CN113621593B - 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用 - Google Patents
来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113621593B CN113621593B CN202110884834.3A CN202110884834A CN113621593B CN 113621593 B CN113621593 B CN 113621593B CN 202110884834 A CN202110884834 A CN 202110884834A CN 113621593 B CN113621593 B CN 113621593B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- leu
- gly
- ala
- seq
- glu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了两条来自古柯Erythroxylum novogranatense的聚酮合酶（Polyketide synthases，PKS）EnPKS1和EnPKS2，及其编码基因与其应用。EnPKS1氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；EnPKS2氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。经大肠杆菌表达后的蛋白质能够催化两分子的丙二酰辅酶A（Malonyl‑CoA）缩合生成丙酮二羧酸。可运用于合成生物学中托品烷类生物碱（如莨菪碱、东莨菪碱和可卡因等）的生产，以及生物合成途径中涉及丙酮二羧酸中间体的天然产物的生产；或是用于指导相关的药用植物的分子育种。
Description
技术领域
本发明涉及植物分子生物学领域，公开了来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因，编码古柯聚酮合酶基因的鉴定，还涉及古柯聚酮合酶的应用。EnPKS1和EnPKS2能以丙二酰辅酶A为底物，催化生成丙酮二羧酸，该产物是植物体内生物合成以及体外化学合成托品烷骨架的重要中间体。本发明的聚酮合酶可作为元件用于托品烷类生物碱的合成生物学，以及生物合成路径中涉及丙酮二羧酸中间体的天然产物的合成代谢工程，为合成生物学提供更多可选择元件。
背景技术
托品类生物碱(TAs)作为一类重要的天然产物，从茄科（Solanaceae），古柯科（Erythroxylaceae），山龙眼科（Proteaceae），红树科（Rhizophoraceae），旋花科（Convolvulaceae），十字花科（Brassicaceae）等植物中分离得到，具有很好的生理活性。例如，从古柯（Erythroxylum novogranatense）中分离得到的可卡因是用于鼻腔的局部麻醉剂；从茄科植物中分离得到的托品生物碱，如莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱作为副交感神经的抗胆碱药物，用于镇痛、麻醉、解痉挛等，在临床中被广泛使用。市面上的托品类生物碱多是从植物中分离得到，产量有限。因此，除培育高产的药用植物品种之外，人们一直在寻找其他更为绿色经济地获得该类化合物的方法。
现代分子生物学技术手段的发展，使得脱离原植物，在微生物中异源生产托品烷类生物碱成为可能。而生物合成途径的解析、发掘生物合成重要元件是进行代谢工程的基础。并且对生物合成途径的解析还有助于进行分子育种，开发高产药源植物品种。
托品类生物碱中的莨菪碱的生物合成途径已被解析，其托品酮的骨架是由鸟氨酸和精氨酸经脱羧氧化等一系列反应，形成N-甲基吡咯阳离子，而后可自发和丙酮二羧酸发生缩合，生成4-（1-甲基-吡咯）-3-氧代丁酸[4-(1-methyl-2-pyrrolidinyl)-3-oxobutanoic acid]，随后再经历氧化成环生成托品烷骨架。
前人已经从茄科植物颠茄（Atropa belladonna L.）、三分三（Anisodus acutangulus）和曼陀罗（Datura stramonium L.）中鉴定出了参与莨菪碱生物合成的聚酮合酶，能够催化两分子的丙二酰辅酶A缩合生成丙酮二羧酸的反应。本发明从古柯当中鉴定出了同样能够催化两分子的丙二酰辅酶A缩合生成丙酮二羧酸的酶，反应式如图1所示。然而，本发明报道的酶与之前的三个物种（颠茄、三分三、曼陀罗）氨基酸相似性较低（约60%），聚酮合酶的多样性拓宽了合成生物学应用中元件的可选范围，并且为改造这类酶提供了新思路，可指导这类酶的理性设计。
另一方面，丙酮二羧酸也是化学合成托品类生物碱骨架的重要中间体，早在1917年德国化学家Robinson以丙酮二羧酸盐、丁二醛和甲胺为原料，非常巧妙地运用一锅法完成了托品酮的合成，并且收率高达42%。丙酮二羧酸具有良好的反应活性，除合成托品酮之外，还可用于合成药物，如格拉司琼，雷尼酸锶等。然而，化学合成方法中使用的一些试剂处理不当会对环境造成危害，故酶的挖掘也为药物合成提供了新的解决方法。
迄今为止，现有技术中没有来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其编码基因鉴定，以及古柯聚酮合酶的应用的报道。
发明内容
有鉴于现有技术中存在的上述不足之处，
本发明的目的之一在于提供一种古柯聚酮合酶；
本发明的目的之二在于提供古柯聚酮合酶基因；
本发明的目的之三在于提供含有所述古柯聚酮合酶基因的重组表达载体；
本发明的目的之四在于提供含有所述古柯聚酮合酶基因的转基因重组菌；
本发明的目的之五在于提供所述古柯聚酮合酶在体内或体外催化生产丙酮二羧酸的应用；
本发明的目的之六在于提供所述古柯聚酮合酶基因、所述的重组表达载体、所述的转基因重组菌在不具有托品烷类生物碱的生物合成途径的原核生物或真核生物中构建托品烷类生物碱合成途径的应用，或是在具有托品烷类生物碱的生物合成途径的原核生物或真核生物中提升托品烷类生物碱产量的应用。
本发明的目的之七在于提供所述古柯聚酮合酶基因、所述的重组表达载体、所述的转基因重组菌在不具有丙酮二羧酸合成能力的原核生物或真核生物中合成途径中涉及丙酮二羧酸中间体的天然产物的生物合成途径的应用，或是在提升生物合成途径中涉及丙酮二羧酸中间体的天然产物产量的应用。
为达到上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
1、古柯聚酮合酶，具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：
a）具有SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.8所示的氨基酸残基序列的蛋白质；
b）将SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.8中的氨基酸残基经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有a）酶功能的由a）衍生的氨基酸序列。
c）与a）或b）限定的氨基酸序列具有80%以上的同源性，且具有a）酶功能的由a）衍生的蛋白质。
d）序列中含有a)或b）所述氨基酸序列的衍生蛋白质。
2、古柯聚酮合酶基因，具有下述核苷酸序列之一的多核苷酸：
a）核苷酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.7所示的多核苷酸；
b）编码权利要求1所述蛋白质的多核苷酸。
c）编码如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列的多核苷酸。
d）与a）、b）或c）限定的核苷酸序列具有80％以上的同源性且编码具有权利要求1所述合成丙酮二羧酸的古柯聚酮合酶功能的多核苷酸；
e）与a）、b）或c）所述的序列互补的多核苷酸。
3、含有所述古柯聚酮合酶基因的重组表达载体。
优选的，所述重组表达载体为将所述的古柯聚酮合酶基因插入原核或真核表达载体得到表达古柯聚酮合酶的重组表达载体。
进一步的，所述重组表达载体为，将古柯聚酮合酶基因EnPKS1，如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，经BamHI和SalI酶切位点连入pET28a载体而得；将古柯聚酮合酶基因EnPKS2，如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，经BamHI和XhoI酶切位点连入pET28a载体而得。
4、含有所述古柯聚酮合酶基因的转基因重组菌。
优选的，转基因重组菌为Rosetta（DE3），或其他细菌和真菌，所述细菌和真菌包括但不限于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母。
5、所述古柯聚酮合酶在体内或体外催化制备丙酮二羧酸中的应用，以及在体内或体外用于催化生产托品烷类生物碱中的应用。
6、所述古柯聚酮合酶基因或重组载体在不具有合成托品烷类生物碱合成能力的原核生物或真核生物中的应用，以及在不具有合成途径中涉及丙酮二羧酸的天然产物合成能力的原核生物或真核生物中的合成生物学中的应用。
7、所述古柯聚酮合酶基因或重组载体在具有丙酮二羧酸生物合成途径的原核生物或真核生物中提升丙酮二羧酸产量，以及合成途径中涉及丙酮二羧酸中间体的天然产物产量中的应用。
8、所述古柯聚酮合酶转基因重组菌或转基因细胞系在制备丙酮二羧酸或是生产托品烷类生物碱中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明公开了古柯聚酮合酶，经研究发现古柯聚酮合酶的氨基酸序列分别是，EnPKS1如SEQ ID NO.4所示，EnPKS2如SEQ ID NO.8所示，其编码的核苷酸分别是，EnPKS1如SEQ ID NO.3所示，EnPKS2如SEQ ID NO.7所示，将古柯聚酮合酶进行原核表达后能够催化丙二酰辅酶A生成丙酮二羧酸。古柯聚酮合酶与之前在颠茄、曼陀罗和三分三中发现的催化相同反应的聚酮合酶氨基酸相似性较低（约60%），古柯聚酮合酶的发现为天然产物的合成生物学提供了更多可选择的元件，并且为这类酶的理性设计提供了指导和依据，具有很好的工业化前景。本发明完善了对古柯托品烷类生物碱生物合成的认识。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为EnPKS1和EnPKS2催化的酶化学反应方程式。
图2为pET28a-EnPKS1和pET28a-EnPKS2的质粒图谱。
图3为EnPKS1和EnPKS2蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果图，其中，1为EnPKS1，2为EnPKS2，M为蛋白marker；
图4为EnPKS1和EnPKS2催化丙二酰辅酶A生成丙酮二羧酸的LC-MS分析图。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册（New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
古柯聚酮合酶（Polyketide synthases，PKS）基因的克隆。
（1）古柯嫩芽总RNA的提取及cDNA第一链的合成。
取适量古柯叶芽组织，在液氮中研磨，用biotek多糖多酚植物总RNA快速提取试剂盒按说明书提取总RNA。用Thermo Scientific NanoDrop分光光度计检测RNA浓度及质量，并用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。
用诺唯赞公司HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit反转录试剂盒，按照其产品说明书指示，以总RNA为模板，合成cDNA。
（2）EnPKS基因的克隆。
设计特异性引物，具体引物序列如下：
EnPKS1-F：5’-atgaacggaaccgtcaagaaaatgaatg-3’（SEQ ID NO.1）
EnPKS1-R：5’-tcattctgtaaccacagaaatggcacgc-3’（SEQ ID NO.2）
EnPKS2-F：5’-atgaacggaatggctaagaaaatgaatg-3’（SEQ ID NO.5）
EnPKS2-R：5’-tcacacagaaatggcacgcaaaactacg-3’（SEQ ID NO.6）
通过PCR以嫩芽组织的cDNA为模板，扩增EnPKS1和EnPKS2的基因并测序，获得EnPKS1和EnPKS2基因的核苷酸序列如下，EnPKS1如SEQ ID NO.3所示，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA；翻译出蛋白编码序列如SEQ ID NO.4所示；EnPKS2如SEQ ID NO.7所示，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA；翻译出蛋白编码序列如SEQ ID NO.8所示。
实施例2
原核表达验证EnPKS1和EnPKS2基因功能。
在酶切位点引入EnPKS1和EnPKS2基因。为EnPKS1和EnPKS2基因设计引物，EnPKS1正向引物带有BamHI酶切位点如SEQ ID NO.9所示，反向引物带有SalI酶切位点如SEQ IDNO.10所示；EnPKS2正向引物带有BamHI酶切位点如SEQ ID NO.11所示，反向引物带有XhoI酶切位点如SEQ ID NO.12所示。通过PCR扩增得到两端带有酶切位点的EnPKS1和EnPKS2基因后，用这两个酶切位点产生的粘性末端分别将EnPKS1和EnPKS2的编码区完整序列连接质粒pET28a，获得重组表达载体pET28a-EnPKS1和pET28a-EnPKS2。
引物序列如下：
BamHI-EnPKS1-F：5’-cgggatccatgaacggaaccgtcaagaaaatgaatg-3’（SEQ IDNO.9）
SalI-EnPKS1-R：5’-acgcgtcgactcattctgtaaccacagaaatggcacgc-3’（SEQ IDNO.10）
BamHI-EnPKS2-F：5’-cgggatccatgaacggaatggctaag-3’（SEQ ID NO.11）
XhoI-EnPKS2-R：5’-ccctcgagtcacacagaaatggcacgc-3’（SEQ ID NO.12）
将构建好的pET28a-EnPKS1和pET28a-EnPKS2质粒转化原核表达菌株Rosetta（DE3），涂布含有卡那霉素和氯霉素的LB固体平板，挑取单菌落培养，提取质粒进行酶切验证，筛选阳性克隆子，获得原核表达工程菌Rosetta-pET28a-EnPKS1和Rosetta-pET28a-EnPKS2。取菌液10 μL接种到含50 μg/L卡那霉素25μg/L氯霉素的5 mL LB液体培养基中，37℃，200 rpm过夜培养。再按1：100比例接种量分别接种到250 mL LB液体培养基中37 ℃，200 rpm进行活化培养，培养至OD600 = 0.6左右时，放置冰上十分钟后，加入IPTG至终浓度0.5mM。在16 ℃，200 rpm条件下继续培养18-22 h。将收获的菌液4000 rpm离心，去掉上清。再把菌体沉淀用蛋白纯化buffer重悬，并在超声破碎后，用镍柱进行蛋白纯化获得EnPKS1和EnPKS2蛋白。得到的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如图3所示。
（2）EnPKS1和EnPKS2酶活性验证。
EnPKS1和EnPKS2催化的体外酶反应的体系如下：磷酸钾缓冲盐（pH 8.0），0.5 mM丙二酰辅酶A，10 μg EnPKS1或EnPKS2蛋白，总体积100 μL，37℃，孵育1 h后，加10μL20%HCl终止反应。
酶反应体系用LC-MS进行分析，质谱仪为Agilent 6530 Accurate-Mass Q-TOF，色谱柱为YMC-Triart C18（250×10 mm I.D.），柱温30℃，流速1 mL/min，流动相洗脱程序为：95% A相（含0.1%甲酸的水），5% B相（乙腈），等度洗脱10min，质谱仪为电喷雾离子源（ESI），进行正离子模式扫描。
检测结果显示，EnPKS1和EnPKS2催化生产丙酮二羧酸（m/z: 169 [M+Na]+），在分析条件下保留时间为5.7 min如图4所示。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
本发明涉及的序列表
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<141> 2021-07-03
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgaacggaa ccgtcaagaa aatgaatg 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 2
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tcattctgta accacagaaa tggcacgc 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 3
<211> 1182
<212> DNA
<213> 古柯(Erythroxylum novogranatense)
<400> 3
atgaacggaa ccgtcaagaa aatgaatgga gctcggcgac ctcatggtct ggcctctatt60
ctagccattg gcaccgcaaa tccatcaaac tgtttcaacc aagacgaatt tcctgactat 120
agcttcagag ttaccaagtc cgagcacttg acgtccctta aagacaagtt caagcgcata 180
tgcgagagat caacagtgag gaagcgatac ttgcacttga cagaggaact tctccaagag 240
tatcccagca tagcaaccta cgacgctcca tcactagacg cacgtcaaga gatcgaagtt 300
gctgaggtcc ccaaactcgc tgccagagca gcatccaggg ccatcgagga atggggacaa 360
cccaaaaaca aaatcacaca cctcatcttc tcttcaactt caggcataga aaaacctggc 420
gtggactgtc acctcgtgca ccttctaggt cttccgttgt ccgtaaaccg agtaatgctc 480
tacactattg gctgtcatgc aggtggcact gtgcttcgca ttgccaagga cttggcagaa 540
aacaatgtcg gttcacgcgt tcttgtagtt tgtagcgagc tcaccgtcat gacgtttcgt 600
ggaccgtcag agaccgactt ggctaatctt atacgtatgg gtattttcgg tgacggtgca 660
gctgctctca ttattggtgc tgaccctgac ctatccatcg aaaaacctat ctttgaaatt 720
ttctcagctt cccaaacatt ggttcctaac acaagcaaag caattcgcgg acgtgttaaa 780
gaaatggggc taacgtttta cgttgacaaa atggttccaa ctttggtggc gagcaacatt 840
gagcaatgct tggataaagc gtttagtcca cttggtataa atgattggaa ctcaatattc 900
tggataccac atcctggagg gcctgcgatt ttagcagaga tagaagcgaa attggaattg 960
aaaccgggca agctgagagc aactagacat gtgctcagcg agtacggcaa catgtcaggt 1020
gcgacagtgc tgttcatatt ggacgagatg agaaggagat cgaagaagga agggaaaggg 1080
accacaggcg acggacttga gtggggtgtt ctgatgggat tcgggcccgg tgtgacggta 1140
gagaccatag tgttgcgtgc catttctgtg gttacagaat ga 1182
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 4
<211> 393
<212> PRT
<213> 古柯(Erythroxylum novogranatense)
<400> 4
Met Asn Gly Thr Val Lys Lys Met Asn Gly Ala Arg Arg Pro His Gly
1 5 10 15
Leu Ala Ser Ile Leu Ala Ile Gly Thr Ala Asn Pro Ser Asn Cys Phe
20 25 30
Asn Gln Asp Glu Phe Pro Asp Tyr Ser Phe Arg Val Thr Lys Ser Glu
35 40 45
His Leu Thr Ser Leu Lys Asp Lys Phe Lys Arg Ile Cys Glu Arg Ser
50 55 60
Thr Val Arg Lys Arg Tyr Leu His Leu Thr Glu Glu Leu Leu Gln Glu
65 70 75 80
Tyr Pro Ser Ile Ala Thr Tyr Asp Ala Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln
85 90 95
Glu Ile Glu Val Ala Glu Val Pro Lys Leu Ala Ala Arg Ala Ala Ser
100 105 110
Arg Ala Ile Glu Glu Trp Gly Gln Pro Lys Asn Lys Ile Thr His Leu
115 120 125
Ile Phe Ser Ser Thr Ser Gly Ile Glu Lys Pro Gly Val Asp Cys His
130 135 140
Leu Val His Leu Leu Gly Leu Pro Leu Ser Val Asn Arg Val Met Leu
145 150 155 160
Tyr Thr Ile Gly Cys His Ala Gly Gly Thr Val Leu Arg Ile Ala Lys
165 170 175
Asp Leu Ala Glu Asn Asn Val Gly Ser Arg Val Leu Val Val Cys Ser
180 185 190
Glu Leu Thr Val Met Thr Phe Arg Gly Pro Ser Glu Thr Asp Leu Ala
195 200 205
Asn Leu Ile Arg Met Gly Ile Phe Gly Asp Gly Ala Ala Ala Leu Ile
210 215 220
Ile Gly Ala Asp Pro Asp Leu Ser Ile Glu Lys Pro Ile Phe Glu Ile
225 230 235 240
Phe Ser Ala Ser Gln Thr Leu Val Pro Asn Thr Ser Lys Ala Ile Arg
245 250 255
Gly Arg Val Lys Glu Met Gly Leu Thr Phe Tyr Val Asp Lys Met Val
260 265 270
Pro Thr Leu Val Ala Ser Asn Ile Glu Gln Cys Leu Asp Lys Ala Phe
275 280 285
Ser Pro Leu Gly Ile Asn Asp Trp Asn Ser Ile Phe Trp Ile Pro His
290 295 300
Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Ala Glu Ile Glu Ala Lys Leu Glu Leu
305 310 315 320
Lys Pro Gly Lys Leu Arg Ala Thr Arg His Val Leu Ser Glu Tyr Gly
325 330 335
Asn Met Ser Gly Ala Thr Val Leu Phe Ile Leu Asp Glu Met Arg Arg
340 345 350
Arg Ser Lys Lys Glu Gly Lys Gly Thr Thr Gly Asp Gly Leu Glu Trp
355 360 365
Gly Val Leu Met Gly Phe Gly Pro Gly Val Thr Val Glu Thr Ile Val
370 375 380
Leu Arg Ala Ile Ser Val Val Thr Glu
385 390
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 5
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
atgaacggaa tggctaagaa aatgaatg 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tcacacagaa atggcacgca aaactacg 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 7
<211> 1173
<212> DNA
<213> 古柯(Erythroxylum novogranatense)
<400> 7
atgaacggaa tggctaagaa aatgaatgga gctcgacgac ctcatggtct ggcctcagtt 60
ctggccattg gcacagcaaa cccagaaaac tgtttcaacc aagacgagtt tcctgactta 120
tgcttccgag tcaccaagtc agagcacttg acaggcctca aagagaagtt caagcgcata 180
tgcgagaggt caacagtgag aaagcgatac ttgcacttga cagaggaaat tctgcaggag 240
tatccaagca tagcaaccta caatgcacca tccctagacg cacgtcaaga gatcgaagtt 300
gcagaggtcc ctaagctcgc tgcaagagca gcctcaaaag ccatcgaaga atggggacaa 360
cccaaaagca agatcaccca tctcatcttc tgttcaactt ctgggataga caagcctggc 420
gttgactgcc acctcgtaca cctactaggt cttccactgt ctgtcaaccg cgtgatgctc 480
tacactcttg gctgtcatgc aggtggtact gtgcttcgca tcgccaagga cttagcagaa 540
aacaacgttg gttctcgtgt tcttgttgtg tgcacagagc tcactgtcat gacgtttcgt 600
ggaccctcgg agactgactt agctaatctt atacgtatgg caatttttgg tgacggtgca 660
gcagccgtga ttatcggtgc tgaccctgac ctatccatcg aacgacccat cttcgagatc 720
tactcagcgt ctcaaacatt ggttcctaac acaagcaagg caattcatgg acgtgttctg 780
gaaatggggc tcacgtttta cgtcgacaaa atggtgccta cactggtggc aagcaacatt 840
gagcaatgct tggataaagc gtttagccca attggtataa aggattggaa ctcaatattc 900
tggatgccac atccaggagg gccagcaatt ttggcagaga tagaagcgaa actggggttg 960
aaaccagaga aactgagagc aacaaagcat gtcctgagtg aatatgggaa catgtcaagc 1020
gcgacagtgc tgttcatatt ggatgaaatg aggaggagat cgaagaagga agggaaggag 1080
acgacaggtg aagggcttga gtggggtgtc ctcatgggtt ttggacctgg cgtgacagtg 1140
gagaccgtag ttttgcgtgc catttctgtg tga 1173
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 8
<211> 390
<212> PRT
<213> 古柯(Erythroxylum novogranatense)
<400> 8
Met Asn Gly Met Ala Lys Lys Met Asn Gly Ala Arg Arg Pro His Gly
1 5 10 15
Leu Ala Ser Val Leu Ala Ile Gly Thr Ala Asn Pro Glu Asn Cys Phe
20 25 30
Asn Gln Asp Glu Phe Pro Asp Leu Cys Phe Arg Val Thr Lys Ser Glu
35 40 45
His Leu Thr Gly Leu Lys Glu Lys Phe Lys Arg Ile Cys Glu Arg Ser
50 55 60
Thr Val Arg Lys Arg Tyr Leu His Leu Thr Glu Glu Ile Leu Gln Glu
65 70 75 80
Tyr Pro Ser Ile Ala Thr Tyr Asn Ala Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln
85 90 95
Glu Ile Glu Val Ala Glu Val Pro Lys Leu Ala Ala Arg Ala Ala Ser
100 105 110
Lys Ala Ile Glu Glu Trp Gly Gln Pro Lys Ser Lys Ile Thr His Leu
115 120 125
Ile Phe Cys Ser Thr Ser Gly Ile Asp Lys Pro Gly Val Asp Cys His
130 135 140
Leu Val His Leu Leu Gly Leu Pro Leu Ser Val Asn Arg Val Met Leu
145 150 155 160
Tyr Thr Leu Gly Cys His Ala Gly Gly Thr Val Leu Arg Ile Ala Lys
165 170 175
Asp Leu Ala Glu Asn Asn Val Gly Ser Arg Val Leu Val Val Cys Thr
180 185 190
Glu Leu Thr Val Met Thr Phe Arg Gly Pro Ser Glu Thr Asp Leu Ala
195 200 205
Asn Leu Ile Arg Met Ala Ile Phe Gly Asp Gly Ala Ala Ala Val Ile
210 215 220
Ile Gly Ala Asp Pro Asp Leu Ser Ile Glu Arg Pro Ile Phe Glu Ile
225 230 235 240
Tyr Ser Ala Ser Gln Thr Leu Val Pro Asn Thr Ser Lys Ala Ile His
245 250 255
Gly Arg Val Leu Glu Met Gly Leu Thr Phe Tyr Val Asp Lys Met Val
260 265 270
Pro Thr Leu Val Ala Ser Asn Ile Glu Gln Cys Leu Asp Lys Ala Phe
275 280 285
Ser Pro Ile Gly Ile Lys Asp Trp Asn Ser Ile Phe Trp Met Pro His
290 295 300
Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Ala Glu Ile Glu Ala Lys Leu Gly Leu
305 310 315 320
Lys Pro Glu Lys Leu Arg Ala Thr Lys His Val Leu Ser Glu Tyr Gly
325 330 335
Asn Met Ser Ser Ala Thr Val Leu Phe Ile Leu Asp Glu Met Arg Arg
340 345 350
Arg Ser Lys Lys Glu Gly Lys Glu Thr Thr Gly Glu Gly Leu Glu Trp
355 360 365
Gly Val Leu Met Gly Phe Gly Pro Gly Val Thr Val Glu Thr Val Val
370 375 380
Leu Arg Ala Ile Ser Val
385 390
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 9
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cgggatccat gaacggaacc gtcaagaaaa tgaatg 36
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 10
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
acgcgtcgac tcattctgta accacagaaa tggcacgc 38
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 11
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
cgggatccat gaacggaatg gctaag 26
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 12
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<400> 12
ccctcgagtcacacagaaatggcacgc 27。
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<141> 2021-07-03
<160> 12
<170>SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgaacggaaccgtcaagaaaatgaatg 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 2
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tcattctgta accacagaaa tggcacgc 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 3
<211> 1182
<212> DNA
<213> 古柯(Erythroxylumnovogranatense)
<400> 3
atgaacggaaccgtcaagaaaatgaatggagctcggcgacctcatggtctggcctctatt 60
ctagccattggcaccgcaaatccatcaaactgtttcaaccaagacgaatttcctgactat 120
agcttcagagttaccaagtccgagcacttgacgtcccttaaagacaagttcaagcgcata 180
tgcgagagatcaacagtgaggaagcgatacttgcacttgacagaggaacttctccaagag 240
tatcccagcatagcaacctacgacgctccatcactagacgcacgtcaagagatcgaagtt 300
gctgaggtccccaaactcgctgccagagcagcatccagggccatcgaggaatggggacaa 360
cccaaaaacaaaatcacacacctcatcttctcttcaacttcaggcatagaaaaacctggc 420
gtggactgtcacctcgtgcaccttctaggtcttccgttgtccgtaaaccgagtaatgctc 480
tacactattggctgtcatgcaggtggcactgtgcttcgcattgccaaggacttggcagaa 540
aacaatgtcggttcacgcgttcttgtagtttgtagcgagctcaccgtcatgacgtttcgt 600
ggaccgtcagagaccgacttggctaatcttatacgtatgggtattttcggtgacggtgca 660
gctgctctcattattggtgctgaccctgacctatccatcgaaaaacctatctttgaaatt 720
ttctcagcttcccaaacattggttcctaacacaagcaaagcaattcgcggacgtgttaaa 780
gaaatggggctaacgttttacgttgacaaaatggttccaactttggtggcgagcaacatt 840
gagcaatgcttggataaagcgtttagtccacttggtataaatgattggaactcaatattc 900
tggataccacatcctggagggcctgcgattttagcagagatagaagcgaaattggaattg 960
aaaccgggcaagctgagagcaactagacatgtgctcagcgagtacggcaacatgtcaggt 1020
gcgacagtgctgttcatattggacgagatgagaaggagatcgaagaaggaagggaaaggg 1080
accacaggcgacggacttgagtggggtgttctgatgggattcgggcccggtgtgacggta 1140
gagaccatagtgttgcgtgccatttctgtggttacagaat ga 1182
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 4
<211> 393
<212> PRT
<213> 古柯(Erythroxylumnovogranatense)
<400> 4
Met Asn Gly Thr Val Lys Lys Met Asn Gly Ala Arg Arg Pro His Gly
1 5 10 15
Leu Ala Ser Ile Leu Ala Ile Gly Thr Ala Asn Pro Ser Asn Cys Phe
20 25 30
Asn Gln Asp Glu Phe Pro Asp Tyr Ser Phe Arg Val Thr Lys Ser Glu
35 40 45
His Leu Thr Ser Leu Lys Asp Lys Phe Lys Arg Ile Cys Glu Arg Ser
50 55 60
Thr Val Arg Lys Arg Tyr Leu His Leu Thr Glu Glu Leu Leu Gln Glu
65 70 75 80
Tyr Pro Ser Ile Ala Thr Tyr Asp Ala Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln
85 90 95
Glu Ile Glu Val Ala Glu Val Pro Lys Leu Ala Ala Arg Ala Ala Ser
100 105 110
Arg Ala Ile Glu Glu Trp Gly Gln Pro Lys Asn Lys Ile Thr His Leu
115 120 125
Ile Phe Ser Ser Thr Ser Gly Ile Glu Lys Pro Gly Val Asp Cys His
130 135 140
Leu Val His Leu Leu Gly Leu Pro Leu Ser Val Asn Arg Val Met Leu
145 150 155 160
Tyr Thr Ile Gly Cys His Ala Gly Gly Thr Val Leu Arg Ile Ala Lys
165 170 175
Asp Leu Ala Glu Asn Asn Val Gly Ser Arg Val Leu Val Val Cys Ser
180 185 190
Glu Leu Thr Val Met Thr Phe Arg Gly Pro Ser Glu Thr Asp Leu Ala
195 200 205
Asn Leu Ile Arg Met Gly Ile Phe Gly Asp Gly Ala Ala Ala Leu Ile
210 215 220
Ile Gly Ala Asp Pro Asp Leu Ser Ile Glu Lys Pro Ile Phe Glu Ile
225 230 235 240
Phe Ser Ala Ser Gln Thr Leu Val Pro Asn Thr Ser Lys Ala Ile Arg
245 250 255
Gly Arg Val Lys Glu Met Gly Leu Thr Phe Tyr Val Asp Lys Met Val
260 265 270
Pro Thr Leu Val Ala Ser Asn Ile Glu Gln Cys Leu Asp Lys Ala Phe
275 280 285
Ser Pro Leu Gly Ile Asn Asp Trp Asn Ser Ile Phe Trp Ile Pro His
290 295 300
Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Ala Glu Ile Glu Ala Lys Leu Glu Leu
305 310 315 320
Lys Pro Gly Lys Leu Arg Ala Thr Arg His Val Leu Ser Glu Tyr Gly
325 330 335
Asn Met Ser Gly Ala Thr Val Leu Phe Ile Leu Asp Glu Met Arg Arg
340 345 350
Arg Ser Lys Lys Glu Gly Lys Gly Thr Thr Gly Asp Gly Leu Glu Trp
355 360 365
Gly Val Leu Met Gly Phe Gly Pro Gly Val Thr Val Glu Thr Ile Val
370 375 380
Leu Arg Ala Ile Ser Val Val Thr Glu
385 390
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 5
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
atgaacggaatggctaagaaaatgaatg 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tcacacagaaatggcacgcaaaactacg 28
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 7
<211> 1173
<212> DNA
<213> 古柯(Erythroxylumnovogranatense)
<400> 7
atgaacggaatggctaagaaaatgaatggagctcgacgacctcatggtctggcctcagtt 60
ctggccattggcacagcaaacccagaaaactgtttcaaccaagacgagtttcctgactta 120
tgcttccgagtcaccaagtcagagcacttgacaggcctcaaagagaagttcaagcgcata 180
tgcgagaggtcaacagtgagaaagcgatacttgcacttgacagaggaaattctgcaggag 240
tatccaagcatagcaacctacaatgcaccatccctagacgcacgtcaagagatcgaagtt 300
gcagaggtccctaagctcgctgcaagagcagcctcaaaagccatcgaagaatggggacaa 360
cccaaaagcaagatcacccatctcatcttctgttcaacttctgggatagacaagcctggc 420
gttgactgccacctcgtacacctactaggtcttccactgtctgtcaaccgcgtgatgctc 480
tacactcttggctgtcatgcaggtggtactgtgcttcgcatcgccaaggacttagcagaa 540
aacaacgttggttctcgtgttcttgttgtgtgcacagagctcactgtcatgacgtttcgt 600
ggaccctcggagactgacttagctaatcttatacgtatggcaatttttggtgacggtgca 660
gcagccgtgattatcggtgctgaccctgacctatccatcgaacgacccatcttcgagatc 720
tactcagcgtctcaaacattggttcctaacacaagcaaggcaattcatggacgtgttctg 780
gaaatggggctcacgttttacgtcgacaaaatggtgcctacactggtggcaagcaacatt 840
gagcaatgcttggataaagcgtttagcccaattggtataaaggattggaactcaatattc 900
tggatgccacatccaggagggccagcaattttggcagagatagaagcgaaactggggttg 960
aaaccagagaaactgagagcaacaaagcatgtcctgagtgaatatgggaacatgtcaagc 1020
gcgacagtgctgttcatattggatgaaatgaggaggagatcgaagaaggaagggaaggag 1080
acgacaggtgaagggcttgagtggggtgtcctcatgggttttggacctggcgtgacagtg 1140
gagaccgtag ttttgcgtgc catttctgtg tga 1173
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 8
<211> 390
<212> PRT
<213> 古柯(Erythroxylumnovogranatense)
<400> 8
Met Asn Gly Met Ala Lys Lys Met Asn Gly Ala Arg Arg Pro His Gly
1 5 10 15
Leu Ala Ser Val Leu Ala Ile Gly Thr Ala Asn Pro Glu Asn Cys Phe
20 25 30
Asn Gln Asp Glu Phe Pro Asp Leu Cys Phe Arg Val Thr Lys Ser Glu
35 40 45
His Leu Thr Gly Leu Lys Glu Lys Phe Lys Arg Ile Cys Glu Arg Ser
50 55 60
Thr Val Arg Lys Arg Tyr Leu His Leu Thr Glu Glu Ile Leu Gln Glu
65 70 75 80
Tyr Pro Ser Ile Ala Thr Tyr Asn Ala Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln
85 90 95
Glu Ile Glu Val Ala Glu Val Pro Lys Leu Ala Ala Arg Ala Ala Ser
100 105 110
Lys Ala Ile Glu Glu Trp Gly Gln Pro Lys Ser Lys Ile Thr His Leu
115 120 125
Ile Phe Cys Ser Thr Ser Gly Ile Asp Lys Pro Gly Val Asp Cys His
130 135 140
Leu Val His Leu Leu Gly Leu Pro Leu Ser Val Asn Arg Val Met Leu
145 150 155 160
Tyr Thr Leu Gly Cys His Ala Gly Gly Thr Val Leu Arg Ile Ala Lys
165 170 175
Asp Leu Ala Glu Asn Asn Val Gly Ser Arg Val Leu Val Val Cys Thr
180 185 190
Glu Leu Thr Val Met Thr Phe Arg Gly Pro Ser Glu Thr Asp Leu Ala
195 200 205
Asn Leu Ile Arg Met Ala Ile Phe Gly Asp Gly Ala Ala Ala Val Ile
210 215 220
Ile Gly Ala Asp Pro Asp Leu Ser Ile Glu Arg Pro Ile Phe Glu Ile
225 230 235 240
Tyr Ser Ala Ser Gln Thr Leu Val Pro Asn Thr Ser Lys Ala Ile His
245 250 255
Gly Arg Val Leu Glu Met Gly Leu Thr Phe Tyr Val Asp Lys Met Val
260 265 270
Pro Thr Leu Val Ala Ser Asn Ile Glu Gln Cys Leu Asp Lys Ala Phe
275 280 285
Ser Pro Ile Gly Ile Lys Asp Trp Asn Ser Ile Phe Trp Met Pro His
290 295 300
Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Ala Glu Ile Glu Ala Lys Leu Gly Leu
305 310 315 320
Lys Pro Glu Lys Leu Arg Ala Thr Lys His Val Leu Ser Glu Tyr Gly
325 330 335
Asn Met Ser Ser Ala Thr Val Leu Phe Ile Leu Asp Glu Met Arg Arg
340 345 350
Arg Ser Lys Lys Glu Gly Lys Glu Thr Thr Gly Glu Gly Leu Glu Trp
355 360 365
Gly Val Leu Met Gly Phe Gly Pro Gly Val Thr Val Glu Thr Val Val
370 375 380
Leu Arg Ala Ile Ser Val
385 390
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 9
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cgggatccatgaacggaaccgtcaagaaaatgaatg 36
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 10
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
acgcgtcgactcattctgtaaccacagaaatggcacgc 38
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 11
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
cgggatccatgaacggaatggctaag 26
<110>中国科学院昆明植物研究所
<120> 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用
<210> 12
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ccctcgagtcacacagaaatggcacgc 27
Claims (8)
1.古柯聚酮合酶，其特征在于：所述古柯聚酮合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQID NO.8所示。
2.古柯聚酮合酶基因，其特征在于：具有下述核苷酸序列之一的多核苷酸：
a）核苷酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.7所示的多核苷酸；
b）编码权利要求1所述古柯聚酮合酶的多核苷酸；
c）编码如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列的多核苷酸；
d）与a）、b）或c）所述的序列互补的多核苷酸。
3.含有权利要求2所述古柯聚酮合酶基因的重组表达载体。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为将权利要求2所述的古柯聚酮合酶基因插入原核或真核表达载体得到表达古柯聚酮合酶的重组表达载体。
5.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：将权利要求2所述的古柯聚酮合酶基因EnPKS1，如SEQ ID NO.3所示的多核苷酸，经BamHI和SalI酶切位点连入pET28a载体而得，或将古柯聚酮合酶基因EnPKS2，如SEQ ID NO.7所示的多核苷酸，经BamHI和XhoI酶切位点连入pET28a载体而得。
6.含有权利要求2所述古柯聚酮合酶基因的转基因重组菌或转基因细胞系。
7.根据权利要求6所述的古柯聚酮合酶基因的转基因重组菌或转基因细胞系，其特征在于所述的转基因重组菌为Rosetta (DE3)，或其他细菌和真菌，所述细菌和真菌包括但不限于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母。
8.权利要求1所述古柯聚酮合酶在体外催化生成丙酮二羧酸中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110884834.3A CN113621593B (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110884834.3A CN113621593B (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113621593A CN113621593A (zh) | 2021-11-09 |
| CN113621593B true CN113621593B (zh) | 2023-08-08 |
Family
ID=78382397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110884834.3A Active CN113621593B (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113621593B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115011576A (zh) * | 2022-05-13 | 2022-09-06 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 白木香来源的Ⅲ型聚酮合酶AsPKS5及其编码基因和应用 |
| CN115125260B (zh) * | 2022-05-27 | 2023-05-26 | 北京大学现代农业研究院 | 一种匍柄霉聚酮合成酶基因pks1及应用 |
| CN116790536B (zh) * | 2022-07-13 | 2024-06-04 | 中国科学院昆明植物研究所 | 来自古柯的芽子酮甲基转移酶EnEMT1和EnEMT2及其基因和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110452916A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-11-15 | 西南大学 | 莨菪醛还原酶及其应用 |
-
2021
- 2021-08-03 CN CN202110884834.3A patent/CN113621593B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110452916A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-11-15 | 西南大学 | 莨菪醛还原酶及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Type III Polyketide Synthase Involved in Tropane and Granatane Alkaloid Biosynthesis;Neill Kim等;The FASEB Journal;摘要 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113621593A (zh) | 2021-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113621593B (zh) | 来自古柯的聚酮合酶EnPKS1和EnPKS2及其基因和应用 | |
| CA2952638C (en) | Compositions and methods for making (s)-norcoclaurine and (s)-norlaudanosoline, and synthesis intermediates thereof | |
| JP6638086B2 (ja) | フルクトースからアロースを生産する菌株およびこれを用いたアロース生産方法 | |
| WO2021043189A1 (zh) | 莨菪醛还原酶及其应用 | |
| CN116790525A (zh) | 一种古柯芽子酮合成酶EnES及其基因和应用 | |
| CN113736763B (zh) | 黑芥子酶Rmyr及其在制备萝卜硫素、莱菔素中的应用 | |
| CN113462666A (zh) | 羰基还原酶突变体及其构建方法和应用 | |
| CN112980906B (zh) | 一种用于制备β-烟酰胺单核苷酸的酶组合物及其应用 | |
| CN110283858B (zh) | 生物催化制备(s)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷的方法 | |
| CN112522228A (zh) | 一种来源于氨氧化假诺卡氏单胞菌的r-转氨酶及其合成方法 | |
| CN108034646B (zh) | 一种催化活性和对映归一性提高的PvEH3突变体 | |
| CN112852774A (zh) | 磷酸果糖氨基转移酶编码基因及酶的制备与应用 | |
| CN110551697A (zh) | 侧耳类食用菌麦角硫因合成酶pegt1和pegt2在合成麦角硫因中的应用 | |
| CN113980932B (zh) | 一种定点突变的α-葡萄糖苷酶 | |
| CN106834244B (zh) | 脯氨酸羟化酶及其应用 | |
| CN113444702B (zh) | 烯酮还原酶突变体及其应用 | |
| CN112626047B (zh) | 一组亚精胺衍生物糖基转移酶及其编码基因和应用 | |
| CN109762801B (zh) | 卤醇脱卤酶突变体及其在合成手性药物中间体中的应用 | |
| CN116790536B (zh) | 来自古柯的芽子酮甲基转移酶EnEMT1和EnEMT2及其基因和应用 | |
| CN113025549B (zh) | 一种星孢菌素骨架化合物的生物糖基化合成体系及其合成方法 | |
| CN114591938B (zh) | 羧化酶突变体及其制备方法和应用 | |
| CN113789293B (zh) | 一种高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株及其应用 | |
| CN114807071B (zh) | 一种托法替布关键中间体的酶法制备方法 | |
| KR20190035204A (ko) | 신규 이소프렌 합성 효소 및 이를 이용한 이소프렌 생산 방법 | |
| CN115433727B (zh) | L-苏氨酸醛缩酶及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |