CN113476375A - 一种蜂毒牙膏及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗菌牙膏技术领域，具体公开了一种蜂毒牙膏及其制备方法，蜂毒牙膏由以下质量百分比的组分组成：复合抗菌肽0.1～15%、增溶剂1～10%、保湿剂10～36%、胶黏剂0.4～2%、发泡剂0.5～5%、水15～25%和其它助剂0.65～4.2%，摩擦剂为5‑40%；每质量百分比的所述复合抗菌肽由以下质量百分比的组分制备而成：金银花1～3%、蒲公英2～6%、甘草10～15%、蜂蜜2～10%、蜂毒提取物0.01～0.1%、五谷虫0～1%，余量为食用油。本申请制备的蜂毒牙膏抗菌效果佳且成分安全，刺激低，不易引起人体过敏反应。

Description

一种蜂毒牙膏及其制备方法
技术领域
本发明涉及抗菌牙膏领域，尤其是涉及一种蜂毒牙膏及其制备方法。
背景技术
龋齿和牙周病是造成成年人牙齿缺失的主要原因，也是人类最普遍的口腔疾病。
牙膏是人们日常清洁的必须品，为了减少龋齿和牙周病的发生，更好地呵护牙齿健康，人们通常在牙膏中添加具有抗菌效果的活性组分，使得人们在日常清洁牙齿的同时清除口腔中的细菌。
研究发现，蜂毒提取物中含有强效抗菌活性组分，但蜂毒提取物中还有容易引起引起人体过敏反应的其它成分，而现有技术难以将蜂毒提取物中有致敏反应的组分去除，因此限制了蜂毒提取物在牙膏中的应用。
发明内容
为了提供一种具有较佳抗菌效果、成分安全，不易刺激并引起人体过敏反应的蜂毒牙膏，本申请提供一种蜂毒牙膏及其制备方法。
第一方面，本申请提供一种蜂毒牙膏，采用以下技术方案：
一种蜂毒牙膏，由以下质量百分比的组分组成：
复合抗菌肽0.1～15％
增溶剂1～15％
保湿剂14～50％
胶黏剂0.4～2％
发泡剂0.5～5％
水15～30％
其它助剂0.7～5.2％
摩擦剂为5-40％；
每质量百分比的所述复合抗菌肽由以下质量百分比的组分制备而成：
金银花1～3％
蒲公英2～6％
甘草10～15％
蜂蜜2～10％
蜂毒提取物0.01～0.1％
五谷虫0～1％
余量为食用油。
蜂毒提取物可以为马蜂蜂毒，可以自己用蜂毒采集器采集，也可市售得到，蜂毒提取物中含有强效抗菌成分，比如蜂毒肽，蜂毒肽约占蜂毒干重的40～50％，因此蜂毒提取物表现出较佳的杀菌效果，但是蜂毒提取物中还有容易引起人体过敏反应的致敏组分，比如与蜂毒肽分子量接近的磷脂酶A2，在不破坏蜂毒肽活性的前提下，这些容易引起人体过敏反应的致敏组分难以去除。
上述金银花、蒲公英、甘草以及五谷虫均为常见中药组分，可以通过市售的方式获得。实验发现，采用金银花、蒲公英和甘草以一定比例配合后，能够在不破坏蜂毒肽活性的前提下，将致敏组分转化为不易引起人体过敏的其它物质，从而提高复合抗菌肽的使用安全性。
通过在复合抗菌肽中加入五谷虫，五谷虫中含有稳定性好且活性高的抗菌多肽，实验发现，将蜂毒提取物和五谷虫充分混合后，复合抗菌肽的热稳定性提高，证明五谷虫加入后有利于提高蜂毒提取物的热稳定性而使得蜂毒提取物不易失活；蜂毒提取物和五谷虫配合后还产生协同抗菌的效果，使得复合抗菌肽的抗菌效果大幅度提高；并且复合抗菌肽还表现出较佳成膜性，人们在刷牙后，复合抗菌肽能够在牙齿表面形成一层抗菌多肽膜，抗菌多肽膜附着在牙齿表面并起到持久抗菌的效果。综上，本申请制备的蜂毒牙膏一方面能够减少口腔内细菌的滋生，起到持久抗菌的效果，从而减少龋齿和牙周病的情况发生，另一方面，抗菌多肽膜含有多种多肽成分，长期使用有利于减少细菌进一步侵蚀牙齿中的细微裂缝，帮助人们坚固牙齿。
除此之外，金银花、蒲公英、甘草、蜂毒提取物和五谷虫协同配合后，还具有明显地促进口腔上皮细胞再生、修复受损的口腔上皮细胞的效果，对于口腔溃疡、牙龈红肿疼痛以及牙龈出血的症状，本申请制备的蜂毒牙膏能够在2～3天起到明显改善的效果，从而快速帮助患者缓解口腔中疼痛不适的感觉。
优选的，所述五谷虫的添加量为0.5～1％。
通过调整五谷虫的添加量为0.5～1％，使得五谷虫与蜂毒提取物协同抗菌效果较佳，还使得牙齿表面形成稳定的抗菌多肽膜，从而有利于提高口腔的抗菌持久性，有利于减少龋齿和牙周病的情况发生。
优选的，所述食用油为菜籽油。
金银花、蒲公英、甘草、蜂毒提取物和五谷虫的活性组分在菜籽油中具有较佳的溶出效果，且菜籽油不易与溶解在菜籽油中的活性组分结合，有利于上述活性组分之间协同配合产生较佳的抗菌和修复的效果，再者，菜籽油无异味，用以制备牙膏容易被人们接受并使用。
优选的，所述复合抗菌肽的制备方法包括以下步骤：
步骤(1)，将除蜂蜜、蜂毒提取物以外的物料混合，在70～80℃下熬煮1.5～3h，过滤取滤液，冷却至15～30℃，得到中药油；
步骤(2)，将蜂蜜、蜂毒提取物以及中药油混合后，在65～75℃下加热均质0.5～2h，接着静置20～30h，重复均质再静置的操作至少三次，得到复合抗菌肽。
上述技术方案的步骤1中，通过升温熬煮，使得金银花、蒲公英、甘草和五谷虫中的活性成分溶解在食用油中，从而得到溶解有多种中药活性组分的中药油。
步骤2中，通过蜂蜜和蜂毒提取物与中药油先均质再静置，在均质时，蜂蜜和蜂毒提取物与中药油充分混合，在静置时，蜂蜜和蜂毒提取物与中药油充分结合，使得蜂毒提取物中的致敏组分转化为其他组分，通过重复先均质再静置的操作至少三次，蜂蜜、蜂毒提取物与中药油得以充分融合，从而使得蜂毒提取物与金银花、蒲公英、甘草和五谷虫配合后起到较佳的抗菌和促进口腔上皮细胞再生的作用。
优选的，所述步骤(2)中，静置温度为18～26℃。
在均质结束后，通过将温度降低至18～26℃，蜂蜜在该温度下放置较长时间不易发酵产生其它杂质成分，使蜂毒提取物以及中药油的活性不易受到上述杂质成分的影响，从而有利于蜂毒提取物与金银花、蒲公英、甘草和五谷虫充分结合，进而使得复合抗菌肽的抗菌以及修复的效果较佳。
优选的，所述保湿剂由以下质量百分比的组分组成：
山梨糖醇10～18％
甘油2～8％
聚乙二醇2～10％。
通过聚乙二醇、山梨糖醇和甘油以特定比例配合，能够有效保持蜂毒牙膏的水分，同时还可以有效降低蜂毒牙膏的冰点，天气过冷时蜂毒牙膏不易出现发硬以及结冰的现象，从而使得蜂毒牙膏保持流动性，不易出现发硬而堵塞管口的现象。具体地，聚乙二醇可以为聚乙二醇400。
优选的，所述发泡剂为十二烷基硫酸酯钠，所述增溶剂为水合硅石。
复合抗菌肽中食用油的含量较高，但是蜂毒牙膏中水的含量较高，复合抗菌肽和水的相容性较差，因此复合抗菌肽的分散性较差，容易团聚。聚乙二醇不但具有较佳的保湿作用，还有利于提高复合抗菌肽的分散性，通过十二烷基硫酸酯钠、水合硅石以及聚乙二醇以特定比例配合，有利于复合抗菌肽在蜂毒牙膏体系中乳化分散，从而提高复合抗菌肽在蜂毒牙膏中的分散稳定性，进而提高蜂毒牙膏的抗菌效果。
优选的，所述其它助剂包括质量百分比为0.05～0.5％的柠檬草精油。
柠檬草精油不但具有独特的香味，还具有一定的抗菌杀毒的效果，通过加入一定比例的柠檬草精油，柠檬草精油温和不易刺激口腔，通过柠檬草精油和复合抗菌肽配合，在刷牙结束后，能够帮助人们在较长时间内保持口气清新，令人感觉清爽干净。
第二方面，本申请提供一种蜂毒牙膏的制备方法，采用以下技术方案：
一种蜂毒牙膏的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，将摩擦剂、发泡剂、增溶剂和胶黏剂混合，搅拌均匀，得到粉料混合物；在真空度为(-0.1～-0.2)MPa的条件下，将保湿剂、其他助剂和水混合，得到液体混合物；
步骤S2，控制真空度为(-0.1～-0.2)MPa的条件下，在液体混合物中加入粉料混合物，接着搅拌0.5～1.5h，得到膏体混合物；
步骤S3，在膏体混合物中加入复合抗菌肽，搅拌10～30min，接着在真空度为(-0.08～-0.1)MPa下搅拌3～8min，停止搅拌，并恢复至常压，得到蜂毒牙膏。
通过上述步骤制备得到的蜂毒牙膏中各组分分散均匀，且分散的稳定性较佳，有利于获得清洁效果佳、抗菌效果稳定的蜂毒牙膏。
优选的，所述其他助剂由柠檬草精油、香味剂、螯合剂、防腐剂和甜味剂组成，所述步骤S1具体为：
将摩擦剂、发泡剂、增溶剂和胶黏剂混合，搅拌均匀，得到粉料混合物；
将甜味剂和螯合剂与水混合，搅拌均匀，得到水相混合物；
将香味剂、防腐剂和柠檬草精油混合，搅拌均匀，得到油相混合物；
将保湿剂、水相混合物以及油相混合物混合，得到液体混合物；
步骤S1中，粉料混合物的制备、水相混合物的制备和油相混合物的制备不分先后顺序。
通过预先制备水相混合物和油相混合物，使得各组分预先溶解分散，再将水相混合物、油相混合物和保湿剂混合，使得水相混合物、油相混合物和保湿剂在搅拌作用下乳化，从而使得各组分实现均匀分散，还有利于提高各组分的分散稳定性，从而使得蜂毒牙膏中各组分保持均匀且稳定分散的效果。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、通过在蜂毒牙膏中加入复合抗菌肽，复合抗菌肽在牙齿表面形成一层抗菌多肽膜，起到持续且强效的杀菌作用，同时不含有对人体刺激作用的致敏组分，使用温和且安全，还能够在较短时间内起到修复口腔溃疡、牙龈红肿以及牙龈出血的效果。
2、通过加入特定比例的水合硅石、聚乙二醇以及十二烷基硫酸酯钠，有利于复合抗菌肽均匀且稳定地分散在蜂毒牙膏中，使得蜂毒牙膏能够保持稳定的抗菌效果。
3、通过加入柠檬草精油以及复合抗菌肽配合，有利于在较长时间保持口气清新以及清爽干净。
具体实施方式
实施例1
一种蜂毒牙膏，由26kg水、1kg增溶剂、30kg保湿剂、0.4kg胶黏剂、0.5kg发泡剂、40.45kg摩擦剂、0.65kg其它助剂以及1kg复合抗菌肽组成，各组分的投入量具体详见表1。
其中，增溶剂为水合硅石，保湿剂为山梨糖醇，胶黏剂为羧甲基纤维素钠，发泡剂为十二烷基硫酸酯钠，摩擦剂为碳酸钙，其他助剂为螯合剂，螯合剂为焦磷酸钠。
复合抗菌肽由1kg金银花、6kg蒲公英、10kg甘草、10kg蜂蜜和0.01kg蜂毒提取物和72.99kg食用油组成，食用油为菜籽油，其制备方法包括以下步骤：
步骤(1)，将1kg金银花、6kg蒲公英、10kg甘草和72.99kg菜籽油混合加入熬煮锅中，在70℃下熬煮3h，过滤取滤液，冷却至15℃，得到中药油。
步骤(2)，10kg蜂蜜和0.01kg蜂毒提取物以及步骤(1)制备的中药油加入均质罐中，在65℃加热均质2h，接着自然降温至18℃，静置20h，重复加热均质再静置的操作三次，得到复合抗菌肽。
上述蜂毒牙膏的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，将40.45kg碳酸钙、0.5kg十二烷基硫酸酯钠、1kg水合硅石和0.4kg羧甲基纤维素钠一起加入粉料罐中，在转速为60r/min下搅拌15min，搅拌均匀，得到粉料混合物。
步骤S2，开启真空制膏机，在真空制膏机的真空度调整为-0.1MPa后，关闭真空泵，打开液料阀，加入30kg山梨糖醇、0.65kg焦磷酸钠以及26kg水混合，关闭液料阀，得到液体混合物，重开真空泵，将真空制膏机的真空度调整为-0.1MPa，关闭真空泵，打开粉料阀，在液体混合物中抽入粉料混合物，关闭粉料阀，接着搅拌0.5h，得到膏体混合物；
步骤S3，打开小料阀，将1kg复合抗菌肽加入膏体混合物中，搅拌10min，接着保持真空度为-0.08MPa下搅拌8min，停止搅拌，缓慢打开放气阀，恢复至常压，得到蜂毒牙膏。
实施例2
与实施例1的区别在于：复合抗菌肽的制备方法不同，具体地，步骤(1)中，将0.5kg的五谷虫与1kg金银花、6kg蒲公英、10kg甘草和72.49kg菜籽油一起加入熬煮锅中。
实施例3
与实施例2的区别在于：复合抗菌肽中各组分的含量不同，具体地，复合抗菌肽由3kg金银花、2kg蒲公英、15kg甘草、1kg五谷虫、2kg蜂蜜、0.1kg蜂毒提取物和76.9kg食用油组成，食用油为菜籽油。
复合抗菌肽的制备方法的参数也有所不同，具体地：
步骤(1)中，将3kg金银花、2kg蒲公英、15kg甘草、1kg五谷虫和76.9kg菜籽油混合加入熬煮锅中，在80℃下熬煮1.5h，过滤取滤液，冷却至30℃，得到中药油。
步骤(2)中，2kg蜂蜜和0.1kg蜂毒提取物以及步骤(1)制备的中药油加入均质罐中，在75℃加热均质0.5h，接着自然降温至26℃，静置30h，重复加热均质再静置的操作五次，得到复合抗菌肽。
实施例4
与实施例3的区别仅在于：保湿剂中还加入有2kg聚乙二醇，增溶剂为6kg水合硅石，各组分的投入量具体详见表1。
上述蜂毒牙膏的制备方法，与实施例3的区别在于：
步骤S1如下：将33.45kg碳酸钙、0.5kg十二烷基硫酸酯钠、6kg水合硅石和0.4kg羧甲基纤维素钠一起加入粉料罐中，在转速为60r/min下搅拌15min，搅拌均匀，得到粉料混合物。
将2kg聚乙二醇与和30kg山梨糖醇混合，在转速为60r/min下搅拌10min，搅拌均匀，得到32kg保湿组合物。
所述步骤S2中，采用32kg保湿组合物替换30kg山梨糖醇，将32kg保湿组合物、0.65kg焦磷酸钠和26kg水混合，搅拌均匀，得到液体混合物。
实施例5
与实施例4的区别在于：聚乙二醇的加入量为5kg，各组分的投入量具体详见表1。
上述蜂毒牙膏的制备方法，与实施例4的区别在于：步骤S1中，将5kg聚乙二醇与30kg山梨糖醇混合，在转速为60r/min下搅拌10min，搅拌均匀，得到35kg保湿组合物。
实施例6
与实施例5的区别在于：其它助剂由0.05kg柠檬草精油和0.65kg焦磷酸钠组合，各组分的投入量具体详见表1。
一种蜂毒牙膏的制备方法，与实施例5的区别在于：步骤S2中，将0.05kg柠檬草精油、0.65kg焦磷酸钠、30kg山梨糖醇以及26kg水混合，得到液体混合物。
实施例7
与实施例5的区别在于：其它助剂由0.3kg柠檬草精油和0.65kg焦磷酸钠组合，各组分的投入量具体详见表1。
上述蜂毒牙膏的制备方法，与实施例5的区别在于：步骤S2中，将0.3kg柠檬草精油、0.65kg焦磷酸钠、30kg山梨糖醇以及26kg水混合，得到液体混合物。
实施例8
与实施例7的区别在于：保湿剂由10kg山梨糖醇、5kg聚乙二醇和2kg甘油组成。
胶黏剂由1kg黄原胶和0.2kg羧甲基纤维素钠组成。
其它助剂由0.05kg柠檬草精油、0.1kg螯合剂、0.2kg防腐剂、3kg香味剂和0.1kg甜味剂组成，具体地，防腐剂由0.1kg羟苯甲酯和0.1kg羟苯丙酯组合，螯合剂为焦磷酸钠，香味剂为香精，甜味剂为糖精钠，各组分的投入量具体详见表1。
上述蜂毒牙膏的制备方法，与实施例7的区别在于：
将41.25kg碳酸钙、1kg十二烷基硫酸酯钠、6kg水合硅石、1kg黄原胶和0.2kg羧甲基纤维素钠一起加入粉料罐中，在转速为60r/min下搅拌15min，搅拌均匀，得到粉料混合物。
将6kg山梨糖醇、5kg聚乙二醇和2kg甘油混合，在转速为60r/min下搅拌10min，搅拌均匀，得到13kg保湿组合物。
将30kg水与0.1kg糖精钠和0.1kg焦磷酸钠混合，在转速为60r/min下搅拌8min，搅拌均匀，得到30.2kg水相混合物。
将3kg香精、0.1kg羟苯甲酯、0.1kg羟苯丙酯和0.05kg柠檬草精油混合，在转速为60r/min下搅拌10min，搅拌均匀，得到3.25kg油相混合物。
实施例9
与实施例7的区别在于：保湿剂由10kg甘油、10kg聚乙二醇和21kg山梨糖醇组成。
胶黏剂由0.2kg黄原胶和1kg羧甲基纤维素钠组成。
其它助剂由0.5kg柠檬草精油、1kg螯合剂、0.25kg防腐剂、0.3kg香味剂和0.4kg甜味剂组成。具体地，防腐剂由0.2kg羟苯甲酯和0.05kg羟苯丙酯组合，螯合剂为焦磷酸钠，香味剂为香精，甜味剂为糖精钠，具体详见表1。
上述蜂毒牙膏的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1如下：将5.35kg碳酸钙、5kg十二烷基硫酸酯钠、15kg水合硅石、0.2kg黄原胶和1kg羧甲基纤维素钠一起加入粉料罐中，在转速为60r/min下搅拌15min，搅拌均匀，得到粉料混合物。
将10kg甘油、10kg聚乙二醇和21kg山梨糖醇混合，在转速为60r/min下搅拌10min，搅拌均匀，得到41kg保湿组合物。
将15kg水与0.4kg糖精钠和1kg焦磷酸钠混合，在转速为60r/min下搅拌8min，搅拌均匀，得到16.4kg水相混合物。
将0.3kg香精、0.2kg羟苯甲酯、0.05kg羟苯丙酯和0.5kg柠檬草精油混合，在转速为60r/min下搅拌10min，搅拌均匀，得到1.05kg油相混合物。
步骤S2，开启真空制膏机，在真空度调整为-0.2MPa后，关闭真空泵，打开液料阀，加入41kg保湿组合物、16.4kg水相混合物以及1.05kg油相混合物混合，关闭液料阀，得到液体混合物，重开真空泵，将真空度调整为-0.2MPa，关闭真空泵，打开粉料阀，在液体混合物中抽入粉料混合物，关闭粉料阀，接着搅拌1.5h，得到膏体混合物。
步骤S3，打开小料阀，将15kg复合抗菌肽加入膏体混合物中，搅拌30min，接着保持真空度为-0.1MPa下搅拌3min，停止搅拌，缓慢打开放气阀，恢复至常压，得到蜂毒牙膏。
表1
Figure BDA0003211656130000121
对比例1
一种牙膏1，与实施例1的区别在于：步骤S3中，采用水等量替换复合抗菌肽。
对比例2
一种蜂毒牙膏2，与实施例1的区别在于：复合抗菌肽的制备方法中，步骤(1)中，采用菜籽油等量替换金银花、蒲公英和甘草。
对比例3
一种蜂毒牙膏3，与实施例1的区别在于：复合抗菌肽的制备方法中，步骤(1)中，将10kg金银花、1kg蒲公英、6kg甘草和72.99kg菜籽油混合加入熬煮锅中，在70℃下熬煮3h，过滤取滤液，冷却至15℃，得到中药油。
对比例4
一种蜂毒牙膏4，与实施例1的区别在于：复合抗菌肽的制备方法中，步骤(1)中，将6kg金银花、1kg蒲公英、10kg甘草和72.99kg菜籽油混合加入熬煮锅中，在70℃下熬煮3h，过滤取滤液，冷却至15℃，得到中药油。
实验1安全测试
实验1.1表皮测试
参照《化妆品安全技术规范(2015版)》，对各实施例制备的蜂毒牙膏以及各对比例制备的牙膏进行多次急性皮肤刺激试验。
实验1.2粘膜测试
将本申请各实施例制备的蜂毒牙膏以及各对比例制备的对比样品分别涂抹至健康家兔的口腔粘膜和牙龈粘膜中，在4h后观察家兔的口腔粘膜和牙龈粘膜中是否出现刺激甚至过敏现象。如果有严重刺激，评分为2，如果轻微刺激，评分为1，如果有无明显刺激，评分为0。
试验结果表明，试验结果详见表2。
表2
皮肤刺激强度等级 评分
实施例1-9 无刺激性 0
对比例1 无刺激性 0
对比例2 强刺激性 2
对比例3 中度刺激性 1
对比例4 中度刺激性 1
根据表2中的测试结果表明，实施例1-9的蜂毒牙膏的皮肤刺激强度均为无刺激，粘膜测试的评分为0，表明实施例1-9制备的蜂毒牙膏对皮肤以及口腔粘膜均无刺激，说明本申请实施例1-9制备的蜂毒牙膏具有安全、不易对皮肤以及口腔产生刺激的优点。
根据表2中实施例1与对比例2-4的数据对比可得，实施例1的复合抗菌肽在制备过程中加入特定比例的金银花、蒲公英和甘草，使得蜂毒提取物的刺激性明显降低，对比例2未添加金银花、蒲公英以及甘草，蜂毒提取物表现出强烈刺激，对比例3和对比例4中金银花、蒲公英以及甘草的比例与实施例1相比明显发生改变，蜂毒提取物表现出中等强度的刺激，证明金银花、蒲公英以及甘草以特定比例配合后才能够对降低蜂毒提取物的刺激性起到明显效果，改变金银花、蒲公英和甘草中任一组分的用量均难以起到有效降低蜂毒提取物的刺激性的效果。
实验2
变形链球菌是最主要的致龋菌，牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌则是公认的牙周病致病菌，而粘性放线菌是可疑致龋菌也是牙周病的可疑致病菌。
本实验测试各实施例制备的蜂毒牙膏以及各对比样品对口腔有害的变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌以及粘性放线菌的抗菌能力。
实验2.1抗变形链球菌(Sm)试验
实验包括以下步骤：
a.配制实验样品：取10g各实施例蜂毒牙膏加160ml水，制成匀浆，待匀浆沉淀后，取100ml上层清液于试管中，得到蜂毒牙膏清液，即为实验样品。
b.配制对照样品:取10g对比样品1-4加160ml水，制成匀浆，待匀浆沉淀后，取100ml上层清液于试管中，得到对比样品清液，即为对照样品。
c.Sm细菌培养液准备：将市售冷冻保存的Sm经复苏、增菌、形态学检查及生化鉴定为纯培养后，将Sm接种于BHI培养基，37℃兼性厌氧(90％N2，5％CO2)条件下培养24h，监测菌液浓度达到108CFU/ml后，稀释100倍，得到Sm细菌培养液。
取Dentocuh SM试剂盒，Dentocuh SM试剂盒内有代螺帽培养瓶、含MSB培养液、杆菌肽纸片和附着板，按照Dentocuh SM试剂盒说明书指引，在含MSB培养液的代螺帽培养瓶中加入杆菌肽纸片15min后，分别取实验样品和对照样品各100μL加入代螺帽培养瓶内，吸取等量的Sm细菌培养液均匀涂布在Dentocult SM附着板上，然后将Dentocult SM附着板放入代螺帽培养瓶内，再将代螺帽培养瓶在37℃恒温箱内培养48h，计数Dentocult SM附着板在刻线以下的附着菌落数。
菌落数读数方式：
对Dentocult SM附着板上的菌落数进行计数，根据Dentocult SM附着板上菌落密度情况判断结果，菌落数<105CFU/ml时，记为“1”，菌落数为105-106CFU/ml时，记为“2”，菌落数>106CFU/ml，记为“3”。每一种实验样品以及对比样品均做三组实验，如三组读数不同则以最高读数作为结果。当实验组读数低于对照组时，认为实验样品或者对照样品能够减少变形链球菌在该体系中的黏附。
实验2.2抗牙龈卟啉单胞菌(Pg)、粘性放线菌(Av)以及伴放线放线杆菌(Aa)试验
Aa细菌培养液制备：市售Aa冷冻保存菌经复苏、增菌、形态学检查及生化鉴定为纯培养后，将BHI液体培养基分别与Aa混合，在37℃兼性厌氧(90％N2，5％CO2)条件下培养24h，监测菌液浓度达到108CFU/ml后，得到Aa细菌培养液。
Pg细菌培养液和Av细菌培养液制备：市售Pg和Av冷冻保存菌经复苏、增菌、形态学检查及生化鉴定为纯培养后，分别将BHI液体培养基分别与Pg和Av混合，接着在厌氧(80％N2，10％H2，10％CO2)条件下培养24h，监测菌液浓度达到108CFU/ml后，分别得到Pg细菌培养液和Av细菌培养液。
双层琼脂培养基的制备：先铺下层BHI-琼脂，接着分别取10μlAa细菌培养液、Pg细菌培养液和Av细菌培养液注入100ml40℃左右的BHI-琼脂中混匀，接着分别铺注在下层BHI-琼脂上面，冷却制成上层含菌的双层培养基平板。在双层培养基平板的表面放置灭菌金属圈，灭菌金属圈直径为9mm，分别在灭菌金属圈内注入实验样品和对比样品各100mg，37℃恒温箱内培养24h后，观察并计算抗菌率结果，每个实验均做三组，结果取三次测量平均值。
采用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无以及抑菌圈大小评价杀菌活性。
同一菌种采用的上层BHI-琼脂与下层BHI-琼脂相同，不同菌种与BHI-琼脂的类型关系详见表3。
表3
BHI-琼脂类型 BHI-琼脂的配方
Aa BHI-琼脂 BHI液体培养基+琼脂(2g/ml)
Pg BHI-血琼脂 BHI琼脂+脱纤维动物血(5％)
Av BHI-S琼脂 BHI琼脂+脱纤维动物血(5％)+Hemin-VitK(1％)
实验2.1和2.2的测试结果详见表4。
表4
Figure BDA0003211656130000161
Figure BDA0003211656130000171
根据表4中实施例1和对比例1的数据对比可得,通过在蜂毒牙膏中加入复合抗菌肽,Sm菌落数减少、Aa、Pg和Av的抑菌圈直径增大，证明复合抗菌肽对于Sm、Aa、Pg和Av具有较佳的抗菌能力，从而使得细菌不易附着在牙釉质的表面，有利于减少龋齿以及牙周病的发生。
根据表4中实施例1和对比例2-4的数据对比可得,实施例1的复合抗菌肽的制备过程中加入特定比例的蒲公英、甘草以及金银花，实验结果显示，Sm菌落数减少，Aa、Pg和Av的抑菌圈直径增大，证明在制备复合抗菌肽过程中加入一定比例的蒲公英、甘草以及金银花，不但能够明显降低蜂毒提取物带来的刺激性，还能够在一定程度上提高蜂毒提取物的杀菌抗菌活性，使得蜂毒牙膏清液对Sm、Aa、Pg和Av的杀菌抗菌效果更佳。
实验3
采用口腔变形链球菌PCR检测试剂盒，按照口腔变形链球菌PCR检测试剂盒的指引，分别对使用实施例1、实施例2以及实施例9的蜂毒牙膏样品的受试者以及使用对比例1-4的对比样品的受试者在使用完5min以及使用完4h的唾液进行收集，测试使用完5min以及使用完4h的唾液中变形链球菌的含量，并计算变形链球菌含量的增长率。计算公式如下：
Figure BDA0003211656130000172
实验4
选取130名有口腔溃疡，伴随有牙龈出血或者牙龈红肿症状的患者，将患者分为13组，每组10人，分别使用各实施例制备的蜂毒牙膏和各对比样品,每天早晚使用，每次使用时间为2分钟左右，连续使用3天后进行评分。
评分标准：3分表示显效，具有明显的修复作用：口腔溃疡以及伴随的牙龈出血或者牙龈红肿症状均明显改善；2分表示有效，有一定的修复作用：口腔溃疡以及伴随的牙龈出血或者牙龈红肿症状略有改善；1分表示无效果，无修复作用：口腔溃疡以及伴随的牙龈出血或者牙龈红肿症状无明显改善。统计各组中各项分值的人数。
实验3的变形链球菌含量的增长率和实验4的评分结果详见表5。
表5
增长率(％) 3分 2分 1分
实施例1 30.3 6 3 1
实施例2 1.1 8 2 0
实施例3 / 8 2 0
实施例4 / 8 2 0
实施例5 / 9 1 0
实施例6 / 9 1 0
实施例7 / 10 0 0
实施例8 / 0 0 0
实施例9 0.9 0 0 0
对比例1 40.3 0 1 9
对比例2 / / / /
对比例3 / / / /
对比例4 / / / /
通过表5中实施例1-2和对比例1的数据对比可得，实施例1中的蜂毒牙膏的复合抗菌肽中加入有蜂毒提取物，使得口腔内的细菌的增长速度减慢，实施例2中还加入有五谷虫，唾液中变形链球菌的增长率明显降低，证明五谷虫和蜂毒提取物配合后，有利于延长口腔中抑制变形链球菌的时间，对此，发明人认为，五谷虫和蜂毒提取物中均含有多种抗菌肽成分，五谷虫和蜂毒提取物配合有利于在牙齿表面形成一层抗菌多肽膜，从而抗菌多肽膜停留在牙齿表面，在刷牙结束后，抗菌多肽膜仍能够在较长时间起到较佳的灭菌作用，从而使得受试者唾液中的变形链球菌的增长率降低。
通过表5中实施例1-2与对比例1对比可得，实施例1-2制备的蜂毒牙膏的复合抗菌肽成分中均加入有蜂毒提取物，蜂毒牙膏对于口腔溃疡以及伴随的牙龈出血或者牙龈红肿症状具有明显的缓解效果，证明蜂毒提取物对于口腔上皮细胞具有较佳的修复效果，从而帮助人们缓解口腔溃疡以及伴随的牙龈出血或者牙龈红肿症状，实施例2在实施例1的基础上增加五谷虫，蜂毒牙膏的评分提高，证明五谷虫加入后能够进一步提高蜂毒牙膏的抗菌效果，从而使得蜂毒牙膏对于口腔溃疡以及伴随的牙龈出血或者牙龈红肿症状的缓解效果更佳。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种蜂毒牙膏，其特征在于：由以下质量百分比的组分组成：
复合抗菌肽0.1～15%
增溶剂1～15%
保湿剂14～50%
胶黏剂0.4～2%
发泡剂0.5～5%
水15～30%
其它助剂0.7～5.2%
摩擦剂为5-40%；
每质量百分比的所述复合抗菌肽由以下质量百分比的组分制备而成：
金银花1～3%
蒲公英2～6%
甘草10～15%
蜂蜜2～10%
蜂毒提取物0.01～0.1%
五谷虫0～1%
余量为食用油。
2.根据权利要求1所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述五谷虫的添加量为0.5～1%。
3.根据权利要求1或2所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述食用油为菜籽油。
4.根据权利要求1或2所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述复合抗菌肽的制备方法包括以下步骤：
步骤（1），将除蜂蜜、蜂毒提取物以外的物料混合，在70～80℃下熬煮1.5～3h，过滤取滤液，冷却至15～30℃，得到中药油；
步骤（2），将蜂蜜、蜂毒提取物以及中药油混合后，在65～75℃下加热均质0.5～2h，接着静置20～30h，重复均质再静置的操作至少三次，得到复合抗菌肽。
5.根据权利要求4所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述步骤（2）中，静置的温度为18～26℃。
6.根据权利要1或2所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述保湿剂由以下质量百分比的组分组成：
山梨糖醇10～30%
甘油2～10%
聚乙二醇2～10%。
7.根据权利要求1或2所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述发泡剂为十二烷基硫酸酯钠，所述增溶剂为水合硅石。
8.根据权利要求1或2所述的一种蜂毒牙膏，其特征在于：所述其它助剂包括质量百分比为0.05～0.5%的柠檬草精油。
9.一种如权利要求1-8任一所述的蜂毒牙膏的制备方法，包括以下步骤：步骤S1，将摩擦剂、发泡剂、增溶剂和胶黏剂混合，搅拌均匀，得到粉料混合物；在真空度为（-0.1～-0.2）MPa的条件下，将保湿剂、其他助剂和水混合，得到液体混合物；
步骤S2，控制真空度为（-0.1～-0.2）MPa的条件下，在液体混合物中加入粉料混合物，接着搅拌0.5～1.5h，得到膏体混合物；
步骤S3，在膏体混合物中加入复合抗菌肽，搅拌10～30min，接着在真空度为（-0.08～-0.1）MPa下搅拌3～8min，停止搅拌，并恢复至常压，得到蜂毒牙膏。
10.根据权利要求9所述的一种蜂毒牙膏的制备方法，其特征在于：所述其他助剂由柠檬草精油、香味剂、螯合剂、防腐剂和甜味剂组成，所述步骤S1具体为：
将摩擦剂、发泡剂、增溶剂和胶黏剂混合，搅拌均匀，得到粉料混合物；
将甜味剂和螯合剂与水混合，搅拌均匀，得到水相混合物；
将香味剂、防腐剂和柠檬草精油混合，搅拌均匀，得到油相混合物；
将保湿剂、水相混合物以及油相混合物混合，得到液体混合物；
步骤S1中，粉料混合物的制备、水相混合物的制备和油相混合物的制备不分先后顺序。
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