CN113368146A - 一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物及制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物及其制备方法，所述西洋参淫羊藿刺五加组合物通过采用刺五加、西洋参、淫羊藿为主要原料并进行适当重量配比，制备时，先分别提取中药中的有效成分制得刺五加提取物、西洋参提取物、淫羊藿提取物，将上述提取物混合后得到混合提取物，再取蜂蜡加入色拉油加热溶解，得到溶有蜂蜡的色拉油；之后将混合提取物加入溶有蜂蜡的色拉油中，充分混匀，最终制得的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物，具有缓解体力疲劳的保健功效。

Description

一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物及制法

技术领域

本发明属于保健品技术领域，具体涉及一种具有缓解体力疲劳作用的西洋 参淫羊藿刺五加组合物及其制备方法。

背景技术

目前过度疲劳引起的疲劳综合症被定义为是一类独立的疾病。西医对疲劳 综合症的病因及发病机制尚无确切定论，目前主要有3种学说：感染后，精神 性和免疫性。本病的病因及发病机制是多因素的，其发生可能是病毒感染、精 神应激等多因素导致神经-内分泌-免疫网络紊乱的结果。中医理论认为疲劳综 合症的病因病机特点为多种脏器功能失调，其病位以肝、脾、肾为主。

过度疲劳是多种多样的。体力疲劳一般表现为四肢乏力、肌肉酸痛，关节 屈伸轻度障碍或有牵引疼痛等；脑力疲劳因用脑过度引起，因大脑血液供氧不 足，脑细胞的生理功能降低，表现为头昏脑胀，记忆力下降和注意力不能集中 等；心理也称为精神疲劳，是受到强烈或持久的劣性精神刺激而引起的消极心 理，如忧郁、焦虑、沮丧、愤怒等，表现为精神涣散、情绪低落、食欲不振等。 关于“疲劳”的研究新学说很多。有人认为，疲劳是一种“中毒”现象。因为当人 体肌内活动时，肌肉会产生乳酸，假如除去乳酸，疲劳的肌肉则可重新活动。 活动中肌肉还会产生“疲劳毒素”等其他物质，这些物质经血液带往肌肉乃至整 个身体，尤其带至大脑产生疲乏感。还有一种学说认为，疲劳本身不是病，而 是体质弱的原因，又同时是结果，因为身体抵抗力差的人也就容易产生疲劳感。 如缺铁性贫血者、长期便秘者、患慢性病患者都容易感觉疲倦。不少专家认为， 由于劳累，可使肌体乏力，以至心脏负荷过大，五脏功能削弱直到丧失、衰竭 而亡。从细胞学分析来看，人体内细胞在进行复杂的新陈代谢的同时会产生一 种活性很高的氧化物，这就是人们常说的“自由基”。在正常情况下，自由基能 保护身体，使体内免受微生物、细菌等有害物质的侵害，是人体免疫系统中相 当重要的一环。但是，当人们遭受环境严重污染、沉重压力、过度劳累时，体 内自由基就会大大增加，过多的自由基会成为人体的破坏分子，它们攻击细胞， 影响蛋白质、核苷酸、脂肪的合成，使人体协调工作能力减弱，直至死亡。因 此，缓解体力疲劳已我为现代人刻不容缓需要解决的重大问题。

在治疗方面，西医对本病的治疗采取对症支持治疗为主，抗病毒药、免疫 调节药、抗抑郁药和镇静剂等均被采用，但所得到的疗效报道不一。Singh发 现给予疲劳模型小鼠卡维地洛等抗氧化剂可以于治疗疲劳综合症；Cleare等认 为，通过小剂量氢化可的松治疗来增加血浆勒帕茄碱水平，也许是一种治疗的 方法；Smith等在实验中发现，对疲劳综合症患者的认知特征进行心里干预治 疗能够改善此类患者的一些临床症状。由于发病的原因不明确，诊断过程复杂， 西医对此类疾病的疗效仍不够理想，还没有根本性的治疗方法。

中医对缓解体力疲劳的治疗有其独厚的优势，采用辨正施治、针灸按摩、 熬挤疗法等治疗手段，均有良好疗效。中医在辨正论治原则指导下，许多学者 结合疲劳综合症的临床表现，分别采用不同治疗方法。因中医临床治疗突出整 体观念，辨正施治，针对患者进行全面调整与个体化治疗，在改善症状、提高 疗效及生活质量方面显示了良好的前景与优势。

发明内容

为了解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了一种缓解体力疲劳的西 洋参淫羊藿刺五加组合物及其制备方法。本发明是以刺五加、西洋参、淫羊藿 等传统中药为主要原料，采用成熟先进的生产工艺，提取中药中的精华成分制 成软胶囊剂型保健食品，具有缓解体力劳的保健功效。本发明是传统医学理论 对中药缓解体力疲劳的科学应用，所用原料源于天然中草药，不含有任何对人 体产生副作用的西药成分，无咖啡因及任何国际上禁用的兴奋剂成分。产品采 用成熟先进提取生产工艺，在符合保健食品GMP的厂房中加工生产，摒弃了 传统中材需要长时间煎煮，服用剂量较大，服用不便，口感较差等因素，且采用软胶囊这种在当今医药保健品行业中具有较强竞争力的剂型，既保证了产品 的品质及疗效，产品安全性高、密封性好，减少二次污染的风险；又遮盖了中 药的苦涩气味，更易吞咽，使消费者服用时感觉夏为舒适；且软胶囊剂型包装 不易破碎，携带十分安全，在适于消费者日常居家使用的同时，更适于人们在 外出度假、旅游及野外工作时使用。由于产品崩解后在肠道直接吸收，无需溶 解过程，吸收快。又由于产品的生物利用度高，因此减少了消费者的服用剂量。 因此本发明产品在保健食品市场特别是缓解体力疲劳类保健食品市场上极具竞 争力及发展前景。

本发明所采用的技术方案为：

一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物，原料组分包括：刺五加 提取物50-70重量份、西洋参提取物80-100重量份、淫羊藿提取物20-30重量 份、蜂蜡5-15重量份、色拉油300-350重量份。

进一步优选所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物的原料组分 为：刺五加提取物57重量份、西洋参提取物89重量份、淫羊藿提取物26重量 份、蜂蜡10重量份、色拉油318重量份。

所述组合物的剂型为软胶囊。

所述的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊的制备方法，步骤如下：

(1)取刺五加、西洋参、淫羊藿，打碎过筛后，分别用乙醇浸提，得到各 自的浸提液；各浸提液分别进行离心后过滤，滤液回收乙醇后，依次经浓缩、 干燥，分别得到刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物；

按照所述重量份分别取刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物，充 分混合均匀，得到混合提取物；

(2)取蜂蜡加入色拉油中加热溶解，冷却到常温，得到溶有蜂蜡的色拉油；

(3)将步骤(1)所述混合提取物加入步骤(2)所得溶有蜂蜡的色拉油， 充分搅拌混匀后，得到混悬物料；

(4)将步骤(3)所述混悬物料加入胶体磨内，进行研磨后，即得胶囊内 容物，备用；

(5)取明胶，加入纯净水使吸水膨胀，再取甘油、焦糖色、纯净水置于化 胶罐中，加热混匀后，加入膨胀后的明胶进行搅拌，使熔融成均匀胶液保温1-2h， 抽真空排除胶液中的气泡，过滤胶液，待用；

(6)将步骤(5)所述胶液制成胶片，之后将步骤(4)所述胶囊内容物封 入两片胶片中，即得线形软胶囊；

(7)将线形软胶囊置于转笼中定形；

(8)将定形出来的软胶囊进行预干燥，使软胶囊壳的水分达到6-8％；

(9)将预干燥后的软胶囊进行粗选、洗丸、干燥、抛光后，即得所述缓解 体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊。

步骤(4)中，胶体磨的转速为2800转/min，研磨时间为20min。

步骤(5)中，化胶罐内加热温度为70-80℃。

步骤(7)中，定形时间为2h以上。

步骤(8)中，预干燥的温度为30-35℃，空气相对湿度20％。

步骤(9)中，采用95％酒精进行洗丸；

在21-24℃、相对湿度30-40％条件下进行干燥。

步骤(9)中，在糖衣锅内以转速46r/min进行抛光,经旋转翻动10-20min 后取出。

为了便于理解本发明，下面对本发明中的原料及药效作进一步阐述。

刺五加：现代药理学研究显示，刺五加中含有苷类、多糖、微量元素及氨 基酸等多种物质，其中的主要功效成分是刺五加总苷。有研究指出，用小平台 水环境法对大鼠进行连续96hREM睡眠剥夺，以自制刺五加总甙复方制剂于神 阙穴处贴敷，结果刺五加总甙穴位贴敷组大鼠外观疲劳程度、睡眠剥夺所致血 乳酸浓度升高及低睾酮状态较对照组为轻(P＜0.01)，血皮质醇含量变化与对 照组比较无显著差异(P＞0.05)，提示刺五加总甙可改善实验动物的疲劳状态， 调节机体应激反应水平，具有对抗睡眠剥夺所致疲劳的作用。有文献指出，大 鼠负重游泳试验及小鼠爬绳法试验表明，刺五加提取物及苷类物质具有明显的抗疲劳作用其作用比人参强。同时证明本品苷的抗疲劳作用强于粗提物，说明 抗疲劳的活性成分为苷类物质。曲中原等人的研究显示，给小鼠喂食刺五加总 苷，以竭力游泳时间为指标测定小鼠运动耐力，结果表明，刺五加总苷各剂量 组均能显著延长小鼠负重游泳时间(P＜0.05或P＜0.01)，提高小鼠运动耐力； 显著提高游泳时间后小鼠血清LDH活力以及小鼠体内肌糖原和肝糖原的储备 量(P＜0.05或P＜0.01)显著降低小鼠全血LAC和血清BUN的含量(P＜0.05 或P＜0.01)。由此表明刺五加总苷在增强肌体运动耐力，抵抗疲劳产生和加速 疲劳消除等方面具有显著作用，这可能是其抗疲劳的主要作用机理。

西洋参：西洋参含有丰富的甙类，其主要功效成分是人参皂甙，从人参皂 甙中分离出的人参皂甙有Ro、Rb1、Rg1、Re，其中Rb1含量最高，约占总人 参皂甙含量的30％-40％。张雪香等人用西洋参人参皂甙(Ginsengside，GS)喂 养小白鼠，测定实验小鼠的乳酸脱氢酶(LDH)活力，血乳酸含量及肌糖原、 肝糖原含量。结果显示，食用15天GS小鼠的LDH活力及肌糖原、肝糖原含 量与对照组比较有显性差异(P＜0.05)；食用29天GS的小鼠在运动后20min、 50min的血乳酸值不仅明显低于对照组，而且也低于本组实验前水平(P＜0.01)，由此表明西洋参人参皂甙具有抗疲劳作用。其次，何聆等人的研究显示，给喂 食西洋参含片的小鼠进行负重游泳试验，结果表明中、高剂量组均能延长小鼠 负重游泳时间，小鼠运动后血乳酸量、肝糖原消耗量、血清尿素氮与对照组相 比均有明显减少。提示西洋参可以通过提高小鼠运动耐力、增加小鼠肝糖原贮 备，提高小鼠有氧代谢能力和运动负荷适应性，从而达到抗疲劳的保健功能。 近年来国内外的众多学者对西洋参进行了大量的药理学方能的研究，研究显示 西洋参具有明显的增强免疫力的功效；对中枢神经具有明显的抑制作用，可以 镇痛、镇静、镇痉及解热。有文献显示，给小鼠灌食5g/kg西洋参水煎液，能 使小鼠在多种缺氧环境中明显延长存活时间，在对抗应激作用、抗心率失常、 抗心肌缺血、抗病毒方面都有其显著的作用，这些功效对于缓解体力疲劳都有 一些辅助作用。

本发明所述的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物，通过以刺五加、 西洋参、淫羊藿等传统中药为主要原料，采用成熟先进的生产工艺，提取中药 中的精华成分制成软胶囊剂型保健食品，具有缓解体力劳的保健功效。本发明 是传统医学理论对中药缓解体力疲劳的科学应用，所用原料源于天然中草药， 不含有任何对人体产生副作用的西药成分，无咖啡因及任何国际上禁用的兴奋 剂成分。产品采用成熟先进提取生产工艺，在符合保健食品GMP的厂房中加 工生产，摒弃了传统中材需要长时间煎煮，服用剂量较大，服用不便，口感较 差等因素，且采用软胶囊这种在当今医药保健品行业中具有较强竞争力的剂型， 既保证了产品的品质及疗效，产品安全性高、密封性好，减少二次污染的风险； 又遮盖了中药的苦涩气味，更易吞咽，使消费者服用时感觉夏为舒适；且软胶 囊剂型包装不易破碎，携带十分安全，在适于消费者日常居家使用的同时，更 适于人们在外出度假、旅游及野外工作时使用。由于产品崩解后在肠道直接吸 收，无需溶解过程，吸收快。又由于产品的生物利用度高，因此减少了消费者 的服用剂量。因此本发明产品在保健食品市场特别是缓解体力疲劳类保健食品 市场上极具竞争力及发展前景。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方 案进行详细的描述。显然，所描述的实施病例仅仅是本发明一部分实施例，而 不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出 创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

下面实施例中以1重量份代表1g。

实施例1

本实施例提供一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊，胶囊内容 物配方如下：

刺五加提取物57重量份、西洋参提取物89重量份、淫羊藿提取物26重量 份、蜂蜡10重量份、色拉油318重量份。

胶囊皮各原料配比如下：

明胶:甘油:纯净水:焦糖色＝1:0.35:0.9:0.02。

本实施例所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊的制备方法，包 括如下步骤：

(1)取刺五加、西洋参、淫羊藿，分别打碎，过20目筛，之后分别在24℃ 用体积浓度为50％乙醇浸提3次，每次加3倍药材量溶剂，每次浸提时间均为 6h，得到各自的浸提液；各浸提液分别以3000r/min速率进行离心后过滤，得 到滤液回收乙醇后，分别在55℃、真空度为0.05Kpa条件下进行浓缩至得到相 对密度为1.1的清膏，分别进行喷雾干燥后(进口温度为110℃，出口温度为 70℃)，得到刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物；

按照所述重量份分别取刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物，充 分混合均匀，得到混合提取物；

(2)取蜂蜡加入色拉油中加热溶解，冷却到常温，得到溶有蜂蜡的色拉油；

(3)将步骤(1)所述混合提取物加入步骤(2)所得溶有蜂蜡的色拉油， 充分搅拌混匀后，得到混悬物料；

(4)将步骤(3)所述混悬物料加入胶体磨内，以2800转/min进行研磨 20min后，即得胶囊内容物，备用；

(5)取明胶，加入纯净水使吸水膨胀，再取甘油、焦糖色、纯净水置于化 胶罐中，加热至75℃，混合均匀，加入膨胀后的明胶进行搅拌，使熔融成均匀 胶液保温1.5h，抽真空排除胶液中的气泡，过滤胶液，待用；

(6)将步骤(5)所述胶液通过转鼓制成胶片，在压丸机上将0.5g胶囊内 容物封入两片胶片中，即得线形软胶囊；

(7)将线形软胶囊置于转笼中定形2h以上；

(8)将定形出来的软胶囊在温度为32℃、空气相对湿度20％条件下进行 预干燥，使软胶囊壳的水分达到7％；

(9)将预干燥后的软胶囊进行粗选，并用95％酒精洗丸，之后在23℃、 相对湿度35％条件下进行干燥，将干燥后的软胶囊和消毒过的脱脂棉纱布共同 置于糖衣锅内(糖衣锅转速46r/min)进行抛光后，经旋转翻动15min后，即 得所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊。

实施例2

本实施例提供一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊，胶囊内容 物配方如下：

刺五加提取物50重量份、西洋参提取物100重量份、淫羊藿提取物20重 量份、蜂蜡15重量份、色拉油300重量份。

胶囊皮各原料配比如下：

明胶:甘油:纯净水:焦糖色＝1:0.35:0.9:0.02。

本实施例所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊的制备方法，包 括如下步骤：

(1)取刺五加、西洋参、淫羊藿，分别打碎，过15目筛，之后分别在20℃ 用体积浓度为40％乙醇浸提4次，每次加2倍药材量溶剂，每次浸提时间均为 8h，得到各自的浸提液；各浸提液分别以2500r/min速率进行离心后过滤，得 到滤液回收乙醇后，分别在50℃、真空度为0.04Kpa条件下进行浓缩至得到相 对密度为1.1的清膏，分别进行喷雾干燥后(进口温度为110℃，出口温度为 70℃)，得到刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物；

按照所述重量份分别取刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物，充 分混合均匀，得到混合提取物；

(2)取蜂蜡加入色拉油中加热溶解，冷却到常温，得到溶有蜂蜡的色拉油；

(3)将步骤(1)所述混合提取物加入步骤(2)所得溶有蜂蜡的色拉油， 充分搅拌混匀后，得到混悬物料；

(4)将步骤(3)所述混悬物料加入胶体磨内，以2800转/min进行研磨20min后，即得胶囊内容物，备用；

(5)取明胶，加入纯净水使吸水膨胀，再取甘油、焦糖色、纯净水置于化 胶罐中，加热至70℃，混合均匀，加入膨胀后的明胶进行搅拌，使熔融成均匀 胶液保温2h，抽真空排除胶液中的气泡，过滤胶液，待用；

(6)将步骤(5)所述胶液通过转鼓制成胶片，在压丸机上将0.5g胶囊内 容物封入两片胶片中，即得线形软胶囊；

(7)将线形软胶囊置于转笼中定形2h以上；

(8)将定形出来的软胶囊在温度为30℃、空气相对湿度20％条件下进行 预干燥，使软胶囊壳的水分达到6％；

(9)将预干燥后的软胶囊进行粗选，并用95％酒精洗丸，之后在21℃、 相对湿度30％条件下进行干燥，将干燥后的软胶囊和消毒过的脱脂棉纱布共同 置于糖衣锅内(糖衣锅转速46r/min)进行抛光后，经旋转翻动10min后，即 得所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊。

实施例3

本实施例提供一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊，胶囊内容 物配方如下：

刺五加提取物70重量份、西洋参提取物80重量份、淫羊藿提取物30重量 份、蜂蜡5重量份、色拉油350重量份。

胶囊皮各原料配比如下：

明胶:甘油:纯净水:焦糖色＝1:0.35:0.9:0.02。

本实施例所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊的制备方法，包 括如下步骤：

(1)取刺五加、西洋参、淫羊藿，分别打碎，过25目筛，之后分别在28℃ 用体积浓度为60％乙醇浸提2次，每次加4倍药材量溶剂，每次浸提时间均为8h，得到各自的浸提液；各浸提液分别以3500r/min速率进行离心后过滤，得 到滤液回收乙醇后，分别在60℃、真空度为0.06Kpa条件下进行浓缩至得到相 对密度为1.1的清膏，分别进行喷雾干燥后(进口温度为110℃，出口温度为 70℃)，得到刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物；

按照所述重量份分别取刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物，充 分混合均匀，得到混合提取物；

(2)取蜂蜡加入色拉油中加热溶解，冷却到常温，得到溶有蜂蜡的色拉油；

(3)将步骤(1)所述混合提取物加入步骤(2)所得溶有蜂蜡的色拉油， 充分搅拌混匀后，得到混悬物料；

(4)将步骤(3)所述混悬物料加入胶体磨内，以2800转/min进行研磨 20min后，即得胶囊内容物，备用；

(5)取明胶，加入纯净水使吸水膨胀，再取甘油、焦糖色、纯净水置于化 胶罐中，加热至80℃，混合均匀，加入膨胀后的明胶进行搅拌，使熔融成均匀 胶液保温1h，抽真空排除胶液中的气泡，过滤胶液，待用；

(6)将步骤(5)所述胶液通过转鼓制成胶片，在压丸机上将0.5g胶囊内 容物封入两片胶片中，即得线形软胶囊；

(7)将线形软胶囊置于转笼中定形2h以上；

(8)将定形出来的软胶囊在温度为35℃、空气相对湿度20％条件下进行 预干燥，使软胶囊壳的水分达到8％；

(9)将预干燥后的软胶囊进行粗选，并用95％酒精洗丸，之后在24℃、 相对湿度40％条件下进行干燥，将干燥后的软胶囊和消毒过的脱脂棉纱布共同 置于糖衣锅内(糖衣锅转速46r/min)进行抛光后，经旋转翻动20min后，即 得所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊。

实验例

一、安全性毒理学试验：

1、样品描述：

软胶囊，胶囊内容物为黄棕色油状物，0.5g/粒，置阴凉干燥处保存。人体 口服推荐剂量为0.5g/粒×3粒/次×2次/天，以每人60kg体重计算，折合剂量 0.05g/kg/天。取胶囊内容物(比重0.966g/ml)备用。

2、实验动物及环境：

南华大学实验动物学部提供的清洁级昆明种小鼠和SD大鼠，实验动物生 产许可证号为SCXK(湘)2004-0009。实验动物使用许可证号为SYXK(湘) 2003-0002。实验期间动物房环境温度为21℃-24℃，湿度56％-58％。

3、急性经口毒性试验：

采用最大耐受量试验。选用体重为18g-22g的健康昆明种小鼠20只，雌雄 各半。取该样品内容物给小鼠一次性经口灌胃，灌胃体积为20ml/kg·bw，折合 剂量19320mg/kg·bw，灌胃前禁食16小时。灌胃后连续观察两周，记录中毒 表现及死亡情况。

4、遗传毒性试验：

(1)污染物致突变性检测(Ames试验)：

采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、 TA100、TA102四株菌株进行试验。五个试验剂量分别为5000、1000、200、 40、8μg/皿同时设自发回变、溶剂对照(二甲基亚砜)和阳性突变剂对照。样 品配制时，取1.25g该样品内容物加二甲基亚砜定容至25mL，混匀，配成5000μg/ 皿浓度组受试液；从中取5.0mL加二甲基亚砜定容至25mL，混匀，配成1000μg/ 皿浓度组受试液；从1000μg/皿浓度组受试液中取5.0mL加二甲基亚砜定容至 25mL，混匀，配成200μg/皿浓度组受试液；依次类推，配成40、8μg/皿浓度组 受试液，灭菌后备用。试验采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝微粒体酶(S-9) 作为体外代谢活化系统。在顶层琼脂中加入0.1mL试验菌株增菌液、0.1mL受 试液和0.5ml S-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。37℃培养48小时，计数每皿菌落数。如果受试物的回变菌落数超过自发回变菌 落数的2倍以上，并有剂量-反应关系者定为阳性。整套试验在相同试验条件下 重复做两次。

(2)小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：

采用间隔24小时两次经口灌胃法。取体重为25g-30g的健康昆明种小鼠 50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺 为阳性对照，植物油为阴性对照。试验组3个剂量分别为10000mg/kg·bw、 5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，试验时分别取该样品内容物25.00g、12.50g、 6.25g加植油定容至50mL，环磷酰胺阳性对照取100mg环磷酰胺加蒸馏水定容 至50mL，给小鼠按0.20mL/10g·bw体积间隔24小时灌胃2次。末次给样后6 小时颈椎脱白处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，微核发生 率以含微核的PCE千分率计，按x²检验统计处理。计数200个嗜多染红细胞， 计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例(PCE/NCE)。

(3)小鼠精子畸形试验

取体重25g-35g的雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只。以 40mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，植物油为阴性对照。试验组三个剂量 分别为10000mg/kg·bw、5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，试验时分别取该样品 内容物25.00g、12.50g、6.25g加植物油定容至50mL，环磷酰胺阳性对照取100mg 环磷酰胺加蒸馏水定容至50mL，给小鼠按0.20mL/10g·bw体积灌胃。每日一 次，连续5天，于末次灌胃后的第30天处死动物，取两侧副睾，置于放有2mL 生理盐水的平皿中，用眼科剪将副睾纵向剪1-2刀，静置3-5min，轻轻摇动， 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片，干燥后甲醇固定5min，2％伊红染色1h，用 水轻冲、干燥。每只动物计数1000个结构整的精子，计算畸变精子发生率。按 x²检验统计处理。

5、30天喂养试验：

(1)剂量组选择与受试物给予方式：

SD大鼠80只，雌雄各半，雄鼠体重79.2±7.5g，雌鼠体重78.3±5.8g。随 机分为四组，即对照组及三个受试物组，每组20只，雌雄各半。该样品低、中、 高剂量分别为2.50g/kg·bw、3.75g/kg·bw、5.00g/kg·bw，分别相当于人体推荐 剂量的50、75、100倍。低、中高剂量受试液配制时分别取该样品内容物50.0g、 75.0g、100.0g加植物油定容至200ml，给大鼠按1.0ml/100g·bw体积灌胃，对 照组灌胃给予等体积植物油，每日一次，连续30天。

(2)主要仪器与试剂：

主要仪器：雅培CD3700全自动血球计数仪，OLYMPUS AU 400全自动生 化分仪，TD5A-WS台式低速离心机等。

主要试剂：总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、 谷转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG) 购自上海复星长征医学科学有限公司；肌酐(Cr)购自上海申能-德赛诊断技术 有限公司。

(3)实验方法：

实验期间所有动物给予普通饲料，单笼饲养，自由摄食饮水，每天观察动 物的活动和生长情况，每周加食2次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重， 计算每周进食量和食物利用率，实验末计算总食物利用率。实验末期，禁食16 小时后，每只大鼠摘眼球采集两份血：抗凝血用雅培CD3700全自动血球计数 仪测定血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)，进行红细胞(RBC)、白细胞 (WBC)、血小板(PLT)计数及WBC分类；非抗凝血静置后分离血清，用OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪测定TP、ALB、ALT、Cr、BUN、AST、 CHOL、TG和GLU。采血后颈椎脱臼处死动物作大体解剖，称肝、肾、脾、 睾丸重量，计算脏/体比值，取肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢作病理 切片检查。在对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标改变时， 只进行最高剂量组及对照组动物主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对 较低剂量组相应器官及组织进行检查。

(4)实验数据统计：

用Excel、Spss、Instat软件进行数据转化和统计分析。用Spss软件分析时， 先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较， 发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若 方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后 的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方齐的目的，改用秩和检验进行统计， 发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性Tamhane'sT2检验进行两两比较。

6、实验单位：湖南省疾病预防控制中心

7、实验小结：

(1)经口急性毒性试验：

以19320mg/kg·bw剂量的该样品给两种性别的昆明种小鼠灌胃后未见明显 中毒症状，观察14天无死亡。该样品对雌、雄昆明种小鼠的急性经口毒性试验 最大耐受剂量(MTD)大于19320mg/kg·bw。根据《保健食品检验与评价技术 规范》(2003年版)中的急性毒性分级标准，属无毒物。

(2)遗传毒性试验：

①污染物致突变性检测(Ames试验)：

对TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，加与不加S-9，样品各剂 量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系，说明该 受试物为诱变阴性。

②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：

经x²检验，样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性(P＞ 0.05)，而各剂量组和阴性对照组微核率显著低于环磷酰胺组(P＜0.01)。各 组PCE/NCE比值均在正常范围内。提示样品对小鼠骨髓细胞未见损伤作用。

③小鼠精子畸形试验：

经x²检验，样品各剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异无显著性(P ＞0.05)，而各剂量组和阴性对照组精子畸形率显著低于环磷酰胺组(P＜0.01)。 该样品对小鼠精子不产生畸变作用。

(3)30天喂养试验：

30天喂养期间，各组动物生长发育良好，无异常行为和中毒症状，无死亡。

①对大鼠体重及体重增长的影响：

经方差齐性检验，雌、雄鼠各时点体重及试验期间体重增长值方差齐，采 用单因素方差分析进行统计，结果未见各剂组与对照组之间有显著性差异(P ＞0.05)。

②对大鼠进食量及食物利用率的影响：

经方差齐性检验，雄鼠第1、2周食物利用率方差不齐，采用秩和检验，雄 鼠各周及总进食量、其它周及总食物利用率、雌鼠各周及总进食量、各周及总 食物利用率方差齐，采用单因素方差分析进行统计，未见各剂量组与对照组之 间有显著性差异(P＞0.05)。

③对大鼠血液学指标的影响：

方差齐性检验示，各组雌雄大鼠红细胞总数、血红蛋白、红细胞压积、血 小板总数、白细胞总数及其分类方差齐，采用单因素方差分析进行统计，结果 显示各剂量组与对照组上述各项指标无显著性差异(P＞0.05)。

④对大鼠生化指标的影响：

经方差齐性检验，雌雄鼠各项生化指标均方差齐，采用单因素方差分析进 行统计处理，未发现各剂量组与对照组之间各项生化指标有显著性差异(P＞ 0.05)。

⑤对大鼠脏器绝对重量和脏器/体重比值的影响：

经方差齐性检验，各组雌雄大鼠肝脏、脾脏、肾脏和雄鼠睾丸的绝对重量、 肝/体、脾/体、肾/体比值及雄鼠的睾丸/体重比值方差齐，采用单因素方差分析 进行统计，结果显示各剂量组与相应对照组之间各脏器绝对重量及脏体比值比 较无显著性差异(P＞0.05)。

⑥大体解剖及组织学检查结果：

在对各剂量组动物作大体解剖检查时，未发现明显病变,只进行高剂量组及 对照组动物主要脏器的组织病理学检查。肝、肾、脾、胃、十二指肠、卵巢、 睾丸组织病理切片检查结果，未发现明显病变。

8、检验结果：

(1)经口急性毒性试验：

对雌、雄昆明种小鼠的最大耐受剂量(MTD)大于9320mg/kg·bw，属无 毒物。

(2)遗传毒性试验：

三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠 精子畸形试验)结果均为阴性。

(3)大鼠30天喂养试验：

以2.50g/kg·bw、3.75g/kg·bw、5.00g/kg·bw剂量(分别相当于人体推荐量 的50、75、100倍)的该样品内容物给大鼠灌胃30天，实验期间，各组动物生 长发育良好，样品各剂量对大鼠体重、体重增长、平均进食量及食物利用率无 显著影响(P＞0.05)。实验末，各剂量组血液学指标(血红蛋白、红细胞总数、 红细胞压积、血小板总数、白细胞总数及分类)、血生化指标(血清谷丙转氨 酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、血糖)、 脏体比值(肝/体、脾/体、肾/体比值及雄鼠的睾丸/体重比值)与相应对照组比 较,无显著性差异(P＞0.05)。大体解剖和组织病理检查未见与样品有关的异常 改变。提示该样品30天喂养对大鼠无明显毒副作用。

二、缓解体力疲劳功能动物实验：

1、样品：

软胶囊，胶囊内容物为黄棕色油状物，0.5g/粒，置阴凉干燥处保存。人体 口服推荐剂量为0.5g/粒×3粒/次×2次/天，以每人60kg体重计算，折合剂量 0.05g/kg/天。取胶囊内容物备用。

2、实验动物及饲养环境：

南华大学实验动物学部(实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2004-0009) 提供的清洁级昆明种小鼠，雄性80只，雌性80只，体重18-23g，分为Ⅰ(雄)、 Ⅱ(雄)、Ⅲ(雌)、Ⅳ(雌)4大组，每大组40只动物，分别进行负重游泳 实验、血清尿素、肝糖原及血乳酸测定。每大组又分为对照组、低、中、高剂 量组，每组10只小鼠。实验期间动物房环境温度为21℃-24℃，湿度56％-58％。 实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。

3、剂量选择：

低、中、高剂量分别为0.25g/kg·bw、0.50g/kg·bw、1.50g/kg·bw(分别相当 于人体推荐量的5、10、30倍)，受试液配制时分别取该样品内容物2.5g、5.0g、 15.0g加植物油定容至100ml，按0.1ml/10g·bw体积给小鼠灌胃，对照组给予等 体积植物油。每天灌胃一次，连续30天后测定各项缓解体力疲劳指标。

4、主要仪器、器材与试剂：

(1)仪器、材料：

动物称重天平、电子天平、离心机、细胞破碎仪、水浴箱、振荡器、OLYMPUS AU400全自动生化分析仪、721分光光度计、游泳箱、铅皮、计时器、血色素 吸管、加样器、吸量管、试管、20mL具塞试管。

(2)试剂：

血清尿素测试盒,由中生北控生物科技股份有限公司提供；血乳酸测试试剂 盒由英国RANDOX公司提供；肝糖元测试盒,由南京建成生物工程研究所提供。

5、实验方法及结果判定：

(1)负重游泳试验：

末次给小鼠受试物30min后，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，置于游泳箱 中游泳，水深不少于30cm，水温25℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时 间，作为小鼠负重游泳时间(s)。

游泳时间为计量资料，若受试物组游泳时间明显长于对照组游泳时间，且 差异有显著性(P＜0.05)，可判定该受试物有延长小鼠负重游泳时间的作用。

(2)血清尿素测定：

末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃水中不负重游泳90min，休息 6min后立即拔眼球采血0.5mL。于4℃静置3h后2000rpm离心15min，取血清 用全自动生化分析仪测定血清尿素。

所得数据为计量资料，若受试物组血清尿素含明显低于对照组，且差异有 显著性(P＜0.05)，可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素产生的作用。

(3)肝糖原测定：蒽酮法

末次给小鼠受试物30min后处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸 干，称取肝脏100mg，余下操作按试剂盒说明书进行肝糖元测定。

所得数据为计量资料，若受试物组肝糖原含量明显高于对照组，且差异有 显著性(P＜0.05)，可判定该受试物有促进小鼠肝糖原储备的作用。

(4)血乳酸测定：

末次给予受试物30min后小鼠从内眦静脉丛采血20ul，然后不负重在温度 为30℃的水中游泳10min，分别于运动后0min和20min同上采血20ul，测定 血乳酸计算血乳酸曲线下面积。

血乳酸曲线下面积＝1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值) ×10+1/2×(游泳后0min的血乳酸值+游泳后休息20min的血乳酸值)×20

所得数据为计量资料，任一剂量组血乳酸曲线下面积小于对照组，且差异 有显著性(P＜0.05)，可判定该项实验结果阳性。

(5)实验数据统计处理：

用Excel、Spss软件进行数据转换和统计分析。用Spss软件统计比较时， 先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较， 发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组数间的两两比较。若方 差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后 的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统 计，发现总体比较有差异,则采用不要求方差齐性的Tamhane's T2检验进行两两 比较。

(6)结果判定：

负重游泳试验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖元三项生化指标中任 二项指标阳性，即可判定该受试物具有缓解体力疲劳功能的作用。

6、实验单位：湖南省疾病预防控制中心

7、实验小结：

(1)对小鼠体重的影响：

数据均符合方差齐的要求，单因素方差析显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ大组中各剂 量组与对照组之间初始体重、中期体重终末体重之间无显著性差异(P＞0.05))。

(2)对小鼠负重游泳时间的影响：

对负重游泳时间进行方差齐性检验，满足方差齐性的要求，单因素方差分 析显示各组之间总体比较有显著性差异(P＝0.017)。进一步用Dunnett法进行 多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，发现1.50g/kg·bw剂量组与 0.00g/kg·bw组之间，差异有显著性(P＜0.01)，提示1.50g/kg·bw剂量的该样 品能显著延长小鼠的负重游泳时间。

(3)对小鼠血清尿素的影响：

对小鼠血清尿素进行方差齐性检验，满足方差齐的要求，单因素方差分析 显示各组之间总体比较有显著性差异(P＝0.036)，进一步用Dunnett法进行多 个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，发现1.50g/kg·bw剂量组血清尿素 显著低于0.00g/kg·bw组(P＜0.05)，即1.50g/kg·bw剂量的该样品能减少疲劳 小鼠血清尿素产生。

(4)对三个时点血乳酸曲线下面积的影响：

对血乳酸曲线下面积进行方差齐性检验，结果显示符合方差齐的要求，单 因素方差分析显示各组之间总体比较无显性差异(P＞0.05)。提示缓解体力疲 劳的西洋参淫羊藿刺五加胶囊该样品对运动小鼠血乳酸增长和消除无明显影 响。

(5)对小鼠肝糖原储备量的影响：

原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐的要求，单因素方差分析分析显 示各组之间总体比较有显著性差异(P＝0.027)。进一步用Dunnett法进行多个 剂量组与一个对照组均数间的两两比较，发现1.50g/kg·bw剂量该样品可显著 提高小鼠肝糖原储备量(P＜0.05)。

8、检验结果：

经口灌胃给予小鼠0.25g/kg·bw、0.50g/kg·bw、1.50g/kg·bw剂量的该样品 30天，与对照组相比，1.50g/kg·bw剂量能显著延长小鼠的负重游泳时间，显 著减少疲劳小鼠血清尿素产生，显著增加肝糖原储备量。各剂量对小鼠的体重 增长和运动小鼠血乳酸增长和消除无明显影响。根据《保健食品检验与评价技 术规范》(2003年版)中判定标准，认为该样品具有缓解体力疲劳功能。

三、卫生学检验、功效成分检验、加速稳定性检验：

1、样品：

软胶囊，胶囊内容物为黄棕色油状物，0.5g/粒，置阴凉干燥处保存。

2、检验依据：

GB/T5009食品卫生理化检验方法、《中华人民共和国药典》、GB4789食 品卫生微生物检验方法、《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)等。

3、检验机构：四川省疾病预防控制中心

4、检验结果：

(1)卫生学检验：样品依据国标内规定的方法进行检验，结果表明样品卫 生学相关指标符合国标规定。

(2)功效成分检验：样品在38±1℃，75％相对湿度下进行三个月保温实 验，经功效成分项目检验，提示所检验指标质量稳定。

(3)加速稳定性检验：样品在38±1℃，相对湿度75％下进行三个月保温 实验，经理化、微生物检验，提示所检验指标质量稳定。

四、兴奋剂检测：

1、样品：

软胶囊，胶囊内容物为黄棕色油状物，0.5g/粒，置阴凉干燥处保存。

2、检测项目：

世界反兴奋剂机构禁用药物

3、检验单位：

国家体育总局运动医学研究所兴奋剂检测中心

4、检测结果：

经检测该样品，未发现禁用的刺激剂、麻醉剂、β-阻断剂、利尿剂和甾体 激素类药物。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于 此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到 变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应 以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物，其特征在于，原料组分包括：刺五加提取物50-70重量份、西洋参提取物80-100重量份、淫羊藿提取物20-30重量份、蜂蜡5-15重量份、色拉油300-350重量份。

2.根据权利要求1所述的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物，其特征在于，所述原料组分为：刺五加提取物57重量份、西洋参提取物89重量份、淫羊藿提取物26重量份、蜂蜡10重量份、色拉油318重量份。

3.根据权利要求1或2所述的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物，其特征在于，所述组合物的剂型为软胶囊。

4.根据权利要求3所述的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)取刺五加、西洋参、淫羊藿，打碎过筛后，分别用乙醇浸提，得到各自的浸提液；各浸提液分别进行离心后过滤，滤液回收乙醇后，依次经浓缩、干燥，分别得到刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物；

按照所述重量份分别取刺五加提取物、西洋参提取物和淫羊藿提取物，充分混合均匀，得到混合提取物；

(2)取蜂蜡加入色拉油中加热溶解，冷却到常温，得到溶有蜂蜡的色拉油；

(3)将步骤(1)所述混合提取物加入步骤(2)所得溶有蜂蜡的色拉油，充分搅拌混匀后，得到混悬物料；

(4)将步骤(3)所述混悬物料加入胶体磨内，进行研磨后，即得胶囊内容物，备用；

(5)取明胶，加入纯净水使吸水膨胀，再取甘油、焦糖色、纯净水置于化胶罐中，加热混匀后，加入膨胀后的明胶进行搅拌，使熔融成均匀胶液保温1-2h，抽真空排除胶液中的气泡，过滤胶液，待用；

(6)将步骤(5)所述胶液制成胶片，之后将步骤(4)所述胶囊内容物封入两片胶片中，即得线形软胶囊；

(7)将线形软胶囊置于转笼中定形；

(8)将定形出来的软胶囊进行预干燥，使软胶囊壳的水分达到6-8％；

(9)将预干燥后的软胶囊进行粗选、洗丸、干燥、抛光后，即得所述缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加软胶囊。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，胶体磨的转速为2800转/min，研磨时间为20min。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，化胶罐内加热温度为70-80℃。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，定形时间为2h以上。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(8)中，预干燥的温度为30-35℃，空气相对湿度20％。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(9)中，采用95％酒精进行洗丸；

在21-24℃、相对湿度30-40％条件下进行干燥；

在糖衣锅内以转速46r/min进行抛光，经旋转翻动10-20min后取出。

10.根据权利要求1-9任一项所述方法制得的缓解体力疲劳的西洋参淫羊藿刺五加组合物。