CN113597304A - 原发性中枢神经系统淋巴瘤的组合治疗 - Google Patents

原发性中枢神经系统淋巴瘤的组合治疗 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于治疗原发性中枢神经系统淋巴瘤，优选为复发/难治性原发性中枢神经系统淋巴瘤的R‑CHOP治疗和NGR‑hTNF或其类似物给药的组合。

Description

原发性中枢神经系统淋巴瘤的组合治疗
技术领域
本发明涉及用于治疗原发性中枢神经系统淋巴瘤的R-CHOP治疗和NGR-hTNF或其类似物给药的组合。
背景技术
CNS原发性弥漫性大B细胞淋巴瘤(PCNSL)是侵袭性恶性肿瘤，具有保持局限于CNS的独特临床表现，罕见CNS外播散病例1。与局限期的CNS外DLBCL相比，PCNSL患者的生存数据较差，这至少部分归因于目前用于治疗中枢神经系统外DLBCL的药物(即R-CHOP方案：利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松)无法穿过血脑屏障(BBB)并获得良好的CNS生物利用度2。目前，PCNSL患者接受基于高剂量甲氨蝶呤的组合治疗，通常与阿糖胞苷、烷基化剂和利妥昔单抗联合3。这些现代组合的广泛使用显著提高了PCNSL患者的生存率，但这些治疗需要住院治疗、需要足够的直接经验并且有相关的毒性负荷4。相反，增强R-CHOP药物的CNS递送可能具有治疗耐受性良好的优势，其不需要住院并广泛用于肿瘤-血液病学中心。因此，使用能够诱导可逆BBB透化的静脉内药物来增强CNS细胞抑制剂的生物利用度，对PCNSL患者是一种有吸引力的研究方法。
肿瘤坏死因子(TNF)的静脉内递送之后是选择性BBB透化，并增强了化疗药物在脑转移动物模型中的肿瘤渗透6。TNF是一种具有高效抗肿瘤活性的炎性细胞因子，但它在癌症患者中的使用受到过高的全身毒性的限制7。越来越多的证据表明，这种细胞因子的治疗指数可以通过血管靶向方法来提高8。例如，这可以通过将人TNF的N-末端与CNGRCG融合来实现，CNGRCG是一种肿瘤脉管归巢肽(tumor vasculature-homing peptide)，能够识别氨肽酶N(CD13)的同种型，这是一种在血管生成的肿瘤血管中上调的膜结合金属蛋白酶9,10，正常血管几乎不表达或根本不表达11。CNGRCG-TNF融合蛋白由人TNF制成(由意大利米兰圣拉斐尔科学研究所(the San Raffaele Scientific Institute of Milan,Italy)开发，称为NGR-hTNF)，允许向肿瘤脉管系统递送极低剂量但具有药理学活性的细胞因子，从而避免全身毒性反应和反调节机制12。在黑色素瘤和淋巴瘤动物模型中进行的研究表明，低剂量NGR-hTNF可以局部增强血管透过性并增加化疗药物在肿瘤组织中的渗透8,10,12,14。
基于这些观点，我们假设低剂量NGR-hTNF可以改变BBB并增强R-CHOP在PCNSL患者中的渗透和活性。作为NGR-hTNF转化研究计划的一部分，我们设计了一项前瞻性的II期试验，旨在评估在复发或难治性PCNSL患者中，6个疗程的R-CHOP化学免疫疗法之前先用低静脉剂量的NGR-hTNF进行BBB透化的可行性和活性。在符合方案计划的“原理论证”试验部分，通过前十名入组患者的动态对比增强(DCE)磁共振成像(MRI)和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)研究了淋巴瘤病灶中和外观正常的脑实质中BBB透过性的变化。研究了血浆和脑脊液(CSF)样品中R-CHOP药物浓度的变化和诊断性活检中NGR-hTNF靶标CD13的表达，作为NGR-hTNF对肿瘤脉管系统的效果特异性的指标。在本文中，我们报告了这项“原理论证”研究的结果，这是为PCNSL患者开发一种简单、可控和有效的治疗方法的第一步，类推为广泛使用的CNS外DLBCL治疗方法。
发明概述
用R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松)治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)具有可接受的耐受性和效力。然而，由于其对血脑屏障的通透性差，该化学免疫疗法在CNS的原发性DLBCL(PCNSL)中是没有效果的。与NGR偶合的肿瘤坏死因子α(NGR-hTNF)，靶向CD13+肿瘤血管的肽，诱导荷淋巴瘤小鼠中的内皮透化和药物渗透。在本发明中，在II期试验内的患有复发/难治性PCNSL的患者中，在NGR-hTNF之后，R-CHOP21的安全性、活性和血管透过性变化被解决。NGR-hTNF/R-CHOP组合耐受良好。动态对比增强MRI和99mTc-DTPA SPECT证明，NGR-hTNF选择性地增加总是表达CD13的癌/癌旁区域的血管透过性。NGR-hTNF不影响R-CHOP药物的血浆/CSF浓度。神经显像、组织病理学和药代动力学结果与NGR-hTNF/R-CHOP活性一致，其在7/10的患者中与快速且显著的肿瘤消退相关。
在本发明中令人惊讶地发现，在低剂量NGR-hTNF之后给药R-CHOP是安全且有效的方法，在7/10的PCNSL患者中具有快速且显著的肿瘤消退。该创新的策略代表了一线治疗。
因此，本发明提供了用于治疗对象的原发性中枢神经系统淋巴瘤的R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松)和NGR-hTNF或其类似物的组合，其中该组合包括至少1个疗程的给药NGR-hTNF或其类似物之后的R-CHOP。
NGR-hTNF类似物描述于WO 2004/041297和WO 01/61017，其通过引用纳入本文。
优选地，R-CHOP疗程由375mg/m2利妥昔单抗、750mg/m2环磷酰胺、50mg/m2多柔比星和1.4mg/m2长春新碱组成。
优选地，R-CHOP疗程由第1天给予375mg/m2利妥昔单抗，第2天给予750mg/m2环磷酰胺、50mg/m2多柔比星和1.4mg/m2长春新碱组成。
优选地，在CHOP药物之前进行NGR-hTNF或其类似物的给药。
优选地，NGR-hTNF给药由0.8ug/m2组成。
在优选的实施方式中，该组合包括6个疗程的R-CHOP，每个疗程之前都先给药NGR-hTNF或其类似物。
优选地，R-CHOP的疗程之前给药NGR-hTNF或其类似物可间隔18至21天。
接受治疗的肿瘤优选为复发的或难治性的原发性中枢神经系统淋巴瘤。
复发或难治性是指肿瘤复发或对标准的前序护理有抗性。这类前序护理例如，基于高剂量甲氨蝶呤的化疗，用或不用利妥昔单抗。复发的或难治性的原发性中枢神经系统淋巴瘤意为标准一线治疗之后复发或对标准一线治疗有抗性(例如基于高剂量甲氨蝶呤的化疗，用或不用利妥昔单抗)的淋巴瘤。一线治疗是本领域技术人员已知任何已知的治疗。
术语“复发的”指的是在缓解一段时间后重现或再次生长的疾病。术语“难治性”用于描述对治疗无应答的淋巴瘤(意为癌细胞继续生长)或对治疗应答时持续时间不长。
本文所用术语“肽”包括多肽和蛋白质。术语“多肽”包括单链多肽分子以及多重多肽复合物，其中单独组分多肽通过共价或非共价方式连接。术语“多肽”包括2个或更多氨基酸长度的肽，通常具有多于5、10或20个氨基酸。
应理解，本发明使用的多肽序列不限于特定序列或其片段，而是还包括从任何来源获得的同源序列，例如相关病毒/细菌蛋白质、细胞同源物和合成肽以及其变体或衍生物。本发明的多肽序列还包括由本发明的多核苷酸编码的多肽。
与本发明的氨基酸序列相关的术语“变体”或“衍生物”包括一个(或多个)氨基酸的从或至序列的任何取代、变异、修饰、替代、缺失或添加，提供所得的氨基酸序列的序列优选地具有靶向活性，优选地具有与序列表中呈现的多肽的活性的至少25％至50％，更优选地至少基本上相同的活性。
因此，可以修饰序列以用于本发明。通常，进行修饰以保持序列的活性。
因此，在一个实施方式中，可以进行氨基酸取代，例如从1、2或3至10、20或30个取代，条件是经修饰的序列保留至少约25％至50％或基本相同的活性。然而，在替代性实施方式中，可以有意地修饰本发明的多肽的氨基酸序列以减少该多肽的生物学活性。例如，仍然能够结合靶分子但缺乏功能效应域的截短多肽可能是有用的。
通常，与序列表中描述的相应区域相比，变体或衍生物的氨基酸残基的改变优选少于20％、10％或5％。
氨基酸取代可以包括使用非天然存在的类似物，例如增加治疗性给药多肽的血浆半衰期(用于治疗的该肽衍生物的生产在下文中进一步详细描述)。
可以进行保守取代，例如根据下表。在第二列的同一区块中的氨基酸和优选第三列的同一行中的氨基酸可以相互取代：
Figure BDA0003166427220000051
本发明的多肽还包括以上提及的多肽和其变体的片段，包括序列的片段。优选的片段包括包含表位或结合域的那些。合适的片段长度会是至少约5个氨基酸，例如10、12、15或20个。它们的长度也会少于200、100或50个氨基酸。该蛋白质的多肽片段和其等位变体和物种变体可以包含一个或多个(例如2、3、5或10)取代、删除或插入，包括保守取代。在已经进行取代、缺失和/或插入的情况下，例如通过重组技术，优选序列表中描述的氨基酸残基的小于20％、10％或5％被改变。
本发明的多肽和偶联物通常由重组方式制备，如下文所述。然而，它们也可使用技术人员所熟知的技术由合成方式制备，例如固相合成。用于化学合成肽的各种技术由Borgia和Fields,2000,TibTech 18:243-251综述，并在其中包含的参考文献中进行了详细描述。
肽可直接或间接地通过间隔子偶合至细胞因子，间隔子可以是单个氨基酸、氨基酸序列或有机残基，例如6-氨基辛基-N-羟基琥珀酰亚胺。偶合方法是本领域技术人员已知的，包括基因工程或化学合成技术。
肽配体优选与细胞因子N-末端连接，从而使对修饰的细胞因子与其受体结合的任何干扰最小化。或者，该肽可以与作为酰胺键或羧基键受体的氨基酸残基连接，其天然存在或用基因工程技术人工地插入于分子上。修饰的细胞因子优选通过使用包含编码所述肽的5'-连续序列的cDNA制备。
根据优选实施方式，提供了介于TNF和CNGRC序列之间的偶联产物。更优选地，TNF的氨基末端通过间隔子G(甘氨酸)连接至CNGRC肽。
所得产物(NGR-TNF)，已被证明在RMA-T淋巴瘤动物模型上比TNF更有效。此外，用NGR-TNF治疗过的动物能排斥进一步致癌剂量的RMA-T或RMA细胞。与普通TNF相比，可以在免疫健全的动物中观察到抗肿瘤活性的增加，而免疫缺陷动物中没有。这表明偶联有"NGR"肽的TNF的抗肿瘤活性的增加是由于增强的免疫应答，而不是该偶联物的直接细胞毒性活性。
还证明了由NGR-TNF引发的体内免疫效力与CD13受体直接相关。例如，已经观察到抗CD13受体的抗体以及GNGRC配体在体内与NGR-TNF竞争，因此表明由NGR-TNF靶向受体的机制。
通过使用能够选择性地结合两种TNF受体(p75TNFR和p55TNFR)之一的TNF突变体形式可以进一步改进TNF/CD13配体偶联物的治疗指数。所述TNF突变体可通过定点诱变获得(Loetscher,H.,等,具有针对55-kDa或75kDa的TNF受体的专属特异性的人肿瘤坏死因子α(TNFα)突变体.(Human tumor necrosis factor alpha(TNF alpha)mutants withexclusive specificity for the 55-kDa or 75kDa TNF receptors.)J.Biol.Chem.1993.268:26350-7和Van Ostade,X.,等,对p55受体具有选择性活性的人TNF突变体.(Human TNF mutants with selective activity on the p55 receptor.)Nature1993.361:266-9.)。
根据本发明，经修饰的细胞因子的药代动力学可通过制备聚乙二醇衍生物来改进，其允许延长细胞因子本身的血浆半衰期。
本发明的另一个实施方式由双功能衍生物提供，其中用CD13配体修饰的细胞因子与针对肿瘤抗原或其他肿瘤血管生成标志物的抗体或其片段偶联，例如(xv整联蛋白，金属蛋白酶或血管生长因子，或针对细胞外基质组分的抗体或其片段，例如抗生腱蛋白(anti-tenascin)抗体或抗纤连蛋白EDB结构域。最近已有报道TNF与针对胃和卵巢腺癌表达的肿瘤相关TAG72抗原的mAb铰链区之间的融合产物的制备(Yang,J.,等,基因工程单链FV/TNF分子具有FV的抗肿瘤免疫反应性和肿瘤坏死因子的细胞毒活性(A geneticallyengineered single-chain FV/TNF molecule possesses the anti-tumorimmunoreactivity of FV as well as the cytotoxic activity of tumor necrosisfactor.)Mol.Immunol.1995.32:873-81)。
本发明的另一实施方式提供了使用生物素/亲和素系统的肿瘤预靶向。根据这种方法，在不同阶段的肿瘤抗原位点上获得三元复合物，其由1)生物素化mAb、2)亲和素(或链霉亲和素)和3)用CD13配体和生物素修饰的二价细胞因子形成。许多论文证明，与利用免疫偶联物的常规靶向相比，该预靶向方法可实际增加归巢的活性分子与游离活性分子之比，因而减少治疗毒性(Paganelli,G.,等.,癌胚抗原阳性患者的三步单克隆抗体肿瘤靶向.(Three-step monoclonal antibody tumor targeting in carcinoembryonicantigenpositive patients.)Cancer Res.1991.51:5960-6；Paganelli,G.,等.,亲和素-生物素系统在肿瘤靶向中的临床应用.(Clinical application of the avidin-biotinsystem for tumor targeting.)于D.Goldenberg(编.使用放射性标记抗体的癌症治疗.(Cancer therapy with radiolabeled antibodies.)CRC Press,Boca Raton,1995.P.239-253；Modorati,G.,等.,使用三步单克隆预靶向技术的免疫闪烁法在葡萄膜黑色素瘤的诊断中的初步结果.(Immunoscintigraphy with three step monoclonalpretargeting technique in diagnosis of uveal melanoma:preliminary results.)Br.J.Ophtalm.1994.78:19-23；Colombo,P.,等.,内分泌/神经内分泌肿瘤患者抗嗜铬粒蛋白A抗体的免疫显像.(Immunoscintigraphy with anti-chromogranin A antibodies inpatients with endocrine/neuroendocrine tumors.)J.Endocr.Invest.1993.16:841-3)。本方法使用生物素化的TNF产生了良好效果，生物素化的TNF能诱导体外细胞毒性，并在正常TNF未活化的情况下减少肿瘤细胞生长(Moro,M.,等.,用抗体-亲和素复合物和生物素化肿瘤坏死因子α靶向肿瘤细胞.(Tumor cell targeting with antibody-avidincomplexes and biotinylated tumor necrosis factor alpha.)Cancer Res.1997.57:1922-8.和26.Gasparri,A.,等.,使用亲和素进行肿瘤预靶向提高了小鼠模型中生物素化肿瘤坏死因子α的治疗指数(Tumor pretargeting with avidin improves thetherapeutic index of biotinylated tumor necrosis factor alpha in mousemodels.)Cancer Res.1999.59:2917-23.)。预靶向方法也可以通过使用同时结合肿瘤抗原和经修饰的细胞因子的双特异性抗体进行两阶段过程。最近，有记载称使用针对癌胚抗原和TNF的双特异性抗体作为TNF肿瘤预靶向的手段(Robert,B.,等.,1996.使用针对癌胚抗原和肿瘤坏死因子α的双特异性抗体在肿瘤中靶向细胞因子(Cytokine targeting intumors using a bispecific antibody directed against carcinoembryonic antigenand tumor necrosis factor alpha.)Cancer Res.56:4758.)。
根据另一实施方式，本发明包括TNF分子与CD13配体和抗体或其片段(直接地或通过生物素-亲和素桥间接地)偶联，在不同的TNF亚基上，抗体或其片段针对在肿瘤细胞或其他肿瘤基质组分上表达的抗原，例如生腱蛋白和纤连蛋白EDB结构域。这导致经修饰的细胞因子的肿瘤归巢特性的进一步改善，以及其通过三聚体-单体-三聚体转变在肿瘤微环境中的缓慢释放。正如之前的工作所示，事实上，经修饰的TNF偶联物亚基可从靶向复合物中解离并重新结合，从而形成未经修饰的三聚TNF分子，然后在肿瘤微环境中扩散。已经证明生物活性TNF的释放发生在靶向后24-48小时内(Corti,A.,等.,生物素化肿瘤坏死因子α的肿瘤靶向：结构活性关系和对亲和素预靶向的肿瘤细胞的作用机制(Tumor targeting withbiotinylated tumor necrosis factor alpha:Structure activity relationships andmechanism of action on avidin pretargeted tumor cells.)Cancer Res.1998.58:3866-3872)。
本发明的肽可治疗性地给予患者。优选使用不仅由天然存在氨基酸组成而含有已经修饰的氨基酸的肽，例如为了降低免疫原性、为了增加在患者体内的循环半衰期、为了增强生物利用率和/或增强效力和/或特异性。
已经使用了许多方法来修饰多肽以用于治疗用途。一种方法是将肽或蛋白质连接到多种聚合物上，例如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)-见例如美国专利号5,091,176，5,214,131和US 5,264,209。
用多种非编码或经修饰的氨基酸例如D-氨基酸和N-甲基氨基酸替代天然存在氨基酸也可用于修饰肽。
另一种方法是使用双官能交联剂，例如N-琥珀酰亚胺3-(2吡啶基二硫)丙酸酯、琥珀酰亚胺6-[3-(2吡啶基二硫)丙酰胺基]己酸酯和磺基琥珀酰亚胺6-[3-(2吡啶基二硫)丙酰胺基]己酸酯(参见美国专利5,580,853)。
可能希望使用构象受限的本发明的肽的衍生物。构象限制是指肽所呈现的三维形状的稳定性和优选构象。构象限制包括局部限制，包括限制肽中单个残基的构象迁移；区域限制，包括限制一组残基的构象迁移，这些残基可能形成一些二级结构单元；和全局限制，涉及整个肽结构。
肽的活性构象可以通过共价修饰稳定，例如环化或通过掺入γ-内酰胺或其他类型的桥。例如，侧链可以环化到主链上，从而在相互作用位点的每一侧产生L-γ-内酰胺部分。通常参见，Hruby等.,"合成肽的应用(Applications of Synthetic Peptides),"于《合成肽:使用者指南》:259-345(W.H.Freeman&Co.1992)。环化也可以通过例如形成半胱氨酸桥、各个末端氨基酸的氨基和羧基末端基团的偶合、或Lys残基或相关同源物的氨基基团与Asp、Glu或相关同源物的羧基基团偶合来实现。也可以使用碘乙酸酐将多肽的α-氨基与赖氨酸残基的ε-氨基偶合来进行。参见Wood和Wetzel,1992,Int'l J.Peptide ProteinRes.39:533-39.
US 5,891,418中描述的另一种方法是在肽结构中包括金属-离子络合骨架。通常，优选的金属-肽主链基于给定络合金属离子的配位球所需的特定配位基团的必要数量。一般而言，可能证明有用的大多数金属离子的配位数为4到6。肽链中配位基团的性质包括具有胺、酰胺、咪唑或胍基官能团的氮原子；巯基或二硫化物的硫原子；和羟基、酚基、羰基或羧基官能团的氧原子。此外，肽链或单个氨基酸可以被化学改变以包括配位基团，例如肟、肼基、巯基、磷酸酯、氰基、吡啶基、哌啶基或吗啉基。肽构建体可以是线性的或环状的，然而通常优选线性构建体。小线性肽的一个例子是Gly-Gly-Gly-Gly，它在骨架中有四个氮(一种N4络合系统)，可以与配位数为4的金属离子络合。
改善治疗性肽特性的另一种技术是使用非肽类肽模拟物。多种有用的技术可用于阐明肽的精确结构。这些技术包括氨基酸测序、X射线晶体学、质谱、核磁共振光谱、计算机辅助分子建模、肽图及其组合。肽的结构分析通常提供大量数据，其中包括肽的氨基酸序列以及其原子成分的三维定位。根据该信息，可以设计非肽类肽模拟物，其具有治疗活性所需的化学功能但更稳定，例如对生物降解更不敏感。US 5,811,512中提供了这种方法的示例。
用于化学合成本发明的治疗性肽的技术在以上参考文献中进行了描述，并且还由Borgia和Fields，2000，TibTech 18：243-251进行了综述，并在其中包含的参考文献中进行了详细描述。
为了用于治疗，本发明的修饰的细胞因子将适当地配制成用于口服或肠胃外给药的药物制剂。肠胃外给药的制剂是优选的，它们包括可注射的溶液或悬浮液和用于输注的液体。对于肠胃外剂型的制备，将有效量的活性成分溶解或悬浮于无菌运载体中，任选地加入赋形剂例如增溶剂、等渗剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂或分散剂，然后将其分在密封的小瓶或安瓿中。
更详细地，本发明的偶联物，包括多肽和多核苷酸，可以优选地与各种组分组合以产生本发明的组合物。优选地，将组合物与药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂组合以产生药物组合物(其可以用于人类或动物用途)。合适的运载体和稀释剂包括等渗盐水溶液，例如磷酸盐缓冲盐水。赋形剂的详细信息可在以下中找到：《药用辅料手册》(TheHandbook of Pharmaceutical Excipients),第2版,Eds Wade&Weller,美国制药协会。本发明的组合物可以通过直接注射给药。该组合物可以配制用于肠胃外、肌肉内、静脉内、皮下、眼内、口服或透皮给药。
组合物可以配制成使得每天、每周或每个月给药提供所需日常剂量。应当理解，可以方便地配制组合物以降低给药频率，例如每2、4、6、8、10或12小时。
编码多肽组分的多核苷酸/载体可以作为裸核酸构建体直接给药，优选进一步包含与宿主细胞基因组同源的侧翼序列。
通过几种已知的转染技术(例如包括使用转染剂的那些)增强哺乳动物细胞对裸核酸构建体的吸收。这些试剂的实例包括阳离子试剂(例如磷酸钙和DEAE-葡聚糖)和脂质转染剂(例如lipofectamTM和transfectamTM)。通常，核酸构建体与转染剂混合以产生组合物。
优选地，本发明的多核苷酸或载体与药学上可接受的运载体或稀释剂组合以产生药物组合物。合适的运载体和稀释剂包括等渗盐水溶液，例如磷酸盐缓冲盐水。该组合物可以配制用于肠胃外、肌肉内、静脉内、皮下、眼内或透皮给药。
所描述的给药途径和剂量方案仅用作指导，因为熟练的从业者将能够容易地确定任何特定患者和病症的最佳给药途径和剂量方案。
以脂质体形式制备细胞因子可以提高其生物活性。事实上，已经观察到TNF氨基的酰化诱导其疏水性增加，而不会丧失体外生物活性。此外，据报道，与脂质结合的TNF具有不受影响的体外细胞毒性、免疫调节作用和降低的体内毒性(Debs,R.J.,等.,在中和抗肿瘤坏死因子抗体存在的情况下，脂质体相关的肿瘤坏死因子保持生物活性(Liposome-associated tumor necrosis factor retains bioactivity in the presence ofneutralizing anti-tumor necrosis factor antibodies.)J.Immunol.1989.143:1192-7；Debs,R.J.,等.,游离和脂质体包裹的肿瘤坏死因子α在大鼠中的免疫调节和毒性作用(Immunomodulatory and toxic effects of free and liposome-encapsulated tumornecrosis factor alpha in rats.)Cancer Res.1990.50:375-80)。
人体推注TNF的最大耐受剂量为218-410pg/m2(32.Fraker,D.L.,Alexander,H.R.&Pass,H.I.,1995.TNF的生物治疗：全身给药和隔离灌注(Biologic therapy withTNF:systemic administration and isolation-perfusion.)在癌症的生物治疗中原则和实践(In Biologic therapy of cancer.principles and practice),De Vita,V.,Hellman,S.和Rosenberg,S.(编)pp.329-345.J.B.Lippincott Company:Philadelphia.)比动物中的有效剂量低约10倍。基于来自鼠模型的数据，据信在人体内实现抗肿瘤效果需要至少10倍以上的剂量(Schraffordt Koops,等.,超热的孤立肢体灌注肿瘤坏死因子和美法仑作为四肢局部晚期或复发性软组织肉瘤的治疗(Hyperthermic isolated limbperfusion with tumour necrosis factor and melphalan as treatment of locallyadvanced or recurrent soft tissue sarcomas of the extremities),Radiothepray&Oncology 1998.48:1-4；Hill,S.,等.,高热离体肢体灌注中的低剂量肿瘤坏死因子α和美法仑(Low-dose tumour necrosis factor alpha and melphalan inhyperthermicisolated limb perfusion.)Br.J.Sugr.1993.80:995-7；Eggermont,A.M.,等.,186例局部晚期软组织肢体肉瘤患者采用肿瘤坏死因子和美法仑进行离体肢体灌注保肢(Isolatedlimb perfusion with tumor necrosis factor and melphalan for limb salvage in186patients with locally advanced soft tissue extremity sarcomas.)Thecumulative multicenter European experience.Ann.Surg.1996.224:756-65)。在超热离体肢体灌注的一期临床研究中，用单剂量的4mg TNF与美法仑和干扰素y组合获得了高缓解率(Lienard,D.,等.,用高剂量rTNFα组合干扰素-γ和美法仑在隔离灌注中治疗的恶性黑色素瘤的中途转移(In transit metastases of malignant melanoma treated by highdose rTNF alpha in combination with interferon-gamma and melphalan inisolation perfusion.)World Journal of Surgery 1992.16:234-40)。其他研究表明，干扰素y可以省略，甚至更低剂量的TNF也足以诱导治疗反应(Hill,S.,等.,低剂量肿瘤坏死因子α和美法仑在高热离体肢体灌注中(Low-dose tumour necrosis factor alpha andmelphalan in hyperthermic isolated limb perfusion.)Br.J.Sugr.1993.80:995-7；Eggermont,A.M.,等.,用肿瘤坏死因子和美法仑对186名局部晚期软组织肢体肉瘤患者进行肢体挽救的孤立肢体灌注(Isolated limb perfusion with tumor necrosis factorand melphalan for limb salvage in 186patients with locally advanced softtissue extremity sarcomas.)The cumulative multicenter Europeanexperience.Ann.Surg.1996.224:756-65)。由于这两种细胞因子对内皮细胞发挥协同作用，它们的组合选择性靶向其上可能会产生更强的抗肿瘤活性，从而克服癌症治疗中以相同细胞因子组合使用常遇到的全身毒性问题。此外，已知TNF可以降低内皮衬里(lining)血管的屏障功能，从而增加它们对大分子的透过性。利用根据本发明经修饰的TNF分子治疗毒性更低的优势，以及它们的肿瘤血管归巢特性，替代应用是它们用于治疗或诊断目的增加肿瘤血管对其他化合物的透过性。例如，在肿瘤的放射免疫显像或放射免疫疗法中，经修饰的TNF可用于增加肿瘤对放射标记的抗体或激素(肿瘤成像化合物)的吸收。或者，也可以增加化疗药物、免疫毒素、携带药物或基因的脂质体或其他抗癌药物的吸收，从而增强它们的抗肿瘤作用。
因此，本发明的细胞因子可以以组合、分离或连续制剂的形式使用，还可以与其他诊断或治疗物质一起用于癌症的治疗或诊断。
本发明涉及经修饰的TNF和IFNy组合的使用。该组合可以组合、分离或连续制剂的形式使用。有利地，该组合还与其他诊断或治疗物质一起用于癌症的治疗或诊断，例如多柔比星和美法仑。因此，本发明提供了药物组合物，包含经修饰的TNF和IFNy以及任选地另一种肿瘤诊断或抗肿瘤治疗物质的组合。同样，该组合可以组合、分离或连续制剂的形式使用。
在专利申请号PCT/IB03/02187中，发现靶向递送皮克剂量的细胞因子增强化疗药物的渗透，为增加化疗药物治疗指数提供了新颖且令人惊讶的策略。专利申请号PCT/IB03/02187通过引用全文纳入本文。更详细地，发现向肿瘤和包括肿瘤脉管的肿瘤相关微环境递送非常低剂量的细胞因子代表了一种新方法，以避免负反馈机制并保持其改变药物渗透屏障的能力。
本发明的组合物可以配制用于肠胃外、肌肉内、静脉内、皮下、眼内、口服或透皮给药。在本发明的该方面的一个实施方式中，本发明的偶联物可以在0.5至500ng/kg范围内的剂量给药，优选1至50ng/kg范围内，更优选为5至15ng/kg范围内。
在本发明的该方面的另一个实施方式中，提供了药物组合物，其包含本发明的偶联物与IFNy组合，其中该偶联物存在的量使得该偶联物或其代谢物提供给待治疗的对象血浆的量不高于约35000ng/天，优选约3500ng/天，更优选约1000ng/天。
上述剂量涉及70kg对象的剂量。本领域技术人员将能够容易地调整体重不是70kg的对象的所述剂量。
所描述的给药途径和给药方案仅用作指导，因为熟练的从业者将能够容易地确定任何特定患者和病症的最佳给药途径和给药方案。
本发明的另一方面涉及编码本文公开的偶联的细胞因子的cDNA，其可以通过由细胞因子cDNA添加编码CD13配体(优选编码上述归巢肽)的5’-或3’-连续DNA序列制备。组合的cDNA可原样使用或插入载体后用于基因治疗。合适的载体的制备和治疗应用公开于(Mizuguchi,H.,等.,通过体内基因转移肿瘤坏死因子α到导致肿瘤的动脉中介导的肿瘤消退(Tumor necrosis factor alpha-mediated tumor regression by the in vivotransfer of genes into the artery that leads to tumor.)Cancer Res.1998.58:5725-30.)，其通过引用纳入本文。
用于本发明的多核苷酸包含编码本发明的多肽偶联物的核酸序列。技术人员将会理解，由于遗传密码的简并性，许多不同的多核苷酸可以编码相同的多肽。此外，应当理解，技术人员可以使用常规技术进行不影响本发明的多核苷酸编码的多肽序列的核苷酸取代，以反映其中表达本发明的多肽的任意特定宿主生物的密码子使用。
本发明的多核苷酸可包含DNA或RNA。它们可以是单链或双链。它们可以是多核苷酸，其中包含合成的或修饰的核苷酸。对寡核苷酸的许多不同种类的修饰是本领域已知的。这些包括甲基膦酸酯和硫代磷酸酯骨架，在分子的3'和/或5'末端添加吖啶或聚赖氨酸链。出于本发明的目的，应当理解本文所述多核苷酸可通过本领域可用的任何方法进行修饰。可以进行此类修饰以增强本发明的多核苷酸的体内活性或寿命。
本发明的多核苷酸可被纳入重组可复制载体。载体可用于在相容的宿主细胞中复制核酸。因此在另一个实施方式中，本发明提供了制备本发明的多核苷酸的方法，通过向可复制载体引入本发明的多核苷酸，向相容的宿主细胞引入载体，并在引起载体复制的条件下培养宿主细胞。载体可以从宿主细胞中回收。合适的宿主细胞包括细菌例如大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞系和其他真核细胞系，例如昆虫Sf9细胞。
优选地，载体中的本发明的多核苷酸可操作地连接至能够提供宿主细胞表达编码序列的控制序列，即该载体是表达载体。术语“可操作地连接”意为所述的组分处于允许它们以目标方式发挥功能的关系中。调控序列“可操作地连接”至编码序列是以在与控制序列相容的条件下完成编码序列表达的方式连接。
控制序列可以被修饰，例如通过添加其他转录调控元件以使受控制序列指导的转录水平对转录调节剂更有响应。
本发明的载体可以转化或转染到如下所述的合适的宿主细胞中以提供本发明的蛋白质的表达。该过程可包括，在供给编码蛋白质的编码序列的载体的表达的条件下培养用如上所述的表达载体转化的宿主细胞，并且任选地回收表达的蛋白质。
载体可以是例如质粒或病毒载体，具备复制起点、任选地用于表达所述多核苷酸的启动子和任选地启动子的调节子。载体可包含一种或多种可选择标志物基因，例如在细菌质粒的情况下是氨苄青霉素抗性基因，或在哺乳动物载体中是新霉素抗性基因。载体可用于，例如，转染或转化宿主细胞。
控制序列可操作地连接至编码本发明的蛋白质的序列，包括启动子/增强子和其他表达调控信号。可选择这些控制序列以与表达载体设计用于的宿主细胞相容。术语“启动子”是本领域众所周知的，且涵盖的核酸区域大小和复杂性范围从最小启动子到包含上游元件和增强子的启动子。
尽管可以使用原核细胞启动子和其他真核细胞中的功能性启动子，启动子通常选自哺乳动物细胞中的功能性启动子。启动子通常来源于病毒或真核基因的启动子序列。例如，它可以是源自其中将要发生表达的细胞的基因组的启动子。关于真核启动子，它们可以是以遍在的方式(例如a-肌动蛋白、b-肌动蛋白、微观蛋白)或者是以组织特异性的方式(例如丙酮酸激酶基因的启动子)起作用的启动子。也可以使用特异针对某些细胞的组织特异性启动子。它们也可以是对特定刺激作出响应的启动子，例如结合类固醇激素受体的启动子。也可以使用病毒启动子，例如莫洛尼鼠白血病病毒长末端重复(MMLV LTR)启动子，劳氏肉瘤病毒(RSV)LTR启动子或人巨细胞病毒(CMV)IE启动子。
诱导型启动子也可能是有利的，使得异源基因的表达水平可在细胞的寿命期间内被调节。诱导型是指使用该启动子获得的表达水平可以被调节。
此外，这些启动子中的任何一个都可以通过添加其他调节序列来修饰，例如增强子序列。还可以使用嵌合启动子，其包含来自上述两种或更多种不同启动子的序列元件。
可将本发明的载体和多核苷酸导入宿主细胞，以复制载体/多核苷酸和/或表达由本发明的多核苷酸编码的本发明的蛋白质。
虽然本发明的蛋白质可以使用原核细胞作为宿主细胞生产，但优选使用真核细胞，例如酵母、昆虫或哺乳动物细胞，特别是哺乳动物细胞。
本发明的载体/多核苷酸可使用本领域已知的多种技术导入合适的宿主细胞，例如转染、转化和电穿孔。当本发明的载体/多核苷酸将要给予动物时，有几种本领域已知的技术，例如用重组病毒载体如逆转录病毒，单纯疱疹病毒和腺病毒感染，直接注射核酸和基因枪转化。
包含本发明的多核苷酸的宿主细胞可用于表达本发明的偶联物。宿主细胞可在允许本发明的多肽和偶联物的表达的合适条件下培养。本发明产物的表达可以是组成型的，使得它们是连续产生的，或诱导型的，需要刺激以起始表达。在诱导型表达的情况下，可在需要时通过例如向培养基中添加诱导物质(例如地塞米松或IPTG)来起始蛋白质生产。
本发明的偶联物可通过本领域已知的多种技术从宿主细胞中提取，包括酶、化学和/或渗透裂解和物理破碎。
通过参考下图非限制性实施例阐述本发明。
图1：总体试验设计。提供了两个阶段的终点和统计的详细情况。由于组织和临床原因，NGR-hTNF/RCHOP方案在两个阶段是不同的。
图2：探索阶段设计(前十例患者)。入组的患者接受第一个疗程的R-CHOP治疗，其不在NGR-hTNF之后，而其他五个疗程都在NGR-hTNF之后进行。脑部MRI代表用于缓解评估的钆增强磁共振成像，而DCE-MRI是用于评估BBB透过性变化的脑动态对比增强MRI。SPECT是在第三疗程之前和之后进行的单正电子发射计算机断层扫描，以评估BBB透过性的变化。箭代表CSF和血浆样品的采集。
图3：扩大阶段设计(第二批18例患者)。入组患者接受6个疗程的NGR-hTNF/R-CHOP。脑部MRI代表用于缓解评估的钆增强磁共振成像。箭代表基线CSF和血浆样品的采集。
图4：通过DCE-MRI评估缓解者的BBB透过性改变。增强区域的变化显示在左侧和右侧的病灶周区域中，结果示于Ktrans中。每位患者在第一个疗程(无NGR-hTNF)和第二个疗程(有NGR-hTNF)的值用线相连。每个亚组的中位数和范围值报告于每个图的底部。
图5：在第三个治疗疗程中在输注NGR-hTNF随后R-CHOP之后99mTc-DTPA摄取增加的实例。在NGR-hTNF和R-CHOP给药之前(左图-蓝线)和之后(中图-绿线)进行的两个SPECT研究示出了≥30％99mTc-DTPA摄取体积的轮廓。轮廓体积的对比示于钆增强T1-加权MRT显示的肿瘤(右图)中。NGR-hTNF/R-CHOP递送之前和之后的感兴趣的体积分别为22cm3和40cm3。
图6：肿瘤脉管的内皮衬里表达CD13。A)入组患者的诊断性脑活检的淋巴瘤组分中CD13表达的免疫组化分析。使用抗-CD13单克隆抗体SP187单独进行染色(棕色信号，400x)。B)CD13和αSMA(周细胞标志物)的免疫组化分析。用抗-CD13单克隆抗体SP187(棕色)和抗-αSMA单克隆抗体1A4(红色)进行共染。黑色箭指示CD13-阳性血管；黄色箭指示αSMA-阳性血管周细胞(比例尺20μm；630X)。左图：具有周细胞覆盖(红色)和一些微血管的大血管区域的代表性图像，在没有周细胞的情况下也显示CD13染色(棕色)。右：具有多个CD13阳性微血管(棕色)的区域的代表性图像。C-D)对用多克隆抗-CD13抗体(绿色)和用抗-αSMA抗体1A4(红色)染色的组织切片进行共聚焦免疫荧光分析(400x,比例尺:50μm)。插图：成熟血管(星号)的CD13和αSMA染色的3D投影(400x,比例尺:25μm)显示CD13在血管内皮的腔侧表达。
图7：NGR-hTNF之后R-CHOP的缓解实例。
A)钆增强T1加权扫描显示，一位65岁男性在基于高剂量异环磷酰胺挽救加全脑辐照后和高剂量甲氨蝶呤后第二次复发时，右侧顶叶(箭)有一个大而均匀的增强病灶。B)在四个疗程的实验性治疗后肿瘤消退。C)钆增强T1加权扫描显示，在一位之前抵抗基于高剂量甲氨蝶呤的化学免疫疗法的39岁男性PCNSL患者中，一个大的多叶状体(polylobate)，增强了浸润基底神经节、间脑和左颞叶(箭)的病灶。D)在四个疗程的实验性治疗后肿瘤消退。
图8：嗜铬粒蛋白A(CgA)血浆水平、PPI治疗和缓解
A)CgA血浆水平和对NGR-hTNF/R-CHOP缓解之间的关系。显示了获得完全缓解的患者(n＝12)和未获得完全缓解的患者(其他,n＝16)的CgA基线血浆水平。CgA水平的中值(范围)分别为1.14Nm(0.29-2.72)和2.10nM(0.47-5.81),(p＝0.066)。
B&C)质子泵抑制剂(proton pomp inhibitors)(PPI)中断之后CgA血浆水平变化。试验注册时(基线)和第3个疗程前(2个月)收集的血浆样本中CgA浓度的比较显示，在PPI中断后，一些患者的水平降低(B)，而未接受该药物的患者的值保持稳定(C)。在达到完全缓解(实线)或部分缓解(虚线)的患者之间未检测到差异。
图9：内皮细胞和周细胞在原发性CNS淋巴瘤脉管系统中表达CD13
两名入组患者的PCNSL组织切片用多克隆抗CD13-抗体(绿色)和多克隆抗-CD31(一种内皮细胞标志物)(红色)染色，进行高分辨率宽视野共免疫荧光分析。核用DAPI染色(蓝色)。
A-C)带有CD13-阳性内皮细胞(箭，合并图中的黄色)和CD13阳性壁细胞(箭头，绿色，可能是周细胞)的血管示例。另外分图A中所示血管图像的Z堆栈参见补充影片1。
B)中图：示于左图中的血管突出显示区域(虚线矩形)的电子放大。B)右图：仅使用二抗在连续切片上进行的对照，显示缺乏染色。
D)带有CD13-阳性壁细胞和CD13-阴性内皮细胞的血管示例(合并图中分别为绿色和红色，箭头和箭)。比例尺，5μm；放大倍数示于每个图中。
图10：在PCNSL脉管中CD13和PDGFRβ的表达
入组患者的PCNSL组织切片用多克隆抗CD13-抗体(绿色)和多克隆抗-PDGFR(一种周细胞标志物)(红色)染色，进行高分辨率宽视野共免疫荧光分析。核用DAPI染色(蓝色)。显示了3个不同的血管的代表性染色。放大倍数，60X；比例尺，10μm。
发明详述
患者和方法
研究群体和选择标准
该“INGRID”研究是一项专注于实验性治疗的单臂II期试验，该治疗在患有复发或难治性PCNSL的HIV-阴性患者中由6个疗程的NGR-hTNF输注之后R-CHOP组成(EUDRACT:2014-001532-11–clinicaltrials.gov NCT03536039)。该试验有两个单独的部分(图1)：第一部分聚焦于NGR-hTNF在BBB透过性上的效果的可行性和“原理论证”；第二部分聚焦于实验性治疗的活性和耐受性。选择标准为：1)根据WHO标准17经组织学证实的DLBCL诊断；2)在首次诊断和试验注册时仅局限于CNS、颅神经、脑膜和/或眼睛的疾病；3)既往含高剂量甲氨蝶呤的化疗后复发或难治性淋巴瘤；4)可测量的疾病；5)年龄18-80岁；6)ECOG表现状态评分≤3。排除了既往器官移植或其他形式的免疫抑制、患有HBV、HCV和/或HIV感染或其他恶性肿瘤的患者。在先前治疗线期间接受任何类型的巩固治疗(即全脑放疗-WBRT-、自体干细胞移植-ASCT-、口服药物维持)。试验注册前，对诊断和复发时进行的组织病理学诊断样本和神经影像学检查进行集中评估，并通过体格和神经学检查，血象和生化血清谱(包括病毒标志物：HIV、HBV、HCV)，超声心动图，增强颈部、胸部和腹部CT扫描，骨髓活检，对比增强脑MRI，CSF检查，眼科评估和18FDG-PET对患者进行评估。根据诊断和试验注册时的IELSG评分定义风险18。确认合格后和患者审查方案内容后，获得每一位患者的书面知情同意书。该试验符合赫尔辛基宣言，并由意大利米兰圣拉斐尔科学研究所的IRB批准。
探索阶段：设计和治疗
探索阶段的设计总结于图2。前10位入组的患者接受第一个疗程的R-CHOP治疗，其不在NGR-hTNF之后，而其他五个疗程都在NGR-hTNF之后进行(表1)。
表1：用于探索阶段和扩大阶段的治疗方案
Figure BDA0003166427220000201
Figure BDA0003166427220000211
换言之，入组患者接受了6个疗程的NGR-hTNF之后的R-CHOP21。在两天内递送治疗：在第1天提供375mg/m2的利妥昔单抗，在第2天，CHOP药物前2小时，通过1小时输注递送0.8μg/m2剂量的NGR-hTNF。根据协议，前十名患者在R-CHOP的第一个疗程之前没有使用NGR-hTNF14。NGR-hTNF的时间和给药时间表的基本原理先前已报道14。因此，进入扩大阶段的患者(在前10个群组之后)接受了六个疗程的NGR-hTNF后R-CHOP。每次开始输注NGR-hTNF前30至60分钟，口服或静脉递送对乙酰氨基酚/扑热息痛1.000mg以预防输注相关反应。除了五天的泼尼松之外，避免使用类固醇，并且当有临床指征时，在NGR-hTNF输注当天中断。在试验注册时避免使用PPI治疗并用H2受体阻滞剂(即雷尼替丁)代替。
完成六个计划的疗程并获得完全(CR)或部分(PR)缓解的患者接受巩固治疗评估。根据方案，并相应于先前的治疗，允许进行WBRT 30-36Gy、卡莫司汀-噻替哌-调节的ASCT或口服来那度胺(lenalidomide)维持。
扩大阶段
Figure BDA0003166427220000212
R-CHOP以常规剂量递送：第0天静脉输注375mg/m2利妥昔单抗，随后在第1天静脉推注750mg/m2环磷酰胺，静脉推注50mg/m2多柔比星，以及静脉推注1.4mg/m2长春新碱(上限2mg)；第2-6天口服泼尼松75mg/d。在CHOP之前2小时，通过1小时输注递送0.8μg/m2 NGR-hTNF。避免使用质子泵抑制剂治疗，因为这些药物会增加嗜铬粒蛋白水平并最终干扰NGR-hTNF活性。允许使用H2受体阻滞剂(即雷尼替丁)作为胃保护疗法。除了五天的泼尼松之外，避免使用类固醇，并且当有临床指征时，在NGR-hTNF输注当天中断。
扩大阶段：设计和治疗
扩大阶段的设计总结于图3。其他18位入组患者(在前10位之后)接受了6个疗程的NGR-hTNF之后的R-CHOP(表1)。其他区别在于所有药物在一天内的递送，即：静脉内(IV)输注375mg/m2利妥昔单抗，然后1小时输注0.8μg/m2 NGR-hTNF，并在2小时后递送CHOP药物(静脉推注750mg/m2环磷酰胺，静脉推注50mg/m2多柔比星和静脉推注1.4mg/m2长春新碱[上限2mg]；第2-6天口服泼尼松75mg/d)。质子泵抑制剂和类固醇的使用遵循与上述相同的建议。在探索或扩大阶段完成六个计划的疗程并获得完全(CR)或部分(PR)缓解的患者接受巩固治疗评估。根据方案，并相应于先前的治疗，允许进行WBRT 30-36Gy、卡莫司汀-噻替哌-调节的ASCT或口服来那度胺(lenalidomide)维持。
药物
利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松是任意市售或其他形式可得的。
NGR-hTNF
基因工程改造的蛋白质，其由CNGRCG融合到人肿瘤坏死因子α的N端的序列组成：
CNGRCGVRSSSRTLSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL(SEQ ID No.1)
在大肠杆菌细胞中表达。
NGR-hTNF类似物描述于WO 2004/041297和WO 01/61017，其通过引用纳入本文。
毒性和缓解评估
分别评估每个化疗疗程的治疗副作用，并根据NCI-NCIC CTC 3·0版本19分级。考虑了每种器官、每位患者的最严重毒性。在每个疗程前进行定期专科医师对照、ECG、肌钙蛋白水平测定和超声心动图以排除心脏毒性。治疗对认知功能的影响还未通过专设测试进行评估。
考虑所有合格患者进行缓解评估。在第1、2、4和6个疗程后，通过在1.5特斯拉扫描仪上进行脑部钆增强MRI评估缓解(图2和3)。在CSF和/或玻璃体同时阳性的情况下，在第2、4和6个疗程后进行检查。根据IPCG标准20定义缓解(表2)。
表2：国际PCNSL协作组缓解标准
Figure BDA0003166427220000231
CR＝完全缓解；Cru＝未确认的完全缓解；RPE＝视网膜色素上皮；PR＝部分缓解；PD＝进展性疾病
简而言之，CR由所有淋巴瘤证据的消失组成；PR是肿瘤大小减少>50％；进展性疾病(PD)是肿瘤大小增加>25％或检测到任何新病灶；所有其他情况都被认为是稳定的疾病(SD)。作为IPCG标准的一个重要变化，只有在连续两次MRI确认肿瘤消退时才认为是“缓解”；因此，每次“缓解”需要至少6-8周的时间。R-CHOP第一个疗程后的缓解并没有推动治疗决策，而在后续MRI中任何一次出现PD的患者被视为“脱出研究”并根据机构指南进行治疗。从治疗开始记录的最大缓解被考虑用于分析。缓解持续时间是从最大缓解日期测量到客观进展日期、任何原因死亡或最后一次随访的日期。治疗结束后，每3个月评估一次疾病。
生物标志物评估
在肿瘤缓解评估的相同时间点收集的样品进行ELISA，测试CgA和sTNF-R1和-R2的血浆水平。
在肿瘤缓解评估的相同时间点收集的样本上测试CgA和sTNF-R(受体1和2)的血浆水平，即在第一个疗程之前，以及在第二个和第六个疗程之后。使用市售试剂盒(DuoSetELISA，R&D系统公司(R&D Systems))测试sTNF-R。基于在捕获步骤中使用单克隆抗体B4E11和在检测步骤中使用抗-CgA兔抗血清，通过使用自制的ELISA试剂盒21来评估CgA血浆水平。
PPI治疗(是与否)与CgA血浆水平(连续变量)和(连续变量)之间的关系通过曼-惠特尼U检验进行评估。通过卡方检验评估治疗反应(CR与非CR)与CgA或sTNF-R血浆水平之间的关系，使用截止值来区分具有“低”和“高”血浆水平的亚组；根据ROC曲线选择截止值。
CgA或sTNF-R的血浆水平(连续变量)与治疗反应(CR与非CR)和PPI治疗(是与否)之间的关系通过曼-惠特尼的U检验进行评估。
为了表征CD13(NGR的靶标)在PCNSL脉管系统中的表达，我们在注册患者的肿瘤组织切片上进行了双重免疫荧光染色实验，用抗-CD13和抗-CD31(内皮细胞标志物)抗体，以及用抗-CD13和抗血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β；周细胞标志物)抗体。
免疫荧光研究
在注册患者的诊断样品的石蜡包埋样本(10μm厚)上通过免疫荧光技术评估肿瘤组织中CD13、CD31和血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)的表达。抗原修复后，进行免疫荧光染色，使用抗-CD13/APN兔多克隆抗体(1051-RP02,SinoBiological,1:500)、抗-CD31/PECAM-1绵羊多克隆抗体(内皮细胞标志物，AF806，R&D系统公司，15μg/ml)，和抗-PDGFR-β山羊多克隆抗体(周细胞标志物，AF385，R&D系统公司，10μg/ml)。抗体用含有1％BSA、5％正常马血清、0.1％Triton X-100的PBS稀释，并在4℃下孵育过夜。洗涤后，使用由驴抗-兔IgG-Alexa Fluor 488(绿色，4μg/ml)和驴抗-绵羊IgG-Alexa Fluor 568(红色，4μg/ml)偶联物组成的二抗混合物检测抗-CD13和抗-CD31抗体的结合，用于CD13和CD31的双重染色。使用由驴抗-兔IgG-Alexa Fluor 488(绿色，4μg/ml)和驴抗-山羊IgG-Alexa Fluor 546(红色，4μg/ml)偶联物组成的二抗混合物检测抗-CD13和抗-PDGFR-β抗体的结合，用于CD13和PDGFRβ的双重染色。核用DAPI染色(蓝色)。使用高分辨率宽视野显微镜(DeltaVisionTMUltra，GE医疗公司(GE Healthcare)，配备40X/1.35、60X/1.42和100X/1.4物镜获取荧光信号。Z-堆栈采集以0.2μm和0.3μm的间隔(分别为100X物镜和40X或60X物镜)进行。使用内置软件解卷积并处理Z堆栈。使用Image J软件从Z堆栈中提取图像。
统计考虑
总体缓解率(ORR：CR和PR)是主要终点，使用两阶段Simon Minimax设计。考虑为低兴趣的最大ORR为30％(与之前的前瞻性试验中报告的比率类似，其聚焦于在发明机构进行的PCNSL患者的挽救治疗22,23)，考虑为感兴趣的最小ORR为50％；为了证明这种差异，总共需要28名患者(单侧检验；I类错误.10；功效.9)。第一步，将注册12名患者，如果观察到至少4例有缓解，则研究将持续到总共28名患者。如果记录到至少12个有缓解，则将宣布实验治疗有效。费舍尔精确检验解决了缓解与临床和治疗变量之间的关联。分析的变量为年龄(≤60岁与>60岁)、LDH血清水平(正常与高)、CSF蛋白浓度(正常与高)、疾病位点(外周与深部)、先前的治疗线(1与2-3)、先前巩固(无与WBRT和/或ASCT)、失败类型(复发与难治性疾病)。
缓解持续时间、PFS、OS和耐受性是次要终点。缓解持续时间定义为从第一次记录缓解的评估到复发日期、任何原因死亡日期或最后一次随访日期的时间。PFS定义为进入试验与失败(复发或疾病进展)、任何原因的死亡或最后一次随访日期之间的时间间隔。OS定义为从进入试验到任何原因的死亡或最后一次随访日期的时间。根据NCI CTCAE19，耐受性由3-4级AE定义。
通过神经显像评估BBB透过性
通过DCE-MRI评估在淋巴瘤病灶、肿瘤周围区域(病灶周区域)和正常形态的脑实质中的水平以评估NGR-hTNF引起的BBB通透性的变化。DCE采集遵循标准方案28，其还包含常规的T1、T2、Flair、DWI和动态敏感性对比灌注(DSC)序列。如图5所示，在第1疗程(单独的R-CHOP)、第2疗程(NGR-hTNF在先的R-CHOP的第一个疗程)和第6疗程(NGR-hTNF在先的R-CHOP的最后一个疗程)的第0天(治疗前-基线数据)和第1天(治疗后)进行常规MRI研究内的DCE-MRI。在多个病灶的情况下，考虑最大的一个。使用Olea软件(La Ciotat，法国)进行DCE-MRI的后处理；所有动态图像都针对运动伪影进行了校正，并与体积的后对比T1序列共同配准。结果表示为使用对侧白质标准化的Ktrans值。将第2个疗程后获得的Ktrans(在NGR-hTNF输注后测量)与第1个疗程(无NGR-hTNF)后获得的值进行比较，以确定TNF对BBB透化的影响。通过威尔科克森配对检验评估统计学显著性。
通过SPECT评估BBB透过性
NGR-hTNF诱导的BBB透过性变化也通过脑闪烁扫描法进行评估。由于其亲水性，99mTc-二亚乙基-三胺-五乙酸(99mTc-DTPA)仅渗透破坏的BBB，扩散到改变的组织中，并通过尚未阐明的机制结合。脑病灶水平的示踪剂摄取量与BBB透化程度成比例地增加。在第三个疗程之前的几天(中值4天，范围1-6)和第三个疗程结束后(paBS)在基础条件(bBS)下获得两次脑闪烁扫描(图2)。静脉推注注射大约555-740MBq的99mTc-DTPA。90-120分钟后，使用配备一对低能量、高分辨率准直器的双头γ相机进行SPECT/CT研究。对bBS和paBS都进行了定性和半定量评估。具体来说，对于半定量评估，使用PMOD软件(版本3.2，PMOD技术股份有限公司(PMOD Technologies)，瑞士)评估99mTc-DTPA摄取体积。通过自动等值线法在99mTc-DTPA阳性区域周围绘制了最大吸收30％的感兴趣体积。通过威尔科克森配对检验评估bBS和paBS之间99mTc-DTPA摄取体积变化的统计学显著性。
CNGRCG肽(CD13)靶受体的表达
NGR-hTNF的CNGRCG部分可以识别肿瘤血管表达的CD13形式，从而将TNF靶向递送至肿瘤内皮。在入组患者的诊断组织样品的石蜡包埋标本上，通过免疫组织化学和免疫荧光技术评估这种CD13形式在经治疗的肿瘤中的存在。CD13表达不对试验或实验治疗中的患者注册有影响。
使用免疫染色仪Ventana-Roche Ultrabenchmark XT、抗-CD13单克隆抗体(mAb)SP187和抗-α-平滑肌肌动蛋白(αSMA-周细胞标记物)mAb1A4(西格玛(Sigma)，10μg/ml)自动进行免疫组织化学分析。抗原修复后，使用抗-CD13多克隆抗体(1051-RP02，SinoBiological，1:500)和抗-αSMA抗体(mAb 1A4，西格玛，10μg/ml)在1％BSA、5％正常马血清、0.1％Triton X-100的PBS中进行免疫荧光染色。孵育过夜后，使用由驴抗-兔IgG-Alexa Fluor 488(绿色)(4μg/ml)和驴抗-小鼠IgG-Alexa Fluor 647(红外)(4μg/ml)偶联物组成的二抗混合物检测抗体结合。核用DAPI染色(蓝色)。使用配备40x/0.4物镜、导航模块和LASX采集软件的倒置点扫描共聚焦SMD-SP8莱卡微系统获取荧光信号。
结果
可评估的研究群体
在2016年5月和2018年12月间，注册了28位患者。可评估所有患者的效果和耐受性。28位评估患者的中位年龄为58岁(范围为26-78)；14名为男性(表3)。
表3：患者特征(n＝28)
Figure BDA0003166427220000281
Figure BDA0003166427220000291
*6名患者禁用腰椎穿刺；CSF蛋白浓度被认为是这些患者IELSG风险评分的不利特征。
大多数患者在试验注册时具有不利特征：23位(82％)患者具有中高IELSG风险评分，15位患者的ECOG-PS≥2，11名患者的LDH血清水平升高，11位患者的CSF蛋白浓度高，12位患者大脑深部区域受累。所有患者均显示脑实质病灶，3个伴有眼内疾病；没有患者患有脑膜疾病。患者接受了大量的预处理；10名患者接受了两条或更多的在先治疗线；17(61％)名患者接受了ASCT、WBRT或两者。15名(54％)患者的淋巴瘤对在先治疗是难治性的。
毒性
实验性治疗耐受良好(表4)。
表4：每个疗程的毒性
Figure BDA0003166427220000292
Figure BDA0003166427220000301
报道除了脱发以外的所有毒性事件。分母是已递送的疗程的总数(n＝132)。LVEF＝左心室射血分数。*发烧(n＝4),寒战(4),动脉高压(1)。
168项计划疗程中的132项(79％)已经递送。没有出现意外毒性或因毒性而中断的情况，且没有患者需要减少剂量。由于血细胞减少症，仅在6个(4％)疗程中记录了治疗延迟。在12名患者中记录了16次严重不良事件：癫痫发作(3)、深静脉血栓形成(2)、3级感染(5)、3级晕厥(2)、3级便秘、4级发热性中性粒细胞减少症、肺曲霉病和2级左心室功能降低。NGR-hTNF输注反应9例；发热(4)、寒战(4)和动脉高压均为1-2级，在输注中断15分钟并对症用药后解决。依照方案，延迟输注并在1小时后完成。这些患者接受了符合方案预防的其他NGR-hTNF/R-CHOP疗程，而没有经历任何进一步的输液反应。12名患者需要输血/血小板(其中7名先前接受过ASCT)。
活性(主要终点)
11名患者对NGR-hTNF/R-CHOP组合的最佳缓解是完全的(图7中示例)，10名是部分缓解，ORR为75％(95％CI＝59-91％)；7名患者经历了PD。基本上达到了至少12个缓解的预定活性阈值。14名患者在第2个疗程后获得了最佳缓解，7名患者在第4个疗程后获得。根据IELSG风险变量、病灶位点和数量、在先治疗和难治性，缓解在分析的亚组中平均分布(表5)。
表5：缓解与临床和治疗变量之间的关联
Figure BDA0003166427220000311
1费舍尔精确检验。
21名缓解的患者中有17名接受了巩固治疗：7名患者接受了WBRT，5名接受了ASCT，1名接受了来那度胺维持治疗，4名接受了这些疗法的组合。三名患有眼内疾病的患者中有两名在该部位实现了肿瘤消退，并且在随访3个月和28个月时未经历玻璃体内复发。在所有完全缓解者中缓解持续了超过6个月(中位数10个月，范围为6-19个月)。在中位随访16个月(范围9-26)，5名患者仍然无复发且6名患者存活。
NGR-hTNF抑制剂(生物标志物评估)
在试验注册时的血浆CgA水平与CR率之间观察到近乎显著的关联(p＝0.066)(图8A)。当患者被分组为具有“低”和“高”CgA水平时，使用ROC驱动的1.4nM截止值，我们分别观察到8/13和3/15名患者实现了CR(62％vs.20％；p＝0.05)。值得注意的是，试验注册时CgA的血浆水平与先前类固醇治疗期间的PPI假设有关。不使用PPI(n＝14)和PPI治疗(n＝14)的患者中，CgA的中位血浆水平分别为1.05nM(范围为0.29-3.27)和2.26nM(范围为0.33-7.99；p＝0.008)。在PPI中断后，一些患者的CgA浓度逐渐降低(图8B)，而未接受该药物的患者的值保持稳定(图8C)。
试验注册时sTNF-R1和sTNF-R2的中位血浆水平分别为0.66(范围为0.32-4.88)和2.14(范围为0.98-7.26)nM。sTNF-R浓度与对NGR-hTNF/R-CHOP的缓解无关，在PPI中断后没有变化并且在治疗期间保持稳定(数据未显示)。
CD13在PCNSL脉管中的表达
免疫组织化学染色证明在入组患者的诊断性脑活检中存在CD13；在大多数情况下，染色的血管显示管腔狭窄，轮廓不规则。图6A显示了淋巴瘤病灶内CD13-阳性血管信号的示例。用抗-CD13多克隆抗体和抗-αSMA(周细胞标志物)抗体染色的组织切片的免疫组织化学和共聚焦免疫荧光分析表明，大多数染色的血管缺乏周细胞层(图6B)，表示未成熟血管。更成熟血管的3D投影显示，CD13由血管内皮衬里表达，而在周细胞中表达少得多或几乎不存在(图6C-D)。这些发现表明CD13在肿瘤脉管系统的内皮腔侧表达，其为通过静脉内途径递送NGR-hTNF可及的。
用抗-CD13(NGR靶标)和抗-PDGFR-β(周细胞标志物)抗体双重染色实验，显示在几乎所有淋巴瘤相关血管的周细胞中CD13广泛表达(图10)。此外，使用抗-CD13和抗-CD31(内皮标记物)抗体的双染色实验显示CD13也在肿瘤血管的内皮衬里中表达(图9A-C)。还观察到具有CD13阳性周细胞和CD13阴性内皮细胞的肿瘤血管(图9D)。
通过神经显像评估BBB透过性
DCE-MRI分析显示输注NGR-hTNF后血管透过性增加(图4)。这种效果在病灶周围区域更明显。R-CHOP(无NGR-hTNF)第一个疗程后对比增强区域的中值(范围)Ktrans为23.5(6.8-98.8)，并在第二个疗程(NGR-hTNF/R-CHOP组合)后升至35.3(23.9-887.7；p＝0.39)。在病灶周围区域，基线值(仅R-CHOP)较低(中位数2.5；范围0.4-3.9)，但在第二个疗程(NGR-hTNF/R-CHOP组合)输注NGR-hTNF后显着升高至4.7(2.2-37.7；p＝0.01))。
通过SPECT评估BBB透过性
通过SPECT研究证实在肿瘤和病灶周围区域NGR-hTNF增加BBB透过性的能力。定量分析表明，在所有调查病例中99mTc-DTPA阳性区域的范围都有所增加(图5中的一个例子)。在输注NGR-hTNF和R-CHOP之前和之后，通过PMOD测量的≥30％99mTc-DTPA摄取(感兴趣的体积)的中位体积分别为26cm3(范围为5-67)和40cm3(范围为10-92)，(p＝0.028)。中位体积增加为45％，范围为14％-87％。
讨论
本文介绍的INGRID II期试验结果证明，NGR-hTNF/R-CHOP组合在经过大量预治疗的患有复发的/难治性PCNSL患者中具有良好的耐受和高活性。重要的是，大多数接受治疗的患者在NGR-hTNF/R-CHOP后肿瘤消退后转为接受巩固治疗，这增加了这些预后不良患者治愈的可能性。这一创新策略的活性与选择性增强肿瘤和肿瘤周围区域血管透过性一致。如本研究所证，在试验14的探索阶段证明了R-CHOP药物在血浆和CSF样品中浓度无改变，以及CD13(NGR-hTNF的靶标)在内皮细胞和肿瘤相关毛细血管周细胞中高水平表达，这些支持了NGR-hTNF效应的特异性。总之，该试验的结果支持通过非侵入性手术增加BBB透过性和药物渗透是PCNSL患者中有吸引力的治疗方法。
利妥昔单抗时代的CHOP和最近的R-CHOP在PCNSL患者中使用的经验实际地证明该组合在PCNSL患者中是无效的，在就诊和复发时皆是5,24-26，并证实了这一共同信念主要是由于CNS对相关药物的生物利用度差。实际上，当用作前期治疗时，CHOP化疗与低缓解率相关，并且与基于大剂量甲氨蝶呤的化疗或WBRT组合使用并不有助于改善疾病控制，CHOP-WBRT后的总体2年存活率仅有20-40％5,24-26。没有找到关于在患有复发或难治性PCNSL的患者中使用或不使用利妥昔单抗的CHOP的研究；然而，使用或不使用利妥昔单抗的CHOP作为一线治疗应当是无效的，作为挽救治疗应当也是，这一结果报道令人失望。以下内容也支持了这一观点：前10名入组患者中单独使用R-CHOP第一个周期后缺乏显著缓解，以75％的ORR的方差，且对NGR-hTNF/R-CHOP组合治疗有缓解的21名患者中的17名递送巩固治疗的可能性。使用NGR-hTNF/R-CHOP实现的活性结果与极佳的安全性相关，没有意外毒性，且重要的是所有病例中维持剂量强度。与前期试验27-29一致，向化疗药剂中添加低剂量NGR-hTNF与良好的耐受性相关，特别是与多柔比星的组合与严重的心血管事件无关。
之前的研究聚焦于NGR-hTNF和其与化疗药物的协同作用，在动物模型和实体瘤患者中的研究都已经表明NGR-hTNF对于肿瘤血管的选择性需要与特定受体相互作用11,12,30。当以低剂量递送时，在血管生成的肿瘤脉管系统中7，NGR-hTNF与表达这些受体的内皮细胞上的CD13、TNF-R1和TNF-R2高亲和力相互作用接合，在非肿瘤组织中，不与不表达CD13的内皮细胞接合。实际上，CD13的特殊形式由肿瘤或其他组织的血管生成的血管表达，但并不(或很少)由正常组织的血管表达8,32。值得注意的是，含有NGR的药物可以选择性地靶向由肿瘤血管的内皮细胞和周细胞表达的CD13形式，而非由其他组织表达的CD13形式10,32。在该试验的探索阶段14，我们已经证明NGR-hTNF的促透过性效果在肿瘤和肿瘤周围区域更明显，其中免疫组织化学和免疫荧光技术证明了肿瘤血管表达CD13。应注意，在PCNSL脉管系统中，CD13在周细胞大量表达，在内皮细胞较低程度表达。重要的是，这些细胞，尤其是后一种情况下，很容易接受静脉内递送的NGR-hRNF。
值得注意的是，先前关于正常大脑中CD13表达的研究已经表明，周细胞而非内皮细胞表达该标志物33,34。NGR-hTNF识别正常脑中周细胞表达的CD13形式的能力仍有待阐明，但以下观察表明在PCNSL患者中其仍仅靶向肿瘤血管：首先，在NGR-hTNF治疗后，通过SPECT在肿瘤/肿瘤周围区域观察到99mTc-DTPA摄取增强，但未在剩余的正常脑中观察到14；其次，NGR-hTNF治疗后患者血浆和CSF中R-CHOP药物的浓度没有发生变化14。选择性药物渗透的一个可能的解释是，NGR-hTNF通过靶向肿瘤脉管系统中CD13+的内皮细胞增加其透过性，从而促进选择性的局部药物渗透。如先前在脑转移中观察到的6，也有可能与正常血管相比肿瘤血管中TNF受体过度表达，从而导致低剂量NGR-hTNF与肿瘤血管中而非正常脑血管中的CD13和TNF受体的多价高亲和力相互作用。
在本研究中，sTNF-R的血浆水平与治疗结果无关，但是观察到在CgA的血浆水平、PPI的使用和对NGR-hTNF/R-CHOP的缓解之间有显着关联。已知用PPI治疗后CgA的血浆水平会增加，因为这些药物会诱导高胃泌素血症并刺激肠嗜铬细胞分泌CgA36-38。因此，发明人观察到在类固醇治疗和化学疗法期间，向PCNSL患者给予PPI以防止胃毒性，导致循环CgA显著增加。使用ROC驱动的截止值，他们还观察到62％的低CgA血浆水平患者，和27％的高CgA水平患者实现了对NGR-hTNF/R-CHOP的CR(p＝0.066)。这一发现支持在NGR-hTNF/R-CHOP治疗前停用PPI是可取的。在可能的情况下，一旦CgA在PPI停用后达到正常水平，就应开始NGR-hTNF/R-CHOP，这可能需要几天到几周的时间36-38。
总之，INGRID试验的结果支持低剂量NGR-hTNF对BBB的促渗透作用可用于增强在PCNSL中R-CHOP的活性。NGR-hTNF/R-CHOP组合治疗对接受了大量预治疗的患有复发的/难治性PCNSL的患者是有效且安全的，其抗肿瘤活性与肿瘤血管中CD13的表达一致。在此治疗之前和期间应当避免使用PPI，因为它们可以通过提高CgA的血浆水平来削弱NGR-hTNF的效果。该创新方法值得提出作为PCNSL患者的一线治疗。
参考文献
1.Batchelor TT.原发性中枢神经系统淋巴瘤.(Primary central nervoussystem lymphoma.)Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2016；2016:379-85.
2.Ferreri AJM,Holdhoff M,Nayak L,Rubenstein JL.原发性中枢神经系统淋巴瘤的新疗法.(Evolving Treatments for Primary Central Nervous System Lymphoma.)Am Soc Clin Oncol Educ Book 2019；39:454-66.
3.Ferreri AJ,Cwynarski K,Pulczynski E,等.使用甲氨蝶呤、阿糖胞苷、噻替派和利妥昔单抗(MATRIx方案)治疗原发性CNS淋巴瘤患者的化学免疫疗法：国际结外淋巴瘤研究组-32(IELSG32)2期试验的首次随机化结果.(Chemoimmunotherapy withmethotrexate,cytarabine,thiotepa,and rituximab(MATRix regimen)in patientswith primary CNS lymphoma:results of the first randomisation of theInternational Extranodal Lymphoma Study Group-32(IELSG32)phase 2trial.)LancetHaematol 2016；3:e217-27.
4.Ferreri AJM.原发性CNS淋巴瘤的治疗：强度、辐射和新型药物的作用.(Therapy of primary CNS lymphoma:role of intensity,radiation,and novelagents.)Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2017；2017:565-77.
5.Mead GM,Bleehen NM,Gregor A,等.一项针对原发性脑非霍奇金淋巴瘤患者的医学研究委员会随机试验：脑部放疗联合和不联合环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松化疗.(A medical research council randomized trial in patients with primarycerebral non-Hodgkin lymphoma:cerebral radiotherapy with and withoutcyclophosphamide,doxorubicin,vincristine,and prednisone chemotherapy.)Cancer2000；89:1359-70.
6.Connell JJ,Chatain G,Cornelissen B,等.转移位点血脑屏障的选择性透化(Selective permeabilization of the blood-brain barrier at sites ofmetastasis.)J Natl Cancer Inst 2013；105:1634-43.
7.Corti A,Curnis F,Rossoni G,Marcucci F,Gregorc V.肽介导的细胞因子靶向肿瘤脉管系统：NGR-hTNF示例(Peptide-mediated targeting of cytokines to tumorvasculature:the NGR-hTNF example.)BioDrugs 2013；27:591-603.
8.Di Matteo P,Arrigoni GL,Alberici L,等.CD13在炎症和肿瘤组织血管中的表达增强(Enhanced expression of CD13 in vessels of inflammatory andneoplastic tissues.)J Histochem Cytochem 2011；59:47-59.
9.Curnis F,Sacchi A,Borgna L,Magni F,Gasparri A,Corti A.通过靶向递送至氨肽酶N(CD13)增强肿瘤坏死因子α抗肿瘤免疫治疗特性(Enhancement of tumornecrosis factor alpha antitumor immunotherapeutic properties by targeteddelivery to aminopeptidase N(CD13).)Nat Biotechnol 2000；18:1185-90.
10.Curnis F,Arrigoni G,Sacchi A,等.含有NGR基序的药物与肿瘤血管、上皮细胞和骨髓细胞中CD13亚型的差异结合(Differential binding of drugs containing theNGR motif to CD13 isoforms in tumor vessels,epithelia,and myeloid cells.)Cancer Res 2002；62:867-74.
11.Curnis F,Sacchi A,Corti A.通过血管靶向和屏障改变提高在肿瘤中的化疗药物渗透(Improving chemotherapeutic drug penetration in tumors by vasculartargeting and barrier alteration.)J Clin Invest 2002；110:475-82.
12.Sacchi A,Gasparri A,Gallo-Stampino C,Toma S,Curnis F,Corti A.顺铂、紫杉醇和吉西他滨与肿瘤脉管靶向的肿瘤坏死因子-α的协同抗肿瘤活性(Synergisticantitumor activity of cisplatin,paclitaxel,and gemcitabine with tumorvasculature-targeted tumor necrosis factor-alpha.)Clin Cancer Res 2006；12:175-82.
13.Gregorc V,Gaafar RM,Favaretto A,等.NGR-hTNF与先前治疗过的恶性胸膜间皮瘤(NGR015)的最佳研究者选择相结合：一项随机、双盲、安慰剂对照的3期试验(NGR-hTNF in combination with best investigator choice in previously treatedmalignant pleural mesothelioma(NGR015):a randomised,double-blind,placebo-controlled phase 3trial.)Lancet Oncol 2018；19:799-811.
14.Ferreri AJM,Calimeri T,Conte GM,等.使用工程肿瘤坏死因子-α在原发性中枢神经系统淋巴瘤中进行血脑屏障透化后R-CHOP.(R-CHOP preceded by blood-brainbarrier permeabilization with engineered tumor necrosis factor-alpha inprimary CNS lymphoma.)Blood 2019；134:252-62.
15.Dondossola E,Gasparri AM,Colombo B,Sacchi A,Curnis F,Corti A.嗜铬粒蛋白A限制药物渗透并限制NGR-TNF增强化疗疗效的能力.(Chromogranin A restrictsdrug penetration and limits the ability of NGR-TNF to enhancechemotherapeutic efficacy.)Cancer Res 2011；71:5881-90.
16.Gut P,Waligorska-Stachura J,Czarnywojtek A,等.神经内分泌肿瘤激素综合征的治疗.(Management of the hormonal syndrome of neuroendocrine tumors.)Arch Med Sci 2017；13:515-24.
17.Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,Pileri S,等.《WHO造血和淋巴组织肿瘤分类》(WHO classification of tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues.)法国里昂：IARC出版社编(Lyon,France:IARC Press ed.),2008.
18.Ferreri AJ,Blay JY,Reni M,等.原发性中枢神经系统淋巴瘤的预后评分系统：国际结外淋巴瘤研究组的经验.(Prognostic scoring system for primary CNSlymphomas:the International Extranodal Lymphoma Study Group experience.)JClin Oncol 2003；21:266-72.
19.Trotti A,Colevas AD,Setser A,等.CTCAE v3.0：癌症治疗不良反应综合分级系统的开发(CTCAE v3.0:development of a comprehensive grading system for theadverse effects of cancer treatment.)Semin Radiat Oncol 2003；13:176-81.
20.Abrey LE,Batchelor TT,Ferreri AJ,等.标准化原发性中枢神经系统淋巴瘤基线评估和缓解标准国际研讨会报告(Report of an international workshop tostandardize baseline evaluation and response criteria for primary CNSlymphoma.)J Clin Oncol 2005；23:5034-43.
21.Crippa L,Bianco M,Colombo B,等.由凝血酶激活的一种新的嗜铬粒蛋白A依赖性血管生成开关(A new chromogranin A-dependent angiogenic switch activatedby thrombin.)Blood 2013；121:392-402.
22.Reni M,Zaja F,Mason W,等.替莫唑胺作为原发性脑淋巴瘤的挽救治疗(Temozolomide as salvage treatment in primary brain lymphomas.)Br J Cancer2007；96:864-7.
23.Mappa S,Marturano E,Licata G,等.使用利妥昔单抗、异环磷酰胺和依托泊苷(R-IE方案)挽救性化疗免疫疗法治疗原发性中枢神经系统淋巴瘤复发或对大剂量甲氨蝶呤化疗无效的患者(Salvage chemoimmunotherapy with rituximab,ifosfamide andetoposide(R-IE regimen)in patients with primary CNS lymphoma relapsed orrefractory to high-dose methotrexate-based chemotherapy.)Hematol Oncol 2012；.
24.O'Neill BP,Wang CH,O'Fallon JR,等.原发性中枢神经系统非霍奇金淋巴瘤(PCNSL)：联合初始治疗的生存优势？中北部癌症治疗组(NCCTG)研究的最终报告86-72-52(Primary central nervous system non-Hodgkin'slymphoma(PCNSL):survivaladvantages with combined initial therapy？A final report of the North CentralCancer Treatment Group(NCCTG)Study 86-72-52.)Int J Radiat Oncol Biol Phys1999；43:559-63.
25.Laack NN,O'Neill BP,Ballman KV,等.CHOD/BVAM化疗和全脑放疗治疗新诊断的原发性中枢神经系统淋巴瘤(CHOD/BVAM chemotherapy and whole-brainradiotherapy for newly diagnosed primary central nervous system lymphoma.)IntJ Radiat Oncol Biol Phys 2011；81:476-82.
26.Schultz C,Scott C,Sherman W,等.环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和地塞米松的放射前化疗治疗原发性CNS淋巴瘤：放射治疗肿瘤组方案的初步报告88-06(Preirradiation chemotherapy with cyclophosphamide,doxorubicin,vincristine,and dexamethasone for primary CNS lymphomas:initial report of radiationtherapy oncology group protocol 88-06.)J Clin Oncol 1996；14:556-64.
27.van Laarhoven HW,Fiedler W,Desar IM,等.晚期癌症患者血管药物NGR-hTNF的I期临床和磁共振成像研究(欧洲癌症研究和治疗组织研究16041)(Phase Iclinical and magnetic resonance imaging study of the vascular agent NGR-hTNFin patients with advanced cancers(European Organization for Research andTreatment of Cancer Study 16041).)Clin Cancer Res 2010；16:1315-23.
28.Gregorc V,Citterio G,Vitali G,等.确定NGR-hTNF(一种选择性血管靶向剂)在晚期实体瘤中的最佳生物剂量(Defining the optimal biological dose of NGR-hTNF,a selective vascular targeting agent,in advanced solid tumours.)EurJCancer 2010；46:198-206.
29.Gregorc V,Santoro A,Bennicelli E,等.NGR-hTNF的Ib期研究，一种选择性血管靶向剂，以低剂量与阿霉素联合给药于晚期实体瘤患者(Phase Ib study of NGR-hTNF,a selective vascular targeting agent,administered at low doses incombination with doxorubicin to patients with advanced solid tumours.)BrJCancer 2009；101:219-24.
30.Calcinotto A,Grioni M,Jachetti E,等.将TNF-α靶向新血管生成血管可增强肿瘤中的淋巴细胞浸润并增加免疫疗法的治疗潜力(Targeting TNF-alpha toneoangiogenic vessels enhances lymphocyte infiltration in tumors andincreases the therapeutic potential of immunotherapy.)J Immunol 2012；188:2687-94.
31.Tartaglia LA,Pennica D,Goeddel DV.配体传递：75-kDa肿瘤坏死因子(TNF)受体募集TNF以通过55-kDa TNF受体进行信号传导(Ligand passing:the 75-kDa tumornecrosis factor(TNF)receptor recruits TNF for signaling by the 55-kDa TNFreceptor.)J Biol Chem 1993；268:18542-8.
32.Pasqualini R,Koivunen E,Kain R,等.氨肽酶N是肿瘤归巢肽的受体和抑制血管生成的靶点(Aminopeptidase N is a receptor for tumor-homing peptides and atarget for inhibiting angiogenesis.)Cancer Res 2000；60:722-7.
33.Kunz J,Krause D,Kremer M,Dermietzel R.血脑屏障相关周细胞的140-kDa蛋白与氨肽酶N相同(The 140-kDa protein of blood-brain barrier-associatedpericytes is identical to aminopeptidase N.)J Neurochem 1994；62:2375-86.
34.Alliot F,Rutin J,Leenen PJ,Pessac B.脑实质血管的周细胞和内皮细胞共表达氨肽酶N、氨肽酶A和巢蛋白.(Pericytes and periendothelial cells of brainparenchyma vessels co-express aminopeptidase N,aminopeptidase A,and nestin.)JNeurosci Res 1999；58:367-78.
35.Desar IM,van Herpen CM,van Asten JJ,等.影响DCE-MRI在确定实体癌患者血管靶向剂NGR-hTNF最佳生物剂量时意外失败的因素.(Factors affecting theunexpected failure of DCE-MRI to determine the optimal biological dose of thevascular targeting agent NGR-hTNF in solid cancer patients.)Eur J Radiol2011；80:655-61.
36.Korse CM,Muller M,Taal BG.在评估神经内分泌肿瘤患者嗜铬粒蛋白A水平期间停用质子泵抑制剂.(Discontinuation of proton pump inhibitors duringassessment of chromogranin A levels in patients with neuroendocrine tumours.)Br J Cancer 2011；105:1173-5.
37.Pregun I,Herszenyi L,Juhasz M,等.质子泵抑制剂治疗对血清嗜铬粒蛋白a水平的影响(Effect of proton-pump inhibitor therapy on serum chromogranin alevel.)Digestion 2011；84:22-8.
38.Mosli HH,Dennis A,Kocha W,Asher LJ,Van Uum SH.短期质子泵抑制剂治疗及其停药对健康对象嗜铬粒蛋白A的影响(Effect of short-term proton pumpinhibitor treatment and its discontinuation on chromogranin A in healthysubjects.)J Clin Endocrinol Metab 2012；97:E1731-5.
序列表
<110> 圣拉斐尔基金会中心（Fondazione Centro San Raffaele）
<120> 原发性中枢神经系统淋巴瘤的组合治疗
<130> PCT 141713
<150> US62773473
<151> 2018-11-30
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 165
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Cys Asn Gly Arg Cys Gly Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Leu Ser Asp
1 5 10 15
Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu
20 25 30
Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu
35 40 45
Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile
50 55 60
Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val
65 70 75 80
Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr Lys
85 90 95
Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu Thr Pro
100 105 110
Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly Gly
115 120 125
Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala Glu Ile Asn Arg
130 135 140
Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln Val Tyr Phe Gly Ile
145 150 155 160
Ile Ala Leu His Met
165

Claims (7)

1.一种R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松)和NGR-hTNF或其类似物的组合，用于治疗对象的原发性中枢神经系统淋巴瘤，其中所述组合包括至少1个疗程的在给药NGR-hTNF或其类似物之后的R-CHOP。
2.如权利要求1所述的组合，其中R-CHOP疗程由375mg/m2利妥昔单抗，750mg/m2环磷酰胺、50mg/m2多柔比星和1.4mg/m2长春新碱组成。
3.如权利要求1或2所述的组合，其中所述NGR-hTNF或其类似物是在CHOP药物之前进行给药。
4.如前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述NGR-hTNF给药由0.8ug/m2组成。
5.如前述权利要求中任一项所述的组合，其包括6个疗程的R-CHOP，每个疗程之前都先给药NGR-hTNF或其类似物。
6.如前述权利要求中任一项所述的组合，其中在给药NGR-hTNF或其类似物之后的R-CHOP的疗程间隔18至21天。
7.如前述权利要求中任一项所述的组合，其中原发性中枢神经系统淋巴瘤复发或为难治性原发性中枢神经系统淋巴瘤。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3091792A1 (en) 2018-02-20 2019-08-29 Agios Pharmaceuticals, Inc. Methods of use for trisubstituted benzotriazole derivatives
BR112023003493A2 (pt) * 2020-08-27 2023-04-11 Servier Lab Uso de um composto inibidor de dhodh em terapia de câncer de combinação
CN116908458B (zh) * 2023-09-12 2023-12-29 天津云检医学检验所有限公司 用于差异诊断原发性中枢神经系统淋巴瘤的生物标志物及检测试剂盒

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001080884A1 (en) * 2000-04-25 2001-11-01 Idec Pharmaceuticals Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
US6455043B1 (en) * 1998-08-11 2002-09-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Combination therapies for B-cell lymphomas comprising administration of anti-CD20 antibody
US20150246123A1 (en) * 2014-02-28 2015-09-03 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies
CN107708740A (zh) * 2015-06-10 2018-02-16 萨尔布吕肯大学 用于治疗b细胞恶性肿瘤的手段和方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2364995A1 (en) * 2004-12-23 2011-09-14 Molmed SpA Conjugation product

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6455043B1 (en) * 1998-08-11 2002-09-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Combination therapies for B-cell lymphomas comprising administration of anti-CD20 antibody
WO2001080884A1 (en) * 2000-04-25 2001-11-01 Idec Pharmaceuticals Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
US20150246123A1 (en) * 2014-02-28 2015-09-03 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies
CN107708740A (zh) * 2015-06-10 2018-02-16 萨尔布吕肯大学 用于治疗b细胞恶性肿瘤的手段和方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FERRERI, ANDRES J. M.等: "R-CHOP Preceded By Engineered Tumor Necrosis Factor (TNF) in Patients with Relapsed or Refractory (r/r) Primary CNS Lymphoma (PCNSL): Results of Antitumor Activity, Safety and Blood-Brain Barrier (BBB) Permeabilization in the "Ingrid" Phase II Trial", 《BLOOD》, vol. 132, no. 1, pages 1687, XP086594439, DOI: 10.1182/blood-2018-99-118507 *

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