CN113384748B - 一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法 - Google Patents
一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113384748B CN113384748B CN202110474233.5A CN202110474233A CN113384748B CN 113384748 B CN113384748 B CN 113384748B CN 202110474233 A CN202110474233 A CN 202110474233A CN 113384748 B CN113384748 B CN 113384748B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- cross
- reaction
- hours
- gel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
Abstract
本发明公开了一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法，将胶原蛋白溶解于超纯水中，冷藏，加入化学交联剂，低温搅拌均匀，冷藏，水浴加热开始交联反应，制得交联胶原蛋白凝胶；交联胶原蛋白凝胶中加入生理盐水‑氨水，进行封闭反应；向封闭反应后的交联胶原蛋白凝胶加入生理盐水进行纯化；将纯化后的交联胶原蛋白凝胶使用筛分法制粒；将制粒后的交联胶原蛋白凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得交联胶原蛋白悬浊液，填充至预灌装注射器，湿热灭菌，制得胶原蛋白真皮植入剂。使发酵得到的胶原蛋白经过交联反应具有物理填充功能，且该胶原蛋白真皮植入剂无免疫毒性反应，具有良好的生物相容性，可以作为医学美容中的机体组织填充物。
Description
技术领域
本发明属于医学美容技术领域，具体涉及一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法。
背景技术
胶原蛋白由胶原蛋白分子通过不同程度的交联组成。胶原蛋白分子是一类具有特殊结构的蛋白质。胶原蛋白分子由三条肽链组成，三条肽链缠绕成为独特的三股螺旋结构。三条肽链的一级结构也有独特之处，为G-X-Y三氨基酸单元重复结构。通常情况下，G为甘氨酸，X脯氨酸，Y为羟脯氨酸。甘氨酸是蛋白质结构氨基酸中最小的氨基酸，含有两个碳原子，阿尔法碳原子上没有支链，在三股螺旋结构中，三条肽链的甘氨酸处于三螺旋结构的中心，呈紧密的线状排列。由于甘氨酸阿尔法碳原子上没有支链，体积较小，甘氨酸处于中心使得三股螺旋结构更加紧实稳定。
脯氨酸是蛋白质结构氨基酸中唯一的含有环状结构的氨基酸，由于五元环产生了特定的空间位阻，使得三条肽链能够以特定方式缠绕成为三螺旋结构。
羟脯氨酸不是蛋白质结构氨基酸。其羟基是肽链合成后修饰的结果。三条肽链之间形成较强大的氢键是形成三螺旋结构的主要结合力，而脯氨酸上的羟基是三条肽链间氢键的主要来源。
可见，天然的胶原蛋白具有特殊的三螺旋结构，这是天然胶原蛋白具有其功能的物质基础。
胶原蛋白在动物中广泛存在，低等生物(如鱼类)到高等生物(如哺乳动物)体内都含有。在哺乳动物体内的胶原蛋白发挥了重要作用，既有支持、润滑等物理作用，也具有促进细胞分化迁移等生物活性。
在整形外科领域，常用胶原蛋白作为真皮植入剂，填补因外伤造成的组织缺陷、填充因衰老造成的皮面深沟(如鼻唇沟)。
现有产品采用的胶原蛋白主要来源是动物源性材料，例如牛(皮、跟腱)、猪(皮)。也有采用尸体皮肤作为原料的。
动物源性材料存在由于物种不同造成的免疫原性和活体动物自身携带多种病毒污染，给患者产生较大安全风险。来源于尸体的胶原蛋白带来伦理问题，不能作为常规材料。随着分子生物学的发展，人体胶原蛋白的基因测序已经完成。采用原核生物(常用大肠杆菌)或真核生物(常用酵母菌)，克隆人体胶原蛋白基因，构造工程菌，通过发酵方式生产人源或类人胶原蛋白，已经实现。
由于现阶段不能够在体外模拟体内过程实现三条肽链自组织形成三股螺旋结构，所以，发酵得到的胶原蛋白并不具有天然胶原蛋白的三股螺旋结构，空间物理支撑能力不足。而通过化学方式，使发酵得到的胶原蛋白具有提取胶原蛋白制成的真皮植入剂的性能，是制备发酵胶原蛋白植入剂的关键。
发明内容
针对现有技术中存在的当前胶原蛋白不具有空间物理支撑能力的问题，本发明提出了一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法，其目的为，使发酵得到的胶原蛋白，通过交联反应具备了空间物理支撑能力。
具体技术方案如下：
一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法，首先取胶原蛋白原料1份，溶解于5-15份超纯水中，冷藏，加入化学交联剂为胶原蛋白原料质量的0.001％-1％，搅拌均匀，冷藏，水浴加热35-60℃开始交联反应，制得交联胶原蛋白凝胶1份；向交联胶原蛋白凝胶中加入氨水-生理盐水溶液1-3份(氨浓度为2％)，进行封闭反应1-5小时；向封闭反应后的交联胶原蛋白凝胶加入生理盐水2-10份进行纯化，每次1-3小时，重复2-5次；将纯化后的交联胶原蛋白凝胶筛分法制粒；将筛分制粒后的交联胶原蛋白凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为2％-10％的胶原蛋白悬浊液，填充至预灌装注射器，进行湿热灭菌，制得胶原蛋白真皮植入剂。
其进一步的优选技术方案是：所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。
其进一步的优选技术方案是：所述化学交联剂为醛类化学交联剂、亚胺类化学交联剂或二异氰酸酯类化学交联剂。
其进一步的优选技术方案是：所述化学交联剂为醛类化学交联剂。
其进一步的优选技术方案是：所述醛类化学交联剂为戊二醛、丁二醛。
其进一步的优选技术方案是：胶原蛋白原料与超纯水两者体积比为1:10。
其进一步的优选技术方案是：所述交联反应在水浴加热环境下进行，所述水浴加热温度为50℃，反应时长为8小时。
其进一步的优选技术方案是：所述封闭反应过程中，加入的交联胶原蛋白凝胶、氨水-生理盐水(氨浓度为2％)体积比为1:2，所述封闭反应时间为3小时。
其进一步的优选技术方案是：所述纯化反应中，向交联胶原蛋白凝胶中加入的生理盐水与交联胶原蛋白凝胶的体积比为1:5，所述纯化反应时间为2小时，所述纯化反应次数为4次。
其进一步的优选技术方案是：所述筛分制粒过程中，选用300目筛。
其进一步的优选技术方案是：所述胶原蛋白悬浊液浓度为3.5mg/ml。
根据上述任一项所述方法，制得一种真皮植入剂。
相比现有技术，本发明的技术方案具有如下优点：以类人胶原蛋白为原料，解决了动物源性材料中存在的，由于物种不同造成的免疫原性和活体动物自身携带多种病毒污染的问题。通过交联，使发酵得到的胶原蛋白具备了支撑功能，且该胶原蛋白真皮植入剂无免疫原性毒性，具有良好的生物相容性，可以作为医学美容中的机体组织填充物。
具体实施方式
为使本发明目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明的一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。
实施例1：
本发明实施例提供了一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法，包括以下步骤：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水800ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)2ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例2：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水800ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例3：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水800ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)2ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例4：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水800ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入丁二醛(浓度为50％)2ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例5：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水800ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入丁二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例6：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水800ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入丁二醛(浓度为50％)2ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例7：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水500ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例8：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例9：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1500ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热45℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例10：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热35℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例11：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热50℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例12：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热60℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1500ml，反应2小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例13：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热50℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)1000ml，反应3小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例14：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热60℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)3000ml，反应5小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例15：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热60℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)2000ml，反应4小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水1000ml，每次1小时，纯化4次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例16：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热60℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)2000ml，反应4小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水2000ml，每次1小时，纯化2次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
实施例17：
(1)胶原蛋白溶解：称取胶原蛋白100g，所述胶原蛋白原料为市售，采用的是江苏江山聚源真核发酵生产的类人胶原蛋白。加超纯水1000ml，4℃温度下磁力搅拌2小时，得到均一胶原蛋白凝胶；
(2)反应物混合：4℃下，加入戊二醛(浓度为50％)1ml，4℃下磁力搅拌2小时，冷藏4小时；
(3)交联反应：水浴加热60℃下，反应8小时，得到交联胶原蛋白凝胶；
(4)封闭反应：向反应体系中加入氨水生理盐水(氨浓度为2％)2000ml，反应4小时；
(5)纯化：用生理盐水纯化，每次用生理盐水10000ml，每次3小时，纯化5次；
(6)制粒：将交联胶原蛋白凝胶筛分制粒，过300目筛；
(7)配液和填充：将凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为3.5mg/ml的胶原蛋白混悬液，填充至1ml预灌装注射器；
(8)灭菌：121℃湿热灭菌，F0≥8。
上述各实施列中的胶原蛋白原料也可以采用青海创铭真核发酵产生的类人胶原蛋白。
采用360只CD-1小鼠进行动物实验，评估上述实施例所得产品与同类产品在注入CD-1小鼠脊背中段后的填充新增体积指数和过敏反应；随机选择360只健康的CD-1小鼠，编号，将CD-1小鼠脊背中段剃去毛发，得到面积约1平方厘米的裸露皮肤；
在裸露皮肤下注射胶原蛋白真皮填充剂，试验组1-17注射实施例1-17制得的胶原蛋白植入剂，对照组等量注射市售A公司胶原蛋白植入剂，单笼饲养，定期观察，结果如表1和表2所示。
表1为新增体积指数实验结果。(实施例1-17与常规的比对)
表1新增体积指数实验结果
表2为过敏反应试验结果。(实施例1-17与常规的比对)
表2过敏反应试验结果
由表1和表2可见，采用本发明提供的方式制备胶原蛋白真皮植入剂与对照组产品等量注射入CD-1小鼠脊背中段部位后，经两个月的时间观察，测试结果及结论如下：
植入后第5天，试验组和对照组植入剂新增体积指数没有差异，各组新增体积指数也没有变化，可见植入5天内，试验组和对照组功能表现相同。
植入后第10天，试验组新增体积指数没有变化，对照组有明显下降，1-17组实施例与对照组比较有显著差异，试验组数据优于对照组。
植入后第20天，试验组新增体积指数没有显著变化，对照组继续下降，1-17组实施例与对照组比较有显著差异。
第30天和第60天，对照组下降明显，试验组有少量下降，1-17组实施例与对照组比较有非常显著差异。
根据以上数据可得出结论，采用本文所用的交联方法得到的胶原蛋白真皮植入剂，在功能上优于对照组。
过敏反应试验结果表明，在植入后10天内，对照组有少量过敏反应发生，试验组没有发生过敏反应。采用本文所用的交联方法得到的植入剂，在安全性上优于对照组。
综上所述，采用本交联反应自制得到的胶原蛋白真皮植入剂在功能性和安全性上均优于市售产品，新增体积指数明显比对照组大，填充效果保持时间更长，且实验过程中无明显异常反应，无红肿，发热等现象，说明本发明提供的方式制备出的胶原蛋白真皮植入剂效果较为理想。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种胶原蛋白真皮植入剂的制备方法，其特征在于，
制取交联胶原蛋白凝胶：按重量份称取1份胶原蛋白原料溶解于5-15份超纯水中，冷藏，加入化学交联剂为胶原蛋白原料质量的0.001％-1％，所述化学交联剂包括丁二醛或戊二醛中的一种，搅拌均匀，冷藏，水浴加热35-60℃开始交联反应，制得交联胶原蛋白凝胶1份；
向制得的交联胶原蛋白凝胶中加入氨水-生理盐水溶液1-3份，进行封闭反应1-5小时；
向封闭反应后的交联胶原蛋白凝胶加入生理盐水2-10份进行纯化，每次1-3小时，重复2-5次；
将纯化后的交联胶原蛋白凝胶用筛分法制粒；
将筛分制粒后的交联胶原蛋白凝胶颗粒分散于生理盐水中，制得浓度为2％-10％的胶原蛋白悬浊液，填充至预灌装注射器，进行湿热灭菌，制得胶原蛋白真皮植入剂。
2.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白真皮植入剂的制备方法，其特征在于，胶原蛋白原料与超纯水两者体积比为1:10。
3.根据权利要求2所述的一种胶原蛋白真皮植入剂的制备方法，其特征在于，所述交联反应在水浴加热环境下进行，所述水浴加热温度为50℃，反应时长为8小时。
4.根据权利要求3所述的一种胶原蛋白真皮植入剂的制备方法，其特征在于，所述封闭反应过程中，加入的交联胶原蛋白凝胶、氨水-生理盐水体积比为1:2，所述氨水浓度为2％，封闭反应时间为3小时。
5.根据权利要求4所述的一种胶原蛋白真皮植入剂的制备方法，其特征在于，所述纯化反应中，向交联胶原蛋白凝胶中加入的生理盐水与交联胶原蛋白凝胶的体积比为1:5，纯化反应时间为2小时，纯化反应次数为6次。
6.根据权利要求5所述的一种胶原蛋白真皮植入剂的制备方法，其特征在于，所述筛分制粒过程中，选用300目筛。
7.一种真皮植入剂，其特征在于根据权利要求1-6任一项所述方法制得。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110474233.5A CN113384748B (zh) | 2021-04-29 | 2021-04-29 | 一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110474233.5A CN113384748B (zh) | 2021-04-29 | 2021-04-29 | 一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113384748A CN113384748A (zh) | 2021-09-14 |
| CN113384748B true CN113384748B (zh) | 2022-04-26 |
Family
ID=77617771
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110474233.5A Active CN113384748B (zh) | 2021-04-29 | 2021-04-29 | 一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113384748B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114225112A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-03-25 | 江苏苏伯纳生物科技有限公司 | 一种脑脊液隔离修复膜的制备方法 |
| CN114146223A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-08 | 三亚悦美科技有限公司 | 一种重组胶原蛋白复合注射剂及其制备方法 |
| CN115920111A (zh) * | 2022-10-17 | 2023-04-07 | 杭州可靠护理用品股份有限公司 | 抗菌抑臭性能优良的成人纸尿裤芯体结构及其制备工艺 |
| CN115737886A (zh) * | 2022-10-17 | 2023-03-07 | 杭州可靠护理用品股份有限公司 | 用于纸尿裤的透气抑菌膜材及其制备工艺 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107213028A (zh) * | 2017-05-26 | 2017-09-29 | 陕西慧康生物科技有限责任公司 | 一种胶原蛋白植入剂及其制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2944706B1 (fr) * | 2009-04-28 | 2012-08-24 | Biom Up | Nouveaux materiaux en collagene et procedes d'obtention. |
| CN103755981A (zh) * | 2014-01-14 | 2014-04-30 | 西北大学 | 一种用作皮肤填充材料的水凝胶及其制备方法 |
| CN105860151A (zh) * | 2016-04-13 | 2016-08-17 | 西北大学 | 注射用高分子普鲁兰多糖-胶原蛋白复合水凝胶及其制备方法 |
-
2021
- 2021-04-29 CN CN202110474233.5A patent/CN113384748B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107213028A (zh) * | 2017-05-26 | 2017-09-29 | 陕西慧康生物科技有限责任公司 | 一种胶原蛋白植入剂及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113384748A (zh) | 2021-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113384748B (zh) | 一种胶原蛋白真皮植入剂及其制备方法 | |
| Li et al. | Click chemistry-based biopolymeric hydrogels for regenerative medicine | |
| US7396912B2 (en) | Collagen production method | |
| CN101084023A (zh) | 植入式胶原合成物 | |
| EP0296078A1 (fr) | Nouveaux biomatériaux à base de mélanges de collagène, de chitosan et de glycosaminoglycanes, leur procédé de préparation ainsi que leurs applications en médecine humaine | |
| CN101979106B (zh) | 修复脊髓损伤的生物材料及其制备方法与应用 | |
| JPH03503649A (ja) | 硬骨および軟骨誘導組成物 | |
| CN113768815A (zh) | 一种胶原蛋白植入剂及其制备方法 | |
| JP4490268B2 (ja) | システインプロテアーゼ処理コラーゲンの製造方法およびシステインプロテアーゼ処理コラーゲン | |
| CN111072769B (zh) | 重组胶原蛋白及其医用水凝胶 | |
| CN113713180A (zh) | 一种交联人源白蛋白真皮填充剂及其制备方法 | |
| KR101916759B1 (ko) | 고농도, 고순도의 동종 콜라겐 제조 방법 및 동종 콜라겐 지지체의 제조방법 | |
| EP0938350B1 (en) | Biomembrane suitable for use in substitution, reconstruction, induction of angiogenesis, neoformation or regeneration of human or animal organs or tissues | |
| Hara | Effects of ionizing radiation on biopolymers for applications as biomaterials | |
| CN114146223A (zh) | 一种重组胶原蛋白复合注射剂及其制备方法 | |
| AU2004237992B2 (en) | Insoluble globin injectable implant | |
| CN116036357A (zh) | 用于激光、光子术后修复的蛋白类液体敷料及其制备方法 | |
| RU2353397C2 (ru) | Биорассасываемая коллагеновая матрица, способ ее получения и применение | |
| CN102099023A (zh) | 用于活化干细胞的药剂 | |
| CN115521371A (zh) | 一种重组人源化iii型胶原蛋白、制备方法及应用 | |
| CN111569044B (zh) | 一种含紫球藻多肽的组合物及其制备方法 | |
| CN114369156A (zh) | 包含稳定的大分子i型重组胶原蛋白的注射液 | |
| JPH11137662A (ja) | 放射線滅菌されたコラーゲンゲル及びその製造方法 | |
| Hayashi | Fish Collagen: Characteristics and Application | |
| RU2433828C1 (ru) | Инъекционный гетерогенный биополимерный гидрогель для заместительной и регенеративной хирургии и способ его получения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hong Tao Inventor after: Xu Zhenmei Inventor after: Gao Jun Inventor before: Hong Tao Inventor before: Xu Zhen Inventor before: Gao Jun |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |