CN113495103A - 一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法 - Google Patents

一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法 Download PDF

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CN113495103A CN202010259759.7A CN202010259759A CN113495103A CN 113495103 A CN113495103 A CN 113495103A CN 202010259759 A CN202010259759 A CN 202010259759A CN 113495103 A CN113495103 A CN 113495103A
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黄文清
郭林峰
李晓平
杨福斌
郑宝液
栾保磊
饶万兵
李艳华
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Sunshine Lake Pharma Co Ltd
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Abstract

本发明涉及一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法，属于分析化学领域。所述方法中，以多糖衍生物为填料的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。本发明的方法简单、快速、准确。

Description

一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体涉及分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法。
背景技术
德谷胰岛素(Insulin degludec)是由NovoNordisk公司研发，于2012年10月在日本上市，批准治疗1、2型糖尿病。2015年9月25日，美国FDA批准丹麦诺和诺德公司的新药德谷胰岛素(Insulin Degludec)注射剂上市，商品名为Tresiba。德谷胰岛素为新一代基础胰岛素类似物，通过经皮下注射后形成多六聚体，从而发挥24h超长效作用。德谷胰岛素的CAS号为844439-96-9，分子量为6103.97204，德谷胰岛素的分子式为C274H411N65O81S6。
德谷胰岛素侧链，化学名称为(S)-16-((1-羧基-4-((2,5-二酮基吡咯-1-基)氧基)-4-酮基丁基)氨基)-16-羰基十六烷基羧酸，CAS号为943586-12-7，是德谷胰岛素合成过程中重要的起始物料，其引入的对映异构体杂质，化学名称为(R)-16-((1-羧基-4-((2,5-二酮基吡咯-1-基)氧基)-4-酮基丁基)氨基)-16-羰基十六烷基羧酸，会对德谷胰岛素的质量产生重要的影响，故需要对其进行严格的质量控制。
目前《美国药典》USP、《欧洲药典》EP、《日本药典》JP及《中国药典》Ch.P.均没有收载德谷胰岛素侧链及其对映异构体的分离检测方法，为了更好更准确地控制产品中的杂质，保证原料药的质量，需要研究适合于德谷胰岛素侧链及其对映异构体的分析方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用手性色谱柱分离检测德谷胰岛素侧链与其对映异构体的方法，从而实现德谷胰岛素侧链与其对映异构体的分离和测定。本发明的方法能够有效分离德谷胰岛素侧链与其对映异构体杂质，方法的专属性好，灵敏度高，准确度可靠，可用于德谷胰岛素的质量控制。
一种用液相色谱法分离检测德谷胰岛素侧链与其对映异构体的方法，其特征在于，包括：采用多糖衍生物为填料的手性色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。
在一些实施例中，所述手性色谱柱的多糖衍生物填料为直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]、纤维素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]或纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)或其组合。在某些实施例中，多糖衍生物填料为纤维素-(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。
在一些实施例中，所述手性色谱柱可选自CHIRALPAK AD-3、CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H和CHIRALPAK IE。在一些实施例中，所述的手性色谱柱为CHIRALPAK IE，销售厂家是大赛璐药物手性技术(上海)有限公司，英文名DAICEL CHIRAL TECHNOLOGIES(CHINA)CO.,LTD。在一些实施例中，所述的手性色谱柱为CHIRALPAK IE。
在一些实施例中，B相中所述的混合溶液中，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为85：15至95:5。在一些实施例中，B相中乙醇与甲醇的体积比(V/V)为88：12至92：8。在某些实施例中，B相中乙醇与甲醇的体积比(V/V)为90：10。
在一些实施例中，B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.1:100至0.5:100。在一些实施例中，B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.3:100。
在一些实施例中，A相与B相的体积比为10:90至90:10。在一些实施例中，A相与B相的体积比为25:75。
在一些实施例中，本发明所述的分离检测方法，可按以下步骤实现：
1)取德谷胰岛素侧链与其对映异构体或含德谷胰岛素侧链与其对映异构体的样品适量，用稀释剂或空白溶剂溶解样品；
2)设置仪器参数：流动相的流速、检测波长、色谱柱的柱箱温度；
3)取一定量步骤1)的溶液，注入高效液相色谱仪，完成德谷胰岛素侧链与其对映异构体的分离测定。
步骤1)所述的德谷胰岛素侧链可以是任意纯度的。
步骤1)所述的德谷胰岛素侧链可以是任意光学纯度的。
步骤1)所述的稀释剂或空白溶剂为异丙醇与乙酸的混合溶液。所述的异丙醇与乙酸的体积比(V/V)为50:50至90:10。在一些实施例中，所述的异丙醇与乙酸的体积比(V/V)为50:50。
步骤1)所述稀释剂中，所述的乙腈与三氟乙酸的体积比(V/V)为40:60至90:10。在一些实施例中，稀释剂中，所述乙腈与三氟乙酸的体积比(V/V)为50:50。
步骤1)所述的稀释剂中每1ml稀释剂含德谷胰岛素侧链样品0.5mg～10mg。在一些实施例中，步骤1)所述的稀释剂中每1ml稀释剂含德谷胰岛素侧链样品6mg。
步骤2)所述流动相的流速为0.1ml/min～1.5ml/min。在一些实施例中，流动相的流速为0.3ml/min；在一些实施例中，流动相的流速为0.6ml/min；在一些实施例中，流动相的流速为1.0ml/min。
步骤2)所述检测波长为205nm至215nm。在一些实施例中，检测波长为210nm，有利于检测。
步骤2)所述色谱柱柱箱温度为15℃～40℃。在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为25℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为35℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为40℃。
步骤3)所述样品溶液进样量为2μl～10μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为4μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为5μl。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：
1)取德谷胰岛素侧链与其对映异构体或含德谷胰岛素侧链与其对映异构体的样品适量，用稀释剂或空白溶剂溶解样品，并配制成每1ml含德谷胰岛素侧链样品0.5mg～10mg的样品溶液；
2)设置流动相的流速为0.1ml/min～1.5ml/min，检测波长为205nm至215nm，色谱柱柱箱温度为15℃至40℃；
3)取步骤1)的样品溶液2μl～10μl，注入高效液相色谱仪，完成德谷胰岛素侧链与其对映异构体的分离测定。
本发明提供的方法中，采用的高效液相色谱仪为美国Agilent 1200型高效液相色谱系统及工作站。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱选自CHIRALPAK AD-3、CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H或CHIRALPAK IE。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱选自CHIRALPAK AD-3、CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H或CHIRALPAK IE；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为85:15至95:5。
在一些实施例中，本发明所述的分离检测方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液中，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为85：15至95:5；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.1:100至0.5:100。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为90:10；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.1:100至0.5:100。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为85:15至95:5；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.3:100。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为90:10；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.3:100。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为85：15至95:5；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.1:100至0.5:100；A相与B相的体积比为10:90至90:10。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为90：10；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.1:100至0.5:100；A相与B相的体积比为10:90至90:10。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为90:10；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.3；A相与B相的体积比为10:90至90:10。
在一些实施例中，本发明所述的分离测定方法，采用的色谱柱为CHIRALPAK IE柱；流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液；B相中所述的混合溶液，乙醇、甲醇的体积比(V/V)为90:10；B相中所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比(V/V)为0.3；A相与B相的体积比为25:75。
采用本发明所述的分离方法，分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的时间可在30分钟以内。
在上文或下文的内容中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现1％、2％、5％、7％、8％或10％等差异。
本发明采用以多糖衍生物为填料的手性色谱柱，以正己烷或者正庚烷作为A相，以乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液为B相的流动相体系，可以将德谷胰岛素侧链与其对映异构体杂质进行有效分离，分离度达到1.5以上或2.5以上或5以上，完全基线分离，本发明的方法专属性好，灵敏度高，准确度好，有较好的稳定性指示能力，从而可以准确有效控制德谷胰岛素侧链的质量。
附图说明
图1实施例1中空白溶液的高效液相色谱图；
图2实施例1中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图；
图3实施例2中空白溶液的高效液相色谱图；
图4实施例2中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图；
图5实施例3中空白溶液的高效液相色谱图；
图6实施例3中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图；
图7实施例4中空白溶液的高效液相色谱图；
图8实施例4中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图；
图9实施例5中空白溶液的高效液相色谱图；
图10实施例5中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图；
图11实施例6中空白溶液的高效液相色谱图；
图12实施例6中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图；
图13实施例7中德谷胰岛素侧链加标溶液的高效液相色谱图。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
仪器与色谱柱的规格：美国Agilent 1200型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；
色谱柱 规格 填料
CHIRALPAK IE 4.6x250mm，5μm 多糖衍生物
实施例1
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：35℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝25:75(V:V)；
运行时间：30min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mLEP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取空白溶液、德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。
图2中保留时间约7.9分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约10.3分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
从图2可知，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
图2证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
实施例2
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：40℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝25:75(V:V)；
运行时间：30min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mL EP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取空白溶液、德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3、图4。
图4中保留时间约8.1分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约10.2分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
图4证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
实施例3
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：25℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝25:75(V:V)；
运行时间：30min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mL EP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取空白溶液、德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图5、图6。
图6中保留时间约8.9分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约12.7分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
图6证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
实施例4
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：1.0mL/min；
柱温：35℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝25:75(V:V)；
运行时间：15min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mL EP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取空白溶液、德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图7、图8。
图8中保留时间约5.0分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约6.5分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
图8证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
实施例5
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：0.3mL/min；
柱温：35℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝25:75(V:V)；
运行时间：30min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mL EP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取空白溶液、德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图9、图10。
图10中保留时间约16.2分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约21.1分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
图10证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
实施例6
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：35℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝10:90(V:V)；
运行时间：15min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mL EP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取空白溶液、德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图11、图12。
图12中保留时间约7.5分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约8.8分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
图12证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。
实施例7
仪器与条件
色谱柱：CHIRALPAK IE，4.6x250mm，5μm；
检测器：DAD(紫外检测器)，检测波长210nm；
流速：0.6mL/min；
柱温：35℃；
进样量：4μL；
流动相A：正己烷；
流动相B：乙醇：甲醇：TFA＝90:10:0.3(V:V:V)；
洗脱比例：A相:B相＝50:50(V:V)；
运行时间：50min；
稀释剂/空白溶液：异丙醇：乙酸＝1:1(V:V)；
实验步骤
取德谷胰岛素侧链样品25.28mg，德谷胰岛素侧链对映异构体6.07mg，精密称定至10mL EP管中，加入4mL稀释剂，溶解，摇匀，作为德谷胰岛素侧链加标溶液。
取德谷胰岛素侧链加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图13。
图13中保留时间约14.1分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链对映异构体的色谱峰，保留时间约23.5分钟的色谱峰为德谷胰岛素侧链色谱峰。
图13证明，该检测方法能够将德谷胰岛素侧链与其对映异构体分离。本法可以用于德谷胰岛素侧链的异构体质量监测。

Claims (10)

1.一种用液相色谱法分离检测德谷胰岛素侧链及其对映异构体的方法，其特征在于，采用多糖衍生物为填料的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，所述的色谱柱为CHIRALPAK AD-3、CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H或CHIRALPAK IE。
3.根据权利要求1所述的方法，所述A相与B相的体积比为10:90至90:10。
4.根据权利要求1所述的方法，所述B相中乙醇、甲醇的体积比为85:15至95:5。
5.根据权利要求1所述的方法，所述的三氟乙酸与乙醇与甲醇总体积的体积比为0.1:100至0.5:100。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述的方法包含以下步骤：
1)取德谷胰岛素侧链与其对映异构体或含德谷胰岛素侧链与其对映异构体的样品适量，用稀释剂或空白溶剂溶解样品；
2)设置仪器参数：流动相的流速、检测波长、色谱柱的柱箱温度；
3)取一定量步骤1)的溶液，注入高效液相色谱仪，完成德谷胰岛素侧链与其对映异构体的分离测定。
7.根据权利要求6所述的方法，步骤1)中所述稀释剂或空白溶剂为异丙醇与乙酸的混合溶液。
8.根据权利要求7所述的方法，所述的异丙醇与乙酸的体积比为50:50至90:10。
9.根据权利要求6所述的方法，步骤1)中每1ml稀释剂含德谷胰岛素侧链样品0.5mg～10mg。
10.根据权利要求1-9任一所述的方法，所述流动相的流速为0.1ml/min～1.5ml/min；检测波长为205nm-215m；色谱柱柱箱温度为15℃～40℃。
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