CN113504290B - 一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，包括以下步骤：A、制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本；B、使用飞行时间质谱仪对实验样本进行检测，得到实验样本的质荷比峰谱图；C、对质荷比峰谱图进行数据处理；D、使用李斯特氏菌的特征峰谱图与经过步骤C处理后的质荷比峰谱图进行比对，得到分型结果。本发明能够改进现有技术的不足，提高了检测精度并同时缩短了检测时间。

Description

一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法
技术领域
本发明涉及微生物检测技术领域，尤其是一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法。
背景技术
随着飞行时间质谱技术的发展，近些年来飞行时间质谱逐渐被应用到微生物检测领域，飞行时间质谱仪是通过不同质荷比离子的加速快慢来对不同离子进行区分。随着飞行时间质谱的广泛应用，如何提高检测精度并同时缩短检测时间，成为了本领域的研究热点之一。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，提高了检测精度并同时缩短了检测时间。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。
一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，包括以下步骤：
A、制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本；
B、使用飞行时间质谱仪对实验样本进行检测，得到实验样本的质荷比峰谱图；
C、对质荷比峰谱图进行数据处理；
D、使用李斯特氏菌的特征峰谱图与经过步骤C处理后的质荷比峰谱图进行比对，得到分型结果。
作为优选，步骤A中，制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本包括以下步骤，
A1、在1.5mL的Eppendorf管中加入200μL纯净水，使用一次性接种环取5mg的李斯特氏菌样本放入管内进行振荡混匀；
A2、加入800μL无水乙醇，进行离心处理后弃去上清液；
A3、向Eppendorf管中加入50μL70%甲酸和50μL乙腈，进行离心处理后取上清液待用；
A4、取1μL步骤A3制得的上清液滴加在靶板上，干燥后再覆盖1μL基质，干燥后完成验样本的制作。
作为优选，步骤A2中离心转速为15000rad/min，离心时间为3min；步骤A3中离心转速为20000rad/min，离心时间为2min。
作为优选，步骤C中，对质荷比峰谱图进行数据处理包括以下步骤，
C1、在质荷比峰谱图中划分出峰值区域和非峰值区域；
C2、将峰值区域的曲线进行平滑处理。
作为优选，步骤C1中，峰值区域平均质荷比大于等于非峰值区域平均质荷的5倍。
作为优选，步骤C2中，峰值区域的曲线进行平滑处理包括以下步骤，
C21、对峰值区域进行离散采样；
C22、使用采样点进行拟合，得到平滑曲线。
作为优选，步骤C2中，计算得到平滑曲线和处理前的峰值区域曲线的变换矩阵，使用变换矩阵对非峰值区域进行变换，将非峰值区域变换前后的曲线进行对比，若相似度大于等于预设值，则完成数据处理，若相似度小于预设值，重新进行步骤C2。
采用上述技术方案所带来的有益效果在于：本发明通过对飞行时间质谱仪得到的质荷比峰谱图进行数据处理，提高了与李斯特氏菌的特征峰谱图对比的准确度。处理质荷比峰谱图的过程中，为了有效提高效率，本发明首先对质荷比峰谱图进行分区，然后针对峰值区域进行平滑处理，平滑处理采用离散采样拟合的方式进行，可以减少运算量；另外，为了保证上述简化平滑处理的准确性，使用非峰值区域曲线对平滑处理过程进行验证，从而实现在确保准确性的同时有效缩短了数据处理时间。
具体实施方式
一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，包括以下步骤：
A、制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本；
B、使用飞行时间质谱仪对实验样本进行检测，得到实验样本的质荷比峰谱图；
C、对质荷比峰谱图进行数据处理；
D、使用李斯特氏菌的特征峰谱图与经过步骤C处理后的质荷比峰谱图进行比对，得到分型结果。
步骤A中，制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本包括以下步骤，
A1、在1.5mL的Eppendorf管中加入200μL纯净水，使用一次性接种环取5mg的李斯特氏菌样本放入管内进行振荡混匀；
A2、加入800μL无水乙醇，进行离心处理后弃去上清液；
A3、向Eppendorf管中加入50μL70%甲酸和50μL乙腈，进行离心处理后取上清液待用；
A4、取1μL步骤A3制得的上清液滴加在靶板上，干燥后再覆盖1μL基质，干燥后完成验样本的制作。
步骤A2中离心转速为15000rad/min，离心时间为3min；步骤A3中离心转速为20000rad/min，离心时间为2min。
步骤C中，对质荷比峰谱图进行数据处理包括以下步骤，
C1、在质荷比峰谱图中划分出峰值区域和非峰值区域；
C2、将峰值区域的曲线进行平滑处理。
步骤C1中，峰值区域平均质荷比大于等于非峰值区域平均质荷的5倍。
步骤C2中，峰值区域的曲线进行平滑处理包括以下步骤，
C21、对峰值区域进行离散采样；
C22、使用采样点进行拟合，得到平滑曲线。
步骤C2中，计算得到平滑曲线和处理前的峰值区域曲线的变换矩阵，使用变换矩阵对非峰值区域进行变换，将非峰值区域变换前后的曲线进行对比，若相似度大于等于预设值，则完成数据处理，若相似度小于预设值，重新进行步骤C2。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (3)

1.一种基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，其特征在于包括以下步骤：
A、制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本；
B、使用飞行时间质谱仪对实验样本进行检测，得到实验样本的质荷比峰谱图；
C、对质荷比峰谱图进行数据处理；包括以下步骤，
C1、在质荷比峰谱图中划分出峰值区域和非峰值区域；
C2、将峰值区域的曲线进行平滑处理；包括以下步骤，
C21、对峰值区域进行离散采样；
C22、使用采样点进行拟合，得到平滑曲线；
计算得到平滑曲线和处理前的峰值区域曲线的变换矩阵，使用变换矩阵对非峰值区域进行变换，将非峰值区域变换前后的曲线进行对比，若相似度大于等于预设值，则完成数据处理，若相似度小于预设值，重新进行步骤C2；
D、使用李斯特氏菌的特征峰谱图与经过步骤C处理后的质荷比峰谱图进行比对，得到分型结果。
2.根据权利要求1所述的基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，其特征在于：步骤A中，制作带有待分型李斯特氏菌的实验样本包括以下步骤，
A1、在1.5mL的Eppendorf管中加入200μL纯净水，使用一次性接种环取5mg的李斯特氏菌样本放入管内进行振荡混匀；
A2、加入800μL无水乙醇，进行离心处理后弃去上清液；
A3、向Eppendorf管中加入50μL70%甲酸和50μL乙腈，进行离心处理后取上清液待用；
A4、取1μL步骤A3制得的上清液滴加在靶板上，干燥后再覆盖1μL基质，干燥后完成验样本的制作。
3.根据权利要求2所述的基于飞行时间质谱的李斯特氏菌分型方法，其特征在于：步骤A2中离心转速为15000rad/min，离心时间为3min；步骤A3中离心转速为20000rad/min，离心时间为2min。
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