CN111961614B - 一株产胞外多糖的细菌cd-1 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株产胞外多糖的细菌cd‑1，该菌株于2018年12月17日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2018904。该株产胞外多糖的细菌cd‑1的发酵液中胞外多糖的含量达到0.43g/L，可为后续分离纯化各种胞外多糖提供菌种资源，具有较为广阔的市场应用前景。

Description

一株产胞外多糖的细菌cd-1

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种产胞外多糖的细菌。

背景技术

多糖是一种可再生资源，它因具有特殊而良好的理化性质及能提供给人类极具使用价值的产品的特性，而被广泛应用于食品、化工、医药、石油等领域。一般由十个以上单糖分子结合在一起组成的生物聚合物称为多糖，多糖聚合物中通常含有几百甚至几千个单糖分子。

微生物多糖主要以胞内多糖、胞壁多糖和胞外多糖三种形式存在。其中胞外多糖是指微生物体内合成分泌到培养基中的一类多糖。通常细菌胞外多糖指微荚膜、荚膜、液层和菌胶团等，它能保护细菌免受干旱损伤、宿主细胞的吞噬，还具有储藏养料、堆积某些代谢产物和表面吸附等作用，对细菌本身具有很多的功能特性。在多糖应用方面，微生物多糖不仅具有植物多糖和动物多糖不具备的优势，且因具有丰富多样的生物活性而被广泛应用于食品工业和非食品工业中。微生物多糖产生菌的种类繁多，胞外多糖的产生不受季节、地域等各种外界环境的影响。

虽然当前对微生物多糖的研究还在不断深入，但据统计，真正进行或已接近工业化生产的还很少，微生物多糖真正的应用价值还没有得到实现。挖掘产胞外多糖的微生物资源仍显得尤为重要。

微生物由于种类丰富，长期以来人们利用各种培养技术对环境中的微生物进行分离鉴定与开发利用，随着科学技术的发展，微生物资源在科技研究及生物产业中的重要性日益凸显。微生物资源中以细菌的种类最为繁多，其分离源广泛，具体来自于土壤、水体、淤泥以及一些极端环境，现已发现的微生物资源仅占10％左右，潜力广阔。而细菌分离地位鉴定可通过多相分类手段实现，该手段最早由Colwell于1970年提出，是指根据包括表型、基因型与系统发育的信息，综合研究微生物分类和系统进化的过程。其中DNA同源性分析是确定正确的分类地位的最直接的方法，而DNA-DNA杂交可以在总体水平上研究微生物间的关系，用于种水平上的分类学研究。1987年，国际系统细菌学委员会(InternationalCommittee on Systematic Bacteriology,ICSB)规定，DNA同源性≥70％为细菌种的界限。2018年，众多学者发表在International Journal of Systematic and Evolutionary上的文章指出，利用ANI(average nucleotide identity)与dDDH(digital DNA-DNAhybridization)取代传统的DNA杂交手段，表示不同菌株在基因水平上的差别。

由此推断，从不同环境中分离细菌，并通过多相分类手段进行鉴定，进而对其产多糖能力进行分析，将会是实现多糖有效化利用的重要手段。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中的不足，提供一株产胞外多糖的细菌cd-1，为后续分离纯化各种胞外多糖提供菌种资源，对实现多糖的有效化利用具有较大实际意义。

本发明的技术方案为：本发明所述的一株产胞外多糖的细菌cd-1已经于2018年12月17日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2018904。

该株产胞外多糖的细菌cd-1分离自河南省郑州市农田土壤中。

该株产胞外多糖的细菌cd-1为革兰氏阴性菌，细胞呈短杆状，无鞭毛，在LB固体培养基上恒温培养，菌落边缘整齐，光滑，凸起，不透明，黄色。

该株产胞外多糖的细菌cd-1的最适生长温度为30℃，最适生长pH＝7.0，最适生长NaCl浓度为0％。

该株产胞外多糖的细菌cd-1的发酵液中胞外多糖的含量达到0.43g/L，可为后续分离纯化各种胞外多糖提供菌种资源。

本发明的有益效果是：

分离得到新菌株Aquamicrobium zhengzhouensis cd-1隶属于α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)，根瘤菌目(Rhizobiales)，叶杆菌科(Phyllobacteriaceae)Aquamicrobium属的一株新菌株，具有产胞外多糖的能力，其发酵液中胞外多糖的含量为0.43g/L，可为后续分离纯化各种胞外多糖提供菌种资源，具有较为广阔的市场应用前景。

附图说明

图1是菌株cd-1在LB平板上的纯培养菌落图；

图2是菌株cd-1的电子显微镜照片；

图3是菌株cd-1的16S rRNA序列图；

图4是基于16S rRNA基因序列的菌株cd-1的系统发育树；

图5是菌株cd-1与菌株NK8^T，Sa14^T在生理生化特征上的差异比较图；

图6是菌株cd-1的极性酯双向薄层层析图谱；

图7是菌株cd-1与菌株NK8^T，Sa14^T的脂肪酸分析(％)比较图。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。

一株产胞外多糖的细菌cd-1，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M2018904，保藏日期为2018年12月17日。

供试土壤及培养基

供试土壤来自河南省郑州市农田土壤

MSM基础盐培养基：NaCl 1.0g/L，铵盐1.0g/L，K₂HPO₄ 1.5g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，MgSO₄ 0.2g/L，pH 7.0-7.5，121℃灭菌30min。

LB培养基：酵母粉5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，NaCl5.0 g/L，固体培养基加入1.5％的琼脂粉，121℃灭菌30min。

1、实验方法

1.1菌株cd-1的分离与筛选

取一定土壤样品，风干过筛(约10g)，加入到100mL MSM基础盐培养基中，30℃，200rpm振荡培养1h。吸取100μL至无菌水中，梯度稀释至10^-5，10^-6和10^-7后，涂布于LB固体培养基平板上，30℃培养3d，待平板上出现单菌落进行后续操作。分离得到一株细菌，初步鉴定为Aquamicrobium属菌株，命名为cd-1，后续对其进化关系和分类地位进行鉴定。

1.2菌株cd-1的分类鉴定

1.2.1菌落特征观察

将菌株cd-1划线于LB固体培养基上，30℃培养3d，观察其菌落特征，包括大小、颜色、边缘、凸起、光滑度、粘性、透明度等。

1.2.2温度、pH和盐浓度对菌株cd-1生长的影响

挑取LB固体培养基上培养3d的单菌落，接种至LB液体培养基，30℃摇床培养36h至对数期，作为种子液。

将收集的种子液按1％(v/v)的比例转接至新鲜的LB液体培养基中，混匀。分别置于10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、37℃、42℃摇床培养3d，测定其生长情况(OD₆₀₀)，探究温度对cd-1生长的影响。

调节LB培养基中NaCl浓度，分别为0.0％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7％、8％和9％，按1％(v/v)的比例转接种子液至培养基中，30℃摇床培养3d，测定其生长情况(OD₆₀₀)，研究NaCl浓度对cd-1生长的影响。

调节LB培养基的pH分别为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0，按1％(v/v)的比例转接种子液至培养基中，30℃培养3d，测定生长情况(OD₆₀₀)，探究pH对菌株cd-1生长的影响。

1.2.3菌株cd-1的16S rRNA基因序列的扩增、测序及系统发育树的构建

利用16S rRNA基因扩增通用引物(27f，1492r)，以菌株cd-1的基因组DNA为模板进行PCR扩增，反应体系为30μL：2×PCR Mix 15μL，正反引物各1μL，DNA模板1μL，加超纯水至30μL。反应程序如下：95℃，5min；95℃，30s；55℃，30s；72℃，90s；72℃，10min；10℃，5min。其中第二步至第四步重复30次。琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果，用回收试剂盒回收扩增片段，并送往南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序分析，并通过在线比对网站进行相似度分析(www.ezbiocloud.net)，下载相关序列构建系统发育进化树。

1.2.4菌株cd-1的生理生化特性

菌株的运动性、硝酸盐还原、尿素和明胶水解、α-葡萄糖苷酶和β-半乳糖苷酶活性的测定根据《常见细菌系统鉴定手册》和《Bergey’s Manual of DeterminativeBacteriology》，结合API 20E和Biolog GENIII的结果，对菌株的生理生化特性进行分析和鉴定。

API 20E鉴定试剂条是由20个含干燥底物的小管所组成。这些测定管用配置的细菌悬浮液接种，代谢产物颜色自发或通过添加附加试剂而发生颜色变化，根据反应结果并参照分析图索引和鉴定软件得到鉴定结果

Biolog GENIII利用微生物对不同碳源进行呼吸代谢的差异，针对每一类微生物筛选95种不同碳源或其它化学物质，配合四唑类显色物质(如TTC、TV)，固定于96孔板上(A1孔为阴性对照)，接种菌悬液后培养一定时间，检测微生物细胞利用不同碳源进行呼吸代谢过程中，产生的氧化还原物质与显色物质发生反应而导致的颜色变化(吸光度)以及由于微生物生长造成的浊度差。

1.3化学分类学分析

1.3.1脂肪酸分析：

1.3.1.1培养基

MIDI推荐培养基--TSBA培养基：加热混合溶解30g胰蛋白胨大豆肉汤(Tryptieasesoy broth，TSB)、15g琼脂和1L去离子水制成。

1.3.1.2配置试剂(所有有机试剂均为HPLC级，无机试剂均为优级纯)

溶液I(皂化试剂)：混合150mL水和150mL甲醇，加入45g NaOH，同时搅拌至完全溶解。

溶液II(甲基化试剂)：325mL 6mol/L的盐酸加入到275mL甲醇中，混合均匀。

溶液III(萃取试剂)：加200mL甲基叔丁基醚到200mL正己烷中，混合均匀。

溶液IV(碱洗液)：在900mL去离子水中加入10.8g NaOH，搅拌至完全溶解。

溶液V(饱和NaC1溶液)：在100mL去离子水中加入40g NaC1。

1.3.1.3实验方法

试验方法主要参照MIDI操作手册，即在TSBA培养基上28℃恒温培养细菌24h后取菌，通过提取和分离细菌细胞膜中的磷脂脂肪酸(PLFA)，甲基化后进行气相色谱鉴定分析。具体如下：

(1)细菌的培养：在含TSBA培养基的培养皿和含牛肉膏蛋白胨培养基的培养皿上按照四区划线法分别接种4℃保存的菌株，28℃恒温培养箱中培养24h。随机选取部分TSBA培养基上培养的菌株，转接到另一含TSBA培养基的培养皿中，28℃再培养24h，用于比较活化处理时间长短对鉴定结果的影响。

(2)菌株的获取：按照MIDI推荐的方法，三区取样获取的菌株脂肪酸最具代表性。因此用普通接种环获取已培养好的三区菌株至少40mg到10mL带聚四氟乙烯塞的玻璃瓶中。

(3)皂化：在取好菌株样的玻璃瓶中加入1.0mL的溶液I(皂化试剂)，盖好盖子，旋涡振荡5-10s，于100℃的沸水浴中加热5min，稍冷却后振荡5-10s，再将玻璃瓶放入水浴中继续加热25min，然后冷却至室温。

(4)甲基化：每个玻璃瓶中加入溶液II(甲基化试剂)2.0mL，盖紧盖子旋涡振荡后，放入80℃水浴加热10min，再将玻璃瓶冷却至室温。

(5)萃取：往玻璃瓶中加入1.25mL溶液III(萃取试剂)，玻璃瓶盖紧盖子在旋转式混合振荡仪上温和振荡10min后，打开盖子，取出每个样品的下层相并丢弃，保留上层有机相。

(6)基本洗涤：每个玻璃瓶中加入3.0溶液IV(碱洗液)，盖紧盖子后在旋转式混合振荡仪上温和旋转振荡5min。静置几分钟，若两相界面不清楚，加数滴溶液V(饱和NaC1溶液)使两层液面的接口更清楚。

(7)分析吸取上层有机相于气相色谱样品瓶中，在安捷伦6890气相色谱仪，配备分流/不分流进样口，氢火焰离子化检测器(FID)及HP气相色谱化学工作站(HP CHEMSTATIONver A5.01)；色谱柱为Ultra-2柱，长25m，内径0.2mm；气相色谱各参数由MIDI Sherlock程序(MIDI，Inc.Newark，DE)设置调用(炉温为二阶程序升温：起始温度170℃，每分钟5℃升至260℃，随后以40℃/min升至310℃，维持1.5min；进样口温度250℃，载气为氢气，流速0.5mL/min，分流进样模式，分流比100:1，进样量2μL；检测器温度300℃，氢气流速30mL/min，空气流速216mL/min，补充气(氮气)流速30mL/min)。

1.3.2呼吸醌测定：

(1)菌体的收集制备

菌体摇瓶培养，通过离心收集菌体，用蒸馏水洗涤两次，离心后-70℃冻3d，真空抽3d，冻干菌体4℃保存备用。以同属标准菌株或标准品为对照。

(2)醌的提取及纯化

A.取冻干菌体约100mg，加入V_{氯仿：甲醇}＝2：1的混合溶液40mL，在黑暗处磁力搅拌10h左右。

B.在黑暗处用滤纸过滤收集滤液。

C.用减压旋转薄膜蒸发仪40℃(36℃)减压蒸馏至干燥。

D.用少量(1mL)丙酮重新溶解干燥物，长条状点样于GF254硅胶板上(青岛海洋化工厂分厂，100×200mm)，同时在一端点V_K做对照。

E.以苯作展层剂，展层约20min。

F.取出风干后在254nm紫外灯下观察。R_f＝0.8，在绿色萤光背景下呈暗褐色的带即为甲基萘醌的位置，与V_K位点齐平，若R_f＝0.4-0.5的位置有暗褐色的带则为泛醌组分。G.刮下R_f＝0.8的带，用1mL丙酮溶解，然后用细菌滤器过滤除去硅胶，收集滤液(可适当浓缩至200μL-300μL)，即得甲基萘醌的丙酮溶液。置于4℃，黑暗处保存。

(3)高压液相色谱(HPLC)测定甲基萘醌组分

用反相高压液相色谱分析法进行甲基萘醌的测定。高压液相色谱仪为Waters，反相高压液相柱为十八烷基硅烷(ODS 5μm,250×4.6mm id)，进样量一般为20μL流动相为甲醇(分析纯)：异丙醇(分析纯)＝2：1溶液，流速为1.00mL/min，柱温为40℃，240nm和270nm紫外检测，使用Waters Epower软件完成测定并记录数据。

1.3.3极性酯测定：

细胞极性酯的制备：取100mg冻干细胞加6.75mL氯仿∶甲醇∶0.3％NaCl(50∶100∶40，V/V/V)的混合物，室温下静置4h，经4000r/min离心10min，取上清液分别加入1.75mL氯仿与0.3％NaCl混合液(5∶4，V/V)摇匀静置，取下层液在流动氮气下干燥，然后加100μL氯仿和甲醇混合液(2∶1，V/V)溶解样品。

双薄层层析：取10μL样品点在10×10cm TLC薄板上，进行薄层层析。第一相展层系统：氯仿∶甲醇∶水(16.25∶5∶1，V/V/V)，第二相展层系统：氯仿∶醋酸∶甲醇∶水(10.6∶6∶4.2∶1.7，V/V/V/V)混合后分层，取下层作展层剂。第一相展层至薄板上端时取出薄板，风干；第二相展层过上边缘，取出，风干。喷10％的磷钼酸，置130℃烤箱10min，显示兰色斑点为极性脂。

提取菌株cd-1基因组DNA，并通过文库构建、库检、上机测序、生物信息学分析，得到菌株的基因组序列，并与菌株Aquamicrobium soli NK8^T和Aquamicrobium aerolatumSa14^T进行Average Nucleotide Identity(ANI)和digital DNA-DNA hybridizations(dDDH)的数据分析。

1.4菌株cd-1的保藏信息

菌株cd-1已于2018年12月17日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M2018904，该菌株的分类命名是Aquamicrobium zhengzhouensis cd-1。

1.5cd-1菌剂的制备与应用

将LB固体培养基上的cd-1单菌落接种到LB液体培养基，培养至对数中期，作为种子液备用。发酵罐500L，投料量400L，发酵培养基为LB液体培养基。投料完毕后121℃高压湿热灭菌，冷却至40℃左右，将上述培养好的摇瓶菌种按10％的接种量接种入发酵罐中，接种后的发酵罐温度控制在25，30，35℃，培养过程中无菌空气的通气量分别为1:0.6，1:0.8，1:1.0，搅拌速度分别为100，150，200转/分。整个工艺流程培养时间为72h。发酵结束后测定发酵液中多糖的含量。

多糖的测定采用苯酚硫酸法：

(1)葡萄糖标准曲线的测定：配制0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液，取葡萄糖标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别置于试管中，依次加入蒸馏水使其最终体积均为1.0mL。往各试管中再加入1.0mL 6％的苯酚溶液，摇匀，迅速滴加浓硫酸各5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴15min，取出后冷却至室温，按测定波长490nm处以蒸馏水为对照，测定吸光度值OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

(2)多糖样品的测定：将多糖样品溶液稀释后取1.0mL，加入1.0mL 6％的苯酚溶液，摇匀，迅速滴加5.0mL浓硫酸，摇匀后放置5min，然后置沸水浴15min，取出冷却至室温，在波长490nm处测定吸光度值，以蒸馏水代替多糖样品作为空白调零。

2、实验结果

菌株cd-1为革兰氏阴性菌，需氧条件下生长。细胞呈短杆状(0.5-0.8μm×1.7-2.3μm)，无鞭毛(图2)，有运动性。在LB固体培养基上，30℃培养3d后，菌落直径为0.5-1.2mm，边缘整齐，光滑，凸起，不透明，黄色(图1)。

菌株cd-1生长发生在15-37℃，最适温度为30℃。菌株可以在pH 5.0-9.0，最适pH7.0，0-8％NaCl，最适0％NaCl下生长。

菌株的氧化酶和过氧化氢酶呈阳性，硝酸盐还原、柠檬酸利用、H₂S产生、吲哚产生呈阴性，VP试验和尿素水解呈阳性。精氨酸双水解酶和β-半乳糖苷酶呈阳性，α-葡萄糖苷酶、蛋白酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱氢酶呈阴性。D-葡萄糖、L-鼠李糖和L-阿拉伯糖发酵呈阳性，D-甘露醇、肌醇、D-山梨醇、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁苷发酵呈阴性。Biolog GENIII试剂条结果显示，菌株cd-1可以利用L-鼠李糖、1％乳酸钠、梭链孢酸、D-丝氨酸、D-果糖-6-PO4、醋竹桃霉素、利福霉素、二甲胺四环素、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-焦谷氨酸、洁霉素、盐酸胍、硫酸四癸钠、葡糖醛酰胺、万古霉素、四唑紫、四唑蓝、p-Hydroxy-苯乙酸、丙酮酸盐、L-乳酸、α-Keto-戊二酸、L-羟基丁二酸、萘啶酮酸、氯化锂、亚碲酸钾、吐温40、α-Hydroxy-丁酸、β-Hydroxy-D,L-丁酸、α-Keto-丁酸、丙酸、醋酸、甲酸、氨曲南、丁酸钠、溴酸钠生长，其余均为阴性。

以菌株cd-1的基因组DNA为模板，16S rRNA基因通用引物为引物进行PCR扩增，得到如图3所示总长为1452bp的基因序列。将该序列在EzBioCloud数据库(https://www.ezbiocloud.net)中进行比对，并通过MEGA 6.0中Neighbor-Joining法构建菌株cd-1的系统进化树(图4)，结果表明菌株cd-1与Aquamicrobium属的亲缘关系最为接近，位于该属进化分支内部，并与Aquamicrobium aerolatum DSM 21857^T与Aquamicrobium soli NK8^T单独构成了一个亚分支。因此，本研究以菌株Aquamicrobium aerolatum DSM 21857^T(下面以Sa14^T表示)与Aquamicrobium soli NK8^T作为参比菌株，与cd-1进行比较分析，其在生理生化特征上的差异如图5所示。

根据实验结果，菌株cd-1的呼吸醌为Q-10，G+C％为59.2％，极性酯包括二磷脂酰甘油(DPG)，磷脂酰甘油(PG)，磷脂酰乙醇胺(PE)，磷脂酰单甲基乙醇胺(PME)(图6)。

菌株cd-1与菌株NK8^T，Sa14^T在脂肪酸组成上的差异如图7所示。可知菌株cd-1的脂肪酸(>5％)组成主要包括C_18:1ω7c(35.8％)，C_19:0cycloω8c(32.1％)，C _18:1ω7c11-methyl(5.2％)，虽然在个别脂肪酸的组成和含量上有所差别，但是符合Aquamicrobium属脂肪酸的特征。此外，Average Nucleotide Identity(ANI)是在核酸水平，两两基因组之间所有直系同源蛋白编码基因的相似性，常用于研究基因组之间的进化距离。相较于传统的DNA-DNA hybridization(DDH)，ANI指标计算简单省时，且ANI指标有助于构建结构性数据库，方便生物信息学者的后续研究。相较于传统的DNA杂交数值(DDH)，digital DNA-DNAhybridizations(dDDH)能更真实反应不同菌株之间基因组的差异。本实验中菌株cd-1与模式菌株NK8^T的ANI为71.0％，与Sa14^T的ANI为73.4％，低于新种临界值95％，与NK8^T的dDDH为19.9％，与Sa14^T的dDDH为20.6％，远低于临界值70％，结合菌株cd-1的系统发育关系，生理生化特征以及化学分类特征，将菌株cd-1归于Aquamicrobium属的一株新菌株，命名为Aquamicrobium zhengzhouensis cd-1^T。

从菌株的电镜图可以看出cd-1能产生胞外多糖，我们从菌株的基因组中也找到了编码胞外多糖合成蛋白的基因。

1、胞外多糖在食品工业中的应用：黄原胶是理想的增调剂、乳化剂和成型剂等，将其加到蛋糕中可以使蛋糕蓬松增大，结构均勾细腻，还可以延长蛋糕的货架期，它还是一种典型的假塑性流体。黄原胶具有对酸碱、温度等的稳定性，其粘度基本不受影响。将黄原胶其应用于奶油制品和乳制品中可使其产品结构坚实、易于切片、利于香味的释放，并且可以改善产品口感使其更加细腻清爽。

2、微生物胞外多糖具有广泛的药理作用。它具有增强各种免疫细胞活力、促进细胞因子合成、活化补体、抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗氧化、防衰老、降血糖血脂等功效，而且具有毒性低、安全无害等特点，近年来受到人们越来越广泛的关注。

3、微生物胞外多糖在化工工业中的应用：不仅在吸附重金属及污水处理中得到应用，而且在其它工业生产中也得到广泛的应用，例如黄原胶现已被广泛应用于纺织工业中，在印染工业中它可以控制浆水的流变速度，通过与染料的结合阻止染料多快迁移变化，使印染出的花纹更加的清晰均匀，而且黄原胶能很好的与印染染料互溶。黄原胶还具有另一个应用市场即石油工业，低浓度的黄原胶水溶液可以保持水基钻井液的黏液并控制其流变性能，因而在高速转动的钻头部位黏度极小，大大节约了动力。

4、微生物胞外多糖种类繁多，性质各异，某些特性可用于农业、养殖业中，具有增强鱼、虾等水产品、家禽及家畜免疫系统的功能作用。主要影响其机体的网状内皮系统、巨噬细胞、淋巴细胞、白细胞、补体系统以及RNA、DNA、蛋白质的合成，进而促进抗体的生成以及淋巴因子、干扰素的诱生增强。

Aquamicrobiumzhengzhouensis cd-1在500升发酵罐中，在发酵温度30℃，无菌空气的通气量1:0.8，搅拌速度200转/分，培养72h，发酵液中胞外多糖的含量最高，达到0.43g/L，可为后续分离纯化各种胞外多糖提供菌种资源。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。但是以上所述仅为本发明的具体实施例，本发明的技术特征并不局限于此，任何本领域的技术人员在不脱离本发明的技术方案下得出的其他实施方式均应涵盖在本发明的专利范围之中。

Claims (5)

1.一株产胞外多糖的细菌cd-1，其特征在于，该菌株于2018年12月17日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2018904，细菌cd-1属于Aquamicrobium属。

2.如权利要求1所述的一株产胞外多糖的细菌cd-1，其特征在于，该株产胞外多糖的细菌cd-1分离自河南省郑州市农田土壤中。

3.如权利要求1所述的一株产胞外多糖的细菌cd-1，其特征在于，该株产胞外多糖的细菌cd-1为革兰氏阴性菌，细胞呈短杆状，无鞭毛，在LB固体培养基上恒温培养，菌落边缘整齐，光滑，凸起，不透明，黄色。

4.如权利要求1所述的一株产胞外多糖的细菌cd-1，其特征在于，该株产胞外多糖的细菌cd-1的最适生长温度为30℃，最适生长pH＝7.0，最适生长NaCl浓度为0％。

5.如权利要求1所述的一株产胞外多糖的细菌cd-1，其特征在于，其可为后续分离纯化各种胞外多糖提供菌种资源。

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