CN113527510A - 融合蛋白分子及其制备方法和用途 - Google Patents

融合蛋白分子及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN113527510A
CN113527510A CN202010324085.4A CN202010324085A CN113527510A CN 113527510 A CN113527510 A CN 113527510A CN 202010324085 A CN202010324085 A CN 202010324085A CN 113527510 A CN113527510 A CN 113527510A
Authority
CN
China
Prior art keywords
leu
ser
gly
glu
ala
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010324085.4A
Other languages
English (en)
Inventor
杨选明
张晓卿
韩萍
王海勇
李范林
徐艳芹
李民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN202010324085.4A priority Critical patent/CN113527510A/zh
Priority to PCT/CN2021/088598 priority patent/WO2021213421A1/zh
Publication of CN113527510A publication Critical patent/CN113527510A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6425—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a receptor, e.g. CD4, a cell surface antigen, i.e. not a peptide ligand targeting the antigen, or a cell surface determinant, i.e. a part of the surface of a cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本申请涉及一种融合蛋白分子及其制备方法和用途，具体而言，本申请提供了融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和靶向部分，其中所述靶向部分能够特异性结合活化T细胞的因子；本申请还提供了融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和嵌合抗原受体(CAR)功能结构，其中所述嵌合抗原受体功能结构包括跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域。本申请还提供了上述融合蛋白的制备方法及其单独，或者与细胞因子或其融合蛋白联合在制备治疗冠状病毒所引起的疾病的药物中的用途。

Description

融合蛋白分子及其制备方法和用途
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种融合蛋白分子及其制备方法和用途。
背景技术
冠状病毒在病毒分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。目前，已经鉴定出7种可感染人类的冠状病毒，其中SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2可引起严重急性呼吸综合征，并且总病死率相对较高。SARS-CoV-2和SARS-CoV冠状病毒感染没有病毒特异的治疗方案，也没有疫苗可以预防接种。瑞德西韦等候选药物的临床试验结果也尚未披露。SARS-CoV-2和SARS-CoV病毒感染造成的免疫损伤常采用激素治疗，但副作用较大。
因此亟需开发有效且安全可靠的冠状病毒所引起的疾病的治疗手段。
发明内容
本申请提供了一种融合蛋白分子及其制备方法和用途，具体而言，本申请提供了融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段(例如人ACE2的第1-740位氨基酸)和靶向部分，其中所述靶向部分能够特异性结合活化T细胞的因子；本申请还提供了融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段(例如人ACE2的第1-740位氨基酸)和嵌合抗原受体(CAR)功能结构，其中所述嵌合抗原受体功能结构包括跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域。本申请还提供了上述融合蛋白的制备方法，以及上述融合蛋白单独，或者与细胞因子或其融合蛋白联合制备治疗冠状病毒所引起的疾病的药物的用途。本申请所提供的融合蛋白分子，和/或与所述细胞因子或其融合蛋白联合，至少可以达到下述之一的效果：(1)有效地预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病；(2)针对冠状病毒的靶向性高，毒副作用小；(3)能够抑制冠状病毒所引起的(例如感染所引起)的组织损伤和/或临床损伤，还可以进一步修复受损伤的组织；(4)阻断冠状病毒的感染；(5)可以被快速地大规模量产，可满足治疗冠状病毒所引起的疾病所需的时效性。
一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和靶向部分，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述靶向部分能够特异性结合活化T细胞的因子。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段与所述靶向部分直接或间接连接。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含ACE2蛋白的胞外结构域。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段来源于人。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述活化T细胞的因子选自下组：CD3和CD28。
在某些实施方式中，所述靶向部分包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab')2，F(ab)2，dAb，分离的互补决定区CDR，Fv和scFv。
在某些实施方式中，所述靶向部分为scFv。
在某些实施方式中，所述靶向部分包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述间接连接包括通过连接子连接。
在某些实施方式中，所述连接子为肽连接子。
在某些实施方式中，所述连接子包含SEQ ID NO:3，27-32中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述融合蛋白包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和嵌合抗原受体(CAR)功能结构，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述嵌合抗原受体功能结构包括跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含ACE2蛋白的胞外结构域。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段来源于人。
在某些实施方式中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述跨膜结构域包含源自选自下述蛋白的跨膜结构域：T细胞受体的α，β或ζ链、CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
在某些实施方式中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述共刺激结构域包含源自选自下述蛋白的共刺激结构域：CD28、4-1BB、OX-40和ICOS。
在某些实施方式中，所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述胞内信号传导结构域包含源自CD3ζ的信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体功能结构还包括铰链区。
在某些实施方式中，所述铰链区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体功能结构包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述融合蛋白，还包括细胞因子。
在某些实施方式中，所述细胞因子位于所述融合蛋白的C端。
在某些实施方式中，所述细胞因子与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。
在某些实施方式中，所述细胞因子包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种或多种核酸分子，其编码本申请所述的融合蛋白。
另一方面，本申请提供一种载体，其包含本申请所述的核酸分子。
另一方面，本申请提供一种细胞，其表达本申请所述的融合蛋白，和/或包含本申请所述的核酸分子，和/或包含本申请所述的载体。
在某些实施方式中，所述细胞选自下组：间充质干细胞和T细胞。
另一方面，本申请提供一种制备本申请所述的融合蛋白的方法，其包括以下的步骤：培养本申请所述的细胞。
另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含本申请所述的融合蛋白。
另一方面，本申请提供一种本申请所述的融合蛋白在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病。
在某些实施方式中，所述冠状病毒包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
另一方面，本申请提供一种药物产品，其包括包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，和细胞因子或其融合蛋白，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白。
在某些实施方式中，所述包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白包括本申请所述的融合蛋白。
在某些实施方式中，所述包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白包括ACE2-Fc融合蛋白，所述ACE2-Fc融合蛋白包括ACE2蛋白的胞外结构域与其直接或间接连接的IgG的Fc区域。
在某些实施方式中，所述细胞因子或其融合蛋白包括促进型细胞因子或其融合蛋白，和/或，抑制型细胞因子或其融合蛋白，其中所述促进型细胞因子包括IL-22，和/或，所述抑制型细胞因子包括IL-6。
在某些实施方式中，所述促进型细胞因子或其融合蛋白包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抑制型细胞因子或其融合蛋白包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种本申请所述的药物产品在制备预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病的药物中的用途。
在某些实施方式中，所述病毒包括SARS-CoV和/或SARS-CoV-2。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：
图1显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-Fc)结构示意图。
图2显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-Fc)与SARS-CoV-2S蛋白结合结果。
图3显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-Fc)对SARS-CoV-2假病毒感染的阻断结果。
图4显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-BITE)结构示意图。
图5显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-BITE)与SARS-CoV-2 S蛋白和CD3结合结果。
图6显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-BITE)对SARS-CoV-2阳性细胞的杀伤结果。
图7显示的是本申请所述促进型细胞因子融合蛋白结构示意图。
图8显示的是本申请所述促进型细胞因子融合蛋白促进COLO 205细胞的增值。
图9显示的是本申请所述促进型细胞因子融合蛋白促进COLO 205的划痕修复。
图10显示的是本申请所述抑制型细胞因子融合蛋白结构示意图。
图11显示的是本申请所述抑制型细胞因子融合蛋白对IL-6信号的阻断结果。
图12显示的是利用MSC表达本申请所述融合蛋白(ACE2-Fc)的蛋白分泌测定结果。
图13显示的是利用MSC表达本申请所述融合蛋白(ACE2-BITE)的蛋白分泌测定结果。
图14显示的是利用MSC表达本申请所述促进型细胞因子融合蛋白的蛋白分泌测定结果。
图15显示的是利用MSC表达本申请所述抑制型细胞因子融合蛋白的蛋白分泌测定结果。
图16显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2 BBZ)对SARS-CoV2 S蛋白阳性细胞的杀伤结果。
图17显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2 BBZ)被S蛋白阳性细胞特异激活释放IFNγ。
图18显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2-Fc)不影响小鼠的体重。
图19显示的是本申请所述的融合蛋白(ACE2-Fc)不造成小鼠组织损伤。
图20显示的是本申请所述的融合蛋白(ACE2-Fc)在小鼠体内的药代动力学分析。
图21显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2 BBZ-IL-22-Fc)分泌表达IL-22-Fc。
图22显示的是本申请所述融合蛋白(ACE2 BBZ-IL-22-Fc)对SARS-CoV2 S蛋白阳性细胞的杀伤结果。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“活化T细胞的因子”通常是指能够活化T细胞的分子。在本申请中，所述活化T细胞的因子可以包括T细胞活化第一信号，和/或T细胞活化第二信号。所述T细胞活化第一信号可以包括CD3。例如，CD3分子可以与TCR形成TCR-CD3复合体，参与把TCR与抗原结合后产生的活化信号传递到T细胞内，从而诱导T细胞活化。所述T细胞活化第二信号可以包括CD28。例如，CD28可以与抗原呈递细胞上的配体B7结合形成B7-CD28复合体来发挥共刺激作用。例如，CD3和CD28可以发挥协同地活化T细胞的作用。
在本申请中，术语“靶向部分”通常是指能够特异性识别并结合特定标志(例如抗原，又例如细胞表面标记物)的功能区域。在本申请中，所述靶向部分可以包括抗体(例如单克隆抗体)或其抗原结合片段。在本申请中，所述靶向部分可以是靶向所述活化T细胞的因子的抗体或其抗原结合片段。例如，所述靶向部分可以为CD3抗体或其抗原结合片段。又例如，所述靶向部分可以为CD28抗体或其抗原结合片段。
在本申请中，术语“冠状病毒的S蛋白”通常是指冠状蛋白的刺突蛋白(spike蛋白)。所述S蛋白可以组合成三聚体，其约含有1300个氨基酸。所述S蛋白可以属于第一类膜融合蛋白(Class I viral fusion protein)。所述S蛋白通常可以含有两个亚基(subunit)，S1和S2。S1主要包含有受体结合区(receptor binding domain RBD)，其可以负责识别细胞的受体。S2含有膜融合过程所需的基本元件，包括一个内在的膜融合肽(fusionpeptide)，两个7肽重复序列(heptad repeat，HR)，一个富含芳香族氨基酸的膜临近区域(membrane proximal external region，MPER)，以及跨膜区(transmembrane，TM)。S1蛋白可进一步分成两个区域(domain)，即N-端区域(N-terminal domain，NTD)和C-端区域(C-terminal domain，CTD)。S蛋白可以决定病毒(例如冠状病毒SARS-CoV-2)的宿主范围和特异性，也可以为宿主中和抗体的而重要作用位点，和/或疫苗设计的关键靶点。所述S蛋白可以为SARS-CoV-2的S蛋白，例如，其结构可以参见Daniel Wrapp等，Cryo-EM structure ofthe 2019-nCoV spike in the prefusion conformation,Science。
在本申请中，术语“S蛋白的结合蛋白或其功能性片段”通常是指可以结合所述冠状病毒的S蛋白的蛋白，或者其功能性片段(例如，所述功能性片段仍可以保留结合所述冠状病毒的S蛋白的性质)。例如，所述S蛋白的结合蛋白可以包括血管紧张素转换酶II(Angiotensin converting enzyme II，ACE2)，氨基肽酶N(animo peptidase N，APN)，二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4,DPP4)，以及CEACAM1(carcino embryonic antigen-related cell adhesion molecule)。
在本申请中，术语“ACE2”通常是指血管紧张素转化酶II(Angiotensin-converting enzyme 2)或其功能片段。所述血管紧张素转化酶II可以催化血管紧张素I转化为血管紧张素-(1-9)或血管紧张素II转化为血管紧张素-(1-7)的外肽酶。所述ACE2可以包括N端的PD区(peptidase domain，肽酶结构域)和C端CLD区(Collectrin-like domain)。所述血管紧张素转化酶II可以为SARS冠状病毒(SARS-CoV)或严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)的受体，例如，所述ACE2的胞外结构域(例如，所述ACE2的PD区)可以结合冠状病毒的S蛋白的RBD。人血管紧张素转化酶II在UniProt数据库的登录号为Q9BYF1。人ACE2基因可以包含18个外显子，参见Tipnis,S.R.,Hooper,N.M.,Hyde,R.,Karran,E.,Christie,G.,Turner,A.J.A human homolog of angiotensin-converting enzyme:cloning and functional expression as a captopril-insensitive carboxypeptidase.J.Biol.Chem.275:33238-33243,2000的表1。在本申请中，所述ACE2蛋白的功能性片段可以包括所述完整ACE2蛋白的截短体或变体，只要所述功能性片段仍具备作为冠状病毒(例如SARS-CoV和/或SARS-CoV-2)受体的功能。
在本申请中，术语“ACE2-Fc融合蛋白”通常是指包含本申请所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段以及IgG抗体的Fc区域的融合蛋白。在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段与所述IgG抗体的Fc区域直接或间接连接。例如，所述IgG抗体的Fc区域可以位于所述ACE2-Fc融合蛋白的C端。在本申请中，所述IgG可以为IgG1，例如可以为人IgG1。
在本申请中，术语“冠状病毒”通常是指属于套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)中的病毒。所述冠状病毒为线性单股正链的RNA病毒。所述冠状病毒可以包括具有棘突的包膜。所述冠状病毒的基因组可以5’端具有甲基化的帽状结构，3’端具有poly(A)尾，基因组全长约为27-32kb。在本申请中，所述冠状病毒包括严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒，即Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus，其是冠状病毒科乙型冠状病毒属的一个种。在本申请中，所述冠状病毒可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)和/或新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
在本申请中，术语“SARS-CoV”通常是指SARS冠状病毒，即严重急性呼吸道综合征冠状病毒(英文全称为Severe acute respiratory syndrome coronavirus)，其属于冠状病毒科(Coronaviridae)乙型冠状病毒属(Betacoronavirus)沙贝病毒亚属(Sarbecovirus)。
在本申请中，术语“SARS-CoV-2”通常是指严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型，英文全称为Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2。SARS-CoV-2属于冠状病毒科(Coronaviridae)乙型冠状病毒属(Betacoronavirus)沙贝病毒亚属(Sarbecovirus)。SARS-CoV-2是一种具有包膜的、不分节段的正链单股RNA病毒。SARS-CoV-2可以引发新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。在本申请中，所述SARS-CoV-2可以包括S蛋白(刺突蛋白，spike蛋白)。
在本申请中，术语“嵌合抗原受体(CAR)功能结构”通常是指嵌合抗原受体中除靶向部分以外的结构部分。例如，所述嵌合抗原受体功能结构可以包括胞内信号传导结构域、共刺激结构域和/或跨膜结构域。在本申请中，所述嵌合抗原受体功能结构还可以包括铰链区。在本申请中，所述嵌合抗原受体功能结构及其中的各个部分所发挥的功能可以与所述嵌合抗原受体中的胞内信号传导结构域、共刺激结构域和/或跨膜结构域，以及铰链区的功能相一致或类似。例如，所述嵌合抗原受体功能结构可以将信号传导至细胞内。例如，所述嵌合抗原受体功能结构可以提供给免疫共刺激分子。例如，所述嵌合抗原受体功能结构可以与所述胞内信号传导结构域共同发挥传递信号的作用。
在本申请中，术语“胞内信号传导结构域”通常是指位于细胞内部能够转导信号的结构域。在本申请中，所述胞内信号传导信号域可以将信号传导至细胞内。例如，所述胞内信号传导结构域是所述嵌合抗原受体的胞内信号传导结构域。
在本申请中，术语“共刺激结构域”通常是指可以提供免疫共刺激分子的胞内结构域，所述共刺激分子为淋巴细胞对抗原的有效应答所需要的细胞表面分子。
在本申请中，术语“跨膜结构域”通常是指穿过细胞膜的结构域(TransmembraneDomain)。在本申请中，所述跨膜结构域可以与细胞内信号转导结构域相连接，起到传递信号的作用。
在本申请中，术语“细胞因子”通常可以包括白细胞介素、干扰素、趋化因子、造血生长因子，肿瘤坏死因子和/或转化生长因子。一般来说，它们是低分子量蛋白质，其可调节免疫系统的细胞的成熟、活化、增殖和分化。
在本申请中，术语“药物产品”通常是指含有一个以上活性成分的药物。在本申请中，所述药物产品可以指联用的药物(例如，联用的一个以上活性成分可以同时，也可以具备先后顺序施用，所述一个以上活性成分可以被分装在不同的容器中)，也可以指药物组合物(例如，所述一个药物成分可以为混合物，也可以被分装在相同的容器中)。在本申请中，所述一个以上活性成分可以包括本申请所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，也可以包括本申请所述的细胞因子或其融合蛋白。例如，所述细胞因子可以包括促进型细胞因子和/或抑制型细胞因子。
在本申请中，术语“促进型细胞因子”通常是指能够促进炎症反应消除和/或降低的细胞因子(例如细胞因子、细胞因子的受体、和/或特异性结合所述细胞因子或细胞因子受体的抗体或其抗原结合片段)。在本申请中，所述炎症反应可以因感染冠状病毒所造成。所述炎症反应可以包括由防御性反应产生的红肿、发热、疼痛、组织损伤等症状。本申请中，所述促进型细胞因子可以降低所述炎症反应(例如，可以促进组织修复)，例如，其可以包括IL-22。
在本申请中，术语“抑制型细胞因子”通常是指抑制炎症反应(例如，本申请所述的炎症反应)消除和/或降低的细胞因子(例如细胞因子、细胞因子的受体、和/或特异性结合所述细胞因子或细胞因子受体的抗体或其抗原结合片段)。例如，所述炎症反应可以包括细胞因子风暴(例如，所述细胞因子风暴可以包括体液中多种细胞因子，例如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MCP-1和IL-8，迅速大量产生)。在本申请中，所述抑制型细胞因子可以包括能够抑制所述细胞因子风暴的细胞因子，或者特异性结合所述细胞因子或细胞因子受体的抗体或其抗原结合片段。在本申请中，所述抑制型细胞因子可以包括IL-6、IL-10和/或TNF。
在本申请中，术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项的两项。
在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
发明详述
融合蛋白
一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和靶向部分，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述靶向部分能够特异性结合活化T细胞的因子。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以与所述靶向部分直接或间接连接。在本申请中，所述间接连接可以包括通过连接子连接。在本申请中，所述连接子可以为肽连接子。例如，所述连接子可以包含SEQ ID NO:3，27-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述连接子可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以位于所述融合蛋白的N端。在本申请中，所述靶向部分可以位于所述融合蛋白的C端。
例如，在所述融合蛋白中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的C端可以与所述靶向部分的N端直接或间接连接。例如，ACE2蛋白或其片段(例如，ACE2蛋白的胞外结构域)的C端可以与所述靶向部分的N端直接或间接连接。
在本申请中，所述融合蛋白可以自N端依次包括所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段、所述连接子和所述靶向部分。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以包含ACE2蛋白的胞外结构域。例如，所述S蛋白的结合蛋白可以包括ACE2蛋白。又例如，所述S蛋白的结合蛋白的功能性片段可以包括ACE2蛋白的胞外结构域。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以来源于人。例如，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以为人ACE2蛋白或其功能性片段(例如，所述功能可以包括保留与所述S蛋白识别和/或结合的能力)。例如，所述ACE2蛋白的功能性片段可以为人ACE2蛋白的胞外结构域。例如，所述ACE2蛋白的功能性可以包含人ACE2蛋白第1-740位氨基酸的氨基酸序列。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述活化T细胞的因子可以选自下组：CD3和CD28。例如，所述活化T细胞的因子可以为CD3。
在本申请中，所述靶向部分可以包括抗体或其抗原结合片段。例如，所述靶向部分可以为IgG型抗体，也可以为抗原结合片段。例如，所述抗原结合片段可以选自下组：Fab，Fab’，F(ab')2，F(ab)2，dAb，分离的互补决定区CDR，Fv和scFv。例如，所述靶向部分可以为scFv。
在本申请中，所述靶向部分可以为CD3抗体或其抗原结合片段。例如，所述靶向部分可以为CD3 scFv。在本申请中，所述靶向部分可以为OKT3(CAT#:TAB-0416CL-S(P))。
在本申请中，所述靶向部分可以包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述融合蛋白还可以包含识别标签。例如，所述识别标签可以位于所述融合蛋白的C端。例如，所述识别标签可以与所述靶向部分的C端直接或间接连接。在本申请中，所述识别标签可以包括HIS标签，例如，其氨基酸序列可以如SEQ ID NO:26所示。
在本申请中，所述融合蛋白可以自N端依次包括所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段、所述连接子、所述靶向部分和所述识别标签。
在本申请中，所述融合蛋白可以包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和嵌合抗原受体(CAR)功能结构，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述嵌合抗原受体功能结构包括跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以包含ACE2蛋白的胞外结构域。例如，所述S蛋白的结合蛋白可以包括ACE2蛋白。又例如，所述S蛋白的结合蛋白的功能性片段可以包括ACE2蛋白的胞外结构域。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以来源于人。例如，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以为人ACE2蛋白或其功能性片段(例如，所述功能可以包括保留与所述S蛋白识别和/或结合的能力)。例如，所述ACE2蛋白的功能性片段可以为人ACE2蛋白的胞外结构域。例如，所述ACE2蛋白的功能性可以包含人ACE2蛋白第1-740位氨基酸的氨基酸序列。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以来源于人。
例如，所述ACE2蛋白可以为完整的人ACE2蛋白。在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。例如，ACE2蛋白或其片段(例如，ACE2蛋白的胞外结构域)的C端可以与所述靶向部分的N端直接或间接连接。在本申请中，所述间接连接可以包括通过连接子连接。在本申请中，所述连接子可以为肽连接子。例如，所述连接子可以包含SEQ ID NO:3，27-32中任一项所示的氨基酸序列。在本申请中，所述连接子的N端可以与所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的C端连接，且所述连接子的C端可以与所述嵌合抗原受体功能结构的N端连接。
在本申请中，所述融合蛋白自N端起可以包括所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和所述嵌合抗原受体功能结构。
在本申请中，所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段可以位于所述嵌合抗原受体(CAR)功能结构的N端。在本申请中，所述嵌合抗原受体(CAR)功能结构可以位于所述融合蛋白的C端。例如，所述融合蛋白自N端起可以包括所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和所述嵌合抗原受体功能结构。
例如，在所述融合蛋白中，所述ACE2蛋白或其功能性片段的C端可以与所述嵌合抗原受体(CAR)功能结构的N端直接或间接连接。
在本申请中，在所述嵌合抗原受体(CAR)功能结构中，所述跨膜结构域可以位于所述嵌合抗原受体功能结构的N端。
在本申请中，所述胞内信号传导结构域可以位于所述嵌合抗原受体功能的C端。
在本申请中，所述共刺激结构域可以位于所述跨膜结构域的C端。例如，所述跨膜结构域的C端可以与所述共刺激结构域的N端直接或间接连接。
在本申请中，所述共刺激结构域可以位于所述胞内信号传导结构域的N端。例如，所述共刺激结构域的C端可以与所述胞内信号传导结构域的N端直接或间接连接。
在本申请中，所述嵌合抗原受体功能结构可以自N端其包括所述跨膜结构域、所述共刺激结构域和所述胞内信号传导结构域。
在本申请中，所述跨膜结构域可以包含源自选自下述蛋白的跨膜结构域：T细胞受体的α，β或ζ链、CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
在本申请中，所述跨膜结构域可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述共刺激结构域可以包含源自选自下述蛋白的共刺激结构域：CD28、4-1BB、OX-40和ICOS。
在本申请中，所述共刺激结构域可以包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述胞内信号传导结构域可以包含源自CD3ζ的信号传导结构域。
在本申请中，所述胞内信号传导结构域可以包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体功能结构还可以包括铰链区。所述铰链区可以位于所述嵌合抗原受体功能结构的N端。例如，所述铰链区的C端可以与所述跨膜结构域的N端直接或间接连接。在本申请中，所述嵌合抗原功能结构自N端起可以包括所述铰链区、所述跨膜结构域、所述共刺激结构域和所述胞内信号传导结构域。
在本申请中，所述铰链区可以包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述嵌合抗原受体功能结构可以包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述融合蛋白，还可以包括细胞因子。
在本申请中，所述细胞因子可以位于所述融合蛋白的C端。例如，所述细胞因子可以位于所述嵌合抗原受体功能结构的C端。例如，所述细胞因子可以与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。例如，所述细胞因子的N端可以与所述嵌合抗原受体功能结构的C端直接或间接连接。例如，所述间接连接可以包括通过连接子连接。在本申请中，所述连接子可以为连接肽，所述连接肽可以包括SEQ ID NO:22-25中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述连接肽可以包括SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。在本申请中，所述连接肽的N端可以与所述嵌合抗原受体功能结构的C端连接，且所述连接肽的C端可以与所述细胞因子的N端连接。
在本申请中，所述融合蛋白自N端起可以包括所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段、所述嵌合抗原受体功能结构和所述细胞因子。又例如，所述融合蛋白自N端起可以包括所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段、所述嵌合抗原受体功能结构、所述连接肽和所述细胞因子。
在本申请中，所述细胞因子可以包括IL-22。在本申请中，所述细胞因子可以包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述的融合蛋白可以包含SEQ ID NO:10或EQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种或多种核酸分子，其编码本申请所述的融合蛋白。
在本申请中，所述核酸分子可以涵盖RNA以及单链和/或双链DNA。所述核酸分子可以是天然存在的，例如，在基因组、转录物、mRNA、tRNA、rRNA、siRNA、snRNA、质粒、粘粒、染色体、染色单体、或其它天然存在的核酸分子的背景中。所述核酸分子也可以是非天然存在的分子，例如重组DNA或RNA、人工染色体、工程化基因组、或其片段、或合成DNA、RNA、DNA/RNA杂合物，或者包括非天然存在的核苷酸或核苷。
另一方面，本申请提供一种载体，其包含本申请所述的核酸分子。
在本申请中，所述载体可以包括质粒、病毒载体、粘粒、人工染色体和/或噬菌粒。所述载体可以含有一种或多种适合于用于鉴定和/或选择细胞的标志物序列。
另一方面，本申请提供一种细胞，其表达本申请所述的融合蛋白，和/或包含本申请所述的核酸分子，和/或包含本申请所述的载体。
在本申请中，所述细胞可以包括原核细胞和/或真核细胞，例如，所述细胞可以为哺乳动物细胞，例如，所述细胞可以选自下组：间充质干细胞和T细胞。例如，所述细胞可以为间充质干细胞，例如，人间充质干细胞。
另一方面，本申请提供一种制备本申请所述的融合蛋白的方法，其包括以下的步骤：培养本申请所述的细胞。
例如，所述培养的条件可以为能够使所述细胞表达本申请所述的融合蛋白。所述培养的条件可以通过摸索本领域技术的常规的细胞培养条件得到，只要该条件能够获得具有正确构象和/或生物学活性的本申请所述融合蛋白即可。
另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含本申请所述的融合蛋白。
另一方面，本申请提供一种本申请所述的融合蛋白在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病。
本申请提供一种本申请所述的融合蛋白在制备预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病的药物中的用途。
本申请提供一种预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病的方法，其包括以下的步骤，向有需要的受试者施用本申请所述的融合蛋白。
在本申请中，所述冠状病毒可以包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
例如，所述疾病可以包括重症急性呼吸综合征(SARS)和/或新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。在本申请中，新型冠状病毒肺炎(COVID-19)可以指2019冠状病毒病(英文全称为coronavirus disease 2019)，其是由SARS-CoV-2引发的疾病。大多数COVID-19患者的表现以下呼吸道症状为主，常见临床表现包括发热、四肢乏力、干咳等症状。重症急性呼吸综合征(SARS)可以指由SARS-CoV引发的疾病。SARS通常以肌肉疼痛、头痛和发烧的全身症状为特征，并于2-14天内出现咳嗽、呼吸困难和肺炎等呼吸道症状。
药物产品和联用
另一方面，本申请提供一种药物产品，其包括包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，和细胞因子或其融合蛋白，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白。
在本申请中，所述包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白可以包括本申请所述的上述任意的融合蛋白。
在本申请中，所包含述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白可以包括ACE2-Fc融合蛋白，所述ACE2-Fc融合蛋白包括ACE2蛋白的胞外结构域与其直接或间接连接的IgG的Fc区域。
例如，所述ACE2蛋白的胞外结构域(例如人ACE2蛋白的胞外结构域)可以位于所述Fc区域的N端。例如，所述ACE2蛋白的胞外结构域(例如人ACE2蛋白的胞外结构域)的C端可以与所述Fc区域的N端直接或间接连接。
在本申请中，所述IgG可以为IgG1。例如，可以为人IgG1。
在本申请中，所述细胞因子或其融合蛋白可以包括促进型细胞因子或其融合蛋白，和/或，抑制型细胞因子或其融合蛋白，其中所述促进型细胞因子可以包括IL-22，和/或，所述抑制型细胞因子可以包括IL-6。
在本申请中，所述促进型细胞因子的融合蛋白可以促进组织修复(例如，可以促进因所述冠状病毒感染导致的炎症反应的组织损伤的修复)。在本申请中，所述促进型细胞因子的融合蛋白可以包括IL-22，例如，可以包括人IL-22。在本申请中，所述促进型细胞因子或其融合蛋白还可以包括IL22、TGF-β和/或PDGF。
在本申请中，所述促进型细胞因子的融合蛋白可以包括IL-22和其直接或间接连接的IgG的Fc区域。在本申请中，所述IgG可以为IgG1。例如，可以为人IgG1。
在本申请中，所述IL-22可以位于所述Fc区域的N端。例如，所述IL-22的C端可以与所述Fc区域的N端直接或间接连接。
在本申请中，所述促进型细胞因子或其融合蛋白可以包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抑制型细胞因子或其融合蛋白可以抑制细胞因子风暴(例如，因感染所述冠状病毒导致的炎症反应的细胞因子风暴)。在本申请中，所述抑制型细胞因子的融合蛋白可以包括靶向IL-6受体的抗体或其抗原结合片段，例如，可以包括靶向人IL-6受体的抗体或其抗原结合片段。例如，可以包括靶向人IL-6受体的scFv。在本申请中，所述抑制型细胞因子或其融合蛋白还可以包括IL-10、TNF抗体、IL-6抗体和/或TNF受体-Ig。
在本申请中，所述抑制型细胞因子的融合蛋白可以包括所述靶向IL-6受体的抗体或其抗原结合片段(例如，可以为靶向人IL-6R的单链抗体，又例如，可以包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列)和其直接或间接连接的IgG的Fc区域。在本申请中，所述IgG可以为IgG1。例如，可以为人IgG1。
在本申请中，所述靶向IL-6受体的抗体或其抗原结合片段可以位于所述Fc区域的N端。例如，所述靶向IL-6受体的抗体或其抗原结合片段的C端可以与所述Fc区域的N端直接或间接连接。
在本申请中，所述抑制型细胞因子或其融合蛋白可以包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述药物产品可以为药物组合物。例如，所述包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，和细胞因子或其融合蛋白(例如，所述抑制型细胞因子的融合蛋白和/或所述促进型细胞因子的融合蛋白)可以被置于同一容器中。又例如，所述包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，和细胞因子或其融合蛋白(例如，所述抑制型细胞因子的融合蛋白和/或所述促进型细胞因子的融合蛋白)可以被置于不同的容器(例如包装)中。
另一方面，本申请提供一种本申请所述的药物产品在预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病中的用途。
本申请提供一种本申请所述的药物产品在制备预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病的药物中的用途。
本申请提供一种预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病的方法，其包括以下的步骤，向有需要的受试者施用本申请所述的药物产品。
在本申请中，所述病毒可以包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
例如，所述疾病可以包括重症急性呼吸综合征(SARS)和/或新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
本申请还可以包括以下的实施方式：
1.融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和靶向部分，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述靶向部分能够特异性结合活化T细胞的因子。
2.根据实施方式1所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段与所述靶向部分直接或间接连接。
3.根据实施方式1-2中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含ACE2蛋白的胞外结构域。
4.根据实施方式1-3中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段来源于人。
5.根据实施方式1-4中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
6.根据实施方式1-5中任一项所述的融合蛋白，其中所述活化T细胞的因子选自下组：CD3和CD28。
7.根据实施方式1-6中任一项所述的融合蛋白，其中所述靶向部分包括抗体或其抗原结合片段。
8.根据实施方式1-7中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab')2，F(ab)2，dAb，分离的互补决定区CDR，Fv和scFv。
9.根据实施方式1-8中任一项所述的融合蛋白，其中所述靶向部分为scFv。
10.根据实施方式1-9中任一项所述的融合蛋白，其中所述靶向部分包含SEQ IDNO:2所示的氨基酸序列。
11.根据实施方式1-10中任一项所述的融合蛋白，其中所述间接连接包括通过连接子连接。
12.根据实施方式11所述的融合蛋白，其中所述连接子为肽连接子。
13.根据实施方式11-12中任一项所述的融合蛋白，其中所述连接子包含SEQ IDNO:3，27-32中任一项所示的氨基酸序列。
14.根据实施方式1-13中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
15.融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和嵌合抗原受体(CAR)功能结构，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述嵌合抗原受体功能结构包括跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
16.根据实施方式15所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。
17.根据实施方式15-16中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含ACE2蛋白的胞外结构域。
18.根据实施方式15-17中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段来源于人。
19.根据实施方式15-18中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
20.根据实施方式15-19中任一项所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包含源自选自下述蛋白的跨膜结构域：T细胞受体的α，β或ζ链、CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
21.根据实施方式15-20中任一项所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包含SEQID NO:5所示的氨基酸序列。
22.根据实施方式15-21中任一项所述的融合蛋白，其中所述共刺激结构域包含源自选自下述蛋白的共刺激结构域：CD28、4-1BB、OX-40和ICOS。
23.根据实施方式15-22中任一项所述的融合蛋白，其中所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
24.根据实施方式15-23中任一项所述的融合蛋白，其中所述胞内信号传导结构域包含源自CD3ζ的信号传导结构域。
25.根据实施方式15-24中任一项所述的融合蛋白，其中所述胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
26.根据实施方式15-25中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合抗原受体功能结构还包括铰链区。
27.根据实施方式26所述的融合蛋白，其中所述铰链区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
28.根据实施方式15-27中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合抗原受体功能结构包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
29.根据实施方式15-28中任一项所述的融合蛋白，其还包括细胞因子。
30.根据实施方式29所述的融合蛋白，其中所述细胞因子位于所述融合蛋白的C端。
31.根据实施方式29-30中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞因子与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。
32.根据实施方式29-31中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞因子包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列。
33.根据实施方式29-32中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:12所示的氨基酸序列。
34.一种或多种核酸分子，其编码实施方式1-33中任一项所述的融合蛋白。
35.载体，其包含实施方式34所述的核酸分子。
36.细胞，其表达实施方式1-33中任一项所述的融合蛋白，和/或包含实施方式34所述的核酸分子，和/或包含实施方式35所述的载体。
37.根据实施方式36所述的细胞，其中所述细胞选自下组：间充质干细胞和T细胞。
38.制备根据实施方式1-33中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括以下的步骤：培养实施方式36所述的细胞。
39.药物组合物，其包含实施方式1-33中任一项所述的融合蛋白。
40.实施方式1-33中任一项所述的融合蛋白在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病。
41.根据实施方式40所述的用途，其中所述冠状病毒包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
42.药物产品，其包括包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，和细胞因子或其融合蛋白，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白。
43.根据实施方式42，其中所述包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白包括实施方式1-33中任一项所述的融合蛋白。
44.根据实施方式42-43中任一项所述的药物产品，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白包含ACE2-Fc融合蛋白，所述ACE2-Fc融合蛋白包括ACE2蛋白的胞外结构域以及与其直接或间接连接的IgG的Fc区域。
45.根据实施方式42-44中任一项所述的药物产品，其中所述细胞因子或其融合蛋白包括促进型细胞因子或其融合蛋白，和/或，抑制型细胞因子或其融合蛋白，其中所述促进型细胞因子包括IL-22，和/或，所述抑制型细胞因子包括IL-6。
46.根据实施方式45所述的药物产品，其中所述促进型细胞因子或其融合蛋白包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
47.根据实施方式45-46中任一项所述的药物产品，其中所述抑制型细胞因子或其融合蛋白包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
48.根据实施方式42-47中任一项所述的药物产品在预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病中的用途。
49.根据实施方式48所述的用途，其中所述病毒包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1 S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白(ACE2-Fc)的制备及功能
1.1生产ACE2-Fc
ACE2-Fc的结构可以参见图1。首先制备人工合成以下序列：ACE21-740(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)，人IgG1Fc区域(其氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示)，将以上两个序列连接后得到ACE2-Fc，其氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。
通过XbaI和BamHI酶切位点将编码ACE2-Fc的核酸分子(其核苷酸序列如SEQ IDNO:18所示)克隆到pCDH-MSCVEF载体。测序正确的克隆用NucleoBond Xtra Midi Plus EF试剂盒无内毒素大提，转染Lenti-X 293细胞，37℃、5％CO2培养6天后收取上清，0.45μM过滤后，使用Protein A亲和纯化ACE2-Fc蛋白。
1.2 ACE2-Fc与SARS-CoV-2 S蛋白的结合
胰酶消化293-S蛋白细胞(该细胞表达SARS-CoV-2的S蛋白)，与200ng/ml的实施例1.1制备的ACE2-Fc共孵育25分钟，洗去一抗，加入Alexa
Figure BDA0002462528830000191
647 AffiniPure F(ab')2片段山羊抗人IgG,Fc片段特异性二抗染色，其结果如图2所示。
其中图2A表示仅添加二抗的结构，图2B表示添加二抗和ACE2-Fc的结果。结果说明，ACE2-Fc能够特异性地与SARS-CoV-2 S蛋白结合。
1.3 ACE2-Fc阻断SARS-CoV-2假病毒的感染
将pCDNA3.1-SARS-CoV-2-S蛋白(该质粒包含编码SARS-CoV-2的S蛋白的核酸分子，其核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示)，Gag/Pol，RSV-REV和pCDH-IRFP-Luc转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，获得SARS-CoV-2假病毒。
胰酶消化293-ACE2细胞(该细胞表达人ACE2蛋白)接种到96孔板，将不同浓度的实施例1.1制备的ACE2-Fc与SARS-CoV-2假病毒37℃共孵育15分钟，再将孵育后的假病毒上清加入293-ACE2细胞，48小时后通过流式细胞分析IRFP的表达确定SARS-CoV-2假病毒的感染。其结果如图3所示。
结果显示，ACE2-Fc能够特异阻断SARS-CoV-2假病毒对人ACE2蛋白的感染。
实施例2 S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白(ACE2-BITE)的生产及功能
2.1.生产ACE2-BITE
ACE2-BITE的结构可以参见图4。首先人工合成以下序列：ACE21-740(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)，连接子(其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示)，OKT3 scFv(其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示)和HIS标签(其氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示)，将以上序列顺次连接后得到ACE2-BITE，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
通过XbaI和BamHI酶切位点将编码ACE2-BITE的核酸分子(其核苷酸序列如SEQ IDNO:20所示)克隆到pCDH-MSCVEF载体。测序正确的克隆用NucleoBond Xtra Midi Plus EF试剂盒无内毒素大提，转染Lenti-X 293细胞，37℃、5％CO2培养6天后收取上清，0.45μM过滤后，为ACE2-BITE转染上清，进一步使用镍柱亲和纯化ACE2-BITE蛋白。
2.2 ACE2-BITE与SARS-CoV-2 S蛋白的结合
将293-S蛋白单细胞悬液与实施例2.1制备的ACE2-BITE转染上清共孵育25分钟，洗去一抗，加入Alexa
Figure BDA0002462528830000201
647 AffiniPure F(ab')2片段山羊抗鼠IgG,Fab片段特异性二抗染色，其结果如图5所示，其中对照指不加入ACE2-BITE，只加入二抗的染色结果。
结果显示，所得ACE2-BITE能够特异地分别与SARS-CoV-2的S蛋白结合。
2.3 ACE2-BITE杀伤SARS-CoV-2 S蛋白阳性细胞
胰酶消化293细胞和293-S蛋白细胞(该细胞表达SARS-CoV-2的S蛋白，可视为SARS-CoV-2 S蛋白阳性细胞)接种到96孔板，加入人T细胞，加入实施例2.1制备的ACE2-BITE转染上清，48小时后通过流式细胞分析293细胞和293-S蛋白细胞的细胞数量确定ACE2-BITE的杀伤作用。其结果如图6所示，其中对照指不加入ACE2-BITE的T细胞。
结果显示，所得ACE2-BITE能够特异杀伤SARS-CoV-2 S蛋白阳性细胞。
实施例3促进型细胞因子融合蛋白(IL-22-Fc)的生产和功能
3.1 IL-22-Fc蛋白生产
IL-22-Fc的结构可以参见图7。首先人工合成以下序列：人IL-22(其氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示)，人IgG1 Fc区域(其氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示)，将以上两个序列连接后得到IL-22-Fc，其氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
通过XbaI和BamHI酶切位点将编码IL-22-Fc的核酸分子克隆到pCDH-MSCVEF载体。测序正确的克隆用NucleoBond Xtra Midi Plus EF试剂盒无内毒素大提，转染Lenti-X293细胞，37℃、5％CO2培养6天后收取上清，0.45μM过滤后，使用Protein A亲和纯化IL-22-Fc蛋白。
3.2 IL-22-Fc促进COLO 205细胞释放IL-10和划痕修复作用
将Colo 205细胞(购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)接种到96孔板，加入不同浓度实施例3.1制备的IL-22-Fc，48小时后通过ELISA检测IL-10的分泌释放。其结果如图8所示。
结果显示，所得IL-22-Fc具有生物活性，能够促进COLO 205细胞分泌IL-10。
将COLO 205细胞种到24-孔板，使用200μL移液枪头在细胞层上划痕，加入不同浓度实施例3.1制备的IL-22-Fc，72小时后显微镜拍照观察划痕修复。其结果如图9所示，其中对照指不加入所述IL-22-Fc。
结果显示，所得IL-22-Fc能够促进COLO 205细胞的划痕修复。
实施例4抑制型细胞因子融合蛋白(IL-6R抗体-Fc)的生产和功能
4.1 IL-6R抗体-Fc蛋白生产
IL-6R抗体-Fc的结构可以参见图10。首先人工合成以下序列：IL-6R抗体(其氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示)，人IgG1Fc区域(其氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示)，将以上两个序列连接后得到IL-6R抗体-Fc，其氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。
通过XbaI和BamHI酶切位点将编码IL-6R抗体-Fc的核酸分子克隆到pCDH-MSCVEF载体。测序正确的克隆用NucleoBond Xtra Midi Plus EF试剂盒无内毒素大提，转染Lenti-X 293细胞，37℃、5％CO2培养6天后收取上清，0.45μM过滤后，使用Protein A亲和纯化IL-6R抗体-Fc蛋白。
4.2 IL-6R抗体-Fc对IL-6信号的阻断作用
将表达TF-1的细胞(购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心)接种到96孔板，加入IL-6以及不同浓度的实施例4.1制备的IL-6R抗体-Fc，48小时后通过CCK-8试剂盒检测TF-1细胞的增殖，其结果如图11所示。
结果显示，IL-6R抗体-Fc能够阻断IL-6介导的TF-1细胞增殖。
实施例5间充质干细胞MSC表达ACE2-Fc
将VSV-g(货号ab1874)，Gag/Pol(购自addgene，货号14887)，RSV-REV(购自addgene，货号12253)和pCDH-MSCVEF-ACE2-Fc(其包含编码ACE2-Fc的核酸分子)转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，为ACE2-Fc病毒上清。
将MSC接种到6孔板，加入0.5mL ACE2-Fc病毒上清，加入凝聚胺至终浓度为10μg/ml,24小时后换液，48小时后加入嘌呤霉素筛选，获得稳定表达ACE2-Fc的MSC细胞，4天后用ELISA检测上清中ACE2-Fc的含量。其结果如图12所示。
结果显示，所得MSC稳定细胞系能够持续表达ACE2-Fc。
实施例6间充质干细胞MSC表达ACE2-BITE
将VSV-g，Gag/Pol，RSV-REV和pCDH-MSCVEF-ACE2-BITE(其包含编码ACE2-BITEc的核酸分子)转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，为ACE2-BITE病毒上清。
将MSC接种到6孔板，加入0.5MLACE2-BITE病毒上清，加入凝聚胺至终浓度为10μg/ml,24小时后换液，48小时后加入嘌呤霉素筛选，获得稳定表达ACE2-BITE的MSC细胞，后用上清染色293-S蛋白细胞，洗去一抗，加入Alexa
Figure BDA0002462528830000221
647 AffiniPure F(ab')2片段山羊抗鼠IgG,Fab片段特异性二抗染色。其结果如图13所示。
结果显示，所得MSC稳定细胞系能够持续表达ACE2-BITE。
实施例7间充质干细胞MSC表达IL-22-FC
将VSV-g，Gag/Pol，RSV-REV和pCDH-MSCVEF-IL-22-Fc(其包含编码IL-22-Fc的核酸分子)转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，为IL-22-Fc病毒上清。
将MSC接种到6孔板，加入0.5mL IL-22-Fc病毒上清，加入凝聚胺至终浓度为10μg/ml，24小时后换液，48小时后加入嘌呤霉素筛选，获得稳定表达IL-22-Fc的MSC细胞，4天后ELISA检测上清中IL-22-Fc的含量。其结果如图14所示。
结果显示，所得MSC稳定细胞系能够持续表达IL-22-Fc。
实施例8间充质干细胞MSC表达IL-6R抗体-Fc
将VSV-g，Gag/Pol，RSV-REV和pCDH-MSCVEF-IL-6R抗体-Fc(其包含编码IL-6R抗体-Fc的核酸分子)转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，为IL-6R抗体-Fc病毒上清。
将MSC接种到6孔板，加入0.5mL IL-6R抗体-Fc病毒上清，加入凝聚胺至终浓度为10μg/ml，24小时后换液，48小时后加入嘌呤霉素筛选，获得稳定表达IL-6R抗体-Fc的MSC细胞，4天后ELISA检测上清中IL-6R抗体-Fc的含量。其结果如图15所示。
结果显示，所得MSC稳定细胞系能够持续表达IL-6R抗体-Fc。
实施例9 S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白(ACE2 BBZ)的生产和功能
9.1 ACE2 BBZ CAR-T的生产
人工合成以下序列：ACE21-740(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)，BBZ(其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示)连接得到ACE2 BBZ，其氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
通过XbaI和BamHI酶切位点将编码ACE2 BBZ的核酸分子(其核苷酸序列如SEQ IDNO:21所示)克隆到pCDH-MSCVEF载体。测序正确的克隆用NucleoBond Xtra Midi Plus EF试剂盒无内毒素大提，将VSV-g，Gag/Pol，RSV-REV和pCDH-MSCVEF-ACE2BBZ(其包含编码ACE2 BBZ的核酸分子)转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，超速离心浓缩得到ACE2 BBZ病毒。
9.2 ACE2 BBZ CAR-T的功能
取实施例9.1制备所得的ACE2 BBZ病毒转染人T细胞，获得ACE2 BBZ CAR-T细胞，并以野生型人T细胞作为对照。将野生型人T细胞和ACE2 BBZ CAR-T细胞与293细胞和293-S蛋白细胞在37℃，5％CO2条件下共培养，48小时后流式细胞仪检测293细胞和293-S蛋白细胞的存活情况，从而检测ACE2 BBZ的杀伤效果。其结果如图16所示。同时检测上清中T细胞活化分泌IFNγ的含量。其结果如图17所示。
结果显示，与野生型人T细胞相比，ACE2BBZ CAR-T细胞能选择性杀伤表达SARS-CoV-2 S蛋白的细胞。
实施例10 ACE2-Fc的小鼠体内药代动力学分析和副作用分析10.1 ACE2-Fc对小鼠的副作用分析
将实施例1.1中制备的ACE2-Fc蛋白(200μg)腹腔注射到C57BL/c小鼠，注射后7天，每天检测小鼠体重，结果如图18所示，同时以不进行所述注射的小鼠作为对照。于第7天取小鼠心，肝，脾，肺和肾脏组织，进行HE染色分析。结果如图19所示。
结果显示ACE2-FC(200μg)给药，对小鼠体重无影响，心，肝，脾，肺和肾脏组织无可见组织损伤。
ACE2-Fc的小鼠药代动力学分析
将实施例1.1中制备的ACE2-Fc蛋白(100μg)静脉注射到C57BL/c小鼠，注射后5分钟，30分钟，1小时，2小时，3小时，6小时，1天，2天，3天，5天，7天，分别取血获得血清，通过ELISA检测血清中的ACE2-Fc的含量。结果如图20所示。
结果显示单次ACE2-FC(100μg)给药，在小鼠体内能够存续大于七天，其半衰期约8.21小时。
实施例11 S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白(ACE2 BBZ-IL-22-Fc)的生产和功能
11.1 ACE2 BBZ-IL22-Fc CAR-T的生产
人工合成以下序列：ACE21-740(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)，BBZ(其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示)，连接肽P2A(其氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示)，IL-22-Fc连接得到ACE2 BBZ-IL-22-Fc，其氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。
通过XbaI和BamHI酶切位点将编码ACE2 BBZ-IL-22-Fc的核酸分子克隆到pCDH-MSCVEF载体。测序正确的克隆用NucleoBond Xtra Midi Plus EF试剂盒无内毒素大提，将VSV-g，Gag/Pol，RSV-REV和pCDH-MSCVEF-ACE2BBZ-IL-22-Fc(其包含编码ACE2 BBZ-IL-22-Fc的核酸分子)转染到Lenti-X 293细胞，48小时后收取上清，0.45μM过滤后，超速离心浓缩得到ACE2 BBZ-IL-22-Fc病毒。同时取48小时后上清，ELISA检测IL-22-Fc表达，结果图21所示。
结果显示，ACE2 BBZ-IL-22-Fc转染细胞能分泌表达IL-22Fc。
11.2 ACE2 BBZ-IL-22-Fc CAR-T的功能
取实施例11.1制备所得的ACE2 BBZ-IL-22-Fc病毒转染人T细胞，获得ACE2 BBZ-IL-22-Fc CAR-T细胞，并以野生型人T细胞作为对照。将野生型人T细胞和ACE2 BBZ-IL-22-Fc CAR-T细胞与293细胞和293-S蛋白细胞在37℃，5％CO2条件下共培养，48小时后流式细胞仪检测293细胞和293-S蛋白细胞的存活情况，从而检测ACE2 BBZ-IL-22-Fc的杀伤效果。其结果如图22所示。
结果显示，与野生型人T细胞相比，ACE2BBZ-IL-22-Fc CAR-T细胞能选择性杀伤表达SARS-CoV-2 S蛋白的细胞。
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本文所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。
序列表
<110> 上海交通大学
<120> 融合蛋白分子及其制备方法和用途
<130> 0104-PA-003
<160> 32
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 740
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人ACE2蛋白氨基酸序列
<400> 1
Met Ser Ser Ser Ser Trp Leu Leu Leu Ser Leu Val Ala Val Thr Ala
1 5 10 15
Ala Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe
20 25 30
Asn His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp
35 40 45
Asn Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn
50 55 60
Ala Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala
65 70 75 80
Gln Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln
85 90 95
Leu Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys
100 105 110
Ser Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser
115 120 125
Thr Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu
130 135 140
Glu Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu
145 150 155 160
Arg Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu
165 170 175
Arg Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg
180 185 190
Ala Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu
195 200 205
Val Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu
210 215 220
Asp Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu
225 230 235 240
His Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile
245 250 255
Ser Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly
260 265 270
Arg Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys
275 280 285
Pro Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala
290 295 300
Gln Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu
305 310 315 320
Pro Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro
325 330 335
Gly Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp
355 360 365
Phe Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala
370 375 380
Tyr Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe
385 390 395 400
His Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys
405 410 415
His Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn
420 425 430
Glu Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly
435 440 445
Thr Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe
450 455 460
Lys Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met
465 470 475 480
Lys Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe
500 505 510
Ile Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala
515 520 525
Leu Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile
530 535 540
Ser Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu
545 550 555 560
Gly Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala
565 570 575
Lys Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe
580 585 590
Thr Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr
595 600 605
Asp Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu
610 615 620
Lys Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met
625 630 635 640
Tyr Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu
645 650 655
Lys Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val
660 665 670
Ala Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro
675 680 685
Lys Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile
690 695 700
Arg Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn
705 710 715 720
Ser Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln
725 730 735
Pro Pro Val Ser
740
<210> 2
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD3 scFV氨基酸序列
<400> 2
Asp Ile Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser
165 170 175
Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser
180 185 190
Gly Val Pro Tyr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Leu Lys
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列1
<400> 3
Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 4
<211> 997
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ACE2-Bite氨基酸序列
<400> 4
Met Ser Ser Ser Ser Trp Leu Leu Leu Ser Leu Val Ala Val Thr Ala
1 5 10 15
Ala Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe
20 25 30
Asn His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp
35 40 45
Asn Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn
50 55 60
Ala Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala
65 70 75 80
Gln Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln
85 90 95
Leu Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys
100 105 110
Ser Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser
115 120 125
Thr Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu
130 135 140
Glu Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu
145 150 155 160
Arg Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu
165 170 175
Arg Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg
180 185 190
Ala Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu
195 200 205
Val Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu
210 215 220
Asp Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu
225 230 235 240
His Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile
245 250 255
Ser Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly
260 265 270
Arg Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys
275 280 285
Pro Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala
290 295 300
Gln Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu
305 310 315 320
Pro Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro
325 330 335
Gly Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp
355 360 365
Phe Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala
370 375 380
Tyr Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe
385 390 395 400
His Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys
405 410 415
His Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn
420 425 430
Glu Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly
435 440 445
Thr Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe
450 455 460
Lys Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met
465 470 475 480
Lys Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe
500 505 510
Ile Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala
515 520 525
Leu Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile
530 535 540
Ser Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu
545 550 555 560
Gly Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala
565 570 575
Lys Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe
580 585 590
Thr Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr
595 600 605
Asp Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu
610 615 620
Lys Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met
625 630 635 640
Tyr Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu
645 650 655
Lys Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val
660 665 670
Ala Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro
675 680 685
Lys Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile
690 695 700
Arg Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn
705 710 715 720
Ser Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln
725 730 735
Pro Pro Val Ser Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Leu
740 745 750
Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met
755 760 765
Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp
770 775 780
Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn
785 790 795 800
Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala
805 810 815
Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser
820 825 830
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr
835 840 845
Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
850 855 860
Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
865 870 875 880
Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met
885 890 895
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser
900 905 910
Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro
915 920 925
Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Tyr
930 935 940
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser
945 950 955 960
Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
965 970 975
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys His
980 985 990
His His His His His
995
<210> 5
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD8跨膜区氨基酸序列
<400> 5
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 6
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4-1BB共刺激结构域序列
<400> 6
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 7
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD3ζ胞内信号传导结构域氨基酸序列
<400> 7
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 8
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 铰链区氨基酸序列
<400> 8
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 9
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗原受体功能结构氨基酸序列
<400> 9
Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
20 25 30
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
50 55 60
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
65 70 75 80
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
85 90 95
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
100 105 110
Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln
115 120 125
Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu
130 135 140
Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly
145 150 155 160
Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu
165 170 175
Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly
180 185 190
Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
210 215 220
Pro Arg Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly
225 230 235 240
Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
245
<210> 10
<211> 988
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ACE2-BBZ氨基酸序列
<400> 10
Met Ser Ser Ser Ser Trp Leu Leu Leu Ser Leu Val Ala Val Thr Ala
1 5 10 15
Ala Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe
20 25 30
Asn His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp
35 40 45
Asn Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn
50 55 60
Ala Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala
65 70 75 80
Gln Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln
85 90 95
Leu Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys
100 105 110
Ser Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser
115 120 125
Thr Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu
130 135 140
Glu Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu
145 150 155 160
Arg Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu
165 170 175
Arg Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg
180 185 190
Ala Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu
195 200 205
Val Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu
210 215 220
Asp Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu
225 230 235 240
His Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile
245 250 255
Ser Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly
260 265 270
Arg Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys
275 280 285
Pro Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala
290 295 300
Gln Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu
305 310 315 320
Pro Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro
325 330 335
Gly Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp
355 360 365
Phe Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala
370 375 380
Tyr Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe
385 390 395 400
His Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys
405 410 415
His Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn
420 425 430
Glu Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly
435 440 445
Thr Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe
450 455 460
Lys Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met
465 470 475 480
Lys Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe
500 505 510
Ile Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala
515 520 525
Leu Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile
530 535 540
Ser Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu
545 550 555 560
Gly Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala
565 570 575
Lys Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe
580 585 590
Thr Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr
595 600 605
Asp Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu
610 615 620
Lys Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met
625 630 635 640
Tyr Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu
645 650 655
Lys Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val
660 665 670
Ala Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro
675 680 685
Lys Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile
690 695 700
Arg Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn
705 710 715 720
Ser Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln
725 730 735
Pro Pro Val Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
740 745 750
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
755 760 765
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
770 775 780
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
785 790 795 800
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
805 810 815
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
820 825 830
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
835 840 845
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
850 855 860
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
865 870 875 880
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
885 890 895
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
900 905 910
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
915 920 925
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
930 935 940
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
945 950 955 960
Gln Ala Leu Pro Pro Arg Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
965 970 975
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
980 985
<210> 11
<211> 179
<212> PRT
<213> 人类（Homo sapiens）
<400> 11
Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu Met Gly Thr Leu
1 5 10 15
Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val Gln Gly Gly Ala
20 25 30
Ala Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln
35 40 45
Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser
50 55 60
Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe
65 70 75 80
His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu
85 90 95
Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln
100 105 110
Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg
115 120 125
Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn
130 135 140
Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu
145 150 155 160
Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn
165 170 175
Ala Cys Ile
<210> 12
<211> 1426
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ACE2-BBZ-IL22氨基酸序列
<400> 12
Met Ser Ser Ser Ser Trp Leu Leu Leu Ser Leu Val Ala Val Thr Ala
1 5 10 15
Ala Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe
20 25 30
Asn His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp
35 40 45
Asn Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn
50 55 60
Ala Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala
65 70 75 80
Gln Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln
85 90 95
Leu Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys
100 105 110
Ser Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser
115 120 125
Thr Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu
130 135 140
Glu Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu
145 150 155 160
Arg Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu
165 170 175
Arg Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg
180 185 190
Ala Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu
195 200 205
Val Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu
210 215 220
Asp Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu
225 230 235 240
His Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile
245 250 255
Ser Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly
260 265 270
Arg Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys
275 280 285
Pro Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala
290 295 300
Gln Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu
305 310 315 320
Pro Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro
325 330 335
Gly Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp
355 360 365
Phe Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala
370 375 380
Tyr Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe
385 390 395 400
His Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys
405 410 415
His Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn
420 425 430
Glu Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly
435 440 445
Thr Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe
450 455 460
Lys Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met
465 470 475 480
Lys Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe
500 505 510
Ile Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala
515 520 525
Leu Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile
530 535 540
Ser Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu
545 550 555 560
Gly Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala
565 570 575
Lys Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe
580 585 590
Thr Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr
595 600 605
Asp Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu
610 615 620
Lys Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met
625 630 635 640
Tyr Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu
645 650 655
Lys Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val
660 665 670
Ala Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro
675 680 685
Lys Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile
690 695 700
Arg Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn
705 710 715 720
Ser Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln
725 730 735
Pro Pro Val Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
740 745 750
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
755 760 765
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
770 775 780
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
785 790 795 800
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
805 810 815
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
820 825 830
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
835 840 845
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
850 855 860
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
865 870 875 880
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
885 890 895
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
900 905 910
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
915 920 925
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
930 935 940
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
945 950 955 960
Gln Ala Leu Pro Pro Arg Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
965 970 975
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Gly Ser Gly Ala
980 985 990
Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
995 1000 1005
Gly Pro Arg Thr Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu
1010 1015 1020
Met Gly Thr Leu Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val
1025 1030 1035 1040
Gln Gly Gly Ala Ala Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys
1045 1050 1055
Ser Asn Phe Gln Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala
1060 1065 1070
Lys Glu Ala Ser Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly
1075 1080 1085
Glu Lys Leu Phe His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met
1090 1095 1100
Lys Gln Val Leu Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser
1105 1110 1115 1120
Asp Arg Phe Gln Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg
1125 1130 1135
Leu Ser Asn Arg Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His
1140 1145 1150
Ile Gln Arg Asn Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly
1155 1160 1165
Glu Ser Gly Glu Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met
1170 1175 1180
Ser Leu Arg Asn Ala Cys Ile Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp
1185 1190 1195 1200
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
1205 1210 1215
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
1220 1225 1230
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
1235 1240 1245
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
1250 1255 1260
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
1265 1270 1275 1280
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
1285 1290 1295
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
1300 1305 1310
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
1315 1320 1325
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
1330 1335 1340
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
1345 1350 1355 1360
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
1365 1370 1375
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
1380 1385 1390
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
1395 1400 1405
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
1410 1415 1420
Gly Lys
1425
<210> 13
<211> 414
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL-22Fc氨基酸序列
<400> 13
Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu Met Gly Thr Leu
1 5 10 15
Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val Gln Gly Gly Ala
20 25 30
Ala Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln
35 40 45
Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser
50 55 60
Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe
65 70 75 80
His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu
85 90 95
Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln
100 105 110
Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg
115 120 125
Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn
130 135 140
Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu
145 150 155 160
Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn
165 170 175
Ala Cys Ile Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
180 185 190
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
195 200 205
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
210 215 220
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
225 230 235 240
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
245 250 255
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
260 265 270
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
275 280 285
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
290 295 300
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
305 310 315 320
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
325 330 335
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
340 345 350
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
355 360 365
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
370 375 380
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
385 390 395 400
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
405 410
<210> 14
<211> 263
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL-6R scFV氨基酸序列
<400> 14
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
145 150 155 160
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
165 170 175
His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
195 200 205
Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
210 215 220
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
260
<210> 15
<211> 235
<212> PRT
<213> 人类（Homo sapiens）
<400> 15
Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
50 55 60
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
100 105 110
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
130 135 140
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
180 185 190
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
195 200 205
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
210 215 220
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 16
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL-6R scFv-Fc氨基酸序列
<400> 16
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
145 150 155 160
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
165 170 175
His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
195 200 205
Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
210 215 220
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp
260 265 270
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
275 280 285
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
290 295 300
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
305 310 315 320
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
325 330 335
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
340 345 350
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
370 375 380
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
385 390 395 400
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
405 410 415
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
420 425 430
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
435 440 445
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
450 455 460
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
465 470 475 480
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
485 490 495
Gly Lys
<210> 17
<211> 975
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ACE2-Fc氨基酸序列
<400> 17
Met Ser Ser Ser Ser Trp Leu Leu Leu Ser Leu Val Ala Val Thr Ala
1 5 10 15
Ala Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe
20 25 30
Asn His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp
35 40 45
Asn Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn
50 55 60
Ala Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala
65 70 75 80
Gln Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln
85 90 95
Leu Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys
100 105 110
Ser Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser
115 120 125
Thr Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu
130 135 140
Glu Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu
145 150 155 160
Arg Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu
165 170 175
Arg Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg
180 185 190
Ala Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu
195 200 205
Val Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu
210 215 220
Asp Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu
225 230 235 240
His Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile
245 250 255
Ser Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly
260 265 270
Arg Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys
275 280 285
Pro Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala
290 295 300
Gln Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu
305 310 315 320
Pro Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro
325 330 335
Gly Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp
355 360 365
Phe Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala
370 375 380
Tyr Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe
385 390 395 400
His Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys
405 410 415
His Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn
420 425 430
Glu Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly
435 440 445
Thr Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe
450 455 460
Lys Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met
465 470 475 480
Lys Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe
500 505 510
Ile Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala
515 520 525
Leu Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile
530 535 540
Ser Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu
545 550 555 560
Gly Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala
565 570 575
Lys Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe
580 585 590
Thr Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr
595 600 605
Asp Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu
610 615 620
Lys Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met
625 630 635 640
Tyr Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu
645 650 655
Lys Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val
660 665 670
Ala Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro
675 680 685
Lys Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile
690 695 700
Arg Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn
705 710 715 720
Ser Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln
725 730 735
Pro Pro Val Ser Ala Ala Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
740 745 750
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
755 760 765
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
770 775 780
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
785 790 795 800
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
805 810 815
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
820 825 830
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
835 840 845
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
850 855 860
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
865 870 875 880
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
885 890 895
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
900 905 910
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
915 920 925
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
930 935 940
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
945 950 955 960
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
965 970 975
<210> 18
<211> 2928
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码ACE2-Fc的核酸分子
<400> 18
atgtcaagct cttcctggct ccttctcagc cttgttgctg taactgctgc tcagtccacc 60
attgaggaac aggccaagac atttttggac aagtttaacc acgaagccga agacctgttc 120
tatcaaagtt cacttgcttc ttggaattat aacaccaata ttactgaaga gaatgtccaa 180
aacatgaata atgctgggga caaatggtct gcctttttaa aggaacagtc cacacttgcc 240
caaatgtatc cactacaaga aattcagaat ctcacagtca agcttcagct gcaggctctt 300
cagcaaaatg ggtcttcagt gctctcagaa gacaagagca aacggttgaa cacaattcta 360
aatacaatga gcaccatcta cagtactgga aaagtttgta acccagataa tccacaagaa 420
tgcttattac ttgaaccagg tttgaatgaa ataatggcaa acagtttaga ctacaatgag 480
aggctctggg cttgggaaag ctggagatct gaggtcggca agcagctgag gccattatat 540
gaagagtatg tggtcttgaa aaatgagatg gcaagagcaa atcattatga ggactatggg 600
gattattgga gaggagacta tgaagtaaat ggggtagatg gctatgacta cagccgcggc 660
cagttgattg aagatgtgga acataccttt gaagagatta aaccattata tgaacatctt 720
catgcctatg tgagggcaaa gttgatgaat gcctatcctt cctatatcag tccaattgga 780
tgcctccctg ctcatttgct tggtgatatg tggggtagat tttggacaaa tctgtactct 840
ttgacagttc cctttggaca gaaaccaaac atagatgtta ctgatgcaat ggtggaccag 900
gcctgggatg cacagagaat attcaaggag gccgagaagt tctttgtatc tgttggtctt 960
cctaatatga ctcaaggatt ctgggaaaat tccatgctaa cggacccagg aaatgttcag 1020
aaagcagtct gccatcccac agcttgggac ctggggaagg gcgacttcag gatccttatg 1080
tgcacaaagg tgacaatgga cgacttcctg acagctcatc atgagatggg gcatatccag 1140
tatgatatgg catatgctgc acaacctttt ctgctaagaa atggagctaa tgaaggattc 1200
catgaagctg ttggggaaat catgtcactt tctgcagcca cacctaagca tttaaaatcc 1260
attggtcttc tgtcacccga ttttcaagaa gacaatgaaa cagaaataaa cttcctgctc 1320
aaacaagcac tcacgattgt tgggactctg ccatttactt acatgttaga gaagtggagg 1380
tggatggtct ttaaagggga aattcccaaa gaccagtgga tgaaaaagtg gtgggagatg 1440
aagcgagaga tagttggggt ggtggaacct gtgccccatg atgaaacata ctgtgacccc 1500
gcatctctgt tccatgtttc taatgattac tcattcattc gatattacac aaggaccctt 1560
taccaattcc agtttcaaga agcactttgt caagcagcta aacatgaagg ccctctgcac 1620
aaatgtgaca tctcaaactc tacagaagct ggacagaaac tgttcaatat gctgaggctt 1680
ggaaaatcag aaccctggac cctagcattg gaaaatgttg taggagcaaa gaacatgaat 1740
gtaaggccac tgctcaacta ctttgagccc ttatttacct ggctgaaaga ccagaacaag 1800
aattcttttg tgggatggag taccgactgg agtccatatg cagaccaaag catcaaagtg 1860
aggataagcc taaaatcagc tcttggagat aaagcatatg aatggaacga caatgaaatg 1920
tacctgttcc gatcatctgt tgcatatgct atgaggcagt actttttaaa agtaaaaaat 1980
cagatgattc tttttgggga ggaggatgtg cgagtggcta atttgaaacc aagaatctcc 2040
tttaatttct ttgtcactgc acctaaaaat gtgtctgata tcattcctag aactgaagtt 2100
gaaaaggcca tcaggatgtc ccggagccgt atcaatgatg ctttccgtct gaatgacaac 2160
agcctagagt ttctggggat acagccaaca cttggacctc ctaaccagcc ccctgtttcc 2220
gcggccgccg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 2280
gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 2340
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 2400
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 2460
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 2520
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 2580
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 2640
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 2700
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 2760
accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg 2820
gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 2880
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaatga 2928
<210> 19
<211> 3822
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码SARS-CoV-2的S蛋白的核酸分子
<400> 19
atgttcgtgt ttctggtgct gctgcctctg gtgagctccc agtgcgtgaa cctgaccaca 60
cggacacagc tgccccctgc ctacaccaac agcttcacaa ggggcgtgta ctaccccgac 120
aaggtgttta gatctagcgt gctgcactcc acacaggatc tgtttctgcc tttcttttct 180
aacgtgacct ggttccacgc tatccacgtg tccggcacca acggaacaaa gaggttcgac 240
aacccagtgc tgccctttaa cgatggcgtg tacttcgcct ccaccgagaa gtctaacatc 300
atcagaggct ggatctttgg aaccacactg gacagcaaga cacagtccct gctgatcgtg 360
aacaacgcca ccaacgtggt catcaaggtg tgcgagttcc agttttgtaa cgatccattc 420
ctgggcgtgt actaccacaa gaacaacaag tcttggatgg agagcgagtt tcgcgtgtac 480
tcctctgcca acaactgtac atttgagtac gtgtcccagc ccttcctgat ggacctggag 540
ggcaagcagg gaaacttcaa gaacctgcgg gagttcgtgt ttaagaacat cgatggctac 600
tttaagatct actccaagca caccccaatc aacctggtgc gcgacctgcc acagggcttc 660
tctgccctgg agccactggt ggatctgccc atcggaatca acatcaccag gtttcagaca 720
ctgctggccc tgcacagaag ctacctgaca ccaggcgaca gctcctctgg atggaccgct 780
ggagctgctg cctactacgt gggctacctg cagccccgga ccttcctgct gaagtacaac 840
gagaacggaa ccatcacaga cgctgtggat tgcgccctgg accccctgtc tgagaccaag 900
tgtacactga agagctttac cgtggagaag ggcatctacc agacaagcaa cttccgggtg 960
cagcctaccg agtccatcgt gcgctttccc aacatcacaa acctgtgccc ttttggagag 1020
gtgttcaacg ctacccgctt cgcctccgtg tacgcttgga accggaagcg catctccaac 1080
tgcgtggccg actactctgt gctgtacaac agcgccagct tcagcacctt caagtgctac 1140
ggcgtgagcc caacaaagct gaacgacctg tgctttacca acgtgtacgc tgattccttc 1200
gtgatcaggg gagacgaggt gcgccagatc gctcccggcc agacaggaaa gatcgctgac 1260
tacaactaca agctgcctga cgatttcacc ggctgcgtga tcgcctggaa ctctaacaac 1320
ctggatagca aagtgggcgg aaactacaac tacctgtaca ggctgtttag aaagtctaac 1380
ctgaagccat tcgagcggga catctccaca gagatctacc aggctggctc taccccatgc 1440
aacggagtgg agggcttcaa ctgttacttc cctctgcaga gctacggatt ccagccaaca 1500
aacggcgtgg gataccagcc ctaccgcgtg gtggtgctgt cttttgagct gctgcacgct 1560
cctgctacag tgtgcggacc aaagaagagc accaacctgg tgaagaacaa gtgcgtgaac 1620
ttcaacttta acggactgac cggcacagga gtgctgaccg agtctaacaa gaagttcctg 1680
ccttttcagc agttcggccg ggacatcgcc gataccacag acgctgtgcg cgaccctcag 1740
accctggaga tcctggatat cacaccatgc tccttcggcg gagtgtctgt gatcacacca 1800
ggaaccaaca caagcaacca ggtggccgtg ctgtaccagg acgtgaactg taccgaggtg 1860
cccgtggcta tccacgccga tcagctgacc cctacatgga gggtgtactc taccggcagc 1920
aacgtgttcc agacaagagc cggctgtctg atcggagctg agcacgtgaa caacagctac 1980
gagtgcgaca tccctatcgg cgccggaatc tgtgcttcct accagaccca gacaaactcc 2040
ccaaggagag ccaggtctgt ggctagccag tccatcatcg cctacaccat gagcctgggc 2100
gccgagaact ccgtggctta ctccaacaac tctatcgcta tccctaccaa cttcacaatc 2160
tccgtgacca cagagatcct gccagtgagc atgaccaaga catccgtgga ctgcacaatg 2220
tacatctgtg gagattccac cgagtgctct aacctgctgc tgcagtacgg ctctttctgt 2280
acccagctga acagagccct gacaggaatc gctgtggagc aggacaagaa cacacaggag 2340
gtgttcgccc aggtgaagca gatctacaag accccaccca tcaaggactt tggcggattc 2400
aactttagcc agatcctgcc cgatcctagc aagccatcca agaggtcttt tatcgaggac 2460
ctgctgttca acaaggtgac cctggctgat gccggcttca tcaagcagta cggcgattgc 2520
ctgggagaca tcgctgccag agacctgatc tgtgcccaga agtttaacgg actgaccgtg 2580
ctgcctccac tgctgacaga tgagatgatc gctcagtaca catctgctct gctggccggc 2640
accatcacaa gcggatggac cttcggcgct ggagctgccc tgcagatccc ctttgccatg 2700
cagatggctt acagattcaa cggcatcgga gtgacccaga acgtgctgta cgagaaccag 2760
aagctgatcg ccaaccagtt taactccgct atcggcaaga tccaggactc tctgagctcc 2820
acagctagcg ccctgggaaa gctgcaggat gtggtgaacc agaacgctca ggccctgaac 2880
accctggtga agcagctgtc tagcaacttc ggcgccatct cctctgtgct gaacgatatc 2940
ctgagcaggc tggacaaggt ggaggctgag gtgcagatcg acaggctgat cacaggaaga 3000
ctgcagtccc tgcagaccta cgtgacacag cagctgatca gggctgctga gatcagggct 3060
tctgccaacc tggctgccac caagatgagc gagtgcgtgc tgggccagtc caagagagtg 3120
gacttttgtg gcaagggata ccacctgatg agcttcccac agtccgcccc tcacggagtg 3180
gtgtttctgc acgtgaccta cgtgccagct caggagaaga acttcaccac agctcccgcc 3240
atctgccacg atggcaaggc ccactttcct cgggagggcg tgttcgtgag caacggaacc 3300
cactggtttg tgacacagcg caacttctac gagccacaga tcatcaccac agacaacaca 3360
ttcgtgtccg gcaactgtga cgtggtcatc ggaatcgtga acaacaccgt gtacgatcct 3420
ctgcagccag agctggactc ttttaaggag gagctggata agtacttcaa gaaccacacc 3480
agccctgacg tggatctggg cgacatctct ggaatcaacg ccagcgtggt gaacatccag 3540
aaggagatcg accggctgaa cgaggtggct aagaacctga acgagtccct gatcgatctg 3600
caggagctgg gcaagtacga gcagtacatc aagtggccct ggtacatctg gctgggcttc 3660
atcgccggac tgatcgctat cgtgatggtg accatcatgc tgtgctgtat gacaagctgc 3720
tgttcctgcc tgaagggctg ctgttcttgt ggaagctgct gtaagtttga cgaggacgat 3780
agcgagcctg tgctgaaggg cgtgaagctg cactacacct ga 3822
<210> 20
<211> 2994
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码ACE2-BITE的核酸分子
<400> 20
atgtcaagct cttcctggct ccttctcagc cttgttgctg taactgctgc tcagtccacc 60
attgaggaac aggccaagac atttttggac aagtttaacc acgaagccga agacctgttc 120
tatcaaagtt cacttgcttc ttggaattat aacaccaata ttactgaaga gaatgtccaa 180
aacatgaata atgctgggga caaatggtct gcctttttaa aggaacagtc cacacttgcc 240
caaatgtatc cactacaaga aattcagaat ctcacagtca agcttcagct gcaggctctt 300
cagcaaaatg ggtcttcagt gctctcagaa gacaagagca aacggttgaa cacaattcta 360
aatacaatga gcaccatcta cagtactgga aaagtttgta acccagataa tccacaagaa 420
tgcttattac ttgaaccagg tttgaatgaa ataatggcaa acagtttaga ctacaatgag 480
aggctctggg cttgggaaag ctggagatct gaggtcggca agcagctgag gccattatat 540
gaagagtatg tggtcttgaa aaatgagatg gcaagagcaa atcattatga ggactatggg 600
gattattgga gaggagacta tgaagtaaat ggggtagatg gctatgacta cagccgcggc 660
cagttgattg aagatgtgga acataccttt gaagagatta aaccattata tgaacatctt 720
catgcctatg tgagggcaaa gttgatgaat gcctatcctt cctatatcag tccaattgga 780
tgcctccctg ctcatttgct tggtgatatg tggggtagat tttggacaaa tctgtactct 840
ttgacagttc cctttggaca gaaaccaaac atagatgtta ctgatgcaat ggtggaccag 900
gcctgggatg cacagagaat attcaaggag gccgagaagt tctttgtatc tgttggtctt 960
cctaatatga ctcaaggatt ctgggaaaat tccatgctaa cggacccagg aaatgttcag 1020
aaagcagtct gccatcccac agcttgggac ctggggaagg gcgacttcag gatccttatg 1080
tgcacaaagg tgacaatgga cgacttcctg acagctcatc atgagatggg gcatatccag 1140
tatgatatgg catatgctgc acaacctttt ctgctaagaa atggagctaa tgaaggattc 1200
catgaagctg ttggggaaat catgtcactt tctgcagcca cacctaagca tttaaaatcc 1260
attggtcttc tgtcacccga ttttcaagaa gacaatgaaa cagaaataaa cttcctgctc 1320
aaacaagcac tcacgattgt tgggactctg ccatttactt acatgttaga gaagtggagg 1380
tggatggtct ttaaagggga aattcccaaa gaccagtgga tgaaaaagtg gtgggagatg 1440
aagcgagaga tagttggggt ggtggaacct gtgccccatg atgaaacata ctgtgacccc 1500
gcatctctgt tccatgtttc taatgattac tcattcattc gatattacac aaggaccctt 1560
taccaattcc agtttcaaga agcactttgt caagcagcta aacatgaagg ccctctgcac 1620
aaatgtgaca tctcaaactc tacagaagct ggacagaaac tgttcaatat gctgaggctt 1680
ggaaaatcag aaccctggac cctagcattg gaaaatgttg taggagcaaa gaacatgaat 1740
gtaaggccac tgctcaacta ctttgagccc ttatttacct ggctgaaaga ccagaacaag 1800
aattcttttg tgggatggag taccgactgg agtccatatg cagaccaaag catcaaagtg 1860
aggataagcc taaaatcagc tcttggagat aaagcatatg aatggaacga caatgaaatg 1920
tacctgttcc gatcatctgt tgcatatgct atgaggcagt actttttaaa agtaaaaaat 1980
cagatgattc tttttgggga ggaggatgtg cgagtggcta atttgaaacc aagaatctcc 2040
tttaatttct ttgtcactgc acctaaaaat gtgtctgata tcattcctag aactgaagtt 2100
gaaaaggcca tcaggatgtc ccggagccgt atcaatgatg ctttccgtct gaatgacaac 2160
agcctagagt ttctggggat acagccaaca cttggacctc ctaaccagcc ccctgtttcc 2220
gcggccgcag gaggtggtgg ttccgacatc aaactgcagc agagcggagc tgaactggcc 2280
agacccggcg ctagcgtgaa gatgtcctgt aagaccagcg gctacacctt caccaggtac 2340
acaatgcact gggtgaagca gaggcccgga cagggactgg agtggatcgg ctatatcaac 2400
cccagcaggg gctacaccaa ctacaatcag aagttcaagg acaaggccac cctgaccacc 2460
gacaagagct ccagcaccgc ctacatgcag ctcagcagcc tgacatccga agatagcgcc 2520
gtgtactact gcgccagata ctacgacgac cactactgcc tggactactg gggccagggc 2580
acaacactca ccgtgagcag cgtggaaggc ggaagcggag gaagcggagg ctccggaggc 2640
agcggcggag tggatgacat ccagctgacc cagagccccg ccattatgtc cgccagccct 2700
ggcgagaagg tgaccatgac ctgcagagcc agcagcagcg tgagctacat gaactggtat 2760
cagcagaaga gcggcaccag ccccaagagg tggatctacg acaccagcaa ggtggcctcc 2820
ggcgtgccct acaggttttc cggcagcggc agcggaacaa gctacagcct gaccatctcc 2880
tccatggagg ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agtggagctc caaccccctg 2940
accttcggag ctggcaccaa gctggaactg aagcatcatc accatcatca ttag 2994
<210> 21
<211> 2901
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码ACE2 BBZ的核酸分子
<400> 21
atgtcaagct cttcctggct ccttctcagc cttgttgctg taactgctgc tcagtccacc 60
attgaggaac aggccaagac atttttggac aagtttaacc acgaagccga agacctgttc 120
tatcaaagtt cacttgcttc ttggaattat aacaccaata ttactgaaga gaatgtccaa 180
aacatgaata atgctgggga caaatggtct gcctttttaa aggaacagtc cacacttgcc 240
caaatgtatc cactacaaga aattcagaat ctcacagtca agcttcagct gcaggctctt 300
cagcaaaatg ggtcttcagt gctctcagaa gacaagagca aacggttgaa cacaattcta 360
aatacaatga gcaccatcta cagtactgga aaagtttgta acccagataa tccacaagaa 420
tgcttattac ttgaaccagg tttgaatgaa ataatggcaa acagtttaga ctacaatgag 480
aggctctggg cttgggaaag ctggagatct gaggtcggca agcagctgag gccattatat 540
gaagagtatg tggtcttgaa aaatgagatg gcaagagcaa atcattatga ggactatggg 600
gattattgga gaggagacta tgaagtaaat ggggtagatg gctatgacta cagccgcggc 660
cagttgattg aagatgtgga acataccttt gaagagatta aaccattata tgaacatctt 720
catgcctatg tgagggcaaa gttgatgaat gcctatcctt cctatatcag tccaattgga 780
tgcctccctg ctcatttgct tggtgatatg tggggtagat tttggacaaa tctgtactct 840
ttgacagttc cctttggaca gaaaccaaac atagatgtta ctgatgcaat ggtggaccag 900
gcctgggatg cacagagaat attcaaggag gccgagaagt tctttgtatc tgttggtctt 960
cctaatatga ctcaaggatt ctgggaaaat tccatgctaa cggacccagg aaatgttcag 1020
aaagcagtct gccatcccac agcttgggac ctggggaagg gcgacttcag gatccttatg 1080
tgcacaaagg tgacaatgga cgacttcctg acagctcatc atgagatggg gcatatccag 1140
tatgatatgg catatgctgc acaacctttt ctgctaagaa atggagctaa tgaaggattc 1200
catgaagctg ttggggaaat catgtcactt tctgcagcca cacctaagca tttaaaatcc 1260
attggtcttc tgtcacccga ttttcaagaa gacaatgaaa cagaaataaa cttcctgctc 1320
aaacaagcac tcacgattgt tgggactctg ccatttactt acatgttaga gaagtggagg 1380
tggatggtct ttaaagggga aattcccaaa gaccagtgga tgaaaaagtg gtgggagatg 1440
aagcgagaga tagttggggt ggtggaacct gtgccccatg atgaaacata ctgtgacccc 1500
gcatctctgt tccatgtttc taatgattac tcattcattc gatattacac aaggaccctt 1560
taccaattcc agtttcaaga agcactttgt caagcagcta aacatgaagg ccctctgcac 1620
aaatgtgaca tctcaaactc tacagaagct ggacagaaac tgttcaatat gctgaggctt 1680
ggaaaatcag aaccctggac cctagcattg gaaaatgttg taggagcaaa gaacatgaat 1740
gtaaggccac tgctcaacta ctttgagccc ttatttacct ggctgaaaga ccagaacaag 1800
aattcttttg tgggatggag taccgactgg agtccatatg cagaccaaag catcaaagtg 1860
aggataagcc taaaatcagc tcttggagat aaagcatatg aatggaacga caatgaaatg 1920
tacctgttcc gatcatctgt tgcatatgct atgaggcagt actttttaaa agtaaaaaat 1980
cagatgattc tttttgggga ggaggatgtg cgagtggcta atttgaaacc aagaatctcc 2040
tttaatttct ttgtcactgc acctaaaaat gtgtctgata tcattcctag aactgaagtt 2100
gaaaaggcca tcaggatgtc ccggagccgt atcaatgatg ctttccgtct gaatgacaac 2160
agcctagagt ttctggggat acagccaaca cttggacctc ctaaccagcc ccctgtttcc 2220
gcggccgcta caaccacccc cgctcccaga cctcctacac ccgctcccac cattgccagc 2280
cagcctctct ctttaagacc cgaggcttgt aggcccgctg ctggaggagc cgtgcacaca 2340
aggggactgg actttgcttg tgatatctat atctgggccc ctctggctgg aacttgtgga 2400
gtcctcttat tatctttagt gatcacttta tactgtaaga ggggtcgtaa gaagttatta 2460
tacatcttca agcagccctt catgaggccc gtccaaacca cccaagaaga ggacggatgt 2520
agctgtaggt ttcccgagga ggaggaggga ggctgcgaat tacgtgtcaa gttctccaga 2580
agcgccgatg cccccgctta ccaacaaggt cagaaccagc tgtacaatga gctgaatctg 2640
ggcagaagag aagagtacga cgtgctggat aagaggaggg gtcgtgaccc cgaaatggga 2700
ggcaagccca gaagaaaaaa cccccaagaa ggactctaca acgagctgca aaaggataag 2760
atggctgagg cctattccga gattggcatg aagggcgaga gaaggagagg caagggccac 2820
gacggtttat atcaaggtct ctccaccgcc accaaggaca catacgatgc tctgcacatg 2880
caagctctgc cccccagatg a 2901
<210> 22
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2A
<400> 22
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 23
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> T2A
<400> 23
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 24
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E2A
<400> 24
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 25
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> F2A
<400> 25
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 26
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> His标签
<400> 26
His His His His His His
1 5
<210> 27
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列2
<400> 27
Ala Ala Ala
1
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列3
<400> 28
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 29
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列4
<400> 29
Gly Ser
1
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列5
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列6
<400> 31
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 32
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列7
<400> 32
Gly Ser Gly

Claims (18)

1.融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和靶向部分，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述靶向部分能够特异性结合活化T细胞的因子。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的融合蛋白，其中所述活化T细胞的因子选自下组：CD3和CD28。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白，其中所述靶向部分包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
6.融合蛋白，其包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段和嵌合抗原受体(CAR)功能结构，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述嵌合抗原受体功能结构包括跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段与所述嵌合抗原受体功能结构直接或间接连接。
8.根据权利要求6-7中任一项所述的融合蛋白，其中所述S蛋白的结合蛋白或其功能性片段包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，和/或，所述嵌合抗原受体功能结构包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
10.根据权利要求6-9中任一项所述的融合蛋白，其还包括细胞因子，所述细胞因子包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求6-10中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
12.一种或多种核酸分子，其编码权利要求1-11中任一项所述的融合蛋白。
13.载体，其包含权利要求12所述的核酸分子。
14.细胞，其表达权利要求1-11中任一项所述的融合蛋白，和/或包含权利要求12所述的核酸分子，和/或包含权利要求13所述的载体。
15.根据权利要求14所述的细胞，其中所述细胞选自下组：间充质干细胞和T细胞。
16.权利要求1-11中任一项所述的融合蛋白在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病，其中所述冠状病毒包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
17.药物产品，其包括包含S蛋白的结合蛋白或其功能性片段的融合蛋白，和细胞因子或其融合蛋白，其中所述S蛋白包括冠状病毒的S蛋白，所述细胞因子或其融合蛋白包括促进型细胞因子或其融合蛋白，和/或，抑制型细胞因子或其融合蛋白，其中所述促进型细胞因子包括IL-22，和/或，所述抑制型细胞因子包括IL-6。
18.根据权利要求17所述的药物产品在制备治疗预防、缓解或治疗冠状病毒所引起的疾病的药物中的用途，其中所述病毒包括SARS-CoV和SARS-CoV-2。
CN202010324085.4A 2020-04-22 2020-04-22 融合蛋白分子及其制备方法和用途 Pending CN113527510A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010324085.4A CN113527510A (zh) 2020-04-22 2020-04-22 融合蛋白分子及其制备方法和用途
PCT/CN2021/088598 WO2021213421A1 (zh) 2020-04-22 2021-04-21 融合蛋白分子及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010324085.4A CN113527510A (zh) 2020-04-22 2020-04-22 融合蛋白分子及其制备方法和用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113527510A true CN113527510A (zh) 2021-10-22

Family

ID=78094137

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010324085.4A Pending CN113527510A (zh) 2020-04-22 2020-04-22 融合蛋白分子及其制备方法和用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN113527510A (zh)
WO (1) WO2021213421A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114591988A (zh) * 2022-03-30 2022-06-07 北京贝来生物科技有限公司 一种激活肿瘤免疫的基因修饰干细胞制备方法
CN114606219A (zh) * 2022-04-01 2022-06-10 北京大学 一种冠状病毒中和效应蛋白及其应用
CN114606218A (zh) * 2022-04-01 2022-06-10 北京大学 冠状病毒中和效应蛋白及其应用
CN115521928A (zh) * 2022-05-20 2022-12-27 中山大学·深圳 Ace2功能结构域肽段及其在制备预防和/或治疗新型冠状病毒药物中的应用
CN116023511A (zh) * 2023-02-03 2023-04-28 上海易安飞玛生物技术有限公司 一种融合蛋白及其在制备SARS-CoV-2疫苗中的应用
CN116059348A (zh) * 2022-09-16 2023-05-05 四川大学华西医院 基于nkg2d的细胞接合器分子在清除衰老细胞中的应用
WO2023144625A3 (en) * 2022-01-27 2023-09-21 The Chinese University Of Hong Kong Enhanced hace2-based neutralizing agents against sars-cov-2 infection

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020232247A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
US12006366B2 (en) 2020-06-11 2024-06-11 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
US20240139296A1 (en) 2021-03-03 2024-05-02 Formycon Ag Formulations of ace2 fc fusion proteins
EP4331571A1 (en) 2022-09-02 2024-03-06 Formycon AG Formulations of ace2-igm fusion proteins

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023144625A3 (en) * 2022-01-27 2023-09-21 The Chinese University Of Hong Kong Enhanced hace2-based neutralizing agents against sars-cov-2 infection
CN114591988A (zh) * 2022-03-30 2022-06-07 北京贝来生物科技有限公司 一种激活肿瘤免疫的基因修饰干细胞制备方法
CN114606219A (zh) * 2022-04-01 2022-06-10 北京大学 一种冠状病毒中和效应蛋白及其应用
CN114606218A (zh) * 2022-04-01 2022-06-10 北京大学 冠状病毒中和效应蛋白及其应用
CN114606218B (zh) * 2022-04-01 2023-10-27 北京大学 冠状病毒中和效应蛋白及其应用
CN114606219B (zh) * 2022-04-01 2023-10-31 北京大学 一种冠状病毒中和效应蛋白及其应用
CN115521928A (zh) * 2022-05-20 2022-12-27 中山大学·深圳 Ace2功能结构域肽段及其在制备预防和/或治疗新型冠状病毒药物中的应用
CN116059348A (zh) * 2022-09-16 2023-05-05 四川大学华西医院 基于nkg2d的细胞接合器分子在清除衰老细胞中的应用
WO2024056097A1 (zh) * 2022-09-16 2024-03-21 四川大学华西医院 基于nkg2d的细胞接合器分子在清除衰老细胞中的应用
CN116023511A (zh) * 2023-02-03 2023-04-28 上海易安飞玛生物技术有限公司 一种融合蛋白及其在制备SARS-CoV-2疫苗中的应用
CN116023511B (zh) * 2023-02-03 2024-04-09 北京强本生物技术有限公司 一种融合蛋白及其在制备SARS-CoV-2疫苗中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021213421A1 (zh) 2021-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113527510A (zh) 融合蛋白分子及其制备方法和用途
WO2022262142A1 (zh) 一种产生广谱交叉中和活性的重组新型冠状病毒rbd三聚体蛋白疫苗、其制备方法和应用
CN111217918B (zh) 一种基于2,4-二氧四氢喋啶合酶的新型冠状病毒s蛋白双区域亚单位纳米疫苗
CN113173995B (zh) 一种结合冠状病毒的双特异性抗体
CN108966652A (zh) 含有三聚体共刺激性tnf家族配体的抗原结合分子
CN108264567A (zh) 一种识别cd19阳性肿瘤的嵌合抗原受体及细胞
WO2023138334A1 (zh) 一种重组新型冠状病毒蛋白疫苗、其制备方法和应用
US20160031991A1 (en) Targeting vaccines for veterinary use
CN113461812A (zh) 人源化新冠病毒中和性抗体nCoV-00D及其应用
CA3173064A1 (en) Soluble ace2 and fusion protein, and applications thereof
KR20220058585A (ko) 치료용 융합 단백질
WO2023051701A1 (zh) 抗SARS-CoV-2感染的mRNA、蛋白以及抗SARS-CoV-2感染的疫苗
CN112587660A (zh) 塞尼卡谷病毒3d蛋白作为免疫诱导剂或者佐剂的应用
WO2023138333A1 (zh) 一种重组新型冠状病毒蛋白疫苗、其制备方法和应用
US6395875B1 (en) Recombinant soluble adenovirus receptor
CN110964118A (zh) 一种双特异性融合抗体及其在肿瘤免疫治疗中的应用
JP2007527695A (ja) グリコシルホスファチジルイノシトールを含有するポリペプチド
CN114591988B (zh) 一种激活肿瘤免疫的基因修饰干细胞制备方法
CN114630909B (zh) 环状rna、包含环状rna的疫苗及用于检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒
KR20150002588A (ko) 인터페론 및 면역글로불린 fc 섹션 융합 단백질
CN114292337B (zh) 一种可溶性nk-car融合蛋白及制备方法和在介导免疫细胞靶向杀肿瘤细胞药物中应用
US20240067706A1 (en) Fully human broad-spectrum neutralizing antibody 76e1 against coronavirus, and use thereof
US20230365640A1 (en) Clec2 fusion protein and uses thereof
WO2024140767A1 (zh) 用于预防或治疗hpv感染相关疾病的多核苷酸分子
KR101193940B1 (ko) 레서스 원숭이 ｃｔｌａ-4 융합 이뮤노글로불린

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination