CN113368096A - 淫羊藿苷元在制备脑梗死出血转化防治药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及淫羊藿苷元在制备脑梗死出血转化防治药物中的用途。淫羊藿苷元不仅可显著降低脑梗死患者的原发性出血转化、无症状性出血转化及使用溶栓药物、抗凝药物或抗血小板药物后导致的继发性出血转化风险，明显缩短出血时间、减少出血量，在发挥上述作用时不改变凝血四项及血常规数值，不影响溶栓药的溶栓效果，而且还对根据首次头颅CT/MRI可以确定的出血性梗死的发生具有显著的预防作用，对提高梗死类疾病溶栓治疗的近期及远期疗效，具有十分重要的意义。

Description

淫羊藿苷元在制备脑梗死出血转化防治药物中的用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及淫羊藿苷元在制备脑梗死出血转化防治药物中的用途。

背景技术

目前，心脑血管疾病已成为危害国人健康和生命的主要疾病。其中，脑卒中已连续五年成为我国人口死因的第二位，同时也是世界死亡原因第二位的疾病。而到2010年，中国缺血性脑卒中和短暂性脑缺血发作二级预防指南(2010版)已明确指出：脑血管病已成为我国城市和农村人口的第一位致残和死亡原因，且随着人口老龄化的到来，卒中的发病率会有逐年增加的趋势。因此，各类缺血性梗死的早期防治，减少后遗症，已经成为现代医学的重点问题。

溶栓治疗是目前唯一具有循证医学证据的治疗急性缺血性梗死的有效方法，被分别列入各国脑血管病的防治指南之中，如美国卒中协会的声明中，特别推荐3小时内静脉内重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓治疗，而对大的颅动脉包括椎基底动脉或大脑中动脉闭塞，发病6小时内推荐经动脉rt-PA溶栓治疗。我国国家“九五”攻关课题“急性脑梗死早期溶栓治疗的多中心、随机、双盲和安慰剂对照临床研究”结果也表明，急性脑梗死发病6小时内，应用尿激酶(UK)静脉溶栓疗效与安全是肯定的。溶栓治疗的原理在于溶栓药物能迅速溶解血栓，疏通闭塞血管，恢复梗死区血供，抢救缺血半暗带，解除神经功能缺损症状和体征，从而挽救生命，减少后遗症。

尽管溶栓治疗是目前唯一有循证医学证据且公认有效的治疗方法，但溶栓治疗也是一把双刃剑，它在溶解血栓的同时，亦可导致出血转化等多种严重并发症，且有严格的时间窗限制，从而严重限制了其在临床的应用。溶栓后的出血转化(HT)是指急性缺血性脑卒中进行溶栓治疗后，由于缺血区血管重新恢复血流灌注，导致血液从发生缺血性改变的动脉中漏出，甚至在血压作用下使动脉破裂而出血。目前西医对溶栓后的各种并发症仅从各单一环节或单一因素进行防治，尚未取得满意的疗效，故如能充分发挥中医药注重整体调节和多环节综合治疗的优势，寻求能够在溶解血栓同时减轻或消除各类出血转化风险的有效治法及方药，提高梗死类疾病溶栓治疗的近期及远期疗效，具有十分重要的意义。

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatumMaxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)、或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥茎叶。临床上主要用于肾阳虚，阳痿尿频，不孕；风湿痹痛，肢体麻木拘挛，筋骨痿软，步履艰难；肾阳虚，喘咳短气。

淫羊藿苷元(icaritin,IT)为小檗科淫羊藿属植物淫羊藿中的一种多羟基黄酮类单体成分。药理研究表明：IT抗骨质疏松作用较淫羊藿中其他黄酮苷类化合物强，在体外具有促进成骨细胞活性，抑制破骨细胞活性的作用。近年来作为淫羊藿中重要活性成分的淫羊藿苷和淫羊藿苷元越来越受到医药工作者的关注。如专利申请CN101637467A公开了淫羊藿苷元在制备治疗骨质疏松药物中的应用。专利US6399579公开了淫羊藿苷元在治疗性功能障碍方面的用途。

目前还没有有关淫羊藿苷元防治出血转化的文献报道。

发明内容

为预防或治疗脑梗死出血转化，本发明提供了淫羊藿苷元在制备出血转化防治药物中的用途。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

淫羊藿苷元在制备脑梗死出血转化防治药物中的用途。

所述的脑梗死出血转化为缺血性脑梗死继发性出血转化、原发性出血转化或无症状性出血转化中的一种或多种。

所述的脑梗死出血转化为出血性脑梗死。所述的继发性出血转化为使用溶栓药物、抗栓药物或血管内治疗中的一种或多种治疗方法导致的出血转化。

进一步地，所述的溶栓药物为阿替普酶，所述的抗栓药物为抗凝血药或抗血小板药中的一种或多种，所述的抗凝药为肝素钠；抗血小板药为阿司匹林。

所述的原发性出血转化为急性脑梗后自发性出血转化。

药效实施例1-2淫羊藿苷元对肝素钠及阿司匹林导致的小鼠出血时间的影响作用结果表明：淫羊藿苷元可显著缩短肝素钠及阿司匹林所致的小鼠出血时间，并且在发挥促凝作用的同时不改变血常规及凝血四项。

药效实施例3淫羊藿苷元对溶栓药物溶栓效果的影响及实施例4淫羊藿苷元对溶栓药物所致出血转化的影响结果表明：淫羊藿苷元可显著改善溶栓药物导致的出血转化，并且在阻止出血转化减少出血量的同时不影响溶栓药物对血栓的溶解作用，不影响血常规数值。

淫羊藿苷元对上述实施例列举以外的溶栓药物、抗凝药物及抗血小板药物导致的出血转化也具有显著的防治作用，并且对自发性出血转化及无症状性出血转化风险同样具有显著的降低作用。

除对上述脑梗死发生后的出血转化具有显著的防治作用外，淫羊藿苷元还对根据首次头颅CT/MRI可以确定的出血性梗死的发生具有显著的防治作用。

淫羊藿苷元给药途径包括胃肠道途径和非胃肠道途径，非胃肠道途径包括但不限于皮下、皮内、动脉、静脉、肌肉、关节、鞘内、颅内、胸腔、腹腔内注射或滴注，经鼻、经颊、舌下、气管、尿道、直肠或病灶局部给药等。可以和其它药物同时服用，也可以提前服用进行预防用药。

本发明除了提供了淫羊藿苷元在制备出血转化防治药物中的用途外，还提供了在进行上述疾病治疗时所用到的药物制剂，其包含淫羊藿苷元和药学可接受的药用辅料。

药物制剂包括但不限于注射剂、粉针剂、胶囊剂、片剂、微乳、滴丸、肠溶软胶囊。

本发明制剂所用的药用辅料为本领域技术人员已知的常用辅料。

适合的药用辅料在《药用辅料大全》(第123页，四川科学技术出版社，1993年出版，罗明生和高天惠主编)中已有详细描述。例如，制备微乳制剂常用的药用辅料包括但不限于大豆油、聚氧乙烯-23-月桂基醚、1，2-丙二醇、氢化椰油甘油脂、月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯、聚乙二醇3350、红花油、棉子油、十甘油单硬脂酸酯；制备滴丸制剂常用的药用辅料包括但不限于聚乙二醇6000、聚乙二醇1000；制备胶囊制剂常用的药用辅料包括但不限于乳糖和玉米淀粉。制备软胶囊制剂常用的可药用载体包括但不限于中链脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油、1，2-丙二醇等。

本领域技术人员可以根据实际需要选择适合的药用辅料，并通过本领域已知的方法配制本发明的制剂。所述制剂包括但不限于固体、液体、油、乳剂、凝胶、气溶胶、吸入剂、喷雾、胶囊、丸剂、贴剂和栓剂等。

优选地，所述的药物在出血转化防治时的给药剂量为0.02mg/kg-200mg/kg；更优选地，所述的药物在出血转化防治时的给药剂量为0.2mg/kg-20mg/kg。

与现有技术相比，淫羊藿苷元在用于出血转化防治时具有如下优势：

(1)疗效显著

可显著缩短肝素钠及阿司匹林所致的小鼠出血时间延长的时间；有效防止溶栓药物导致的出血转化。

(2)不改变凝血四项及血常规数值，不影响溶栓药的溶栓效果。

(3)安全无毒、综合作用

淫羊藿苷元为中药提取成分，相比西药治疗不仅具有安全无毒的优点，而且能起到整体调节和多环节综合治疗的作用。

具体实施例

以下通过具体实施方式进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。

制剂实施例1淫羊藿苷元微乳制剂

制备工艺：称取处方量大豆油、聚氧乙烯-23-月桂基醚、1,2-丙二醇，混合后搅拌均匀，然后加入淫羊藿苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清溶液，即为淫羊藿苷元微乳制剂。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为15nm。

制剂实施例2淫羊藿苷元微乳制剂

制备工艺：称取处方量氢化椰油甘油脂、月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯、1,2-丙二醇、聚乙二醇3350，混合后搅拌均匀，然后加入淫羊藿苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清溶液，即为淫羊藿苷元微乳制剂。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为40nm。

制剂实施例3淫羊藿苷元注射液

制备工艺：向处方量的PEG-400加入淫羊藿苷元，搅拌溶解，加入0.9％氯化钠溶液至10L，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

制剂实施例4淫羊藿苷元注射液

制备工艺：将处方量的乙醇和吐温-80混合均匀，加入淫羊藿苷元，搅拌溶解，加入注射用水至10L，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

制剂实施例5淫羊藿苷元注射液

淫羊藿苷元 1g

乙醇 3.3L

注射用水 加至10L

制备工艺：将处方量的乙醇加入淫羊藿苷元，搅拌溶解，加入注射用水至10L，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

制剂实施例6淫羊藿苷元滴丸制剂

聚乙二醇-6000 14.5g

聚乙二醇-1000 5.0g

制成1000粒

制备工艺：称取处方量过100目筛的淫羊藿苷元，加入已在水浴上加热熔融的含处方量的聚乙二醇6000、聚乙二醇1000的混合液中，充分搅拌，使之均匀，装入滴瓶中，于95±2℃的条件下滴制；滴入盛有4-6mL的甲基硅油的玻璃冷凝柱内，成型后取出，用吸水纸吸去黏附的甲基硅油，即得。

制剂实施例7淫羊藿苷元肠溶软胶囊制剂

内容物处方：

淫羊藿苷元 10g

无水乙醇 10g

1,2-丙二醇 10g

聚氧乙烯蓖麻油 50g

中链脂肪酸甘油酯 20g

胶皮处方：

明胶 10g

甘油 5g

纯化水 10g

肠溶包衣液处方：

制备工艺：称取处方量中链脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油、1,2-丙二醇、无水乙醇，混合后搅拌均匀，然后加入淫羊藿苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为淫羊藿苷元微乳浓缩物。将上述所得的微乳浓缩物加水按照1：10-20的重量比稀释至澄清溶液，即得软胶囊微乳内容物。称取处方量明胶、甘油、纯化水，混合均匀后压制成胶皮，再称取处方量的Eudragit L30D-55、柠檬酸三乙酯、滑石粉、纯化水混合均匀制得肠溶包衣液。将含有淫羊藿苷元的软胶囊微乳内容物用胶皮包裹制成软胶囊，并在软胶囊上包肠衣制得肠溶软胶囊。

制剂实施例8淫羊藿苷元胶囊制剂

制备工艺：将淫羊藿苷元100g、乳糖120g和玉米淀粉130g在混合机中混合10-15分钟，加入硬脂酸镁5g混合1-3分钟，装入1000粒胶囊壳即可。

制剂实施例9淫羊藿苷元片剂

制备工艺:将淫羊藿苷元和辅料微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀，加入适量的淀粉浆制软材，然后过16目筛制粒。湿颗粒在60℃干燥，干颗粒过20目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混匀，压片，每片约200mg，即得。

制剂实施例10淫羊藿苷元粉针剂

制备工艺：称取处方量的注射用淫羊藿苷元原料,加入适量注射用水溶解。然后，加入经过规定量的预先经过除菌除热原处理的混匀，再加注射用水至规定1000ml；将上述药液中加入注射剂用活性炭5g，在60-80℃加热30分钟，用滤膜过滤，收集滤液。将上述滤液按无菌操作法用除菌滤器进行正压除菌滤过，用0.22μM微孔滤膜过滤，滤液进行热原检查和半成品含量检查然后西林瓶分装。在专用冻干箱内，在-40℃以下预冻1.5-3.5小时，真空度下升华在游离水分去处90％以后加温干燥(最高温度不得超过35℃)，冻干结束即可制备得到淫羊藿苷元粉针剂。

药效实施例1淫羊藿苷元对肝素钠导致的小鼠出血时间延长的影响

1.药品及来源

肝素钠注射液

来源：江苏万邦生化医药集团有限责任公司

批号：51701106

酚磺乙胺注射液

来源：山东方明药业集团股份有限公司

批号：18060672

2.试验动物及分组

5～6周龄ICR小鼠72只，体重19～21g，雌雄各半。小鼠入室后检疫7天，选择健康小鼠作为受试动物。检疫首日和末日称重。

按检疫末日体重以简化随机法，将雌雄动物各分为六组，分别为正常组(C)、模型组(V)、淫羊藿苷元低、中、高剂量组(2、6、18mg/kg，L、M、H)和阳性药组(200mg/kg酚磺乙胺，P)。

3.预给药及造模

分组完成后，正常组、模型组灌胃给予10ml/kg淫羊藿苷元溶媒，溶媒由12g羟丙甲纤维素E5，0.1g十二烷基硫酸钠加入到1L水中配制而成。淫羊藿苷元各剂量组分别灌胃给予2、6、18mg/kg淫羊藿苷元，每天一次，连续五天；阳性药组每天腹腔注射200mg/kg酚磺乙胺注射液，每天一次，连续五天。最后一次预给药1h后，模型组和各给药组尾静脉注射150U/kg肝素钠注射液造模，正常组尾静脉注射10ml/kg氯化钠注射液。

4.检测指标

4.1出血时间

造模15min后，剪尾测每只小鼠的出血时间。

4.2血常规和凝血四项

检测完出血时间后，用戊巴比妥钠麻醉小鼠，腹主静脉采血，检测血常规和凝血四项(PT、APTT、TT、FIB)。

5.试验结果

5.1出血时间

各组小鼠的出血时间如表1所示。

表1淫羊藿苷元对肝素钠所致的小鼠出血时间的影响

组别	动物数量	T(min)
			C	12	16.2±3.3
V	12	35.5±9.8<sup>##</sup>
			P	12	21.4±6.7<sup>﹩</sup>
L	12	26.4±8.8<sup>﹩</sup>
			M	12	22.7±9.1<sup>﹩</sup>
H	12	15.9±6.6<sup>﹩﹩&amp;</sup>

注：与正常组相比，^##P<0.01；

与模型组相比，^﹩P<0.05，^﹩﹩P<0.01；

与阳性对照药组相比，^&P<0.05。

从表可以看出，与正常组相比，模型组小鼠出血时间显著延长，说明造模成功；与模型组相比，各给药组小鼠出血时间显著缩短，说明淫羊藿苷元能缩短出血小鼠的出血时间，随着剂量的增加出血时间缩短更加显著，说明淫羊藿苷元的促凝作用具有剂量依赖性，并且高剂量组与阳性对照药组相比具有显著性差异，说明淫羊藿苷元的促凝作用好于阳性对照药的促凝作用。

5.2血常规及凝血四项

各组小鼠血常规及凝血四项结果分别见表2及表3。

表2各组小鼠血常规检查结果

表3各组小鼠凝血四项检查结果

从上表可以看出，各组小鼠血常规及凝血四项均无显著性差异，表明淫羊藿苷元在缩短肝素钠导致的出血时间延长作用时对血常规及凝血四项无显著影响。

药效实施例2淫羊藿苷元对阿司匹林导致的小鼠出血时间延长的影响

1.药品及来源

阿司匹林

来源：汕头金石制药总厂有限公司

批号：1903012

酚磺乙胺注射液

来源：山东方明药业集团股份有限公司

批号：1905032

2.试验动物及分组

5～6周龄ICR小鼠96只，体重19～21g，雌雄各半。小鼠入室后检疫7天，选择健康小鼠作为受试动物。检疫首日和末日称重。

按检疫末日体重以简化随机法，将雌雄动物各分为六组，分别为正常组(C)、模型组(V)、淫羊藿苷元低、中、高剂量组(2、6、18mg/kg，L、M、H)和阳性药组(200mg/kg酚磺乙胺，P)。

3.预给药及造模

分组完成后，正常组、模型组灌胃给予10ml/kg淫羊藿苷元溶媒，淫羊藿苷元各剂量组分别灌胃给予2、6、18mg/kg淫羊藿苷元，每天一次，连续五天；阳性药组每天腹腔注射200mg/kg酚磺乙胺注射液，每天一次，连续五天。最后一次预给药1h后，模型组和各给药组灌胃给予阿司匹林20mg/kg造模，正常组灌胃给予等体积生理盐水。

4.出血时间检测

造模15min后，剪尾测每只小鼠的出血时间。

5.试验结果

各组小鼠出血时间见表4。与正常组相比，模型组小鼠出血时间显著延长，说明造模成功；与模型组相比，各给药组小鼠出血时间显著缩短，说明淫羊藿苷元能缩短出血小鼠的出血时间，随着剂量的增加出血时间缩短更加显著，说明淫羊藿苷元的促凝作用具有剂量依赖性，并且高剂量组与阳性对照药组相比具有显著性差异，说明淫羊藿苷元的促凝作用好于阳性对照药的促凝作用。

表4淫羊藿苷元对阿司匹林所致小鼠出血时间的影响

注：与正常组相比，^##P<0.01；

与模型组相比，^﹩P<0.05，^﹩﹩P<0.01；

与阳性对照药组相比，^&P<0.05。

药效实施例3淫羊藿苷元对溶栓药物溶栓效果的影响

1.大鼠腹主动脉血栓模型的构建

按如下方法制备大鼠腹主动脉血栓模型。以1.5％戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠。将大鼠腹部剃毛备皮，以仰卧位固定于鼠板上。切开大鼠腹部皮肤，隔离血管和周围组织，暴露腹主动脉，用玻璃分针小心分离腹主动脉。在腹主动脉下垫一条0.7cm×1.5cm的锡箔条，然后用浸渍35％FeCl₃溶液的滤纸条(0.5cm×1.0cm)包裹腹主动脉，30min后取下滤纸条，此时血管壁颜色明显变暗，显微镜下可见血管内有栓子形成，病理切片显示血管被血栓堵塞。

2.分组与给药

将SD大鼠按体重随机分为3组，每组10只，即血栓模型组、蚓激酶胶囊组和蚓激酶胶囊+淫羊藿苷元组。造模后5min给药，蚓激酶胶囊按30×10⁴U/kg从十二指肠直接注射给药，淫羊藿苷元按18mg/kg灌胃给药，血栓模型组以等体积蒸馏水代替。

3.取材

以止血钳夹闭腹主动脉两端，完整取下造模处血管段，精确截取滤纸包覆的0.5cm血管段，称重，截余血管段于10％甲醛中保存。

4.大鼠血栓重量的测定

以电子天平称量取下的血管段的重量，取出血栓后再称量血管重量，血栓湿重＝血栓与血管总重-血管重量。

取出的血栓于烘箱中80℃烘干，放置过夜，称量重量，即为血栓干重。

5.试验结果

各组大鼠血栓重量见下表，从表中可以看出，与模型组相比，蚓激酶组的血栓重量显著降低，说明蚓激酶具有显著的溶栓作用；与蚓激酶组相比，蚓激酶+淫羊藿苷元组的血栓无显著性差异，说明淫羊藿不影响蚓激酶对大鼠血栓的溶解作用。

表5淫羊藿苷元对各组大鼠血栓重量的影响

组别	例数	血栓湿重(mg)	血栓干重(mg)
				模型组	9	2.98±0.54	0.31±0.12
蚓激酶组	10	1.01±0.22<sup>##</sup>	0.04±0.01<sup>##</sup>
				蚓激酶+淫羊藿苷元组	10	1.24±0.19	0.04±0.02

注：与模型组相比，^##P<0.01。

药效实施例4淫羊藿苷元对溶栓药物所致出血转化的影响

1.动物模型的制备

按照下述方法制备大鼠大脑中动脉自体血栓栓塞模型：大鼠以10％水合氯酸按350mg/kg体重腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台上，按无菌操作规程，常规皮肤消毒，铺巾。取颈正中皮肤剪长约3.0cm切口，钝性分离肌肉及皮下组织，分离右侧CCA、ECA及ICA，避免损伤迷走神经，分离颈内动脉至颅底，于CCA分叉处结扎ECA。用1ml注射器选大鼠股动脉处取动脉血0.1ml，吸入4U凝血酶，混匀静置8-10min，待血液凝固后将其注入24G静脉留置针管，制成长约1cm的栓子，后接1-2ml的生理盐水注射器。然后将留置针在ECA和ICA分叉的前方穿刺进CCA，并向前内侧进入ICA内约8-10mm，拔出针芯，快速将注射器的栓子及生理盐水冲入ICA内，然后结扎、缝合。假手术组对照组除注入生理盐水代替栓子外，其余手术步骤均与以上溶栓模型各组相同。

2.动物纳入标准

造模术后2h观察大鼠的症状和体征，出现以下症状和体征者表明模型制作成功：缺血同侧Horner征，行走时向缺血对侧转圈；向对侧倾倒；将大鼠提尾悬空时，脑缺血对侧前肢呈屈曲、抬高、肩内收、肘关节伸直等。

2.实验分组与给药

将102只大鼠查随机数字随机分为假手术组、rt－PA溶栓组(溶栓组)、rt－PA溶栓+淫羊藿苷元低、中、高组，其中假手术组18只，其余各组每组各21只。其中各组又按不同处死时间点(溶栓后3、6、24小时)平均分组，假手术组每个时间点6只，其余各组3小时时每组9只，其它每时间点每组6只。另取20只大鼠备用，如造模失败(死亡或评分0分者)随机补上。

除假手术组外其余各组均于造模3h后经股静脉给予阿替普酶(rt－PA)(5mg/kg，加rt－PA配用的灭菌水到1ml)。假手术组给予等体积生理盐水。

治疗组分两次给药，分别在造模后及溶栓治疗后立即灌胃药物。给药剂量分别为2、6、18mg/kg。假手术组给予等体积生理盐水。

4.指标观察及测定方法

4.1整体状况比较及血常规检查

4.1.1比较假手术组、溶栓组及溶栓组+淫羊藿苷元组各组大鼠整体状况。

4.1.2检测假手术组、溶栓组及溶栓组+淫羊藿苷元组各组大鼠血常规。

4.2脑梗死体积(率)测定

除假手术组外，溶栓3小时时，每组取大鼠3只处死，将脑组织置入-20℃冰箱内速冻20分钟后，制备2mm厚的冠状脑片，浸入2％TTC溶液中，37℃避光水浴30分钟，置于4％多聚甲醛溶液中固定24h，拍照后用图像分析软件(Image-Pro Plus6.0)测定梗死体积。梗死体积＝非缺血侧半球体积一缺血侧半球未梗死区体积，梗死灶体积率的计算以梗死灶体积和非缺血侧半球体积的百分比(％)来表示。

4.3脑出血量测定：

(1)绘制标准曲线

另取4只健康大鼠，过量麻醉处死后经心灌注去血。取8个大脑半球组织，每个半球组织中依次加入雄性SD大鼠动脉血0、0.5、1、2、4、8、16、32、50ul，再加PH＝7.4的PBS至总体积3ml，匀浆30s后超声裂解，于4℃以13000r/min离心30min。取drabkin试剂0.8ml与每份样品上清液0.2ml混合，室温避光放置10min后在540nm波长处测定吸光度(不加血液的样本吸光度设为0)。以吸光度为纵坐标，每份样品中的血量为横坐标，绘制标准曲线。

(2)梗死侧半球出血量的测定

脑梗死大鼠梗死侧半球组织加PH＝7.4的PBS至总体积3ml，匀浆30s后超声裂解，以13000r/min离心30min。取drabkin试剂0.8ml与每份样品上清液0.2ml混合，室温避光放置10min后在540nm波长处测定吸光度(以不含血液的脑组织样本吸光度设为0，同批测定)。得到的吸光度在标准曲线上对应的血量即出血量。

5.统计学处理

所有实验数据用均数土标准差表示，并用PASW Statistics 17.0统计软件包进行数据处理。组间组内比较采用单因素方差分析，若方差齐性则使用LSD检验，若方差不齐则采用Dunnett T3非参数检验；相关分析采用直线相关双尾Pearson积差相关系数检验，以双侧P值＜0.05认为具有统计学意义。

6.实验结果

6.1整体状况比较及血常规检测

6.1.1整体状况比较，

假手术组大鼠精神状态良好，皮毛色泽光彩正常。溶栓组、溶栓组+淫羊藿苷元各剂量组术后精神与手术前相比均明显变差，其表现为：毛色光泽暗淡，自发活动减少，对外界反应相对变迟钝，其中以溶栓组为最差，溶栓组+淫羊藿苷元高剂量组精神状态最好。

6.1.2血常规检测

血常规检测结果显示：溶栓组与溶栓组+淫羊藿苷元组大鼠血常规数值比较无显著性差异，并且溶栓组、溶栓组+淫羊藿苷元组与假手术组相比均无显著性差异。

6.2脑梗死体积(率)测定

TTC染色可观察脑缺血的范围。染色结果：假手术组和其余各组非梗死侧脑组织呈均匀一致的红色，而梗死侧脑组织明显水肿，苍白色，无光泽，TTC染色后梗死区呈苍白色。研究结果显示：取备用大鼠造模后3h测定脑梗死体积率为(38.84±3.67)％，假手术组大鼠脑组织TTC染色无变化。与模型组比较，溶栓组及溶栓药+淫羊藿苷元各剂量组大鼠TTC染色均可见梗死区苍白色面积显著减少，进行脑梗死体积测定发现：溶栓药+淫羊藿苷元各剂量组脑梗死体积降低率与溶栓组相当，此结果表明：淫羊藿苷元不影响溶栓药物的溶栓作用。

6.3不同时间点各组大鼠脑出血量的比较

不同时间点各组大鼠脑出血量如下表所述，从表中可以看出：溶栓组出血量显著多于假手术组，说明溶栓药导致了脑梗大鼠的出血转化，并且随着时间的延长出血量显著增加；与溶栓组相比，溶栓药+淫羊藿苷元各剂量组出血量均显著减少，并且出血量并不会随着时间的延长而增加。说明淫羊藿苷元可有效防止溶栓药物所致的出血转化。

表6不同时间点各组大鼠脑出血量比较

注：与假手术组相比，^##P<0.01；

与溶栓组相比，^﹩P<0.05，^﹩﹩P<0.01。

Claims (10)

1.淫羊藿苷元在制备脑梗死出血转化防治药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的脑梗死出血转化为缺血性脑梗死继发性出血转化、原发性出血转化或无症状性出血转化中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的脑梗死出血转化为出血性脑梗死。

4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的继发性出血转化为使用溶栓药物、抗栓药物或血管内治疗中的一种或多种治疗方法导致的出血转化。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的溶栓药物为阿替普酶。

6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的抗栓药物为抗凝血药或抗血小板药中的一种或多种。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的抗凝药为肝素钠；抗血小板药为阿司匹林。

8.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的原发性出血转化为急性脑梗后自发性出血转化。

9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，包含淫羊藿苷元的药物制剂为其固体、液体、油、乳剂、凝胶、气溶胶、吸入剂、喷雾、胶囊、丸剂、贴剂和栓剂。

10.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物在用于脑梗死出血转化防治时的给药剂量为0.02mg/kg-200mg/kg，优选为0.2mg/kg-20mg/kg。