CN113583970B - 一种用于预防或抗冠状病毒传播、致病的药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于预防新冠肺炎或抗新冠肺炎冠状病毒传播、致病的制剂药物，包括病毒抗原成分，所述病毒抗原成分为羊传染性脓疱病毒(ORFV)。在本发明中ORFV灭活毒在用药局部激活髓系来源的巨噬细胞，巨噬细胞可以迁移至冠状病毒尤其是新型冠状肺炎病毒SARS‑CoV‑2的靶向组织器官，进行游离病毒的清除或抑制病毒从鼻甲中排除。从而降低鼻洗液(游离于鼻甲外的病毒)中的病毒滴度，进而阻断病毒通过气溶胶进行传播。同时降低肺脏内的病毒滴度，进而减少新冠病毒对肺脏的损伤作用。并且起到加快病毒在体内的清除的作用。

Description

一种用于预防或抗冠状病毒传播、致病的药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及羊传染性脓疱病毒灭活毒的新用途，具体涉及将羊传染性脓疱病毒灭活毒用于阻断SARS-CoV-2的传播。
背景技术
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)目前已经成为影响人类健康、威胁全人类生命安全的重大威胁。该病原的蔓延也给世界经济带来了沉重的打击。目前，新冠疫苗的研制和临床试验也在加紧进行，正在进行临床试验的新冠疫苗有腺病毒载体疫苗、灭活病毒疫苗、mRNA疫苗、亚单位疫苗等。对于受SARS-CoV-2感染的患者来说，应对新冠肺炎的主要措施是进行集中隔离和非特异性治疗，临床上并无有效的抵抗该病毒的药物。不仅如此，基于目前SARS-CoV-2在世界范围内的变异，其传播力的大幅提升使得该病的危害性持续扩大。因此，阻断SARS-CoV-2变异株传播能力的应对方案变得日益紧迫。
羊传染性脓疱病病毒(ORFV)属于痘病毒科、副痘病毒属家族成员。一直以来，其灭活病毒是预防羊传染性脓疱病(Orf)的主要方式。近年来，ORFV所具有的免疫调节能力日益为人们所重视。研究人员也将ORFV作为载体工具传递免疫原性基因、构建重组疫苗。因此，开发ORFV在临床上的应用、挖掘基于ORFV的防治策略具有重要意义。
发明内容
根据发明人的前期试验，利用SARS-CoV-2感染金黄地鼠模型，发现ORFV灭活毒经肌肉注射后可以显著降低鼻洗液中的病毒载量、并阻止病毒通过飞沫(气溶胶)传播。不仅如此，ORFV灭活毒的短期滴鼻预防亦可以降低病毒载量、阻断病毒通过飞沫传播。基于上述结果，发明人提出采用肌肉注射和滴鼻免疫的方式分别对SARS-CoV-2易感的人群或动物进行紧急治疗和预防。并且，本发明对ORFV的扩增、浓缩、纯化鉴定及灭活的基础核心程序进行了后续研究。目前已经成功在MDBK(牛肾细胞)、OFTU(羊胚胎鼻甲细胞)或Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)中扩增ORFV、经超速离心法浓缩病毒液、随后进行蔗糖密度梯度法纯化，ORFV灭活后，获得ORFV灭活病毒通过透射电镜进行鉴定。
本发明提供了一种用于预防或抗冠状病毒传播的药物，包括病毒成分，所述病毒成分为羊传染性脓疱病毒(ORFV)。本发明所述的病毒成分，包括减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、抗原(全抗原、半抗原、亚单位抗原等)、病毒颗粒、具有病毒基因组序列全部或部分序列的核酸序列或者以全部或部分基因组序列为模板得到的核酸序列(包括但不限于经过反转录、PCR、人工合成等方式得到的DNA或RNA全场及片段)。
优选的是，所述羊传染性脓疱病毒为减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原、病毒天然抗原片段、人工重组表达病毒免疫原性蛋白或病毒颗粒的至少一种。减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原、病毒天然抗原片段、人工重组表达病毒免疫原性蛋白或病毒颗粒的制备方法均为现有技术中的常规方法，其制备不是本发明保护的主题，但制备得到的羊传染性脓疱病毒减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原或病毒颗粒作为预防新冠肺炎或抗新冠肺炎病毒传播、致病的应用，或制备得到的预防新冠肺炎或抗新冠肺炎病毒传播、致病的药物，均落入本发明保护的范围。例如，裂解病毒会释放病毒自身的天然抗原片段，或原核表达病毒免疫原性蛋白均具有免疫保护作用。
上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒为灭活病毒(ORFV灭活毒)。在本发明中，接种ORFV灭活毒后不仅可以帮助机体有效预防新冠病毒的传播所带来的感染，其重要意义在于即便发生感染事件，ORFV灭活毒的作用可以帮助机体尽快清除病毒，降低呼吸道、肺脏内的病毒载量，同时抑制病毒的排出、传播。
上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒灭活病毒具有羊传染性脓疱病毒的天然构象或三维空间结构。在现有技术的研究中，羊传染性脓疱病毒在灭活过程中其病毒表面的蛋白修饰或者蛋白的折叠结构有可能发生不同程度的改变，这需要进一步的研究验证。在本发明的研究中，通过电镜扫描发现，本发明所述羊传染性脓疱病毒灭活病毒的表面形态、病毒大小、病毒构象保持不变。
上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒灭活病毒的制备方法为：
(1)准备毒株：所述的羊传染性脓疱病毒ORFV-SY17、ORFV-Jilin、ORFV-NA17。
本发明优选的病毒野毒株ORFV-SY17、ORFV-NA17及ORFV-Jilin株为现有技术中已公开的毒株，公众可通过与作者共享的方式获得。(1.Zhong J#,Guan J#,Zhou Y,Cui S,Wang Z,Zhou S,Xu M,Wei X,Gao Y,Zhai S,Song D,He W,Gao F,Zhao K*.Genomiccharacterization of two Orf virus isolates from Jilin province in China.VirusGenes,2019,55:490–501.2.Zhao K,Song D,He W,Lu H,Zhang B,Li C,Chen K,GaoF.Identification and phylogenetic analysis of an Orf virus isolated from anoutbreak in sheep in the Jilin province of China.Vet Microbiol.2010May 19；142(3-4):408-15.)，MDBK细胞(牛肾细胞)、Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)可通过商业化途径购买得到。OFTu细胞可以从羊鼻甲骨中分离取得。
(2)扩增、浓缩病毒：利用MDBK、OFTu或Vero细胞扩增野生型ORFV，超速离心机离心浓缩病毒，蔗糖密度梯度离心纯化病毒。所述超速离心机离心浓缩及蔗糖密度梯度离心纯化病毒的方法均为本领域的常规技术，记载于相应的工具书及实验指南中(《病毒学方法》，作者:李德新，出版社：科学出版社，出版日期：2016-03-01，ISBN：9787030358844)。
(3)灭活ORFV：将β-丙内酯加入病毒液中，于4℃放置24小时。随后37℃水解2小时。优选的，β-丙内酯与待灭活病毒液(待灭活病毒液浓度为103-109TCID50/mL)的体积比例为1：4000-1：2000。(β-丙内酯可破坏病毒核酸，但不作用于病毒蛋白，较好地保护病毒的免疫原性。安全性体现在其可水解为无毒的β-羟基丙酸)
本发明优选的病毒野毒株ORFV-SY17株为现有技术中已公开的毒株(Zhong J#,Guan J#,Zhou Y,Cui S,Wang Z,Zhou S,Xu M,Wei X,Gao Y,Zhai S,Song D,He W,Gao F,Zhao K*.Genomic characterization of two Orf virus isolates from Jilinprovince in China.Virus Genes,2019,55:490–501.)，公众可通过与作者共享的方式获得。MDBK细胞、Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)可通过商业化途径购买得到。OFTu细胞可以从羊鼻甲骨中分离取得。
上述任一项优选的是，所述药物还包括稳定剂。
上述任一项优选的是，述稳定剂包括但不限于下述物质的至少一种：各种糖类，如乳糖、甘油、蔗糖、甘露醇、海藻糖果糖、半乳糖及葡萄糖等；各种氨基酸；右旋糖酐及聚乙二醇等聚合物。
上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒与稳定剂的质量比为1：1～100,所述羊传染性脓疱病毒灭活毒与所述稳定剂的质量比为1：1—1：100。进一步优选的是，所述羊传染性脓疱病毒灭活毒与所述稳定剂的质量比为1：1，1：10，1：20，1：30，1：40，1：50，1：60，1：70，1：80，1：90，1：100。
上述任一项优选的是，所述药物由ORFV灭活毒50微克和稳定剂50微克组成。ORFV灭活毒药物为混悬液制剂。使用时，向其中添加稀释液制成注射用制剂。所述稀释液优选为生理盐水。稀释后的制剂既可通过肌肉注射的形式给药，也可通过预防性滴鼻的形式给药。
上述任一项优选的是，所述药物的给药方式为肌肉注射或滴鼻。优选的，ORFV灭活毒50微克和稳定剂50微克加入生理盐水，制成制剂。ORFV灭活病毒可以通过肌肉注射形式降低SRAS-COV-2传播。ORFV灭活病毒进行短期滴鼻预防亦可以降低SRAS-COV-2传播。所述的ORFV灭活病毒可以通过肌肉注射的形式降低SRAS-COV-2在金黄地鼠鼻洗液中的载量，进而降低其以气溶胶形式在个体之间的传播。所述的ORFV灭活病毒可以短期滴鼻预防或滴鼻免疫的形式降低SRAS-COV-2在金黄地鼠鼻洗液中的载量，进而降低其以气溶胶形式在个体之间的传播。本发明中，所述短期滴鼻预防是指SRAS-COV-2病毒接毒前24小时进行滴鼻处理。在新型冠状肺炎的预防中，利用本发明所提供药物进行短期滴鼻预防的意义在于在得知处于较大感染风险环境后，进行的紧急预防性策略。因此时注射特异性疫苗尚需时日建立有效特异性免疫。通过此法进行此空窗期的非特异性保护。
上述任一项优选的是，肌肉注射剂量的范围是103-109TCID50，进一步优选为103、104、105、106、107、108、109TCID50；滴鼻方式剂量范围是103-109TCID50，进一步优选为103、104、105、106、107、108、109TCID50。
本发明还提供了一种制备上述任一项药物的方法，包括以下步骤：
(1)准备羊传染性脓疱病病毒；
(2)体外培养扩增羊传染性脓疱病病毒，浓缩病毒，然后纯化病毒；
(3)灭活羊传染性脓疱病病毒，灭活后的羊传染性脓疱病病毒具有天然构象或三维空间结构。
本发明所述具有天然构象或三维空间结构是指电镜观察下，灭活病毒的表面结构、病毒粒子大小和病毒的构象未发生改变，而对于病毒表面或病毒内部的蛋白结构、蛋白修饰、核酸结构等是否发生改变未进行限定。
优选的，羊传染性脓疱病病毒为ORFV-SY17株、ORFV-Jilin、ORFV-NA17。
上述任一项优选的是，步骤(2)中，利用MDBK、Vero或OFTU细胞扩增野生型羊传染性脓疱病病毒。
上述任一项优选的是，步骤(2)中，通过超速离心机离心浓缩病毒。
上述任一项优选的是，步骤(2)中，通过蔗糖密度梯度离心纯化病毒。
上述任一项优选的是，步骤(3)中，通过β-丙内酯灭活法灭活羊传染性脓疱病病毒。由β-丙内酯法灭活的ORFV与活病毒相比，在透射电镜下的形态未发生显著改变。
上述任一项优选的是，步骤(3)中，所述ORFV的灭活方式为β-丙内酯于4℃灭活病毒24小时，随后37℃水解2小时。同时，所述灭活病毒的处理方式包括其他未破坏ORFV天然构象或三维空间结构的各种灭活方式。本发明所述未破坏ORFV天然构象或三维空间结构是指电镜观察下，灭活病毒的表面结构、病毒粒子大小和病毒的构象未发生改变，而对于病毒表面或病毒内部的蛋白结构、蛋白修饰、核酸结构等是否发生改变未进行限定。
本发明提供了一种ORFV灭活毒在控制新冠肺炎(COVID-19)发展、阻断SARS-CoV-2病毒传播及预防其感染方面的用途。其中给药途径分别是肌肉注射和滴鼻免疫。所述ORFV灭活毒作为免疫刺激或增强剂，刺激机体的先天免疫应答反应。所述ORFV灭活毒通过肌肉注射的形式阻断SARS-CoV-2传播，这可能是通过诱导机体产生非特异性免疫反应的方式降低病毒载量，并阻断病毒传播。所述ORFV灭活毒通过滴鼻的形式给药，在短期预防SARS-CoV-2感染方面，可能是通过诱导黏膜免疫的方式降低SARS-CoV-2的载量。
上述任一项优选的应用方式是，所述ORFV灭活毒的紧急肌肉注射及短期滴鼻预防，可以通过提升机体非特异性免疫应答能力用于目前日益流行的经变异后传播力增强的新型冠状病毒毒株，降低其大范围传播风险。
本发明提供的ORFV灭活毒，具有以下作用：
(1)通过肌肉注射的方式抑制SARS-CoV-2在呼吸道内的载量；
(2)通过肌肉注射的方式抑制SARS-CoV-2在个体之间的传播；
(3)通过肌肉注射的方式抑制SARS-CoV-2触发的呼吸道病变、咳嗽、呼吸困难、发热、炎症、神经症状及体重减轻；
(4)通过肌肉注射及滴鼻给药的方式提高机体抵抗SARS-CoV-2及普通流感的能力；
(5)通过滴鼻给药的方式降低SARS-CoV-2的感染率、感染后的病毒载量及个体间的传播。
本发明中，ORFV灭活毒的作用是对SARS-CoV-2传播起到抑制作用。
在本发明中，接种ORFV灭活毒后可以帮助机体有效预防新冠病毒的传播所带来的感染，但对于病毒对细胞感染的直接预防作用并不明显。其重要意义在于即便发生感染事件，ORFV灭活毒的作用可以帮助机体尽快清除病毒，降低呼吸道、肺脏内的病毒载量，同时抑制病毒的排出、传播。
本发明抑制SARS-CoV-2传播的方法与传统的抑制SARS-CoV-2复制增殖的方式减少病毒载量的方式不同。通过ORFV灭活毒在用药局部激活髓系来源的巨噬细胞，巨噬细胞可以迁移至新冠病毒的靶向组织器官(主要为上呼吸道和肺脏)，进行游离病毒的清除或抑制病毒从鼻甲中排除。从而降低鼻洗液(游离于鼻甲外的病毒)中的病毒滴度，进而阻断病毒通过气溶胶进行传播。同时降低肺脏内的病毒滴度，进而减少新冠病毒对肺脏的损伤作用。ORFV灭活毒还有一个重要的作用，就是即使机体被感染后，ORFV灭活毒的作用也可以加快病毒在体内的清除，缩短病程。
本发明的另一个重要方面，ORFV灭活毒可以与治疗COVID-19的药物联合使用，用于提高机体的免疫力，使得治疗后获得更好的预后。
优选的，所述药物与临床抗病毒制剂联合使用。进一步的，所述临床抗病毒制剂优选为SARS-CoV-2的中和抗体、Favipiravir(法匹拉韦)等。
优选的，所述药物与COVID-19疫苗联用。进一步的，所述COVID-19疫苗优选为mRNA疫苗、腺病毒疫苗、亚单位疫苗、灭活病毒疫苗、DNA疫苗及病毒样颗粒疫苗。
上述任一项优选的是，本发明所述药物在所述临床抗病毒制剂的联合使用，所述联合使用是指在所述药物在所述临床抗COVID-19病毒制剂使用前、使用后使用或同时使用。
上述任一项优选的是，在联合使用中，所述用于预防或抗冠状病毒传播、致病的药物的用药剂量为每个个体103～109TCID50，进一步优选为103、104、105、106、107、108、109TCID50。同时优选的抗病毒药物为Favipiravir或Clofazimine或Remdesivir，所述抗病毒药物的用量遵从现有技术中及药典中的使用剂量，联合使用能够得到更高的治疗效果。
ORFV灭活毒既降低了SARS-CoV-2侵染机体带来的冲击，又为适应性免疫反应的建立赢得时间；
进一步的优选方案为，ORFV灭活毒也可根据实际需要制成喷雾剂，通过黏膜免疫的方式作为紧急预防的备选方案。优选的喷雾剂使用方式为，以ORFV灭活毒作喷雾剂的主要成分，同时辅以稳定剂。所述稳定剂优选为，乳糖、甘油、蔗糖、甘露醇、海藻糖果糖、半乳糖及葡萄糖、各种氨基酸、右旋糖酐或聚乙二醇中的至少一种。所述ORFV灭活毒与稳定剂的质量比为1：1～100。给药方式为鼻腔喷雾，作为紧急预防，喷雾2-3次，每次103-109TCID50，进一步优选为103、104、105、106、107、108、109TCID50，每次间隔1-2天。
新型冠状病毒为单股正链RNA病毒，SARS-CoV-2主要侵染肺脏，也可感染中枢神经系统。本发明提供的ORFV灭活毒通过刺激机体的免疫应答反应，肺脏、上呼吸道的病毒载量会减少，同时推测神经系统中的病毒也会减少。
在本发明中，ORFV灭活毒经肌肉注射后可刺激肌肉组织内巨噬细胞发生活化，产生表观遗传修饰，并产生短暂记忆。此类巨噬细胞通过在体内迁移、游走，继续寻找其他病原入侵位点，并在入侵位点处发挥抗病原作用。被激活以及发生记忆的巨噬细胞可在趋化因子的作用下迁移至新冠病毒侵染局部(即肺部和上呼吸道)，进行病毒的吞噬、清除，故可降低新冠病毒在肺内和上呼吸道内的滴度，同时可以减少传播。本发明通过对小鼠肌肉注射ORFV灭活毒后进行基因转录分析，发现指示髓系来源细胞激活的基因发生显著上调。证明，ORFV灭活毒注射可激活局部单核、巨噬细胞。
附图说明
图1为本发明实施例1中ORFV野毒与灭活毒透射电镜检测图。
图2本发明实施例1中ORFV灭活毒肌肉注射金黄地鼠前后的体重变化情况。
图3为本发明实施例1中ORFV灭活毒以肌肉注射的形式处理SARS-CoV-2感染的金黄地鼠后3天和5天金黄地鼠鼻洗液、肺脏中病毒载量情况。
图4为本发明实施例1中ORFV灭活毒以滴鼻形式短期预防后，3天和5天金黄地鼠鼻洗液中病毒载量情况。
图5本发明实施例3中ORFV灭活毒以肌肉注射的形式处理金黄地鼠后，病毒的传播示意图。
图6本发明实施例3中ORFV灭活毒以肌肉注射的形式处理金黄地鼠后，病毒的传播阻断情况。
图7为本发明实施例4髓系来源细胞激活的基因Stat1、Cxcl9转录水平上调结果图。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进行更加清晰、完整的描述，但所描述的实例仅是本发明一部分实施例，并非全部。所述实施例为帮助理解本发明，不应依此来局限本发明的保护范围。本发明所使用的试剂方法如无特殊说明均为现有技术的常规试剂和方法，可由商业化购买或者记载于教科书、工具书及相关已公开文献中。
实施例1
ORFV的扩增、浓缩及纯化
将MDBK、Vero或OFTu细胞培养于T75细胞培养瓶中，待细胞汇合度为70-80％时，将野生型ORFV-SY17毒株接种细胞，37℃培养箱无血清孵育1h后，加入含2％胎牛血清的DMEM培养液继续培养。待80％细胞发生病变后终止培养，并反复冻融收毒。1000转/分钟离心5分钟后，收集上清液。20000转/分钟离心1.5小时，弃上清液，并用适量(100-500微升)PBS重悬。用蔗糖密度梯度离心法进行。20000转/分钟离心1小时，收取30-40％密度之间的病毒聚集条带，并最终获得纯化好的病毒液。
灭活病毒的制备及透射电镜观察鉴定
根据所需的灭活病毒量，将β-丙内酯加入特定倍数稀释的ORFV病毒液中(β-丙内酯与待灭活病毒液的体积比例为1：4000-1：2000)，于4℃放置24小时进行病毒的灭活。随后在37℃条件下水解2小时，以彻底将有毒性的β-丙内酯分解为无毒的成分。分解后的成分不会对细胞和动物机体产生不利影响。将活病毒与灭活病毒置于透射电镜下观察、鉴定。结果如图1所示，其中左图为ORFV野毒，右图为ORFV灭活病毒。
灭活病毒毒力安全性评价
本发明实施过程中利用ORFV灭活毒肌肉注射与滴鼻的方式对金黄地鼠进行处理，检测血液生化指标，同时每日记录金黄地鼠的体重变化。
肌肉注射：单位体重注射量为每次每个个体106TCID50。肌肉注射每天一次，连续2-5次，第一次后便出现效果。
滴鼻(鼻粘膜免疫)：滴鼻剂量为每次每个个体106TCID50。新冠病毒SARS-CoV-2感染48小时、24小时前各滴鼻一次。新冠病毒感染后3，5，7天分别进行检测。
结果如图2显示，ORFV灭活毒并未显著改变地鼠的体重。
ORFV灭活病毒对SARS-CoV-2病毒载量的影响
本发明利用ORFV灭活毒肌肉注射与滴鼻的方式处理SARS-CoV-2感染的金黄地鼠模型，提取地鼠的鼻洗液进行病毒滴定分析，肌肉注射与滴鼻的方式的具体给药方式及浓度与上述实验相同。
肌肉注射是在新冠病毒接毒后当天(第一天)开始给药，持续五天(1，2，3，4，5天)，取样分别是新冠病毒接毒后的3，5，7天。结果如图3、4所示。无论肌注还是滴鼻均可以显著降低鼻洗液内的病毒载量。
实施例2
实施例2与实施例1相似，不同之处在于，将ORFV灭活毒制备成喷雾剂进行鼻黏膜免疫。所述喷雾剂包括ORFV灭活毒和稳定剂。所述稳定剂优选为乳糖，ORFV灭活毒和稳定剂的质量比为1：1。给药方式为鼻腔喷雾，作为紧急预防，喷雾2-3次，单个个体每次103-109TCID50，每次间隔1-2天。喷雾剂量优选为103、104、105、106、107、108、109TCID50。
实施例3
实施例3对病毒的传播阻断进行了研究。如图5所示，为实施例3中ORFV灭活毒以肌肉注射的形式处理金黄地鼠后，病毒的传播示意图。
传播实验方案：分别将传播鼠(接种SARS-CoV-2)与被传播鼠置于不同的鼠笼中(不会有直接接触)，建立气溶胶传播模型(气溶胶传播模型为现有技术的模型，具体方法参见：
1.Sia SF,Yan LM,Chin AWH,Fung K,Choy KT,Wong AYL,Kaewpreedee P,PereraRAPM,Poon LLM,Nicholls JM,Peiris M,Yen HL.Pathogenesis and transmission ofSARS-CoV-2in golden hamsters.Nature.2020Jul；583(7818):834-838.
2.Hou YJ,Chiba S,Halfmann P,Ehre C,Kuroda M,Dinnon KH 3rd,Leist SR,
Figure BDA0003187180850000071
A,Nakajima N,Takahashi K,Lee RE,Mascenik TM,Graham R,Edwards CE,TseLV,Okuda K,Markmann AJ,Bartelt L,de Silva A,Margolis DM,Boucher RC,RandellSH,Suzuki T,Gralinski LE,Kawaoka Y,Baric RS.SARS-CoV-2D614G variant exhibitsefficient replication ex vivo and transmission in vivo.Science.2020Dec 18；370(6523):1464-1468.)，分别在1，3，5，7天检测鼠鼻洗液中的病毒载量，以确定病毒在体内传播或被清除的程度。
实验设计分组：分两组，组1是传播、被传播鼠均注射PBS对照，随后进行传播试验；组2是传播、被传播鼠均注射iORFV，随后进行传播试验。病毒注射量与实施例1或2相同。
实施例3的结果如图6所示。组1作为试验对照，接毒后，SARS-CoV-2在传播鼠中存续的时间是1，3，5天，病毒载量逐渐递减。在这期间可以通过气溶胶的方式将SARS-CoV-2传递给被传播鼠，SARS-CoV-2在被传播鼠中存续的时间也是1，3，5天，病毒载量先升高后降低。证明传播试验设计成功。组2作为试验组，在接种SARS-CoV-2前24小时通过肌肉注射的形式分别为传播鼠与被传播鼠注入iORFV。不同时间点检测后发现，SARS-CoV-2在传播鼠中存续的时间是1，3天，表明iORFV帮助了SARS-CoV-2在传播鼠体内的加速清除；而SARS-CoV-2在被传播鼠中的不同时间点中均未被检测到，证明iORFV的注射阻断了传播进程。
实施例4
实施例4通过对小鼠肌肉注射ORFV灭活毒后进行基因转录分析，发现指示髓系来源细胞激活的基因stat1、Cxcl9发生显著上调，如图7所示，证明，ORFV灭活毒注射可激活局部单核、巨噬细胞。基因转录分析为本领域常规技术，凡是可以检测基因转录水平变化的方法均可应用于本发明。
需要说明的是，上述实施例所进行的详尽描述可理解为对本发明内涵的部分理解，而本发明的内涵及保护范围不应仅限于上述实施例所述情形，故不应通过上述实施例的内容限制本发明的理解和保护范围。在不违背本发明内涵和精神的情形下，本发明的实施或具体保护性方案可做多种变化和延伸。本发明专利的权利要求范围应尽可能涵盖所有可能的经合理变化、调整及延伸后的方案。

Claims (7)

1.一种用于预防或抗冠状病毒传播、致病的药物，包括病毒成分，其特征在于，所述病毒成分为灭活的羊传染性脓疱病毒ORFV-SY17、ORFV-Jilin或ORFV-NA17中的一种，所述冠状病毒为SARS-CoV-2病毒。
2.如权利要求1所述的药物，其特征在于，还包括稳定剂，所述羊传染性脓疱病毒与稳定剂的质量比为1：1～100。
3.如权利要求1所述的药物，其特征在于，给药方式为肌肉注射和/或鼻腔黏膜免疫。
4.如权利要求3所述的药物，其特征在于，用药剂量为每个个体103～109 TCID50。
5.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述药物与临床抗病毒制剂联合使用。
6.一种制备权利要求1-5任一项所述药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
准备羊传染性脓疱病病毒；
体外培养扩增羊传染性脓疱病病毒，浓缩病毒，然后纯化病毒；
灭活羊传染性脓疱病病毒。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，通过β-丙内酯灭活羊传染性脓疱病病毒。
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