CN113631228B - 作为sting激动剂的大环化合物 - Google Patents

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Abstract

公开了具有通式(I)的大环化合物，及其互变异构形式、立体异构体、药学上可接受的盐，以及它们与合适药物的组合、相应的合成方法和本文公开的化合物的药物组合物和用途。

Description

作为STING激动剂的大环化合物
技术领域
本发明涉及具有通式(I)的大环化合物，及其互变异构形式、立体异构体、药学上可接受的盐，以及它们与合适药物的组合、相应的合成方法和包含本发明的化合物的药物组合物和用途。
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年3月28日提交的印度临时专利申请201921012258和于2019年11月13日提交的印度临时专利申请201921046194的益处，这两篇专利申请的公开内容通过引用整体并入本文用于所有目的。
背景技术
干扰素基因刺激因子(STING，也称为跨膜蛋白173/TMEM173/MPYS/MITA/ERIS)是一种在人体内由TMEM173基因编码的信号传导分子。STING是具有379个氨基酸的蛋白质，由若干个跨膜区组成。STING蛋白在若干种内皮和上皮细胞类型，以及造血谱系诸如T细胞、树突细胞(DC)(包括浆细胞样树突细胞(pDC))和巨噬细胞中表达。STING与细胞中的内质网(ER)相关，并且在控制许多宿主防御基因(包括I型干扰素(IFN)和促炎细胞因子)的转录中具有主要作用。
对细胞溶质中异常DNA物种或环状二核苷酸(CDN)的识别导致STING的激活。细胞溶质DNA物种可在与环状GMP-AMP合酶(cGAS)结合之后激活STING信号传导。细胞溶质DNA与cGAS的结合催化了一种称为cGAMP(环状GMP-AMP)的CDN的产生，该CDN含有一个2',5'-磷酸二酯键和一个典型的3',5'键(c[G(2',5')pA(3',5')p])。cGAMP与其他细菌CDN的结合诱导STING蛋白构象的变化，并促进TANK-结合激酶1(TBK1)的结合。STING-TBK1复合物进一步转移到细胞的核周区域，以将TBK1转运到内溶酶体区室，TBK1在内溶酶体区室使转录因子如干扰素调节因子3(IRF3)磷酸化。类似地，STAT6和核因子-κB(NF-κB)在STING激活的下游也被激活。然后这些转录因子易位至细胞核中以启动先天免疫基因转录以及I型IFN和其他细胞因子的产生。然后STING迅速降解，这一事件可避免与持续的细胞因子产生相关的问题。(Nature Reviews Immunol,2015,15,760-770；Cell Reports,2015,11,1018-1030)
对小鼠的研究表明，I型IFN信号传导在肿瘤启动T细胞引发和肿瘤控制中起重要作用(J.Exp.Med.2011,208,1989-2003)。DC中缺乏IFN-α/β受体的小鼠不能排斥免疫原性肿瘤，而且来自这些小鼠的CD8α+DC在向CD8+T细胞交叉呈递抗原方面存在缺陷。另外，黑色素瘤患者的转录谱分析表明，含有浸润激活T细胞的肿瘤其特征在于具有I型IFN转录特征(Cancer Res.2009,69,3077-3085)。许多研究已经证明，激活肿瘤驻留宿主APC中的STING途径是诱导体内针对肿瘤衍生抗原的自发CD8+T细胞应答所必需的(Immunity,2014,41,830-842)。大量证据表明，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)与多种恶性肿瘤的有利预测相关(J.Transl.Med.2012,10,205)并且预测响应于若干免疫疗法策略的积极临床结果(CancerJ.2012,18,153-159)。STING激活部分地促进了化疗剂以及放射疗法的抗肿瘤活性(Immunity,2014,41,843-852)。此外，研究已发现STING激活和信号传导对于通过促进抗肿瘤免疫应答来防止癌症的发展至关重要。因此，STING的激活代表了一种用于癌症治疗的潜在免疫疗法。
研究表明，将经修饰的CDN直接瘤内注射(I.Tu.)到已形成的B16F10黑色素瘤、CT26结肠癌和4T1乳腺癌中，可使肿瘤快速且显著地消退，并产生持久的全身性抗肿瘤免疫。因此，通过特异性激动剂激活TME中的STING途径可能是促进广泛的肿瘤启动T细胞引发从而治疗癌症的有效治疗策略。(J.Immunol.2013,190,5216–5225；Cell Rep.2015,19,11(7),1018-30)。除了CDN之外，其他种类的化合物也可激活STING。
与STING的抗癌机制相同，STING对其下游的激活也导致若干种抗病毒基因的诱导，这些抗病毒基因包括IFN-β和若干种干扰素刺激基因(ISG)。小鼠胚胎成纤维细胞中STING的消融使它们容易受到负链病毒感染，该负链病毒包括水疱性口炎病毒。第一代小鼠STING激动剂DMXAA对多种体内病毒模型如HBV(乙型肝炎病毒)DNA流体动力学小鼠模型、屈曲病毒、H1N1 PR8流感株显示有效，表明了STING激动剂作为抗病毒剂对多种病毒感染的效用。(Nature,2008,455,674-678；PLoSPathog.2015,11,12；Antimicrob.AgentsChemother.2015,59,2 1273-1281；J Leukocyte Bio.2011,89,3 351-357)。
国际公开WO2017/011920、WO2017/175147、WO2017/175156、WO2018,234805、WO2018,234807、WO2018,234808、WO2019/023635、WO2019/027857、WO2019/027858和Nature(2018),564(7736),439-443公开了STING调节剂。
本文描述了具有STING调节剂活性的本发明化合物。
发明内容
本发明涉及通式(I)化合物，及其互变异构形式、立体异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药。
其中，
G1独立地选自环A或
G2为-CH＝CH-；
环A独立地选自任选取代的杂环基和任选取代的杂芳基；
环B为芳族碳环；
环C为任选取代的五元杂芳基；
R1为-CON(R3)2；
R2独立地选自氢、任选取代的C1-C6烷基和任选取代的C3-C5单环环烷基；
R3独立地选自氢和任选取代的C1-C6烷基；
m选自0或1；
n选自0、1或2；
o为1；
p选自0、1或2；
当“烷基”被取代时，该烷基被1-4个独立地选自卤素、烷基、全卤代烷基、环烷基、杂环基、-N(R4)2和-OR4的取代基取代；
当“碳环”或“环烷基”被取代时，该碳环或环烷基被1-4个独立地选自卤素、烷基、全卤代烷基、-N(R4)2和-OR4的取代基取代；
当“杂环”或“杂环基”被取代时，该杂环或杂环基被1-4个独立地选自氧代(＝O)、卤素、氰基、烷基、全卤代烷基、-OR4、-C(＝O)OH、-OP(O)(OR4)2、-P(O)(OR4)2、-P(O)(OR4)R4a、-SO2R4a、-SO2NH2、-C(＝O)N(H)R4、-C(＝O)N(烷基)R4、-N(H)C(＝O)R4a、-N(H)R4和-N(烷基)R4的取代基取代；
当“杂芳基”被取代时，该杂芳基被1-4个选自卤素、氰基、烷基、全卤代烷基、-O-烷基、-O-全卤代烷基、-N(烷基)烷基、-N(H)R4、-SO2-烷基、-N(烷基)C(＝O)烷基、-N(H)C(＝O)烷基、-C(＝O)N(烷基)烷基、-C(＝O)N(H)烷基、-C(＝O)NH2、-SO2N(烷基)烷基、-SO2N(H)烷基、-SO2NH2、-C(＝O)OH、-OP(O)(OR4)2、-P(O)(OR4)2和-P(O)(OR4)R4a的取代基取代；
每个R4独立地选自氢、烷基和环烷基；并且
每个R4a独立地选自烷基和环烷基。
在另一个实施方案中，本发明提供了通式(Ia)化合物，及其互变异构形式、立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，
其中，
R2、环A、m和n如上所定义。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(Ib)化合物，及其互变异构形式、立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，
其中，
R2、环A和m如上所定义。
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中环A为任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基。
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)和式(Ia)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中环A为
根据另一个实施方案，本发明涉及式(Ib)化合物，及其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中环A为
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中R2为任选取代的C1-C6烷基。
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中R2为任选取代的乙基。
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)或式(Ia)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中n为0、1或2。
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)或式(Ia)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中n为0。
根据另一个实施方案，本发明涉及式(I)化合物，其互变异构形式，其立体异构体，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中R2为任选取代的C1-C6烷基；n为0、1或2；并且环A为任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物，其互变异构形式及其所有可能的几何异构体，包括但不限于如下所示的式(A)、式(B)、式(C)、式(D)和式(E)：
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，其互变异构形式，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，或其前药，其中该化合物选自：
/>
/>
/>
/>
在又一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在又一个实施方案中，本发明提供了式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗STING激活有益的疾病或病况。
在又一个实施方案中，本发明提供了式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或药物组合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗STING激活有益的疾病或病况的药物中的用途。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种治疗受试者中STING激活有益的疾病或病况的方法，该方法包括施用治疗有效量的式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种治疗有此需要的哺乳动物中选自癌症和感染性疾病的疾病或病况的方法，该方法包括向该哺乳动物施用治疗有效量的式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种治疗癌症诸如实体瘤、白血病和淋巴瘤的方法。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种治疗感染性疾病诸如病毒感染或细菌感染的方法。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种组合物，该组合物包含式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其他疗法。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种组合物，该组合物包含式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其他疗法，诸如化学疗法、免疫疗法或放射疗法。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种疫苗佐剂，该疫苗佐剂包含式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐。
在又一个实施方案中，本发明提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包含式(I)、式(Ia)、式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及抗原或抗原组合物。
具体实施方式
式中使用的一般术语可如下定义；然而，所陈述的含义不应被解释为限制术语本身的范围。
术语“烷基”是指烷烃衍生的烃基，其在主链中仅包括碳和氢原子，不含不饱和度，具有一至六个碳原子，并且通过单键与分子的其余部分例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)等连接。除非有相反的陈述或叙述，否则本文所述或要求保护的所有烷基可以是直链或支链的、取代或未取代的。
如本文所用，术语“全卤代烷基”是指如上定义的烷基，其中所述烷基中的所有氢原子被卤素取代。全卤代烷基的示例为三氟甲基、五氟乙基等。
如本文所用，术语“芳环”是指单环芳烃环系。
如本文所用，“杂芳环”是指具有1-2个选自O、N或S的环杂原子的5-6元单环芳环系。
术语“环烷基”或“碳环”是指具有3-12个碳原子的非芳族单环或多环环系，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。除非有相反的陈述或叙述，否则本文所述或要求保护的所有环烷基可以是取代或未取代的。
术语“C3-C5单环环烷基”是指具有3-5个碳原子的取代或未取代的非芳族单环环系，诸如环丙基、环丁基、环戊基等。
如本文所用，术语“芳族碳环”是指芳族烃环系。示例包括苯环等。
如本文所用，术语“芳基”是指单价单环、双环或三环芳烃环系。芳基的示例包括苯基、萘基、蒽基、芴基、茚基、薁基等。
如本文所用，术语“杂芳基”是指具有1-4个选自O、N或S的环杂原子，其余环原子为碳(除非另有说明，否则具有适当的氢原子)的5-14元单环、双环或三环环系，其中该环系中至少一个环为芳环。
除非另有说明，否则术语“杂环”或“杂环基”是指具有3-15元环的取代或未取代的非芳族单环、双环、三环或桥环/稠环/螺环系，该环系由碳原子组成，并且具有一个或多个(例如2个或3个)独立地选自N、O、S、P(O)(OR4)、P(O)(R4a)或S(O)2的杂原子。连接点可以来自任何合适的碳或氮。
术语“氧代”是指连接到母体基团上的二价氧(＝O)。例如，氧代连接到碳形成羰基，氧代取代环己烷形成环己酮等。
术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指可通过低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子迁移互变异构体)包括通过质子迁移的互变，诸如酮-烯醇异构化。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。
术语“几何异构体”是指双键的E或Z几何异构体(例如顺式或反式)。
本文所述的通式和化合物的所有互变异构形式及其所有可能的几何异构体，包括但不限于式(s)、式(r)和式(t)，都旨在包括在本发明的范围内。
本发明化合物可具有一个或多个手性中心。每个手性中心的绝对立体化学可以是“R”或“S”。本发明化合物包括所有非对映体和对映体及它们的混合物。除非另有具体说明，否则对一种立体异构体的提及适用于任何可能的立体异构体。每当有立体异构组成未指明时，应当理解所有可能的立体异构体均包括在内。
术语“立体异构体”是指由相同原子通过相同的键连接而组成，但具有不可互变的不同三维结构的化合物。这些三维结构称为构型。如本文所用，术语“对映体”是指分子彼此为非重叠镜像的两种立体异构体。术语“手性中心”是指四个不同基团所连接的碳原子。如本文所用，术语“非对映异构体”是指不是对映体的立体异构体。术语“外消旋体”或“外消旋混合物”是指等份对映体的混合物。
术语状态、疾病、病症、病况或综合征的“治疗”包括：(a)预防或延迟该状态、疾病、病症、病况或综合征的临床症状在可能患有或易患该状态、疾病、病症、病况或综合征，但尚未经历或显示该状态、疾病、病症、病况或综合征的临床或亚临床症状的受试者中进展的出现；(b)抑制该状态、疾病、病症、病况或综合征，即，阻止或减少该疾病或其至少一种临床或亚临床症状的进展；(c)减轻疾病、病症或病状或其临床或亚临床症状中的至少一种临床或亚临床症状的严重性；和/或(d)缓解该疾病，即引起该状态、病症或病况或其临床或亚临床症状中的至少一种临床或亚临床症状的消退。
术语“受试者”包括哺乳动物，优选人和其他动物(诸如家畜；例如家庭宠物，包括猫和狗)。
“治疗有效量”是指当向有此需要的受试者施用时足以引起期望效果的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物，疾病及其严重性，待治疗受试者的年龄、体重、身体状况和反应性而变化。
本文公开的化合物及其互变异构形式、立体异构体、前药可例如通过在有机合成中熟知的，并且是本发明领域普通技术人员所熟悉的技术来制备。此外，本文所述的方法可实现本发明化合物的合成。然而，这些方法可能不是合成本发明所述化合物的唯一方式。此外，本文所述的各种合成步骤可以交替的顺序进行，以提供期望化合物。
在本发明的又一方面，提供了式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗STING激活有益的疾病或病况。
在本发明的又一方面，提供了式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或药物组合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗STING激活有益的疾病或病况的药物中的用途。
在本发明的又一方面，提供了一种治疗受治疗者中STING激活有益的疾病或病况的方法，该方法包括施用治疗有效量的式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐。
在又一方面，本发明提供了一种治疗有此需要的哺乳动物中选自癌症和感染性疾病的疾病或病况的方法，该方法包括向该哺乳动物施用治疗有效量的式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐。
在又一方面，本发明提供了一种治疗癌症诸如实体瘤、白血病和淋巴瘤的方法。
在又一方面，本发明提供了一种治疗感染性疾病诸如病毒感染或细菌感染的方法。可用本发明化合物治疗的实体瘤的示例包括但不限于乳腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠癌、结直肠癌、脑癌、肾癌、睾丸癌、尿道癌、直肠癌、输卵管癌、阴茎癌、阴道癌、胃癌、皮肤癌、黑色素瘤、肝癌、胃肠道间质瘤、尿道上皮癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、骨癌、口腔癌、卵巢癌、子宫癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、胆囊癌、膀胱癌、口咽癌、淋巴结癌、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤或软组织肉瘤、纤维肉瘤、软骨肉瘤、血管瘤、畸胎瘤、脂肪瘤、粘液瘤、纤维瘤、横纹肌瘤、畸胎瘤、胆管癌、尤因氏肉瘤。可用本发明化合物治疗的白血病的示例包括但不限于成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、急性骨髓性白血病、毛细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、套细胞白血病、急性巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、红白血病、浆细胞瘤、前髓细胞性白血病、慢性粒单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓纤维变性、慢性髓细胞性白血病、真性红细胞增多症、血小板增多症、慢性淋巴细胞性白血病、前淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、华氏巨球蛋白血症、淋巴结增生症、慢性中性粒细胞白血病、免疫母细胞大细胞白血病、浆细胞瘤和身体任何其他部位的白血病。可用本发明化合物治疗的淋巴瘤的示例包括但不限于霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成淋巴细胞性T细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、CNS淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、外周T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、原发性纵隔淋巴瘤、蕈样真菌病、小非分裂细胞淋巴瘤、成淋巴细胞性淋巴瘤、免疫母细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤和HIV相关(或AIDS相关)淋巴瘤。可用本发明化合物治疗的病毒感染的示例包括但不限于人类免疫缺陷病毒(HIV)，人乳头状瘤病毒(HPV)，丙型肝炎病毒(HCV)，乙型肝炎病毒(HBV)，流感病毒(正粘病毒科)，甲病毒，轮状病毒，仙台病毒，牛痘，呼吸道合胞病毒，拉沙病毒(沙粒病毒科)，狂犬病病毒(弹状病毒科)，西尼罗河病毒，登革热病毒，日本脑炎病毒和其他黄病毒科，RNA病毒，DNA病毒，属于甲型线形病毒科、星状病毒科、阿尔法四体病毒科、蜂窝状病毒科、非洲猪瘟病毒科、瓶状病毒科、腺病毒科、囊泡病毒科、乙型线形病毒科、雀麦花叶病毒科、杆菌状核糖核酸病毒科、毕科病毒科、杆状病毒科、长线形病毒科、杯状病毒科、四病毒科、棒状病毒科、覆盖噬菌体科、二顺反子病毒科、内源病毒科、丝状病毒科、球状病毒科、滴状病毒科、双生病毒科、线头病毒科、光滑噬菌体科、黄症病毒科、脂毛噬菌体科、海洋病毒科、海洋RNA病毒科、转座病毒科、软体动物疱疹病毒科、野田村病毒科、亚科病毒科、线头病毒科、矮化病毒科、微小病毒科、分体病毒科、小双节病毒科、副黏液病毒科、痘病毒科、潘多拉病毒科、多瘤病毒科、藻类DNA病毒科、乳头状瘤病毒科、多DNA病毒科、多瘤病毒科、复制酶置换四体病毒科、马铃薯Y病毒科、逆转录病毒科、长尾噬菌体科、球脂状病毒科、植物杆状病毒科、披膜病毒科、塔螺病毒科、复层病毒科的病毒。可用本发明化合物治疗的细菌感染的示例包括但不限于由属于布鲁氏菌属、梭菌属(Clostridium)、梭菌属(Clostrodium)、弯曲菌属、肠球菌属、弗朗西丝氏菌属、李斯特菌属、军团菌属、分枝杆菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、葡萄球菌属、耶尔森氏菌属的细菌引起的感染。在又一方面，本发明提供了一种组合物，该组合物包含式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其他疗法。
在又一方面，本发明提供了一种组合物，该组合物包含式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其他疗法，诸如化学疗法、免疫疗法或放射疗法。
化学疗法包括施用一种或多种其他化疗剂，该一种或多种其他化疗剂可与式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐组合使用。可组合使用的化疗剂包括拓扑异构酶II抑制剂、抗肿瘤抗生素、抗代谢物、类维生素A、抗病毒剂、醋酸阿比特龙、六甲蜜胺、脱水长春碱、澳瑞他汀、贝沙罗汀、比卡鲁胺、BMS 184476、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、博来霉素、N,N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-脯氨酸-叔丁酰胺、恶病质素、西马多丁、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、3',4'-二脱氢-4'-脱氧-8'-去甲长春碱、多西他赛、多西紫杉醇(doxetaxel)、环磷酰胺、卡铂、卡莫司汀、顺铂、念珠藻素、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素D、柔毛霉素、地西他滨、尾海兔素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羟基脲和羟基脲紫杉烷、异环磷酰胺、利阿唑、氯尼达明、环己亚硝脲(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥)、美法仑、羟乙基磺酸米伏布林、根霉素、sertenef、链脲菌素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉烷、尼鲁米特、奥那司酮、紫杉醇、松龙苯芥、甲基苄肼、RPR109881、磷酸雌莫司汀、它莫西芬、他索纳明、紫杉酚、维A酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛和长春氟宁。
免疫疗法包括施用一种或多种其他免疫刺激剂，该一种或多种其他免疫刺激剂可与式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐组合使用。可在本文组合使用的免疫刺激剂包括疫苗佐剂，诸如Toll样受体激动剂、T细胞检查点阻断剂、CTLA4、PD-1、PD-L1、TIM3、OX40、LAG3、B7-H3、GITR、4-1BB、ICOS、CD40和KIR抗体。CTLA-4和PD-1拮抗剂的示例包括但不限于伊匹单抗、曲美木单抗、纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、CT-011、AMP-224和MDX-1106。
在又一方面，本发明提供了一种疫苗佐剂，该疫苗佐剂包含式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐。
在又一方面，本发明提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包含式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，以及抗原或抗原组合物。
可与本文公开的式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物或其药学上可接受的盐组合使用的抗原和佐剂包括B7共刺激分子、白介素-2、干扰素-α、干扰素-γ、GM-CSF、CTLA-4拮抗剂、OX-40激动剂、CD40激动剂、沙格司亭、左旋咪唑、牛痘病毒、卡介苗(BCG)、脂质体、明矾、脱毒内毒素、矿物油、表面活性物质(诸如脂质卵磷脂、普朗尼克多元醇、聚阴离子、肽和油或烃乳液)。可加入佐剂诸如氢氧化铝或磷酸铝，以增加疫苗触发、增强或延长免疫应答的能力。单独或与所述组合物组合使用的其他材料也是潜在的佐剂，该其他材料诸如细胞因子、趋化因子和细菌核酸序列，如CpG、Toll样受体(TLR)9激动剂，以及TLR 2、TLR 4、TLR 5、TLR7、TLR 8、TLR 9的其他激动剂(包括脂蛋白、LPS、单磷酰脂A、脂磷壁酸、咪喹莫特、瑞喹莫德)，此外还有其他视黄酸诱导型基因I(RIG-I)激动剂，诸如聚I:C。
药物组合物可含有药学上可接受的载体、佐剂和赋形剂的制剂形式通过各种方式施用，包括非胃肠外施用、肠胃外施用、通过吸入喷雾施用、局部施用或直肠施用。在肿瘤内(直接进入肿瘤块)或肿瘤周围(在肿瘤块周围)施用本发明化合物。
一般制备方法
本文所述的通式化合物可通过本领域已知的技术制备。此外，本文所述的通式化合物可按照如方案1和方案2中所述的反应顺序制备。此外，在下列方案中，如果提及了具体的碱、酸、试剂、溶剂、偶联剂等，应当理解为也可使用本领域已知的其他碱、酸、试剂、溶剂、偶联剂等，并因此包括在本发明范围内。如本领域已知的可使用的反应条件(例如温度和/或反应持续时间)的变化也在本发明的范围内。除非另有说明，否则这些方案中所述的通式化合物的所有异构体也包括在本发明的范围内。
本文所述的方法可实现本发明化合物的合成。然而，这些方法可能不是合成本发明所述化合物的唯一方式。此外，本文所述的各种合成步骤可以交替的顺序进行，以提供期望化合物。
方案1
方案1示出了由式(2)化合物制备式(I-A)化合物的方法[其中环C、m、G1、G2、p和R2如上对式1所定义]。
在存在碱(诸如碳酸铯、碳酸钾)的情况下，使式(2)化合物与1-(氯甲基)-4-甲氧基苯在溶剂诸如(二甲基甲酰胺、乙腈、THF或丙酮)中反应，得到式(3)的化合物。
在存在碱(诸如DIPEA)的情况下，使在前一步骤中获得的式(3)化合物与式(10)化合物在溶剂(诸如乙醇、甲醇、THF或DMSO)中反应，得到式(4)化合物。
使式(4)化合物与连二亚硫酸钠在溶剂(诸如甲醇、乙醇或THF)中反应，得到式(5)化合物。通过使用EDC和碱(诸如三乙胺或二异丙胺)，使式(5)化合物与式(8)化合物在溶剂(诸如二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中偶联，得到式(6)化合物。
将在前一步骤中获得的式(6)化合物用酸(诸如三氟乙酸或盐酸)处理以使PMB基团脱保护，从而得到式(7)化合物。
在存在碱(诸如氢氧化钠、氢化钠、碳酸钾或碳酸铯)的情况下，使所得的式(7)化合物与式(9)化合物(其中L为卤素(氯/溴)或-OMs或-OTs)在溶剂(如四氢呋喃或二甲基甲酰胺)中，在约30℃-80℃或更高的温度下反应，得到式(I-A)化合物。
方案2
方案2示出了由式(11)化合物制备式(I-A)化合物的方法[其中环C、m、G1、G2、p和R2如上对式1所定义]。
根据WO2017/100594中所述的流程来制备式(11)化合物。在Mitsunobu条件下，在存在试剂(如DIAD或DEAD和TPP)的情况下，使式(11)化合物与式(9-A)化合物在溶剂(诸如二甲基甲酰胺、乙腈或THF)中反应，得到式(12)化合物。
另选地，在存在碱(诸如氢化钠、碳酸钾或碳酸铯)的情况下，使式(11)化合物与式(9)化合物(其中L为卤素(氯/溴)或-OMs或-OTs)在溶剂(如四氢呋喃或二甲基甲酰胺)中，在约30℃-80℃或更高的温度下反应，得到式(12)化合物。
在存在碱(诸如DIPEA)的情况下，使在前一步骤中获得的式(12)化合物与式(10)化合物在溶剂(诸如乙醇、甲醇、THF或DMSO)中反应，得到式(13)化合物。
使式(13)化合物与连二亚硫酸钠在溶剂(诸如甲醇、乙醇或THF)中反应，得到式(14)化合物。通过使用EDC和碱(诸如三乙胺或二异丙胺)，使式(14)化合物与式(8)化合物在溶剂(诸如二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中偶联，得到式(15)化合物。
将在前一步骤中获得的式(15)化合物用碱(诸如氢氧化锂或氢氧化钠)处理以水解，从而得到式(16)化合物。
使式(16)化合物与偶联剂(如TBTU或EDC和氯化铵)在溶剂(如四氢呋喃、二甲基甲酰胺)中反应，得到式(I-A)化合物。
方案3
方案3示出了由式(17)化合物制备式(I-A)化合物的方法[其中环C、m、G1、G2、p和R2如上对式1所定义]。
在Mitsunobu条件下，在存在试剂(如DIAD或DEAD和TPP)的情况下，使式(17)化合物与式(21)化合物在溶剂(诸如二甲基甲酰胺、乙腈或THF)中反应，得到式(18)化合物。
使式(18)化合物与HCl的二氧六环溶液在溶剂(诸如氯化溶剂或四氢呋喃)中反应以使甲氧基甲基(MOM)基团脱保护，然后在存在碱(诸如2,6-二甲基吡啶)的情况下用三氟甲磺酸酐进一步处理，得到式(19)化合物。
在存在碱(诸如三乙胺)的情况下，使式(19)化合物与环A在溶剂(如四氢呋喃或氯化溶剂)中反应，得到式(20)化合物。
可通过与方案2中所述将式(12)化合物转化为式(I-A)化合物的流程类似的流程，将式(20)化合物转化为式(I-A)化合物。
方案4
方案4示出了由式(3)化合物制备式(I-A)化合物的方法[其中环C、m、G1、G2、p和R2如上对式1所定义]。
在存在碱(诸如DIPEA)的情况下，使式(3)化合物与式(28)化合物在溶剂(诸如乙醇、甲醇、THF或DMSO)中反应，得到式(22)化合物。
使式(22)化合物与连二亚硫酸钠在溶剂(诸如甲醇、乙醇或THF)中反应，得到式(23)化合物。通过使用EDC和碱(诸如三乙胺或二异丙基胺)，使式(23)化合物与式(8)化合物在溶剂(如二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中偶联，得到式(24)化合物，然后使用HCl的二氧六环溶液进行Boc脱保护，得到式(25)化合物。
在存在碱(诸如DIPEA)的情况下，使在前一步骤中获得的式(25)化合物与式(3)化合物在溶剂(诸如乙醇、甲醇、THF或DMSO)中反应，得到式(26)化合物。
使式(26)化合物与连二亚硫酸钠在溶剂(诸如甲醇、乙醇或THF)中反应，得到式(27)化合物。通过使用EDC和碱(诸如三乙胺或二异丙胺)，使式(27)化合物与式(8)化合物在溶剂(诸如二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中偶联，得到式(6)化合物。
将在前一步骤中获得的式(6)化合物用酸(诸如三氟乙酸或盐酸)处理以使PMB基团脱保护，从而得到式(7)化合物。
在存在碱(诸如氢氧化钠、氢化钠、碳酸钾或碳酸铯)的情况下，使所得的式(7)化合物与式(9)化合物(其中L为卤素(氯/溴)或-OMs或-OTs)在溶剂(如四氢呋喃、二甲基甲酰胺)中，在约30℃-80℃或更高的温度下反应，得到式(I-A)化合物。
方案5
方案5示出了由式(I-B)化合物制备式(I-D)化合物的方法[其中环C、m、G2、p和R2如上对式1所定义]。
使式(I-B)化合物与HCl的甲醇溶液反应，得到式(I-C)化合物，然后用碱(如氢氧化锂或氢氧化钠)处理以水解，得到式(I-D)化合物。
缩略语：
DMF：二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
THF：四氢呋喃
CDI：1,1'-羰基二咪唑
EDC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
TBTU：2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯
HATU：1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸酯
DIPEA：二异丙基胺
NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮
TEA：三乙胺
KI：碘化钾
DCM：二氯甲烷
MeOH：甲醇
MOM：甲氧基甲基
Ms：甲磺酰基
Ts：4-甲基苯磺酰基
PMB：4-甲氧基苄基
DEAD：偶氮二甲酸二乙酯
DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯
TPP：三苯基膦
本发明代表性实施例中的一些实施例按照如上所述的一种或多种反应方案制备。
通过以下实施例进一步说明本发明，提供这些实施例仅是为了举例说明本发明，并不限制本发明的范围。下文列举的实施例说明了制备相关化合物的合成方法。某些修改和等效物对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且旨在包括在本发明的范围内。
本发明化合物根据ChemDraw Professional 16.0命名。中间物以及最终化合物的结构通过光谱数据得到确认。
实验
中间体的合成：
中间体1：
4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺的合成
步骤1：4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺的合成
在0℃下，向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸(按照WO2017/100594中报道的流程制备，20.0g，86mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.669mL，8.64mmol)的二氯甲烷(400mL)悬浮液中滴加草酰氯(8.32mL，95mmol)，并将反应混合物在40℃下搅拌30分钟。在起始原料消失后，将反应混合物真空浓缩，溶解在500mL二氯甲烷中，并冷却至0℃。滴加氢氧化铵(135mL，864mmol，25％水溶液)，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应物料减压浓缩。将所得固体过滤，用水洗涤并真空干燥，得到标题化合物(19.0g，95％收率)。
LCMS(ESI):m/z 230.1(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.06(d,J＝1.8Hz,1H),7.89(d,J＝1.9Hz,1H),7.79(s,1H),4.02(s,3H)。
步骤2：4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(中间体1)的合成
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(步骤1，18.5g，80mmol)与甲苯(4×10mL)共蒸发直至完全干燥，然后悬浮于二氯甲烷(250mL)中并在室温下搅拌。向反应中滴加三溴化硼(481mL，481mmol)的二氯甲烷溶液(1M)。在氮气保护下，将该浆液在40℃下搅拌60小时。通过1H NMR监测反应。反应完成后，减压除去挥发物直至完全干燥。将反应物料冷却至-78℃，并将湿冰缓慢加入反应混合物中(直至发烟停止)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将沉淀物过滤，用水洗涤，并在真空下彻底干燥，得到灰白色固体状标题化合物(16.0g，92％收率)。
LCMS(ESI):m/z 216.2(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.50(s,1H),8.16(s,1H),7.92(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(d,J＝2.0Hz,1H),7.63(s,1H)。
中间体2：
(1R,5S)-3-(1,3-二氯丙烷-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
步骤1：2-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)丙二酸二乙酯的合成
在室温下，向2-溴丙二酸二乙酯(5.0g，20.91mmol)的氯仿(50mL)搅拌溶液中加入8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(4.69g，31.4mmol)和TEA(14.58mL，105mmol)，将反应混合物在60℃下加热12小时，用TLC监测反应。将反应混合物浓缩，得到粗产物，将其通过combi flash(使用15％-20％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到标题化合物(3.5g，61.7％收率)。
LCMS(ESI):m/z 271.08(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.20(d,J＝2.6Hz,3H),4.15(m,4H),2.70(m,2H),2.61(m,2H),1.92–1.74(m,2H),1.74–1.64(m,2H),1.20(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤2：2-((1R,5S)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)丙烷-1,3-二醇的合成
在0℃下，将2-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)丙二酸二乙酯(步骤1产物，3.50g，12.90mmol)的THF(20mL)溶液加入氢化铝锂(2.448g，64.5mmol)的THF(20mL)溶液中，将所得溶液在25℃下搅拌5小时。滴加乙酸乙酯(25mL)和饱和NaCl溶液淬灭混合物。将所得固体通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩以得到粗产物，将其通过柱色谱(使用10％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到标题化合物(1.5g，62.1％收率)。
LCMS(ESI):m/z 188.14(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.16(m,2H),3.44(m,4H),2.69(m,2H),2.44(m,2H),2.36(m,1H),1.86–1.77(m,2H),1.72–1.61(m,2H)。
步骤3：(1R,5S)-3-(1,3-二氯丙烷-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(中间体2)的合成
在0℃下，向2-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)丙烷-1,3-二醇(步骤2产物，0.50g，2.67mmol)的THF(10mL)搅拌溶液中滴加亚硫酰氯(0.780mL，10.68mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。通过LCMS监测反应。
将反应混合物浓缩至干并用乙醚洗涤，得到盐。加入10％碳酸氢钠中和该盐，并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯浓缩得到游离碱，将其通过硅胶柱色谱(使用5％-10％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到标题化合物(0.20g，33.4％收率)。
LCMS(ESI):m/z 224.89(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.20(m,2H),3.78(m,2H),3.69(m,2H),2.91(q,J＝6.3Hz,1H),2.73(dd,J＝11.0,2.0Hz,2H),2.54(d,J＝1.9Hz,2H),1.90–1.77(m,2H),1.77–1.61(m,2H)。
中间体3：
(1R,5S)-3-(1,3-二氯丙烷-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷的合成
步骤1：1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸苄酯
在圆底烧瓶中，将3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸苄酯(20.0g，92mmol)、2-氟乙烷-1-醇(6.52g，102mmol)和三苯基膦(31.5g，120mmol)溶解在四氢呋喃(200mL)中，随后将氮杂二羧酸二异丙酯(23.38mL，120mmol)滴加到反应混合物中。将反应混合物在25℃下搅拌60分钟。通过TLC监测反应。反应完成后，加入水(50L)淬灭反应，并用乙酸乙酯(250mL×2)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物，将其通过combiflash色谱(20％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到白色固体状标题化合物(18g，74.2％收率)。
LCMS(ESI):m/z 262.96(M+H)+
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.47–7.32(m,5H),6.71(s,1H),5.33(s,2H),4.93–4.79(m,3H),4.71(t,J＝5.0Hz,1H),2.30(s,3H)。
步骤2：1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸
在圆底烧瓶中，将1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸苄酯(步骤1，17.5g，66.7mmol)溶解于四氢呋喃(50mL)中，随后滴加氢氧化锂(2.397g，100mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌15小时。通过TLC监测反应。将反应混合物减压浓缩，得到粘性固体，将其溶解在水中。将水溶液用乙醚(100mL)洗涤，然后分液，用1N HCl调节水层pH为约2。固体析出，搅拌15分钟，通过布氏漏斗过滤，并用水洗涤。将所得固体在真空下干燥，得到白色固体状标题化合物(10g，87％收率)。
LCMS(ESI):m/z 173.01(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.32(s,1H),6.64(s,1H),4.83–4.73(m,2H),4.73–4.63(m,2H),2.19(s,3H)。
步骤3：1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(中间体3)的合成
向1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(步骤2，14.0g，81mmol)的DCM(100mL)搅拌溶液中加入DMF(6.30μL，0.081mmol)和草酰氯(7.83ml，89mmol)。在添加过程中观察到起泡。搅拌1小时后，将反应混合物减压浓缩，粗产物(酰氯)继续进行下一反应。在另一RBF中，将硫氰酸钾(7.90g，81mmol)溶解在丙酮(10mL)中。将反应混合物在0℃-5℃冷却2小时。将上述中间体(酰氯)溶解在丙酮(10mL)中，并缓慢加入反应混合物中。添加完成后，将己烷(50mL)加入反应混合物中，并将反应混合物真空浓缩。相同的流程重复3次。浓缩后，加入己烷(50mL)并过滤固体化合物。将所得透明黄色滤液真空浓缩。将粗产物通过comb flash(乙酸乙酯的己烷溶液)纯化。用0％-5％乙酸乙酯洗脱期望产物(10g，58％收率)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.79(s,1H),4.86–4.73(m,2H),4.71–4.67(m,2H),2.31(s,3H)。
实施例1：(E)-8-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物1)
步骤1：4-氯-3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酰胺的合成
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(中间体1，15.0g，69.3mmol)的二甲基甲酰胺(75mL)溶液中加入碳酸铯(24.82g，76.0mmol)，并将混合物在室温下搅拌10分钟。在相同温度下，缓慢加入1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(11.39g，72.7mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时，通过TLC和LCMS监测反应。在剧烈搅拌下滴加水(300mL)，并将所得固体搅拌15分钟。将所得固体过滤，并用水(200mL)洗涤。将化合物与戊烷一起研磨，得到标题化合物(14g，60.0％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.04(m,2H),7.80(s,1H),7.48–7.40(m,2H),7.03–6.95(m,2H),5.29(s,2H),3.77(s,3H)。
步骤2：(E)-4,4'-(丁-2-烯-1,4-二基双(氮二基))双(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酰胺)的合成
向4-氯-3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酰胺(步骤1产物，14.0g，41.6mmol)的乙醇(100mL)悬浮液中加入(E)-丁-2-烯-1,4-二胺二盐酸盐(通过文献中已知的方法合成，3.31g，20.79mmol)和DIPEA(21.49g，166mmol)，并将混合物在密封管中在100℃下搅拌48小时。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物减压浓缩。将粗粘性固体与甲醇(25mL)一起搅拌15分钟，并将固体通过布氏漏斗过滤，用甲醇(5mL)洗涤，得到标题产物(14.1mg，49.4％收率)。
LCMS(ESI):m/z 687.28(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(d,J＝1.9Hz,3H),8.03(s,3H),7.77–7.65(m,4H),7.38–7.29(m,4H),6.94–6.84(m,4H),5.40(t,J＝3.0Hz,2H),5.02(s,4H),3.99(s,4H),3.73(s,6H)。
步骤3：(E)-4,4'-(丁-2-烯-1,4-二基双(氮二基))双(3-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯甲酰胺)的合成
在0℃下，向(E)-4,4'-(丁-2-烯-1,4-二基双(氮烷二基))双(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酰胺)(步骤2产物，14.0g，20.39mmol)的四氢呋喃(35mL)和甲醇(75mL)搅拌悬浮液中加入连二亚硫酸钠(35.5g固体的水(38mL)溶液，204mmol)。在相同温度下加入氢氧化铵(79.0mL，510mmol)。将反应混合物升温至25℃，并在25℃下搅拌15小时。通过LCMS监测反应进程。在真空下从反应混合物中除去有机溶剂。将粗产物溶解在二氯甲烷(250mL)的15％甲醇溶液中。固体化合物析出，搅拌15分钟。将固体滤出，并将滤液有机层减压浓缩。将化合物与甲苯(100mL)共蒸发两次以除去痕量的水，得到标题化合物(6.2g，48.5％收率)。
LCMS(ESI):m/z 627.46(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,1H),7.47–7.31(m,5H),7.21(m,3H),7.01–6.80(m,9H),5.61(t,J＝6.7Hz,2H),4.97(d,J＝9.6Hz,4H),4.65(s,1H),3.81–3.73(m,3H),3.72(s,6H),3.48(d,J＝3.5Hz,4H)。
步骤4：(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)的合成
将(E)-4,4'-(丁-2-烯-1,4-二基双(氮烷二基))双(3-氨基-5-((4-甲氧基苄基)氧基)苯甲酰胺)(步骤3产物，6.0g，9.57mmol)溶解在50mL DMF中，将溶液冷却至0℃，并向其中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(通过文献中报道的方法合成，4.67g，23.93mmol)的DMF(5mL)溶液。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基丙-1-胺盐酸盐(5.51g，28.7mmol)加入反应混合物中，随后加入二异丙基乙胺(10.02mL，57.4mmol)。将反应混合物升至室温并搅拌过夜。通过LCMS监测反应进程，并在反应完成后，将反应混合物减压浓缩，并加入水。将所得固体沉淀过滤得到产物(6.2g，68.2％收率)。
LCMS(ESI):m/z 949.82(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.92(s,2H),7.99(s,2H),7.74(s,2H),7.41(m,4H),7.34–7.00(m,8H),6.67(d,J＝8.4Hz,2H),6.52(s,2H),5.48(s,2H),4.80(m,6H),4.53(d,J＝7.5Hz,4H),3.61(s,4H),2.24–2.00(m,6H),1.27(m,8H)。
步骤5：(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)的合成
在室温下，向(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)(步骤4产物，5.80g，6.11mmol)的二氯甲烷(50mL)搅拌溶液中加入三氟乙酸(50mL，306mmol)。将反应混合物搅拌1小时，并在通过TLC判断反应完成后，将挥发物浓缩，并向残余物中加入水使粗产物析出。将固体过滤，用水洗涤，并通过与甲苯共沸蒸馏干燥。将干燥的粗产物依次与乙醚、二氯甲烷和乙腈一起研磨来纯化，然后过滤，得到产物(4.0g，92％收率)。
LCMS(ESI):m/z 709.32(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,2H),10.45(m,2H),7.82(s,2H),7.44(m,3H),7.18(m,3H),6.50(s,2H),5.95(s,2H),4.95(s,4H),4.51(d,J＝7.0Hz,4H),2.09(m,6H),1.24(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤6：(E)-8-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物1)的合成
向(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)(步骤5产物，200mg，0.282mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中加入3-(1,3-二氯丙-2-基)-8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(中间体2，95mg，0.423mmol)、氢氧化钠(45.1mg，1.129mmol)和碘化钾(23.42mg，0.141mmol)。然后将反应混合物在60℃下加热10小时，通过LCMS监测反应。将反应混合物浓缩至干，用乙腈洗涤，并通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(18mg，7.04％收率)。LCMS(ESI):m/z 860.68(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(brs,2H),8.00(brs,2H),7.69(d,J＝1.2Hz,2H),7.58(d,J＝1.4Hz,2H),7.41(brs,2H),6.52(s,2H),5.49(s,2H),5.02–4.76(m,4H),4.59(dd,J＝10.4,4.2Hz,2H),4.53(q,J＝7.1Hz,4H),4.35–4.25(m,2H),4.19(dd,J＝10.4,6.4Hz,2H),3.08(s,2H),2.92–2.83(m,2H),2.76–2.65(m,2H),2.08–2.02(m,7H),1.82–1.70(m,2H),1.27(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例2：(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物2)
步骤1：5,5'-((2-(甲氧基甲氧基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)的合成
在室温下，向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸乙酯(32.5g，132.3mmol)、2-(甲氧基甲氧基)丙烷-1,3-二醇(9.0g，66.2mmol)、三苯基膦(69.4g，264.6mmol)的THF(200mL)冷却溶液中滴加DIAD(51.5mL，264.6mmol)，并将反应混合物在60℃下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。将反应混合物浓缩得到粗产物，向其中加入IPA(200mL)，并在室温下搅拌30分钟，然后在-78℃下搅拌30分钟。将固体过滤，充分干燥，得到标题化合物(23.0g，59％收率)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.08(d,J＝1.7Hz,2H),7.84(d,J＝1.8Hz,2H),4.91(s,2H),4.58–4.40(m,9H),3.48(s,3H),1.44(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤2：5,5'-((2-羟基丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)的合成
向5,5'-((2-(甲氧基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)(步骤1，23.0g，38.9mmol)的DCM(150mL)和乙醇(150mL)冷却溶液中加入HCl的二氧六环溶液(100mL，388.9mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。通过TLC监测反应进程。将反应混合物浓缩并溶解在DCM(50mL)中，用8％碳酸氢钠溶液和水洗涤，将有机相用硫酸钠干燥并减压蒸馏，得到标题化合物(21.0g，97％收率)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.10(d,J＝1.7Hz,2H),7.85(d,J＝1.8Hz,2H),4.61(p,J＝5.1Hz,1H),4.50–4.40(m,6H),3.72(s,3H),1.44(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤3：5,5'-((2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)的合成
向5,5'-((2-羟基丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)(步骤2，21.0g，38.4mmol)的DCM(200mL)冷却溶液中滴加2,6-二甲基吡啶(17.9mL，153.5mmol)和三氟甲磺酸酐(16.2g，57.6mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。通过TLC监测反应进程。将反应混合物用2N HCl水溶液淬灭，用DCM萃取，用水洗涤，用硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到标题化合物(24.0g，92％收率)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.15(d,J＝1.7Hz,2H),7.83(d,J＝1.7Hz,2H),5.64(p,J＝4.8Hz,1H),4.70–4.66(m,3H),4.47(q,J＝7.1Hz,4H),3.73(s,1H),1.45(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤4：5,5'-((2-((1R,5S)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)的合成
向(1R,5S)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(10.1g，67.7mmol)的THF(30mL)冷却溶液中加入TEA(18.9ml，135.4mmol)并在0℃下搅拌30分钟，然后加入5,5'-((2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)(步骤3，23.0g，33.9mmol)，在25℃下搅拌12小时。通过TLC监测反应进程。将反应混合物浓缩，并通过柱色谱纯化，得到标题化合物(18.0g，83％收率)。
LCMS(ESI):m/z 641.47[M+1]
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.07(d,J＝1.7Hz,2H),7.94–7.78(m,2H),4.52–
4.29(m,8H),3.77(d,J＝10.5Hz,2H),3.60(d,J＝10.1Hz,2H),3.50–3.33(m,2H),3.33–3.21(m,1H),2.11–1.93(m,4H),1.44(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤5：(E)-7-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,13-二硝基-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂-[4,9]二氮杂环戊二烯-3,11-二羧酸二乙酯的合成
在1升高压釜中，向5,5'-((2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二乙酯)(步骤4，17.9g，27.9mmol)的乙醇(300mL)溶液中加入(E)-丁-2-烯-1,4-二胺二盐酸盐(5.7g，36.2mmol)和DIPEA(38.9mL，22.29mmol)，并将反应混合物在110℃下搅拌24小时。通过TLC监测反应进程。将反应混合物冷却至室温，将所得固体过滤并干燥，得到标题化合物(15.5g，85％收率)。
LCMS(ESI):m/z 656.22[M+1]
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.57(d,J＝1.9Hz,2H),8.46(m,2H),7.64(d,J＝1.9Hz,2H),5.76(s,2H),4.47(dd,J＝16.4,6.8Hz,2H),4.39(q,J＝7.1Hz,4H),4.26(dd,J＝9.7,5.1Hz,2H),4.06(dd,J＝16.0,7.0Hz,2H),3.88–3.78(m,4H),3.63(d,J＝10.5Hz,2H),3.46–3.40(m,2H),3.16(t,J＝5.3Hz,1H),2.04(s,4H),1.41(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤6：(E)-1,13-二氨基-7-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊二烯-3,11-二羧酸二乙酯的合成
在0℃下，向(E)-7-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,13-二硝基-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊二烯-3,11-二羧酸二乙酯(步骤5，15.0g，22.9mmol)的THF(30mL)和乙醇(30mL)搅拌悬浮液中加入连二亚硫酸钠(39.8g，228.8mmol)(5.0mL的水溶液)。在相同温度下加入氢氧化铵(71.3mL，457.6mmol)。将反应混合物升至0℃-25℃，并在25℃下搅拌3小时。通过LCMS监测反应进程。将固体滤掉，并在真空下除去有机溶剂。向反应混合物中加入水，用DCM(4×50mL)萃取。将有机层用硫酸钠干燥并浓缩，得到粗残余物。将固体用乙醚洗涤，得到标题化合物(13.0g，95％收率)。
LCMS(ESI):m/z 596.08[M+1]
步骤7：(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸二乙酯
在0℃下，向(E)-1,13-二氨基-7-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊二烯-3,11-二羧酸二乙酯(步骤6，14.0g，23.5mmol)的DMF(200mL)搅拌溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(8.3g，42.3mmol)的DMF溶液(1mL)，并搅拌30分钟，随后在0℃下加入EDC(18.0g，94.0mmol)和TEA(26.2mL，188.0mmol)，并搅拌18小时。通过LCMS监测反应。反应完成后，将混合物减压浓缩，加入水，将固体过滤并干燥，得到粗产物，将其通过柱色谱(5％MeOH/DCM)纯化，得到标题化合物(14.0g，65％收率)。
LCMS(ESI):m/z 918.07[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.91(s,2H),7.83(d,J＝1.3Hz,2H),7.61(d,J＝1.4Hz,2H),6.50(s,2H),5.39(s,2H),4.95(d,J＝16.0Hz,2H),4.81(d,J＝16.4Hz,2H),4.58(dd,J＝10.7,4.4Hz,2H),4.55–4.46(m,4H),4.38–4.28(m,4H),3.99–3.90(m,2H),3.69(d,J＝10.1Hz,2H),3.58(d,J＝4.2Hz,2H),3.51(d,J＝10.2Hz,2H),2.93(t,J＝5.1Hz,1H),2.04(s,6H),1.99–1.90(m,2H),1.87–1.77(m,2H),1.33(t,J＝7.1Hz,6H),1.25(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤8：(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸
在室温下，向(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸二乙酯(步骤7，14.0g，15.3mmol)的乙醇(70mL)和THF(70mL)搅拌溶液中加入氢氧化锂水合物(6.4g，152.5mmol)的水(10mL)溶液，并在50℃下搅拌16小时。通过LCMS监测反应，并在反应完成后，将反应混合物减压浓缩，加入水，并用1N HCl将pH调节至酸性。固体析出，将其过滤并干燥，得到标题化合物(12.0g，91％收率)。
LCMS(ESI):m/z 862.05[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.94–7.81(m,2H),7.70(s,2H),5.55(s,2H),5.20–4.97(m,4H),4.86(t,J＝16.4Hz,2H),4.64–4.39(m,8H),3.81–3.63(m,5H),2.41–2.32(m,2H),2.15(d,J＝8.4Hz,2H),2.06(s,6H),1.26(t,J＝7.1Hz,6H)。
步骤9：(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物2)的合成
将(E)-8-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸(步骤8，10.0g，11.6mmol)溶解在DMSO(80mL)中。向该搅拌溶液中滴加HOBT(8.9g，58.0mmol)、EDC(11.1g，58.0mmol)和DIPEA(16.2mL，92.8mmol)，随后在0℃下加入氯化铵(21.7g，406.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过LCMS监测反应。反应完成后，将反应混合物倒入冷水中，固体析出，将其过滤并用水洗涤。将固体充分干燥得到粗产物。将粗产物通过柱色谱(DCM:MeOH，20％)纯化，并将所得固体用乙腈洗涤并过滤，得到标题化合物(6.0g，60％收率)。
LCMS(ESI):m/z 860.68(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,2H),8.01(s,2H),7.73(s,2H),7.63(s,2H),7.38(s,2H),6.50(s,2H),5.40(s,2H),4.98(d,J＝16.4Hz,2H),4.79(d,J＝16.5Hz,2H),4.60(dd,J＝10.7,4.6Hz,2H),4.50(q,J＝7.2Hz,4H),3.97(dd,J＝10.8,5.5Hz,2H),3.68(d,J＝10.1Hz,2H),3.60(s,2H),3.53(d,J＝10.0Hz,2H),2.96–2.84(m,1H),2.04(s,6H),1.95(s,2H),1.84–1.74(m,2H),1.28–1.21(m,6H)。
实施例3：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物3)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和4-(1,3-二氯丙烷-2-基)吗啉，并将产物转化为相应的盐酸盐，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 834.67(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.24(brs,2H),8.12(brs,2H),7.95(s,2H),7.81(d,J＝1.2Hz,2H),7.51(brs,2H),6.52(s,2H),5.29(s,2H),5.16(d,J＝9.0Hz,2H),5.00–4.77(m,4H),4.49(q,J＝7.1Hz,4H),4.40(dd,J＝11.8,6.0Hz,2H),4.14–4.02(m,5H),3.73–3.50(m,4H),2.03(s,6H),1.24(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例4：(E)-8-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物4)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和1-(1,3-二氯丙烷-2-基)-4,4-二氟哌啶，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 868.67(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,2H),8.32(s,1H),8.01(s,2H),7.67(d,J＝2.7Hz,4H),7.43(s,2H),6.55(s,2H),5.58(s,2H),4.90(s,4H),4.66–4.46(m,7H),4.26(dd,J＝10.6,6.5Hz,2H),2.94(d,J＝5.5Hz,4H),2.08(m,10H),1.27(m,6H)。
实施例5：(E)-8-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物5)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和(2S,6R)-4-(1,3-二氯丙烷-2-基)-2,6-二甲基吗啉，并将产物转化为相应的盐酸盐，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 862.80(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14(s,2H),7.97(s,2H),7.80(d,J＝1.1Hz,2H),7.49(s,2H),6.52(s,2H),4.92(s,3H),4.50(t,J＝7.0Hz,4H),4.39–4.28(m,4H),3.80–3.68(m,4H),3.38(qd,J＝7.1,5.5Hz,6H),3.17(s,3H),2.03(s,6H),1.22(t,J＝7.0Hz,6H),1.09(d,J＝7.0Hz,6H)。
实施例6：(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物6)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和(S)-1-(1,3-二氯丙-2-基)-3-甲氧基吡咯烷，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 848.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,2H),8.02(s,2H),7.73(s,2H),7.64(s,2H),7.39(s,2H),6.52(s,2H),5.44(s,2H),4.98-4.79(m,4H),4.64(d,J＝10.6Hz,3H),4.51(d,J＝7.8Hz,4H),4.13(s,2H),3.95(s,1H),3.23(s,3H),3.07(d,J＝11.4Hz,2H),2.85(m,2H),2.05(s,6H),1.76(s,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例7：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(哌啶-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物7)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和1-(1,3-二氯丙烷-2-基)哌啶，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 832.52(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,2H),8.00(s,2H),7.70(s,2H),7.62(d,J＝5.2Hz,2H),7.39(s,2H),6.54(s,2H),5.54(s,2H),4.90(m,4H),4.62(dd,J＝10.5,4.3Hz,2H),4.53(q,J＝7.4Hz,3H),4.20(dd,J＝10.5,6.4Hz,2H),2.78(t,J＝5.2Hz,4H),2.07(s,6H),1.60(s,4H),1.47(s,2H),1.27(t,J＝6.8Hz,6H)。
实施例8：(E)-8-(氮杂环丁烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物8)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和1-(1,3-二氯丙烷-2-基)氮杂环丁烷盐酸盐，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 804.67(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(brs,2H),7.98(d,J＝1.6Hz,2H),7.66(d,J＝1.8Hz,2H),7.35(m,4H),6.45(m,2H),6.12(m,2H),5.12(m,1H),5.05–4.88(m,3H),4.65–4.34(m,6H),4.28(t,J＝7.8Hz,1H),3.65(t,J＝9.9Hz,1H),2.08(m,2H),1.89(d,J＝8.0Hz,6H),1.80–1.69(m,1H),1.55(d,J＝6.7Hz,1H),1.34–1.18(m,6H)。
实施例9：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1-甲基哌啶-4-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物9)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和4-(1,3-二氯丙烷-2-基)-1-甲基哌啶，来制备标题化合物的甲酸盐。
LCMS(ESI):m/z 846.68(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,3H),8.48(s,1H),8.60–8.42(m,2H),8.02–7.95(m,1H),7.81(s,1H),7.66(s,1H),7.40(d,J＝7.4Hz,3H),7.33(s,1H),7.25(s,1H),6.56(s,1H),6.44(s,1H),5.82(m,2H),4.92(m,4H),4.52(m,4H),4.05(d,J＝7.6Hz,2H),2.89(s,4H),2.55–2.54(s,3H),2.10(d,J＝21.4Hz,6H),2.00(s,2H),1.84(d,J＝7.5Hz,1H),1.59(s,1H),1.38–1.15(m,8H)。
实施例10：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(哌嗪-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物10)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和4-(1,3-二氯丙烷-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，随后进行Boc去保护，来制备标题化合物的二盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 833.80(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07(s,2H),7.79(d,J＝18.4Hz,4H),7.45(s,2H),6.53(s,2H),5.43(s,1H),4.91(s,6H),4.51(d,J＝7.4Hz,5H),3.46–3.30(m,9H),2.04(s,6H),1.27(d,J＝7.0Hz,6H)。
实施例11：(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物11)
步骤1：(S)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙二酸二乙酯的合成
通过使用中间体2的步骤1中公开的流程，由2-溴丙二酸二乙酯和(S)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷盐酸盐来合成(S)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙二酸二乙酯。
LCMS(ESI):m/z 360.41(M+H)+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.49–4.38(m,1H),4.26(q,J＝7.0Hz,4H),3.26(dd,J＝9.4,6.3Hz,1H),3.03–2.82(m,2H),2.63(dd,J＝9.4,4.8Hz,1H),2.19–2.01(m,1H),1.81–1.65(m,2H),1.31(t,6H),0.89(s,9H),0.06(s,6H)。
步骤2：(S)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二醇的合成
通过使用中间体2的步骤2中公开的流程，由(S)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙二酸二乙酯(步骤1产物)来合成(S)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二醇。
LCMS(ESI):m/z 276.21(M+H)+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.42(m,1H),3.94–3.82(m,1H),3.81–3.73(m,4H),3.19(dd,J＝10.6,5.3Hz,1H),3.01–2.95(m,1H),2.85–2.73(m,2H),2.14–2.01(m,1H),1.91–1.74(m,1H),0.91(s,9H),0.10(s,6H)。
步骤3：5,5'-((2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))(S)-双(4-氯-3-硝基苯甲酸甲酯)的合成
在0℃-5℃下，向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(通过文献中报道的方法合成，3.87g，16.70mmol)、(S)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二醇(步骤2产物，2.3g，8.35mmol)和三苯基膦(8.76g，33.4mmol)的THF(10mL)搅拌溶液中滴加DIAD(6.49mL，33.4mmol)。滴加完毕后，将反应混合物在50℃下搅拌8小时。反应完成后，通过TLC监测反应，将挥发物减压浓缩，并将粗产物通过柱色谱纯化，得到灰白色固体状标题产物(2.3g，40％)。
LCMS(ESI):m/z 702.58(M+H)+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13–8.03(m,2H),7.89–7.76(m,2H),4.48(m,5H),3.99(s,6H),3.67–3.43(m,1H),3.16(m,3H),2.79(s,1H),2.21–1.89(m,2H),0.89(s,9H),0.08(s,6H)。
步骤4：(S,E)-7-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,13-二硝基-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊二烯酮-3,11-二羧酸二甲酯的合成
向5,5'-((2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))(S)-双(4-氯-3-硝基苯甲酸二甲酯)(步骤3，1.2g，1.71mmol)的乙醇(30mL)搅拌溶液中加入(E)-丁-2-烯-1,4-二胺二盐酸盐(0.27g，1.71mmol)和DIPEA(1.79mL，10.25mmol)。在密封管中，将反应混合物在120℃下搅拌16小时。通过LCMS和TLC监测反应进程。反应完成后，将反应物料减压浓缩，并将粗产物通过柱色谱纯化，得到红色固体状标题产物(0.76g，62％)。
LCMS(ESI):m/z 716.77(M+H)+
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.56(d,J＝2.1Hz,2H),8.45(t,J＝6.6Hz,2H),7.62(d,J＝2.0Hz,2H),5.79(d,J＝1.5Hz,2H),4.56–4.44(m,3H),4.37(q,J＝7.1Hz,3H),4.11–4.01(m,3H),3.91(s,6H),3.89–3.85(m,2H),1.81–1.75(m,2H),1.45–1.38(m,3H),0.92(s,9H),0.11(d,J＝1.3Hz,6H)。
步骤5：(S,E)-1,13-二氨基-7-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊二烯酮-3,11-二羧酸二甲酯的合成
向(S,E)-7-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,13-二硝基-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊二烯酮-3,11-二羧酸二甲酯(步骤4，0.750g，1.048mmol)的甲醇:THF(15mL:15mL)的溶液中加入连二亚硫酸钠(2.159g，10.48mmol)的水(10mL)溶液，随后在0℃下加入氢氧化铵(4.08mL，26.2mmol)。通过TLC和LCMS监测反应。将反应物料加入水(20mL)中，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物，将其通过柱色谱纯化，得到标题产物(0.6g，87％)。
LCMS(ESI):m/z 656.70(M+H)+
步骤6：(S,E)-8-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸二甲酯
在0℃下，向(S,E)-1,13-二氨基-7-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-7,8,14,15,18,19-六氢-6H-二苯并[b,j][1,12]二氧杂[4,9]二氮杂环戊胺-3,11-二羧酸酯(步骤5，0.65g，0.99mmol)的DMF(20mL)搅拌溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(0.35g，1.78mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，随后加入EDC(0.57g，2.97mmol)和Et3N(0.69ml，4.96mmol)，并将反应混合物升至室温反应过夜。反应完成后，将混合物减压浓缩，并加入水，使白色固体状产物析出，将其过滤并干燥。(800mg，83％)。
LCMS(ESI):m/z 977.58(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.94(brs,2H),7.83(d,J＝5.8Hz,2H),7.62(d,J＝4.9Hz,2H),6.53(s,2H),5.49(d,J＝10.3Hz,2H),4.92(m,4H),4.71–4.47(m,6H),4.43(s,2H),4.33(q,J＝7.0Hz,2H),4.21(m,2H),3.87(s,6H),3.13(m,1H),2.99(s,1H),2.88(d,J＝10.6Hz,1H),2.78–2.65(m,2H),2.05(s,6H),1.66(s,1H),1.26(t,J＝6.9Hz,6H),0.88(s,9H),0.08(d,J＝1.8Hz,6H)。
步骤7：(S,E)-8-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸
向(S,E)-8-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸二甲酯(步骤6，800mg，0.82mmol)的THF、甲醇和水(1:1:1)混合物(15mL)溶液中加入氢氧化锂(19.58mg，0.82mmol)，并在室温下搅拌12小时。通过LCMS监测反应。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到残余物，将其用水稀释。加入1N HCl溶液直至pH为5，并将所得白色沉淀过滤并干燥，得到标题化合物(640mg，84％收率)。
LCMS(ESI):m/z 950.82(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.96(brs,4H),7.86(d,J＝8.2Hz,2H),7.83–7.62(m,2H),6.54(s,2H),5.47(s,2H),5.12–4.76(m,8H),4.51(d,J＝7.6Hz,8H),4.30–3.98(m,1H),2.80–2.63(m,2H),2.17(d,J＝2.6Hz,1H),2.05(s,6H),1.29–1.25(m,6H),0.87(s,9H),0.10(s,6H)。
步骤8：(S,E)-8-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺
将(S,E)-8-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二羧酸(步骤7，650mg，0.684mmol)溶解在DMF(50mL)中。加入氯化铵(1.1g，20.52mmol)、TBTU(661mg，2.052mmol)，随后加入DIPEA(0.717mL，4.10mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过LCMS监测反应，并在反应完成后，将混合物浓缩并倒入碎冰中。得到白色固体状二酰胺，将其过滤并干燥(600mg，92％收率)。
LCMS(ESI):m/z 949.07(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.95(brs,2H),7.78(brs,2H),7.32(brs,2H),7.19(s,2H),7.06(s,2H),6.52(s,2H),5.34(d,J＝16.4Hz,2H),5.11–4.76(m,8H),4.50(d,J＝7.2Hz,6H),3.71–3.50(m,2H),3.13(dd,J＝7.3,4.2Hz,2H),2.16(s,2H),2.04(s,6H),1.30–1.20(m,6H),0.87(s,9H),0.10(s,6H)。
步骤9：(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺盐酸盐(化合物11)的合成
在室温下，将(S,E)-8-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(步骤8，600mg，0.633mmol)在3MHCl的甲醇溶液中搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，减压除去挥发物得到粗产物，将其与乙醚一起研磨，得到标题化合物，将其通过制备型HPLC进一步纯化。(150mg，28％收率)。
LCMS(ESI):m/z 834.80(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 8.19–8.00(m,2H),7.89–7.76(m,4H),7.48(s,2H),6.54(d,J＝2.0Hz,2H),5.34(d,J＝3.9Hz,2H),4.94(m,6H),4.50(m,10H),4.06–3.37(m,2H),2.55(d,J＝2.3Hz,2H),2.04(m,6H),1.26–1.23(m,6H)。
实施例12：(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物12)
按照实施例11概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和(R)-2-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二醇，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 834.80(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19–8.00(m,2H),7.89–7.76(m,4H),7.48(s,2H),6.54(d,J＝2.0Hz,2H),5.34(d,J＝3.9Hz,2H),4.94(m,6H),4.50(m,10H),4.06–3.37(m,2H),2.55(d,J＝2.3Hz,2H),2.04(m,6H),1.26–1.23(m,6H)。
实施例13：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(2-吗啉代乙基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物13)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和4-(4-氯-3-(氯甲基)丁基)吗啉，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 862.51(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.90(brs,2H),10.57(brs,1H),7.98(brs,1H),7.88(brs,1H),7.67(s,1H),7.44(brs,1H),7.38(s,1H),7.33(s,1H),7.29(brs,1H),7.19(s,1H),6.55(s,1H),6.48(s,1H),5.87–5.74(m,2H),5.05–4.80(m,4H),4.63–4.42(m,4H),4.05(d,J＝5.4Hz,4H),3.87–3.31(m,6H),2.68–2.60(m,4H),2.35–2.25(m,3H),2.13(s,3H),2.09(s,3H),1.29(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例14：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物14)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和3-(1,3-二氯丙烷-2-基)-1-甲基氮杂环丁烷，来制备标题化合物的甲酸盐。
LCMS(ESI):m/z 832.52(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,3H),8.27(s,1H),8.16–7.91(m,1H),7.73(s,1H),7.72–7.63(m,1H),7.61(s,1H),7.49–7.25(m,4H),6.53(s,2H),5.39(s,2H),5.05–4.81(m,4H),4.65–4.44(m,4H),4.35(m,2H),4.14(dd,J＝9.7,6.7Hz,2H),3.57(t,J＝7.3Hz,2H),2.99(s,2H),2.55(s,3H),2.47–2.39(m,2H),2.25–1.98(m,8H),1.32–1.14(m,6H)。
实施例15：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物15)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和4-(3-氯-2-(氯甲基)丙基)-1-甲基哌啶，来制备标题化合物的甲酸盐。
LCMS(ESI):m/z 860.53(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.92(brs,2H),8.31(s,1H),8.02(brs,2H),7.73(d,J＝1.2Hz,2H),7.59(s,2H),7.40(brs,2H),6.53(s,2H),5.39(s,2H),4.98–4.79(m,4H),4.51(q,J＝7.1Hz,4H),4.37(m,2H),4.16(m,2H),2.79(m,2H),2.46(m,2H),2.17(s,3H),2.06(s,6H),1.94(m,2H),1.75(d,J＝12.4Hz,2H),1.50(t,J＝7.0Hz,2H),1.25–1.23(m,8H)。
实施例16：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(吗啉代甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物16)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和4-(3-氯-2-(氯甲基)丙基)吗啉，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 848.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.91(brs,2H),8.24(s,1H),8.01(brs,2H),7.70(d,J＝1.2Hz,2H),7.62(s,2H),7.39(brs,2H),6.53(s,2H),5.39(s,2H),4.88(s,4H),4.61–4.38(m,6H),4.23(t,J＝4Hz,2H),3.68(t,J＝4.5Hz,4H),2.06(s,8H),1.28–1.22(m,6H)。
实施例17：(E)-15-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物17)
步骤1：(E)-(4-((4-氨基甲酰基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
在250mL密封管中，向4-氯-3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酰胺(实施例1的步骤1产物，24.00g，71.3mmol)的乙醇(100mL)溶液中加入(E)-(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(19.91g，107mmol)，随后加入二异丙基乙胺(62.2mL，356mmol)，并在120℃下加热16小时。等分试样的LCMS显示起始原料酰胺未反应，因此加入另外0.6eq的(E)-(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯，并继续反应16小时。通过TLC监测反应进程。将混合物冷却，将红色固体过滤并用乙醇洗涤。将化合物通过combi flash色谱(甲醇的DCM溶液)纯化。将期望产物在4％-5％甲醇的二氯甲烷溶液中洗脱，得到标题化合物(14.0g，40.4％收率)。
LCMS(ESI):m/z 487.36(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝2.0Hz,1H),8.02(s,1H),7.82–7.67(m,2H),7.48–7.40(m,2H),7.34(s,1H),7.03–6.89(m,3H),5.55–5.37(m,2H),5.12(s,2H),4.06(t,J＝5.6Hz,2H),3.77(s,3H),3.45(t,J＝5.3Hz,2H),1.36(s,9H)。
步骤2：(E)-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
在圆底烧瓶中，在0℃下，向(E)-(4-((4-氨基甲酰基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1，14.00g，28.8mmol)的甲醇(500mL)搅拌溶液中加入连二亚硫酸钠(29.7g，144mmol)的甲醇:THF(50mL，1:1)溶液，随后加入氢氧化铵(53.8mL，345mmol)。将反应混合物升至室温反应30分钟。通过TLC监测反应。将混合物用水(100mL)和乙酸乙酯(300mL)稀释。将有机层分离，并将水层用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到棕色固体状标题化合物(11.5g，88％收率)。
LCMS(ESI):m/z 457.50(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.40(m,2H),7.06–6.80(m,5H),5.67–5.41(m,2H),5.01(d,J＝8.2Hz,2H),4.70(s,1H),3.77(s,3H),3.53(s,3H),3.34(s,2H),1.37(s,9H)。
步骤3：(E)-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
在圆底烧瓶中，在0℃下，向(E)-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(步骤2，11g，24.09mmol)的二甲基甲酰胺(100mL)搅拌溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(4.70g，24.09mmol)的二甲基甲酰胺(1mL)溶液，并搅拌30分钟。在0℃下，向该反应混合物中加入EDC(6.93g，36.1mmol)和三乙胺(10.08ml，72.3mmol)，并搅拌18小时。搅拌完毕后，将混合物减压浓缩。加入水，将所得固体过滤并干燥，得到标题化合物(11.5g，18.62mmol，77％收率)。
LCMS(ESI):m/z 618.46(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),8.00(s,1H),7.67(d,J＝1.2Hz,1H),7.53(d,J＝1.4Hz,1H),7.50–7.46(m,2H),7.38(d,J＝7.5Hz,1H),7.08–6.87(m,5H),6.61(s,1H),5.67(d,J＝15.3Hz,1H),5.38(m,1H),5.22(s,2H),4.85(d,J＝6.8Hz,2H),4.60(q,J＝7.0Hz,2H),3.78(d,J＝8.1Hz,5H),3.44(m,2H),2.17(s,4H),1.32(s,9H)。
步骤4：(E)-1-(4-氨基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺盐酸盐
在圆底烧瓶中，将(E)-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(步骤3，11.45g，18.54mmol)溶解在二氯甲烷(150.00mL)中，并向其中加入甲醇(约15mL)。向溶液中缓慢加入盐酸(4M的二氧六环溶液)(46.3mL，185mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。搅拌完毕后，将反应混合物浓缩，并将所得固体与乙醚一起研磨，得到标题化合物(10.0g，97％收率)。
LCMS(ESI):m/z 518.36(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(d,J＝1.2Hz,2H),7.59(d,J＝1.4Hz,2H),7.56–7.45(m,3H),7.43–7.33(m,2H),7.09–6.99(m,3H),6.71(m,1H),6.02–5.92(m,1H),5.56–5.43(m,1H),5.27(s,2H),4.94(d,J＝5.6Hz,2H),4.60(q,J＝6.8Hz,2H),3.77(m,4H),3.43–3.31(m,2H),2.19(d,J＝4.4Hz,2H),1.36(m,3H)。
步骤5：(E)-1-(4-((4-氨基甲酰基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺
在圆底烧瓶中，将(E)-1-(4-氨基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺盐酸盐(9.95g，17.96mmol)和4-氯-3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酰胺(步骤4，6.05g，17.96mmol)混悬于异丙醇(100mL)中，加入二异丙基乙胺(25.09mL，144mmol)，并在密封管中将混合物在115℃下加热36小时。通过LCMS监测反应进程。反应完成(观察到约10％的起始原料)后，将反应混合物减压浓缩，并通过柱色谱(乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，以除去起始化合物。然后将期望化合物用约10％-15％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(10.5g，71.5％收率)。
LCMS(ESI):m/z 818.61(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(br s,2H),8.05(s,1H),7.34(m,3H),7.17(d,J＝8.6Hz,1H),6.89–6.81(m,1H),6.76(d,J＝8.7Hz,1H),4.92–4.72(m,2H),4.55(q,J＝7.2Hz,2H),4.00(s,2H),3.77–3.68(m,3H),3.59(m,8H),3.35(m,8H),3.12(m,6H),2.16(m,2H)。
步骤6：(E)-1-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺
将(E)-1-(4-((4-氨基甲酰基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(步骤7，10g，12.23mmol)溶解在甲醇(50mL)中。将溶液冷却至0℃，向其中加入连二亚硫酸钠(12.60g，61.1mmol)的水(25mL)溶液，随后加入28％氢氧化铵的水溶液(22.85mL，147mmol)。将反应混合物升至室温并搅拌2小时，之后TLC显示反应完成。然后将挥发物在旋转蒸发仪上浓缩，粗产物析出。将所得固体与20％MeOH-DCM一起搅拌，然后过滤，得到产物(7.5g，78％收率)。
LCMS(ESI):m/z 788.73(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(s,2H),7.65(m,3H),7.51(t,J＝1.6Hz,2H),7.43–7.35(m,4H),7.21(m,2H),6.99(m,2H),6.94–6.86(m,4H),6.85–6.76(m,2H),6.61(dq,J＝8.4,4.1Hz,1H),5.71(m,1H),5.19–5.04(m,3H),4.87–4.76(m,4H),4.70–4.47(m,4H),3.53(m,5H),2.23–2.10(m,4H),1.32–1.27(m,4H)。
步骤7：(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺
将(E)-1-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(4.5g，5.71mmol)溶解在DMF(50mL)中，将溶液冷却至0℃，并向其中加入1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(中间体3，1.22g，5.71mmol)的DMF(5mL)溶液。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基丙-1-胺盐酸盐(1.64g，8.57mmol)加入反应混合物中，随后加入三乙胺(2.39mL，17.13mmol)。将反应混合物升至室温并搅拌过夜。通过LCMS监测反应进程，并在反应完成后，将反应混合物减压浓缩，并加入水。将所得固体沉淀过滤得到产物(2.3g，41.6％收率)。
LCMS(ESI):m/z 967.70(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.91(s,2H),7.98(s,2H),7.74(s,2H),7.40(m,4H),7.14–6.97(m,3H),6.82–6.64(m,4H),6.55(m,2H),5.48(s,2H),4.99–4.73(m,10H),4.70–4.45(m,3H),3.61(s,6H),3.33(s,4H),2.12(d,J＝5.6Hz,6H),1.35–1.23(m,4H)。
步骤8：(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺
将(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((4-甲氧基苄基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(来自步骤9的产物，2.2g，2.28mmol)溶解在DCM(50mL)中，加入三氟乙酸(5.19g，45.5mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程，并在反应完成后，将反应混合物减压浓缩，并加入乙醚，使固体状产物析出，将其过滤并用醚洗涤(1.6g，97％收率)。
LCMS(ESI):m/z 727.53(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,2H),7.91–7.74(m,2H),7.50–7.41(m,3H),7.23(s,2H),7.17–7.08(m,2H),6.53(m,2H),5.95(m,2H),4.96(s,4H),4.92–4.72(m,4H),4.66(t,J＝5.1Hz,1H),4.51(q,J＝7.1Hz,2H),2.11(m,6H),1.25(t,J＝7.1Hz,4H)。
步骤9：(E)-15-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺甲酸盐(化合物17)
按照实施例1的步骤6概述的流程，使用(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(步骤8产物)和4-(1,3-二氯丙烷-2-基)吗啉，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 852.5(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(s,2H),7.77–7.71(m,2H),7.66(s,2H),7.41(s,2H),6.57(d,J＝21.9Hz,2H),5.53(s,2H),4.99–4.86(m,4H),4.86–4.74(m,2H),4.72–4.59(m,3H),4.53(q,J＝7.1Hz,2H),4.21(dd,J＝10.4,6.2Hz,2H),3.76–3.62(m,4H),3.15(q,J＝5.4Hz,1H),2.83(q,J＝6.1,4.7Hz,4H),2.09–2.04(m,6H),1.28–1.22(m,3H)。
实施例18：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物18)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和1-(3-氯-2-(氯甲基)丙基)-4-甲基哌嗪二盐酸盐，来制备标题化合物的二盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 861.68(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(brs,2H),7.95(brs,2H),7.77(s,2H),7.46(brs,2H),6.57-6.55(s,2H),5.42(s,2H),4.92(s,6H),4.51(q,J＝7.1Hz,6H),4.38–4.36(m,2H),2.90–2.88(s,3H),2.60–2.53(m,2H),2.50(s,3H),2.06(s,6H),1.55–1.53(m,1H),1.26–1.23(m,6H)。
实施例19：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1H-咪唑-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物19)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和1-(1,3-二氯丙烷-2-基)-1H-咪唑，来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 815.67(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(s,2H),7.81(s,1H),7.68(s,1H),7.50–7.39(m,4H),7.22(s,1H),7.14(s,1H),6.99(s,1H),6.47(s,2H),5.75–5.58(m,2H),5.35(s,1H),5.12(d,J＝9.8Hz,3H),4.94–4.82(m,2H),4.69–4.61(m,2H),4.56–4.40(m,5H),2.09(s,6H),1.25–1.17(m,6H)。
实施例20：(33R,35R,E)-12,62-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-11H,61H-2,5-二氧杂-1,6(7,1)-二苯并[d]咪唑-3(3,5)-吡咯烷并环癸烷-8-烯-15,65-二甲酰胺(化合物20)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和(2R,4R)-4-(甲苯磺酰氧基)-2-((甲苯磺酰氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，随后将Boc基团脱保护并转化为其盐，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 789.91(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.14(s,1H),8.13(brs,2H),7.76(s,1H),7.74(s,1H),7.62(brs,1H),7.47–7.40(m,3H),6.59–6.57(m,2H),6.00(s,1H),5.81(s,1H),5.58(s,1H),5.26–5.07(m,2H),4.90(s,2H),4.61–4.51(m,6H),4.32–4.22(m,1H),3.94–3.84(m,1H),2.98–2.87(m,1H),2.06(s,3H),2.01(s,3H),1.29(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例21：(33R,35R,E)-12,62-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-31-甲基-11H,61H-2,5-二氧杂-1,6(7,1)-二苯并[d]咪唑-3(3,5)-吡咯烷并环十氢烷-8-烯-15,65-二甲酰胺(化合物21)
向(33S,35R,E)-12,62-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-11H,61H-2,5-二氧杂-1,6(7,1)-二苯并[d]咪唑-3(3,5)-吡咯烷环十氢-8-烯-15,65-二甲酰胺(0.015g，0.019mmol)[实施例20]的MeOH-DCM(1:2，3mL)搅拌溶液中加入甲醛(0.035g，0.38mmol)，并在25℃下搅拌2小时，之后加入三乙酰氧基硼氢化钠(8.05mg，0.038mmol)，并在25℃下搅拌1小时。通过LCMS监测反应，并在反应完成后，将挥发物减压浓缩，并加入水。将析出的固体过滤并干燥，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，并转化为盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 804.6(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,2H),7.76(m,3H),7.45(s,3H),6.59(s,2H),6.16–5.99(m,1H),5.99–5.81(m,1H),5.78–5.56(m,1H),5.17–4.79(m,4H),4.66–4.48(m,6H),3.10(s,3H),2.07(s,3H),2.03(s,3H),1.32–1.27(m,6H)。
实施例22：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(4-羟基哌啶-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物22)
按照实施例11概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二醇，随后将TBS基团脱保护并转化为其盐，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 848.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.25(s,1H),8.14(s,2H),7.95(d,J＝6.8Hz,2H),7.82–7.76(m,2H),7.49(s,2H),6.52(s,2H),5.43–5.23(m,2H),5.13(d,J＝11.2Hz,2H),4.92-4.87(m,4H),4.50-4.43(m,4H),4.45–4.31(m,2H),3.68–3.63(m,2H),3.57–3.43(m,2H),2.40-2.48(m,4H),2.03(s,6H),1.25(t,J＝6.9Hz,6H)。
实施例23：(E)-8-(4-氨基哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物23)
按照实施例11概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和(1-(1,3-二羟基丙-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯，随后将Boc基团脱保护并转化为其盐，来制备标题化合物的二盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 847.30(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.85(s,2H),8.41–8.11(m,6H),7.82(d,J＝9.4Hz,2H),7.47(s,2H),6.52(s,2H),5.26(s,2H),4.91(s,4H),4.49(q,J＝7.1Hz,4H),4.38(d,J＝7.7Hz,2H),4.08(m,2H),3.91–3.52(m,6H),2.19(m,4H),2.03(s,6H),1.23(m,6H)。
实施例24：(S,E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基磷酸二氢盐(化合物24)
步骤1：(S,E)-(1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基)磷酸二叔丁酯的合成
在25℃下，向(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物11，150mg，0.180mmol)的DMF(2mL)中加入1H-四唑(315mg，4.50mmol)和二叔丁基二异丙基亚磷酰胺(998mg，3.60mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。通过LCMS监测反应进程。在起始原料完全消耗后，在室温下加入H2O2(30％水溶液，1.5mL，4.50mmol)并搅拌30分钟，之后将反应混合物倒入含有碳酸氢钠和硫代硫酸钠的水溶液(10mL)中。产物析出，将其过滤并通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(20mg，11％收率)。
LCMS(ESI):m/z 1026.84(M+H)+
步骤2：(S,E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基磷酸二氢盐的合成
在室温下，将从前一步骤中获得的(S,E)(1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基)磷酸二叔丁酯(20mg，0.019mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)和4N HCl的二氧六环溶液(0.236mL，0.945mmol)中并搅拌2小时。通过LCMS监测反应进程。脱保护完成后，将挥发物减压浓缩，得到固体，将其与乙醚一起研磨，得到标题化合物的盐酸盐(15mg，80％收率)。
LCMS(ESI):m/z 913.32(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 8.16(s,2H),7.81(d,J＝5.8Hz,4H),7.46(s,2H),6.53(s,2H),5.33(d,J＝10.2Hz,3H),5.04–4.84(m,6H),4.57–4.33(m,8H),3.41–3.31(m,3H),2.46-2.40(m,2H),2.04(s,6H),1.27–1.23(m,6H)。
实施例25：(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)哌啶-4-基磷酸二氢盐(化合物25)
按照实施例24概述的流程，使用(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(4-羟基哌啶-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物22)，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 928.32(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,2H),11.50(s,1H),8.11(s,2H),7.90(d,J＝26.8Hz,2H),7.79(d,J＝4.3Hz,2H),7.49(s,2H),6.52(s,2H),5.36–5.25(m,2H),5.19–5.06(m,2H),4.97–4.87(m,3H),4.63–4.23(m,11H),3.60(s,2H),2.28–2.18(m,2H),2.03(s,6H),1.27–1.22(m,6H)。
实施例26：(E)-8-(3-氰基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物26)
步骤1：1-(1,3-二氯丙烷-2-基)吡咯烷-3-腈的合成
将1,3-二氯丙-2-酮(2.62g，20.60mmol)和吡咯烷-3-腈(1.8g，18.72mmol)的THF(30mL)混合物在室温下搅拌2小时，之后加入三乙酰氧基硼氢化钠(5.16g，24.34mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，加入水将反应混合物淬灭，并用DCM萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到粗产物，将其通过快速柱色谱纯化，得到产物。
LCMS(ESI):m/z 207.01(M+H)+
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ3.88–3.78(m,2H),3.78–3.69(m,2H),3.32–3.19(m,1H),3.13–3.02(m,1H),3.02–2.91(m,3H),2.90–2.81(m,1H),2.36–2.23(m,1H),2.22–2.13(m,1H)。
步骤2：5,5'-((2-(3-氰基吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二甲酯)的合成
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(2.24g，9.66mmol)和1-(1,3-二氯丙烷-2-基)吡咯烷-3-腈(1.00g，4.83mmol)溶解在乙腈(50mL)中。加入DIPEA(5.06mL，29.0mmol)和KI(0.802g，4.83mmol)，并将反应混合物在80℃下搅拌12小时。然后将反应物料减压浓缩，并通过柱色谱纯化，得到5,5'-((2-(3-氰基吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二甲酯)(1.3g，45.1％收率)。
LCMS(ESI):m/z 596.83(M+H)+
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.10–8.06(m,2H),7.85–7.80(m,2H),4.55–4.44(m,4H),4.00(s,6H),3.70–3.65(m,1H),3.37–3.28(m,1H),3.25–3.19(m,1H),3.14–3.03(m,3H),2.40–2.19(m,2H)。
步骤3：按照实施例11的步骤4至步骤8中概述的流程，将从前一步骤获得的5,5'-((2-(3-氰基吡咯烷-1-基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸二甲酯)转化为(E)-8-(3-氰基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺盐酸盐(化合物26)
LCMS(ESI):m/z 843.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,2H),7.85(s,2H),7.80(d,J＝1.4Hz,2H),7.49(s,2H),6.54(s,2H),5.11–4.73(m,6H),4.56–4.42(m,6H),4.35-4.21(m,8H),2.48–2.44(m,2H),2.04(s,6H),1.26–1.23(m,6H)。
实施例27：(E)-8-(3-氨基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物27)
按照实施例26概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和(1-(1,3-二氯丙烷-2-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯，随后将Boc基团脱保护并转化为其盐，来制备标题化合物的二盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 833.30(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.85(s,2H),8.41–8.11(m,6H),7.82(m,2H),7.47(s,2H),6.52(s,2H),5.26(s,2H),4.91(s,4H),4.49(q,J＝7.1Hz,4H),4.38(d,J＝7.7Hz,2H),4.08(m,2H),3.91–3.52(m,6H),2.19(m,4H),2.03(s,6H),1.23(q,J＝8.8,7.8Hz,6H)。
实施例28：(R,E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基磷酸二氢盐(化合物28)
按照实施例24概述的流程，使用(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物12)，来制备标题化合物的盐酸盐。LCMS(ESI):m/z 913.19(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,2H),8.14(m,2H),7.81(d,J＝6.7Hz,4H),7.47(s,2H),6.53(s,2H),5.33(d,J＝10.8Hz,2H),4.96(m,6H),4.50(q,J＝7.0Hz,5H),4.28-4.20(m,5H),2.59–2.54(m,4H),2.04(s,6H),1.24(d,J＝1.6Hz,6H)。
实施例29：(E)-8-(4-氰基哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物29)
按照实施例26概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和1-(1,3-二氯丙烷-2-基)哌啶-4-甲腈，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 857.05(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00(s,2H),7.63(d,J＝28.0Hz,4H),7.37(s,2H),6.52(s,2H),5.51(s,2H),4.90(m,4H),4.54(m,6H),4.20(s,2H),3.19(s,1H),2.92(m,4H),2.76(m,2H),2.07(s,6H),1.97(s,2H),1.88–1.74(m,2H),1.25(d,J＝8.3Hz,6H)。
实施例30：(E)-8-(氮杂环丁烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物30)
按照实施例11概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和3-(1,3-二羟基丙-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯，随后将Boc基团脱保护并转化为其盐，来制备标题化合物的盐酸盐。
LC-MS(ESI):m/z 804.29(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,1H),9.07(s,1H),8.09(s,2H),7.75(d,J＝1.2Hz,2H),7.68(s,2H),7.43(s,2H),6.54(s,2H),5.42(s,2H),4.91(s,4H),4.51(q,J＝7.1Hz,4H),4.43(m,2H),4.23-4.05(m,6H),3.18-3.06(m,1H),2.18(d,J＝7.1Hz,1H),2.05(s,6H),1.25(t,J＝6.9Hz,6H)。
实施例31：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(哌啶-4-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物31)
按照实施例11概述的流程，使用4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯和4-(1,3-二羟基丙-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，随后将Boc基团脱保护并转化为其盐，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 832.17(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,1H),8.71(m,1H),8.07(s,2H),7.73(d,J＝1.2Hz,2H),7.65(d,J＝1.4Hz,3H),7.42(s,2H),6.54(s,2H),5.44(s,2H),4.92(m,4H),4.51(q,J＝7.3Hz,6H),4.23-4.12(m,2H),3.37(d,J＝7.0Hz,2H),2.96-2.86(m,2H),2.25-2.12(m,2H),2.06(s,8H),1.81(m,2H),1.25(t,J＝7.0Hz,6H)。
实施例32：(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-甲酸(化合物32)
步骤1：(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-甲酸甲酯的合成
将(E)-8-(3-氰基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(50mg，0.06mmol)[化合物26]溶解在MeOH(5mL)中，向其中加入4N HCl的二氧六环溶液(1.48mL，5.93mmol)，并在室温下搅拌4小时。通过LCMS监测反应，并在转化为酯后，将反应混合物减压浓缩，并用乙醚洗涤，得到标题化合物(40mg，77％收率)。
LCMS(ESI):m/z 876.18(M+H)+
步骤2：(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-甲酸(化合物32)
将(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-甲酸甲酯盐酸盐(步骤1，30mg，0.033mmol)溶解在MeOH、THF和水(1:1:1)的混合物(6mL)中。加入氢氧化锂水合物(6.90mg，0.164mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌15小时。通过LCMS监测反应，并在完全水解后，将反应混合物减压浓缩，并加入水。加入2N HCl将混合物的pH调节至酸性，并将析出的固体过滤并干燥，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到标题产物(10mg，34％收率)。
LCMS(ESI):m/z 862.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(brs,1H),11.55(brs,1H),11.24(brs,1H),8.06(brs,2H),7.80(d,J＝2.8Hz,4H),7.49(brs,2H),6.54(s,2H),5.33(s,2H),5.07–4.80(m,6H),4.61–4.35(m,6H),4.27–4.13(m,1H),4.13–3.99(m,1H),3.95–3.82(m,2H),3.45–3.28(m,2H),2.04(s,6H),1.25(t,J＝7.6Hz,6H)。
实施例33：(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)哌啶-4-甲酸(化合物33)
/>
按照实施例32概述的流程，由(E)-8-(4-氰基哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物29)来制备标题化合物。
LCMS(ESI):m/z 876.31(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90(brs,2H),7.49(d,J＝1.2Hz,2H),7.35(s,2H),7.11(brs,2H),6.38(s,2H),5.33(s,2H),5.00(m,2H),4.83(d,J＝15.7Hz,2H),4.53(d,J＝7.2Hz,6H),4.05–3.99(m,4H),3.00(d,J＝1.9Hz,2H),2.06(s,6H),1.85–1.74(m,2H),1.64–1.56(m,2H),1.22–1.15(m,6H)。
实施例34：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物34)
按照实施例21概述的还原胺化流程，使用(E)-8-(氮杂环丁烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物30)的反应产物，并通过制备型HPLC纯化粗产物，来制备标题化合物的盐酸盐。
LCMS(ESI):m/z 818.17(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.90(brs,2H),8.02(brs,2H),7.73(d,J＝1.3Hz,2H),7.56(d,J＝1.4Hz,2H),7.40(s,2H),6.53(s,2H),5.41(s,2H),4.89(s,4H),4.51(q,J＝7.1Hz,4H),4.32(m,2H),4.14(m,2H),3.60(t,J＝7.3Hz,2H),3.21(t,J＝7.3Hz,2H),2.33(s,3H),2.06(s,6H),1.27–1.23(m,6H)。
实施例35：(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物35)
按照实施例2概述的流程，使用步骤4中的5,5'-((2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)和(R)-3-甲氧基吡咯烷，来制备标题化合物。
LC-MS(ESI):m/z 848.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,2H),8.04(s,2H),7.75(s,2H),7.64(s,2H),7.39(s,2H),6.52(s,2H),5.48(s,2H),4.98-4.79(m,4H),4.64(d,J＝10.6Hz,3H),4.56(d,J＝7.8Hz,4H),4.13(s,2H),3.96(s,1H),3.23(s,3H),3.09(m,2H),2.85(m,2H),2.05(s,6H),1.76(s,2H),1.31(m,6H)。
实施例36：(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(吡啶-2-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺(化合物36)
按照实施例1概述的流程，使用(E)-1,1'-(丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺)和2-(吡啶-2-基)丙烷-1,3-二基双(4-甲基苯磺酸酯)，来制备标题化合物。
LC-MS(ESI):m/z 826.18(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 13.00-12.70(br s,1H),10.44(s,1H),8.59(m,1H),8.02(s,1H),7.94–7.76(m,3H),7.71–7.62(m,2H),7.48(d,J＝1.3Hz,1H),7.46–7.40(m,2H),7.38(s,1H),7.23(s,1H),7.14(d,J＝1.5Hz,1H),6.48(s,1H),6.46(s,1H),5.92(s,1H),5.72(t,J＝3.2Hz,2H),5.57(s,1H),5.20(s,2H),4.90–4.83(m,2H),4.74(s,2H),4.51–4.42(m,4H),3.38(d,J＝5.7Hz,1H),2.09(s,3H),2.08(s,3H),1.22(m,6H)。
生物测定
THP1细胞系中人STING信号传导的刺激
使用基于人THP1-BlueTMISGSEAP的报告细胞系(Invivogen)来测试化合物的STING激活潜力。简而言之，将96孔板中的TTHP1-Blue ISG细胞(100,000细胞/孔)用不同浓度的测试化合物和参考化合物处理，并在37℃、5％CO2下温育18-20小时。还设置了未处理的对照细胞。温育完成后，使用QuantiBlueTM底物试剂(Invivogen)检测细胞上清液的SEAP(分泌型胚胎碱性磷酸酶)活性。通过使用PheraStar/Tecan酶标仪测量620nm波长处的吸光度，来定量呈蓝色产物的形成。在GraphPad Prism6中，将每个数据点的重复读数的平均值相对于测试化合物或参考化合物的浓度进行作图，以计算EC50值。相对于未受刺激的细胞对照组，估计在不同数据点SEAP诱导的倍数或发光的增加。
化合物1、2、3、5、6、11、12、19、26和35显示EC50值范围为1nM-10nM。
化合物4、9、13、16、17、20、22和36显示EC50值范围为11nM-100nM。
响应于STING激动剂的小鼠或人全血中细胞因子分泌的定量
测试化合物诱导小鼠或人全血中细胞因子(特别是IFNβ)分泌的能力。使用肝素作为抗凝剂从C57BL/6小鼠中采集小鼠血液。将人血液收集在含有肝素钠的抗凝管中。用含有2×青霉素-链霉素溶液的无血清RPMI培养基以1:3的比例(四倍)稀释小鼠或人血液。将稀释的全血(150μL)接种在U形底平板中，并加入在RPMI培养基中制备的50μL试验化合物，用移液管混合两次，随后将平板在37℃下温育4小时(小鼠)和5小时(人)。加入最终浓度为3μM的测试化合物。温育期后，将样品以2500rpm离心5分钟，收集上清液并转移到V型底平板中，并立即在-80℃下储存。将样品进行处理，以便通过ELISA使用市售试剂盒分别测量小鼠IFNβ(VeriKine小鼠IFNβELISA，PBL assay science，目录号42400-2)或人IFNβ(VeriKine人IFNβELISA，PBL assay science，目录号41410-2)来定量IFNβ。IFNβ水平以pg/mL表示。
在小鼠和人全血测定中，化合物1、2和3显示IFNβ分泌范围为250pg/mL-900pg/mL。
来自荷CT-26肿瘤的BALB/c小鼠的血清样品中的细胞因子分泌的定量
向荷CT-26肿瘤的动物施用剂量为0.5mg/kg的测试化合物，剂量-体积为5mL/kg。在指定的时间点(3.5小时)收集血清样品，并在-80℃下冷冻直至进一步评估。在使用市售试剂盒估计IFNβ(VeriKine小鼠IFNβELISA，PBL assay science，目录号42400-2)之前，用稀释缓冲液适当稀释小鼠血清样品。原始数据值用稀释因子校正，最后以pg/mL表示。
化合物1和化合物2分别显示IFNβ分泌为4344pg/mL和28305pg/mL。
静脉内施用化合物对CT26同种异体BALB/c小鼠模型中肿瘤体积的影响
5-8周龄的健康雌性BALB/c小鼠，由研究动物机构(RAF)提供。将这些小鼠饲养在动物实验室的独立通风笼(IVC)中，并在细胞接种前适应不少于5天。所有实验活动都在生物安全柜内进行以确保无菌。在无菌条件下，通过使用配有26G1/2英寸无菌针头的1mL一次性注射器，将含10万个CT26单细胞的悬浮液接种于BALB/c小鼠中，来获得同种异体移植瘤模型。每只小鼠在右胁腹区皮下接种DMEM培养基中的100μL CT26细胞悬浮液。细胞接种完成后，将小鼠随机分成不同的组，在包括溶媒对照组的各个试验组中，肿瘤体积的平均值和变化值(S.E.M.)大致相等。
当肿瘤变得明显时，用游标卡尺测量肿瘤大小。肿瘤体积(T.V.)使用下式计算：
肿瘤体积(mm3)＝(L×W2)/2
其中，L为肿瘤长度，W为肿瘤宽度
在治疗第1天，即肿瘤细胞接种完成后，根据肿瘤体积选择小鼠，并将小鼠随机分成期望数量的组，平均值和变化值大致相等。在第1、4和8天给药方案中，所有研究组通过静脉内途径，通过侧尾静脉以5mL/kg的剂量体积进行治疗。
每周两次用游标卡尺测量肿瘤大小，并每天记录小鼠的体重。
肿瘤生长抑制百分比(％TGI)使用下式计算：
％TGI＝[1-(Tf-Ti)/(Cf-Ci)]×100
其中，Tf和Ti分别是最终和初始测试肿瘤体积，Cf和Ci分别是最终和初始对照平均肿瘤体积。
肿瘤消退百分比(％TR)使用下式计算：
％TR＝[(初始T.V.-最终T.V.)/(初始T.V.)]×100
其中，T.V.为肿瘤体积
当化合物1、2和3分别以0.75mpk、0.375mpk和1.5mpk给药时，在CT-26异位同种异体移植物BALB/c小鼠模型中，所有动物在第21天均显示＞80％的肿瘤消退。

Claims (12)

1.一种化合物，其立体异构体、其药学上可接受的盐，其中，所述化合物具有式(Ia)结构：
其中，
R2独立地选自氢、任选取代的C1-C6烷基；
环A选自下组：
m选自0或1；
n选自0、1或2；
当“烷基”被取代时，所述烷基被1-4个独立地选自卤素、C1-C6烷基、全卤代C1-C6烷基、环烷基、-N(R4)2和-OR4的取代基取代；其中，所述环烷基为具有3-12个碳原子的非芳族单环或多环环系；和
每个R4独立地选自氢、C1-C6烷基和环烷基，且所述环烷基为具有3-12个碳原子的非芳族单环或多环环系。
2.根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、其药学上可接受的盐，其中，R2为乙基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、其药学上可接受的盐，其中，n为0。
4.根据权利要求1所述的化合物，其立体异构体、其药学上可接受的盐，其中，R2为C1-C6烷基；n为0、1或2。
5.一种化合物，其立体异构体、其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
(E)-8-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(哌啶-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(氮杂环丁烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1-甲基哌啶-4-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(哌嗪-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(2-吗啉代乙基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(吗啉代甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-15-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1H-咪唑-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(4-羟基哌啶-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(4-氨基哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(S,E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基磷酸二氢盐；
(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)哌啶-4-基磷酸二氢盐；
(E)-8-(3-氰基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(3-氨基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(R,E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-基磷酸二氢盐；
(E)-8-(4-氰基哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(氮杂环丁烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(哌啶-4-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)吡咯烷-3-甲酸；
(E)-1-(4,12-二氨基甲酰基-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-8-基)哌啶-4-甲酸；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；和
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(吡啶-2-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺。
6.一种化合物，其立体异构体、其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
(E)-8-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1-甲基哌啶-4-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(S,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-羟基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(2-吗啉代乙基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(吗啉代甲基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-15-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-吗啉代-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环戊烷并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(1H-咪唑-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(4-羟基哌啶-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(E)-8-(3-氰基吡咯烷-1-基)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；
(R,E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺；和
(E)-1,15-双(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8-(吡啶-2-基)-8,9,16,19-四氢-7H-6,10-二氧杂-2,14,15a,19a-四氮杂环十五并[3,2,1-cd:8,9,10-c'd']二茚-4,12-二甲酰胺。
7.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
8.根据权利要求1至6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗STING激活有益的疾病或病况的药物中的用途，其中所述疾病或病症为癌症或感染性疾病。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病症为癌症，且所述癌症选自脑癌、睾丸癌、尿道癌、直肠癌、输卵管癌、阴茎癌、阴道癌、胃癌、皮肤癌、肝癌、胃肠道间质瘤、尿道上皮癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、骨癌、口腔癌、卵巢癌、子宫癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、胆囊癌、肾癌、膀胱癌、口咽癌、淋巴结癌、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤或软组织肉瘤、纤维肉瘤、软骨肉瘤、血管瘤、脂肪瘤、粘液瘤、纤维瘤、横纹肌瘤、畸胎瘤、胆管癌、尤因氏肉瘤、骨髓瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成淋巴细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、CNS淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、原发性纵隔淋巴瘤、蕈样真菌病、小非分裂细胞淋巴瘤、成淋巴细胞性淋巴瘤、免疫母细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、HIV相关或AIDS相关淋巴瘤、慢性髓细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、成淋巴细胞性T细胞白血病、急性骨髓性白血病、毛细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、套细胞白血病、急性巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、红白血病、前髓细胞性白血病、慢性粒单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓纤维变性、真性红细胞增多症、血小板增多症、慢性淋巴细胞性白血病、前淋巴细胞性白血病、华氏巨球蛋白血症、淋巴结增生症、免疫母细胞大细胞白血病和浆细胞瘤。
10.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病症为感染性疾病，且所述感染性疾病选自HIV、HPV、HCV、HBV、甲病毒、轮状病毒或流感感染。
11.根据权利要求1至6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备疫苗佐剂中的用途。
12.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1至6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及抗原或抗原组合物。
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