基纤维素0.3份、甘油6份和去离子水74份。
本实施例载药纳米脂质体中蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇与药物组合物的质量比为65：20：15，其中药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为5：3：3：1：3。
实施例1-3中使用的脂肪干细胞外泌体为人源脂肪干细胞外泌体，粒径为20～200nm，是细胞在生理活动过程中分泌出来的生理活性物质，主要功效成分包括蛋白质类物质及micRNA类核酸物质。脂肪干细胞外泌体是一种外层为脂质双分子层结构的囊泡，在面部皮肤进行水光针等注射疗法后，面膜中的脂肪干细胞外泌体可以直接由表皮针孔破损处的细胞通道直达肌底细胞，发挥作用。
脂肪干细胞外泌体能够促进皮肤细胞对水光针等注射疗法注入真皮层的胶原蛋白等营养物质的吸收，使修复后的面部皮肤快速消肿并促进胶原重构，在恢复末期还能通过抑制胶原形成防止注射针口形成疤痕。
实施例1-3中使用的载药纳米脂质体含有木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油。其中木犀草素不但能够消炎抗敏抑菌，还能够降低胶原蛋白的分解，保证注射到面部皮肤的胶原蛋白等有效成分高效发挥作用；羟基积雪草酸能够促进伤口愈合，防治瘢痕生成；红没药醇具有消炎、抗过敏的作用；邻羟基苯甲酸甲酯具有促进血液循环、消肿、消炎、镇痛的作用；薄荷油则具有镇痛、缓解面部肿痛症状的作用。
载药纳米脂质体药物有效成分包裹在脂质膜内，其粒径仅为100～150nm，非常易于通过细胞吞噬和融合作用而进入皮肤细胞，继而将药物释放，更快速高效的发挥药效。
脂肪干细胞外泌体和载药纳米脂质体作为主要功效成分，均能够快速被表皮细胞吸收发挥作用，两者复配在一起进入细胞，起到协同增效的作用，一方面快速对细胞进行消炎、消肿、镇痛，使细胞恢复正常，另一方面促进消炎后表皮细胞快速吸收、利用注射获得的营养物质，尽早实现皮肤修复效果。
同时，面膜精华液中还复配了桦树汁、尿囊素等成分，辅以保湿补水、促进细胞生长、加速伤口愈合的作用，同时各组分温和无刺激，安全无毒副作用。
实施例4
本实施例提供了一种脂肪干细胞外泌体的提取方法，具体包括如下步骤：
步骤1、获得脂肪干细胞：
取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块，加入0.1％胶原蛋白酶I和0.25％胰酶消化30～45min，然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液，将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基，10％胎牛血清终止消化，300×g离心10min，弃上清，在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基，37℃，5％CO2恒温培养48h后换液，之后每5天换液，观察到梭形细胞长出，细胞融合度达到70～80％时即可冻存得到脂肪干细胞；
本实施例脂肪组织取自健康人体抽脂术后的脂肪组织。
本实施例使用的诱导培养基是以低糖DMEM培养基为基础，添加了如下含量的诱导剂：重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL。
步骤2、脂肪干细胞的培养：
配制诱导培养基，所述诱导培养基以低糖DMEM培养基为基础，添加了如下含量的诱导剂：重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL。
将步骤1获得的脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基，加入低糖DMEM培养基培养48h后收集上清液；
步骤3、收集脂肪干细胞外泌体：
将步骤2收集得到的上清液300×g离心10min，收集上清，将所得上清2000×g离心10min，收集上清，将所得上清10000×g高速离心30min，收集上清，将所得上清14000×g超速离心90min，收集沉淀得到外泌体，用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬，14000×g超速离心90min，收集沉淀，生理盐水重悬沉淀，冻存于-80℃备用。
本实施例提取得到的脂肪干细胞外泌体直径为20～200nm。
含有本实施例制备的脂肪干细胞外泌体的面膜精华液在15℃下储存1个月、2个月、3个月、6个月后检测其外泌体蛋白测得量，相比于本实施例制备的脂肪干细胞外泌体原始外泌体蛋白测得量，储存后的面膜精华液的外泌体蛋白测得量依次为99％、97％、96％、93％。这说明本发明制备的脂肪干细胞外泌体活性状态稳定，经冻干再水化后仍保持膜完整性，外泌体蛋白测得量恒定，有效延长了面膜的保质期。
实施例5
本实施例提供了一种载药纳米脂质体的制备方法，具体方法如下：
将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇，所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜，将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜，将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化，对水化体系进行300W超声处理，超声处理10min使脂质体充分均匀分散在水化体系中，用孔径为200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出，反复挤出3～5次后，再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出，反复挤出2～3次后，得到粒径为100～150nm的载药纳米脂质体。
本实施例制备的载药纳米脂质体药物包封率不低于80％，且粒径均匀，在面膜中能够保持结构稳定，有效延长了面膜的保质期。
实施例6
本实施例为实施例1提供的利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤一、按实施例4提供的方法提取脂肪干细胞外泌体：
将脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基后，加入低糖DMEM培养基继续培养48h后收集上清液；所得上清液依次经300×g离心10min、2000×g离心10min、10000×g高速离心30min和14000×g超速离心90min，收集所述超速离心得到的沉淀即为脂肪干细胞外泌体。
步骤二、按实施例5提供的方法制备载药纳米脂质体：
按药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为4：2：1：2：1准备药物组合物；按蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇与药物组合物的质量比为70：20：10准备蛋黄磷脂酰胆碱和胆固醇。将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇，所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜，将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜，将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化，对水化体系进行300W超声处理10min，使脂质体充分均匀分散在水化体系中，然后用200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出，反复挤出3～5次后，再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出，反复挤出2～3次后，得到粒径为100～150nm的载药纳米脂质体。
步骤三、制备面膜精华液：
准备如下重量份的组分：脂肪干细胞外泌体1.5份、载药纳米脂质体12份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份、去离子水70份；
将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素溶于去离子水中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到面膜精华液；
步骤四、制备舒缓面膜：
本实施例中舒缓面膜的面膜基材可为市售的无纺布面膜基材、蚕丝面膜基材、生物纤维面膜基材或纳米纤维素面膜基材，优选纳米纤维素面膜基材。
用面膜精华液浸渍纳米纤维素面膜基材，封装即得到利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜。
本实施例的舒缓面膜可在进行水光针等注射疗法进行面部皮肤修复术后贴敷，每次15～20min，每天1～2次。
实施例7
本实施例为实施例2提供的利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤一、按实施例4提供的方法提取脂肪干细胞外泌体：
将脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基后，加入低糖DMEM培养基继续培养48h后收集上清液；所得上清液依次经300×g离心10min、2000×g离心10min、10000×g高速离心30min和14000×g超速离心90min，收集所述超速离心得到的沉淀即为脂肪干细胞外泌体。
步骤二、按实施例5提供的方法制备载药纳米脂质体：
按药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3：1：2：4：2准备药物组合物；按蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇与药物组合物的质量比为68：20：12准备蛋黄磷脂酰胆碱和胆固醇。将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇，所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜，将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜，将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化，对水化体系进行300W超声处理10min，使脂质体充分均匀分散在水化体系中，然后用200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出，反复挤出3～5次后，再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出，反复挤出2～3次后，得到粒径为100～150nm的载药纳米脂质体。
步骤三、制备面膜精华液：
准备如下重量份的组分：脂肪干细胞外泌体2份、载药纳米脂质体10份、桦树汁3份、尿囊素0.5份、羟乙基纤维素0.2份、甘油5份、去离子水79.3份；
将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素溶于去离子水中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到面膜精华液；
步骤四、制备舒缓面膜：
本实施例中舒缓面膜的面膜基材可为市售的无纺布面膜基材、蚕丝面膜基材、生物纤维面膜基材或纳米纤维素面膜基材，优选纳米纤维素面膜基材。
用面膜精华液浸渍纳米纤维素面膜基材，封装即得到利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜。
本实施例的舒缓面膜可在进行水光针等注射疗法进行面部皮肤修复术后贴敷，每次15～20min，每天1～2次。
实施例8
本实施例为实施例3提供的利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤一、按实施例4提供的方法提取脂肪干细胞外泌体：
将脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基后，加入低糖DMEM培养基继续培养48h后收集上清液；所得上清液依次经300×g离心10min、2000×g离心10min、10000×g高速离心30min和14000×g超速离心90min，收集所述超速离心得到的沉淀即为脂肪干细胞外泌体。
步骤二、按实施例5提供的方法制备载药纳米脂质体：
按药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为5：3：3：1：3准备药物组合物；按蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇与药物组合物的质量比为65：20：15准备蛋黄磷脂酰胆碱和胆固醇。将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇，所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜，将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜，将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化，对水化体系进行300W超声处理10min，使脂质体充分均匀分散在水化体系中，然后用200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出，反复挤出3～5次后，再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出，反复挤出2～3次后，得到粒径为100～150nm的载药纳米脂质体。
步骤三、制备面膜精华液：
准备如下重量份的组分：脂肪干细胞外泌体0.1份、载药纳米脂质体15份、桦树汁4份、尿囊素0.6份、羟乙基纤维素0.3份、甘油6份、去离子水74份；
将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素溶于去离子水中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到面膜精华液；
步骤四、制备舒缓面膜：
本实施例中舒缓面膜的面膜基材可为市售的无纺布面膜基材、蚕丝面膜基材、生物纤维面膜基材或纳米纤维素面膜基材，优选纳米纤维素面膜基材。
用面膜精华液浸渍纳米纤维素面膜基材，封装即得到利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜。
本实施例的舒缓面膜可在进行水光针等注射疗法进行面部皮肤修复术后贴敷，每次15～20min，每天1～2次。
对比例1
本对比例提供了一种仅添加脂肪干细胞外泌体的面膜及其制备方法。
将按实施例4提供的方法提取的脂肪干细胞外泌体1.5份、尿囊素1份与甘油10份混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素0.5份溶于去离子水82份中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁5份混合均匀得到面膜精华液；用面膜精华液浸渍纳米纤维素面膜基材，封装即得到对比面膜a。
对比例2
本对比例提供了一种仅添加载药纳米脂质体的面膜及其制备方法。
将按实施例5提供的方法制备的载药纳米脂质体12份、尿囊素1份与甘油10份混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素0.5份溶于去离子水71.5份中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁5份混合均匀得到面膜精华液；用面膜精华液浸渍纳米纤维素面膜基材，封装即得到对比面膜b。
对比例3
本对比例提供了一种不含脂肪干细胞外泌体和载药纳米脂质体的面膜及其制备方法。
将尿囊素1份与甘油10份混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素0.5份溶于去离子水83.5份中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁5份混合均匀得到面膜精华液；用面膜精华液浸渍纳米纤维素面膜基材，封装即得到对比面膜c。
舒缓面膜效果对比实验：
构建白兔皮肤模型：实验用白兔若干、背部区脱毛备皮，利用水光针注射同等过量胶原蛋白，白兔背部注射部位皮肤出现明显红肿症状，将症状接近的白兔分为八组，每组5只白兔。
第一组注射胶原蛋白后注射部位每天早晚各贴敷实施例1提供的舒缓面膜10分钟；
第二组注射胶原蛋白后注射部位每天早晚各贴敷实施例2提供的舒缓面膜10分钟；
第三组注射胶原蛋白后注射部位每天早晚各贴敷实施例3提供的舒缓面膜10分钟；
第四组注射胶原蛋白后注射部位每天早晚各贴敷对比例1提供的对比面膜a10分钟；
第五组注射胶原蛋白后注射部位每天早晚各贴敷对比例2提供的对比面膜b10分钟；
第六组注射胶原蛋白后注射部位每天早晚各贴敷对比例3提供的对比面膜c10分钟；
第七组注射胶原蛋白后每天早晚各冷敷注射部位10分钟；
第八组注射胶原蛋白后自然恢复，不做处理。
贴敷面膜一天后观察，第一组、第二组、第三组注射部位红肿明显减弱，第四组、第五组红肿减弱效果不及第一组、第二组、第三组；第六组、第七组红肿未见减弱；第八组红肿加重。
贴敷面膜三天后观察，第一组、第二组、第三组注射部位红肿基本消失，皮肤恢复良好，注射针眼未见疤痕，组化检测发现注射部位有大量胶原蛋白沉积，皮肤光滑而有弹性；第四组注射部位仍有红肿，组化检测发现注射部位有少量胶原蛋白沉积；第五组注射部位红肿基本消失，但组化检测发现注射部位未发现胶原蛋白沉积；第六组、第七组红肿未见减弱；第八组注射部位仍有红肿及渗出等炎症反应。
继续观察发现，第四组注射部位红肿完全消失是在贴敷面膜5天后，组化检测发现注射部位胶原蛋白沉积量与第一组贴敷三天的胶原蛋白沉积量相当。
第五组贴敷面膜10天后，组化检测发现注射部位胶原蛋白沉积量与第一组贴敷三天的胶原蛋白沉积量相当。
第六组、第七组注射部位在贴敷面膜或冷敷后7天红肿完全消失，贴覆面膜或冷敷后10天组化检测发现注射部位胶原蛋白沉积量均未达到第一组贴敷三天的胶原蛋白沉积量。
第八组自然恢复的注射部位在10天红肿基本消失，组化检测发现注射部位胶原蛋白沉积量未达到第一组贴敷三天的胶原蛋白沉积量。
效果实验结果证明了脂肪干细胞外泌体能够促进皮肤细胞对水光针等注射疗法注入真皮层的胶原蛋白等营养物质的吸收，使修复后的面部皮肤快速消肿并促进胶原重构，在恢复末期还能通过抑制胶原形成防止注射针口形成疤痕；同时也证明了载药纳米脂质体能够快速实现消肿消炎的功效。
脂肪干细胞外泌体和载药纳米脂质体作为主要功效成分，均能够快速被表皮细胞吸收发挥作用，两者复配在一起进入细胞，起到协同增效的作用，一方面快速对细胞进行消炎、消肿、镇痛，使细胞恢复正常，另一方面促进消炎后表皮细胞快速吸收、利用注射获得的营养物质，尽早实现皮肤修复效果。
Claims (6)
1.一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，由面膜精华液和面膜基材组成，其特征在于，所述面膜精华液由以下组分组成，按重量份计为：脂肪干细胞外泌体0.1～2份、载药纳米脂质体10～15份、桦树汁3～5份、尿囊素0.5～1份、羟乙基纤维素0.2～1份、甘油5～10份和去离子水66～81.5份；
所述载药纳米脂质体由以下组分按质量比组成，质量比为65～70：20：10～15的蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇和药物组合物，所述药物组合物由如下组分组成：木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油；所述药物组合物中木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油的质量比为3～5：1～3：1～3：1～5：1～3；
所述脂肪干细胞外泌体的制备方法包括如下步骤：
步骤1、获得脂肪干细胞
取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块，加入0.1％胶原蛋白酶I和0.25％胰酶消化30～45min，然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液，将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基，10％胎牛血清终止消化，300×g离心10min，弃上清，在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基，37℃，5％CO2恒温培养48h后换液，之后每5天换液，观察到梭形细胞长出，细胞融合度达到70～80％时即可冻存得到脂肪干细胞；
所述脂肪组织取自健康人体抽脂术后的脂肪组织；
步骤2、脂肪干细胞的培养：
配制诱导培养基，所述诱导培养基以低糖DMEM培养基为基础，添加了如下含量的诱导剂：重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL；
将步骤1获得的脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基，加入低糖DMEM培养基培养48h后收集上清液；
步骤3、收集脂肪干细胞外泌体：
将步骤2收集得到的上清液300×g离心10min，收集上清，将所得上清2000×g离心10min，收集上清，将所得上清10000×g高速离心30min，收集上清，将所得上清14000×g超速离心90min，收集沉淀得到外泌体，用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬，14000×g超速离心90min，收集沉淀，生理盐水重悬沉淀，冻存于-80℃备用。
2.根据权利要求1所述的一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，其特征在于，所述面膜精华液由以下组分组成，按重量份计为：脂肪干细胞外泌体1.5份、载药纳米脂质体12份、桦树汁5份、尿囊素1份、羟乙基纤维素0.5份、甘油10份和去离子水70份。
3.根据权利要求1或2任一项所述的一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜，其特征在于，所述脂肪干细胞外泌体粒径为20～200nm。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、提取脂肪干细胞外泌体：
步骤1、获得脂肪干细胞
取脂肪组织用PBS缓冲液冲洗3次后剪碎获得1mm3的碎块，加入0.1％胶原蛋白酶I和0.25％胰酶消化30～45min，然后静置分层后吸取上层脂肪细胞液，将所得脂肪细胞液加入等体积DMEM-F12培养基，10％胎牛血清终止消化，300×g离心10min，弃上清，在细胞沉淀中加入20mL无血清细胞培养基，37℃，5％CO2恒温培养48h后换液，之后每5天换液，观察到梭形细胞长出，细胞融合度达到70～80％时即可冻存得到脂肪干细胞；
所述脂肪组织取自健康人体抽脂术后的脂肪组织；
步骤2、脂肪干细胞的培养：
配制诱导培养基，所述诱导培养基以低糖DMEM培养基为基础，添加了如下含量的诱导剂：重组白蛋白50μg/mL、重组表皮生长因子20μg/mL、维生素C 20μg/mL、尼克酰胺8μg/mL、丙酮酸钠12μg/mL、成纤维细胞生长因子30μg/mL、IBMX 0.5μg/mL、维甲酸0.5μg/mL；
将步骤1获得的脂肪干细胞接种于诱导培养基中进行培养，接种量为50％，培养条件为37℃，5％CO2恒温培养48h，吸除培养基，加入低糖DMEM培养基培养48h后收集上清液；
步骤3、收集脂肪干细胞外泌体：
将步骤2收集得到的上清液300×g离心10min，收集上清，将所得上清2000×g离心10min，收集上清，将所得上清10000×g高速离心30min，收集上清，将所得上清14000×g超速离心90min，收集沉淀得到外泌体，用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬，14000×g超速离心90min，收集沉淀，生理盐水重悬沉淀，冻存于-80℃备用；
步骤二、制备载药纳米脂质体：
根据配方将蛋黄磷脂酰胆碱、胆固醇、木犀草素、羟基积雪草酸、红没药醇、邻羟基苯甲酸甲酯和薄荷油溶于无水乙醇，所有组分完全溶解后减压旋干获得脂膜，将所得脂膜再次用无水乙醇溶解并再次旋干得到二次脂膜，将所得二次脂膜用DEPC生理盐水溶解水化，对水化体系进行超声处理，使脂质体充分均匀分散在水化体系中，然后用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出得到载药纳米脂质体；
步骤三、制备面膜精华液：
将步骤一提取得到的脂肪干细胞外泌体、步骤二制备的载药纳米脂质体、尿囊素与甘油混合均匀得到体系1，将羟乙基纤维素溶于去离子水中得到体系2，再将体系1、体系2与桦树汁混合均匀得到面膜精华液；
步骤四、制备舒缓面膜：
用面膜精华液浸渍面膜基材，封装即得到利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜。
5.根据权利要求4所述的一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，其特征在于，步骤二所述超声处理条件为300W超声处理10min。
6.根据权利要求5所述的一种利于面部皮肤修复术后恢复的舒缓面膜的制备方法，其特征在于，步骤二所述用聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出是用孔径为200nm的聚碳酸酯膜对水化体系进行过膜挤出，反复挤出3～5次后，再用孔径为100nm的聚碳酸酯膜对体系进行过膜挤出，反复挤出2～3次后，得到粒径为100～150nm的载药纳米脂质体。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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