CN113368012A

CN113368012A - 一种针对成人的红枸杞明目纳米眼霜及制备方法

Info

Publication number: CN113368012A
Application number: CN202110648908.3A
Authority: CN
Inventors: 李明媛; 贾琳; 李世勤; 李萌; 李媛; 王志遥; 董茹悦; 刘育宁; 周家兴; 郁彭
Original assignee: Tianjin University of Science and Technology
Current assignee: Ningxia Love Goji Supply Chain Corp
Priority date: 2021-06-10
Filing date: 2021-06-10
Publication date: 2021-09-10
Anticipated expiration: 2041-06-10
Also published as: CN113368012B

Abstract

本发明涉及一种针对成人的红枸杞明目纳米眼霜及制备方法。所述眼霜其原料成分为：红枸杞玉米黄素双棕榈酸酯，枸杞多糖，枸杞籽油，茶多酚提取物，金银花提取物，人参皂苷，卵磷脂，烟酰胺，透明质酸，透明质酸钠，海藻糖，海藻酸钠，黄原胶，苯氧乙醇，苯甲酸钠，丙二醇，丙三醇，胶原蛋白，蒸馏水。本发明富含天然植物提取成分，利用脂质体纳米技术包载多种红枸杞提取物，一方面提高红枸杞提取物在水中的分散能力，另一方面脂质体可携带活性成分透过皮肤角质层，至基底层，发挥效果，令干涩的眼睛达到明目滋润的功效，且绿色健康，不含人工色素。

Description

一种针对成人的红枸杞明目纳米眼霜及制备方法

技术领域

本发明属于化妆品生产技术领域，具体涉及一种针对成人的红枸杞明目纳米眼霜及制备方法。

背景技术

眼霜,护肤类化妆产品之一,是用来保护眼睛周围比较薄的皮肤,其有滋润的功效,对眼袋、黑眼圈、鱼尾纹、干纹、细纹等都有一定的效果。随着人们生活水平的提高,使用电子产品频率很高，长期用眼过度导致眼睛干涩，视力下降等一系列问题，目前市场上眼霜产品有很多,但是普遍都是改善眼袋、黑眼圈、鱼尾纹、干纹、细纹等问题的产品。目前还没有人利用眼霜这一护肤品改善眼睛明目的功效，而且市场上的产品存在渗透性差、不易吸收,使用效果不明显等问题，同时,眼部的肌肤非常细致而脆弱,容易受到伤害。因此，眼霜需温和，不刺激，低敏，安全。

枸杞在明代李时珍《本草纲目》中记载：春采其叶，名天精草；夏采其花，名长生草；秋采其子，名枸杞子；冬采其根，名地骨皮。可谓地里长的，土中埋的，全身是宝，无一废弃。枸杞含有丰富的营养成分，是常用的营养滋补佳品，同时作为药食两用的进补佳品，有多种食用方法。常见的枸杞是成熟后干燥的果实，有补肾益肝的作用，枸杞的根皮干燥后入药，有清热、降血压等功效。枸杞芽有清热、明目、生津、止渴、补肝等功效。中医认为，其性味甘、平，入肝、肾、肺经，有滋补肝肾、生精养血、明目安神、滋阴润肺等功效。真可谓浑身是宝，皆可入药。

红枸杞，为茄科植物枸杞的成熟果实。夏、秋果实成熟时采摘，除去果柄，置阴凉处晾至果皮起皱纹后，再暴晒至外皮干硬、果肉柔软即得。遇阴雨可用微火烘干。红枸杞有多种保健功效，是卫生部批准的药食两用食物。适量食用有益健康，具有清肝明目的效果。具有免疫调节、抗衰老、提高视力等功效。枸杞所含有的类胡萝卜素则具有非常重要的药用价值。枸杞红素即玉米黄素双棕榈酸酯、胡萝卜素是枸杞中的主要活性成分。其中胡萝卜素具有抗氧化，并且作为维生素A的合成前体等具有重要的生理功能。其枸杞子具有养肝，滋肾，润肺，补虚益精，清热明目的功效。其中枸杞多糖具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作用。

随着技术的发展，纳米技术已经逐渐被应用到医药、食品和化妆品等领域。化妆品与人们的日常生活关系日益密切，如今化妆品的功能逐渐由简单的美容修饰作用向功能性方面延伸，而化妆品产业的科技含量已成为化妆品企业竞争的重要手段。纳米技术为美容化妆品行业带来了巨大的变化，其中可以包裹脂溶性、水溶性活性成分和营养物质的脂质体已被广泛利用，在皮肤管理和化妆品应用方面的研究正蓬勃发展，其结构类似于生物膜，含脂质体的化妆品具有传统化妆品不可比拟的优点，其可以改变普通化妆品的渗透性，吸收性，保湿型，缓释性使其功效更加明显。而且包载了枸杞提取物的脂质体更能够使其活性成分进入眼睛基底，达到明目，抗氧化，抗疲劳的一系列作用。

通过检索，发现如公开专利文献：一种以柔性纳米脂质体为载体的眼霜制剂及其制备方法

(CN110664689A)、一种抗皱修复眼霜及其制备方法(CN108403506A)、水飞蓟素纳米抗皱眼霜及其制备方(CN110897908A)、一种缓解黑眼圈的中药眼霜及其制备方法(CN105997794A)通过对比，本发明专利申请与上述专利公开文献存在本质不同。本发明主要利用枸杞红素、枸杞籽油和枸杞多糖的明目活性，首次将其分别包载于脂质体中(枸杞红素和枸杞籽油包载于磷脂双分子层间，枸杞多糖包载于脂质体内水相)，实现对于枸杞提取物的分类别高效包载，同时利用脂质体的高渗透递送作用，靶向眼周基底层细胞和毛细血管网，直接通过涂抹透皮给药实现高效递送，辅助其他功能成分，达到美白、抗皱，同时营养视神经，缓解视疲劳的作用。

发明内容

针对以上问题，本发明提供了一种红枸杞明目纳米眼霜及制备方法，其温和不刺激并且具有抗氧化，抗衰老，抗辐射，保湿补水，及营养视神经和缓解视疲劳等功效。本发明提供一种添加红枸杞纳米脂质体的明目眼霜及其制备方法，以解决目前眼霜新型功效明目方面的问题，以及在渗透性差、不易吸收,使用效果不明显，防止用眼过度干涩的问题。

一种针对成人的红枸杞明目纳米眼霜，采取的技术方案是：是由如下重量百分比的原料和方法得到的：枸杞红素1-15份,枸杞多糖1-15份，枸杞籽油1-10份，茶多酚提取物1-5份，金银花提取物1-5份，人参皂苷1-5份，卵磷脂15-30份，烟酰胺0.01-1份，透明质酸0.1-10份，透明质酸钠0.5-1份，海藻糖0.5-5份，海藻酸钠0.5-5份，黄原胶1-2份，苯氧乙醇0.01-1份，苯甲酸钠0.01-1份，丙二醇1-5份，丙三醇0.5-1份，胶原蛋白1-2份，精油0.01份，蒸馏水补足至100份。

所述红枸杞红素制备方法为：取一定量枸杞干燥果实，用1-5倍石油醚，1-5倍乙酸乙酯，超声提取多次，抽滤，合并滤液倒入圆底烧瓶，再用石油醚和90％甲醇萃取多次，分层后分开；再用石油醚、乙酸乙酯萃取90％甲醇部位一次；合并石油醚部位，用90％甲醇萃取一次；完成以上萃取后于水浴减压回收溶剂，得到提取产物；取上述提取物，将石油醚部位用水洗涤两次；将石油醚部位用无水硫酸钠干燥，倒入圆底烧瓶，减压回收溶剂，得石油醚部位为枸杞红素提取物。

所述枸杞多糖的制备方法为：称取枸杞粉碎加入水，以水为提取溶剂，枸杞：水的体积比为1:30，提取温度80-120℃，浸提3-4小时，抽滤，收集水层，冻干后，即得枸杞多糖。

所述人参皂苷制备方法为：称取人参粉碎成粉，以纯净水为提取溶剂，按料液比1∶10，90℃-110℃加热回流2-4h，冷却，真空抽滤得滤液，将滤液于﹣80℃预冻一夜后放入冷冻干燥机冻成粉。即得人参皂苷提取物。

上述针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，采用技术方案的步骤如下：

S1按比例取一定量的茶多酚提取物，金银花提取物，人参皂苷，烟酰胺，透明质酸钠，海藻糖，苯氧乙醇，苯甲酸钠，丙二醇，丙三醇，溶于一定量的超纯水中，加入枸杞红素脂质体，枸杞多糖脂质体，枸杞籽油脂质体，透明质酸脂质体和胶原蛋白脂质体，混合均匀后做为水相基质；

S2于80℃水浴加热中按比例取少量精油加入上述水相基质，高速搅拌至均匀；

S3按比例加入一定量的黄原胶，海藻酸钠，调节其眼霜粘稠度，即得红枸杞明目纳米眼霜。

上述红枸杞红素脂质体的制备方法：称取枸杞红素、卵磷脂，加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸熟分钟成蜂窝状薄膜后加入适量超纯水进行水化，超声数分钟过膜后即得。

上述枸杞籽油脂质体的制备方法：取枸杞籽油、卵磷脂，加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸熟分钟成蜂窝状薄膜后加入适量超纯水进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有枸杞籽油的纳米脂质体。

上述枸杞多糖脂质体的制备方法：取卵磷脂加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸数分钟成蜂窝状薄膜后加入适量枸杞多糖水溶液进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有枸杞多糖的纳米脂质体。

上述透明质酸脂质体的制备方法：取卵磷脂加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸数分钟成蜂窝状薄膜后加入适量不同分子量的透明质酸水溶液进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有透明质酸的纳米脂质体。

上述胶原蛋白脂质体的制备：取卵磷脂加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸数分钟成蜂窝状薄膜后加入适量胶原蛋白水溶液进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有胶原蛋白的纳米脂质体。

本发明取得的优点和积极效果为:

1.本发明添加了红枸杞活性成分的纳米技术护肤品，合理科学地设计了多种组分及配比，优化筛选纳米技术脂质体工艺参数，将红枸杞活性成分发挥更大未发觉的明目功效。

2.本发明参考古今中医学药理研究成就，其中枸杞红素的为枸杞主要要活性成分，具有抗氧化和作为维生素A的合成前体等重要的生理功能。筛选出清肝明目、滋肝补肾、明目、补气活血、清热解毒的天然植物枸杞子，又更新了眼霜明目的新功效。

3.本发明利用新型纳米脂质体技术可以将脂溶性有效成分包载于磷脂双分子层间，将水溶性成分包载于脂质体内成为水相，使其活性物质更好的吸收至眼部皮肤基底。本发明治疗效果理想，且无毒安全，天然绿色，制备方法易于放大生产。

附图说明

图1为本发明中包载脂溶性枸杞活性成分的纳米脂质体三次测量的粒径分布图，每条曲线代表一次测量结果；

图2为本发明中包载脂溶性枸杞活性成分的纳米脂质体三次测量的电位分布图，每条曲线代表一次测量结果；

图3为本发明中激光照射本发明中包载脂溶性枸杞活性成分的纳米脂质体的丁达尔效应图；

图4为本发明中视神经细胞BV2小胶质细胞在脂多糖刺激下的效果图；

图5为本发明中枸杞脂质体保护后视神经细胞BV2小胶质细胞在脂多糖刺激下的效果图；

图6为本发明中视神经细胞BV2小胶质细胞在双氧水刺激下的效果图；

图7为本发明中枸杞脂质体保护后视神经细胞BV2小胶质细胞在双氧水刺激下的效果图；

图8为本发明中视神经细胞BV2小胶质细胞在蓝光刺激下的效果图；

图9为本发明中枸杞脂质体保护后视神经细胞BV2小胶质细胞在蓝光刺激下的效果图

图10为本发明中10万分子量透明质酸与同等浓度HA溶液透皮率比较图；

图11为本发明中50万分子量透明质酸与同等浓度HA溶液透皮率比较图；

图12为本发明中100万分子量透明质酸与同等浓度HA溶液透皮率比较图

具体实施方式

下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。

本发明中所使用的原料，如没有特殊说明则为常规市售产品；本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

对比例1

10万分子量透明质酸(HA)溶液的制备：称取60mg-10万分子量HA溶于10ml水中，制得6mg/ml-HA溶液。

对比例2

50万分子量HA溶液的制备：称取40mg-50万分子量HA溶于10ml水中，制得5mg/ml-HA溶液。

对比例3

100万分子量HA溶液的制备：称取20mg-100万分子量HA溶于10ml水中，制得2mg/ml-HA溶液。

对比例4

胶原蛋白溶液制备：称取20mg胶原蛋白溶于10ml水中，制得2mg/ml胶原蛋白溶液，可稀释为系列浓度。

对比例5

维生素C乙醇溶液：准确称取10mg纯维生素C，至于10ml容量瓶中，加少量乙醇溶解后，稀释定容，摇匀，得到1mg/ml的维生素C乙醇溶液，梯度稀释至0.8mg/ml，0.6mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml。

实施例1

枸杞红素脂质体的制备方法：

S1取5mg枸杞红素、100mg卵磷脂、乙醇55℃水浴加热至完全溶解。

S2利用旋转蒸发仪抽真空，60℃水浴加热，制备蜂窝状的薄膜。

S3取5ml超纯水为水化液，将上述蜂窝状薄膜及水化液同时水浴加热至45-60℃，再将水化液加入薄膜中混合，利用旋转蒸发仪转动并水浴加热40-70℃，水浴蒸发10-15min薄膜完全溶解于水化液中，超声5-10分钟，5％-10％功率，制得包载脂溶性枸杞活性成分的纳米脂质体，其粒径、电位及宏观状态如附图1-3所示。

实施例2

枸杞籽油脂质体的制备方法：

S1取5mg枸杞籽油、100mg卵磷脂、乙醇55℃水浴加热至完全溶解。

S3取5ml超纯水为水化液，将上述蜂窝状薄膜及水化液同时水浴加热至45-60℃，再将水化液加入薄膜中混合，利用旋转蒸发仪转动并水浴加热40-70℃，水浴蒸发10-15min薄膜完全溶解于水化液中，超声5-10分钟，5％-10％功率，制得包载脂溶性枸杞活性成分的纳米脂质体。

实施例3

包载枸杞多糖的脂质体的制备方法：

S1取100mg卵磷脂、乙醇55℃水浴加热至完全溶解；

S2利用旋转蒸发仪抽真空，60℃水浴加热，制备蜂窝状的薄膜；

S3配制枸杞多糖溶液(1mg/ml)，取5ml用作水化液，超声数分钟过膜后即得包载有枸杞多糖的纳米脂质体。

实施例4

透明质酸脂质体制备方法：

S1取100mg卵磷脂、乙醇55℃水浴加热至完全溶解；

S3将对比例1-3中配制的不同分子量不同浓度的透明质酸溶液分别作为水化液，超声数分钟过膜后即得三种包载不同分子量透明质酸的脂质体制剂。

实施例5

胶原蛋白脂质体制备方法：

S1取100mg卵磷脂、乙醇55℃水浴加热至完全溶解；

S3将对比例4中配制的胶原蛋白溶液分别作为水化液，超声数分钟过膜后即得胶原蛋白脂质体。

实施例6

枸杞明目纳米眼霜的制备方法：

S1按比例取一定量的茶多酚提取物1g，金银花提取物1g，人参皂苷1g，烟酰胺0.5g，透明质酸钠0.5g，海藻糖4g，苯氧乙醇0.02g，苯甲酸钠0.02g，丙二醇3g，丙三醇0.5g，溶于一定量的超纯水中，加入实施例110g，实施例210g，实施例310g，实施例45g和实施例52g，混合均匀后做为水相基质；

S2于80℃水浴加热中按比例取少量精油0.01g加入上述水相基质，高速搅拌至均匀；

S3按比例加入一定量的黄原胶2g，海藻酸钠4g，调节其眼霜粘稠度，蒸馏水补足至100g，即得红枸杞明目纳米眼霜。

为了更好的说明本发明的有益效果，本发明给出实施例进行比较试验评价：

试验例1明目效果测评

1.用脂多糖(LPS)，双氧水(H₂O₂)和蓝光刺激BV2小胶质细胞，通过MTT法检测细胞的存活率，来检测样品对BV2小胶质细胞的保护效果。

2.小胶质细胞培养:使用含有10％FBS的DMEM高糖培养基进行BV2小胶质细胞的培养，另外添加1％的青链双抗以防止细胞污染。细胞复苏时取出冻存的BV2细胞，于37℃条件下迅速解冻后接种于3.5mm培养皿，培养36h。待细胞基本长满培养皿后，使用0.25％胰蛋白酶消化细胞150g，3min离心收集细胞，新鲜培养液重悬后传代。冻存细胞使用含有15％DMSO的细胞培养液，如上述使用胰蛋白酶消化细胞离心收集后，使用冻存细胞液重悬BV2细胞，并置于梯度冻存盒内，24h后转移至液氮中冻存。

3.MTT法：检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

4.取96孔板，每孔加90μL细胞液，细胞密度为5×10⁴个/mL，37℃，5％CO2孵育24h；每孔加实施例110μL(1:10)预保护，1h后采用不同方式进行刺激(脂多糖、双氧水和蓝光照射)；2h后加每孔20μLMTT溶液，继续培4h；终止培养，加入盐酸异丙醇100μL溶解甲瓒，孵育10min；在酶联免疫检测仪上492nm、630nm波长处测得各孔的光密度值(OD值)；

5.细胞存活率＝{(OD值-空白组OD值[均值])/(空白培养基组OD值-空白组OD}×100％

6.实验结果

表1添加实施例1对于LPS(1μg/mL)刺激的保护作用细胞存活率结果(％)

浓度mg/ml	0.20	0.16	0.12	0.08	0.04
						空白对照	2.22	-1.57	5.63	0.95	0.86
实施例1+LPS	153.14	156.75	147.11	141.65	109.81
						实施例1+LPS	161.32	166.39	154.21	147.89	134.16
实施例1+LPS	146.81	157.53	146.13	132.21	121.69
						实施例1+LPS	163.17	167.85	157.72	153.63	139.71
实施例1+LPS	158.30	161.81	154.90	147.11	120.43
						实施例1+LPS	168.14	170.96	174.08	159.57	133.47
+LPS	75.25	71.94	69.70	69.11	64.24
						+完全培养基	108.55	108.84	100.37	91.22	100.47

从数据中可以看出，在实施例1浓度为0.16mg/mL时，细胞存活率最高(163.5％)，与LPS组对比，加药后也可以有效保护细胞并且促进细胞增殖。此浓度下对细胞也不产生毒性，为最适宜枸杞红素脂质体浓度。单独LPS刺激的BV2细胞形态见附图4，加实施例1保护后LPS刺激的BV2细胞形态见附图5。

表2添加实施例1对于H₂O₂(20μmol/L)刺激的保护作用细胞存活率结果(％)

浓度mg/ml	0.20	0.16	0.12	0.08	0.04
						空白对照	1.36	-1.82	-1.13	-2.42	0.96
实施例1+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	51.56	40.08	29.40	23.22	9.94
						实施例1+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	53.75	37.59	31.30	21.42	13.93
实施例1+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	56.05	38.48	25.81	19.92	14.03
						实施例1+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	70.72	53.55	35.19	23.32	12.34
实施例1+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	63.73	54.55	35.79	23.22	17.03
						实施例1+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	65.23	45.57	40.28	32.10	22.32
+H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>	18.72	15.73	12.44	13.83	15.43
						+完全培养基	93.67	109.74	103.16	102.76	102.46

从数据中可以看出，在实施例1浓度为0.20mg/mL时，细胞存活率最高，与H₂O₂组对比，加药后对细胞具有一定的保护效果。单独H₂O₂刺激的BV2细胞形态见附图6，加实施例1保护后H₂O₂刺激的BV2细胞形态见附图7。

表3添加实施例1对于蓝光刺激的保护作用细胞存活率结果(％)

从数据中可以看出，在枸杞红素脂质体浓度为0.04mg/mL时，细胞存活率最高，与照射蓝光组对比，加药后对细胞具有一定的保护效果。单独蓝光刺激的BV2细胞形态见附图8，加实施例1保护后蓝光刺激的BV2细胞形态见附图9。

试验例2抗氧化能力测评-DPPH自由基的清除实验

1.溶液配制：称取4mg DPPH自由基粉末至100ml容量瓶中用无水乙醇溶解，再用无水乙醇定容，摇匀，得0.04mg/mL的DPPH溶液。

2.清除DPPH自由基实验：取96孔板，加入100ul-DPPH溶液，再加100ul乙醇，混合均匀，室温条件下避光反应20min,515nm测定其吸光度A。再取100ul-DPPH溶液，加100ul枸杞红素乙醇溶液，混合均匀，室温条件下避光反应20min,515nm测定其吸光度B。

3.实验组：不同浓度的枸杞红素乙醇溶液；对照组：对比例5(维生素C乙醇溶液)

4.DPPH自由基清除率(％)＝(1-B/A)×100％

5.其中，A：空白吸光度；B：样品吸光度。

6.以上实验操作平行重复3次，即n＝3。

7.DPPH自由基清除率测定实验结果(n＝3)

表4维生素C对于DPPH的清除能力评价结果

表5枸杞红素对于DPPH的清除能力评价结果

从表4，表5综合可知，枸杞红素与VC对比没有明显的抗氧化活性。

试验例3透明质酸透皮吸收测评

1.离体皮肤制备：将老鼠处死剥离其腹部皮肤，去除皮下脂肪进行脱毛处理，配制一定量的硫化氢溶液将其鼠皮浸泡数分钟后，用镊子取出，小刀刮去皮肤上已经褪去的鼠毛。用生理盐水洗净，以滤纸吸干水分，再用磷酸盐缓冲液漂洗至洗液澄清，用滤纸吸干后，福尔马林-4℃浸泡保存，备用。

2.透皮吸收试验：采用TK-6H1型透皮扩散试验仪，将上述处理好的鼠皮固定在扩散池的供给池与接受池之间，真皮层面向下，角质层面向上，排尽气泡。在供给池中加入3ml含透明质酸脂质体，2ml生理盐水。接受池内加入5ml生理盐水，以300r/min的速度搅拌混匀，设定温度为(33±0.1)℃。分别于1、2、3、4、5、6h从接受池中取出200ul介质，同时向接受池中补加等量的接收液(生理盐水)。

吸出的接收液经0.22μm微孔滤膜滤过后，采用CTAB法进行透明质酸含量的测定。

取上述接受液50ul加入50ul磷酸缓冲溶液于96孔板中，37℃孵育15min，再加入100ulCTAB溶液，37℃孵育10min，于600nm酶标仪测其吸光度。

3.透明质酸CTAB法标准曲线绘制：取透明质酸标准品10mg于10ml超纯水中完全溶解，制得1mg/ml透明质酸标品水溶液，再将其进行逐级稀释制得0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml、0.1ug/ml，0.01ug/ml，0.001ug/ml标准品溶液。分别取上述各个浓度液体50ul，再分别加入50ul磷酸缓冲溶液于96孔板中，37℃孵育15min，再分别加入100ul CTAB溶液，37℃孵育10min，于600nm酶标仪测其吸光度。记录数据，绘制标准曲线。

4.透明质酸含量计算：将样品测定后的吸光度值带入至标准曲线线性方程中，即得其样品中透明质酸浓度及透过率。

5.实验结果

表6不同分子量透明质酸脂质体与其溶液的透皮效率对比研究结果

由附表3可看出包载有HA的纳米脂质体比同等浓度HA溶液的透过率高。证明包载有活性物质的脂质体更能进入皮肤，此种纳米技术运用于化妆品市场有很好的发展前景。其中不同分子量HA脂质体透过率如附图10、附图11、附图12所示。

试验例4

四.胶原蛋白体外透皮吸收测评

2.透皮吸收试验：采用TK-6H1型透皮扩散试验仪，将上述处理好的鼠皮固定在扩散池的供给池与接受池之间，真皮层面向下，角质层面向上，排尽气泡。在供给池中加入3ml含胶原蛋白脂质体，2ml生理盐水。接受池内加入5ml生理盐水，以300r/min的速度搅拌混匀，设定温度为(33±0.1)℃。分别于1、2、3、4、5从接受池中取出200ul介质，同时向接受池中补加等量的接收液(生理盐水)。

3.蛋白含量的测定：吸出的接收液经0.22μm微孔滤膜滤过后，采用考马斯亮蓝法进行胶原蛋白含量的测定。

取上述接受液20ul加入100ul考马斯亮蓝G250染液，于595nm酶标仪测其吸光度。

4.牛血清白蛋白标准曲线绘制：取牛血清标准品10mg于10ml超纯水中完全溶解，制得1mg/ml牛血清标品水溶液，再将其进行逐级稀释制得0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml、0.1ug/ml，0.01ug/ml，0.001ug/ml标准品溶液。分别取上述各个浓度液体20ul，再分别加入100ul考马斯亮蓝G250染液于96孔板中，于595nm酶标仪测其吸光度。记录数据，绘制标准曲线，如附图8所示。

5.胶原蛋白含量计算：将样品测定后的吸光度值带入至标准曲线线性方程中，即得其样品中胶原蛋白浓度。

考马斯亮蓝法测定胶原蛋白实验结果。

表7不同时间点胶原蛋白脂质体透皮效率研究

通过表7可以看出胶原蛋白脂质体的透皮效果优于同等浓度胶原蛋白溶液。

试验例5感官评价测试

以实施例6为实验组，市售两款普通眼霜作为对照组。选择志愿者(20-50岁)男性、女性各15人，随机平均分为3组，每天清洁皮肤后将实验组和对照组涂于眼周，15天后观察效果。根据皮肤状态变化分别对不同项目进行打分(0-100分)，结果如下表9所示。

表8产品使用感官评分结果

综合以上结果发现，本发明制得的枸杞红素脂质体各项效果最优，特别具有其他眼霜产品不具有的缓解视疲劳功能。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种针对成人的红枸杞明目纳米眼霜，其特征在于：其原料成分及重量份数为：枸杞红素1-15份,枸杞多糖1-15份，枸杞籽油1-10份，茶多酚提取物1-5份，金银花提取物1-5份，人参皂苷1-5份，卵磷脂15-30份，烟酰胺0.01-1份，透明质酸0.1-10份，透明质酸钠0.5-1份，海藻糖0.5-5份，海藻酸钠0.5-5份，黄原胶1-2份，苯氧乙醇0.01-1份，苯甲酸钠0.01-1份，丙二醇1-5份，丙三醇0.5-1份，胶原蛋白1-2份，精油0.01份，蒸馏水补足至100份。

2.根据权利要求1所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜，其特征在于：所述红枸杞红素制备方法为：取一定量枸杞干燥果实，用石油醚，乙酸乙酯，超声提取多次，抽滤，合并滤液倒入圆底烧瓶，再用石油醚和90％甲醇萃取多次，分层后分开；再用石油醚、乙酸乙酯萃取90％甲醇部位一次；合并石油醚部位，用90％甲醇萃取一次；完成以上萃取后于水浴减压回收溶剂，得到提取产物；取上述提取物，将石油醚部位用水洗涤两次；将石油醚部位用无水硫酸钠干燥，倒入圆底烧瓶，减压回收溶剂，得石油醚部位为枸杞红素提取物。

3.根据权利要求1所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜，其特征在于：所述枸杞多糖的制备方法为：称取一定量的枸杞，粉碎后加入水，以超纯水为提取溶剂。枸杞与水以一定比例，适当温度浸提数小时，抽滤后得滤液，收集水层，冻干后，即得枸杞多糖。

4.根据权利要求1所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜，其特征在于：所述人参皂苷制备方法为：称取人参粉碎成粉，以超纯水为提取溶剂，人参粉末与水以一定体积加热回流数小时，冷却，真空抽滤得滤液，将滤液预冻一夜后放入冷冻干燥机冻成粉，即得人参皂苷提取物。

5.根据权利要求1至4任一项所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，其特征在于：步骤如下：

6.根据权利要求5所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，其特征在于：红枸杞红素脂质体的制备方法：称取枸杞红素、卵磷脂，加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸熟分钟成蜂窝状薄膜后加入适量超纯水进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有枸杞红素的纳米脂质体。

7.根据权利要求5所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，其特征在于：枸杞籽油脂质体的制备方法：取枸杞籽油、卵磷脂，加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸熟分钟成蜂窝状薄膜后加入适量超纯水进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有枸杞籽油的纳米脂质体。

8.根据权利要求5所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，其特征在于：枸杞多糖脂质体的制备方法：取卵磷脂加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸数分钟成蜂窝状薄膜后加入适量枸杞多糖水溶液进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有枸杞多糖的纳米脂质体。

9.根据权利要求5所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，其特征在于：透明质酸脂质体的制备方法：取卵磷脂加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸数分钟成蜂窝状薄膜后加入适量不同分子量的透明质酸水溶液进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有透明质酸的纳米脂质体。

10.根据权利要求5所述的针对成人的红枸杞纳米明目眼霜的制备方法，其特征在于：胶原蛋白脂质体的制备：取卵磷脂加入乙醇完全溶解，水浴加热，旋蒸数分钟成蜂窝状薄膜后加入适量胶原蛋白水溶液进行水化，超声数分钟过膜后即得包载有胶原蛋白的纳米脂质体。