TW202237157A - 紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在治療放射病中的用途 - Google Patents

Abstract

本申請關於紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在治療放射病中的用途。本申請提供一種醫藥組成物，其包含源自紅色諾卡氏菌細胞壁的組分，可有效治療或緩解放射病及其症狀。

Description

紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在治療放射病中的用途

本公開關於醫學、微生物領域、生物製藥領域。具體而言，本申請關於紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備治療放射病的藥物中的用途。

紅色諾卡氏菌(Nocardia rubra)是諾卡氏菌中的一種。紅色諾卡氏菌的菌體經發酵、細胞破碎、蛋白酶降解後可製得紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(以下簡稱Nr-CWS)。

諾卡氏菌呈多形態，有球狀、杆狀、或絲狀。菌體無運動性，有些株呈弱抗酸性，專性需氧。在普通瓊脂平板上，培養3天後可見菌落，7至10天後菌落凸起，形成氣生菌絲，表面呈絨毛狀。不同株的菌落有黃、橙、或紅。DNA中的G+C克分子含量為60至72%。大多諾卡氏菌為腐生菌，存在於土壤中。

現有技術中，紅色諾卡氏菌細胞壁骨架可以是市售獲得，例如由遼寧格瑞仕特生物製藥有限公司生產的商品(商品名“納可佳”)，或者福建省山河藥業有限公司、福建廣生堂藥業股份有限公司、福建省微生 物研究所等提供。紅色諾卡氏菌細胞壁骨架已用於治療宮頸糜爛、宮頸癌前病變(CN101073583A)、抗人乳頭瘤病毒(CN1935262A)、皮膚損傷或皮膚潰瘍(CN101209267A)、皮膚病變(濕疹、神經性皮炎、非特異性皮炎、特應性皮炎、銀屑病)(CN108938674A)、痤瘡(CN108295095A)、真菌感染、單純皰疹、帶狀皰疹(CN1879661A)。

放射病，是機體在受到大劑量輻射時引起的全身性或局部性疾病(包括其症狀)。體內輻射和體外輻射都可能發生放射病。引起放射病的射線有γ線、中子和X射線等。

輻射後的初期，有噁心和食欲減退等症狀，照射劑量可能大於1Gy；有嘔吐的情況，可能大於2Gy。輻射後數小時內出現多次嘔吐，並很快發生嚴重腹瀉，但無神經系統症狀的情況，可考慮為腸型放射病。輻射後1小時內頻繁嘔吐、定向力障礙、共濟失調、肢體震顫、肌張力增強的情況，可診斷為腦型放射病。

在臨床治療中，放射療法是利用射線治療腫瘤或癌症的一種局部治療方法。射線包括α、β、γ和x射線治療機或加速器產生的射線、電子線、質子束、及其他粒子束。然而，放射療法常會伴有多種副作用或併發症：

-全身反應：表現為乏力、眩暈、頭痛、噁心、嘔吐等。

-血液變化：主要表現為白細胞和血小板減少。

-皮膚反應：照射部位可出現充血、色素沉著、乾性脫皮、濕性脫皮、皮膚萎縮、表皮毛細血管擴張、皮下脂肪纖維組織纖維化等。

-黏膜反應：可有潮紅、腫脹、發乾、表淺潰瘍及蒼白假膜形成；肺癌病人常可出現食管炎。

-其它組織的反應：中樞神經系統受到大量照射後會發生腦壞死、放射性脊髓炎等；盆腔大劑量照射可發生尿急、尿痛、尿頻、血尿、大便次多及裡急後重等膀胱及直腸刺激症狀。

然而，現有技術中尚未有報導紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在放射病中的作用，也沒有報導改善或緩解放射療法所致的皮膚和黏膜副作用或併發症中的用途。

根據本申請的一些實施方案，提供了紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備治療放射病的藥物或醫療裝置中的用途。

在一些實施方案中，放射病是輻射所致的放射病。

在一些實施方案中，該輻射是電離輻射或非電離輻射。

在一些實施方案中，該放射病是由選自以下的任一項或其組合所致：α射線、β射線、x射線、γ射線、中子輻射。

在一些實施方案中，該放射病是放射療法所致副作用和/或放射療法所致併發症。

在一些實施方案中，放射療法所致副作用和/或放射療法所致併發症尤其是指關於表皮、真皮和/或黏膜相關的副作用和/或併發症。

在一些實施方案中，放射病可以累及以下組織：表皮層、真皮層、黏膜(如消化道黏膜)、皮下組織。

在一些實施方案中，藥物或醫療裝置藉由損傷處接觸而施用。

在一些實施方案中，藥物或醫療裝置包含藥學上可接受的載體。本領域技術人員所知的任何適當的載體都可用於實施本申請的技術方案。

在一些實施方案中，藥物被製備成選自以下的任一劑型：栓劑、膏劑、霜劑、乳液、混懸劑、糊劑、凝膠劑、洗劑、酊劑、油劑、片劑、氣霧劑、噴霧劑、搽劑、粉劑；其中，該膏劑選自：軟膏劑、硬膏劑、乳膏劑。

根據一些實施方案，提供一種治療放射病的方法，包括步驟：向受試者提供治療有效量的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架。

在一些具體的實施方案中，針對病灶的面積或嚴重程度的不同，採用藥物(或醫療裝置)施用至病灶。例如，但不限於用包含紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的藥物塗抹、或者用浸有紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的貼片覆蓋在病變處、或包含紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的凍乾粉在病灶直接施用、在病灶上施用包含紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的膏體、洗劑等。當病灶位於消化道時，可以口服施用包含紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的膠囊、片劑、溶液等。

在一些實施方案中，該藥物包含：

-紅色諾卡氏菌細胞壁骨架、和

-藥學上可接受的載體。

在一些實施方案中，該藥學上可接受的載體選自，但不限於：填充劑、穩定劑(例如海藻糖、甘胺酸)、矯味劑(例如木糖醇)、崩解劑(例如羧甲基纖維素鈉)、黏合劑(例如明膠)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂)。

在一些實施方案中，穩定劑選自以下的一種或組合：甘胺酸、賴胺酸、精胺酸、羥乙基澱粉、羥甲基澱粉、海藻糖、葡聚糖。

在一些實施方案中，矯味劑選自以下的一種或組合：蔗糖、單糖、糖精鈉、阿斯巴甜、山梨醇、木糖醇、甘露醇。

在一些實施方案中，黏合劑選自以下的一種或組合：羧甲基纖維素鈉、羥丙甲纖維素、明膠。

在一些實施方案中，潤滑劑選自以下的一種或組合：有滑石粉、硬脂酸鎂、微粉矽膠。

在一些具體的實施方案中，適用於本申請的載體還可以提及，例如但不限於：右旋糖酐、乳糖、微晶纖維素、海藻糖、甘胺酸、木糖醇、羧甲基纖維素鈉、赤蘚糖醇、明膠、硬脂酸鎂、拋射劑、保濕劑、溶劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、pH調節劑、防腐劑。具體而言，非限制實例還包括：白凡士林、卡波姆、羥丙甲纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素鈉、殼聚糖、硫糖鋁殼聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、玻璃酸鈉、二甲醚、四氟乙烷、氫氟烷烴、甘油、丙二醇、去離子水、注射用水、蒸餾水、乙醇、十六醇、十八醇、對胺基苯甲酸、乙醯胺、異丙醇、吐溫、聚氧乙基氫化蓖麻油、硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、三聚甘油單硬脂酸酯、脂肪酸蔗糖酯、蔗糖酯、乙酸異丁酸蔗糖糖酯、山梨醇酐三硬脂酸酯、肉豆殼酸異丙酯、膽固醇、角鯊烯、角鯊烷、正丁醇、乙二醇、乙醇、丙二醇、聚甘油 酯、亞硫酸鹽、半胱胺酸、二叔丁基羥基甲苯、山梨酸鉀、磷酸緩衝溶液、三乙醇胺、氫氧化鈉、乙二胺、月桂胺、碳酸氫鈉、鹽酸、尼泊金類、硫柳汞、氯甲酚、三氯叔丁醇、苯甲酸及其鈉鹽。

在一些實施方案中，藥學上可接受的載體是右旋糖酐。

在一些實施方案中，本申請的藥物或醫療裝置一天施用1-3次，或一天施用一次，或二天施用一次。視患者病灶的面積及程度不同採用不同的每次劑量，通常為1μg/單位劑量/每次至1000μg/單位劑量/每次。具體而言，例如1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200μg/單位劑量/每次、以及前述任意兩個數值之間的範圍。

在一些實施方案中，施用週期持續2天至6月，例如，1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週、12週、13週、14週、15週、16週、17週、18週或更長、以及前述任意兩個數值之間的範圍。

在一些實施方案中，該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架是市售紅色諾卡氏菌細胞壁骨架。

在另一些實施方案中，該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架藉由以下方式獲得，該方式包括以下步驟或由以下步驟組成：

1)提供紅色諾卡氏菌；

2)粉碎該紅色諾卡氏菌，得到粉碎產物；

3.1)視需要地，對該粉碎產物進行去除脂質的操作；

3.2)視需要地，對該粉碎產物進行去除核酸的操作；

3.3)視需要地，對該粉碎產物進行去除蛋白質的操作；

3.4)得到源自紅色諾卡氏菌細胞壁的產品；

4)視需要地，對該源自紅色諾卡氏菌細胞壁的產品進行冷凍乾燥；

5)視需要地，分裝；

其中，

步驟3.1)、3.2)、3.3)能夠互換順序或並行，

步驟4)和步驟5)能夠互換順序；

該粉碎的平均粒度為10nm至1000nm，較佳10nm至800nm，更佳10nm至500nm；

較佳地，該分裝是指分裝至容器中；

該容器選自：瓶、管、包、袋、板、安瓿、注射裝置、鋁膜包裝、敷料、囊、膜。

對於紅色諾卡氏菌的粉碎，其目的在於去除細胞內的物質，因此可以採用超聲破碎、溶菌酶等技術。技術人員理解，任何適用於破碎革蘭氏陽性菌的已知或未來方法，均適用於本公開的技術方案。

技術人員有能力根據活性成分(細胞壁及其組成成分)的後續應用(例如外敷)，來調整培養、破碎、分離、收集、除雜質、分裝的具體參數和設備，以免製備步驟中引入影響後續應用的因素。

在一些實施方案中，利用有機溶劑去除破碎產物中的脂質。在一些實施方案中，利用核酸酶去除破碎產物中的DNA和RNA。在一些 實施方案中，利用水解酶降解破碎產物中的蛋白質。在一些實施方案中，利用表面活性劑去除破碎產物中的細胞膜。

在一些實施方案中，粉碎的平均粒度為10nm至1000nm；可以提及10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190nm±10nm，以及上述任意兩個數值之間的範圍。粒度的測試方法是現有技術公知的。

在一些具體的實施方案中，粉碎的平均粒度為10nm至800nm。

在另一些具體的實施方案中，粉碎的平均粒度為10nm至500nm。

在具體的實施方案中，該分裝是指分裝至瓶/安瓿中。臨用前，向瓶/安瓿中添加溶劑(如無菌水)。

在一些具體的實施方案中，受試者是人以外的動物，例如用於農場動物、寵物、工作動物、觀賞動物、生產動物、實驗動物。

在具體的實施方案中，受試者是人；尤其是經輻射的受試者。作為一個示例，受試者是經放射療法處理過的患者；尤其是，經放射療法處理後，出現了皮膚、真皮和/或黏膜症狀的患者。

在本申請的上下文中，藥物或醫療裝置中的唯一治療性活性成分是源自紅色諾卡氏菌的產品，尤其是包含紅色諾卡氏菌的組成成分(如蛋白、核酸、脂質、細胞壁及其組成成分、碳水化合物、代謝物)的產品，具體而言包含紅色諾卡氏菌細胞壁(更佳紅色諾卡氏菌骨架或其組成)的產品。

圖1A至圖1C：本申請的醫藥組成物改善化療所致的傷口癒合。

圖2A至圖2D：本申請的醫藥組成物改善化療所致的傷口癒合。

圖3A至圖3H：本申請的醫藥組成物在大鼠輻射模型中對皮膚損傷創面的癒合促進作用。45Gy輻射後1週(圖3A和圖3E)、2週(圖3B和圖3F)、3週(圖3C和圖3G)、4週(圖3D和圖3H)；圖3A至圖3D為對照組(照射後僅施用對照組成物，即和本申請的組成物相比不含細胞壁骨架)；圖3E至圖3H為治療組，施用有本申請的組成物。

紅色諾卡氏菌細胞壁

在本公開中，“紅色諾卡氏菌細胞壁”既可以理解為完整的細胞壁，也可以理解為不完整的細胞壁(例如，破碎的、或部分降解的)。在本公開的教導下，技術人員將理解，顯示出所需活性的成分來自紅色諾卡氏菌的細胞壁(例如，是細胞壁本身或其組成)。因此，在臨床應用中允許採用完整的細胞壁、經破碎的細胞壁、細胞壁的不完全降解產物、細胞壁的組成成分、細胞壁的提取物等各種形式，這些都包含在本公開範疇之內。

細胞壁骨架

構成細胞壁主體結構的組成成分；但不能理解為僅僅表示細胞壁當中的交聯網狀實體，技術人員理解不排除交聯網狀實體上所吸附、結合、攜帶的其他細胞壁成分。

單位劑量

本公開的藥物或醫療裝置，可以製備成單位劑量(或單元製劑)的形式。

“視需要”意味著其隨後所描述的事項可以發生，但不必須發生；需要視情況而定。例如，“視需要地，進行分裝”意味著允許對產品進行分裝，但是不是必須進行分裝；分裝與否不影響技術效果的實現。

“一個”、“一”、“單個”、“該”，如果沒有明確說明，也包括複數形式。

以下結合實施例進一步描述本公開。但這些實施例並非限制著本公開的範圍。當未註明具體條件時，按照常規條件、按照原料供應商所建議的條件操作。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

技術人員尤其理解，雖然以下具體示例採用了特定的市售細胞壁產品，但是技術效果的實現不限於該特定的市售產品，任何分類屬於紅色諾卡氏菌的物種均適用。

實施例1.市售的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架

紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(商品名：納可佳)購自遼寧格瑞仕特生物製藥有限公司，批准文號國藥准字S20030009(2ml/安瓿；凍乾粉)，其包含60μg活性成分和15mg右旋糖酐40。

實施例2.紅色諾卡氏菌細胞壁骨架的製備

1.按照公知的方法培養菌體，並收集。對細胞進行粉碎(例如但不限於藉由超聲波破碎)。也允許採用本領域任何適當的公知方法對菌體進行破碎，例如CN101250490A或CN101323865A。顯微鏡下檢查粉碎的情況，每個視野有形菌不得超過5個，檢查若干(10至30個)視野均達到此標準為合格。

2.除核酸：將破碎上清液進行離心，獲得的沉澱物中加入DNA酶和RNA酶，按照酶的供應商建議的操作去除核酸。

3.除蛋白質：沉澱物加入常見的蛋白酶(例如胰蛋白酶)，按照酶的供應商建議的操作去除蛋白質。

4.除脂質：沉澱物中加入有機試劑(如但不限於丙酮、乙醚、乙醇中的一種或組合)，按照本領域常規操作去除脂質。

5.除細胞膜：沉澱物中加入TritonX-100，按照本領域常規操作，離心收集沉澱物，用PBS漂洗。

應當理解，上述除去雜質的步驟之間，技術人員可以調整先後順序，使得步驟之間兼容。去除非細胞壁成分後，將沉澱物複溶於注射用水，待用。視需要地，可以在115℃下滅菌20-30分鐘，作為細胞壁骨架的原液(主要包含細胞壁骨架及其組成成分)。

實施例3.醫藥組成物或醫療裝置的製備

1.將實施例2所得產物(活性成分60μg至120μg，例如60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg)或者實施例1的市售產品塗覆在敷料(例如無菌紗布)上，製備成外用醫療裝置。

2.將實施例2所得產物(活性成分60μg)製成凍乾粉，直接敷在病灶表面。

3.也可以採用本領域公知的洗劑製備方法，例如：洗劑多以水和乙醇為分散介質；由活性成分、電解質、等滲調節劑等在分散介質中製成。

4.將實施例2所得產物(活性成分60μg至120μg，例如60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg)或者實施例1的市售產品製備成腸溶膠囊。

測試例.放射病的治療效果

藥物及主要試劑

測試藥物：外用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(遼寧格瑞仕特生物科技有限公司，國藥准字S20030009，規格60μg/支，批號201809004)：

測試例1

患者，女，56歲。右側乳癌術後，2019年2月開始化療，共8次，8月份開始放療，共放療28次，第20次開始有紅色液體，然後破潰(圖1A)。

2019.9.30患者開始使用本申請的醫藥組成物，圖1B和圖1C是用施用第1週和第2週的創面。用藥後2週創面癒合。

測試例2

患者，女，55歲。左乳癌，骨轉移，肺轉移。2018年6月手術，同年7月開始化療，共8次。2019年3月開始放療，共25次，15次時出現皮膚破潰(圖2A)。

2019.10.17就診後開始使用本申請的醫藥組成物，用藥後創面明顯收縮變小(圖2B至圖2D)。由於患者近期精神及體力不佳，疑似出現癌症復發的情況。因此，癒合速度較慢。

測試例3.紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對大鼠輻射模型的作用

大鼠後背部單次45Gy X射線照射，照射後1、2、3、4週大鼠受照部位創面變化情況。創面上施用本申請的組成物，肉眼可見地促進放射性皮膚損傷創面的癒合(圖3A至圖3G)。

Claims (9)

1. 一種紅色諾卡氏菌細胞壁骨架在製備藥物中的用途，其中該藥物用於治療放射病。
2. 如請求項1所述的用途，其中，

   該放射病是輻射所致的放射病；

   較佳地，該輻射是電離輻射或非電離輻射；

   較佳地，該放射病是由選自以下的任一項或其組合所致：α射線、β射線、x射線、γ射線、中子輻射；

   較佳地，該放射病是放射療法所致副作用和/或放射療法所致併發症；

   較佳地，該放射病關於選自以下任一項的綜合症：骨髓型綜合症、腸型綜合症、腦型綜合症；

   較佳地，該放射病是選自以下的任一項：輕度、中度、重度、極重度；

   較佳地，該放射病累及選自以下任一組織或其組合：表皮層、真皮層、黏膜、皮下組織。
3. 如請求項1所述的用途，其中該藥物製備成選自以下任一項的劑型：膏劑、霜劑、乳液、混懸劑、糊劑、凝膠劑、洗劑、酊劑、油劑、片劑、氣霧劑、噴霧劑、搽劑、粉劑、輔料、繃帶、膜、貼片、栓劑。
4. 如請求項1所述的用途，其中該藥物中的單位劑量包含1μg至1000μg紅色諾卡氏菌細胞壁骨架；較佳1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200μg。
5. 如請求項1所述的用途，其中該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架是市售的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架。
6. 如請求項1所述的用途，其中該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架能夠藉由以下方法獲得，該方法包括以下步驟或由以下步驟組成：

   1)提供紅色諾卡氏菌；

   2)粉碎該紅色諾卡氏菌，得到粉碎產物；

   3.1)視需要地，對該粉碎產物進行去除脂質的操作；

   3.2)視需要地，對該粉碎產物進行去除核酸的操作；

   3.3)視需要地，對該粉碎產物進行去除蛋白質的操作；

   3.4)得到源自紅色諾卡氏菌細胞壁的產品；

   4)視需要地，分裝；

   5)視需要地，對該源自紅色諾卡氏菌細胞壁的產品進行冷凍乾燥；

   其中，

   步驟3.1)、3.2)、3.3)能夠互換順序或並行，

   步驟4)和步驟5)能夠互換順序；

   該粉碎的平均粒度為10nm至1000nm，較佳10nm至800nm，更佳10nm至500nm；

   較佳地，該分裝是指分裝至容器中；

   較佳地，該容器選自：瓶、管、包、袋、板、安瓿、注射裝置、鋁膜包裝、敷料、囊、膜。
7. 一種治療放射病的方法，包括步驟：

   使受試者接觸治療有效量的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架；

   該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製備成選自以下任一項的形式：膏劑、霜劑、乳液、混懸劑、糊劑、凝膠劑、洗劑、酊劑、油劑、搽劑、粉劑、片劑、栓劑、膜、貼片、敷料；

   該接觸為一天施用兩次、或一天施用一次、或二天施用一次、或三天施用一次、或一週施用一次；

   該接觸持續2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週、12週、13週、14週、15週、16週、17週、18週或更長；

   該放射病是輻射所致的放射病；

   較佳地，該輻射是電離輻射或非電離輻射；

   較佳地，該放射病是由選自以下的任一項或其組合所致：α射線、β射線、x射線、γ射線、中子輻射；

   較佳地，該放射病是放射療法所致副作用和/或放射療法所致併發症；

   較佳地，該放射病累及選自以下任一組織或其組合：表皮層、真皮層、黏膜、皮下組織。
8. 如請求項7所述的方法，其中該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架是市售紅色諾卡氏菌細胞壁骨架。
9. 如請求項7所述的方法，其中該紅色諾卡氏菌細胞壁骨架藉由以下方式獲得，該方式包括以下步驟或由以下步驟組成：

   1)提供紅色諾卡氏菌；

   2)粉碎該紅色諾卡氏菌，得到粉碎產物；

   3.1)視需要地，對該粉碎產物進行去除脂質的操作；

   3.2)視需要地，對該粉碎產物進行去除核酸的操作；

   3.3)視需要地，對該粉碎產物進行去除蛋白質的操作；

   3.4)得到源自紅色諾卡氏菌細胞壁的產品；

   4)視需要地，分裝；

   5)視需要地，對該源自紅色諾卡氏菌細胞壁的產品進行冷凍乾燥；

   其中，

   步驟3.1)、3.2)、3.3)能夠互換順序或並行，

   步驟4)和步驟5)能夠互換順序；

   該粉碎的平均粒度為10nm至1000nm，較佳10nm至800nm，更佳10nm至500nm：

   較佳地，該分裝是指分裝至容器中；

   較佳地，該容器選自：瓶、管、包、袋、板、安瓿、注射裝置、鋁膜包裝、敷料、囊、膜。

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