CN113461528A

CN113461528A - 一种苯氧酸类衍生物及其应用

Info

Publication number: CN113461528A
Application number: CN202110336215.0A
Authority: CN
Inventors: 阳泰; 广兵; 董韧涵; 谢建; 彭向阳; 刘进; 许高洁; 黄胜; 彭坚
Original assignee: Chengdu Medical College
Current assignee: Chengdu Medical College
Priority date: 2020-03-30
Filing date: 2021-03-29
Publication date: 2021-10-01
Anticipated expiration: 2041-03-29
Also published as: CN113461528B

Abstract

本发明涉及一种苯氧酸类衍生物及其应用。具体提供了一种式(I‑2)所示的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物。实验证明，式(I‑2)所示化合物与蛋白酶体抑制剂联用，不仅能够在体外有效抑制肿瘤细胞的生长，还能够在体内发挥协同增效的抗肿瘤活性，在制备治疗蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤的药物中具有非常好的临床潜力。

Description

一种苯氧酸类衍生物及其应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种苯氧酸类衍生物及其与蛋白酶体抑制剂联合使用作为抗肿瘤药物的用途。

背景技术

贝特类降脂药也就是苯氧芳酸类降脂药。其多数药物的译名中含有“贝特”二字，如氯贝特、苯扎贝特、非诺贝特等，故常将此类降脂药物称之为“贝特类”降脂药。此类药物口服后容易被肠道吸收，服药1-2小时后即可在血液中测得其药物浓度。它们可通过增强脂蛋白脂酶的活性加速脂蛋白的分解，同时也能减少肝脏中脂蛋白的合成，从而降低血脂。这类药物的突出作用是显著降低甘油三酯。

贝特类降脂药非诺贝特作为前药，其在体外是以稳定的酯的形式存在；进入体内后，其在体内酯酶的作用下会迅速代谢成非诺贝特酸，进而起到降血脂作用。研究发现，非诺贝特在体外细胞实验中显示了广泛的抗肿瘤活性；但是细胞实验体现的仅仅是非诺贝特前药对肿瘤细胞的体外抑制活性，想要在临床应用中发挥抗肿瘤效果，需要具有良好的体内抗肿瘤活性。目前已经有研究证明非诺贝特对肿瘤细胞的抗肿瘤活性优于其水解酸的形式，而非诺贝特进入体内会很快水解为酸的形式，导致非诺贝特的体内抗肿瘤活性也会因为体内酯酶水解作用而损失。因此，研发出能够在体内保留抗肿瘤活性的抗肿瘤药物具有非常重要的意义。

泛素蛋白酶体途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制。蛋白酶体超出正常水平会导致生长抑制的减弱、细胞凋亡的减少、以及促进血管生成，从而引发多种肿瘤疾病，因此蛋白酶体是抗癌等药物的重要靶点。蛋白酶体抑制剂能够通过阻断细胞蛋白酶体降解而抑制肿瘤细胞生长以及促进细胞凋亡。

尽管蛋白酶体抑制剂是治疗多发性骨髓瘤的革命性药物，但其应用仍有局限，例如：部分患者伴有原发耐药，或者药物治疗过程中出现继发性耐药；治疗窗口窄、存在剂量限制性不良反应等。目前，针对蛋白酶体抑制剂耐药机制进行研究，寻求其他有效治疗策略是多发性骨髓瘤以及其它肿瘤研究领域的重点和难点。因此，开发出对蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤具有优异的体内抗肿瘤活性的药物具有重要意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种苯氧酸类衍生物及其与蛋白酶体抑制剂联合使用作为抗肿瘤药物的用途。

本发明提供了一种式(I-2)所示的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物：

本发明还提供了一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物是以式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体为活性成分、或其氘代化合物，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

进一步地，所述药学上可接受的辅料选自稀释剂、填充剂、着色剂、助流剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、助悬剂或缓冲剂的任一种或两种以上；

和/或，所述药物单位制剂中包含的活性成分的量为0.5-500mg；所述制剂为口服制剂或注射制剂。

本发明还提供了一种抗肿瘤的联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物和蛋白酶体抑制剂，以及药学上可接受的载体。

本发明还提供了一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于：它包含式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物，以及蛋白酶体抑制剂。

进一步地，所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米、Ixazomib Citrate或MG-132。

进一步地，所述联合用药物或药物组合物单位制剂中包含的活性成分的量为0.5-500mg；所述联合用药物或药物组合物为口服制剂或注射制剂。

进一步地，所述蛋白酶体抑制剂为MG-132，所述联合用药物或药物组合物的单位制剂中，式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物与蛋白酶体抑制剂的质量比为(100～400)：1，优选为400:1、200:1或100:1；

或，所述蛋白酶体抑制剂为Ixazomib Citrate，所述联合用药物或药物组合物的单位制剂中，式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物与蛋白酶体抑制剂的质量比为300：(5～10)，优选为300:7。

本发明还提供了式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物在制备抗肿瘤药物中的用途；优选的，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、鼻咽癌、肾癌或结肠癌；更优选的，所述肿瘤为蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤。

本发明还提供了式(I-2)所示化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物与蛋白酶体抑制剂联用在制备上述抗肿瘤的联合用药物或药物组合物中的用途；优选的，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、鼻咽癌、肾癌或结肠癌；更优选的，所述肿瘤为蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤。

关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。

“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。

“盐”是将化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和/或碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。

“氘代化合物”是指化合物中的一个或多个氢被氘取代后得到的化合物。

本发明中所述的盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

MG132的结构为：

Ixazomib Citrate的结构为：

实验表明，本发明提供的苯氧酸类衍生物具有优异的抗肿瘤活性。此外，该苯氧酸类衍生物与蛋白酶体抑制剂联用，不仅能够在体外有效抑制肿瘤细胞的生长，还能够在体内发挥协同增效的抗肿瘤活性，在制备治疗蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤的药物中具有非常好的临床潜力。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为实验例3的测试结果，其中，A为各组小鼠的平均肿瘤体积，B为各组小鼠的平均体重。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

下面实施例中若无特殊说明，采用的方法为本领域常规方法。

实施例1本发明化合物I-2的制备

(1)化合物I-1的制备

取市售非诺贝特(S-1)15克(41.57mmol)悬浮在90ml甲醇里面；取氢氧化钠3.3克(82.50mmol)用30ml水溶解，慢慢加入到非诺贝特的甲醇溶液里面，升温到40℃搅拌反应10小时，反应体系澄清，TLC检测反应完全。加150ml水稀释反应液，用9ml浓盐酸调pH值至3，产品析出，继续搅拌10分钟，过滤得固体，固体再用30ml水洗涤一次，烘干得到化合物I-1，称重12.3克，收率93.1％。

ESI m/z：340.00[M+Na]⁺。

¹HNMR(DMSO，400MHz)：δppm：12.53(brs，1H)，7.68-7.72(m，4H),7.60-7.63(m，2H)，7.06-7.10(m，2H)，1.530(s，6H)。

(2)化合物I-2的制备

取4克化合物I-1(12.55mmol)用30ml四氢呋喃溶解，加入环己醇1.89克(18.87mmol)，冰水浴降温至5℃，分批加入3.88克DCC(18.80mmol)，加完后室温搅拌反应过夜。第二日TLC检测反应完全。加入2ml醋酸搅拌30分钟，破坏没反应完全的DCC，过滤。取滤液浓缩，浓缩后的体系用50ml乙酸乙酯溶解，依次用10ml碳酸钠溶液洗涤三次，用10ml0.5N的盐酸洗涤一次，用10ml饱和盐水洗涤一次，保留乙酸乙酯相，用5克硫酸钠干燥，过滤，取滤液浓缩，加石油醚，结晶，取固体烘干，得到化合物I-2，称重3.86克，收率76.7％，纯度98.7％。

ESI m/z：423.13[M+Na]⁺。

¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：δppm：7.79-7.68(m,4H),7.50-7.43(m,2H),6.92-6.85(m,2H),4.94-4.83(m,1H),1.85-1.72(m,2H),1.69(s,6H),1.61-1.21(m,6H)。

以下通过实验例证明本发明化合物的有益效果。

实验例1本发明苯氧酸类衍生物对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制活性检测

(1)实验方法

多发性骨髓瘤细胞MM.1S按照40000个细胞/孔，加入到平底96孔细胞培养板中。化合物最高浓度为100μM，按照5倍梯度做药物浓度稀释。化合物作用48小时后加入10μl CCK-8，孵育6h后，利用酶标仪测定450nM波长吸收值。药物对肿瘤细胞生长抑制率(GI50)计算方法按照美国国家癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)标准方法进行：当Ti(药物组，培养48h，CCK-8显色吸收OD值)≥Tz(不含药物组，培养起始时CCK-8显色吸收OD值)，肿瘤细胞存活率＝[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100，其中C为不含药物组48小时后CCK-8显色吸收OD值；当Ti<Tz时，肿瘤细胞存活率＝[(Ti-Tz)/Tz]×100。通过GraphpadPrism5.0计算测试样品对多发性骨髓瘤细胞增殖抑制活性的GI₅₀(drug concentration causing 50％growthinhibition)。

(2)实验结果

结果见表1。可以看出，与非诺贝特(S-1)相比，本发明的化合物I-2对多种多发性骨髓瘤细胞增殖具有更高的抑制活性。

此外，化合物I-1为非诺贝特(S-1)在人体内迅速水解后形成的酸性形式，由于体内存在大量的酯酶，施用非诺贝特(S-1)后，酯酶可以迅速将其水解为化合物I-1。根据表1可知，与其药物原形非诺贝特(S-1)相比，化合物I-1对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制活性显著降低，GI₅₀高达420-520μM。事实上，直接以目前市场上的贝特类降脂药进行体内肿瘤干预时，体内大都只保留抑制肿瘤细胞活性差的贝特酸的形式，没有明显抗肿瘤效果。而本发明合成的化合物I-2，在本身具有更高的抗肿瘤活性的同时，还不易被体内酯酶水解，有利于在体内长时间保持优异的抗肿瘤活性。

表1本发明化合物抑制多发性骨髓瘤细胞增殖试验结果

实验例2本发明苯氧酸类衍生物与蛋白酶抑制剂联用对多发性骨髓瘤细胞增殖的体外抑制活性检测

(1)实验方法

多发性骨髓瘤细胞MM.1S按照40000个细胞/孔，加入到平底96孔细胞培养板中。本发明待测化合物最高浓度为40μM，按照2倍梯度做药物浓度稀释至10μM；另外设计药物联合作用孔，本发明化合物按照上述药物浓度稀释，同时加入蛋白酶体抑制剂MG-132，其浓度为100nM；最后设置单用蛋白酶体抑制剂MG-132对照，浓度为100nM。化合物作用48小时后加入10μl CCK-8，孵育6h后，利用酶标仪测定450nM波长吸收值。通过使用CalcuSyn软件(Biosoft，Cambridge，UK)计算联合指数(CI)值来评估本发明化合物与蛋白酶体抑制剂MG-132的组合对细胞增殖的影响。基于中值效应原理，CI提供了多种药剂之间相互作用程度的定量测量。CI值<1，＝1和>1分别表示协同，叠加和拮抗作用；受影响的部分由细胞活力测定计算。

(2)实验结果

结果见表2。在本实验各浓度比例下，本发明苯氧酸类衍生物I-2和蛋白酶体抑制剂MG-132联用都具有明显的协同作用；而且，与非诺贝特(S-1)与MG-132联用的效果相比，本发明化合物和MG-132联用对肿瘤细胞的抑制活性更强。

表2本发明化合物与蛋白酶体抑制剂联用对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制试验结果

实验例3本发明苯氧酸类衍生物与蛋白酶体抑制剂联用对多发性骨髓瘤移植瘤的体内抑制作用

(1)实验方法

利用MM1.S多发性骨髓瘤细胞和SCID小鼠建立肿瘤模型：100μl 1640培养基重悬3×10⁷MM1.S细胞，并和100μl基质胶混匀。将上述200μl混匀体系注射至SCID小鼠(5周龄，雌性)右侧腹。6-7天后，在肿瘤注射部位形成可见大小(100mm3)，待肿瘤生长至大约800mm³左右，进行随机分组，组1，口服灌胃蛋白酶体抑制剂药物：Ixazomib Citrate(Ixa)(化合物用5％HPβCD进行溶解，给药剂量为7mg/Kg，一周两次)；组2，为联合用药组，口服灌胃给予本发明创造化合物I-2(化合物用5％HPβCD进行溶解)，每天一次、剂量为300mg/kg，同时给予蛋白酶体抑制剂药物-Ixa剂量为7mg/kg；组3为联合用药组，小鼠每天口服灌胃给予对照化合物-非诺贝特(S-1)(化合物用5％HPβCD进行溶解)，剂量为300mg/kg，同时给予蛋白酶体抑制剂药物Ixa剂量为7mg/kg。每天记录小鼠的体重及肿瘤体积，肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：V＝1/2×a×b²，其中a和b分别表示肿瘤的长和宽。

(2)实验结果

实验结果如图1。根据图1-A：治疗结束时，单独服用Ixa组小鼠的平均肿瘤体积为1753.33±761.05mm³，Ixa和S-1联合用药组小鼠的平均肿瘤体积为2217.94±1158.13mm³，Ixa和I-2联合用药组小鼠的平均肿瘤体积为600.55±655.193mm³。该结果说明Ixa和非诺贝特(S-1)联用的体内抗肿瘤效果反而比单独使用Ixa更差，而本发明化合物I-2与蛋白酶体抑制剂Ixa联用产生了明显的协同效应，与单用Ixa相比，差异显著(P＜0.05)。

进一步，Ixa和S-1联用没有体现出明显的体内抗肿瘤协同效应，这与实验例1的结果一致：I-1为非诺贝特(S-1)在人体内迅速水解为酸性的形式；由于体内存在大量的酯酶，可以迅速水解化合物S-1，使其成为抗肿瘤活性较差的贝特酸形式。

而本发明提供的苯氧酸类衍生物，在保留抗肿瘤活性的同时，其结构不易被体内酯酶水解而损失体内抗肿瘤活性。所以本发明化合物I-2同蛋白酶体抑制剂Ixa联用产生了明显的协同效应；与非诺贝特(S-1)蛋白酶体抑制剂联合用药组相比，差异显著(P＜0.05)。

此外，根据图1-B：化合物I-2同蛋白酶体抑制剂Ixa联用没有明显毒性，小鼠体重下降未超过20％。

上述实验结果表明，本申请提供的式(I-2)所示苯氧酸类衍生物不仅能够在体外有效抑制肿瘤细胞的生长，还能够在体内发挥协同增效的抗肿瘤活性。

综上，本发明提供了一种式(I-2)所示苯氧酸类衍生物，该苯氧酸类衍生物与蛋白酶体抑制剂联用，不仅能够在体外有效抑制肿瘤细胞的生长，还能够在体内发挥协同增效的抗肿瘤活性，在制备治疗蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤的药物中具有非常好的临床潜力。

Claims

1.一种式(I-2)所示的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物：

2.一种抗肿瘤药物，其特征在于：所述抗肿瘤药物是以权利要求1任一项所述化合物、或其盐、或其立体异构体为活性成分、或其氘代化合物，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

3.根据权利要求2所述的抗肿瘤药物，其特征在于：所述药学上可接受的辅料选自稀释剂、填充剂、着色剂、助流剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、助悬剂或缓冲剂的任一种或两种以上；

4.一种抗肿瘤的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的权利要求1所述化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物和蛋白酶体抑制剂，以及药学上可接受的载体。

5.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于：它包含权利要求1所述化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物，以及蛋白酶体抑制剂。

6.根据权利要求4或5所述的抗肿瘤的联合用药物或药物组合物，其特征在于：所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米、Ixazomib Citrate或MG-132。

7.根据权利要求4或5所述的抗肿瘤的联合用药物或药物组合物，其特征在于：所述联合用药物或药物组合物单位制剂中包含的活性成分的量为0.5-500mg；所述联合用药物或药物组合物为口服制剂或注射制剂。

8.根据权利要4或5所述的抗肿瘤的联合用药物或药物组合物，其特征在于：所述蛋白酶体抑制剂为MG-132，所述联合用药物或药物组合物的单位制剂中，权利要求1所述化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物与蛋白酶体抑制剂的质量比为(100～400)：1，优选为400:1、200:1或100:1；

或，所述蛋白酶体抑制剂为Ixazomib Citrate，所述联合用药物或药物组合物的单位制剂中，权利要求1所述化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物与蛋白酶体抑制剂的质量比为300：(5～10)，优选为300:7。

9.权利要求1所述化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物在制备抗肿瘤药物中的用途；优选的，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、鼻咽癌、肾癌或结肠癌；更优选的，所述肿瘤为蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤。

10.权利要求1所述化合物、或其盐、或其立体异构体、或其氘代化合物与蛋白酶体抑制剂联用在制备权利要求4～8任一项所述抗肿瘤的联合用药物或药物组合物中的用途；优选的，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、鼻咽癌、肾癌或结肠癌；更优选的，所述肿瘤为蛋白酶体抑制剂原发性或继发性耐药肿瘤。