CN115671145A - 一种用于预防和抗嗜神经性病毒感染的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于预防和抗嗜神经性病毒感染(尤其是PHEV)的药物及其制备方法，包括病毒成分，所述病毒为羊传染性脓疱病毒。本发明所述药物：减少嗜神经性病毒在脑内的载量，进一步优选的通过静脉注射的方式控制PHEV在脑内的载量；抑制嗜神经性病毒对个体的感染，降低发病率；减少嗜神经性病毒感染导致的致死率；缓解、减轻、抑制嗜神经性病毒感染后机体的症状；提高机体对嗜神经性病毒的抗感染力，起到预防的作用。

Description

一种用于预防和抗嗜神经性病毒感染的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及羊传染性脓疱病毒灭活病毒的新用途，具体涉及将羊传染性脓疱病毒灭活后，用于对嗜神经性病毒，尤其是猪血凝性脑脊髓炎病毒感染早期的紧急预防。

背景技术

猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)是一种感染猪的冠状病毒，引起3周龄以内的仔猪发生非化脓性脑炎，并呈现明显的呕吐和/或神经症状。PHEV是目前已知的唯一能够感染猪的嗜神经性冠状病毒。发病仔猪的死亡率可高达100％，给养猪业带来十分严重的危害。目前，兽医临床尚无猪血凝性脑脊髓炎的疫苗。因此，获取能够缓解该病发生、减轻PHEV感染产生症状及控制PHEV传播能力的紧急预防方案十分重要。

羊传染性脓疱病病毒(ORFV)属于痘病毒科、副痘病毒属家族成员。一直以来，其灭活病毒是预防羊传染性脓疱病(Orf)的主要方式。近年来，ORFV所具有的免疫调节能力日益为人们所重视。研究人员已经将ORFV作为载体，传递免疫原性基因、构建重组疫苗。不仅如此，挖掘基于ORFV的免疫调节能力，拓展ORFV在兽医临床上的应用具有重要意义。

对ORFV的扩增、浓缩、纯化鉴定及灭活是后续研究的基础核心程序。目前已经成功在MDBK细胞(牛肾细胞)、Vero(非洲绿猴肾细胞)或OFTu细胞(羊胚胎鼻甲细胞)中扩增ORFV、经超速离心法浓缩病毒液、随后进行蔗糖密度梯度法纯化，最后通过透射电镜进行鉴定。

发明内容

根据发明人的前期试验，将ORFV灭活病毒对小鼠进行短期免疫，不仅可以减轻PHEV导致的临床症状，也可以明显降低由PHEV感染导致的小鼠死亡率。上述结果表明，ORFV灭活病毒可能由于诱导机体产生先天性免疫应答，从而使宿主对PHEV产生一定的抵抗作用。基于上述试验结果，发明人提出采用ORFV灭活病毒对猪血凝性脑脊髓炎进行紧急预防。并在进一步的研究中证实，ORFV灭活病毒能够有效减少嗜神经性病毒靶器官(脊髓、脑)的病毒载量，抑制神经病变、炎症、神经症状。本发明具体内容如下：

本发明提供了一种用于预防和抗嗜神经性病毒感染的药物，包括病毒成分，所述病毒为羊传染性脓疱病毒。本发明所述的病毒成分，包括减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、抗原(全抗原、半抗原、亚单位抗原等)、病毒颗粒、具有病毒基因组序列全部或部分序列的核酸序列或者以全部或部分基因组序列为模板得到的核酸序列(包括但不限于经过反转录、PCR、人工合成等方式得到的DNA或RNA全场及片段)。本发明所述嗜神经性病毒是指病毒的靶向组织器官为神经系统。在本发明所述的嗜神经性病毒中，一些病毒由轴突周围的局部神经侵入；一些病毒的靶器官不仅仅是神经系统，但主要的是侵犯脊髓和脑灰质的运动神经细胞；一些病毒为全身性或多靶器官病毒，虽然主要侵犯的是其他器官，但仍有部分或少量病毒能够侵犯至神经系统。例如：脊髓灰质炎病毒、带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病病毒等，也可以称为神经性病毒。在本发明的一个优选实施方式中，提供一种ORFV灭活病毒在控制PHEV的发展、阻断其传播及紧急预防PHEV感染等方面的用途。

优选的是，所述羊传染性脓疱病毒为减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原、病毒天然抗原片段、人工重组表达病毒免疫原性蛋白或病毒颗粒的至少一种。减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原、病毒天然抗原片段、人工重组表达病毒免疫原性蛋白或病毒颗粒的制备方法均为现有技术中的常规方法，其制备不是本发明保护的主题，但制备得到的羊传染性脓疱病毒减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原或病毒颗粒作为预防猪血凝性脑脊髓炎或PHEV传播的应用，或制备得到的预防猪血凝性脑脊髓炎或抗PHEV传播的药物，均落入本发明保护的范围。例如，裂解病毒会释放病毒自身的天然抗原片段，或原核表达病毒免疫原性蛋白均具有免疫保护作用。优选的，羊传染性脓疱病毒的病毒成分包括ORFV 011抗原(又称B2L抗原)片段和/或ORFV 059抗原(又称F1L抗原)片段，进一步优选的羊传染性脓疱病毒的病毒成分包括Seq ID NO:1和/或Seq ID NO:2所示的氨基酸序列，其中Seq ID NO:1所示的氨基酸序列为ORFV 011抗原片段，Seq ID NO:2所示的氨基酸序列为ORFV 059抗原片段。

上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒为灭活病毒(ORFV灭活毒)。通过ORFV灭活毒在用药局部激活髓系来源的巨噬细胞，巨噬细胞可以迁移至PHEV的靶向器官，进行游离病毒的清除或抑制。

上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒灭活病毒具有羊传染性脓疱病毒的天然构象或三维空间结构。本发明所述具有天然构象或三维空间结构是指电镜观察下，灭活病毒的表面结构、病毒粒子大小和病毒的构象未发生改变，而对于病毒表面或病毒内部的蛋白结构、蛋白修饰、核酸结构等是否发生改变未进行限定。

上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒灭活病毒的制备方法为：

(1)准备毒株：所述羊传染性脓疱病毒为ORFV-SY17、ORFV-NA17或ORFV-Jilin。

(2)扩增、浓缩病毒：利用MDBK、Vero或OFTU细胞扩增野生型ORFV，超速离心机离心浓缩病毒，蔗糖密度梯度离心纯化病毒。所述超速离心机离心浓缩及蔗糖密度梯度离心纯化病毒的方法均为本领域的常规技术，记载于相应的工具书及实验指南中。(《病毒学方法》，作者:李德新，出版社：科学出版社，出版日期：2016-03-01，ISBN：9787030358844)

(3)灭活ORFV：将β-丙内酯加入病毒液中，于4℃放置24小时。随后37℃水解2小时。优选的，β-丙内酯与待灭活病毒液的体积比例为1：4000-1：2000，待灭活病毒液浓度为10³-10⁹TCID₅₀/mL。(β-丙内酯可破坏病毒核酸，但不作用于病毒蛋白，较好地保护病毒的免疫原性。安全性体现在其可水解为无毒的β-羟基丙酸)

本发明优选的病毒野毒株ORFV-SY17、ORFV-NA17及ORFV-Jilin株为现有技术中已公开的毒株(1.Zhong J#,Guan J#,Zhou Y,Cui S,Wang Z,Zhou S,Xu M,Wei X,Gao Y,Zhai S,Song D,He W,Gao F,Zhao K*.Genomic characterization of two Orf virusisolates from Jilin province in China.Virus Genes,2019,55:490–501.2.Zhao K,Song D,He W,Lu H,Zhang B,Li C,Chen K,Gao F.Identification and phylogeneticanalysis of an Orf virus isolated from an outbreak in sheep in the Jilinprovince of China.Vet Microbiol.2010May 19；142(3-4):408-15.)，公众可通过与作者共享的方式获得。MDBK细胞(牛肾细胞)、Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)可通过商业化途径购买得到。OFTu细胞可以从羊鼻甲中提取。

上述任一项优选的是，所述嗜神经性病毒为嗜神经性冠状病毒、带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病病毒、MERS-CoV或SARS-CoV-1中的一种。

上述任一项优选的是，所述嗜神经性冠状病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒。

上述任一项优选的是，所述药物还包括稳定剂。

上述任一项优选的是，所述稳定剂包括但不限于下述物质的至少一种：各种糖类，如乳糖、甘油、蔗糖、甘露醇、海藻糖果糖、半乳糖及葡萄糖等；各种氨基酸；右旋糖酐及聚乙二醇等聚合物。

上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒与稳定剂的质量比为1：1～100,所述羊传染性脓疱病毒减毒株与所述稳定剂的质量比为1：1—1：100。进一步优选的是，所述羊传染性脓疱病毒减毒株与所述稳定剂的质量比为1：1，1：10，1：20，1：30，1：40，1：50，1：60，1：70，1：80，1：90，1：100。

上述任一项优选的是，所述羊传染性脓疱病毒与稳定剂的质量比为1：1。优选的，所述制剂由ORFV灭活毒50微克和稳定剂50微克组成。ORFV灭活毒制剂为混悬液制剂。进一步优选的是使用时，向其中添加稀释液。所述稀释液优选为生理盐水。稀释后的药物适用于注射、滴鼻、鼻黏膜喷雾的的给药形式，均可以实现免疫刺激或增强的效果，刺激机体的先天免疫应答反应。

上述任一项优选的是，所述药物使用的剂量的范围是10³-10⁹TCID₅₀，进一步优选的使用剂量为：10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹TCID₅₀。

上述任一项优选的是，给药方式为注射和/或鼻腔黏膜免疫的至少一种方式。优选的给药途径分别是静脉注射、肌肉注射、腹腔注射及滴鼻(喷雾)。

本发明还提供了一种制备上述任一项所述药物的方法，包括以下步骤：

(1)准备羊传染性脓疱病病毒；

(2)体外培养扩增羊传染性脓疱病病毒，浓缩病毒，然后纯化病毒；

(3)灭活羊传染性脓疱病病毒。

优选的，灭活后的羊传染性脓疱病病毒具有天然构象或三维空间结构。本发明所述具有天然构象或三维空间结构是指电镜观察下，灭活病毒的表面结构、病毒粒子大小和病毒的构象未发生改变，而对于病毒表面或病毒内部的蛋白结构、蛋白修饰、核酸结构等是否发生改变未进行限定。

上述任一项优选的是，羊传染性脓疱病病毒为ORFV-SY17株、ORFV-NA17或ORFV-Jilin。

上述任一项优选的是，步骤(2)中，利用MDBK、Vero或OFTu细胞扩增野生型羊传染性脓疱病病毒。

上述任一项优选的是，步骤(2)中，通过超速离心机离心浓缩病毒。

上述任一项优选的是，步骤(2)中，通过蔗糖密度梯度离心纯化病毒。

上述任一项优选的是，步骤(3)中，通过β-丙内酯灭活法灭活羊传染性脓疱病病毒。由β-丙内酯法灭活的ORFV与活病毒相比，在透射电镜下的形态未发生任何改变。根据本发明用途，优选ORFV的灭活方式为β-丙内酯于4℃作用24小时，随后37℃水解2小时。β-丙内酯灭活法仅作为本发明灭活羊传染性脓疱病病毒的一种优选方式，通过其他灭活病毒的方法，未破坏ORFV天然构象或三维空间结构，所得到的羊传染性脓疱病灭活病毒在作为预防和/或抗嗜神经性病毒感染药物中的应用均落入本发明的保护范围。

在本发明中，所述ORFV灭活病毒优选的作为免疫刺激或增强剂，刺激机体的先天免疫应答反应。进一步优选为，所述ORFV灭活病毒在缓解嗜神经性病毒感染疾病尤其是PHEV发展、阻断传播的方面，可以通过静脉注射、肌肉注射、腹腔注射及滴鼻(喷雾)的形式给药。该形式可能通过诱导机体产生非特异性免疫反应的方式降低病毒载量，并阻断病毒传播。实验表面，本发明所激活的非特异性免疫作用可以到达脑、脊髓等靶器官，降低靶器官的病毒载量，减缓症状。

上述任一项优选的应用方式是，所述ORFV灭活病毒的紧急短期预防，可以提升机体非特异性免疫应答能力，用于目前流行毒株及未来可能变异后传播力增强的毒株，降低其大范围传播风险。本发明所述短期预防可优选的通过鼻腔黏膜免疫进行。优选方案为，将所述预防和抗嗜神经性病毒感染的药物制成喷雾剂，进行鼻腔黏膜免疫，在接毒(PHEV)前24小时进行滴鼻处理，预防的意义在于在得知处于较大感染风险环境后，进行的紧急预防性策略。因为此时注射特异性疫苗尚需时日建立有效特异性免疫。通过此法进行此空窗期的非特异性保护。优选的喷雾剂使用方式为，ORFV灭活毒为喷雾剂的主要成分，同时辅以稳定剂。所述稳定剂优选为，乳糖、甘油、蔗糖、甘露醇、海藻糖果糖、半乳糖及葡萄糖、各种氨基酸、右旋糖酐或聚乙二醇中的至少一种。给药方式为鼻腔喷雾，作为紧急预防，喷雾2-3次，每次10³-10⁹TCID₅₀，每次间隔1-2天。鼻腔喷雾进一步优选的使用剂量为：10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹TCID₅₀。

本发明提供的用于预防和抗嗜神经性病毒感染的药物所述病毒为羊传染性脓疱病灭活病毒，优选的作为以下用途的药物使用：

(1)减少嗜神经性病毒在脑内的载量，进一步优选的通过静脉注射的方式控制PHEV在脑内的载量；

(2)抑制嗜神经性病毒对个体的感染，降低发病率，进一步优选的通过静脉注射的方式预防PHEV对个体的感染；

(3)减少嗜神经性病毒感染后的致死率，进一步优选的通过静脉注射的方式降低PHEV感染后的致死率；

(4)缓解、减轻、抑制嗜神经性病毒感染后机体的症状，进一步优选的通过静脉注射的方式控制PHEV触发的神经病变、炎症、神经症状及体重减轻；

(5)提高机体对嗜神经性病毒的抗感染力，起到预防的作用，进一步优选的通过肌肉注射及滴鼻给药的方式提高机体抵抗PHEV感染的能力。

本发明可采用以下优选方案，静脉注射、肌肉注射或滴鼻给药总共2次即可，2次之间间隔1-2周，即可达到为期0.5-1年的非特异性保护效果。对于单个个体，静脉注射剂量为每次10³-10⁹TCID₅₀，进一步优选的使用剂量为：10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹TCID₅₀；肌肉注射的剂量为每次10³-10⁹TCID₅₀，进一步优选的使用剂量为：10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹TCID₅₀；滴鼻给药方式的剂量为每次10³-10⁹TCID₅₀，进一步优选的使用剂量为：10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹TCID₅₀。

作为本发明特有的作用，ORFV灭活毒在本发明中还扩大非特异性免疫反应，即在机体未接触嗜神经性病毒抗原成分时，为机体适应性免疫反应的建立赢得时间。本发明所述药物应用于PHEV，所述ORFV灭活毒降低了PHEV侵染机体带来的冲击，为适应性免疫反应的建立赢得时间，作为紧急预防的备选方案。

上述任一项优选的是，所述药物与抗病毒感染药物的联合使用，包括与化学药物、生物药、中药等，ORFV灭活毒与抗病毒感染药物联合使用，用于提高机体的免疫力。优选的抗病毒药物包括Favipiravir、Clofazimine或Remdesivir。

除了嗜神经性病毒，本发明的研究中发现，对于全身性感染的病毒，本发明所提供的药物也能够减少神经系统的病毒载量(例如减少SARS-CoV-2病毒在神经系统的病毒载量)，因此进一步证明了ORFV灭活毒所激活的天然免疫的作用能够有效的到达神经系统，对机体产生保护作用。

ORFV灭活毒研究得最多的2类免疫调节功能为：

(1)细胞因子。现有技术中，机体接触到ORFV后首先上调TNF、IFN、IL18、IL8、IL6等Th1型促炎细胞因子，随后上调IL10及IL4等Th2型细胞因子。据报道，ORFV灭活毒对细胞因子的触发是全身性的，因为一些因子的检测信号是从血清样本中获得的。然而最新研究表明，PHEV可以在感染初期某种机制逃逸干扰素(IFN)的抗病毒免疫应答(Porcinehaemagglutinating encephalomyelitis virus deactivates transcription factorIRF3 and limits type I interferon production.Vet Microbiol.2021Jan；252:108918.PMID:33191000.)，而其他细胞因子对病毒的抑制作用远不及IFN。因此，本申请不能简单地推断ORFV灭活毒诱导的干扰素等细胞因子会帮助抵抗PHEV。

(2)免疫细胞。在现有技术中，ORFV病毒可诱导NK、DC、T细胞、单核细胞等免疫细胞浸润到注射位点局部。

众所周知，免疫细胞及细胞因子介导的炎性应答反应，如干扰素(IFN)因子的产生、释放有助于对病毒进行抑制。然而，所有已知文献所涉及的所谓ORFV灭活病毒抵抗其他病毒的机制也仅限于此，并未有更深入的研究。

在本发明中，ORFV灭活毒对PHEV的预防是通过激活髓系来源的巨噬细胞的激活获得的。不仅如此，其机制还涉及所激活巨噬细胞长期记忆的建立，该记忆的建立是通过ORFV灭活毒刺激的巨噬细胞基因组表观遗传修饰改变所获得的。表观修饰的不仅会改变巨噬细胞目前的活化状态，而且在其迁移到其他病原(如PHEV)的靶向组织器官后，可迅速动员、活化，对PHEV及被PHEV感染的细胞进行吞噬、杀伤。本发明所提出的通过激活髓系来源的巨噬细胞对PHEV侵染的作用，相对于现有技术的作用机制而言，ORFV灭活毒可以更早、更快地对PHEV侵染做出反应。

ORFV灭活毒经肌肉注射、静脉注射及鼻粘膜免疫后可刺激组织内巨噬细胞发生活化，产生表观遗传修饰，并产生短暂记忆。此类巨噬细胞通过在体内迁移、游走，继续寻找其他病原入侵位点，并在入侵位点处发挥抗病原作用。被激活以及发生记忆的巨噬细胞可在趋化因子的作用下迁移至PHEV侵染局部(即神经中枢)，进行病毒的吞噬、清除，故可降低PHEV在靶向组织内的滴度，同时可以减轻中枢神经系统的病变。本发明进一步的通过实验证实对小鼠肌肉注射ORFV灭活毒后进行RNA sequence测序，发现指示髓系来源细胞激活的数十种基因发生显著上调。证明，ORFV灭活毒注射可激活局部巨噬细胞。

附图说明

图1为本发明实施例1中ORFV野毒与灭活毒透射电镜检测图。

图2为本发明实施例1中ORFV灭活毒静脉注射前后小鼠的体重变化情况。

图3为本发明实施例1中ORFV灭活毒静脉注射的形式预防后，小鼠死亡率的情况。

具体实施方式

本发明通过以下实施例进行更加清晰、完整的描述，但所描述的实例仅是本发明一部分实施例，并非全部。所述实施例为帮助理解本发明，不应依此来局限本发明的保护范围。

实施例1

ORFV的扩增、浓缩及纯化

将MDBK、Vero或OFTU细胞培养于T75细胞培养瓶中，待细胞汇合度为70-80％时，将野生型ORFV-SY17毒株接种细胞，37℃培养箱无血清孵育1h后，加入含2％胎牛血清的DMEM培养液继续培养。待80％细胞发生病变后终止培养，并反复冻融收毒。1000转/分钟离心5分钟后，收集上清液。20000转/分钟离心1.5小时，弃上清液，并用适量(100-500微升)PBS重悬。用蔗糖密度梯度离心法进行。20000转/分钟离心1小时，收取30-40％密度之间的病毒聚集条带，并最终获得纯化好的病毒液。

灭活病毒的制备及透射电镜观察鉴定

根据所需的灭活病毒量，将β-丙内酯加入特定倍数稀释的ORFV病毒液中，于4℃放置24小时进行病毒的灭活。随后在37℃条件下水解2小时，以彻底将有毒性的β-丙内酯分解为无毒的成分。分解后的成分不会对细胞和动物机体产生不利影响。将活病毒与灭活病毒置于透射电镜下观察、鉴定。结果如图1显示，其中左图ORFV为ORFV野毒，右图iORFV为ORFV灭活毒。

灭活病毒毒力安全性评价

本发明实施过程中利用ORFV灭活病毒静脉注射与滴鼻的形式对小鼠进行处理，处理后对小鼠的体重变化进行记录。ORFV灭活毒并未显著改变小鼠的体重，如图2所示。

静脉注射：静脉注射总共2次即可，2次之间间隔1-2周，即可达到为期0.5-1年的非特异性保护效果。静脉注射剂量为10⁶TCID₅₀。

滴鼻：滴鼻给药总共2次即可，2次之间间隔1-2周，

滴鼻给药方式的剂量为10⁶TCID₅₀。

ORFV灭活病毒预防对PHEV感染后小鼠死亡率的影响

本发明利用ORFV灭活毒静脉注射进行短期免疫，随后建立PHEV感染的小鼠模型，观测小鼠死亡率的差异，结果如图3所示。ORFV预防可显著降低小鼠的死亡率。

序列表

<110> 吉林大学

<120> 一种用于预防和抗嗜神经性病毒感染的药物及其制备方法

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 378

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Trp Pro Phe Ser Ser Ile Pro Val Gly Ala Asp Cys Arg Val Val

1 5 10 15

Glu Thr Leu Pro Ala Glu Val Ala Ser Leu Ala Gln Gly Asn Met Ser

20 25 30

Thr Leu Asp Cys Phe Thr Ala Ile Ala Glu Ser Ala Lys Lys Phe Leu

35 40 45

Tyr Ile Cys Ser Phe Cys Cys Asn Leu Ser Ser Thr Lys Glu Gly Val

50 55 60

Asp Val Lys Asp Lys Leu Cys Thr Leu Ala Lys Glu Gly Val Asn Val

65 70 75 80

Thr Leu Leu Val Asp Val Gln Ser Lys Asp Lys Asp Ala Asp Glu Leu

85 90 95

Arg Glu Ala Gly Val Asn Tyr Tyr Lys Val Lys Val Ser Thr Arg Glu

100 105 110

Gly Val Gly Asn Leu Leu Gly Ser Phe Trp Leu Ser Asp Ala Gly His

115 120 125

Trp Tyr Val Gly Ser Ala Ser Leu Thr Gly Gly Ser Val Ser Thr Ile

130 135 140

Lys Asn Leu Gly Leu Tyr Ser Thr Asn Lys His Leu Ala Trp Asp Leu

145 150 155 160

Met Asn Arg Tyr Asn Thr Phe Tyr Ser Met Ile Val Glu Pro Lys Val

165 170 175

Pro Phe Thr Arg Leu Cys Cys Ala Ile Val Thr Pro Thr Ala Thr Asn

180 185 190

Phe His Leu Asn His Ser Gly Gly Gly Val Phe Phe Ser Asp Ser Pro

195 200 205

Glu Arg Phe Leu Gly Phe Tyr Arg Thr Leu Asp Glu Asp Leu Val Leu

210 215 220

His Arg Ile Glu Asn Ala Lys Asn Ser Ile Asp Leu Ser Leu Leu Ser

225 230 235 240

Met Val Pro Val Ile Lys His Ala Ser Ala Val Glu Tyr Trp Pro Gln

245 250 255

Ile Ile Asp Ala Leu Leu Arg Ala Ala Ile Asn Arg Gly Val Arg Val

260 265 270

Arg Val Ile Ile Thr Glu Trp Lys Asn Ala Asp Pro Leu Ser Val Ser

275 280 285

Ala Ala Arg Ser Leu Asn Asp Phe Gly Val Gly Ser Val Asp Met Ser

290 295 300

Val Arg Lys Phe Val Val Pro Gly Arg Asp Asp Ala Ala Asn Asn Thr

305 310 315 320

Lys Leu Leu Ile Val Asp Asp Thr Phe Ala His Leu Thr Val Ala Asn

325 330 335

Leu Asp Gly Thr His Tyr Arg Tyr His Ala Phe Val Ser Val Asn Ala

340 345 350

Glu Lys Gly Asp Ile Val Lys Asp Leu Ser Ala Val Phe Glu Arg Asp

355 360 365

Trp Arg Ser Glu Phe Cys Lys Pro Ile Asn

370 375

<210> 2

<211> 336

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Asp Pro Pro Glu Ile Thr Ala Tyr Ile Ile Gly Val Ala Glu Gly

1 5 10 15

Arg Gly Thr Lys Glu Val Phe Pro Thr Leu Pro Tyr Leu Val Gly Leu

20 25 30

Ala Asp Asp Pro Pro Lys Pro Gln Pro Ala Pro Lys Pro Ala Pro Ser

35 40 45

Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Lys Pro Ser

50 55 60

Pro Pro Ala Pro His Pro Lys Gly Asp His Val Leu Lys Ala Val Glu

65 70 75 80

Trp Lys Asp Val Asp Ser Lys Asp Tyr Pro His Phe Phe Thr Asp Met

85 90 95

Cys Lys Ser Thr Cys Pro Lys Glu Met Gln Arg Arg Ala Ala His His

100 105 110

Leu Asn Leu Trp Glu Ser Ile Ser Ala Gly Thr Val Ser Thr Lys Tyr

115 120 125

Ser Asp Asp Asp Phe Val Leu Val Val Asp Asn Asp Met Thr Phe Arg

130 135 140

Lys Pro Glu Met Val Lys Pro Leu Ile Glu Ala Met Arg Thr Asn Gly

145 150 155 160

Trp Tyr Met Ala Gln Leu Lys Glu Thr Tyr Met Thr Gly Ala Leu Ala

165 170 175

Thr Asn Val Pro Gly Thr Gly Asp Pro Glu Leu Met Val Tyr Pro Gly

180 185 190

Gly Tyr Asp Val Ser Leu Asp Ala Tyr Ile Ile Asn Val Gly Gly Met

195 200 205

Lys Lys Leu Tyr Asp Ala Ile Ile Lys Glu Gly Gly Leu Arg Ser Gly

210 215 220

Leu Leu Thr Glu Val Phe Thr Leu Glu Lys Arg Leu Ser Leu Ala Arg

225 230 235 240

Val Val Leu Ser Gly Ala Glu Gln Val Val Tyr Pro Glu Tyr Tyr Ile

245 250 255

Gln Val Lys Thr Arg Leu Ser Gly Ala Pro Ser Leu Trp Ser Leu Leu

260 265 270

Ala Thr Trp Leu Ala Arg Phe Trp Pro Gly Ala Ile Tyr Phe Leu Thr

275 280 285

Thr Pro Leu Phe Ser Phe Met Gly Leu Phe Asp Val Asp Val Val Asp

290 295 300

Ile Phe Ile Leu Ala Tyr Leu Leu Val Leu Val Leu Leu Leu Pro Asn

305 310 315 320

Ser Arg Leu Leu Trp Phe Ile Ala Gly Leu Leu Val Thr Ala Ile Val

325 330 335

Claims (10)

1.一种用于预防和抗嗜神经性病毒感染的药物，包括病毒成分，其特征在于，所述病毒为羊传染性脓疱病毒。

2.如权利要求1所述的药物，其特征在于，所述病毒成分为羊传染性脓疱病毒的减毒活病毒、灭活病毒、裂解病毒、亚单位抗原或病毒颗粒的至少一种。

3.如权利要求2所述的药物，其特征在于，所述病毒成分包括羊传染性脓疱病毒包括ORFV 011抗原片段和/或ORFV 059抗原片段。

4.如权利要求2所述的药物，其特征在于，所述羊传染性脓疱病毒为灭活病毒。

5.如权利要求1-4任一项所述的药物，其特征在于，所述嗜神经性病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒。

6.如权利要求5所述的药物，其特征在于，还包括稳定剂。

7.如权利要求6所述的药物，其特征在于，所述羊传染性脓疱病毒与稳定剂的质量比为1：1～100。

8.如权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物的剂量的范围是10³-10⁹TCID₅₀。

9.如权利要求8所述的药物，其特征在于，给药方式为注射和/或鼻腔黏膜免疫。

10.一种制备权利要求1-9任一项所述药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)准备羊传染性脓疱病病毒；

(2)体外培养扩增羊传染性脓疱病病毒，浓缩病毒，然后纯化病毒；

(3)灭活羊传染性脓疱病病毒。

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