CN1135332A - 皮肤病毒感染的局部治疗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有阿非迪霉素或其衍生物的药物制剂，它用于局部治疗皮肤的病毒感梁。该制剂含有阿非迪霉素或其衍生物及医药上可接受的局部用赋形剂。本发明也涉及一种治疗皮肤病毒感染的方法，它包括在皮肤感染病毒的部位施用制剂。在一项具体实施方案中，用制剂以治疗乳头状瘤病毒感染。

Description

皮肤病毒感染的局部治疗

本发明是有关一种含有阿非迪霉素(aphidicolin)或其衍生物的药物制剂，它用于局部治疗皮肤病毒感染，如：由乳头瘤病毒及疱疹病毒引起的感染。

许多以皮肤损伤为特征的皮肤感染症可局部治疗。导致皮肤损伤的病毒包括例如：乳头状瘤病毒及疱疹病毒。这二种病毒都是DNA病毒，在感染期间复制时需要DNA聚合酶。本文将以乳头状瘤病毒为例，详细讨论这一类皮肤感染，依赖DNA聚合酶的病毒。

乳头状瘤病毒是无被膜、廿面体DNA病毒，它会感染鳞状表皮细胞。该病毒粒子包含一个8000碱基的环状双股DNA分子，它含在球状蛋白质外层内。乳头状瘤病毒的基因组的组织结构则高度地保留。

乳头状瘤病毒具有严格的品种专一性，且在其宿主中产生鳞状表皮肿瘤及纤维表皮肿瘤。目前已鉴定出70种以上的人类乳头状瘤病毒(下文中称为“HPVs”)。HPV-1会引起掌疣，而HPV-6及HPV-11则导致喉部乳头状瘤及湿疣(生殖疣)，这是性传染的最常见的第四疾病。HPV-16、HPV-18、HPV-31及HPV-33会导致生殖疣，且与生殖器上皮内的瘤形成的发展有关。这些瘤形成可能逐渐发展成各种癌瘤，包括子宫颈癌，每年约有500,000人死亡。

抗病毒疗法的标准方法是通过抑制病毒聚合酶而抑制病毒复制。这方法曾用于发展许多适用于治疗疱疹病毒感染的药物。例如：阿糖腺苷(vidarabine)在细胞内磷酸化以形成三磷酸盐衍生物，它在抑制疱疹病毒DNA聚合酶上比抑制人类DNA聚合酶更有效。同样地，无环鸟苷(acyclovir)通过疱疹专一性胸苷激酶而磷酸化，以形成无环鸟嘌呤核苷(acycloguanosine)单磷酸盐，再经宿主激酶磷酸化而形成无环鸟嘌呤核苷三磷酸盐。该衍生物是比对人类DNA聚合酶更有效的病毒聚合酶的抑制剂。在这些各例中，用于病毒复制所选用的药物足以确保不会因抑制宿主DNA聚合酶，而产生过量毒性。

对乳头状瘤病毒复制作用是不能进行选择性抑制，因为尚未发现有在感染乳头状瘤病毒时表达的病毒蛋白质具有DNA聚合酶活性。此外，近年来在无细胞的复制系统中进行的HPV复制研究提出，HPVs使用一种或多种宿主聚合酶进行复制。郭(Kuo)等人在269 J.Biol.Chem.24058-65(1994)中指出，当使用HPV-11复制来源时，有效复制作用将依赖于病毒蛋白质E1和E2，人类DNA聚合酶-α及-δ，复制蛋白质A及局部异构酶I及II(topoisomerases)。

目前有多种处理用于治疗HPV感染。可采用抗有丝分裂药物康狄洛斯(Condylox)以局部治疗外生殖疣。然而，根据医生参考手册，临床试验中约65％患者会有局部不良反应，如：疼痛、发痒、灼烧感、发炎、流血或溃烂。此外，康狄洛斯不能用于治疗肛周的或粘膜的疣。在患处内注射干扰素-α及激光手术亦可用来处理乳头状瘤病毒感染。然而这二种处理均疼痛的、昂贵且再发率高。这些方法的另一个缺点是必须由医师来执行。若有可施用于患者体内的或体外损害处的药物时，则将比现有的治疗法更为有利。

阿非迪霉素(十四氢-3，9-二羟基-4，11b-二甲基-8，11a-亚甲基-11aH-环庚[α]萘-4，9-二甲醇)是一种由蚜假头状孢子头(Cephalosporum aphidicola)所产生的抗生素，它是细胞DNA合成作用的强抑制剂。该效果归因于对哺乳动物DNA聚合酶的抑制作用。具体地说，阿非迪霉素可抑制真核DNA聚合酶-α、δ及∈的活性。阿非迪霉素也可以在组织培养物及兔子眼睛中抑制单纯疱疹病毒(下文中称为“HSV”)的复制。该效果甚至出现在已对其他抗病毒剂有抗性的变异体中，如：对膦酰基甲酸呈抗性的HSV变异体。此外，已证实阿非迪霉素可抑制HSV及疫苗病毒所产生的病毒聚合酶。

尽管阿非迪霉素具有强抗病毒活性，但未见其在医疗上的用途。特别是，有几个问题阻碍了阿非迪霉素在抗病毒治疗中的用途。首先，阿非迪霉素口服投药时没有生物可利用性。第二，阿非迪霉素难溶于水，因此全身性治疗时需要注射大量液体。该问题通过发展水溶性阿非迪霉素(阿非迪霉素甘氨酸盐)而得到解决。

过去阿非迪霉素在医疗用途上所遭遇到另一个更严重问题是在全身性投药时，因抑制宿主DNA聚合酶而产生的毒性。Sessa等人在卵巢癌患者的阿非迪霉素甘氨酸盐第I期临床试验中发现受剂量限制的局部毒性及神经中毒性症状。[Sessa等人，83 J.Natl.CancerInstitute 1160-64(1991)]。作者在结论中指出，阿非迪霉素甘氨酸盐的临床发展应针对该药物与临床上核准使用的抗肿瘤药顺氯氨铂(cisplatin)组合使用而进行研究(文献同上述)。在稍后发表的文献中，Damia等人探讨了此组合物在患有鼠网状细胞肉瘤的小鼠中的效果(Damia等人，30 Cancer Chemother.Pharmacol.459-464)。其中观察顺氯氨铂活性的中等效力，但它并不支持阿非迪霉素甘氨酸盐与顺氯氨铂组合的临床用途(文献同上述)也没有说明阿非迪霉素可局部施用于治疗病毒感染。

本发明提供一种含有阿非迪霉素或其衍生物的局部药物制剂，用于治疗病毒感染。本发明基于发现阿非迪霉素与其原药虽然在全身性施用时具有过高毒性，但该药物可有效地用作局部抗病毒治疗剂。

本发明制剂是在医药上可接受的局部用赋形剂中含有阿非迪霉素或其衍生物。文中所使用“阿非迪霉素”一词的定义包括具有DNA聚合酶抑制活性的阿非迪霉素衍生物。阿非迪霉素的浓度必须足够高，以保证有足够的阿非迪霉素进入细胞内，以抑制病毒复制所需的DNA聚合酶活性。

在一个具体实施方案中，阿非迪霉素的浓度足以抑制宿主聚合酶。用于治疗皮肤乳头状瘤病毒感染的较佳制剂中，阿非迪霉素浓度足以抑制真核DNA聚合酶-α、δ及∈。另一个具体实施方案中，阿非迪霉素的浓度足以抑制病毒聚合酶。该具体方案适用于治疗如HSV-1与HSV-2的病毒。

本发明的赋形剂可以是任何医药上可接受的局部用赋形剂。合适的赋形剂包括液体、凝胶、气溶胶、粉末、糊剂、乳霜剂、软膏及脂肪醇/丙二醇(FAPG)等基质。较佳赋形剂是含DMSO、聚亚烷基二醇及醇类的液体制剂。

本发明也提供一种局部治疗病毒感染的方法，包括对感染病毒的皮肤部位局部施用含有阿非迪霉素的药物制剂。该局部用制剂是宜于一天施用2次。有些情况下，治疗一次就可达到痊愈效果。然而，治疗一般持续至少约7天。此外，在损害症状消失后再继续治疗一段时间，以防止再复发。

当本发明与例如：目前治疗生殖疣的方法比较时，本发明的优点就显而易见。本发明局部用制剂不同于目前所采用的生殖疣局部疗法，不会产生任何显著的不良反应。在局部用阿非迪霉素制剂的临床试验中，大多数患者都指出与感染有关的疼痛及发痒现象已减少。此外，本发明治疗法与患处内干扰素注射法及激光手术相反，患者在家就可进行治疗。

本发明基于发现阿非迪霉素及其衍生物适用于局部治疗病毒感染。阿非迪霉素是病毒与真核DNA聚合酶(包括人类DNA聚合酶-α、δ与∈)的强抑制剂。由于此效果会影响为类聚合酶，因此将阿非迪霉素用作全身性治疗剂就会失败。现已发现，可利用局部药物制剂，使有效浓度的阿非迪霉素或其衍生物引入感染病毒的细胞内而不会引起过量的全身毒性。

如上所述，“阿非迪霉素”一词包括阿非迪霉素衍生物如，例如：可在体内(细胞内或细胞外)转化成阿非迪霉素的前药。前药实例包括其中一个或多个羟基已修饰成酯、醚或羧酸盐衍生物，等等的衍生物。阿非迪霉素甘氨酸盐为适用于本发明的酯衍生物实例。

本发明提供一种在适当局部用赋形剂中含有阿非迪霉素的局部用制剂。阿非迪霉素的浓度要足够的高，以在施用制剂至感染病毒的部位上时，抑制细胞中DNA聚合酶活性。本发明也提供治疗皮肤病毒感染的方法，该方法包括在感染部位施用含阿非迪霉素的局部用药物制剂。

病毒感染

本发明局部用制剂可用于治疗由真核聚合酶-α、δ及/或∈用于病毒复制所必要的任何病毒(如：乳头状瘤病毒)所引起的皮肤感染。此外，由于阿非迪霉素也抑制病毒DNA聚合酶，因此局部用制剂可用于治疗疱疹病毒，如，例如：HSV-1及HSV-2所引起的皮肤感染。

局部用阿非迪霉素制剂

本发明制剂是在医药上可接受的局部用赋形剂中含有阿非迪霉素。阿非迪霉素的浓度必须足以使阿非迪霉素的抑制浓度传送到感染病毒部位的细胞中，也就是必须有足量的阿非迪霉素进入细胞内，以抑制病毒复制所需的DNA聚合酶活性。治疗乳头状瘤病毒感染时，细胞内的阿非迪霉素浓度必须足以抑制宿主DNA聚合酶的活性。在一项具体实施方案中，阿非迪霉素的浓度可以抑制宿主聚合酶-α、δ及∈。

通常，阿非迪霉素的浓度范围决定于特定的病毒感染，在约1μM(0.34微克/毫升)至约15mM(5.10毫克/升)范围内。例如：适合治疗乳头状瘤病毒感染的浓度范围为约1μM(0.34微克/毫升)至约1mM(0.34毫克/毫升)。优选的，阿非迪霉素浓度在约50μM(17微克/毫升)至约800μM(0.27毫克/毫升)之间，更佳的，在约100μM(34微克/毫升)至500μM(0.17毫克/毫升)之间。然而，合适的阿非迪霉素浓度可按照待治疗的特定病毒感染而变化。例如：治疗HSV-1与HSV-2时，可使用高达15mM(5.10毫克/毫升)的阿非迪霉素浓度。对特定病毒感染最适当的剂量由相关技术专家决定。

赋形剂可以是任何医药上可接受的局部用赋形剂。许多这种赋形剂是已知的，按照特定药物及施用部位来选择合适赋形剂。合适赋形剂包括液体制剂、凝胶、气溶胶、粉末、糊剂、乳霜剂、软膏、及脂肪醇/丙二醇(FAPG)等的基质。

液体制剂可包含甘油、聚乙二醇、己烷-1，2，6-三醇、聚乙烯醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇、油醇、羊毛脂、无水羊毛脂、羊毛脂衍生物、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、胆固醇酯、乙二醇及/或丙二醇单酯、甘油基单酯、自行乳化的单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇和/或无水山梨糖醇酯、植物油、硫酸化油、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯，等等。

适用于凝胶基的赋形剂的聚合物包括，例如：西黄耆胶、角叉菜胶、果胶、琼脂、藻酸、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、皂土、硅酸镁铝、laponite、聚羧乙烯(Carbopol)(与烯丙基蔗糖交链的羧乙烯基聚合物)，及其组合物。

合适的气溶胶赋形剂包括：溶液气溶胶、粉末气溶胶、乳液气溶胶及半固体气溶胶。粉末基赋形剂可包含滑石、氧化锌、淀粉、高岭土，等等。合适糊剂可在脂肪基质中包含许多种制剂如：氧化锌、淀粉、碳酸钙、滑石、水杨酸、及1，8，9-蒽三酚。乳霜剂可以是油包水或水包油性的乳液。合适的软膏可包含羟基质、脂肪及固定油基质、硅酮、吸收基质、乳化基质、水溶性基质，等等。赋形剂也可以是FAPG基质，包括例如：硬脂醇、丙二醇、聚乙二醇及甘油。

当局部用制剂包含不相容液体的混合物时，在制剂中可包含表面活性剂，以形成均匀稳定的制剂。合适的表面活性剂实例包括：烷基硫酸酯、单硬脂酸甘油酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯及单油酸酯(聚山梨酸酯80)及聚乙二醇。

其他广泛用于局部用制剂的试剂包括棕榈酸鲸蜡酯及可改善乳霜稠度的有关酯类；硬脂酸与硬脂醇，可作为润滑剂、软化剂及消泡剂；及甲基纤维素与西黄耆胶，它在糊剂与软膏中用作悬浮剂。任何这种添加物都可含在本发明局部用制剂中。最后，局部用制剂也可包含防腐剂，例如：对胺基苯甲酸的甲酯与丙酯(甲基-与丙基-对羟苯甲酸(paraben))。

选用赋形剂中考虑的因素包括：治疗剂在赋形剂中的溶解性与稳定性、赋形剂对促进渗透作用的能力、以及赋形剂、角质层与活性剂的化学和物理的相互作用。本发明包括阿非迪霉素悬浮液，因此在局部用制剂中可使用阿非迪霉素相当不易溶于其中的赋形剂。然而，通常以可溶解阿非迪霉素的赋形剂为佳。

赋形剂应使其中阿非迪霉素在进行阿非迪霉素治疗期间(通常约8至18小时)保持稳定。阿非迪霉素最好在赋形剂中保持稳定至少约2年。制剂可保存在冰箱中(约4℃)，以加强稳定性。

在一项具体实施例方案中，赋形剂与角质层水合，因此促进阿非迪霉素渗透。此外，所选用的赋形剂最好可减轻感染部位的刺激性。

本发明局部用制剂不一定要无菌。然而，以无菌制剂为好，因此赋形剂最好是无菌的或在组合成局部用制剂后可以灭菌。局部用制剂可通过任何不破坏阿非迪霉素或赋形剂的通常方法灭菌。合适灭菌方法包括过滤及照射。此外，通过上述在制剂中包含防腐剂，以减少或防止细菌污染。

在一项具体实施方案中，赋形剂包含二甲亚砜(DMSO)。此具体方案的一种变更是赋形剂中除了DMSO外，还包含聚亚烷基二醇及一种醇。另一种变更则为赋形剂中包含约5％DMSO，约45％聚丙二醇，及约50％乙醇。

另一项提供持续释放阿非迪霉素的具体实施方案中，赋形剂包含，含有硬脂醇及鲸蜡醇的乳霜。该具体实施方案的一种变更是乳霜中还包含丙二醇及聚乙二醇-100(PEG-100)硬脂酸酯。另一种变更中，乳霜包含25％硬脂醇、25％鲸蜡醇、12％丙二醇、10％PEG-100硬脂酸酯、7.96％聚山梨酸酯60、5％山梨糖醇酐单硬脂酸酯、5％硬脂酸甘油酯、5％矿物油、5％蒸馏水、0.025％甲基对羟苯甲酸酯、及0.015％丙基对羟苯甲酸酯。

组合赋形剂成分与活性成分和技术是熟知的，且它们适用于本发明而与现有技术没有不同。

皮肤病毒感染的治疗

在感染部位，主要指皮肤损害处，施用本发明局部用药物制剂而治疗皮肤病毒感染。任何熟知的施药器，如：棉花球可用于施加制剂。施药器最好为无菌。

最适宜的给药方法可随着病毒感染的类型和部位而不同；然而通常每日给药2次就可提供良好结果。因此，局部用制剂一般在早晨施用一次，在傍晚或上再施用一次。制剂通常至少连续施用7天，或最好施用至任何损害症状消失为止。此外，待损害症状消失后，可继续治疗一段时间，以防止再复发。

当治疗皮肤损害时，直接在损害部位及其周围皮肤施用局部用制剂。例如，若损害部位约直径1英寸时，则在损害部位周围约0.5英寸以内的皮肤上施用局部用制剂。

一项具体实施方案中，采用该治疗法以治疗乳头状瘤病毒所引起的生殖疣。因此，局部用制剂是直接施用在任何疣及其周围皮肤。内生及外生的损害都可用该方法治疗。其他具体实施方案中，使用该治疗法以治疗HSV-1与HSV-2。

通过下列具体的但不限制的实例进一步说明本发明。以现在式说明的方法是可以实际操作者，以过去式说明的方法则是实验室所进行的。

实例1临床试验

进行本发明的临床试验。追踪40名女性生殖疣患者，患者年龄范围由22至50岁。所有患者都接受局部用阿非迪霉素制剂处理，早晨一次及傍晚一次。以棉花球将制剂施用至疣处。

制剂含有100μM或500μM阿非迪霉素、5％DMSO、45％丙二醇及50％乙醇(v/v)。为制备制剂，取适当体积DMSO、丙二醇及乙醇共同混合。添加固体阿非迪霉素至混合物中，于室温下搅拌过夜，以保证阿非迪霉素完全溶解。由于制剂中含有高浓度乙醇，因此不必要进行灭菌。

各处理结果示于表I及II，且综合于表III。小阴唇、阴道前庭、阴部、及会阴等内部的损害属外部损害(“E”)，而前阴穹窿、后阴穹窿、阴道壁及阴道颈的损害属内部损害(“I”)。

     表I.500μM阿非迪霉素治疗生殖疣的效果

患者	损害数目及位置		治疗后损害面积(感染HPV面积)的降低程度				治疗前的患病时间(月)
								E	I	100％	＞50％	＜50％	微量
	1	0	1	X											2
2							2	0	X				2
	4	0	2		X										3
6							3	0		X			1+
	8	1	1			X									1+
10							2	2			X		4+
	12	0	1			X									3
14							1	1			X		1+
	16	2	0	X											5
18							1	2		X			1
	20	1	1			X									2
23							1	2			X		2
	25	0	2		X										6
28							1	1			X		50
	30	4	1			X									12
32							2	1		X			1
	34	1	1			X									4
36							1	1			X		3
	37	0	1		X										2
40							1	1				X	48

   表II.100μM阿非迪霉素治疗生殖疣的效果

患者	损害数目及位置		治疗后损害面积(感染HPV面积)的降低程度				治疗前的患病时间(月)
								E	I	100％	＞50％	＜50％	微量
	3	1	1		X										7
5							2	1	X				3
	7	1	2											X	2
9							1	1		X			2+
	11	0	1		X										2
13							1	1			X		6
	15	2	1		X										3
17							2	1			X		3
	19	1	2			X									5
21							1	2			X		3
	22	0	1			X									1
24							2	0		X			5
	26	0	1		X										4
27							1	2			X		3
	29	0	2		X										5
31							1	1			X		3
	33	1	1		X										2
35							2	1				X	5
	38	1	2		X										2
39							1	1				X	3

    表III.临床试验综合结果

溶液	病例数	结果
						100％痊愈	＞50％痊愈	＜50％痊愈	可忽视
		500μM	20	3(15％)	7 (35％)					10 (50％)	0  (0％)
100μM	20					0(0％)	9 (45％)	7  (35％)	4  (20％)

有些患者在施用制剂期间有灼烧感觉。然而80％以上患者不再有疼痛及发痒感觉且阴道排泄物减少。100％痊愈的患者在治疗结束2个月后均不再长疣。

Claims (23)

1、一种局部用药物制剂，它包含：

(a)阿非迪霉素，其浓度足以在施用制剂的病毒感染部位抑制细胞内的DNA聚合酶活性；

(b)医药上可接受的局部用赋形剂。

2、根据权利要求1所述局部用药物制剂，其中所述制剂含有阿非迪霉素甘氨酸盐。

3、根据权利要求1所述局部用药物制剂，其中DNA聚合酶是病毒复制所必要的宿主聚合酶。

4、根据权利要求3所述局部用药物制剂，其中阿非迪霉素浓度足以抑制宿主DNA聚合酶-α、δ及∈的活性。

5、根据权利要求1所述局部用药物制剂，其中DNA聚合酶是病毒聚合酶。

6、根据权利要求1所述局部用药物制剂，其中阿非迪霉素浓度为约1μM至约15mM。

7、根据权利要求6所述局部用药物制剂，其中阿非迪霉素浓度为约50μM至约800μM。

8、根据权利要求7所述局部用药物制剂，其中阿非迪霉素浓度为约100μM至约500μM。

9、根据权利要求1所述局部用药物制剂，其中所述赋形剂选自：液体、凝胶、气溶胶、粉末、糊剂、乳霜、软膏、及FAPG等基质。

10、根据权利要求1所述局部用药物制剂，其中所述赋形剂包括表面活性剂。

11、根据权利要求9所述局部用药物制剂，其中所述赋形剂为包含DMSO的液体。

12、根据权利要求11所述局部用药物制剂，其中所述液体还包含：

(a)聚亚烷基二醇；及

(b)醇。

13、根据权利要求12所述局部用药物制剂，其中所述赋形剂为包含下列成分的液体：

(a)约5％DMSO；

(b)约45％聚丙二醇；及

(c)约50％乙醇。

14、根据权利要求9所述局部用药物制剂，其中所述赋形剂为包含硬脂醇与鲸蜡醇的乳霜。

15、根据权利要求14所述局部用药物制剂，其中所述乳霜还包含丙二醇及聚乙二醇-100硬脂酸酯。

16、根据权利要求15所述局部用药物制剂，其中所述赋形剂为包含下列成分的乳霜：

(a)约25％硬脂醇；

(b)约25％鲸蜡醇；

(c)约12％丙二醇；

(d)约10％PEG-100硬脂酸酯；

(e)约7.96％聚山梨酸酯60；

(f)约5％山梨糖醇酐单硬脂酸酯；

(g)约5％硬脂酸甘油酯；

(h)约5％矿物油；

(i)约5％蒸馏水；

(j)约0.025％甲基对羟基苯甲酸酯；及

(k)约0.015％丙基对羟基苯甲酸酯。

17、根据权利要求1的局部用药物制剂，它用于局部治疗皮肤病毒感染。

18、根据权利要求1的局部用药物制剂，它是一天施用用2次。

19、根据权利要求1的局部用药物制剂，它是连续至少7天时间施用。

20、根据权利要求1的局部用药物制剂，它施用于受乳头状瘤病毒感染的皮肤部位。

21、根据权利要求20的局部用药物制剂，其中所述乳头状瘤病毒感染的部位是生殖疣。

22、根据权利要求1的局部用药物制剂，它施用于受疱疹病毒感染的皮肤部位。

23、根据权利要求1的局部用药物制剂，其中所述皮肤部位是用选自HSV-1与HSV-2的病毒感染的。