CN113546183A - 双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法 - Google Patents
双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113546183A CN113546183A CN202110874092.6A CN202110874092A CN113546183A CN 113546183 A CN113546183 A CN 113546183A CN 202110874092 A CN202110874092 A CN 202110874092A CN 113546183 A CN113546183 A CN 113546183A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- dspe
- bottle
- contrast agent
- double
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002961 echo contrast media Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 42
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 18
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims abstract description 18
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims abstract description 5
- CBBVHSHLSCZIHD-UHFFFAOYSA-N mercury silver Chemical compound [Ag].[Hg] CBBVHSHLSCZIHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims abstract description 5
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 8
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 210000000998 shell membrane Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- -1 adding GA Chemical compound 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 abstract description 19
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 30
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 28
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 10
- 238000012285 ultrasound imaging Methods 0.000 description 8
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 5
- 229910018503 SF6 Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 4
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 4
- SFZCNBIFKDRMGX-UHFFFAOYSA-N sulfur hexafluoride Chemical compound FS(F)(F)(F)(F)F SFZCNBIFKDRMGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 3
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- QCQYVCMYGCHVMR-AAZUGDAUSA-N n-[(2r,3r,4s,5r)-4,5,6-trihydroxy-1-oxo-3-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexan-2-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QCQYVCMYGCHVMR-AAZUGDAUSA-N 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 2
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000687983 Cerobasis alpha Species 0.000 description 1
- MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N Glycyrrhetinsaeure Natural products C12C(=O)C=C3C4CC(C)(C(O)=O)CCC4(C)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 101100346932 Mus musculus Muc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000008883 Patent Foramen Ovale Diseases 0.000 description 1
- 108010046016 Peanut Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- XGCDHPDIERKJPT-UHFFFAOYSA-N [F].[S] Chemical compound [F].[S] XGCDHPDIERKJPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 229960003720 enoxolone Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 150000002966 pentacyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960000909 sulfur hexafluoride Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
- A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
- A61K49/223—Microbubbles, hollow microspheres, free gas bubbles, gas microspheres
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
- A61K49/221—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by the targeting agent or modifying agent linked to the acoustically-active agent
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Acoustics & Sound (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明适用于医药领域，提供了双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，包括以下步骤：S1.DSPE‑PEG2000‑GA和DSPE‑PEG2000‑PNA的合成；S2.按比例称取DPPA、DSPC、DSPE‑PEG2000‑GA和PNA；S3.加入氯仿和甲醇；S4.旋转蒸发至茄形瓶中溶液完全挥发干净；S5.加入缓冲液；S6.将西林瓶与换气装置相接；S7.将银汞调和振荡机固定在平稳的桌面上；S8.振荡后小瓶内液体性状为乳白色，弃上层白色泡沫，取下层混悬液，提取上层乳白色悬液。本发明具有肝靶向性更强，显像时间更长的优势。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，尤其涉及双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法。
背景技术
技术背景：国家癌症中心统计，全国每天新发肿瘤约12000例，每天约7500名肿瘤患者死亡，严重危害我国居民的生命和健康，给我国带来巨大的疾病负担。恶性肿瘤的早期诊断和及时治疗是提高肿瘤患者的生存率、降低病死率的有效手段。影像学检查是恶性肿瘤诊断的常规检查手段，其能准确确定肿瘤的位置，测量肿瘤的大小，判断肿瘤是否发生转移等。超声检查技术操作简单、价格便宜、使用方便，在恶性肿瘤的诊断和治疗评估中发挥着其他检查方法不可替代的作用。由于肿瘤病灶与周围正常组织的声阻抗不同，故超声检查能发现肿瘤病灶，但在检查过程中由于肥胖、肺气等因素的影响，某些肿瘤病灶难以清晰显示，从而产生一定的误诊和漏诊。此外，常规二维超声检查仅能进行肿瘤病灶的解剖结构显像，而彩色多普勒检查仅能评估大血管的血流灌注，难以准确评估肿瘤病灶内微小血管的灌注情况，故常规超声检查在恶性肿瘤的诊断中存在一定的局限性。超声造影检查是通过超声造影剂来提高组织间的声阻抗差，增强病灶与周围正常组织的超声显像对比度，实时动态观察病灶内微小血管灌注情况，从而提高超声检查的敏感性和特异性。超声造影技术目前己用于多种疾病的诊断及鉴别诊断中，包括心脏结构和功能评估、实质器官良恶性病灶的鉴别诊断、空腔脏器的通畅性判断等。超声造影检查能显示恶性肿瘤中微小血管的分布及灌注情况，且在恶性肿瘤中表现为快进快出的增强模式，与周围正常组织或良性病灶的增强模式不同，因此有利于恶性肿瘤的诊断和鉴别诊断。
超声造影剂是超声造影检查的基础和关键，本质是外膜包裹核心气体的囊泡，其发展经历了不同时期。第一代超声造影剂是无外膜包裹的空气或氧气型超声造影剂，其粒径大，不能通过肺微循环，且稳定性差，体内持续时间短，故仅能用于右心声学造影，临床应用价值极其有限。目前临床上仍采用经肘前静脉注射氯化钠溶液和空气混合物来进行右心声学造影，诊断卵圆孔未闭及评估介入封堵术的效果。第二代超声造影剂是外膜包裹空气的超声造影剂，外膜材料有白蛋白、脂质、糖类等。第二代超声造影剂较第一代超声造影剂粒径减小，其能通过肺微循环增强左心腔、周围血管以及实质器官的超声显像。但由于稳定性差、增强超声显像持续时间短，目前第二代超声造影剂己不在临床使用。第三代超声造影剂是外膜包裹惰性气体的超声造影剂，主要是氟碳气体和氟硫气体。由于惰性气体溶解度低、弥散度低，其构建的超声造影剂不易溶解、稳定性更高、增强超声显像效果更好，目前己广泛应用于临床超声造影检查中。目前国内主要使用的超声造影剂是声诺维，其是脂质外膜包裹六氟化硫的微泡，粒径在2～8μm，静脉注射后可通过肺微循环，显著增强多种组织器官的超声显像。但其不能通过血管内皮间隙故仅能用于获取肿瘤组织内微循环的血流灌注信息，缺乏对疾病信息的特异性识别，限制了超声造影检查技术在疾病诊断及鉴别诊断中的应用价值。随着超声影像学、分子生物学、纳米医学等学科的不断发展，产生了新兴的超声分子影像学，其能在活体内分子水平进行超声显像，定性和定量分析活体组织中结构和分子表达水平的变化。超声分子显像是利用靶向超声造影剂为超声分子探针进行超声造影显像的技术，活体内靶向超声造影剂利用其表面携载的特异性配体与靶组织中的靶分子稳定结合，长时间地聚集在靶组织中，借助其增强超声显像的部分显著增强靶组织的超声显像，从而判断靶组织中分子或细胞水平的变化，进一步提高超声早期诊断疾病的准确性。超声分子显像己被应用于肿瘤、血栓、炎性反应、动脉粥样硬化等疾病的早期诊断和疗效监测的实验研究中，并被证实能在活体内无创动态监测相应蛋白表达水平的变化。靶向超声造影剂是超声分子显像的前提，其成功构建是超声分子显像的关键环节。静脉注射靶向超声造影剂后，其能在分子水平识别靶组织中的靶分子，特异性聚集在靶组织中，显著增强靶组织的超声显像。理想的靶向超声造影剂应具有以下特点：1.粒径均匀合适，能自由通过心肺循环，顺利进入靶组织中；2.特异性稳定结合靶组织中的靶分子，大量聚集在靶组织中，在非靶组织中浓度低；3.在靶组织中滞留时间长，稳定性高，能满足超声造影检查所需的时间；4.具有显著的增强超声显像效果，且增强超声显像效果稳定；5.安全无毒性，对机体无明显影响，体内可快速降解或排出。甘草次酸是一种五环三萜类化合物。1991年，Negish等人发现大鼠肝实质膜表面有大量GA受体，且GA结合具有高度特异性。He等人在2010年发现GA也能与人肝癌细胞系中的蛋白激酶Cα结合，且肝癌组织中GA-R的表达是邻近正常肝组织的1.5-5倍。花生凝集素是一种从花生中提取的植物凝集素蛋白。核糖核酸与β-D-半乳糖基-（1-3）-N-乙酰基-D-半乳糖胺结合，在不同类型的癌细胞上表达。粘蛋白是一类由上皮组织产生的高分子量和高度糖基化的蛋白质家族。特别是粘蛋白1与许多癌症有关，包括乳腺癌和胃癌。MUC1在大约80%的上皮癌细胞中异常过表达。Thomsen-Friedenreich抗原是一种常见的肿瘤相关糖抗原，其基本结构为Gal-β（1-3）GalNAc，这也是MUC1的核心结构。因此，PNA能与MUC1特异性结合，可作为脂质体修饰的配体。利用PNA和GA的特异结合特性，可以合成双配体修饰的脂质体，从而实现对癌细胞的主动靶向。
但是，现有技术中：单一靶点的特异性配体仅能靶向聚集于特定靶分子表达阳性的肿瘤组织中。由于肿瘤的异质性，同一种肿瘤组织中靶分子的表达水平可能不同，故携载单一配体的靶向超声造影剂的增强超声显像效果有时欠佳。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，旨在解决单一靶点的特异性配体仅能靶向聚集于特定靶分子表达阳性的肿瘤组织中。由于肿瘤的异质性，同一种肿瘤组织中靶分子的表达水平可能不同，故携载单一配体的靶向超声造影剂的增强超声显像效果有时欠佳的问题。
本发明实施例是这样实现的，双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，包括以下步骤：
S1.DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA的合成：
将DSPE-PEG2000-NH2溶于氯仿中，然后加入GA、EDC和DMAP，溶液在室温下搅拌孵育24小时，然后用纯水洗涤；在溶液中加入无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩溶液；将溶液与无水乙醚混合沉淀，产物溶解沉淀，最终得到DSPE-PEG2000-GA；
将PNA溶于PBS中，在加热条件下向溶液中加入DSPE-PEG2000-NHS，直至完全溶解，溶液在室温下搅拌8h，然后转移到透析袋中48h进行纯化，将溶液冷冻干燥，得到DSPE-PEG2000-PNA；
S2. 将电子天平置于稳定的平面上，称重前应先归零，按比例称取DPPA、DSPC、DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA，将其混合物倒入茄形瓶中；
S3. 用微量移液器向装有混合物的茄形瓶中加入氯仿和甲醇，轻轻摇晃瓶身，使上述混合物颗粒完全溶解于溶液中；
S4. 将茄形瓶与旋转蒸发仪连接起来，旋转蒸发至茄形瓶中溶液完全挥发干净，瓶底形成白色薄膜状沉淀物；
S5. 关闭旋转蒸发仪，取下茄形瓶，加入缓冲液，轻摇瓶身至白色薄膜完全均匀溶解在PBS中，即得到微泡壳膜原液，再用微量移液器将其分装到西林瓶中；
S6. 将西林瓶与换气装置相接，用SF6气体置换出西林瓶中的空气，置换时间为2min，换气压力控制在0. 02KPa，结束后立即密封，存放在4℃冰箱中备用，此时西林瓶中为微泡原液；
S7. 将银汞调和振荡机固定在平稳的桌面上，设定振荡时间为90s；
S8. 振荡后小瓶内液体性状为乳白色，弃上层白色泡沫，取下层混悬液，静置30min后，提取上层乳白色悬液，此层液体即为靶向纳米微泡。
进一步的技术方案，根据S1，PBS的pH值为7.4。
进一步的技术方案，根据S1，加热条件为水浴加热。
进一步的技术方案，根据S2，DPPA ： DSPC： DSPE-PEG-GA/PNA=0. 052： 1： 0.382。
进一步的技术方案，根据S3，氯仿和甲醇的比例为2：1。
进一步的技术方案，氯仿和甲醇为液态。
进一步的技术方案，根据S6，微泡原液呈浑浊状。
本发明实施例提供的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，本方案解决了现有技术中：单一靶点的特异性配体仅能靶向聚集于特定靶分子表达阳性的肿瘤组织中。由于肿瘤的异质性，同一种肿瘤组织中靶分子的表达水平可能不同，故携载单一配体的靶向超声造影剂的增强超声显像效果有时欠佳的问题；获得了：肝靶向性更强，显像时间更长的优点。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。
作为本发明一个实施例提供的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，包括以下步骤：
S1.DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA的合成：
将DSPE-PEG2000-NH2溶于氯仿中，然后加入GA、EDC和DMAP，溶液在室温下搅拌孵育24小时，然后用纯水洗涤；在溶液中加入无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩溶液；将溶液与无水乙醚混合沉淀，产物溶解沉淀，最终得到DSPE-PEG2000-GA；
将PNA溶于PBS中，PBS的pH值为7.4，在水浴加热条件下向溶液中加入DSPE-PEG2000-NHS，直至完全溶解，溶液在室温下搅拌8h，然后转移到透析袋中48h进行纯化，将溶液冷冻干燥，得到DSPE-PEG2000-PNA；
S2. 将电子天平置于稳定的平面上，称重前应先归零，按比例称取DPPA、DSPC、DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA，DPPA ： DSPC： GA/PNA=0. 052： 1： 0. 382，将其混合物倒入茄形瓶中；
S3. 用微量移液器按照2：1的比例向装有混合物的茄形瓶中加入液态的氯仿和甲醇，轻轻摇晃瓶身，使上述混合物颗粒完全溶解于溶液中；
S4. 将茄形瓶与旋转蒸发仪连接起来，旋转蒸发至茄形瓶中溶液完全挥发干净，瓶底形成白色薄膜状沉淀物；
S5. 关闭旋转蒸发仪，取下茄形瓶，加入缓冲液，轻摇瓶身至白色薄膜完全均匀溶解在PBS中，即得到微泡壳膜原液，再用微量移液器将其分装到西林瓶中；
S6. 将西林瓶与换气装置相接，用SF6气体置换出西林瓶中的空气，置换时间为2min，换气压力控制在0. 02KPa，结束后立即密封，存放在4℃冰箱中备用，此时西林瓶中为微泡原液，呈浑浊状；
S7. 将银汞调和振荡机固定在平稳的桌面上，设定振荡时间为90s；
S8. 振荡后小瓶内液体性状为乳白色，弃上层白色泡沫，取下层混悬液，静置30min后，提取上层乳白色悬液，此层液体即为靶向纳米微泡。
在本发明实施例中，1.DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA的合成： 将DSPE-PEG2000-NH2（0.1g）溶于2mL氯仿中，然后加入0.11g GA、0.11gEDC和0.055 g DMAP。溶液在室温下搅拌孵育24小时，然后用纯水洗涤2~4次。加入无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩溶液。溶液与无水乙醚混合沉淀，产物溶解沉淀2~4次，最终得到DSPE-PEG2000-GA；PNA（0.05g）溶于2mL PBS（pH 7.4）中。在加热条件下（在水浴中）向溶液中加入DSPE-PEG2000-NHS（0.05g），直至完全溶解。溶液在室温下搅拌8h，然后转移到透析袋（8000~14000 Da）中48h进行纯化。将溶液冷冻干燥，得到DSPE-PEG2000-PNA。
2.将电子天平置于稳定的平面上，称重前应先归零。按比例称取DPPA（二苯基磷酞基叠氮化物）、DSPC（二硬脂酞磷脂酞胆碱）、DSPE-PEG2000-GA和PNA，三者之间比例为DPPA：DSPC：DSPE-PEG-GA/PNA=0.052：1：0.382，GA和PNA质量比1：1，本研究中所称取三者的质量分别为0.52mg、10mg、3.82mg。将其混合物倒入茄形瓶中。
3.用微量移液器按2： 1的比例向装有混合物的茄形瓶中加入氯仿和甲醇，二者的剂量分别为：氯仿8ml，甲醇4ml。轻轻摇晃瓶身，使上述混合物颗粒完全溶解于溶液中。
4.将茄形瓶与旋转蒸发仪连接起来，旋转蒸发至茄形瓶中溶液完全挥发干净，瓶底形成白色薄膜状沉淀物。
5.关闭旋转蒸发仪，取下茄形瓶，加入10mlPBS缓冲液，轻摇瓶身至白色薄膜完全均匀溶解在PBS中，即得到微泡壳膜原液。再用微量移液器将其分装到西林瓶中。
6.将西林瓶与换气装置相接，用SF6气体置换出西林瓶中的空气，置换时间为2min，换气压力控制在0. 02KPa，结束后立即密封，存放在4℃冰箱中备用。此时西林瓶中为微泡原液，呈略浑浊状。
7.将银汞调和振荡机固定在平稳的桌面上，设定振荡时间为90s。
8.振荡后小瓶内液体性状为乳白色，弃上层白色泡沫，取下层混悬液，静置30min后，提取上层乳白色悬液，此层液体即为靶向纳米微泡。
本发明上述实施例中提供了双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，本方案解决了现有技术中：单一靶点的特异性配体仅能靶向聚集于特定靶分子表达阳性的肿瘤组织中。由于肿瘤的异质性，同一种肿瘤组织中靶分子的表达水平可能不同，故携载单一配体的靶向超声造影剂的增强超声显像效果有时欠佳的问题；获得了：肝靶向性更强，显像时间更长的优点。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA的合成：
将DSPE-PEG2000-NH2溶于氯仿中，然后加入GA、EDC和DMAP，溶液在室温下搅拌孵育24小时，然后用纯水洗涤；在溶液中加入无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩溶液；将溶液与无水乙醚混合沉淀，产物溶解沉淀，最终得到DSPE-PEG2000-GA；
将PNA溶于PBS中，在加热条件下向溶液中加入DSPE-PEG2000-NHS，直至完全溶解，溶液在室温下搅拌8h，然后转移到透析袋中48h进行纯化，将溶液冷冻干燥，得到DSPE-PEG2000-PNA；
S2. 将电子天平置于稳定的平面上，称重前应先归零，按比例称取DPPA、DSPC、DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-GA，将其混合物倒入茄形瓶中；
S3. 用微量移液器向装有混合物的茄形瓶中加入氯仿和甲醇，轻轻摇晃瓶身，使上述混合物颗粒完全溶解于溶液中；
S4. 将茄形瓶与旋转蒸发仪连接起来，旋转蒸发至茄形瓶中溶液完全挥发干净，瓶底形成白色薄膜状沉淀物；
S5. 关闭旋转蒸发仪，取下茄形瓶，加入缓冲液，轻摇瓶身至白色薄膜完全均匀溶解在PBS中，即得到微泡壳膜原液，再用微量移液器将其分装到西林瓶中；
S6. 将西林瓶与换气装置相接，用SF6气体置换出西林瓶中的空气，置换时间为2min，换气压力控制在0. 02KPa，结束后立即密封，存放在4℃冰箱中备用，此时西林瓶中为微泡原液；
S7. 将银汞调和振荡机固定在平稳的桌面上，设定振荡时间为90s；
S8. 振荡后小瓶内液体性状为乳白色，弃上层白色泡沫，取下层混悬液，静置30min后，提取上层乳白色悬液，此层液体即为靶向纳米微泡。
2.根据权利要求1所述的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，根据S1，所述PBS的pH值为7.4。
3.根据权利要求1所述的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，根据S1，所述加热条件为水浴加热。
4.根据权利要求1所述的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，根据S2，所述DPPA ： DSPC： DSPE-PEG-GA/PNA=0. 052： 1： 0. 382。
5.根据权利要求1所述的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，根据S3，所述氯仿和甲醇的比例为2：1。
6.根据权利要求5所述的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，所述氯仿和甲醇为液态。
7.根据权利要求1所述的双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法，其特征在于，根据S6，所述微泡原液呈浑浊状。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110874092.6A CN113546183A (zh) | 2021-07-30 | 2021-07-30 | 双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110874092.6A CN113546183A (zh) | 2021-07-30 | 2021-07-30 | 双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113546183A true CN113546183A (zh) | 2021-10-26 |
Family
ID=78105058
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110874092.6A Pending CN113546183A (zh) | 2021-07-30 | 2021-07-30 | 双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113546183A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009074569A1 (en) * | 2007-12-11 | 2009-06-18 | Bracco International Bv | Targeting and therapeutic compounds with a polyproline-comprising spacer and gas-filled microvesicles comprising said compounds |
| US20150343079A1 (en) * | 2012-10-25 | 2015-12-03 | Sogang University Research Foundation | Ultrasound contrast agent with nanoparticles including drug and method for preparing the same |
| CN110384658A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-10-29 | 高志芹 | 一种双靶修饰脂质体的制备方法 |
-
2021
- 2021-07-30 CN CN202110874092.6A patent/CN113546183A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009074569A1 (en) * | 2007-12-11 | 2009-06-18 | Bracco International Bv | Targeting and therapeutic compounds with a polyproline-comprising spacer and gas-filled microvesicles comprising said compounds |
| US20150343079A1 (en) * | 2012-10-25 | 2015-12-03 | Sogang University Research Foundation | Ultrasound contrast agent with nanoparticles including drug and method for preparing the same |
| CN110384658A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-10-29 | 高志芹 | 一种双靶修饰脂质体的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王玲: "载基因荧光金微泡联合US/NIR双模态成像、双辐照-光热-基因治疗肝癌及其机制的研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105079826B (zh) | 一种rgd@bbn双靶向mr/光学双模态分子探针的制备和应用 | |
| CN103990151A (zh) | 一种磁共振成像造影剂及其制备方法和应用 | |
| Fang et al. | Construction of nucleolin-targeted lipid nanobubbles and contrast-enhanced ultrasound molecular imaging in triple-negative breast cancer | |
| CN108245688A (zh) | 肝细胞癌诊断试剂及其制备方法 | |
| CN112043839A (zh) | 靶向转铁蛋白受体的放射性同位素标记多肽显像剂及其应用 | |
| CN108148193A (zh) | 一种含胆酸的高分子材料及其修饰的脂质体 | |
| CN107349434A (zh) | 一种超支化聚合物及其制备方法和应用 | |
| CN104258420B (zh) | 一种具有肝癌靶向功能的低代数树状大分子包裹的金纳米颗粒作为ct纳米造影剂的制备方法 | |
| CN113546183A (zh) | 双靶点纳米靶向肝癌超声造影剂的制备方法 | |
| CN108653743A (zh) | 一种心脑双靶向脂质体及其制备方法和应用 | |
| CN101716353B (zh) | 一种用于肿瘤及淋巴转移肿瘤影像学诊断的叶酸复合物 | |
| CN103897118B (zh) | 一种可视化含tempo聚炔衍生物的制备方法 | |
| CN104264479B (zh) | 一种用于捕获癌细胞的乳糖酸功能化纳米纤维的制备方法 | |
| AU2021104340A4 (en) | Preparation and Application of Matrix Metalloproteinase-9-Responsive Surface Charge-Reversible Nanocarrier | |
| CN110152024A (zh) | 一种超声与磁共振双模态靶向纳米粒造影剂及其制备方法 | |
| Nie et al. | NIR-II imaging-guided diagnosis and evaluation of the therapeutic effect on acute alcoholic liver injury via a nanoprobe | |
| CN111807979B (zh) | 两性离子氟化交联剂、纳米凝胶及其应用 | |
| CN108743975B (zh) | 一种靶向肿瘤vegfr-3分子的近红外荧光显像剂的设计、合成及应用 | |
| CN107586321B (zh) | F-18标记修饰Dimer-San A探针的制备方法 | |
| CN111548305A (zh) | 一种可用于靶向psma的喹啉类化合物及其制备方法 | |
| CN115073726B (zh) | 一种靶向m2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针及其制备方法与应用 | |
| CN104645348B (zh) | 一种水凝胶及其制备方法 | |
| Liu et al. | Preparation of Microbubble Contrast Material of Sulfhydryl-Maleimide Group and Its Application in Ultrasound Diagnosis of Breast Cancer | |
| CN107674117A (zh) | Cu‑64标记的Dimer‑San A环肽衍生物胰腺癌分子探针的制备方法 | |
| CN114181280B (zh) | 一种放射性核素标记的天冬酰胺酶靶向诊疗一体化药物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211026 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |