CN113430239B - 一种用于提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料，属于刺参饲料技术领域。本发明提供了一种长吻沙蚕多肽的制备方法，使用该制备方法制备的长吻沙蚕多肽饲喂刺参可以有效的促进刺参的生成和非特异性免疫，因此可将长吻沙蚕多肽用于制备提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料。
Description
技术领域
本发明属于刺参饲料技术领域，尤其涉及一种用于提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料。
背景技术
海参属于棘皮动物门中的海参纲，全世界已经发现的海参类型目前约有1200种，在中国的海域中越分布着140多种，主要集中于烟台，威海，大连，北戴河等沿海区域。刺参是我国食用海参中质量最好的一种。为海味 “八珍”之一。
刺参是糖类丰富，蛋白质含量高的珍贵海产品，并且其含有人体所必须的钙，镁和锰等微量元素，因此其具有十分高的药用和食用价值。现代医学已经证明，刺参所含有的酸性黏多糖能够有效的促进人体的成骨、生长和创伤愈合等。同时，刺参中的精氨酸含量高，是合成人体胶原蛋白的重要原料。其次，刺参还具有抗凝血、抗肿瘤等药理作用。
随着人民生活水平的不断提高，对刺参的需求量也呈现出逐年递增的态势。刺参的人工养殖也就随之兴起。在刺参的人工养殖的过程中，细菌、真菌和寄生虫是刺参健康的最大威胁，传统的防治方式是使用抗生素，但是长期使用抗生素将导致产生细菌耐药和药物残留的问题。因此开发新的具有免疫增强作用的饲料添加剂具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种长吻沙蚕多肽的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
其次，本发明提供了长吻沙蚕多肽在制备促进刺参生长的饲料中的应用。
优选地，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
其次，本发明提供了长吻沙蚕多肽在制备刺参蛋白酶活性促进剂中的应用。
优选地，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
其次，本发明提供了长吻沙蚕多肽在制备刺参免疫促进剂中的应用。
优选地，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
其次，本发明提供了长吻沙蚕多肽在制备刺参溶菌酶和超氧物歧化酶促进剂中的应用。
优选地，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末之后，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
最后，本发明提供了一种用于提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料，其特征在于，所述多肽饲料包括长吻沙蚕多肽和基础饲料；
所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末之后，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
本发明的有益效果是：
本发明提供了一种长吻沙蚕多肽的制备方法，使用该制备方法制备的长吻沙蚕多肽饲喂刺参可以有效的促进刺参的生成和非特异性免疫，因此可将长吻沙蚕多肽用于制备提高刺参生长和免疫能力的多肽饲料。
附图说明
图1 饲喂长吻沙蚕多肽后刺参的增量率；
图2 饲喂长吻沙蚕多肽后刺参蛋白酶活性；
图3 饲喂长吻沙蚕多肽后刺参溶菌酶活性；
图4 饲喂长吻沙蚕多肽后刺参超氧物歧化酶活性。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
实施例1
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，使用研磨器研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，充分的搅拌均匀；
（2）搅拌均匀后加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，恒温酶解4小时；
（3）将水浴加热的温度调节为95℃，恒温加热30min，使碱性蛋白酶充分裂解；
（4）置于离心机中10000rpm/min离心20min，将上清转移至新的离心管中；
（5）使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将得到的长吻沙蚕精提取液放入真空冷冻干燥机中，即得到长吻沙蚕多肽。
实施例2
沙蚕多肽对于刺参生长的影响
（1）取9g左右的刺参100头，平均分为2组，其中，A组饲喂基础饲料，B组饲喂5g/kg沙蚕多肽，除饲料差异外其他条件完全相同；
（2）饲养60天后（每15天更换一次养殖筐），将刺参全部捞出，从A组和B组中分别随机挑选出15头刺参放置在洁净的泡沫板上，待其自然舒展后称量总重，计算增重率。
具体的结果表1和图1所示：
表1 沙蚕多肽对于刺参生长的影响
| A组 | B组 | |
| 初始体质量g | 9.11 ±0.05 | 9.10 ±0.05 |
| 末体质量g | 15.43 ±0.30 | 19.77 ±0.41 |
| 增重量g | 6.32 ±0.30 | 10.67 ±0.42 |
| 增重率% | 69.64±3.28 | 117.20±4.49 |
从上述结果和图1可以看出，饲喂沙蚕多肽后，刺参的增重率由69.64±3.28%增加到了117.20±4.49%，且差异具有统计学意义。该结果说明使用沙蚕多肽饲喂刺参能够有效的促进刺参的生长。
实施例3
沙蚕多肽对于刺参蛋白酶活力的影响
（1）从实施例2中的A组和B组中随机选取5头饲养后的刺参，无菌解刨取出消化道；
（2）剔除呼吸树和肠系膜上的脂肪组织，使用去离子水冲洗干净；
（3）将肠组织置于玻璃匀浆器中，加入4倍体积预冷的超纯水，在冰浴条件下匀浆20min；
（4）置于高速冷冻离心机中离心30min，上清液即为肠道消化酶提取液；
（5）使用蛋白酶检测试剂盒检测蛋白酶活力，蛋白酶活力定义为：在一定PH温度下，每分钟水解酪蛋白产生1ug酪氨酸为1个酶活力单位（U=ug/min）。
得到的实验结果表2和图2所示：
表2沙蚕多肽对于刺参蛋白酶活性的影响
| A组 | B组 | |
| 蛋白酶活性（U/mg） | 32.01±1.07 | 42.59±0.97 |
从表2和图2可以看出，饲喂沙蚕多肽后，刺参消化道中的蛋白酶活性由32.01±1.07提高到了42.59±0.97。该结果说明沙蚕多肽能够有效的促进刺参的蛋白酶活性，从而促进刺参的消化吸收。
实施例4
沙蚕多肽对于刺参非特异性免疫的影响
（1）从A组和B组中分别取出5只饲养结束的刺参，从刺参腹部靠近肛门越1cm处抽取体腔液500ul；
（2）4000r/min离心10min，去上清至新的离心管中，使用溶菌酶检测试剂盒和超氧物歧化酶检测试剂盒检测A组和B组间非特异性免疫因子溶菌酶和超氧物歧化酶的差异。
实验结果如表3和图3和图4所示，
表3沙蚕多肽对于刺参非特异性免疫因子的影响
| A组 | B组 | |
| 溶菌酶（U/ml） | 30.40±1.85 | 77.22±4.60 |
| 超氧物歧化酶（U/ml） | 103.18±2.96 | 138.53±4.06 |
从表3，图3和图4可知，饲喂沙蚕多肽后，刺参的溶菌酶活性由30.40±1.85提高到了77.22±4.60，差异具有统计学意义，刺参的超氧物歧化酶活性由103.18±2.96提高到了138.53±4.06，差异也具有统计学意义。该结果说明沙蚕多肽能够有效的促进刺参非特异性免疫因子溶菌酶和超氧物歧化酶的活性。
Claims (4)
1.长吻沙蚕多肽在制备促进刺参生长的饲料中的应用，其特征在于，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
2.长吻沙蚕多肽在制备刺参蛋白酶活性促进剂中的应用，其特征在于，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
3.长吻沙蚕多肽在制备刺参免疫促进剂中的应用，其特征在于，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
4.长吻沙蚕多肽在制备刺参溶菌酶和超氧物歧化酶促进剂中的应用，其特征在于，所述长吻沙蚕多肽的制备方法包括如下步骤：
（1）将长吻沙蚕清洗干净后，研磨成粉末之后，加入5倍量的蒸馏水，搅拌均匀后得到长吻沙蚕匀浆液；
（2）在所述长吻沙蚕匀浆液中加入0.05倍量的碱性蛋白酶，将PH值调节为9.5，水浴加热温度调节为45℃，酶解4小时，得到长吻沙蚕酶解液；
（3）将所述长吻沙蚕酶解液的水浴加热温度调节为95℃，恒温加热30min，得到长吻沙蚕灭酶酶解液；
（4）将所述长吻沙蚕灭酶酶解液置于离心机中离心，得到的上清即为长吻沙蚕提取液；
（5）将所述长吻沙蚕提取液使用0.4μm微滤膜进行过滤，得到长吻沙蚕精提取液；
（6）将所述长吻沙蚕精提取液进行冷冻干燥，即得到长吻沙蚕多肽。
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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