CN113521264A - 一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用。所述鸽球虫病活疫苗包括拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫。本发明通过复合拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫得到一种用于免疫鸽球虫病的疫苗，本发明所述疫苗易于生产、安全性高、效力优、免疫持续期长、对动物产品和环境无污染，可有效预防鸽球虫病和减少抗球虫药物的使用，具备良好的应用潜力。

Description

一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

随着经济水平的提升，人们的食品需求正逐步趋向于营养导向。鸽产品包括鸽肉与鸽蛋一直是高端营养品的代表。鸽产业发展迅速，是继鸡、鸭、鹅的第四大家禽产业，是实施乡村振兴的重要举措。但是目前许多因素如疫病是制约鸽产业发展的主要因素。在无抗养殖的大背景下，疫苗是动物疫病防控的主力。鸽球虫病是常见的、严重危害鸽健康、制约养殖效益的寄生虫病。鸽球虫病感染或与其他疫病共同感染常导致鸽大规模的死亡；慢性和亚临床感染则导致生产性能下降、经济效益降低。鸽球虫感染是鸽体重变轻的最主要的因素之一，对肉鸽和信鸽均有重要影响。因此，急需研制高效安全的鸽球虫病疫苗。

与鸡球虫相比，鸽球虫的研究报道较少。据文献报道，鸽球虫病的病原为艾美耳属8种球虫，寄生于肠道的不同部位不同虫种的致病性和流行率不同，对养鸽业的危害不同。鸽球虫病疫苗的研制一般要实现两个主要目标：一是免疫原性强，即免疫后能够提供很好的免疫保护；二是安全性高，即自然筛选或利用人工手段选育致病性弱的虫株。基于鸡和火鸡球虫病活疫苗的应用效果，开发针对流行球虫种的活疫苗用于鸽球虫病的预防，能够显著降低抗球虫药物的使用，甚至可以达到不再使用抗球虫药物的目的，进而有效提升食品安全、环境和经济效益；同时球虫病疫苗免疫后可显著降低球虫病与其他疫病混合感染引起的严重临床症状，有利于制定科学合理的鸽疫病防控程序，应用前景十分广阔。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用，通过复合拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫得到一种可以有效免疫鸽球虫病的疫苗。

第一方面，本发明提供一种具有免疫原性的球虫组合，包括：

拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫。

进一步地，所述拉氏艾美耳球虫和所述鸽艾美耳球虫均为免疫原性强、致病性弱的球虫株。

进一步地，所述拉氏艾美耳球虫和所述原鸽艾美耳球虫的数量比为1:(1～10)。

第二方面，本发明提供一种鸽球虫病活疫苗，包括任一项所述球虫组合。

进一步地，所述鸽球虫病活疫苗含有拉氏艾美耳球虫250～350卵囊/羽，原鸽艾美耳球虫400～600卵囊/羽。

进一步地，还包括佐剂，所述佐剂由羧甲基纤维素钠与山梨酸钾组成。

羧甲基纤维素钠与山梨酸钾混合物能够增强本发明提供的球虫疫苗的稳定性及延长保存期限。

第三方面，本发明提供所述鸽球虫病活疫苗的制备方法，包括。

本发明进一步提供所述鸽球虫病活疫苗在防治鸽球虫病或制备防治鸽球虫病的药物中的应用。

本发明具备如下有益效果：

本发明通过组合拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫得到一种鸽球虫病活疫苗，该疫苗对于鸽球虫病具有较好的免疫效力和安全性，免疫后相对增重达到95％左右，攻毒后卵囊减少率在90％左右，攻毒后的相对增重达到98％左右，在防治鸽球虫病的领域具有重要意义。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1拉氏艾美耳球虫的分离、鉴定及致病性和免疫原性

本实施例以拉氏艾美耳球虫的分离、鉴定及致病性和免疫原性评价为例，从北京、山东、广西、上海、天津、河北等地肉鸽、信鸽的粪便中镜检，确认拉氏艾美耳球虫的流行率。粪便中的卵囊孢子化后，经口接种雏鸽，进行卵囊扩增，扩增后的卵囊孢子化后，经形态学鉴定符合拉氏艾美耳球虫的形态学特征的单卵囊接种雏鸽，收获粪便中的卵囊，孢子化后进行形态学鉴定。经鉴定，共成功分离获得10株拉氏艾美耳球虫。经药物敏感性测试，该10株拉氏艾美耳球虫有9株对常用抗球虫药物敏感。9株中以拉氏艾美耳球虫北京株的致病性弱(表1)，同时具备良好的免疫原性(表2)。具有作为疫苗虫株的潜力。

表1.拉氏艾美耳球虫致病性分析

表2.拉氏艾美耳球虫北京株免疫原性分析

实施例2原鸽艾美耳球虫的分离、鉴定及致病性和免疫原性

本实施例以原鸽艾美耳球虫的分离、鉴定及致病性和免疫原性评价为例，从北京、山东、广西、上海、天津、河北等地肉鸽、信鸽的粪便中镜检，确认原鸽艾美耳球虫的流行率。粪便中的卵囊孢子化后，经口接种雏鸽，进行卵囊扩增，扩增后的卵囊孢子化后，经形态学鉴定符合原鸽艾美耳球虫的形态学特征的单卵囊接种雏鸽，收获粪便中的卵囊，孢子化后进行形态学鉴定。经鉴定，共成功分离获得9株原鸽艾美耳球虫。经药物敏感性测试，该9株原鸽艾美耳球虫株对常用抗球虫药物敏感。以原鸽艾美耳球虫山东株的致病性弱(表3)，同时具备良好的免疫原性(表4)。具有作为疫苗虫株的潜力。

表3.原鸽艾美耳球虫致病性分析

表4.原鸽艾美耳球虫山东株免疫原性分析

实施例3基于拉氏艾美耳球虫与原鸽艾美耳球虫开发的鸽球虫病活疫苗的效力与安全性

本实施例以实施例1的免疫原性较高，致病性较弱的拉氏艾美耳球虫北京株和实施例2的免疫原性较高，致病性较弱的原鸽艾美耳球山东株研发鸽球虫病二价活疫苗。以有效抵抗1×10⁵个同种孢子化卵囊的虫株感染的来确定各疫苗虫株的最佳免疫剂量(表5)。根据表5所示的数据，选定的最佳免疫剂量分别是：拉氏艾美耳球虫300/羽、原鸽艾美耳球虫500/羽。

基于单虫株的最佳免疫剂量，进行多方配比，获得混合虫株的合适免疫剂量，并通过如下流程制备得到鸽球虫病活疫苗：

健康雏鸽分别经口接种拉氏艾美耳球虫、原鸽艾美耳球虫→收集粪便中排出的卵囊→在28℃、通氧条件下完成孢子化后进行灭菌等纯化→分别对疫苗虫株进行计数与鉴定→按照既定的比例，进行充分混合→加入羧甲基纤维素钠与山梨酸钾→计数、按照适当比例稀释。

表5拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫的最佳免疫剂量

表6配比后疫苗的安全性和效力

可以看出，两种鸽球虫弱毒虫株按最佳配比免疫后，对大剂量的虫株感染具有良好免疫保护力，免疫后相对增重、攻毒后卵囊减少率以及攻毒后相对增重均达到较优的水平。证明本发明利用疫苗组分配比策略开发的鸽球虫活疫苗能够保证疫苗的高效力与高安全性。

综上所述，本发明利用拉氏艾美耳球虫与原鸽艾美耳球虫通过不同的配比组成的鸽球虫病活疫苗免疫对鸽增重无显著影响，能够有效抵抗高剂量的艾美耳球虫感染，安全性和效力均较高。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种具有免疫原性的球虫组合，其特征在于，包括：

拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫。

2.根据权利要求1所述的球虫组合，其特征在于，所述拉氏艾美耳球虫和所述鸽艾美耳球虫均为免疫原性强、致病性弱的球虫株。

3.根据权利要求1或2所述的球虫组合，其特征在于，所述拉氏艾美耳球虫和所述原鸽艾美耳球虫的数量比为1:(1～10)。

4.权利要求1-3任一项所述的球虫组合在制备用于免疫鸽球虫病的药物中的应用。

5.一种鸽球虫病活疫苗，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述球虫组合。

6.根据权利要求5所述的鸽球虫病活疫苗，其特征在于，含有拉氏艾美耳球虫250～350卵囊/羽，原鸽艾美耳球虫400～600卵囊/羽。

7.根据权利要求5或6所述的鸽球虫病活疫苗，其特征在于，还包括佐剂，所述佐剂由羧甲基纤维素钠与山梨酸钾组成。

8.根据权利要求5-7任一项所述的鸽球虫病活疫苗，其特征在于，所述鸽球虫病活疫苗为活卵囊疫苗。

9.权利要求5-8任一项所述鸽球虫病活疫苗的制备方法，其特征在于，包括：

健康雏鸽分别经口接种拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫，并收集粪便中排出的卵囊；经过孢子化、灭菌、纯化后进行混合。

10.权利要求5-8任一项所述鸽球虫病活疫苗在防治鸽球虫病或制备防治鸽球虫病的药物中的应用。