CN113433325A - 血清vitronectin在AL型淀粉样变的诊断及疾病分期中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了医学诊断学技术领域的血清vitronectin(Vn)在AL型淀粉样变的诊断及疾病分期中的应用，该方法包括以下步骤：第一步：选取研究对象；第二步：收集并分离入选研究对象血浆；第三步：使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清vitronectin浓度，使用商品化的人vitronectin酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(货号L170419709，Cloud‑Clore Corp)进行检测；第四步：使用SPSS 20.0进行统计分析；第五步：临床应用：血清vitronectin浓度作为临床血清标记物，协助AL型淀粉样变的诊断及严重程度评估，本成果为AL型淀粉样变的临床诊疗提供了新的无创血清学诊断标志物血清vitronectin，可以检测出疾病及预测疾病严重程度，便于对患者进行及时、个体精准化治疗。
Description
技术领域
本发明涉及医学诊断学技术领域，具体为血清vitronectin在AL型淀粉 样变的诊断及疾病分期中的应用。
背景技术
AL型淀粉样变是一种蛋白质异常折叠疾病，异常的浆细胞克隆产生异常 的免疫球蛋白轻链或片段，异常折叠形成淀粉样纤维丝沉积于全身多个组织 和器官。发病率低，AL型淀粉样变性病发病率占0.3/10万人口，但由于缺乏 有效的治疗手段，中位数生存时间仅为20.4个月，5年生存率是19.6％，致 死率很高。由于发病隐匿，许多AL型淀粉样变性病患者起病时已有多器官受 累、处于疾病晚期，从而失去了治疗时机。早期诊断和早期治疗至关重要， 寻找无创性的早期诊断、疾病分期的诊断标志物可让患者临床获益。
我们的前期研究利用显微切割-质谱分析的蛋白组学方法，在AL型淀粉 样变的肾组织中沉积的淀粉样蛋白中检测到了大量的vitronectin(Vn)，而 正常瘤旁肾组织对照中未检测到vitronectin，提示vitronectin可能参与淀 粉样变性病的蛋白质异常折叠。早在上世纪80年代Dahlback等人利用免疫 组化方法发现vitronectin沉积于肾脏淀粉样沉积物中，2015年，Casadonte 和Winter利用质谱分析对沉积于组织的淀粉样物质进行分析，发现 vitronectin可沉积于不同类型的淀粉样纤维丝中，包括AApoAI、ALλ、ATTR 型淀粉样变。Shin等人的研究提示vitronectin可异常折叠形成的寡聚物或 者纤维丝结构可作为nidus，加速了淀粉样纤维形成最初阶段的成核作用。以 上研究提示vitronectin广泛沉积于淀粉样沉积物中，vitronectin在淀粉样 纤维丝形成过程中起着重要的作用。
Vitronectin(Vn)，又称S蛋白，是一种存在于血液、羊水、尿液和部 分组织的多功能粘附蛋白，血清中的含量为0.1-0.4mg/ml，主要由肝细胞产 生，此外视网膜、脑组织、血管平滑肌细胞、血小板、单核细胞、巨噬细胞 及成纤维细胞均可产生少量的Vn。Vn为含有478个氨基酸的单链多肽，其编 码基因位于17号染色体q11位置，长4.5-5kb，由8个外显子和7个内含子 组成，根据vitronectin的功能特性，将vitronectin分为5个区域。根据 其功能区域，vitronectin生理条件下主要参与细胞粘附、凝血功能、免疫防 御等。
但血清vitronectin如何参与组织淀粉样纤维丝的形成？血清 vitronectin水平是否可对淀粉样变的诊断和严重程度进行预测，既往尚未被 研究。因此，本研究为首次评估血清vitronectin与淀粉样变的相关性极其 诊断价值。
发明内容
本发明的目的在于提供血清vitronectin在AL型淀粉样变的诊断及疾病 分期中的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：血清vitronectin在AL型 淀粉样变的诊断及疾病分期中的应用，该方法包括以下步骤：
第一步：选取研究对象，并签署研究知情同意书；
第二步：收集并分离入选研究对象血浆；
(1)抽取研究对象外周血5ml，放置于惰性分离胶促凝管；
(2)离心1000g×5min；
(3)取上层血清并分装至Eppendorf管；
第三步：使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清vitronectin浓度，使 用商品化的人vitronectin酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(货号 L170419709，Cloud-CloreCorp)进行检测；
第四步：使用SPSS 20.0进行统计分析；
(1)对比不同疾病组、不同Mayo分期组(使用Mayo分期对疾病严重程 度进行评估)血清vitronectin水平；
(2)使用ROC曲线分析方法选择最佳的血清vitronectin诊断界限值：
第五步：临床应用：血清vitronectin浓度作为临床血清标记物，协助 淀粉样变的诊断及严重程度评估。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本成果为AL型淀粉样变的临床 诊疗提供了新的无创血清学诊断标志物：血清vitronectin，可以检测出疾病 及预测疾病严重程度，便于及时对患者进行及时、个体精准化治疗。
附图说明
图1为本发明AL型淀粉样变和疾病对照组的血清vitronectin(Vn)水 平示意图；
图2为本发明不同Mayo分期组血清vitronectin水平示意图；
图3为本发明ROC分析示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行 清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而 不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做 出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-3，本发明提供一种技术方案：血清vitronectin在AL型淀粉 样变的诊断及疾病分期中的应用，该方法包括以下步骤：
第一步：选取研究对象，并签署研究知情同意书；
第二步：收集并分离入选研究对象血浆；
(1)抽取研究对象外周血5ml，放置于惰性分离胶促凝管；
(2)离心1000g×5min；
(3)取上层血清并分装至Eppendorf管；
第三步：使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清vitronectin浓度，使 用商品化的人vitronectin酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(货号 L170419709，Cloud-CloreCorp)进行检测；
第四步：使用SPSS 20.0进行统计分析；
(1)对比不同疾病组、不同Mayo分期组(使用Mayo分期对疾病严重程 度进行评估)血清vitronectin水平；
(2)使用ROC曲线分析方法选择最佳的血清vitronectin诊断界限值：
第五步：临床应用：血清vitronectin浓度作为临床血清标记物，协助 淀粉样变的诊断及严重程度评估；
具体的方法：本研究收集了经肾活检确诊的AL型淀粉样变性病患者85 例、疾病对照组117例(膜性肾病31例、IgA肾病32例、狼疮性肾炎29例、 糖尿病肾病25例)的血标本及临床资料并随访，对比AL型淀粉样变不同治 疗方案的有效性及安全性，使用ELISA法检测血清vitronectin浓度；
结果：AL型淀粉样变的平均血清vitronectin水平(65207.8±23846.8ng/ml)显著低于肾炎对照组(IgA肾病72174.2±16549.8ng/ml，狼 疮性肾炎80334.8±29091.8ng/ml，膜性肾病100198.2±39676.9ng/ml，糖 尿病肾病72575.9±9764.7ng/ml，具体见图1)，且Mayo分期越严重，血清 vitronectin水平越低(见图2)。AL型淀粉样变中，血清vitronectin水平 与血肌酐水平(r＝-0.403，P＝0.007)、血浆白蛋白(r＝-0.326，P＝0.031)、 血红蛋白(r＝-369，P＝0.014)呈负相关，与eGFR呈正相关(r＝-0.323，P＝0.035)。 ROC曲线分析提示，血清vitronectin＜62398ng/ml可以预测诊断AL型淀粉 样变性病的特异度为79.1％，敏感度为60.0％，曲线下面积为0.74(见图3)。
结论：AL型淀粉样变性患者的血清vitronectin水平显著低于其他肾病 组，且疾病越严重(Mayo分期)、血清vitronectin水平越低。血清vitronectin ＜62398ng/ml可以预测诊断AL型淀粉样变性病的特异度为79.1％，敏感度为 60.0％。
图1中为AL型淀粉样变(AL)血清Vn为65207.8±23846.88ng/ml，IgA 肾病(IgA)血清Vn为72174.2±16549.8ng/ml，狼疮性肾炎(LN)血清Vn 为80334.8±29091.8ng/ml，膜性肾病(MN)血清Vn为100198.2± 39676.9ng/ml，糖尿病肾病(DN)血清Vn为72575.9±9764.7ng/ml；
图2中为Mayo分期越严重，血清vitronectin水平越低；
图3中为ROC分析：血清Vn＜62398ng/ml可以预测诊断AL型淀粉样变 性病的特异度为79.1％，敏感度为60.0％，曲线下面积为0.74。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而 言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行 多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限 定。
Claims (1)
1.血清vitronectin在AL型淀粉样变的诊断及疾病分期中的应用，其特征在于：该方法包括以下步骤：
第一步：选取研究对象，并签署研究知情同意书；
第二步：收集并分离入选研究对象血浆；
(1)抽取研究对象外周血5ml，放置于惰性分离胶促凝管；
(2)离心1000g×5min；
(3)取上层血清并分装至Eppendorf管；
第三步：使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清vitronectin浓度，使用商品化的人vitronectin酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(货号L170419709，Cloud-Clore Corp)进行检测；
第四步：使用SPSS 20.0进行统计分析；
(1)对比不同疾病组、不同Mayo分期组(使用Mayo分期对疾病严重程度进行评估)血清vitronectin水平；
(2)使用ROC曲线分析方法选择最佳的血清vitronectin诊断界限值；
第五步：临床应用：血清vitronectin浓度作为临床血清标记物，协助AL型淀粉样变的诊断及严重程度评估。
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