CN113521061A

CN113521061A - 中药木香提取物在制备用于治疗儿科肿瘤药物中的用途

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Publication number: CN113521061A
Application number: CN202110941611.6A
Authority: CN
Inventors: 张茗涵; 张正宽
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2021-08-17
Filing date: 2021-08-17
Publication date: 2021-10-22

Abstract

本发明公开了一系列从中药云木香(Saussurea lappa C.B.Clarke)中分离得到的倍半萜内酯类化合物在制备抗肿瘤药物中的医药用途，具体为式I中所示的化合物在制备治疗儿科肿瘤的药物中的用途。本发明的抗肿瘤增殖实验表明，上述化合物可显著抑制多种儿科肿瘤细胞的生长，具有作为制备新抗肿瘤药物的用途。

Description

中药木香提取物在制备用于治疗儿科肿瘤药物中的用途

技术领域

本发明属于中药领域，特别涉及一种倍半萜内酯类化合物在制备抗儿科肿瘤药物中的应用。

背景技术

儿童恶性肿瘤是一种少见疾病，但发病率、致死率呈逐年上升趋势，已成为儿童第二大常见死亡原因，仅次于意外事故。常见的儿科肿瘤包括神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、骨肉瘤(如尤文肉瘤)、白血病等。儿童恶性肿瘤多发生于间叶组织、胚胎残留组织和生长活跃且代谢旺盛的淋巴造血组织，与成人好发于上皮组织截然不同。与此同时，儿童肿瘤往往是胚胎性肿瘤，肿瘤中包含数个组织成分，并常见不同发育阶段的成分共存，而成人肿瘤主要表现为某一细胞成分的反分化。在基因层面，有研究表明：儿童肿瘤的突变率比成人肿瘤低14倍，且儿童肿瘤往往由单个基因的突变而引起。另外，在成人肿瘤中最常见基因突变是PI3K相关突变基因，占比为31％。相比之下，该基因在儿童肿瘤中的突变率仅3％。上述研究表明，儿童肿瘤与成人肿瘤在发病机制、组织来源、基因驱动等方面存在较大的差异，使得很多成人肿瘤药物无法应用于儿科肿瘤。遗憾的是，目前我国儿童抗肿瘤药物研发仍十分不足，靶向DNA的化疗药物仍是临床首选用药。可选药物的极度缺乏，导致超说明书用药在儿童抗肿瘤治疗过程中不可避免，增加了儿童用药的安全性风险。

云木香(Aucklandia costus)，又名Saussurea lappa，是菊科(Compositae)云木香属植物，原产于克什米尔地区，在我国云南、广西、四川等地有栽培。云木香的根作为中药“木香”，收录在2020版《中国药典》中，具有行气止痛，健脾消食的功效。化学成分研究表明，云木香中富含单萜、倍半萜和三萜类化合物。其中，倍半萜类化合物是云木香中的主要成分。虽然有研究表明，云木香提取物或从云木香中分离的单体化合物对成人肿瘤具有较好的抗肿瘤作用，但尚未有研究对木香中倍半萜化合物的抗儿科肿瘤活性进行研究。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一类倍半萜内酯类化合物或其药学上可接受的盐、对映体或外消旋混合物在抗儿科肿瘤药物中的应用。

在一个方面，提供了所述的倍半萜内酯类化合物，其至少具有如式I中编号1、2、3、4、5、6之一所示的结构

在一些实施方式中，所述的倍半萜内酯类化合物具有如下之一所示的结构

在一些实施方式中，所述化合物具有抗儿科肿瘤的作用，并可用于制备抗儿科肿瘤药物组合物。

在一些实施方式中，所述的儿科肿瘤包括，但不限于髓母细胞瘤、尤文肉瘤、儿童来源的神经上皮瘤、神经母细胞瘤和儿童高级别胶质瘤中的至少一种。

在一些实施方式中，所述的抗儿科肿瘤药物组合物，包括上述式I中任一倍半萜内酯化合物或其药学可接受的盐、前药、水合物、或其混合物的形式，以及药学上可接受的辅料。在一些优选实施方式中，所述药物组合物，其包含一种或多种本文所述的化合物(例如，基本上纯的化合物1或其药学上可接受的盐，例如化合物2，或，例如化合物3)。通常，药物组合物包含治疗有效量的一种或多种本文所述的化合物(例如，基本上纯的化合物1或其药学上可接受的盐，例如化合物2，或，例如化合物3)以及任选的药学上可接受的赋形剂或载体。在一些实施方式中，如本文所述，药物组合物包含基本上纯的化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，药物组合物包含通过本文任何合成方法生产的化合物2或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，药物组合物包含本文所述的基本上纯的化合物2。在一些实施方式中，药物组合物包含晶型和/或无定形形式的化合物2或化合物5。药物组合物可以配制成用于任何给药途径，例如口服给药。

以上所述药物组合物均可为片剂、粉剂、胶囊、口服液、乳剂、膏剂、霜剂、注射剂、混悬剂、酐剂、颗粒剂或气雾剂。上述各剂型的药物组合物均可以按照药学领域的常规方法制备。

还提供了一种用于治疗儿科肿瘤疾患的试剂盒，该试剂盒包含：药物组合物，该药物组合物包含式I中任一所示化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药用盐；以及使用说明书。

在本发明中，以上所有的所述的治疗儿科肿瘤具体体现在：抑制肿瘤细胞的生长。

实验证明，式I中的六种倍半萜内酯类化合物均可抑制多种儿科肿瘤细胞的生长，具有作为制备新型医用抗儿科肿瘤药物的潜在用途。

在一些实施方式中，本文描述的方法也可以与其他疗法，包括另外的活性剂组合使用。例如，本文的方法可以与选自手术程序(例如，常规的抗癌手术疗法)，放射疗法，化学疗法和抗肿瘤免疫疗法中的一种或多种组合使用。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：

目前临床使用的抗儿科肿瘤药物主要是以顺铂等无机金属化合物为代表的化疗药物。本发明拟保护用途的六种化合物均为有机小分子化合物。结构上，它们是一种天然来源的倍半萜内酯类化合物，具有C15骨架和特征性的五元α,β-不饱和内酯片段。上述结构特征与目前临床治疗儿科肿瘤的药物完全不同。

现有临床化疗药物均为广谱细胞毒性化合物，它们作用机理主要是靶向细胞的DNA，进而诱导细胞死亡。这些化疗药物对机体具有较大的毒副作用，且随着化疗药物的使用，针对化疗药物的多药耐药问题也逐渐成为了临床抗肿瘤治疗的一大难题。本发明所涉及结构的化学性质与目前临床治疗儿科肿瘤的药物相比完全不同。基于此类化合物进一步开发成的抗儿科肿瘤药物可避开现有的上市药物专利，为市场提供更多选择。与此同时，它们也有望通过与顺铂等化疗药物联用，或作为替代药物，应对长期使用化疗药物所产生的毒副作用和耐药性问题。

本发明首次发现云木香中的提取物具有抗儿科肿瘤的效果，并且抗肿瘤中药对机体的损害较小，将来可使科学界将目光投入到从云木香中寻找新型抗儿科肿瘤先导物的研究，或基于本发明拟保护的六种化合物，开展复方中成药的新药开发研究。

本发明拟保护其用途的六种化合物，均可通过市售获得。

附图说明

图1为化合物1-6对髓母细胞瘤细胞D283 Med的抑制作用；

图2为化合物1-6对髓母细胞瘤细胞D458的抑制作用；

图3为化合物1-6对儿童高级别胶质瘤细胞SF188的抑制作用；

图4为化合物1-6对尤文肉瘤细胞A673的抑制作用；

图5为化合物1-6对儿童来源的神经上皮瘤细胞SK-N-MC的抑制作用；

图6为化合物1-6对神经母细胞瘤细胞SKN-BE-2C的抑制作用。

具体实施方式

下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，旨在说明本发明的具体配方组成、制备方法及其功能和效果，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。

如本文所用，“儿童肿瘤”或“儿童癌症”是在18岁或18岁之前在主体中首次鉴定出的肿瘤或癌症。儿童肿瘤包括但不仅限于髓母细胞瘤、尤文肉瘤、儿童来源的神经上皮瘤、神经母细胞瘤和儿童高级别胶质瘤。

“疗法”或“治疗”是用于获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。出于本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于以下结果中的一种或多种：减少由疾病引起的一种或多种症状，降低疾病的程度，稳定疾病(例如，预防或延缓疾病的恶化)，预防或延缓疾病的传播(例如，转移)，延缓或减慢疾病进展，改善疾病状态，(部分或全部)缓解疾病，减少治疗疾病所需的一种或多种药物的剂量，增强其他药物的作用，延缓疾病进展，提高生活质量，和/或延长存活期。“治疗”还包括减少癌症的病理学结果。本发明的方法设想了这些治疗方面中的任何一个或多个。

术语“抑制”或“抑制剂”是指相对于载体而言化合物降低、减慢、阻止或防止细胞中特定生物过程的活性的能力。

下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。例如，儿童来源的神经上皮瘤细胞购自ATCC。

实施例1

化合物抗儿科肿瘤增殖活性的测试：

1.1细胞的培养

髓母细胞瘤细胞(D283 Med、D458)、儿童高级别胶质瘤细胞(SF188)、尤文肉瘤(A673)均培养于DMEM培养基，儿童来源的神经上皮瘤细胞(SK-N-MC)培养于MEM培养基，神经母细胞瘤细胞(SKN-BE-2C)培养与RPMI-1640培养基。所有培养基均添加了终浓度为10％胎牛血清、1％双抗(100U/mL青霉素和100U/mL链霉素)。将培养皿置于温度为37℃、含5％CO₂的培养箱中，每隔2天，用胰酶进行消化，传代培养。

1.2细胞增殖实验

取对数生长期的儿科肿瘤细胞，计数后制成相应浓度的细胞悬液，接种于96孔板(每孔5000个细胞)，置于培养箱预培养24h。将各待测化合物1-6分别溶于DMSO中，并稀释成不同浓度的药液，并于种板24h后加入96孔板(给药组)或加入等体积的DMSO(对照组)，采用与给药组同等剂量的顺铂作为顺铂组。实验同时设置背景组(仅加入培养基)。实验设置3个生物学重复，每次生物学重复设3次技术学重复。继续培养48h后，向每孔加入10μL的CCK-8试剂，孵育2h，用酶标仪读取450nm处吸光值(OD值)，计算细胞活率。

按照以下公式计算细胞活率：

细胞活率(％)＝(样品OD值-背景OD值)/(对照OD值-背景OD值)

实验结果，见表1：

表1.化合物1-化合物6对六种儿童肿瘤的IC₅₀值(μM)

如附图1-6所示，加入化合物1-6可显著抑制各儿童肿瘤细胞系的生长，且其抑制生长的效果呈剂量依赖性。其中，代表性化合物2的抑制效果最为显著，其对各儿童肿瘤细胞系的IC₅₀值在1.25到5.93μM之间，与临床现有药物顺铂相比具有相似或更优的抑制效果。

等同替换和范围

在权利要求中，除非相反指明或从上下文中显然看出，冠词“一个”、“一种”和“所述”可以表示一个(种)或多于一个(种)。除非相反指明或从上下文中显然看出，如果群组成员中的一个、多于一个或全部存在于、用于或与所给出的产品或方法相关，则包括在群组的的一个或多个成员之间的“或”的权利要求或说明书被认为是符合的。本发明包括其中恰好群组的一个成员存在、用于或与给出的产品或方法相关的实施方式。本发明包括其中群组的多于一个成员或全部存在、用于或与给出的产品或方法相关的实施方式。

本申请涉及各种授权专利，公开的专利申请，期刊文章和其它出版物，所有这些文献通过引用的方式并入本文。如果任何合并的参考文献和本说明书之间存在冲突，则应以说明书为准。此外，落入到现有技术的本发明的任何特定实施例可以明确地从任何一个或多个权利要求中排除。因为这样的实施方式被认为是本领域普通技术人员已知的，所以即使排除没有在本文中明确阐述，也可以排除它们。本发明的任何特定实施方式可以从任何权利要求中排除，无论是否涉及现有技术的存在。

本领域技术人员将认识到或能够仅仅使用常规实验来确定本文描述的特定实施方式的许多等同物。这里描述的本实施方式的范围并不意图限于以上描述，而是如在所附权利要求中阐述的那样。本领域的普通技术人员将会理解，在不脱离如所附权利要求所限定的本发明的精神或范围的情况下，可以对本描述进行各种改变和修改。

Claims

1.一种倍半萜内酯类化合物或其药学上可接受的盐、对映体或外消旋混合物在制备抗儿科肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的倍半萜内酯类化合物至少具有I式之一所示的结构

2.根据权利要求1所述的倍半萜内酯类化合物在制备抗儿科肿瘤药物中的应用，其特征在于,所述的倍半萜内酯类化合物具有如下之一所示的结构

3.根据权利要求1所述的倍半萜内酯类化合物在制备抗儿科肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的儿科肿瘤包括髓母细胞瘤、尤文肉瘤、儿童来源的神经上皮瘤、神经母细胞瘤和儿童高级别胶质瘤的至少一种。

4.一种抗儿科肿瘤药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1中任一倍半萜内酯化合物或其药学可接受的盐、前药、水合物、或其混合物的形式，以及药学上可接受的辅料。

5.根据权利要求4所述的所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含治疗有效量的一种或多种如权利要求1所述的化合物(例如，基本上纯的化合物1或其药学上可接受的盐，例如化合物2，或，例如化合物3)。

6.根据权利要求4-5中任一所述的所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含晶型和/或无定形形式的化合物2或化合物5。

7.根据权利要求4-6中任一所述的所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为片剂、粉剂、胶囊、口服液、乳剂、膏剂、霜剂、注射剂、混悬剂、酐剂、颗粒剂或气雾剂之一。

8.一种包含权利要求4-7中任一所述的所述药物组合物制备抗儿科肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述组合物与其他活性剂组合使用。

9.如权利要求8所述的应用，进一步包括另外的治疗方法，所述治疗方法选自手术程序(例如，常规的抗癌手术疗法)，放射疗法，化学疗法和抗肿瘤免疫疗法中的一种或多种组合使用。

10.一种用于治疗儿科肿瘤疾患的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：如权利要求4-7中任意一项所述的药物组合物；以及使用说明书。