CN113575292A - 一种桑黄菌种生长培育装置及其培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种桑黄菌种生长培育装置及其培育方法，涉及技术领域。本发明的培育方法使用上述桑黄菌种生长培育装置培育杨树桑黄菌，包括如下步骤：制作接种培养基；其中，接种培养基，杨树木屑5g、葡萄糖20g、马铃薯浆泥100g、磷酸二氢钾3g、水1000ml；制作原种培养基，麦粒、石灰、石膏，其余为水；消毒接种，对培养盖进行消毒，将接种培养基均匀涂抹至格槽，并接种母种；对瓶体进行进行消毒，并填充原种培养基，将瓶体接至培养盖对下端口。本发明通过将菌株分格培养，一格培育出一栽培种，能够根据长势优选出栽培种。

Description

一种桑黄菌种生长培育装置及其培育方法

技术领域

本发明属于技术领域，特别是涉及一种桑黄菌种生长培育装置及其培 育方法。

背景技术

桑黄是一种国际供认的搞笑治疗癌症的药用真菌，此外桑黄还具有调 解免疫功能、抗氧化等作用。近年来，桑黄菌在医药制剂与保健品行业的 需求量越来越多，桑黄栽培主要有袋料培养和段木培养两种。袋料培养是 指将栽培基质装入塑料袋中，灭菌后接种，然后置于合适环境下培养，直 至长出子实体，另一种段木培养是指将切好的木段置于菌袋中，两端切面 铺上栽培基质，然后扎紧菌袋，灭菌后接种，待菌袋长满菌丝后进行出菇 培养，而不论是袋料培养还是段木培养都需要长势良好的原种，现阶段的 原种制备，采用罐装培育，在所有菌丝在一个空间中生长，培育的原种之 间菌丝相互缠绕，其在分株时将造成菌株的损伤。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桑黄菌种生长培育装置及其培育方法，通 过将菌株分格培养，一格培育出一栽培种，能够根据长势优选出栽培种。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种桑黄菌种生长培育装置及其培育方法，包括培养器，培 养器包括培养盖和瓶体，培养盖和瓶体为可拆卸的；

培养盖内具有一中管，中管的表面设有一圈隔板，隔板具有链接与培 养盖上表壁的侧边；

中管的下端口安装有环形板，环形板上具有伸向由隔板、培养盖内表 壁构成的腔体对端板，端板上朝向腔体对面上设有格槽；

培养盖配合于瓶体上，培养盖上还具有瓶嘴。

进一步地，中管的上端口朝向瓶嘴。

进一步地，瓶体和培养盖的端口处具有一环形的边檐，边檐的外表具 有外缺口，外缺口上卡扣有“U”型卡，瓶体上边檐的表面具有环形槽。

进一步地，中管的下端安装有挡环，当环的上表面抵于环形板。

进一步地，瓶嘴对端口内配合有瓶塞，培养盖悬挂在培养架，培养架 上布设有管道，管道中具有贯通管道对内螺纹筒，内螺纹筒内配合有导热 柱，导热柱包括光干段和螺纹段。

一种桑黄菌种生长培育方法，使用上述桑黄菌种生长培育装置培育杨 树桑黄菌，包括如下步骤：

制作接种培养基；

其中，接种培养基，杨树木屑5g、葡萄糖20g、马铃薯浆泥100g、磷 酸二氢钾3g、水1000ml；

制作原种培养基，麦粒、石灰、石膏，其余为水；

消毒接种，对培养盖进行消毒，将接种培养基均匀涂抹至格槽，并接 种母种；

其中，对瓶体进行进行消毒，并填充原种培养基，将瓶体接至培养盖 对下端口，培养23-30天。

进一步地，培养时，将培养器悬挂至培养架上，通过插入式恒温系统 对培养盖进行保温。

进一步地，插入式恒温系统包括管道和带有螺纹段对导热柱体，管道 上具有贯通管道对内螺纹筒。

进一步地，桑黄菌母种是由PDA培养基进行培育的，其中培育温度在 26℃-29℃，培养基PH为4-10。

进一步地，PDA培养基中，培育温度为28℃，培养基PH为7。

本发明具有以下有益效果：

本发明。

通过隔板对培养盖进行分格，可对培育完成的单栽培种长势进行优选 栽种，即可以直接剔除涨势较差的原种，提高桑黄菌种的产量；

过管道中流动的冷却水汲取小麦氧化或者发酵溢出的热量，避免培养 容器内温度出现波动，保证原种的正常生长。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有 优点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所 需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动 的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为培养器的结构示意图；

图2培养器的内部结构示意图；

图3为4格培养盖的内部结构示意图；

图4为表1中黄桑菌生长的显著水平a--g的对照图

附图中，各标号所代表的部件列表如下：

1-瓶体，2-盖体，3-培养器，4-瓶塞，5-“U”型卡，6-挡环，101-边 檐，201-隔板，202-瓶嘴，203-格槽，204-环形板，205-环形槽，206-中 管。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进 行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没 有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的 范围。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“开孔”、“上”、“下”、 “厚度”、“顶”、“中”、“长度”、“内”、“四周”等指示方位或 位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指 的组件或元件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此不能 理解为对本发明的限制。

对菌株进行检测，确定菌株的属种类划分。

样本桑黄菌株JS-1由金寨县永福桑黄菌种植专业合作社提供，在六安 职业技术学院植物病理实。

首次分离选用PDA培养基：马铃薯200g，无水葡萄糖20g，琼脂粉15g， 自来水1000mL，pH自然。对采集的子实体在无菌操作台上，使用75％酒 精棉球擦拭子实体表面，进行杀菌消毒，再用灭过菌的解剖刀由菌伞向基 部切开，用无菌的接种钩在切面中线距离菌伞表面1/3处勾取一小块组织， 迅速的插入培养基表面，密封后放置于26℃恒温培养箱中黑暗培养。组织 块菌丝萌发后，挑取菌落边缘的菌丝进行进一步纯化培养。待菌丝长满平面1/3后将培养皿转移至4℃冰箱内避光保存验室进行分离、纯化、形态学 鉴定以及保藏。

将分离得到的菌株在PDA培养基上培养7d，将收集的菌丝置于1.5mL 的离心管，迅速放入液氮速冻，加入石英砂手工研磨。加900μL的2％CTAB 和90μL的10％SDS。振荡使其充分混匀，60℃下水浴1h，期间不时地颠倒 EP管，然后12000rpm离心10min。将上清液移至新的EP管中，加700μL 酚氯仿异戊醇，充分混匀，12000rpm离心10min。取上清550μL移至新的EP管加入550μL氯仿，充分混匀。12000rpm离心10min。取450μL上清液， 加入900μL无水乙醇，混匀在-20℃沉淀30min，12000rpm离心10min。弃 上清，加800μL75％乙醇洗涤，12000rpm离心5min。弃上清，控干管内水 分。37℃放置10min。加20μL无菌水，在计入1μLRNase液，37℃酶解1h。 电泳检测质量，保存于-20℃冰箱待用。

PCR反应程序采用94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃30s，72℃40s， 32个循环，72℃延伸5min。PCR产物用1％的琼脂糖凝胶电泳检测，并用 AXYGEN凝胶纯化试剂盒回收DNA片段。

连接到T载体上，转至大肠杆菌JM109中，PCR阳性检测后送南京擎 科生物公司测序。测序结果在GenBank中进行序列比对并下载相关序列， 利用DNAMAN进行比对分析，用MEGA6.0软件构建系统进化树。同时将 桑黄菌株JS-1的ITS序列与GenBank中已经登录的其他桑黄菌株的ITS序 列进行比对。

参照JS-1的rDNA-ITS序列长度为462bp，参照吴声华等[4]对桑黄孔 菌属种类的划分，用BLAST软件在GenBank中与已经登录的其他桑黄孔 菌属菌株的rDNA-ITS序列进行比对，结果表明菌株JS-1的rDNA-ITS序 列与GenBank中登录号为HQ845055.1的Sanghuangporusvaninii菌具有 100％的相似性。通过系统发育树分析表明，所得桑黄菌与Sanghuangporusvaninii同源性最高，遗传距离最近，位于系统发育树的同一 分支。结合JS-1的形态特征，以及rDNA-ITS序列分析结果，判定所得桑 黄应为瓦宁木层孔菌Sanghuangporusvaninii，即杨树桑黄。

其中，在进行培养阶段单因素试验和正交试验中确定，培养基为中营养物 质为葡萄糖，马铃薯，响应的条件pH值为8，温度28℃，并且在实验中发 现黄桑菌对对培养温度比较敏感。

在菌丝生长实验中以温度为例：

单因素试验：

以PDA培养基作为基础培养基培养7d后发现，菌株在5℃-35℃区间 均可生长，40℃时菌株停止生长，如表3所示。结果显示在5-28℃温度区 间内，菌落的生长速度随温度的升高而升高，且各组处理之间存在显著差 异；温度在28℃时，菌落的生长速度最快，温度在35℃处理条件下菌丝生 长缓慢，且菌落颜色呈纯白色。结果表明温度为28℃时最适合JS-1菌丝的 生长。

表1JS-1不同温度条件下生长情况。

表1

注：菌丝的生长平均速度为平均值±标准差，筒咧数据后不同字母表示经Duncans新复极差法检验在P＜0.05水平差异显著。

另外的：

与不同种属类的，如裂蹄木层孔菌采用玉米粉为氮源，桑木层孔菌采用氮 源为酵母浸膏，桑树桑黄通过正交试验研究发现可溶性淀粉为碳源蛋白胨 为氮源在30℃条件下培养最适合，等等存在差异。

一种桑黄菌种生长培育方法，更为具体的杨树桑黄原种的生长培育方 法：采用瓶罐培育方式，具体的采用一种瓶体1和瓶颈部既培养盖2可分 离的方式进行分格培育，其通过观察每一格中培育完成的单栽培种长势进 行优选栽种，提高桑黄菌种的产量，其中瓶体1为短瓶，即瓶体1的高度 低于培养盖2的高度，即区少量的原种培养基即可。

包括如下步骤：

制作接种培养基；

其中，接种培养基，杨树木屑5g、葡萄糖20g、马铃薯浆泥100g、磷 酸二氢钾3g、1000ml水；混合均匀，分成80份，备用。

其中，桑黄菌母种是由PDA培养基进行培育的，其中培育温度在28℃ -30℃，培养基PH为4-10。

培育温度为28℃，培养基PH为7

制作原种培养基，麦粒、石灰、石膏，其余为水；

具体的，小麦麦粒98％、石灰1％、石膏1％、含水量60％，备用。

消毒接种：对培养盖进行消毒，将接种培养基均匀涂抹至格槽，并接 种母种；

其中，对瓶体1进行进行消毒，并填充原种培养基，填满瓶体部分， 将瓶体接至培养盖对下端口，培养20-25天或者菌丝填满培养盖2中分格。

培养时大棚室内进行恒温28℃控制，之后只需注意培养器3内的温度 即可，特别应需要注意小麦麦粒氧化时所进行的放热热量，将培养器3悬 挂至培养架上，通过插入式恒温系统对培养盖2进行保温。

插入式恒温系统包括管道和带有螺纹段对导热柱体，管道上具有贯通 管道对内螺纹筒。

另外的，器通过管道内的冷却水带走导热柱体上的热量，从而维持培 养器2内的温度保持在28℃，优选的了给你确水的温度在26℃-27℃。

参阅图1-4所示，本发明为一种桑黄菌种生长培育装置，其中，培养器 3包括培养盖2和瓶体1，其中，培养盖2和瓶体1为可拆卸的，其中，瓶 体1和培养盖2的端口处具有一环形的边檐103，边檐103的外表具有外缺 口，外缺口上卡扣有“U”型卡5，瓶体1上边檐103的表面具有环形槽， 在链接是能够放置密封圈。

另外的，培养盖2上还具有瓶嘴202，瓶嘴202的端口上具有端部环形 板，其通过端部环形板吊挂在培养架上，其中培养架上有一横杆，横杆上 配合与瓶嘴202的缺口，其中，瓶嘴培养器3吊挂时，瓶体1不触地，瓶 体1和培养盖2均为硬质透明塑料瓶，在进行培养是在培养盖2上蒙布。

具体的：

培养盖2内具有一中管206，中管206的表面设有一圈隔板201，隔板 201具有链接与培养盖2上表壁的侧边，即由隔板将培养盖2内划分为一圈 分格空间，优选的每一培养盖2划分为20个分格，即每一培养器3中能够 培养出20个培栽种。

中管206的下端口部安装有环形板204，环形板204上具有伸向由隔板 201、培养盖2内表壁构成的腔体对端板，即一分格内伸入有一环形板204， 端板上朝向腔体对面上设有格槽205，其中格槽205为带有通孔的薄板，即 接种培养基能够链接原种培养基，为菌株提供营养，或者菌株衍生后扎根 至原种培养基。

中管206的下端安装有挡环6，当环6的上表面抵于环形板204，优选 的中管206的下端为螺纹端，挡环6的内圈为螺纹圈，通过挡环将环形板204固定在中管206的下端，另外的，瓶体1在装载原种培养基时，位于环 形板204外的瓶体1外圈部分可稍过瓶体1端口，在环形板204也放有部 分原种培养基，即原种培养基有部分要进入培养盖2引出菌丝，进而通过 瓶体内的原种培养基为黄桑菌提供能量。

中管206的上端口朝向瓶嘴202，即中管206和瓶嘴202之间不直接联 通，两端口之间存在间隙，方便培养盖2的涮洗。

瓶嘴202对端口内配合有瓶塞，瓶塞为橡胶塞，具体的为橡胶套，培 养盖2悬挂在培养架，培养架上布设有管道，管道中具有贯通管道对内螺 纹筒，内螺纹筒内配合有导热柱，导热柱包括光干段和螺纹段，橡胶套套 设在光杆段上配合在瓶嘴202上，通过管道中流动的冷却水汲取小麦氧化 或者发酵溢出的热量，避免培养容器内温度出现波动，保证原种的正常生 长。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体 示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或 者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述 术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体 特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合 适的方式结合。

以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例 并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。 显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具 体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使 所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求 书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (10)

1.一种桑黄菌种生长培育装置，包括培养器(3)，培养器(3)包括培养盖(2)和瓶体(1)，其特征在于：培养盖(2)和瓶体(1)为可拆卸的；

培养盖(2)内具有一中管(206)，中管(206)的表面设有一圈隔板(201)，隔板(201)具有链接与培养盖(2)上表壁的侧边；

中管(206)的下端口部安装有环形板(204)，环形板(204)上具有伸向由隔板(201)、培养盖(2)内表壁构成的腔体对端板，端板上朝向腔体对面上设有格槽(205)；

培养盖(2)配合于瓶体(1)上，培养盖(2)上还具有瓶嘴(202)。

2.根据权利要求1所述的一种桑黄菌种生长培育装置，其特征在于，中管(206)的上端口朝向瓶嘴(202)。

3.根据权利要求2所述的一种桑黄菌种生长培育装置，其特征在于，瓶体(1)和培养盖(2)的端口处具有一环形的边檐(101)，边檐(101)的外表具有外缺口，外缺口上卡扣有“U”型卡(5)。

4.根据权利要求3所述的一种桑黄菌种生长培育装置，其特征在于，中管(206)的下端安装有挡环(6)，当环(6)的上表面抵于环形板(204)。

5.根据权利要求4所述的一种桑黄菌种生长培育装置，其特征在于，瓶嘴(202)对端口内配合有瓶塞，培养盖(2)悬挂在培养架，培养架上布设有管道，管道中具有贯通管道对内螺纹筒，内螺纹筒内配合有导热柱，导热柱包括光干段和螺纹段。

6.一种桑黄菌种生长培育方法，使用权利要求1-6任意一所述的桑黄菌种生长培育装置培育杨树桑黄菌，包括如下步骤：

制作接种培养基；

其中，接种培养基，杨树木屑5g、葡萄糖20、马铃薯浆泥100，磷酸二氢钾3，1000ml水；

制作原种培养基，麦粒、石灰、石膏，其余为水；

消毒接种，对培养盖进行消毒，将接种培养基均匀涂抹至格槽(203)，并接种母种；

其中，对瓶体进行进行消毒，并填充原种培养基，将瓶体(1)接至培养盖(2)对下端口，培养20-25天。

7.根据权利要求6所述的一种桑黄菌种生长培育方法，其特征在于，培养时，将培养器悬挂至培养架上，通过插入式恒温系统对培养盖(2)进行保温。

8.根据权利要求7所述的一种桑黄菌种生长培育方法，其特征在于，插入式恒温系统包括管道和带有螺纹段对导热柱体，管道上具有贯通管道对内螺纹筒。

9.根据权利要求6所述的一种桑黄菌种生长培育方法，其特征在于，桑黄菌母种是由PDA培养基进行培育的，其中培育温度在26℃-29℃，培养基PH为4-10。

10.根据权利要求6所述的一种桑黄菌种生长培育方法，其特征在于，PDA培养基中，培育温度为28℃，培养基PH为7。

Images