CN113613629A

CN113613629A - 防腐的制剂

Info

Publication number: CN113613629A
Application number: CN202080021116.7A
Authority: CN
Inventors: D·S·米什拉; K·K·钱
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2019-03-15
Filing date: 2020-03-11
Publication date: 2021-11-05
Also published as: WO2020190591A1; EP3937904A1; CA3128522A1; JP2022525883A; US20220143187A1; JP2023123742A; CA3128522C

Abstract

本发明涉及适合于肠胃外施用的防腐的、含有表面活性剂的药物组合物。

Description

防腐的制剂

本发明涉及适合于肠胃外施用的防腐的、含有表面活性剂的药物组合物。所述组合物包含一种或多种防腐剂(诸如间甲酚或苯酚)、一种或多种表面活性剂(诸如聚山梨酯80 (PS80))、一种或多种活性药物成分(API)(诸如度拉糖肽)以及一种或多种溶剂改性剂(诸如丙二醇(PPG)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、聚乙二醇(PEG) 400或甘油)。

基于蛋白和肽的药物产品通常必须肠胃外施用，因为如果口服施用，蛋白和肽对消化道中的蛋白水解具有敏感性，并且在一些情况下，所述基于蛋白和肽的药物产品必须与非离子型表面活性剂一起配制，以确保蛋白在储存期间和自始至终的使用中条件的稳定性。然而，需要表面活性剂浓度高于某些水平的此类含有表面活性剂的制剂的局限性在于它们不能被充分防腐以用于多次使用呈现，因为表面活性剂和防腐剂之间的相互作用导致形成不可接受的可见沉淀物。表面活性剂和防腐剂的这种不相容性先前已经被认识到。参见，例如，S.Kazmi和A.Mitchell, Interaction of Preservatives with Cetomacrogol,23 J.Pharm.Pharmac. 482-489 (1970)；J.Blanchard, Effect of Sorbitol on Interaction of Phenolic Preservatives with Polysorbate 80, 66 J.Pharm.Sci.10, 1471-1472 (1977)；J.Blanchard, Effect of Polyols on Interaction of Paraben Preservatives with Polysorbate 80, 69 J.Pharm.Sci. 2, 169-173 (1980)；R.Torosantucci, Protein-Excipient Interactions Evaluated via Nuclear Magnetic Resonance Studies in Polysorbate-Based Multidose Protein Formulations: Influence on Antimicrobial Efficacy and Potential Study Approach, 107J.Pharm.Sci. 10, 2531-2537 (2018)。然而，尚未描述对这种不相容性的解决方案。

因此，目前可用的需要一定浓度的表面活性剂作为稳定剂的基于蛋白和肽的药物产品以非防腐、一次性使用的制剂出售。例如，度拉糖肽是一种胰高血糖素样肽1 (GLP-1)受体激动剂融合蛋白，其以制剂形式以商品名TRULICITY^TM销售；所述制剂需要0.20 mg/mL聚山梨酯80用于稳定目的，但由于如果酚类防腐剂以足以满足监管要求的浓度添加会发生相分离，所以所述制剂不包括酚类防腐剂。参见用于皮下使用的TRULICITY(度拉糖肽)注射剂处方信息要点(Highlights of Prescribing Information, TRULICITY (dulaglutide)injection, for subcutaneous use)(美国FDA初始批准：2014年)。因此，度拉糖肽目前在单次使用后必须丢弃的装置中销售，其与防腐的多次使用产品相比，与劣势(包括产品销售成本(COPS)增加和物理浪费增加)相关。

先前已经描述了基于蛋白或肽的药物产品的制剂，其含有浓度与当前度拉糖肽商业制剂中使用的浓度相似的表面活性剂，或浓度足以满足无菌监管要求的防腐剂，但并不是两者都含有。例如，美国专利申请号2009/0232807描述了GLP-1-Fc融合蛋白的制剂，并列出赋形剂的各种类别和实例，包括该申请描述为“增溶剂”的物质（诸如Tween 80®(也称为聚山梨酯80)）和防腐剂（诸如间甲酚）。然而，该申请没有提供既含有所述的“增溶剂”又含有所述的防腐剂的制剂的任何实施例或实施方案。美国专利申请号20100196405描述了度拉糖肽的制剂，包括包含浓度为约0.2% (w/v)的聚山梨酯80的制剂。然而，该申请没有描述含有防腐剂的制剂。

仍然需要这样的制剂：其含有浓度足以稳定蛋白或肽的表面活性剂和浓度足以满足多次使用的可注射产品的抗菌要求的防腐剂。

在一个方面，本发明提供了组合物，其包含：

a)蛋白或肽；

b)非离子型表面活性剂；

c)酚类防腐剂；和

d)溶剂改性剂；

其中所述非离子型表面活性剂和所述酚类防腐剂以高于在溶剂改性剂不存在的情况下它们的浓度阈值的浓度存在；且其中所述溶剂改性剂以足以确保溶液保持澄清的浓度存在。

在另一个方面，本发明提供了用于制备含有非离子型表面活性剂和酚类防腐剂的澄清制剂的方法，其包括在组合物中包含溶剂改性剂，所述非离子型表面活性剂和酚类防腐剂的浓度为高于在溶剂改性剂不存在的情况下它们的浓度阈值。

在另一个方面，本发明提供了包含水性组合物的制品，所述水性组合物包含：

a)蛋白或肽；

b)非离子型表面活性剂；

c)酚类防腐剂；和

d)溶剂改性剂；

在另一个方面，本发明提供了制备包含高于它们的浓度阈值的非离子型表面活性剂和酚类防腐剂的组合物的方法，包括在所述组合物中包含浓度足以确保所述组合物保持澄清的溶剂改性剂。

如上文所说明的，在许多基于蛋白或肽的药物产品的制剂中包含表面活性剂，以稳定蛋白或肽API。当在本文中使用时，术语“基于蛋白或肽的药物产品”是指用于治疗或预防对象中的疾病或病况的药学上可接受的组合物，其中所述组合物含有至少一种API，所述API为肽或蛋白。尽管肽和蛋白有时根据大小区分(其中肽具有2至50个氨基酸，且蛋白具有大于50个氨基酸)，但两者之间的差异对于本发明的目的无关，因为本文所述的制剂同样适用于含有一种或多种API(其为肽或蛋白)的药物产品。本发明的制剂可适用于出于稳定性目的需要非离子型表面活性剂的各种各样的基于蛋白或肽的药物。

用于本发明的制剂中的优选药物是度拉糖肽，它是一种人GLP-1R激动剂，其包含在其C-末端经由肽接头与免疫球蛋白的Fc部分的类似物的N-末端融合的GLP-1类似物的二聚体，并且通过CAS注册号923950-08-7识别，其提供以下化学名称：7-37-胰高血糖素样肽I[8-甘氨酸，22-谷氨酸，36-甘氨酸](合成人)融合蛋白与肽(合成的16-氨基酸接头)融合蛋白与免疫球蛋白G4(合成人Fc片段)，二聚体。度拉糖肽的每个单体具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列：

(SEQ ID NO:1)。

两个单体通过位置55和58处的半胱氨酸残基之间的二硫键连接以形成二聚体。度拉糖肽的结构、功能、生产和治疗T2DM中的用途更详细地描述于US7,452,966和美国专利申请公开号US20100196405中。当在本文中使用时，术语“度拉糖肽”是指具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的两个单体的任何GLP-1R激动剂蛋白二聚体，包括作为寻求GLP-1R激动剂产品的批准(其全部或部分依赖于Eli Lilly and Company提交给监管机构的涉及度拉糖肽的数据)的监管提交(regulatory submission)的主题的任何蛋白，无论寻求所述蛋白的批准的一方是否实际将该蛋白识别为度拉糖肽或使用某些其他术语。

可用于本发明的制剂中的蛋白或肽的其他实例包括但不限于以下实施例中描述的那些，以及其他Fc融合蛋白、其他GLP-1激动剂、胃抑制肽(GIP))受体激动剂、胰高血糖素受体激动剂、肽YY (PYY)及其变体、生长分化(GDF)因子(诸如GDF15)及其变体、胰淀素受体激动剂、降钙素受体激动剂和白介素及其变体。

当配制在水溶液中时，许多蛋白和肽易于变性和/或聚集，并且通常将表面活性剂添加至此类蛋白和肽的制剂中以减轻此类问题。表面活性剂由具有亲水性和疏水性部分且倾向于在水溶液中聚集以形成称为胶束的团聚体的分子构成。在基于肽或蛋白的药物的水溶液中包括表面活性剂降低溶液的表面张力，并且帮助保护肽或蛋白不与容器中的任何氧接触。公开的用于肠胃外药物组合物的表面活性剂的实例包括聚山梨酯(诸如聚山梨酯20(TWEEN® 20)和聚山梨酯80 (TWEEN® 80))和嵌段共聚物(诸如泊洛沙姆188 (CAS编号9003-11-6，以商品名PLURONIC® F-68销售)和泊洛沙姆407 (PLURONIC® F127))。

本发明的制剂包含一种或多种非离子型表面活性剂。在某些实施方案中，所述非离子型表面活性剂是聚山梨酯型表面活性剂。聚山梨酯是脂肪酸酯化的乙氧基化脱水山梨糖醇，并且具体的聚山梨酯通过与聚氧乙烯脱水山梨糖醇缔合的脂肪酸酯的类型来识别。例如，聚山梨酯20包含单月桂酸酯，聚山梨酯40包含单棕榈酸酯，聚山梨酯60包含单硬脂酸酯且聚山梨酯80包含单油酸酯。聚山梨酯20和聚山梨酯80是用于肠胃外施用的药物产品中常用的表面活性剂，并且在本发明的某些优选实施方案中作为表面活性剂被包含。在其他实施方案中，非离子型表面活性剂是泊洛沙姆。泊洛沙姆是由一条聚氧丙烯链和两条聚氧乙烯链构成的嵌段共聚物，并且通常通过指示聚氧丙烯核心的质量和聚氧乙烯的百分比的数字进行分类。实例包括泊洛沙姆188和泊洛沙姆407。具体而言，泊洛沙姆188是用于肠胃外施用的药物产品中常用的表面活性剂，并且在本发明的某些优选实施方案中作为表面活性剂被包含。

在某些优选实施方案中，所述非离子型表面活性剂选自聚山梨酯80、聚山梨酯20和泊洛沙姆188。在某些实施方案中，所述非离子型表面活性剂是聚山梨酯80。在某些实施方案中，聚山梨酯80的浓度是约0.01 mg/mL至约1 mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯80的浓度是约0.05 mg/mL至约0.5 mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯80的浓度是约0.1mg/mL至约0.4 mg/mL。在某些优选实施方案中，聚山梨酯80的浓度是约0.2 mg/mL至约3mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯80的浓度选自约0.2 mg/mL和约0.25 mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯80的浓度是约0.2 mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯80的浓度是约0.25 mg/mL。在某些实施方案中，所述非离子型表面活性剂是聚山梨酯20。在某些实施方案中，聚山梨酯20的浓度是约0.01 mg/mL至约1 mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯20的浓度是约0.05 mg/mL至约0.5 mg/mL。在某些实施方案中，聚山梨酯20的浓度是约0.1 mg/mL至约0.4 mg/mL。在某些实施方案中，所述非离子型表面活性剂是泊洛沙姆188。在某些实施方案中，泊洛沙姆188的浓度范围为约0.01至约2 mg/mL。在某些实施方案中，泊洛沙姆188的浓度范围为约0.01至约2 mg/mL。在某些实施方案中，泊洛沙姆188的浓度范围为约0.5至约1.5 mg/mL。然而，这些实施方案不应被解释为限制性的，因为本领域技术人员能够识别在给定组合物中提供足够稳定作用所需的表面活性剂的身份和浓度。

本发明的制剂还包含一种或多种防腐剂，添加所述防腐剂以提供抗菌特性。所述组合物在首次生产时是无菌的，然而，当所述组合物在多用途小瓶或药筒中提供时，通常以足以满足监管和药典抗菌防腐剂要求(诸如欧洲药典(E.P.)和美国药典(USP)公布的那些)的强度添加与所述制剂的其他组分相容的抗菌防腐剂化合物或化合物的混合物。参见欧洲药典，第9版，第5.1.3节，Efficacy of Antimicrobial Preservation；美国药典. USP <51>, Antimicrobial effectiveness testing, Rockville, MD。

适用于多次肠胃外施用的药物产品中常用的防腐剂包括酚类化合物或此类化合物的混合物。具体实例包括苯酚(CAS号108-95-2，分子式C₆H₅OH，分子量94.11，)、间甲酚(CAS号108-39-4，分子式C₇H₈O，分子量108.14)、苯甲醇(CAS#：100-51-6，分子式C₇H₈O，分子量108.14 g/mol)和苯氧乙醇(CAS#：122-99-6，分子式C₈H₁₀O₂，分子量138.17 g/mol)。在本发明的某些实施方案中，所述酚类防腐剂选自苯酚和间甲酚及其混合物。满足多用途产品的监管要求所需的防腐剂的浓度取决于多种因素，包括但不限于所用酚类防腐剂的身份和溶液的pH。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯氧乙醇，其以约10至约15 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯甲醇。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯甲醇，其以约10 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚，其以约1至约10 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚，其以约3至约6 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是浓度为至少约3 mg/mL的苯酚。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是浓度选自3、3.5、4、4.5或5 mg/mL的苯酚。在一个优选实施方案中，所述酚类防腐剂是浓度为约4mg/mL的苯酚。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是间甲酚。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是间甲酚，其以约0.1至约10 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是间甲酚，其以约2至约6 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是间甲酚，其以约3.5至约5.5 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是间甲酚，其以约3.15 mg/mL的浓度存在。在其他实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚和间甲酚的混合物。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约1至约5 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以约0.1至约3.5 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约1.5 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以1.58 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约2 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以约1.58 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约3.5 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以约0.32 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约3.5 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以约0.63 mg/mL的浓度存在。然而，这些实施方案不应被解释为限制性的，因为本领域技术人员能够使用已知技术选择满足监管要求所需的酚类防腐剂及其浓度。参见，例如，欧洲药典，第9版, 第5.01.03节 “Efficacy of Antimicrobial Preservation;” 美国药典，USP 40-NF 35, 第<51> 章 “Antimicrobial Effectiveness Testing;” 参见，例如，Meyer, B.K.,等人, Antimicrobial Preservative use in Parenteral Products: Past and Present, J.Pharm.Sci., Vol. 96, No. 12 (2007)。

然而，当表面活性剂和防腐剂均以特定浓度包含在组合物中时，它们以导致相分离的方式相互作用，导致形成不可接受的可见混浊（cloudiness）或浊度（turbidity）。不希望受理论束缚，据信当酚类防腐剂的分子通过桥接吸引力与非离子型表面活性剂的胶束缔合时发生该现象。参见，例如，Chen, J., 等人, From the depletion attraction to the bridging attraction: The effect of solvent molecules on the effective colloidal interactions, The Journal of Chemical Physics2015, 142, 084904；Jie,C., 等人, Size effects of solvent molecules on the phase behavior and effective interaction of colloidal systems with the bridging attraction.Journal of Physics: Condensed Matter2016, 28, (45), 455102；Yuan, G.; Luo, J.;Han, C. C.; Liu, Y. Gelation transitions of colloidal systems with bridging attractions. Physical Review E2016, 94, (4), 040601。这引起多个表面活性剂胶束变得缔合且因此从溶液中沉淀出来。技术人员将理解胶束是表面活性剂分子的组装体，其中非离子型表面活性剂分子的亲水部分形成围绕疏水部分的外表面或壳，所述疏水部分通过由亲水部分形成的外表面或壳被保护免于水性溶剂的影响。形成此类胶束的表面活性剂浓度被称为临界胶束浓度或CMC，并且可以使用本领域中已知的技术测定。参见，例如，Kerwin, B. A. Polysorbates 20 and 80 used in the formulation of protein biotherapeutics: Structure and degradation pathways. JOURNAL OFPHARMACEUTICAL SCIENCES 2008, 97, (8), 2924-2935。同样不希望受理论束缚，据信使用如本文所述的溶剂改性剂抑制防腐剂分子和表面活性剂胶束之间的桥接吸引力。

然而，无论机制的具体情况，当给定组合物中表面活性剂和防腐剂的组合浓度处于或高于本文称为它们的“浓度阈值”(其是指在没有溶剂改性剂的情况下，表面活性剂和防腐剂的组合导致相分离、导致形成混浊或乳白色的外观的浓度)的浓度时，发生相分离。没有通常适用于任何表面活性剂 + 防腐剂组合的通用浓度阈值。相反，浓度阈值取决于所讨论制剂的具体情况，尤其包括表面活性剂和防腐剂的身份。

任何给定制剂中给定表面活性剂 + 防腐剂组合的浓度阈值可以由本领域技术人员使用已知方法(尤其包括视觉观察)确定，尽管也可以使用定量分析，诸如以下实施例中描述的浊度分析。参见，例如，欧洲药典7.0，第2.2.1节，Clarity and Degree ofOpalescence of Liquids。可能不直接反映可见相分离的形成、但可能与给定组合物中可见相分离的最终发展或形成的潜力相关的其他分析包括：尺寸排阻色谱(SEC)、采用高精度液体颗粒计数器(HIAC)的分析，和微流成像(MFI)。

此外，尽管在表面活性剂和防腐剂组合高于浓度阈值的一些组合物中的视觉可检测的相分离基本上在表面活性剂和防腐剂组合后立即发生，但在其他组合物中，相分离直至已经制备制剂后一定时间才变得在视觉上明显。例如，已经观察到在含有间甲酚的制剂中视觉可检测的相分离几乎立即发生，但在某些含有苯酚的制剂中，直至已经制备制剂后高达近似15分钟才变得视觉可检测。因此，必须在已经制备制剂后至少10分钟、优选至少15分钟检查制剂的视觉外观，证实溶剂改性剂已充分减弱酚类防腐剂表面活性剂组合否则在高于其浓度阈值的相分离。

如上文所说明的，给定表面活性剂 + 防腐剂组合的浓度阈值取决于表面活性剂和防腐剂的身份和浓度二者，并且某些商业产品既包含表面活性剂也包含防腐剂，但仍保持澄清和无色，因为那些产品中的表面活性剂 + 防腐剂组合低于它们的浓度阈值。例如，以商品名LANTUS®销售的甘精胰岛素的制剂包含0.02 mg/mL聚山梨酯20和2.7 mg/mL间甲酚，且以商品名APIDRA®销售的谷赖胰岛素的制剂包含0.01 mg/mL聚山梨酯20和3.15 mg/mL间甲酚，而这两种制剂都是澄清的，因为聚山梨酯20和间甲酚在每种情况下的组合浓度都低于该特定组合的浓度阈值。实际上，如以下实施例中所示，对于以浓度为3.15mg/mL间甲酚含有间甲酚的制剂，当聚山梨酯20以处于或低于其CMC的约2倍的浓度被包含时，不发生相分离，但在处于或高于其CMC的约5倍的浓度确实发生相分离。

当在本文中使用时，术语“相分离”是指从溶液中沉淀出来的物理微粒的形成。给定组合物中相分离的存在或不存在可以视觉确定 – 即，如由混浊或乳白色而不是澄清的外观所指示 – 或通过本领域技术人员已知的分析技术来视觉确定。类似地，当在本文中使用时，术语“澄清”是指透明、不具有混浊或乳白色外观并且不含材料的可见可检测的固体颗粒的溶液。尽管可以使用本领域技术人员已知的分析技术，但确定制剂是否是澄清和无微粒的可以视觉上来确定。

本发明涉及使用溶剂改性剂来减弱组合物中相分离的发生，其中表面活性剂和防腐剂以否则(即，在没有溶剂改性剂的情况下)处于或高于它们的浓度阈值的浓度被包含。可在本发明的制剂中用作溶剂改性剂的化合物包括PPG (CAS号57-55-6，分子式C₃H₈O₂，分子量76.095)、NMP (CAS号872-50-4，分子式C₅H₉NO，分子量99.133)和PEG400(CAS号25322-68-3，分子式C_2nH_4n+2O_n+1，n=8.2至9.1，分子量380-420 g/mol)甘油(CAS号56-81-5，分子式C₃H₈O₃，分子量92.09382)。

应当说明的是，前述段落中鉴定的化合物(其可以在本发明的制剂中用作溶剂改性剂)在一些情况下是药物制剂中常用的赋形剂，并且可能具有除了用作本发明的制剂中的溶剂改性剂以外的功能。例如，甘油是用于等渗目的的常用试剂，并且包含在含胰岛素产品(诸如LANTUS®(甘精胰岛素)、APIDRA®(谷赖胰岛素)、HUMALOG®(赖脯胰岛素)、NOVOLOG®(门冬胰岛素)、TRESIBA®(德谷胰岛素)、HUMULIN®(人胰岛素)和TOUJEO®(甘精胰岛素))的制剂中。然而，那些含胰岛素产品或者不包含任何表面活性剂，或者的确包含表面活性剂，但在那些制剂中与酚类防腐剂组合时低于它们的浓度阈值。类似地，PPG也是一种常用的药物赋形剂，用于除了用作溶剂改性剂以外的功能，例如，VICTOZA® (利拉鲁肽)包含14 mg/mL PPG，但不含非离子型表面活性剂。PEG400也是一种常见的赋形剂，并且例如包含在ATIVAN ®(劳拉西泮)中，但该产品不含非离子型表面活性剂。最后，尽管比甘油或PPG更不常用，但NMP用于称为ELIGARD(醋酸亮丙瑞林)的产品中，但该产品是非水性的，并且不含酚类防腐剂或表面活性剂。

关于减弱相分离(其中表面活性剂和防腐剂以高于它们的浓度阈值的浓度被包含)所需的溶剂改性剂的浓度，正如给定表面活性剂 + 防腐剂组合的浓度阈值不同一样，所需的溶剂改性剂浓度也取决于多个变量，包括以下物质的身份和浓度：(a)所使用的特定表面活性剂和防腐剂；(b)所使用的特定溶剂改性剂；和(c)制剂中的其他赋形剂，尤其是下面更详细描述的张力剂。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是甘油。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是甘油，其以约10至约100 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，甘油的浓度是约20至约80 mg/mL。在某些实施方案中，甘油的浓度选自约20、约25或约80 mg/mL。在某些实施方案中，甘油的浓度是约20 mg/mL。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是PPG。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是PPG，其以约10至约100 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，PPG的浓度是约15至约60 mg/mL。在某些实施方案中，PPG的浓度选自约15、约20或约60 mg/mL。在某些实施方案中，PPG的浓度是约15mg/mL。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是NMP。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是NMP，其以约10 mg/mL至约100 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，NMP的浓度是约20至约90 mg/mL。在某些实施方案中，NMP的浓度是约27至约80 mg/mL。在某些实施方案中，NMP的浓度选自约27、约54和约80 mg/mL。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是PEG 400。在本发明的某些实施方案中，所述溶剂改性剂是PEG 400，其以约5至约150 mg/mL的浓度存在。在某些实施方案中，PEG 400的浓度是约40至约120 mg/mL。在某些实施方案中，PEG 400的浓度选自约40、约80、约110和约120 mg/mL。然而，这些浓度不应被解释为限制性的，因为选择适当浓度的溶剂改性剂用于给定组合物中可以由技术人员使用已知技术(包括视觉观察和浊度和微粒分析，诸如在以下实施例中描述的那些)容易地确定。

除了减弱表面活性剂和防腐剂之间的不相容性以外，溶剂改性剂在某些组合物中还可以具有额外功能，尤其包括作为张力剂。因为本发明的制剂旨在用于肠胃外施用，所以当施用组合物时，期望在注射部位处尽可能接近地近似匹配体液的张力(即，渗透压（osmolality）)，因为与体液不近似等渗的溶液在施用时可产生疼痛的刺痛感。如果组合物的渗透压充分低于组织的渗透压(对于血液，约300 mOsmol/kg；欧洲药典对渗透压的要求是>240 mOsmol/kg)，则组合物的张力应当提高至约300 mOsmol/kg。这样的效果可以通过添加足够浓度的溶剂改性剂来实现，因为甘油和PPG是用于本发明的制剂中的溶剂改性剂的实例，但也通常用作肠胃外产品中的张力剂。因此，甘油和/或PPG可能用于本发明的组合物中以作为溶剂改性剂和/或作为张力剂发挥功能。例如，在以下实施例中描述的含有度拉糖肽的组合物中，甘油和PPG以足以将组合物的张力提高至在注射部位与体液近似等渗并减弱那些组合物中的表面活性剂和防腐剂之间的不相容性的浓度添加。

提高小于组织的渗透压的组合物的张力也可以通过添加额外的张力剂来实现。然而，常用的张力剂包括氯化钠和甘露醇，并且已经发现，在某些制剂中，这些试剂可能加剧导致相分离的表面活性剂-防腐剂相互作用，因此降低达到浓度阈值的表面活性剂和/或防腐剂的最低浓度和/或需要更高浓度的溶剂改性剂来避免相分离。在任何情况下，如果需要添加张力剂，使用标准技术容易地确定待添加的张力剂的量。Remington: The Scienceand Practice of Pharmacy, David B. Troy和Paul Beringer, 编辑, LippincottWilliams & Wilkins, 2006, pp. 257-259；Remington: Essentials of Pharmaceutics,Linda Ed Felton, Pharmaceutical Press, 2013, pp. 277-300。此外，如果需要添加张力剂，诸如氯化钠或甘露醇，并且如果其添加加剧表面活性剂-防腐剂相互作用，则需要添加溶剂改性剂以防止不希望的相分离的量可以由本领域技术人员使用已知技术（诸如以下实施例中描述的那些）容易地确定。

如上文所说明的，用于本发明的制剂中的表面活性剂、防腐剂和溶剂改性剂的浓度可以由本领域技术人员使用已知技术、诸如以下实施例中描述的那些来确定。例如，寻求制备基于蛋白或肽的药物产品的多用途制剂的配制者在一些情况下可能首先确定提供足够稳定作用所需的非离子型表面活性剂的身份和浓度，然后确定提供足够抗菌能力所需的防腐剂的身份和浓度，并观察是否已经发生相分离。如果没有发生相分离，则非离子型表面活性剂 + 防腐剂组合低于其浓度阈值，并且不需要溶剂改性剂。如果已经发生相分离，则配制者将确定是否可以使用不同的表面活性剂 + 防腐剂组合，或者转向确定将防止该特定组合发生这种相分离的根据本发明的溶剂改性剂的身份和浓度。或者，配制者可以反而首先确定提供抗菌能力所需的防腐剂的身份和浓度，然后确定提供足够稳定作用所需的表面活性剂的身份和浓度，然后观察当组合那些赋形剂时是否发生相分离。与先前的情形一样，如果没有发生相分离，则表面活性剂 + 防腐剂组合低于其浓度阈值，并且不需要溶剂改性剂。然而，如果已经发生相分离，并且如果不能识别避免这种相分离的替代防腐剂 +表面活性剂组合，则配制者将转向确定根据本发明的溶剂改性剂的身份和浓度。

在某些实施方案中，本发明的制剂包含一种或多种缓冲液以控制pH，并且所用的任何缓冲液的身份和浓度在某些情况下可能与确定避免该系统的相分离所需的给定表面活性剂 + 防腐剂系统的浓度阈值和/或溶剂改性剂有关。“缓冲液”是一种通过其酸碱共轭成分的作用抵抗pH变化的物质。在某些实施方案中，本发明的制剂具有约4至约8、优选约5.5至约7.5、更优选约6.0至约7.0的pH。在某些优选实施方案中，本发明的制剂具有约6.5的pH。在某些优选实施方案中，本发明的制剂具有约7的pH。适合于将本发明的组合物的pH控制在期望范围内的缓冲液包括但不限于试剂诸如磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、或其酸、精氨酸、TRIS和组氨酸缓冲液以及其组合。“TRIS”是指2-氨基-2-羟甲基-1,3,-丙二醇及其任何药理学上可接受的盐。游离碱和盐酸盐形式(即，TRIS-HCl)是TRIS的两种常见形式。TRIS在本领域中也称为三羟甲基氨基甲烷、氨丁三醇和三(羟甲基)氨基甲烷。本发明的组合物中优选的缓冲液是柠檬酸盐或柠檬酸和磷酸盐。鉴于任何缓冲液与确定浓度阈值和/或溶剂调节剂的潜在相关性，配制者可能希望在确定待如前述段落中所描述而使用的表面活性剂和/或防腐剂的身份和浓度之前确定所需的缓冲液。

以上描述涉及配制者可以如何确定待包含在制剂中的表面活性剂、防腐剂和溶剂改性剂的身份和浓度，但不一定一旦已经确定那些身份和浓度就将怎样将所述制剂最终放在一起。尽管在以何种顺序添加何种组分的方面的操作顺序可能具有一些变化，但溶剂改性剂将通常在已经添加全部浓度的酚类防腐剂和表面活性剂两者之前(即在已经发生任何相分离之前)添加。在某些优选实施方案中，所述溶剂改性剂将是添加至制剂中的第一组分，随后为酚类防腐剂，随后为蛋白或肽，随后为表面活性剂。

除了上述组分以外，本发明的制剂可以含有其他赋形剂。例如，由于对氧化或痕量金属的敏感性，某些基于蛋白或肽的药物产品可能需要额外的稳定剂。此类稳定剂分别包括抗氧化剂（诸如甲硫氨酸）或螯合剂（诸如EDTA）。

蛋白和肽由于对蛋白水解的敏感性和胃肠道中吸收差，口服生物利用度低，因此大多数蛋白和肽是肠胃外施用的。本发明的制剂意欲用于肠胃外施用，其可以包括通过静脉内(IV)注射、皮下(SC)注射、肌肉内(IM)注射或腹膜内(IP)注射来进行施用。在优选实施方案中，本发明的制剂被设计用于SC注射。因为本发明的制剂适合于多次使用施用，所以它们通常提供于容器封闭系统(诸如小瓶或药筒)中，可以从其中取出和施用多个剂量。本发明的制剂可以例如提供于小瓶中，可以通过注射器从其中取出用于施用于患者的多个剂量。本发明的制剂还可以提供于在笔式装置中使用的药筒中，可以从其中施用多个剂量。本发明的制剂还可以提供于容器封闭件(诸如在能够递送多个剂量的自动注射器或输液泵中使用的药筒)中。

下面描述了本发明的额外实施方案：

水性组合物，其包含：蛋白或肽；非离子型表面活性剂；酚类防腐剂；和溶剂改性剂。

上述实施方案的组合物，其中所述组合物是无菌的。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述非离子型表面活性剂和所述酚类防腐剂以高于在所述溶剂改性剂不存在的情况下它们的浓度阈值的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂以足以确保溶液保持澄清的浓度存在。

上述实施方案的组合物，其中所述溶液保持澄清至少15分钟。前述实施方案的组合物，其中所述溶液保持澄清至少24小时。前述实施方案的组合物，其中所述溶液保持澄清至少一周。前述实施方案的组合物，其中所述溶液保持澄清至少一个月。前述实施方案的组合物，其中所述溶液保持澄清至少六个月。前述实施方案的组合物，其中所述溶液保持澄清至少1年。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶液在整个保质期内保持澄清。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂以足以防止由于所述非离子型表面活性剂和所述酚类防腐剂之间的相互作用而相分离的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述蛋白或肽以范围为约0.1至约100 mg/mL的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述蛋白或肽以范围为约0.5至约50 mg/mL的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述蛋白或肽以范围为约1至约10 mg/mL的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述蛋白或肽选自GLP-1受体激动剂、胰岛素、GIP受体激动剂、胰高血糖素受体激动剂、PYY、GDF、胰淀素受体激动剂、降钙素受体激动剂和白介素。前述实施方案的组合物，其中所述蛋白或肽是Fc融合蛋白。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述蛋白或肽为度拉糖肽。前述实施方案的组合物，其中度拉糖肽的浓度为约1.5至约9 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中度拉糖肽的浓度选自1.5、3.0、6.0和9.0 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述非离子型表面活性剂是聚山梨酯型表面活性剂。前述实施方案的组合物，其中所述非离子型表面活性剂选自PS20、PS80、泊洛沙姆188和泊洛沙姆407。前述实施方案的组合物，其中所述非离子型表面活性剂是PS20或PS80。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述非离子型表面活性剂是PS80。前述实施方案的组合物，其中PS80的浓度为约0.01 mg/mL至约1 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PS80的浓度为约0.05 mg/mL至约0.5 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PS80的浓度为约0.1 mg/mL至约0.4 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PS80的浓度为约0.2 mg/mL至约0.3 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中聚山梨酯80的浓度为0.2 mg/mL或0.25 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述非离子型表面活性剂为PS20。前述实施方案的组合物，其中PS20的浓度大于其CMC的约2倍。前述实施方案的组合物，其中聚山梨酯20的浓度为约0.01 mg/mL至约1 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PS20的浓度为约0.05 mg/mL至约0.5 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PS20的浓度为约0.1 mg/mL至约0.4 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述非离子型表面活性剂为泊洛沙姆188。前述实施方案的组合物，其中泊洛沙姆188的浓度范围为约0.01至约2 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中泊洛沙姆188的浓度范围为约0.5至约1.5 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂以强度足以满足监管和药典抗菌防腐剂要求的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂选自苯酚、间甲酚、苯甲醇和苯氧乙醇。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂是苯甲醇。前述实施方案的组合物，其中所述苯甲醇以约10 mg/mL的浓度存在。

在某些实施方案中，所述酚类防腐剂是苯氧乙醇。前述实施方案的组合物，其中所述苯氧乙醇以约10至约15 mg/mL的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂选自苯酚和间甲酚及其混合物。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂是苯酚。前述实施方案的组合物，其中苯酚的浓度为约1至约10 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中苯酚的浓度为约3至约6 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中苯酚的浓度为至少约3 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂为浓度选自3、3.5、4、4.5或5 mg/mL的苯酚。前述实施方案的组合物，其中苯酚的浓度为约5 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂为间甲酚。上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂为间甲酚，其以约0.1至约10 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂为间甲酚，其以约2至约6 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂为间甲酚，其以约3.5至约5.5 mg/mL的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂为苯酚和间甲酚的混合物。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂为苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约1至约5 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以约0.1至约3.5 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂为苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约1.5至约2 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以1.58 mg/mL的浓度存在。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂为苯酚和间甲酚的混合物，其中所述苯酚以约3.5至约4 mg/mL的浓度存在且所述间甲酚以约0.32 mg/mL至约0.63mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中苯酚的浓度为约3.5 mg/mL且间甲酚的浓度为约0.32 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂选自PPG、NMP、PEG 400和甘油。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为甘油。上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为甘油，其以约10至约100 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中甘油的浓度为约20至约80 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中甘油的浓度选自约20、约25或约80 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中甘油的浓度为约20mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为PPG。上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为PPG，其以约10至约100 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中PPG的浓度为约15至约60 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PPG的浓度选自约15、约20或约60 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PPG的浓度为约15 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为NMP。上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为NMP，其以约10 mg/mL至约100 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中NMP的浓度为约20至约90 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中NMP的浓度为约27至约80 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中NMP的浓度选自约27、约54和约80 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为PEG 400。上述实施方案中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为PEG 400，其以约5至约150 mg/mL的浓度存在。前述实施方案的组合物，其中PEG 400的浓度为约40至约120 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PEG 400的浓度选自约40、约80、约110和约120 mg/mL。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含张力剂。前述实施方案的组合物，其中所述张力剂选自NaCl和甘露醇。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含缓冲液。前述实施方案的组合物，其中所述缓冲液选自磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、或其酸、精氨酸、TRIS和组氨酸。前述实施方案的组合物，其中所述缓冲液为磷酸盐。前述实施方案的组合物，其中磷酸盐的浓度为约10 mM。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含缓冲液，其为柠檬酸盐。前述实施方案的组合物，其中柠檬酸盐的浓度为约10 mM。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述组合物的pH为约4至约8。前述实施方案的组合物，其中所述组合物的pH为约5.5至约7.5。前述实施方案的组合物，其中所述组合物的pH为约6.0至7.0。前述实施方案的组合物，其中所述组合物的pH为约6.5或约7。

上述实施方案中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含额外的稳定剂。前述实施方案的组合物，其中所述额外的稳定剂是抗氧化剂或螯合剂。前述实施方案的组合物，其中所述抗氧化剂是甲硫氨酸且所述螯合剂是EDTA。

适合于肠胃外施用的水性组合物，其包含：度拉糖肽、PS80、选自PPG和甘油的溶剂改性剂和选自苯酚、间甲酚及其混合物的酚类防腐剂。前述实施方案的组合物，其中度拉糖肽浓度选自1.5、3、6或9 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中PS80的浓度为0.2或0.25 mg/mL。前述实施方案的组合物，其中所述溶剂改性剂为15 mg/mL PPG或20 mg/mL甘油。前述实施方案的组合物，其中所述酚类防腐剂为4 mg/mL苯酚或3.5 mg/mL苯酚和0.32 mg/mL间甲酚的组合。前述实施方案的组合物，其进一步包含缓冲液。前述实施方案的组合物，其中所述缓冲液为柠檬酸盐。前述实施方案的组合物，其中柠檬酸盐的浓度为10 mM。前述实施方案的组合物，其中所述组合物的pH为约6.5。

容器-密封系统，其包含任何上述组合物。前述实施方案的容器-密封系统，其中所述容器-密封系统是小瓶或药筒。

多剂量笔装置，其包含任何上述组合物。

多剂量自动注射器，其包含任何上述组合物。

输注泵，其包含任何上述组合物。

制备任何上述组合物的方法，其包括制备或获得缓冲液、然后添加溶剂改性剂、然后添加酚类防腐剂、然后添加基于蛋白或肽的API、然后添加表面活性剂。

制备包含高于它们的浓度阈值的非离子型表面活性剂和酚类防腐剂的适合于肠胃外施用的水性组合物的方法，其包括在所述组合物中包含浓度足以确保所述组合物保持澄清的溶剂改性剂。

上述实施方案的方法，其中所述组合物包含任何上述组合物。

本发明的实施方案在以下实施例中进一步描述，其不应被解释为限制性的。

实施例

具有0.2 mg/mL PS80的组合物中的浓度阈值

以商品名TRULICITY®销售的度拉糖肽的商业制剂包含 0.2 mg/mL PS80作为稳定剂。为了研究添加酚类防腐剂的作用，制备在pH 6.5的10 mM柠檬酸盐缓冲液中含有0.2mg/mL PS80的安慰剂溶液，并通过将足量的间甲酚或苯酚添加至该溶液的样品以得到含有0.2 mg/mL和3.15 mg/mL间甲酚或5 mg/mL苯酚的制剂来制备测试制品。视觉检查安慰剂和测试制品。安慰剂溶液是澄清且无色的，而测试制品各自快速产生混浊或乳白色的外观。因此，所述含两种防腐剂的溶液各自都超过浓度阈值。

含有间甲酚和PS20的组合物中的浓度阈值

进行一项研究以确定PS20和间甲酚的组合的浓度阈值，所述PS20和间甲酚是甘精胰岛素(以商品名LANTUS®销售)和谷赖胰岛素(以商品名APIDRA®销售)的商业制剂中使用的非离子型表面活性剂和酚类防腐剂，所述商业制剂包括浓度分别为0.02 mg/mL和0.01mg/mL的PS20和浓度分别为2.7和3.15 mg/mL的间甲酚。在含有3.15 mg/mL间甲酚和范围为其CMC的¼直至10倍的不同浓度的PS20的pH7的10 mM磷酸盐缓冲液中制备安慰剂溶液。通过视觉检查分析小瓶。结果提供于下表1中：

表 1.

PS20浓度(mg/mL)	视觉外观
		¼ x CMC (0.02 mg/mL)	澄清的
½ x CMC (0.04 mg/mL)	澄清的
		1 x CMC (0.08 mg/mL)	澄清的
2 x CMC (0.16 mg/mL)	澄清的
		5 x CMC (0.40 mg/mL)	混浊的
7 x CMC (0.56 mg/mL)	混浊的
		10 x CMC (0.8 mg/mL)	混浊的

结果显示，当聚山梨酯20以处于或低于其CMC的约2倍的浓度被包含时，在这些组合物中不发生相分离，但在处于或高于其CMC的约5倍的浓度时确实发生相分离。因此，3.15mg/mL间甲酚和浓度处于或高于其CMC的5倍的聚山梨酯20的组合高于间甲酚和聚山梨酯20的浓度阈值，而3.15 mg/mL间甲酚和浓度处于或低于其CMC的2倍(例如，在LANTUS和APIDRA中使用的0.02和0.01 mg/mL)的聚山梨酯20的组合低于间甲酚和聚山梨酯20的浓度阈值。

含有不同浓度的间甲酚和PS80的组合物的浊度

进行一项研究以评估间甲酚和PS80两者的浓度对产生相分离的相关性。制备一批10-mM柠檬酸盐缓冲液，其含有，调节至6.5的pH，并用作对照和用于配制测试制品的缓冲液基质。将间甲酚添加至缓冲液基质部分中以制备具有浓度为1.58 mg/mL、2.70 mg/mL或3.15 mg/mL的间甲酚的溶液。测量聚山梨酯80并将其溶解于柠檬酸盐缓冲液的分开部分中以制备两种储备溶液，一种具有10 mg/mL聚山梨酯80，且一种具有40 mg/mL聚山梨酯。将表面活性剂的储备溶液以下表2中所示的量逐渐添加至不同量的含有酚类防腐剂的溶液中，以生成含有一定浓度范围的聚山梨酯80的制剂。

表2.

使用HACH浊度计(型号：2100AN，标签#：K349924)测量所得制剂的浊度。仪器在使用前使用浊度标准品进行校准。在试管的外表面上施加硅油的薄涂层，以掩盖玻璃管中的微小缺陷。近似7 mL溶液用于浊度测量。结果提供于图1中。如图1中所见，浊度的发展和量级取决于间甲酚和PS80二者的浓度。

不同浓度的溶剂改性剂、常用张力剂、防腐剂和表面活性剂的作用。

进行研究以评估在溶液状态中包含不同浓度的溶剂改性剂和其他赋形剂(通常用作基于蛋白和肽的制剂中的张力剂)对防腐剂和表面活性剂相容性的影响。

对于一项研究，一批10-mM磷酸盐缓冲液(pH被调节至6.5)用作缓冲液基质。随后，如表3中所示制备含有3.15 mg/mL间甲酚和溶剂改性剂或常用张力剂的缓冲溶液。

成分	浓度(50mg/mL)
		甘露醇	50.0
氯化钠	8.8
		PPG	20.9
甘油	25.3
		NMP	27.2
PEG 400	110.0

表3.

测量聚山梨酯80并将其溶解于磷酸盐缓冲液中以制备两种储备溶液，一种具有10mg/mL聚山梨酯80，且一种具有40 mg/mL聚山梨酯，将其以上表2中所示的量逐渐添加至不同量的上表3中描述的含有溶剂改性剂或张力剂的制剂以生成各自含有一定浓度范围的聚山梨酯80的制剂。如上文所述测量所得制剂的浊度。

结果提供于图2中。如图2中所见，甘露醇和NaCl各自的添加导致浊度数据与对照相比向左偏移，表明在本研究中，它们的包含导致在给定PS80浓度下产生更大的浊度；PPG、甘油和NMP各自的添加导致浊度数据与对照相比向右偏移，并且PEG400阻止浊度的发展，表明在本研究中，它们的包含减弱在给定PS80浓度下浊度的发展。

对于另一组研究，制备10-L批次的10-mM柠檬酸盐缓冲液，其含有2.723 mg/mL柠檬酸和0.1422柠檬酸钠，pH被调节至6.5，并用作缓冲液基质。随后，制备含有间甲酚和各种赋形剂的缓冲溶液，如表4中所总结。柠檬酸、二水合柠檬酸钠、聚山梨酯80、间甲酚、液化苯酚、甘露醇和氯化钠获自Eli Lilly (Indianapolis, Indiana)。甘油、丙二醇、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)和聚乙二醇400 (PEG400)获自Sigma-Aldrich (Milwaukee, Wisconsin)。

表4.柠檬酸盐缓冲液和安慰剂溶液的组成

测量聚山梨酯80并将其溶解于磷酸盐缓冲液中以制备两种储备溶液，一种具有10mg/mL聚山梨酯80，且一种具有40 mg/mL聚山梨酯，其以上表2中所示的量逐渐添加至不同量的上表4中描述的含有溶剂改性剂或张力剂的制剂以生成各自含有一定浓度范围的聚山梨酯80的制剂。如上文所述测量所得制剂的浊度。结果提供于图3至8中。

表面活性剂和防腐剂两者浓度的贡献以及甘露醇和NaCl的有害影响可见于图3和4中。如图3和4中所见，含有1.58 mg/mL间甲酚的制剂在任何测试的PS80浓度下都不混浊，包括在甘露醇或NaCl存在的情况下。因此，对于本研究中测试的任何含有1.58 mg/mL间甲酚的组合物均未达到浓度阈值。然而，当间甲酚的浓度增加至3.15 mg/mL时，随着聚山梨酯80浓度增加，看到浊度的发展。最后，甘露醇或NaCl的存在以剂量依赖的方式加剧浊度的发展。

在某些表面活性剂和防腐剂浓度下，甘油和PPG对浊度发展的影响可见于图5中。如图5中所见，PPG的包含以剂量依赖的方式减弱浊度的发展。另一方面，甘油导致浊度数据与对照相比向左偏移，表明它没有减弱本研究中测试的组合物的浊度。

NMP的影响可见于图6中。如图6中所见，NMP以剂量依赖的方式减弱浊度的发展。

PEG400对某些PS80和间甲酚浓度达到浓度阈值的点的影响可见于图7中。如图7中所见，PEG400以剂量依赖的方式减弱浊度的发展。

最后，在甘露醇或NaCl存在的情况下，PS80与间甲酚或苯酚的组合的浓度阈值的比较可见于图8中。如图8中所见，尽管两种防腐剂均导致浊度的发展，在所有测试浓度下，与间甲酚相比，苯酚与PS80更相容，并且甘露醇具有比NaCl更有害的作用。

总之，这些研究中的数据表明，浓度阈值对于组合物中表面活性剂和防腐剂的身份和浓度是特定的，并且导致此类组合物中的浊度的相分离的发展可以通过包含溶剂改性剂以剂量依赖的方式减弱或通过包含某些常用的等渗剂以剂量依赖的方式加剧。

含有不同分子量的模型蛋白的组合物中的溶剂改性剂的浓度阈值和作用

进行一项研究以证实导致组合物中浊度的发展的表面活性剂和防腐剂之间的相互作用，以及通过包含溶剂改性剂减弱该现象的能力不依赖于组合物中蛋白的身份。对被识别以包含在本研究中的蛋白进行选择以包括一系列的分子量，如下表5中所示：

蛋白	分子量(kDa)
		甲状腺球蛋白	670
细胞色素c	12.4
		C溶菌酶	14.3
β-乳球蛋白	18.4
		牛血清白蛋白	67

表5.

磷酸二氢钠一水合物、磷酸氢二钠七水合物、PS80和间甲酚获自Eli Lilly(Indianapolis, Indiana)。N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、细胞色素C、溶菌酶、β-乳球蛋白和甲状腺球蛋白获自Sigma-Aldrich (Milwaukee, Wisconsin)。牛血清白蛋白获自Akron。所有成分都按原样使用。

通过将0.7821 mg/mL磷酸氢二钠与0.62 mg/mL磷酸二氢钠在水中组合来制备2-L批次的10-mM磷酸盐缓冲液，其中pH被调节至7.0，并且所述缓冲液用作研究的缓冲液基质。随后，制备含有PS80、间甲酚和/或NMP的蛋白制剂，并进行视觉检查。组合物和结果的细节提供于下表6中。

表6.

表6中的数据表明，对于所有测试的蛋白，包括多种浓度的BSA，在没有任何溶剂改性剂的情况下，0.2 mg/mL聚山梨酯80和3.15 mg/mL间甲酚的组合引起相分离，导致混浊的外观，而包含81 mg/mL NMP防止这种相分离的发展。

对度拉糖肽的防腐制剂的稳定性研究

设计一项研究以测试用根据本发明的溶剂改性剂制备的度拉糖肽的防腐制剂的稳定性。目前可用的TRULICITY®(度拉糖肽)的商业制剂在10 mM柠檬酸盐缓冲液(pH 6.5)中含有3 mg/mL度拉糖肽、0.2 mg/mL PS80和46.4 mg/mL甘露醇。如上文所说明的，先前通过添加酚类防腐剂来防腐该制剂的努力引起由于PS80和酚类防腐剂之间的不相容性而导致的相分离。然而，通过使用如本文所述的溶剂改性剂，开发了改进的制剂，其允许包含足以实现足够抗菌有效性的防腐剂和为了稳定性目的所必需的0.2 mg/mL PS80，但没有在不含溶剂改性剂的制剂中观察到的相分离。那些制剂的组成列于下表7中。

表7.

设计一项研究以测试度拉糖肽在这些组合物中的稳定性。制备5 mM的柠檬酸盐缓冲液(pH = 6.5)并按原样使用。将适量的柠檬酸盐缓冲液转移至500-mL容量烧瓶中。然后将计算量的防腐剂和溶剂改性剂添加至所述同一烧瓶中，并且混合溶解以确保均匀的溶液。使用量筒，测量38.5 mL度拉糖肽原料药，并转移至容量烧瓶中。混合溶液，直至均匀。同时，制备100 mg/mL的聚山梨酯80的储备溶液。将近似1000 mg聚山梨酯转移至玻璃烧杯中，并溶解于10 mL缓冲溶液中。使用移液管将1 mL聚山梨酯80储备溶液转移至容量烧瓶中。然后添加适量的缓冲液，直至液体弯月面达到500-mL标记。将溶液进一步混合以确保均匀，并过滤通过0.22-µm过滤器。将过滤的药物产品填充至3 mL药筒中。药筒中的溶液在视觉上证实是澄清的，表明没有发生由于表面活性剂和防腐剂相互作用导致的相分离。

此外，填充的药筒在5℃储存，用于稳定性测试。5℃储存温度代表对于度拉糖肽药物产品推荐的2-8℃的储存温度。在预先指定的时间点，将样品从储存取出，在视觉上证实为澄清且无微粒，并用如下所述的各种方法进行测试。

HIAC. HIAC测试用于测量亚可见微粒含量，并且如USP <787>(治疗性蛋白注射物中的亚可见微粒物质)和<788>(注射物中的微粒物质)(其与欧洲药典2.9.19和日本药典6.07一致)中所述对测试样品进行。对于每个时间点，从3 mL药筒抽取5等份的0.5 mL溶液并合并，因此测量结果反映5个样品的平均值。结果提供于下表8中。

表8.HIAC结果。

遵照USP <788>(注射物中的微粒物质)，其要求含有治疗性蛋白注射物(诸如度拉糖肽)的肠胃外产品每个容器具有不超过6000个等于或大于10 µm的微粒和不超过600个等于或大于25 µm的微粒。如表8中所见，所有测试样品都完全在肠胃外产品的FDA限值之内。

MFI. MFI测试用于检测注射物和肠胃外溶液中存在的除了气泡以外的微粒物质。该方法是一种仅供参考的指示稳定性的表征方法，并且出于如下目的进行：使用流动成像技术关于大小、浓度和形态对亚可见颗粒进行枚举和分类。12个月后从储存取出样品并进行测试。结果提供于下表9中。大于或等于5 µm且纵横比(AR)大于0.85的微粒是形状上高度圆形的，并且可能是来自塞子的硅胶，而不是蛋白的颗粒。

表9. 缩写：AR – 纵横比；CF – 圆形分数。

表9中的数据与历史的度拉糖肽药物产品的数据相当。

SEC.尺寸排阻(SEC) HPLC方法用于测量度拉糖肽的单体纯度。该方法将聚集体和片段化的物质与完整的单体蛋白分离。

度拉糖肽药物产品中的单体纯度通过尺寸排阻HPLC测定。该方法在200埃孔径硅胶柱上使用等度分离，在214 nm处进行UV检测，这接近药物产品的肽骨架的吸光度最大值，且因此不必要针对响应因子进行校正。通过该方法将高分子量形式(总聚集体)与单体度拉糖肽分离。已表明该方法是特异性和指示稳定性的；它将高分子量形式与度拉糖肽单体分离。单体和聚集体被报告为峰面积相对于总面积的百分比。数据提供于表10中。

表10.

表10中的数据在度拉糖肽药物产品的接受限值内。

RP-HPLC. 设计该方法用于测定度拉糖肽药物产品中的纯度和相关物质/杂质。使用反相梯度HPLC将由非糖基化、N-末端截短、接头剪切和Fc区氧化导致的相关杂质与未修饰的度拉糖肽分离，在214 nm处进行UV检测，这接近药物产品的肽骨架的吸光度最大值，且因此不必要针对响应因子进行校正。已表明该方法是特异性和指示稳定性的；它将降解产物与主峰分离。

表11. RP-HPLC结果。*由于分析错误，数据不可供。

表11中的数据在度拉糖肽的接受限值内。

有限消化。设计一种有限消化方法，用于测定对度拉糖肽药物产品中的GLP-1类似物的修饰。将药物产品样品暴露于用胰蛋白酶的温和消化条件，以从分子的Fc部分释放GLP-1类似物和接头。GLP-1类似物被消化成三个较小的肽。该方法使用反相梯度HPLC分离，在214 nm处进行UV检测，这接近药物产品的肽骨架的吸光度最大值，且因此不必要针对响应因子进行校正。通过该方法将由N-末端截短、N-末端修饰(Des H/HG，丙酮酸化)、位置25处的色氨酸氧化和位置28处的赖氨酸羟基化导致的相关杂质与未修饰的度拉糖肽分离。已表明该方法是特异性和指示稳定性的；它将相关物质和杂质与相应的未修饰肽分离。结果提供于表12中。

表12. 有限消化结果。缩写 – des H/HG：N-末端截短，N-末端修饰；羟基化/氧化的：位置25处的色氨酸的氧化和位置28处的赖氨酸的羟基化。

表11中的数据在度拉糖肽的接受限值内。

CE-SDS NR. 毛细管电泳十二烷基硫酸钠非还原(CE-SDSNR)测试用于测定度拉糖肽药物产品中的纯度。度拉糖肽分子被变性，并且分子变体经专有的凝胶基质根据大小分离，所述专有的凝胶基质以电动方式加载至未涂覆的毛细管中。当电流施加至毛细管时发生分离，并且分子变体通过214 nm处的UV检测，这接近药物产品的肽骨架的吸光度最大值，且因此不必要针对响应因子进行校正。通过该方法将高分子量和单链形式与单体度拉糖肽分离。已表明该方法是特异性和指示稳定性的；它将聚集体和单链与度拉糖肽单体分离。

表13.

表13中的数据在度拉糖肽药物产品的接受限值内。

总而言之，上述研究支持以下结论：可以通过使用溶剂改性剂来制备度拉糖肽的防腐制剂，所述制剂含有用于在目前可供的TRULICITY的商业制剂中提供足够稳定性的相同的PS80含量，而不会由防腐剂-表面活性剂相互作用而发生相分离，并且此类制剂中的蛋白保持足够稳定。

序列表

<110> Eli Lilly and Company

<120> X21445

<130> 防腐的制剂

<150> US 62/819,096

<151> 2019-03-15

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 275

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 1

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala

50 55 60

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

65 70 75 80

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

85 90 95

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

100 105 110

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

115 120 125

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

130 135 140

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

145 150 155 160

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

165 170 175

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

180 185 190

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

195 200 205

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

210 215 220

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

225 230 235 240

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

245 250 255

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

260 265 270

Ser Leu Gly

275

Claims

1.水性组合物，其包含：

a)蛋白或肽；

b)非离子型表面活性剂；

c)酚类防腐剂；和

d)溶剂改性剂；

其中所述非离子型表面活性剂和所述酚类防腐剂以高于在溶剂改性剂不存在的情况下它们的浓度阈值的浓度存在；

且其中所述溶剂改性剂以足以确保溶液保持澄清的浓度存在。

2.权利要求1的组合物，其中所述蛋白或肽以范围为约0.1至约100 mg/mL的浓度存在。

3.权利要求1的组合物，其中所述蛋白或肽以范围为约0.5至约50 mg/mL的浓度存在。

4.权利要求1的组合物，其中所述蛋白或肽以范围为约1至约10 mg/mL的浓度存在。

5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述蛋白或肽为度拉糖肽。

6.权利要求5的组合物，其中度拉糖肽的浓度为约1.5至约9 mg/mL。

7.权利要求6的组合物，其中度拉糖肽的浓度选自约1.5、约3.0、约6.0和约9.0 mg/mL。

8.权利要求1-7中任一项的组合物，其中所述非离子型表面活性剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407及其混合物。

9.权利要求8的组合物，其中所述非离子型表面活性剂是浓度为约0.1 mg/mL至约0.4mg/mL的聚山梨酯80。

10.权利要求9的组合物，其中聚山梨酯80的浓度选自约0.2 mg/mL和约0.25 mg/mL。

11.权利要求1-10中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂选自苯酚、间甲酚、苯甲醇和苯氧基乙醇。

12.权利要求11的组合物，其中所述酚类防腐剂为苯酚。

13.权利要求12的组合物，其中苯酚浓度为约4 mg/mL。

14.权利要求1-10中任一项的组合物，其中所述酚类防腐剂为苯酚和间甲酚的混合物。

15.权利要求14的组合物，其中苯酚浓度为约3.5 mg/mL且间甲酚浓度为约0.32 mg/mL。

16.权利要求1-15中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂选自PPG、甘油、PEG 400和NMP。

17.权利要求1-15中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为PPG。

18.权利要求17的组合物，其中PPG浓度为约15 mg/mL。

19.权利要求1-16中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为甘油。

20.权利要求19的组合物，其中甘油浓度为约20 mg/mL。

21.权利要求1-20中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含缓冲液。

22.权利要求21的组合物，其中所述缓冲液选自TRIS、磷酸盐和柠檬酸盐。

23.权利要求22的组合物，其中所述缓冲液为柠檬酸盐。

24.权利要求23的组合物，其中柠檬酸盐浓度为10 mM。

25.权利要求1-24中任一项的组合物，其中所述组合物的pH为约6至8。

26.权利要求1-25中任一项的组合物，其中所述组合物的pH为约6.5。

27.组合物，其包含：

a)度拉糖肽；

b)PS80；

c)选自苯酚、间甲酚及其混合物的酚类防腐剂；和

d)选自NMP、PEG 400、PPG和甘油的溶剂改性剂。

28.权利要求27的组合物，其中PS80的浓度为约0.2 mg/mL。

29.权利要求28的组合物，其中度拉糖肽浓度选自约1.5 mg/mL、约3 mg/mL、约6 mg/mL和约9 mg/mL。

30.权利要求29的组合物，其中所述酚类防腐剂为约4 mg/mL苯酚。

31.权利要求30的组合物，其中所述酚类防腐剂为约3.5 mg/mL苯酚和约0.32 mg/mL间甲酚的组合。

32.权利要求28-31中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为PPG。

33.权利要求32的组合物，其中PPG的浓度为约15 mg/mL。

34.权利要求28-31中任一项的组合物，其中所述溶剂改性剂为甘油。

35.权利要求34的组合物，其中甘油的浓度为约20 mg/mL。

36.权利要求28-35中任一项的组合物，其进一步包含10 mM柠檬酸盐缓冲液且其中所述组合物的pH为6.5。

37.制备权利要求1-36中任一项的组合物的方法，包括：

a)制备或获得缓冲液；

b)添加所述溶剂改性剂；

c)添加所述酚类防腐剂；

d)添加所述蛋白或肽；和

e) 添加所述非离子型表面活性剂。

38.制备包含高于它们的浓度阈值的非离子型表面活性剂和酚类防腐剂的水性组合物的方法，包括在所述组合物中包含浓度足以确保所述组合物保持澄清的溶剂改性剂。

39.权利要求38的方法，其中所述组合物包括权利要求1-35的任意组合物。