CN113564079B - 一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用，本发明的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌株从从广西来宾甘蔗地的土壤中分离而得，其保藏编号为CCTCC NO：2021695，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，该菌株具有较高产酶活力，且产蔗糖磷酸化酶稳定性好，该菌产酶的酶活达304.7U，制备出的α‑熊果苷产量达到62.32g/L，且利用该菌产酶转化制备AA‑2G产量达到46.15g/L。

Description

一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用。
【背景技术】
α-熊果苷(α-Ar)是一种高价值糖苷，广泛应用于化妆品和制药行业，是一种安全可靠的美白剂。酶法是生产α-熊果苷的主要方法，因其原料较简单、生产周期较短而被广泛使用，但由于缺少高催化效率的酶，目前α-熊果苷的产量受到了很大的限制。
维生素C，又名L-抗坏血酸是一种常见的水溶性维生素，广泛分布于新鲜蔬菜、水果、绿色植物中。L-抗坏血酸也是人体内必需的营养元素，但由于人体内缺少古洛糖酸内酯氧化酶，无法合成抗坏血酸，必须通过体外摄取。L-抗坏血酸在日常生产生活中有着广泛的应用。在医疗卫生方面，L-抗坏血酸具有抑制黑色素形成、促进胶原蛋白的合成、抑制癌细胞增殖、防治坏血病和传染病、促进创伤愈合等作用，是辅助治疗的保健药品。在化妆品中L-抗坏血酸酸可作为还原剂、紫外线吸收剂和黑色素形成抑制剂来使用。由于L-抗坏血酸分子中存在极不稳定的连烯二醇结构，极易被热和氧化剂破坏，尤其是光、重金属和荧光物质都能促进其氧化，使其应用受到很大限制。2-O-D-吡喃糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)是L-抗坏血酸的衍生物，该物质是在糖基转移酶(蔗糖磷酸化酶或葡聚糖蔗糖酶)的作用下，由蔗糖和L-抗坏血酸缩合而成。AA-2G具有非还原性，与抗坏血酸相比，稳定性更高，同时更易于吸收和利用。AA-2G作为抗坏血酸最佳的替代品，有效弥补了抗坏血酸自身稳定性差、易被氧化分解的缺陷，极大提高其应用价值。我国对于AA-2G的研究正在不断推进，但离工业化生产仍有一定的距离，成本过高是困扰我们的一大难题。一方面是由于工业酶本身的酶活力较低，导致生产成本提高；另一方面，底物转化率低、分离纯化手段不够完善也是阻碍其工业化生产的另一重要原因。
本发明利用自行筛选的蔗糖磷酸化酶酶法催化合成，即蔗糖磷酸化酶酶液催化蔗糖和L-抗坏血酸合成2-O-D-吡喃糖基-L-抗坏血酸，催化蔗糖和氢醌(对苯二酚)合成α-熊果苷，此反应具有绿色高效、反应温和的优势。
【发明内容】
有鉴于此，本发明的目的在于提供了一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用。
为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：
一株多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株SLLSM4，其保藏编号为CCTCC NO：2021695，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。
进一步说明，所述的多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株SLLSM4，所述菌株从广西来宾甘蔗地的土壤中分离而得。
本申请还提供一种包含如上所述的多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株SLLSM4的微生物制剂。
进一步说明，所述的微生物制剂，所述微生物制剂中含有活菌数不低于1.0×106个/mL的多黏类芽孢杆菌SLLSM4细胞。
本申请还提供一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，具体的方法为：在无菌操作下，用灭菌接种环接多黏类芽孢杆菌SLLSM4到已高温灭菌的发酵培养基(pH＝6.0)中，在37℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液按照接种量10.0％接入新的发酵培养基中摇床恒温37℃培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液。
本申请还提供一种上述所述的多黏类芽孢杆菌SLLSM4在生产α-熊果苷和/或生产2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸产品上的应用。
本申请还提供一种制备如上所述α-熊果苷的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)、将保存的多黏类芽孢杆菌SLLSM4接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得浓度为1.0×106个/ml的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶优化后的发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；
所述斜面培养基为LM培养基；所述LM培养基配方为：蔗糖lg；酵母膏1g；蛋白胨1g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL；
所述摇瓶优化后的发酵培养基配方为：蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL；
(2)、在温度为50℃，加入30mmol/L、pH为6.0磷酸盐缓冲液10mL，蔗糖5g，氢醌50g/L，再加入5mL蔗糖磷酸化酶粗酶液，经180r/min摇床避光反应4h，即可得到α-熊果苷。
本申请还提供一种如上所述2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)、将保存的多黏类芽孢杆菌SLLSM4接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得浓度为1.0×106个/ml的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶优化后的发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；
所述斜面培养基为LM培养基；所述LM培养基配方为：蔗糖lg；酵母膏1g；蛋白胨1g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL；
所述摇瓶优化后的发酵培养基配方为：蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O；
(2)、以15g的蔗糖和10g的抗坏血酸为底物，加入50mmol/L、pH为7.0的磷酸缓冲液100mL，以20mL的蔗糖磷酸化酶粗酶液作为催化剂，在52℃的摇床中反应5h，即可得到2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸。
本申请还公开上述所述的多黏类芽孢杆菌SLLSM4在食品、化妆品或制药领域中的应用。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌是从广西来宾甘蔗地的土壤中分离筛选出一株菌，研究发现该菌是产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌SLLSM4，为了研究该菌的产酶能力，做了单因素和正交实验的研究，通过本申请人研究确定多黏类芽孢杆菌SLLSM4发酵产酶的最佳条件为：发酵时间72h，接种量量为10％，发酵温度为37℃，蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO40.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；初始pH为6.0；该菌产酶的酶活达304.7U/mL，可见该菌具有产酶活力高、稳定性好；并利用该菌产酶转化制备α-熊果苷产量达到62.32g/L，且利用该菌产酶转化制备AA-2G产量达到46.15g/L。
【附图说明】
图1为本申请实施例的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌株在平皿上的形态图；
图2为不同发酵时间对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图3为不同碳源对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图4为不同碳源浓度对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图5为不同氮源对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图6为不同蛋白胨浓度对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图7为不同发酵培养基pH对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图8为菌种不同接种量对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图；
图9为不同发酵温度对多黏类芽孢杆菌产酶能力的影响图。
【具体实施方式】
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
一、菌种的筛选
土样取自广西来宾甘蔗地的土壤，以LM培养基形成筛选培养基筛选产蔗糖磷酸化酶的菌株，工艺为：菌种初筛：菌种初筛：取土壤1g加入装有9mL的无菌生理盐水中，制成10-1浓度的样品液，震荡混匀后逐级稀释到10-2、10-3、10-4、10-5、10-6浓度，静置备用。取后3个稀释度，采用涂布法在PS培养基平板上进行菌种分离，在平板上划线分离，反复纯化，从而得到分离菌株的纯培养物。平板置于4℃冰箱保存。
LM培养基具体为LM琼脂斜面固体培养基，其配方为：蔗糖lg；酵母膏1g；蛋白胨1g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL。
二、菌种的鉴定及发酵条件的优化
1、菌种的鉴定
(1)菌落形态观察：将斜面菌点接至有LM培养基的平皿中，于37℃培养48h，观察菌落形态。
(2)菌株的16S rDNA鉴定：将纯化好的菌株送至上海美吉生物医药科技有限公司鉴定。通过Nucleotide BLAST分析，与多黏类芽孢杆菌菌株的16S r DNA序列同源性为100％，可初步确定SLLSM4菌株为多黏类芽孢杆菌。
所述筛选出的多黏类芽孢杆菌SLLSM4的保藏信息如下：名称为多黏类芽孢杆菌SLLSM4，其分类命名为为多黏类芽孢杆菌SLLSM4，保藏号为CCTCC NO：2021695，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：湖北省武汉市武昌珞珈山，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。
本发明所述多黏类芽孢杆菌SLLSM4在平皿上的形态特征如图1所示，该菌株菌落呈白色的粘稠状，表面湿润光滑。
2、多黏类芽孢杆菌SLLSM4产酶条件优化研究
LM培养基基本配方为：LM培养基：蔗糖lg；酵母膏1g；蛋白胨1g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL。
(1)发酵时间对产酶的影响
以LM培养基接种多黏类芽孢杆菌SLLSM4，在温度为37℃、pH自然、装液量100ml/250ml、接种量8％，转速180r/min的条件下分别发酵36、48、60、72、84h取上清液测酶活。结果见表1和图2。
表1不同发酵时间对多黏类芽孢杆菌产酶能力
项目 36h 48h 60h 72h 84h
酶活(U/mL) 77.35 152.74 243.63 308.67 271.75
(2)碳源及其浓度的优化
以LM培养基为基础接种多黏类芽孢杆菌SLLSM4，碳源的变量为蔗糖、淀粉、乳糖、葡萄糖、麦芽糖。配制成液体培养基在摇床上37℃，转速180r/min，发酵培养72h，10000r/min离心10min，在此基础上进一步探究蔗糖浓度(5、7、9、11、13％)对菌株的产酶影响，取其上清液测酶活。结果见表2和图3、4。
表2不同碳源对多黏类芽孢杆菌产酶能力
项目 蔗糖 淀粉 乳糖 葡萄糖 麦芽糖
酶活(U/mL) 308.96 67.37 152.76 262.34 131.73
项目 蔗糖浓度5％ 蔗糖浓度7％ 蔗糖浓度9％ 蔗糖浓度11％ 蔗糖浓度13％
酶活(U/mL) 107.33 252.71 303.62 242.34 171.75
(3)氮源的优化
以LM培养基为基础接种多黏类芽孢杆菌SLLSM4，分别选取牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、玉米粉、黄豆粉为发酵培养基中唯一的有机氮源。配制成液体培养基在摇床上37℃，转速180r/min，发酵培养72h，10000r/min离心10min，在此基础上进一步探究蛋白胨浓度(5、7、9、11、13％)对菌株产酶的影响，取其上清液测酶活。结果见表3和图5、图6。
表3不同氮源对多黏类芽孢杆菌产酶能力
Figure BDA0003190199310000061
(4)pH对酶活的影响
以LM培养基为基础接种多黏类芽孢杆菌SLLSM4，将培养基的初始pH调为3、4、5、6、7取上清液测酶活。配制成液体培养基在摇床上37℃，转速180r/min，发酵培养72h，取出发酵液10000r/min离心10min，取其上清液测酶活。结果见表4和图7。
表4不同发酵培养基pH对多黏类芽孢杆菌产酶能力
项目 pH(3) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7)
酶活(U/mL) 157.38 212.72 286.94 304.66 271.78
(5)接种量对产酶的影响
以LM培养基为基础接种多黏类芽孢杆菌SLLSM4，分别以6％、8％、10％、12％、14％的接种量接种。配制成液体培养基在摇床上37℃，转速180r/min，发酵培养72h，取出发酵液10000r/min离心10min，取其上清液测酶活。结果见表5和图8。
表5菌种不同接种量对多黏类芽孢杆菌产酶能力
项目 6％ 8％ 10％ 12％ 14％
酶活(U/mL) 177.39 282.72 306.93 264.62 128.79
(6)发酵温度对产酶的影响
以LM培养基为基础接种多黏类芽孢杆菌SLLSM4，分别以28℃、30℃、35℃、37℃、40℃摇床培养，转速180r/min，发酵培养72h，取出发酵液10000r/min离心10min，取其上清液测酶活。结果见表6和图9。
表6不同发酵温度对多黏类芽孢杆菌产酶能力
项目 28℃ 30℃ 35℃ 37℃ 40℃
酶活(U/mL) 141.63 237.99 293.37 305.68 211.13
通过表1至表6和图2至图9的单因素优化检测的酶活数据可以确定多黏类芽孢杆菌SLLSM4发酵产酶的最佳条件为：发酵时间72h，接种量量为10％，发酵温度为37℃，蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；初始pH为6.0。
采用上述的得到的多黏类芽孢杆菌SLLSM4发酵产酶的最佳条件，对多黏类芽孢杆菌SLLSM4进行发酵培养后对，发酵液10000rpm离心10min，，取上清液测酶活。经过检测酶活达到304.7U/mL。
三、利用多黏类芽孢杆菌SLLSM4的应用：产α-熊果苷产品
利用多黏类芽孢杆菌SLLSM4转化制备α-熊果苷的方法，步骤如下：
(1)、蔗糖磷酸化酶粗酶液的配置
在无菌操作下，用灭菌接种环接多黏类芽孢杆菌SLLSM4到已高温灭菌的优化培养基(蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL)(pH＝6.0)中，在37℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液接入新的优化产酶培养基(蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO40.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL)中摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液。
(2)、催化制备α-熊果苷
在温度为50℃，加入30mmol/L、pH为6.0磷酸盐缓冲液10mL，蔗糖5g，氢醌50g/L，再加入5mL蔗糖磷酸化酶粗酶液、经180r/min摇床避光反应4h，即可得到α-熊果苷。
按分光光度法测定反应液中α-熊果苷的含量。
经过测定，α-熊果苷产量达到62.32g/L。
磷酸盐缓冲液的配方为：合肥博美生物科技有限责任公司购买
四、利用多黏类芽孢杆菌SLLSM4的应用：产2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸产品
利用多黏类芽孢杆菌SLLSM43转化制备AA-2G的方法，步骤如下：
(1)、蔗糖磷酸化酶粗酶液的配置
在无菌操作下，用灭菌接种环接多黏类芽孢杆菌SLLSM4到已高温灭菌的发酵培养基(蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O0.002g；维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL)(pH＝6.0)中，在30℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液接入新的发酵培养基(蔗糖5g；蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g；MgSO4.7H2O 0.04g；MnCI2.4H2O 0.02g；FeSO4.4H2O 0.002g；维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100mL)中摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液。
(2)、催化制备AA-2G
以10g的蔗糖和7g的抗坏血酸为底物，加入50mmol/L、pH为7.0磷酸盐缓冲液100mL的磷酸缓冲液，以20mL的蔗糖磷酸化酶粗酶液作为催化剂，在52℃的摇床中反应7h。按分光光度法测定反应液中AA-2G的含量。磷酸缓冲液可从市面上购买而得，例如，可从合肥博美生物科技有限责任公司购买。
经过测定，AA-2G产量达到36.46g/L。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.一株多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株SLLSM4，其保藏编号为CCTCCNO：2021695，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。
2.包含如权利要求1所述的多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株 SLLSM4的微生物制剂。
3.如权利要求2所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中含有活菌数不低于1.0×106个/mL的多黏类芽孢杆菌 SLLSM4细胞。
4.一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，其特征在于，在无菌操作下，用灭菌接种环接多黏类芽孢杆菌 SLLSM4到已高温灭菌的发酵培养基中，发酵培养基的pH=6.0，在37℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液按照接种量10.0%接入新的发酵培养基中摇床恒温37℃培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；所述多黏类芽孢杆菌SLLSM4，其保藏编号为CCTCC NO：2021695。
5.一种利用权利要求1所述的多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株SLLSM4制备α熊果苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
（1）、将保存的多黏类芽孢杆菌 SLLSM4接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得浓度为1.0×106个/mL的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶优化后的发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；
所述斜面培养基为LM培养基；所述LM培养基配方为：蔗糖 lg； 酵母膏 1g； 蛋白胨1g；K2HPO4 0.5g； MgSO4.7H2O 0.04 g；MnCI2.4H2O 0.02g； FeSO4.4H2O 0.002g； 维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g； H2O 100mL；
所述摇瓶优化后的发酵培养基配方为：蔗糖 5g； 蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g； MgSO4.7H2O0.04 g；MnCI2.4H2O 0.02g； FeSO4.4H2O 0.002g； 维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100 mL；
（2）、在温度为50℃，加入30mmol/L、pH为6.0磷酸盐缓冲液10mL，蔗糖5g，氢醌50g/L，再加入5mL蔗糖磷酸化酶粗酶液，经180r/min摇床避光反应4 h，即可得到α熊果苷。
6.一种利用权利要求1所述的多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株SLLSM4制备2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
（1）、将保存的多黏类芽孢杆菌 SLLSM4接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得浓度为1.0×106个/ml的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶优化后的发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；
所述斜面培养基为LM培养基；所述LM培养基配方为：蔗糖 lg； 酵母膏 1g； 蛋白胨1g；K2HPO4 0.5g； MgSO4.7H2O 0.04 g；MnCI2.4H2O 0.02g； FeSO4.4H2O 0.002g； 维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g； H2O 100mL；
所述摇瓶优化后的发酵培养基配方为：蔗糖 5g； 蛋白胨8g；K2HPO4 0.5g； MgSO4.7H2O0.04 g；MnCI2.4H2O 0.02g； FeSO4.4H2O 0.002g； 维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H2O 100 mL；
（2）、以15g的蔗糖和10g的抗坏血酸为底物，加入50mmol/L、pH为7.0磷酸盐缓冲液100mL，以20mL的蔗糖磷酸化酶粗酶液作为催化剂，在52℃的摇床中反应5h，即可得到2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸。
7.权利要求1所述的多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株SLLSM4在制备化妆品或制备药物领域中的应用。
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