CN113521187B - 固本益元膏及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中医药技术领域,具体涉及一种固本益元膏及其制备方法和应用。本发明的固本益元膏由以下重量份的原料组成:冬虫夏草0.1‑0.5份、菟丝子10‑15份、当归10‑15份、白芍10‑15份、陈皮3‑7份、麦冬8‑10份、红参8‑10份、肉苁蓉16‑20份、黄芪10‑15份、熟地8‑12份、黄明胶5‑7份。全方共奏益精固本,补肾强基之效,尤其适用于精神不振、腰酸背痛、月经紊乱、病后虚弱等症者。经线虫实验证明,本发明的固本益元膏能显著延缓衰老、延长寿命、增强生殖能力、抗氧化应激能力、促进生长发育。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域,具体涉及一种固本益元膏及其制备方法和应用。
背景技术
中医理论认为,“肾为先天之本,生命之源”,主藏精气,主生殖,主骨,生髓,髓生血,脑为髓海。肾脏为人体生长、发育及生殖之源,肾虚则是导致人体衰老的主要原因之一。女子肾气充盈,则天癸至,生殖功能旺盛。步入老年,肾气衰退,则天癸枯竭,女子胞失却肾精的滋养,逐渐枯萎废用,丧失生殖功能。
由于受到生活节奏快、工作压力大及饮食习惯不健康等因素的影响,现代女性出现肾虚症状的比例越来越高。女人如果肾虚,就会出现一系列的衰老症状,如精神不振、面色无华、眼睑浮肿、失眠、腰酸背痛、月经紊乱、性欲减退、抵抗力差、病后虚弱等,严重影响现代女性的身体健康和生活质量。
膏方是中药复方制剂,在调节机体激素水平、清除机体有害物质、调节机体免疫等方面起着重要作用。现有技术中,公开号CN106616426A的中国专利申请公开了一种男女补肾抗衰老阿胶膏,其由黄明胶、枸杞、黄精、牡蛎、桑椹、益智仁、苏子、人参、阿胶、内金、山药、茯苓、黑芝麻、麦芽糖浆制成,具有补肾抗衰、健脾开胃、平衡气血、美容养颜、温阳固肾之功效。然而其对于女性肾虚症状的调理效果欠佳。
发明内容
根据本发明的第一个方面,提供了一种固本益元组合物,其由以下重量份的原料组成:冬虫夏草0.1-0.5份、菟丝子10-15份、当归10-15份、白芍10-15份、陈皮3-7份、麦冬8-10份、红参8-10份、肉苁蓉16-20份、黄芪10-15份、熟地8-12份、黄明胶5-7份。
方中以冬虫夏草为君药,具有阴阳双补的功效,以肉苁蓉、菟丝子、熟地为臣药,具有滋肾填精,益阳固阴的功效,以当归、白芍、黄芪、红参为佐药,具有补养气血、扶助正气的功效,以陈皮、麦冬为使药,具有理气导滞、养阴生津的功效,在大队滋补药中配伍行气润降之品,使全方补而不滞、温而不燥,共奏益精固本,补肾强基之效,尤其适用于精神不振、腰酸背痛、月经紊乱、病后虚弱等症者。
本发明各原料及其功效具体如下:
冬虫夏草:麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。甘,平。归肺、肾经。补肺益肾,止血化痰。
菟丝子:旋花科植物菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子。甘,温。归肝、肾、脾经。滋补肝肾,固精缩尿。
当归:伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。甘、辛,温。归肝、心、脾经。补血活血,调经止痛,润肠通便。
白芍:毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。苦、酸,微寒。归肝、脾经。平肝止痛,养血调经,敛阴止汗。
陈皮:芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮。苦、辛,温。归肺、脾经。理气健脾,燥湿化痰。优选五年陈皮,随着贮存年份的增加,陈皮挥发油的含量减少,而总黄酮和橙皮苷含量增加,药性更平和,理气健脾效果更优。
麦冬:百合科植物麦冬(沿阶草)Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。甘,微苦,微寒。归心、肺、胃经。养阴生津,润肺清心。
红参:五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的栽培品(习称“圆参”)经蒸制后的干燥根。甘、微苦,温。归脾、肺、心经。大补元气,复脉固脱,益气摄血。
肉苁蓉:列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎。甘、咸,温。归肾、大肠经。补肾阳,益精血,润肠通便。
黄芪:豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。甘,温。归肺、脾经。补气固表,利尿托毒。
熟地:玄参科植物地黄或怀庆地黄的根茎,经加工蒸晒而成。甘,微温。归肝、肾经。滋阴补血,益精填髓。
黄明胶:由牛皮经煎煮,浓缩制成的固体胶。甘、平。滋阴润燥,养血止血。
在一些实施方式中,其由以下重量份的原料组成:冬虫夏草0.3份、菟丝子12份、当归12份、白芍12份、陈皮5份、麦冬9份、红参9份、肉苁蓉18份、黄芪12份、熟地10份、黄明胶6份。
根据本发明的第二个方面,提供了一种固本益元膏,其由上述固本益元组合物和药学上可以接受的辅料组成。
根据本发明的第三个方面,提供了一种固本益元膏的制备方法,包括以下步骤:
(1)将黄明胶加水进行炖化,然后过滤,得到胶液;
(2)将冬虫夏草、菟丝子、当归、白芍、陈皮、麦冬、红参、肉苁蓉、黄芪、熟地按比例配好后,加水进行煎煮,过滤得到煎煮液,然后将煎煮液进行浓缩,得到清膏;
(3)将胶液与清膏混合,并加入辅料,得到混合物;
(4)将步骤(3)得到的混合物进行浓缩,去除水分,得到成品膏滋。
在一些实施方式中,清膏的相对密度为1.0-1.25,粘度为1100-1400mPa·s;成品膏滋的含水量为45-60%。
根据本发明的第四个方面,提供了上述固本益元组合物在制备益精固本,补肾强基的药物中的应用。
根据本发明的第五个方面,提供了上述固本益元组合物在制备治疗精神不振和/或腰酸背痛和/或月经紊乱和/或病后虚弱的药物中的应用。
本发明认为肾主一身之阴阳,具有主宰和调节全身阴阳的作用,其维持机体阴阳动态平衡的功能,是通过肾精实现的,精满气足则神旺,肾精也是肾主生殖的基础,通过经脉肾与胞宫相连,主宰妊娠、月经等生理功能,且腰为肾之府,肾精充足,则腰脊有力。肾精亏虚,精血化生不足出现精神不振、月经紊乱,腰府失于濡养、不荣则痛出现腰酸背痛,肾虚则各脏腑功能失调,阴阳失调、气血不和则病后衰弱。本发明的固本益元膏,其主要功效是益精固本、补肾强基,因此适用于治疗精神不振、腰酸背痛、月经紊乱,对于病后虚弱也具有很好的改善效果。
根据本发明的第六个方面,提供了上述固本益元组合物在制备延缓衰老和/或延长寿命和/或增强生殖能力和/或抗氧化应激能力和/或促进生长发育的药物中的应用。
本发明认为肾虚与衰老密切相关,肾内藏人体的元阴元阳,有资助、促进、协调全身脏腑之阴阳的作用,肾虚则脏腑功能衰退,是导致衰老的主要原因。本方通过中药配伍,于滋补肾阴中温补肾阳,使阴阳相互滋生,生化无穷,以固本强基,保持脏腑功能在相对的健康状态下自然衰老,增加健康寿命,达到延缓衰老的目的。
附图说明
图1是本发明的固本益元膏对线虫平均寿命的影响。
图2是本发明的固本益元膏对线虫寿命的影响。
图3是本发明的固本益元膏对线虫抗氧化应激能力的影响。
图4-5是本发明的固本益元膏对线虫生殖能力的影响。
图6是本发明的固本益元膏对线虫体长的影响。
图7是本发明的固本益元膏对线虫体宽的影响。
图8是本发明的固本益元膏对线虫体型发育的影响。
图9、图10是本发明的固本益元膏对线虫肠道脂褐素的影响。
图11是本发明的固本益元膏对线虫体内ROS水平的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明,但本发明的实施方式不限于此。下列实施例中涉及的物料均可从商业渠道获得。
实施例1
本实施例的固本益元膏,其由以下方法制备得到:
(1)将60g黄明胶加水进行炖化,然后过滤,得到胶液;
(2)将3g冬虫夏草、120g菟丝子、120g当归、120g白芍、50g陈皮、90g麦冬、90g红参、180g肉苁蓉、120g黄芪、100g熟地混合,加10倍重量的水进行煎煮,煮沸后保持微沸1h,过滤得到煎煮液,然后对滤渣再重复煎煮2次,将每次得到的煎煮液混合后进行浓缩,得到清膏;
(3)将胶液与清膏混合,并加入辅料,得到混合物;
(4)将步骤(3)得到的混合物进行浓缩,去除水分,得到成品膏滋。
秀丽隐杆线虫是衰老研究的一种重要模式生物,在基因上有高度保守性,与人类有60%-80%的基因相似度,广泛应用于衰老研究。下面通过线虫模型,研究固本益元膏对线虫寿命、抗氧化应激能力、生殖能力、体型发育、肠道脂褐素以及体内ROS水平的影响,通过以上指标评价固本益元膏延缓线虫衰老的作用。
本发明所用的模式生物为秀丽隐杆线虫野生型N2型(由中山大学附属第一医院神经科实验室提供,购于Caenorhabditis Geneties Center(CGC)),大肠埃希菌Ecoli OP50由中山大学附属第一医院神经科实验室提供。
秀丽隐杆线虫培养:配制线虫基本培养基(nematode growth media,NGM),每个NGM平板加入200μL大肠埃希菌OP50菌液,均匀涂布,培养皿边缘留出约0.5cm为无菌区,涂布后的培养皿于37℃培养箱过夜培养。将L3或L4期秀丽隐杆线虫接种于涂布后的NGM培养基上,将培养基置于20℃恒温培养箱中培养,观察秀丽隐杆线虫的生长情况并定期更换培养基。本研究实验过程中成虫7天之前每日将线虫挑至新板上,均未加5-氟脱氧尿嘧啶(FUDR),避免对线虫产生潜在影响。
称取实施例1制备得到的固本益元膏25g置于50mLEP管中,以双蒸水(ddH2O)溶解并定容至25mL刻度线处,由此将固本益元膏制成浓度为1g/mL的母液,秀丽隐杆线虫正式实验前用Ecoli OP50菌液将母液稀释至相应质量浓度。
一、实验方法
1、寿命实验
同期化的线虫培养至L4期,分别转移到空白对照组(图示中为control组)、烟酰胺(以下简称NAM)阳性对照组和固本益元膏(以下简称GBYY)给药组的NGM平板上,阳性对照组给予NAM(200mM),固本益元膏给药组给予实施例1的固本益元膏(300mg/mL)。每个培养皿随机挑选不少于50条虫子,每天将虫子转移到新的NGM平板上,并记录存活和死亡的线虫条数,直至线虫全部死亡。
2、抗氧化应激能力实验
同步化的线虫培养至L4期,分别转移到空白对照组、阳性对照组和固本益元膏给药组的NGM平板上,阳性对照组给予NAM(200mM),固本益元膏给药组给予实施例1的固本益元膏(300mg/mL),恒温20℃药物干预4天后,分别挑取30条线虫至含有10mL 3mM过氧化氢溶液的3.5cm培养皿中进行氧化应激能力测试,设置三个平行组,标记后于25℃恒温环境内静置4h,显微镜下观察线虫的存活及死亡情况。
3、生殖能力检测
将同步化L4期雌雄同体的线虫分别转移到空白对照组及固本益元膏给药组的NGM平板上,每板1条,每组15条,固本益元膏给药组给予实施例1的固本益元膏(300mg/mL),每隔24h定时分别移入新鲜培养皿中,直至产卵期结束。原培养皿继续在20℃下培养,在虫卵进入产卵期之前对线虫数目进行计数,通过计算,每个培养皿中子代线虫数量的总和就是该线虫的产卵数量。
4、体型发育检测
同步化的线虫培养至L4期,分别转移到空白对照组及固本益元膏给药组的NGM平板上,每板10条,固本益元膏给药组给予实施例1的固本益元膏(300mg/mL),药物干预6天,为防止子代线虫干扰,每24h转移到新的含药培养基里,将相机与显微镜连接,在显微镜下选取合适的视野对线虫进行拍照,每次的拍照条件相同,并使用Uop View软件的长度测量功能测量秀丽线虫的体长和体宽。
5、脂褐素荧光检测
同步化的线虫培养至L4期,分别挑出至空白对照组及固本益元膏给药组的NGM平板上,每组30条,固本益元膏给药组给予实施例1的固本益元膏(300mg/mL),各组分别给药8天(即线虫年龄的10天)后进行脂褐素荧光检测。荧光正置显微镜下观察并拍摄线虫肠道中脂褐素自发荧光,蓝光激发绿色荧光,使用Image J软件定量分析线虫体内的相对荧光强度。
6、体内ROS水平检测
使用ROS敏感探针DCFH-DA来检测线虫体内ROS水平。同步化的线虫培养至L4期,分别挑出至空白对照组及固本益元膏给药组的NGM平板上,每组100条,固本益元膏给药组给予实施例1的固本益元膏(300mg/mL),各组分别给药7天,用M9溶液收集线虫并清洗3次,离心并收集线虫至含有100uL PBST离心管中,线虫在冰上超声仪破碎后加入100uL DCFH-DA溶液(终浓度为50uM),混合均匀后加入96孔板中,37℃孵化半小时后读数,激发波长485nm,发射波长530nm。
二、统计学处理方法
每组实验均重复3次,取平均值进行分析。满足正态性和方差齐性的计量资料用表示,应用GraphPad Prism 8.0及SPSS18.0统计学软件进行整理和分析,统计学方法生存分析采用Kaplan-Meier法和log-rank检验,两组均数比较采取t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析(事后多重比较采用Bonferroni检验),P<0.05,差异有统计学意义,P<0.01,差异显著。
三、实验结果
1、寿命实验
固本益元膏对线虫寿命的影响如表1所示,固本益元膏对线虫平均寿命的影响如图1所示。
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
从表1和图1可以看出,与空白对照组相比,固本益元膏能显著延长线虫平均寿命(F=17.469,P=0.000),延长线虫的最大寿命(P<0.05),延长中位生存期(P>0.05);与阳性对照组相比,固本益元膏组平均寿命及最大寿命无明显差异(P>0.05)。
对线虫存活情况做生存曲线,结果如图2所示,从图2可以看出,与空白对照组相比,阳性对照组、固本益元膏组能使线虫的生存曲线明显右移。
2、抗氧化应激能力实验
抗氧化应激能力实验结果如表2和图3所示。
表2固本益元膏对线虫抗氧化应激能力的影响
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
从表2可以看出,经固本益元膏干预的线虫存活率为89.96%±2.20%,显著高于空白对照组的61.44%±3.42%(F=12.300,P=0.000),差异具有统计学意义;也显著高于阳性对照组的79.23%±6.67%(P>0.05)。从表2和图3可以看出,固本益元膏明显提高线虫的抗氧化应激能力。
3、生殖能力检测
生殖能力检测结果如图4和图5所示。从图4中可以看出,固本益元膏延缓了线虫繁殖高峰期后子代数目的下降,并在繁殖后期显著增加了后代数量。从图5中可以看出,固本益元膏组每条虫产出的总子代数目高于空白对照组但无统计学意义(P>0.05)。线虫在进入繁殖期后第二天和第三天为生殖高峰期,本实验中测得固本益元膏增加了线虫在进入繁殖期后第4天的子代数目,且固本益元膏组与空白对照组相比有显著的统计学差异(t=-5.131,P=0.007),这表明固本益元膏可以延迟线虫繁殖期的生殖能力下降。
4、体型发育检测
体型发育检测结果如表3及图6-8所示。
表3固本益元膏对线虫体型发育的影响
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
从表3及图6-8可以看出,与空白对照组相比,固本益元膏组增长了线虫的体长(t=-3.630,P=0.022),显著增加了线虫的体宽(t=-9.971,P=0.001)。线虫的体长及体宽反映线虫生长发育的情况,固本益元膏能增加线虫的体长及体宽,由此表明固本益元膏能促进线虫生长发育。
5、脂褐素荧光检测
脂褐素荧光检测结果如表4、图9、图10所示。
表4固本益元膏对线虫肠道脂褐素的影响
组别 | 剂量/mg·ml<sup>-1</sup> | N/条 | 相对荧光强度/% | P |
空白对照 | - | 30 | 100 | — |
固本益元膏 | 300 | 30 | 76.90±0.95<sup>**</sup> | 0.000 |
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
从表4、图9、图10可以看出,与空白对照组相比,固本益元膏能显著降低脂褐素荧光强度,且差异具有统计学意义(t=41.906,P=0.000)。线虫肠道脂褐素是经历衰老细胞中损伤积累的重要标志,由此表明,本发明的固本益元膏能显著延缓细胞衰老。
6、体内ROS水平检测
体内ROS水平检测结果如表5、图11所示。
表5固本益元膏对线虫体内ROS水平的影响
组别 | 剂量/mg·ml<sup>-1</sup> | N/条 | 相对水平/% | P |
空白对照 | - | 100 | 100 | — |
固本益元膏 | 300 | 100 | 77.26±1.07<sup>**</sup> | 0.000 |
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
从表5、图11可以看出,与空白对照组相比,固本益元膏能显著降低线虫体内ROS水平,且差异具有统计学意义(t=36.758,P=0.000)。自由基衰老理论认为,ROS的积累引起线虫肠道脂褐素沉积、破坏细胞膜结构、使细胞内修复蛋白变性,从而导致衰老甚至死亡。由此表明,本发明的固本益元膏能显著延缓细胞衰老。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明创造构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.固本益元组合物,其特征在于,其由以下重量份的原料组成:冬虫夏草0.1-0.5份、菟丝子10-15份、当归10-15份、白芍10-15份、陈皮3-7份、麦冬8-10份、红参8-10份、肉苁蓉16-20份、黄芪10-15份、熟地8-12份、黄明胶5-7份。
2.根据权利要求1所述的固本益元组合物,其特征在于,其由以下重量份的原料组成:冬虫夏草0.3份、菟丝子12份、当归12份、白芍12份、陈皮5份、麦冬9份、红参9份、肉苁蓉18份、黄芪12份、熟地10份、黄明胶6份。
3.固本益元膏,其特征在于,其由权利要求1或2的固本益元组合物和药学上可以接受的辅料组成。
4.权利要求3所述的固本益元膏的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将黄明胶加水进行炖化,然后过滤,得到胶液;
(2)将冬虫夏草、菟丝子、当归、白芍、陈皮、麦冬、红参、肉苁蓉、黄芪、熟地按比例配好后,加水进行煎煮,过滤得到煎煮液,然后将煎煮液进行浓缩,得到清膏;
(3)将胶液与清膏混合,并加入辅料,得到混合物;
(4)将步骤(3)得到的混合物进行浓缩,去除水分,得到成品膏滋。
5.根据权利要求4所述的固本益元膏的制备方法,其特征在于,所述成品膏滋的含水量为45-60%。
6.权利要求1或2所述的固本益元组合物在制备延缓衰老和/或延长寿命和/或延迟生殖能力下降和/或增强抗氧化应激能力和/或促进生长发育的药物中的应用。
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