CN113425752A - 复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺 - Google Patents
复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113425752A CN113425752A CN202110763976.4A CN202110763976A CN113425752A CN 113425752 A CN113425752 A CN 113425752A CN 202110763976 A CN202110763976 A CN 202110763976A CN 113425752 A CN113425752 A CN 113425752A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cells
- culture
- cell
- water
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 241001149649 Taxus wallichiana var. chinensis Species 0.000 title claims abstract description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 21
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 176
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 36
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 34
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241001116500 Taxus Species 0.000 claims abstract description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 45
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 22
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 18
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 18
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 17
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 16
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 15
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 14
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 13
- 239000000306 component Substances 0.000 claims description 13
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 12
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 claims description 10
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 10
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical class O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 10
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 claims description 9
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 claims description 9
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 9
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 9
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 9
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 claims description 9
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 9
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 9
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 9
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 8
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 8
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims description 8
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 claims description 7
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 claims description 7
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 7
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 6
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 6
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 6
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 6
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- MKWYFZFMAMBPQK-UHFFFAOYSA-J sodium feredetate Chemical compound [Na+].[Fe+3].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O MKWYFZFMAMBPQK-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 6
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 claims description 6
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 claims description 6
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 6
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims description 6
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 6
- GEWDNTWNSAZUDX-WQMVXFAESA-N (-)-methyl jasmonate Chemical compound CC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](CC(=O)OC)CCC1=O GEWDNTWNSAZUDX-WQMVXFAESA-N 0.000 claims description 5
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 claims description 5
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- MMDJDBSEMBIJBB-UHFFFAOYSA-N [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[NH6+3] Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[NH6+3] MMDJDBSEMBIJBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002363 auxin Substances 0.000 claims description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- GEWDNTWNSAZUDX-UHFFFAOYSA-N methyl 7-epi-jasmonate Natural products CCC=CCC1C(CC(=O)OC)CCC1=O GEWDNTWNSAZUDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 claims description 5
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 claims description 4
- 240000005020 Acaciella glauca Species 0.000 claims description 3
- 241001474374 Blennius Species 0.000 claims description 3
- 239000005747 Chlorothalonil Substances 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 3
- VGPSUIRIPDYGFV-UHFFFAOYSA-N [N].O[N+]([O-])=O Chemical compound [N].O[N+]([O-])=O VGPSUIRIPDYGFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 3
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 3
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 claims description 3
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 claims description 3
- CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N chlorothalonil Chemical compound ClC1=C(Cl)C(C#N)=C(Cl)C(C#N)=C1Cl CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 claims description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 3
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012533 medium component Substances 0.000 claims description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 3
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 3
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 3
- 235000003499 redwood Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000007711 solidification Methods 0.000 claims description 3
- 230000008023 solidification Effects 0.000 claims description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 3
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 2
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 11
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 10
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 10
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 10
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 10
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 8
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 8
- -1 ammonium sulfate) Chemical compound 0.000 description 8
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 7
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 7
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 6
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 6
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 6
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 5
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 241001674343 Taxus x media Species 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 description 2
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 2
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 2
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPKSPKHJBVJUKB-UHFFFAOYSA-N N-phenylglycine Chemical compound OC(=O)CNC1=CC=CC=C1 NPKSPKHJBVJUKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 description 2
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 description 2
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 description 2
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 description 2
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 2
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012007 large scale cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- OYSBZLVHMPNJMR-UHFFFAOYSA-N pyridine-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1.OC(=O)C1=CC=CN=C1 OYSBZLVHMPNJMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 230000009946 DNA mutation Effects 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/13—Coniferophyta (gymnosperms)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0025—Culture media for plant cell or plant tissue culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，步骤1：红豆杉离体材料的制备。有益效果在于：本发明所制备的细胞系提取物中不存在任何化学残留，且提取物中细胞很少破坏，不仅对刺激和激活受损及细胞功能紊乱有较好的修补并促使其功能化的作用，而且对提高患者各免疫细胞活力松驰血管内皮细胞Ca*‑N0‑.GMP的途径，还能够有效的清除体内DPPH、02、NO等强氧化自由基，多次重复试验证明本发明细胞系提取物，对脂质过氧化的现象明显减轻，还能够养心、护心、强心的作用，同时对抵抗乙肝病毒生长与复制，抗放射作用、抗血栓、杭血凝、降脂、降压、降血糖、降低胆固醇及甘油三酯有显著的功效。
Description
技术领域
本发明涉及到红豆杉干细胞与抗癌物提取技术领域，尤其涉及复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺。
背景技术
红豆杉无毒提取紫杉醇比其它植物生物碱要好的多，但紫杉醇中含有等量的有毒成分“豆杉精油”虽然患者注射或口服后其能够耐受,但必定会给患者造成不安全隐患。多年的实验证明，口服或注射10天后，患者体内的细胞量值会逐步下降因而会引起免疫力低下，贫血等其它疾病。
癌细胞之所以能够在体内生成和飞快的生长，主要是体内细胞DNA突变，导致细胞变异，紫杉醇虽然抗癌作用较好，但仍然解决不了基因变异致癌的有效性，同时，在有关癌症的发生机制的药物研发及治疗的研究上，世界各国高端研究机构己经付出了高昂的研究费用，至目前世界各国临床治癌方面表明，癌症还仍然被示为不可治愈的恶性疾病，并且包括白血病在内的各种癌症的治疗，都会引起一系列的毒副作用反应，因此，己经付出了极大努力来研究并开发用于抵制癌症的新药和各种制剂，特别是中国的中医药具有多方面调节而副作用小，来自天然材料的抗癌物质的开发已经引起了世界各国的兴趣。
本发明提供能够必免去分化而引起的变异问题，也就是形成层细胞系的解决方法，其可使细胞稳定增殖并具有较高的遗传稳定性，当对这些细胞系中红豆杉的内皮细胞系进行培养时，并以很高产量得到紫杉醇。
因此，本发明多年来付出了极大的努力研发来自天然植物干细胞的抗癌组合物，其与从红豆杉中提取紫杉醇的其它植物抗癌药物相比具有副作用小，能够佼正人细胞基因电子频率的紊乱并能修复受损的细胞DNA，显示出了强烈的抗癌细胞杀死活性。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，它包括以下步骤：
步骤1：红豆杉离体材料的制备
收集红豆杉茎，切成4-5cm长的段4-5块，立即浸泡在210mg/2L的抗氧化剂、L-抗坏血酸溶液中5分钟，在放入1％的苯菌灵、1％的百菌清、1％的头孢氨苄的混合溶液中，将离体材料灭菌预处理20小时，然后用无菌磁化水洗涤30分钟，在放入75％的乙醇液中杀菌2分钟，取出在放进30％的过氧化氢液中在杀菌16分钟，在用蒸馏水冲洗10分钟；
步骤2：从离体材料中分离形成层及培养
(1)将灭菌的离体材料用接种刀沿着离体材料的长度方向将皮层切开，除去外皮组织和木质茎芯，将外皮内的最内侧内皮组织，也就是韧皮部取下，放入固态培养基上，在受控暗室内培养，培养温度25±1度；
(2)形成层细胞的诱导，在整个培养过程中保持25土1度的恒温，瓶外培养的空间湿度在86±1左右，形成层细胞诱导29天；
步骤3：固态培养基成分的组成
硝酸钾1010mg/L，硫酸镁120mg/L，硫酸锰9.5mg/L，硫酸锌2mg/L，氯化钙113mg/L，硫酸铜0.023mg/L，碘化钾0.72mg/L，磷酸二氢钠130mg/L，氯化钻0.023mg/L，硼酸3.1mg/L，钼酸钠0.24mg/L，乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L，肌醇452mg/L，盐酸噻胺(VB)21mg/L，吡哆醇(VB)l.9mg/L,尼克酸1.9mg/L，L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸114mg/L，光氨酸170mg/L，酪蛋白水解物510mg/L，蔗糖30.100mg/L，2，4-D2.5mg/L，赤霉素0.6mg/L，琼脂39.000mg/L，活性碳3000mg/L，磁化水1升；
步骤4：传代培养
将培养29天的形成层细胞用接种铲将其移入烧瓶液态培养基内，在受控暗室中，用旋转摇床，以100rpm，25±1度下培养，传代时间设定为20天，使用的培养液见下表；
步骤5：液态培养基成分的组成
硝酸钾1010mg/L，硫酸镁120mg/L，硫酸锰9.5mg/L，硫酸锌2mg/L，氯化钙113mg/L，硫酸铜0.023mg/L，碘化铆0.72mg/L，磷酸二氢钠130mg/L，氯化钴0.023mg/L，硼酸3mg/L，钼酸钠0.24mg/L，乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L,肌醇200mg/L，盐酸噻胺(VB)21mg/L，吡哆醇(VB)1.9mg/L，尼克酸1.9mg/L，L-抗坏血酸110mg/L，柠檬酸148mg/L，2，4-D2.5mg/L，赤霉素0.1mg/L，天冬氨酸134mg/L，精氨酸180mg/L，脯氨酸118mg/L，甘氨酸60mg/L，色氨酸80mg/L,蔗糖21.000mg/，麦饭石2000mg/L，锗石2000mg/L，磁化水1升；
步骤6：气升式生物反应器中放大培养
将传代培养20天的细胞系移入3升的气升式生物反应器中继续放大培养，不间断搅拌，培养液使用烧瓶液态培养基相同的培养液，培养温度为25±1度，培养12天后，在向生物反应器内加入蔗糖10g，甲基茉莉酮酸酯50mg，N-苯酰甘氨酸50mg以及0.5升无菌磁化水的混合，在继续培养10天；
步骤7：细胞系的提取物制备
(3)将培养22天的细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤，将截留的大分子团取出，放入一玻璃容器内，注入含量为75％的乙醇0.5升，放入40HZ的超声波清洗机内，超声粉碎大分子团细胞系，然后二次超滤，然后再用95％的乙醇4升冲洗超滤柱；
将滤过的全部乙醇、细胞混合液，经另一容器内快速搅拌3小时，在进行间接加热80度进行旋转吸空蒸发，浓缩至小于原体液五分之一时取出，在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥，30小时后，在含水分小于3％以下时取出，粉碎100目，装入铝泊袋内真空封口，冷藏存放，待用，即成为复方(红互杉)植物干细胞与抗癌物的功能性产品。
进一步的，本发明无机盐类包括植物细胞生长所需的氮、磷、钾、钙、镁、硫等大量元素及铁、锰、锌、铜、硼、碘、钼、钴等微量元素，大量元素几乎在任何配方培养基中都是不可缺少的，它们是植物生长所需的最基木的矿物质营养，其中氮元素是植物细胞合成蛋白质的主要成分，又是细胞生长多种酶的重要组成部分，常用的氮源有硝酸氮(硝酸钾)和胺态氨(如硫酸铵)，蛋白质水解物(如水解酪蛋白等)也可以作为植物形成层细胞组织中氮源的补充，当单独使用铵态氮时，其离子浓度应<7毫摩尔/升，当单独使用硝态氮时，硝酸根的离子浓度以≤25毫摩尔/升为宜。
进一步的，磷元素是植物细胞的主要成分之一，许多的重要生理活性物质如磷脂,核酸、酶及维生素中都含有酶，磷在植物碳水化合物的移动和代谢中起到极其重要的作用，磷能直接参与呼吸和发酵过程，提高植物体及细胞蛋白氮的含量；钾元素在植物离体内对维持原生质体系统和细胞液的缓冲系统具有重要作用，钾与培养基中的碳水化合物的合成和运转有着极密切的关系，钾还具有活化许多种酶的功能以及调节PH值的作用；钙、镁、硫这些大量的元素常影响培养物中酶的活性和方向，影响新陈代谢过程，常用的钙有硝酸钙、氮化钙、磷酸钙等，常用的镁是硫酸镁，硫为各种硫酸镁，硫为各种硫酸盐。
进一步的，本发明中微量元素，微量元素用量一般在105-107克分子浓度以下，植物细胞对这些元素的需要量极微，稍多即发生毒害作用，微量元素包括铁、锌、锰、铜、硼、钼、钴等；其中铁元素是极为重要的一种微量元素，它是多种氮化酶的组成部分，与离体材料及细胞的氧化一还原过程有着密切的关系；其中铜元素具有促进离体不定根生长作用与愈伤组织愈合后，能促使细胞快速生长与萌发；其中锰元素是细胞许多氧化原酶的重要成分，参与体内氧化还原过程；其中硼元素是细胞参与各养分及碳水化合物的过程，与蛋白质合成有一定的关系；其中锌元素是细胞合成某种氨基酸所必需的元素，也是间接合成生长素的元素；其中钴元素能抑制离体材料褐化，是许多单化合物细胞可交换的化合反应本发明中固态培养基中和有机物质；在培养中应用的有机物质,有维生素和氨基酸两大类，另外还有肌醇、盐酸胺(VB1)、尼克酸(烟酸)、吡哆醇)(VB6)以及其它附加物；其中维生素可直接参与植物细胞生命活动最重要的过程，如醇的合成，细胞蛋白质和脂肪的代谢等等，植物离体材料的培养物自身虽有合成维生素的能力，但还不能满足其细胞快速生长需求，因此，在培养基中常添加一些维生素以保证培养物形成层细胞的快速生长和一些器管的分化。
进一步的，本发明中的氨基酸中水解蛋白和精氨酸是植物离体材料培养的补充氨源，能够促进蛋白质的合成，同时各种氨基酸都各有特定的作用，如水解酪蛋白用在固态或液态培养基中，用于植物细胞的繁殖，能不同层度地替代酪氨酸，对培养物的胚状体和不定芽的分化能起良好的促进作用，同时用于液态培养基中可有效的使紫杉醇化合物的转化合。
进一步的，其中肌醇(环乙六醇)本身虽没有什么直接的生长促进作用，但能协助其它活性物质发挥出作用的效果，并能参与糖的代谢，间接促进不定胚细胞的生长；其中糖类为蔗糖，糖作为碳源在植物材料组织层培养中是不可少的，常用的糖有蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨等，但本发明中的培养基采用蔗糖为好，它对红豆杉组织培养时能增进细胞生长的作用要好于其它糖种。
进一步的，植物生长素赤霉素(GS)2.4-D是本发明中培养基内促进植物细胞生长至关重要的激进元素，尤其对细胞形态健成起着极其重要而明显的作用，其中活性碳，植物离体配料的，形成层细胞系的形成，这一培养过程似乎比较简单，但是在某些木本植物尤期是红豆杉离体料的内皮组织培养过程中常会出现许多困难，这里需要特别加以红豆杉离体内皮组织容易褐化主要原因是通过含铜的氧化酶如多酚氧化酶和酪氨酸酶等起作用所致，其作用的底物通常是酪氨酸和邻位羟酚尖化合物如绿原酸等，酶和底物在植物正常生长的情况下是在组织的不同部位，当细胞受伤组织垂死时，酶和底物就会聚集在一起发生作用，当酚被氧化为活性酸化物和环形多聚体氧化蛋白时便会形成深色的化合物，这些物质又很快被氧化和变成复杂的抑制性物质，从而导致红豆杉离体内皮材料变褐死亡并导致培养诱导失败，本发明中的固化剂-琼脂是从海藻中提取出来的一种凝胶性物质，植物及细胞并不能利用它，但由于具有无毒、可塑、遇热溶化、冷却后固形化，可使各种养分均匀地扩散分布等特性。
进一步的，本发明中磁化水是一种普通自来水经4600高斯NS极磁场通过后，形成的一种带有磁记忆的小分子活性水，利用磁化水制备固态培养基或液态培养基具有比自来水，山泉水等水源的活性，张力、渗透性压要强十几倍，磁化后的小分子活性水，能够激活受损的组织细胞修复再生能力，能够佼正受损的细胞电子频率的紊乱，带有磁记忆的小分子活性水包含着培养基中各营养物质快速渗透到培养组织中，对促进细胞生长，形成层形成具有较好的作用。
进一步的，本发明在分离组织细胞系之后，用于诱导来自离体材料形成层细胞系的优选固态培养基在下表1所示：
表1：优选用于曼地亚红豆杉离休材料诱导细胞系的固态培养基
通过在表1的培养基中培养29天后，组织细胞系增量放大，形成层细胞系与韧皮组织分离，细胞系组织有大量的液泡存在，并且接触后易碎，这时，将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入烧瓶液态培养基内，在暗室中，用旋转摇床，以100rpm、25±1度下培养，传代时间设定为20天，使培养基的干细胞指数在生长期内始终从保持极高的活力。
在如上所述形成层细胞系移入烧瓶中液态培养基的组合成分在下表2所示。
通过培养基表2烧瓶内的形成层细胞系观查，使用生物学显微镜观查细胞聚集的程度，结果，如下表3所示，可以看到悬浮液培养时细胞系超过94％的细胞是以单细胞形式存在，而细胞系的形态特征存在大量的液泡，处在未分化状态；
表3:红豆杉经长期培养的细胞聚集状
结果，从表3中可以看出，烧瓶内悬浮培养液中的细胞系的细胞没有出现大细胞群和中等细胞群团块连接的状态，仅有小量的小细胞聚集，而绝大部分细胞均呈单个细胞状态下生长在培养液中，说明，培养状态良好；
同时，为了实施大规模细胞培养的可能性，将来自曼地亚红豆杉愈伤组织形成层的烧瓶内的细胞系移入3升的气升式生物反应器中放大培养；
培养液使用表2中的液体培养基，在受控暗室中25±1度下不间断搅拌形式进行。结果，看到细胞培养物在生物反应器中细胞增量时间为3天，这与在烧瓶中悬浮培养增量时间12天提前了9天，而且细胞系显示了大约6-7倍的生长速度；这与生长环境放大、加_上在液态培养基中使用小分子磁化活性水、添加了具有内含几十种天然微量元素的麦饭石含有锗元素的矿石的原故有关；小分子活性水能增强细胞活力，麦饭石、锗石中固含几十种天然的微量元素，经液流不间断的冲击而冲刷下来溶于培养液中，使培养后期的细胞系细胞群得到天然、安全和足够利用的微量元素的补充；同时，植物细胞群的聚集降低也与生物反应器内钢壁对剪切细胞应力的敏感性而使细胞聚集下降有直接关连。
在生物反应器内培养12天的形成层细胞系培养液中，在加入蔗糖10g和甲基茉莉酮酸酯50mg，N-苯酰甘氨酸50mg，无菌磁化水0.5升的混合液，在暗室中不间断搅拌，继续培养10天。加入上述混合液的目的是可有效的诱导紫杉醇的形成。
进一步的，本发明的细胞系提取物抗癌效果实验如下：
采用8mg、10mg细胞系提取物干粉与0.5ml蒸馏水稀释并分别处理SGC-2961细胞后，用MTT法测定胃癌细胞的生长与抑制率，通过形态学观查及流式细胞术检测癌细胞的凋亡率。
结果，此剂量的细胞系提取物对胃癌细胞具有极为强烈的抑制作用，且呈时间依赖及剂量依赖性，光镜及流式细胞术分析表明，8mg和10mg两个含量处理24小时后观查,细胞即出现极为明显的凋亡峰；对端粒酶活性的同步检测结果显示，两种不同剂量含量的细胞系提取物浓度增大，抑癌作用也就逐步增大；当处理12小时时对端粒酶活性为76-81％，处理24小时为86-92，处理72小时时为88-99％，即起变为阴性。
本发明实验显示，只要时间延长抑制作用就会渐增强，只要时间足够，即使偏小剂量或极小含量的细胞系提取物仍能对SGC2961细胞增殖产生显著的抑制效果，其抑制率为100％，抑癌率为88-99％。
本发明的有益效果在于：
本发明所制备的细胞系提取物中不存在任何化学残留，且提取物中细胞很少破坏，不仅对刺激和激活受损及细胞功能紊乱有较好的修补并促使其功能化的作用，而且对提高患者各免疫细胞活力松驰血管内皮细胞Ca*-N0-.GMP的途径，还能够有效的清除体内DPPH、02、NO等强氧化自由基，多次重复试验证明本发明细胞系提取物，对脂质过氧化的现象明显减轻，还能够养心、护心、强心的作用，同时对抵抗乙肝病毒生长与复制，抗放射作用、抗血栓、杭血凝、降脂、降压、降血糖、降低胆固醇及甘油三酯有显著的功效。
具体实施方式
复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，它包括以下步骤：
步骤1：红豆杉离体材料的制备
收集红豆杉茎，切成4-5cm长的段4-5块，立即浸泡在210mg/2L的抗氧化剂、L-抗坏血酸溶液中5分钟，在放入1％的苯菌灵、1％的百菌清、1％的头孢氨苄的混合溶液中，将离体材料灭菌预处理20小时，然后用无菌磁化水洗涤30分钟，在放入75％的乙醇液中杀菌2分钟，取出在放进30％的过氧化氢液中在杀菌16分钟，在用蒸馏水冲洗10分钟；
步骤2：从离体材料中分离形成层及培养
(1)将灭菌的离体材料用接种刀沿着离体材料的长度方向将皮层切开，除去外皮组织和木质茎芯，将外皮内的最内侧内皮组织，也就是韧皮部取下，放入固态培养基上，在受控暗室内培养，培养温度25±1度；
(2)形成层细胞的诱导，在整个培养过程中保持25土1度的恒温，瓶外培养的空间湿度在86±1左右，形成层细胞诱导29天；
步骤3：固态培养基成分的组成
硝酸钾1010mg/L，硫酸镁120mg/L，硫酸锰9.5mg/L，硫酸锌2mg/L，氯化钙113mg/L，硫酸铜0.023mg/L，碘化钾0.72mg/L，磷酸二氢钠130mg/L，氯化钻0.023mg/L，硼酸3.1mg/L，钼酸钠0.24mg/L，乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L，肌醇452mg/L，盐酸噻胺(VB)21mg/L，吡哆醇(VB)l.9mg/L,尼克酸1.9mg/L，L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸114mg/L，光氨酸170mg/L，酪蛋白水解物510mg/L，蔗糖30.100mg/L，2，4-D2.5mg/L，赤霉素0.6mg/L，琼脂39.000mg/L，活性碳3000mg/L，磁化水1升；
步骤4：传代培养
将培养29天的形成层细胞用接种铲将其移入烧瓶液态培养基内，在受控暗室中，用旋转摇床，以100rpm，25±1度下培养，传代时间设定为20天，使用的培养液见下表；
步骤5：液态培养基成分的组成
硝酸钾1010mg/L，硫酸镁120mg/L，硫酸锰9.5mg/L，硫酸锌2mg/L，氯化钙113mg/L，硫酸铜0.023mg/L，碘化铆0.72mg/L，磷酸二氢钠130mg/L，氯化钴0.023mg/L，硼酸3mg/L，钼酸钠0.24mg/L，乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L,肌醇200mg/L，盐酸噻胺(VB)21mg/L，吡哆醇(VB)1.9mg/L，尼克酸1.9mg/L，L-抗坏血酸110mg/L，柠檬酸148mg/L，2，4-D2.5mg/L，赤霉素0.1mg/L，天冬氨酸134mg/L，精氨酸180mg/L，脯氨酸118mg/L，甘氨酸60mg/L，色氨酸80mg/L,蔗糖21.000mg/，麦饭石2000mg/L，锗石2000mg/L，磁化水1升；
步骤6：气升式生物反应器中放大培养
将传代培养20天的细胞系移入3升的气升式生物反应器中继续放大培养，不间断搅拌，培养液使用烧瓶液态培养基相同的培养液，培养温度为25±1度，培养12天后，在向生物反应器内加入蔗糖10g，甲基茉莉酮酸酯50mg，N-苯酰甘氨酸50mg以及0.5升无菌磁化水的混合，在继续培养10天；
步骤7：细胞系的提取物制备
(1)将培养22天的细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤，将截留的大分子团取出，放入一玻璃容器内，注入含量为75％的乙醇0.5升，放入40HZ的超声波清洗机内，超声粉碎大分子团细胞系，然后二次超滤，然后再用95％的乙醇4升冲洗超滤柱；
(2)将滤过的全部乙醇、细胞混合液，经另一容器内快速搅拌3小时，在进行间接加热80度进行旋转吸空蒸发，浓缩至小于原体液五分之一时取出，在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥，30小时后，在含水分小于3％以下时取出，粉碎100目，装入铝泊袋内真空封口，冷藏存放，待用，即成为复方(红互杉)植物干细胞与抗癌物的功能性产品。
本实施例中，本发明无机盐类包括植物细胞生长所需的氮、磷、钾、钙、镁、硫等大量元素及铁、锰、锌、铜、硼、碘、钼、钴等微量元素，大量元素几乎在任何配方培养基中都是不可缺少的，它们是植物生长所需的最基木的矿物质营养，其中氮元素是植物细胞合成蛋白质的主要成分，又是细胞生长多种酶的重要组成部分，常用的氮源有硝酸氮(硝酸钾)和胺态氨(如硫酸铵)，蛋白质水解物(如水解酪蛋白等)也可以作为植物形成层细胞组织中氮源的补充，当单独使用铵态氮时，其离子浓度应<7毫摩尔/升，当单独使用硝态氮时，硝酸根的离子浓度以≤25毫摩尔/升为宜。
本实施例中，磷元素是植物细胞的主要成分之一，许多的重要生理活性物质如磷脂,核酸、酶及维生素中都含有酶，磷在植物碳水化合物的移动和代谢中起到极其重要的作用，磷能直接参与呼吸和发酵过程，提高植物体及细胞蛋白氮的含量；钾元素在植物离体内对维持原生质体系统和细胞液的缓冲系统具有重要作用，钾与培养基中的碳水化合物的合成和运转有着极密切的关系，钾还具有活化许多种酶的功能以及调节PH值的作用；钙、镁、硫这些大量的元素常影响培养物中酶的活性和方向，影响新陈代谢过程，常用的钙有硝酸钙、氮化钙、磷酸钙等，常用的镁是硫酸镁，硫为各种硫酸镁，硫为各种硫酸盐。
本实施例中，本发明中微量元素，微量元素用量一般在105-107克分子浓度以下，植物细胞对这些元素的需要量极微，稍多即发生毒害作用，微量元素包括铁、锌、锰、铜、硼、钼、钴等；其中铁元素是极为重要的一种微量元素，它是多种氮化酶的组成部分，与离体材料及细胞的氧化一还原过程有着密切的关系；其中铜元素具有促进离体不定根生长作用与愈伤组织愈合后，能促使细胞快速生长与萌发；其中锰元素是细胞许多氧化原酶的重要成分，参与体内氧化还原过程；其中硼元素是细胞参与各养分及碳水化合物的过程，与蛋白质合成有一定的关系；其中锌元素是细胞合成某种氨基酸所必需的元素，也是间接合成生长素的元素；其中钴元素能抑制离体材料褐化，是许多单化合物细胞可交换的化合反应本发明中固态培养基中和有机物质；在培养中应用的有机物质,有维生素和氨基酸两大类，另外还有肌醇、盐酸胺(VB1)、尼克酸(烟酸)、吡哆醇)(VB6)以及其它附加物；其中维生素可直接参与植物细胞生命活动最重要的过程，如醇的合成，细胞蛋白质和脂肪的代谢等等，植物离体材料的培养物自身虽有合成维生素的能力，但还不能满足其细胞快速生长需求，因此，在培养基中常添加一些维生素以保证培养物形成层细胞的快速生长和一些器管的分化。
本实施例中，本发明中的氨基酸中水解蛋白和精氨酸是植物离体材料培养的补充氨源，能够促进蛋白质的合成，同时各种氨基酸都各有特定的作用，如水解酪蛋白用在固态或液态培养基中，用于植物细胞的繁殖，能不同层度地替代酪氨酸，对培养物的胚状体和不定芽的分化能起良好的促进作用，同时用于液态培养基中可有效的使紫杉醇化合物的转化合。
本实施例中，其中肌醇(环乙六醇)本身虽没有什么直接的生长促进作用，但能协助其它活性物质发挥出作用的效果，并能参与糖的代谢，间接促进不定胚细胞的生长；其中糖类为蔗糖，糖作为碳源在植物材料组织层培养中是不可少的，常用的糖有蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨等，但本发明中的培养基采用蔗糖为好，它对红豆杉组织培养时能增进细胞生长的作用要好于其它糖种。
本实施例中，植物生长素赤霉素(GS)2.4-D是本发明中培养基内促进植物细胞生长至关重要的激进元素，尤其对细胞形态健成起着极其重要而明显的作用，其中活性碳，植物离体配料的，形成层细胞系的形成，这一培养过程似乎比较简单，但是在某些木本植物尤期是红豆杉离体料的内皮组织培养过程中常会出现许多困难，这里需要特别加以红豆杉离体内皮组织容易褐化主要原因是通过含铜的氧化酶如多酚氧化酶和酪氨酸酶等起作用所致，其作用的底物通常是酪氨酸和邻位羟酚尖化合物如绿原酸等，酶和底物在植物正常生长的情况下是在组织的不同部位，当细胞受伤组织垂死时，酶和底物就会聚集在一起发生作用，当酚被氧化为活性酸化物和环形多聚体氧化蛋白时便会形成深色的化合物，这些物质又很快被氧化和变成复杂的抑制性物质，从而导致红豆杉离体内皮材料变褐死亡并导致培养诱导失败，本发明中的固化剂-琼脂是从海藻中提取出来的一种凝胶性物质，植物及细胞并不能利用它，但由于具有无毒、可塑、遇热溶化、冷却后固形化，可使各种养分均匀地扩散分布等特性。
本实施例中，本发明中磁化水是一种普通自来水经4600高斯NS极磁场通过后，形成的一种带有磁记忆的小分子活性水，利用磁化水制备固态培养基或液态培养基具有比自来水，山泉水等水源的活性，张力、渗透性压要强十几倍，磁化后的小分子活性水，能够激活受损的组织细胞修复再生能力，能够佼正受损的细胞电子频率的紊乱，带有磁记忆的小分子活性水包含着培养基中各营养物质快速渗透到培养组织中，对促进细胞生长，形成层形成具有较好的作用。
本实施例中，本发明在分离组织细胞系之后，用于诱导来自离体材料形成层细胞系的优选固态培养基在下表1所示：
表1：优选用于曼地亚红豆杉离休材料诱导细胞系的固态培养基
通过在表1的培养基中培养29天后，组织细胞系增量放大，形成层细胞系与韧皮组织分离，细胞系组织有大量的液泡存在，并且接触后易碎，这时，将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入烧瓶液态培养基内，在暗室中，用旋转摇床，以100rpm、25±1度下培养，传代时间设定为20天，使培养基的干细胞指数在生长期内始终从保持极高的活力。
在如上所述形成层细胞系移入烧瓶中液态培养基的组合成分在下表2所示。
通过培养基表2烧瓶内的形成层细胞系观查，使用生物学显微镜观查细胞聚集的程度，结果，如下表3所示，可以看到悬浮液培养时细胞系超过94％的细胞是以单细胞形式存在，而细胞系的形态特征存在大量的液泡，处在未分化状态；
表3:红豆杉经长期培养的细胞聚集状
结果，从表3中可以看出，烧瓶内悬浮培养液中的细胞系的细胞没有出现大细胞群和中等细胞群团块连接的状态，仅有小量的小细胞聚集，而绝大部分细胞均呈单个细胞状态下生长在培养液中，说明，培养状态良好；
同时，为了实施大规模细胞培养的可能性，将来自曼地亚红豆杉愈伤组织形成层的烧瓶内的细胞系移入3升的气升式生物反应器中放大培养；
培养液使用表2中的液体培养基，在受控暗室中25±1度下不间断搅拌形式进行，结果，看到细胞培养物在生物反应器中细胞增量时间为3天，这与在烧瓶中悬浮培养增量时间12天提前了9天，而且细胞系显示了大约6-7倍的生长速度；这与生长环境放大、加_上在液态培养基中使用小分子磁化活性水、添加了具有内含几十种天然微量元素的麦饭石含有锗元素的矿石的原故有关；小分子活性水能增强细胞活力，麦饭石、锗石中固含几十种天然的微量元素，经液流不间断的冲击而冲刷下来溶于培养液中，使培养后期的细胞系细胞群得到天然、安全和足够利用的微量元素的补充；同时，植物细胞群的聚集降低也与生物反应器内钢壁对剪切细胞应力的敏感性而使细胞聚集下降有直接关连。
在生物反应器内培养12天的形成层细胞系培养液中，在加入蔗糖10g和甲基茉莉酮酸酯50mg，N-苯酰甘氨酸50mg，无菌磁化水0.5升的混合液，在暗室中不间断搅拌，继续培养10天。加入上述混合液的目的是可有效的诱导紫杉醇的形成。
本实施例中，本发明的细胞系提取物抗癌效果实验如下：
采用8mg、10mg细胞系提取物干粉与0.5ml蒸馏水稀释并分别处理SGC-2961细胞后，用MTT法测定胃癌细胞的生长与抑制率，通过形态学观查及流式细胞术检测癌细胞的凋亡率。
结果，此剂量的细胞系提取物对胃癌细胞具有极为强烈的抑制作用，且呈时间依赖及剂量依赖性，光镜及流式细胞术分析表明，8mg和10mg两个含量处理24小时后观查,细胞即出现极为明显的凋亡峰；对端粒酶活性的同步检测结果显示，两种不同剂量含量的细胞系提取物浓度增大，抑癌作用也就逐步增大；当处理12小时时对端粒酶活性为76-81％，处理24小时为86-92，处理72小时时为88-99％，即起变为阴性。
本发明实验显示，只要时间延长抑制作用就会渐增强，只要时间足够，即使偏小剂量或极小含量的细胞系提取物仍能对SGC-2961细胞增殖产生显著的抑制效果，其抑制率为100％，抑癌率为88-99％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：它包括以下步骤：
步骤1：红豆杉离体材料的制备
收集红豆杉茎，切成4-5cm长的段4-5块，立即浸泡在210mg/2L的抗氧化剂、L-抗坏血酸溶液中5分钟，在放入1％的苯菌灵、1％的百菌清、1％的头孢氨苄的混合溶液中，将离体材料灭菌预处理20小时，然后用无菌磁化水洗涤30分钟，在放入75％的乙醇液中杀菌2分钟，取出在放进30％的过氧化氢液中在杀菌16分钟，在用蒸馏水冲洗10分钟；
步骤2：从离体材料中分离形成层及培养
(1)将灭菌的离体材料用接种刀沿着离体材料的长度方向将皮层切开，除去外皮组织和木质茎芯，将外皮内的最内侧内皮组织，也就是韧皮部取下，放入固态培养基上，在受控暗室内培养，培养温度25±1度；
(2)形成层细胞的诱导，在整个培养过程中保持25土1度的恒温，瓶外培养的空间湿度在86±1左右，形成层细胞诱导29天；
步骤3：固态培养基成分的组成
硝酸钾1010mg/L，硫酸镁120mg/L，硫酸锰9.5mg/L，硫酸锌2mg/L，氯化钙113mg/L，硫酸铜0.023mg/L，碘化钾0.72mg/L，磷酸二氢钠130mg/L，氯化钻0.023mg/L，硼酸3.1mg/L，钼酸钠0.24mg/L，乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L，肌醇452mg/L，盐酸噻胺(VB)21mg/L，吡哆醇(VB)l.9mg/L,尼克酸1.9mg/L，L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸114mg/L，光氨酸170mg/L，酪蛋白水解物510mg/L，蔗糖30.100mg/L，2，4-D2.5mg/L，赤霉素0.6mg/L，琼脂39.000mg/L，活性碳3000mg/L，磁化水1升；
步骤4：传代培养
将培养29天的形成层细胞用接种铲将其移入烧瓶液态培养基内，在受控暗室中，用旋转摇床，以100rpm，25±1度下培养，传代时间设定为20天，使用的培养液见下表；
步骤5：液态培养基成分的组成
硝酸钾1010mg/L，硫酸镁120mg/L，硫酸锰9.5mg/L，硫酸锌2mg/L，氯化钙113mg/L，硫酸铜0.023mg/L，碘化铆0.72mg/L，磷酸二氢钠130mg/L，氯化钴0.023mg/L，硼酸3mg/L，钼酸钠0.24mg/L，乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L,肌醇200mg/L，盐酸噻胺(VB)21mg/L，吡哆醇(VB)1.9mg/L，尼克酸1.9mg/L，L-抗坏血酸110mg/L，柠檬酸148mg/L，2，4-D2.5mg/L，赤霉素0.1mg/L，天冬氨酸134mg/L，精氨酸180mg/L，脯氨酸118mg/L，甘氨酸60mg/L，色氨酸80mg/L,蔗糖21.000mg/，麦饭石2000mg/L，锗石2000mg/L，磁化水1升；
步骤6：气升式生物反应器中放大培养
将传代培养20天的细胞系移入3升的气升式生物反应器中继续放大培养，不间断搅拌，培养液使用烧瓶液态培养基相同的培养液，培养温度为25±1度，培养12天后，在向生物反应器内加入蔗糖10g，甲基茉莉酮酸酯50mg，N-苯酰甘氨酸50mg以及0.5升无菌磁化水的混合，在继续培养10天；
步骤7：细胞系的提取物制备
(1)将培养22天的细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤，将截留的大分子团取出，放入一玻璃容器内，注入含量为75％的乙醇0.5升，放入40HZ的超声波清洗机内，超声粉碎大分子团细胞系，然后二次超滤，然后再用95％的乙醇4升冲洗超滤柱；
(2)将滤过的全部乙醇、细胞混合液，经另一容器内快速搅拌3小时，在进行间接加热80度进行旋转吸空蒸发，浓缩至小于原体液五分之一时取出，在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥，30小时后，在含水分小于3％以下时取出，粉碎100目，装入铝泊袋内真空封口，冷藏存放，待用，即成为复方(红互杉)植物干细胞与抗癌物的功能性产品。
2.根据权利要求1所述的复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：本发明无机盐类包括植物细胞生长所需的氮、磷、钾、钙、镁、硫等大量元素及铁、锰、锌、铜、硼、碘、钼、钴等微量元素，大量元素几乎在任何配方培养基中都是不可缺少的，它们是植物生长所需的最基木的矿物质营养。
3.根据权利要求1所述的复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：其中氮元素是植物细胞合成蛋白质的主要成分，又是细胞生长多种酶的重要组成部分，常用的氮源有硝酸氮(硝酸钾)和胺态氨(如硫酸铵)，蛋白质水解物(如水解酪蛋白等)也可以作为植物形成层细胞组织中氮源的补充，当单独使用铵态氮时，其离子浓度应<7毫摩尔/升，当单独使用硝态氮时，硝酸根的离子浓度以≤25毫摩尔/升为宜。
4.根据权利要求1所述的复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：本发明中的氨基酸中水解蛋白和精氨酸是植物离体材料培养的补充氨源，能够促进蛋白质的合成，同时各种氨基酸都各有特定的作用，如水解酪蛋白用在固态或液态培养基中，用于植物细胞的繁殖，能不同层度地替代酪氨酸，对培养物的胚状体和不定芽的分化能起良好的促进作用，同时用于液态培养基中可有效的使紫杉醇化合物的转化合。
5.根据权利要求1所述的复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：植物生长素赤霉素(GS)2.4-D是本发明中培养基内促进植物细胞生长至关重要的激进元素，尤其对细胞形态健成起着极其重要而明显的作用。
6.根据权利要求1所述的复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：本发明中的固化剂-琼脂是从海藻中提取出来的一种凝胶性物质，植物及细胞并不能利用它，但由于具有无毒、可塑、遇热溶化、冷却后固形化，可使各种养分均匀地扩散分布等特性。
7.根据权利要求1所述的复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺，其特征在于：本发明中磁化水是一种普通自来水经4600高斯NS极磁场通过后，形成的一种带有磁记忆的小分子活性水，利用磁化水制备固态培养基或液态培养基具有比自来水，山泉水等水源的活性，张力、渗透性压要强十几倍，磁化后的小分子活性水，能够激活受损的组织细胞修复再生能力，能够佼正受损的细胞电子频率的紊乱，带有磁记忆的小分子活性水包含着培养基中各营养物质快速渗透到培养组织中，对促进细胞生长，形成层形成具有较好的作用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110763976.4A CN113425752A (zh) | 2021-07-06 | 2021-07-06 | 复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110763976.4A CN113425752A (zh) | 2021-07-06 | 2021-07-06 | 复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113425752A true CN113425752A (zh) | 2021-09-24 |
Family
ID=77759209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110763976.4A Pending CN113425752A (zh) | 2021-07-06 | 2021-07-06 | 复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113425752A (zh) |
-
2021
- 2021-07-06 CN CN202110763976.4A patent/CN113425752A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103583511B (zh) | 一种间充质干细胞冻存液及注射液 | |
| CN102459572B (zh) | 银杏科的形成层来源的植物干细胞及其分离方法 | |
| CN103305455A (zh) | 红豆杉植物干细胞系培育与抗癌物的提取制作方法 | |
| EP3270686B1 (en) | Production of ingenol, ingenol esters and/or tiglian-3-one derivatives by euphorbiaceae plant cell suspension cultures | |
| EP3077523B1 (en) | Production of thapsigargins by thapsia cell suspension culture | |
| CN103320379A (zh) | 番茄植物干细胞分离培养提取与口服液、饮料和白酒的制备方法 | |
| CN108721203A (zh) | 一种含牡丹干细胞提取物的美白修复护肤品及其制备方法 | |
| CN113174360A (zh) | 一种人参干细胞的分离培养方法 | |
| RU2341079C1 (ru) | Способ получения стимулятора роста растений | |
| CN113425752A (zh) | 复方红豆杉干细胞与抗癌物的提取方法及工艺 | |
| JP2023525203A (ja) | インビトロ培養物のバイオマス由来の標準化植物抽出物、その調製方法及び使用 | |
| WO2005020672A1 (en) | Method for mass production of wild ginseng roots by plant tissue culture | |
| CN108034681B (zh) | 利用悬浮培养的地黄茎形成层干细胞生产梓醇的方法 | |
| KR101093743B1 (ko) | 푸에라리아 미르피카 캘러스 배양 배지 및 이를 이용한 배양 방법 | |
| Pindel | Optimization of isolation conditions of Cymbidium protoplasts | |
| JPH06296493A (ja) | タキソールの生産方法 | |
| CN107318654A (zh) | 促进罗汉果cs基因表达的方法 | |
| CN113481144A (zh) | 复方干细胞与抗癌组合物制作方法及工艺 | |
| CN113559248A (zh) | 复方番茄干细胞分离培养提取与口服液制作方法及工艺 | |
| KR0169081B1 (ko) | 탁산형 디테르펜 고생성 배양 세포의 취득방법 | |
| CN115058347B (zh) | 一株花脸香蘑、其非糖类提取物的制备及其应用 | |
| KR20110010871A (ko) | 여우구슬 부정근의 대량생산 방법 | |
| JP2545359B2 (ja) | 植物培養細胞 | |
| CN110972953A (zh) | 一种优质金线莲组织培养方法 | |
| JPS6339595A (ja) | アルカロイドの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20210924 |