CN113365619A - 成胶质细胞瘤的治疗和预防 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及选择性β2‑肾上腺素能受体拮抗剂用于治疗神经胶质瘤的用途。具体地,本发明涉及烷醇胺衍生物或其药学上可接受的酸加成盐用于治疗患者中成胶质细胞瘤的用途。
Description
技术领域
本发明涉及神经胶质瘤的治疗和预防领域,更具体地涉及成胶质细胞瘤的治疗和预防。
背景技术
神经胶质瘤是一类始于大脑或脊柱中的癌症。它被称为神经胶质瘤,因为其起源于神经胶质细胞和/或其前体。神经胶质瘤最常见的部位是大脑。神经胶质瘤按细胞类型、等级和位置分类。神经胶质瘤是根据它们最接近相似的具体细胞类型命名的。神经胶质瘤的主要类型是:
-室管膜细胞瘤,源自室管膜细胞的神经胶质瘤。
-星形细胞瘤,源自星形胶质细胞的神经胶质瘤;多形性成胶质细胞瘤(GBM)是最常见的星形细胞瘤。
-少突神经胶质细胞瘤,源自少突神经胶质细胞的神经胶质瘤。
-混合神经胶质瘤,如少突星形细胞瘤,其含有来自不同类型神经胶质的细胞。
神经胶质瘤根据其等级进一步分类,所述等级由肿瘤的病理评估确定。因此,其可以区分分化良好(非间变性)、良性和预示患者预后较好的低等级神经胶质瘤;和未分化或间变性、恶性且预后较差的高等级神经胶质瘤。
在使用的众多分级系统中,最常见的是世界卫生组织(WHO)星形细胞瘤分级系统。
脑神经胶质瘤的治疗取决于位置、细胞类型和恶性等级。通常,治疗是利用手术、放射疗法和化学疗法的组合方法。放射疗法是外射束放射(external beam radiation)或利用放射手术的立体定位性方法的形式。脊髓肿瘤可以通过手术和放射治疗。替莫唑胺是能够有效穿过血脑屏障的化学治疗药物,并且正用于治疗中。尽管有这些方法,但大多数高等级神经胶质瘤患者还是死于他们的疾病。需要对关键目标进行新的治疗干预,以改善此患者群体的结果。
多形性成胶质细胞瘤(GBM,WHO IV级)是高度侵袭性的脑肿瘤,表现为具有不同临床病史和分子特征(molecular profiles)的两种亚型中的一种。原发性GBM急性表现为高等级疾病,而继发性GBM亚型由低等级疾病的缓慢进展演变而来(Dolecek TA等人,2012.Neuro Oncol 14(增刊5):v1–v49。
恶性神经胶质瘤(如GBM)是迄今为止成人中最常见的脑癌,并且是最难治疗的脑癌之一。即使采用侵袭性的单模式和多模式治疗选择(如手术、化学疗法、放射和小分子抑制剂),在过去30年里,存活率保持不变,其中诊断后的中位存活率少于一年。常规治疗失败的原因是多因素的,包括GBM的高度浸润性/侵入性、通过血脑屏障和神经实质递送药物的限制,以及导致对可用治疗的内在抗性和侵袭性抗性克隆增加的遗传异质性。因此,需要新的治疗选择。
发明内容
本发明的发明人已发现,ICI 118,551降低成胶质细胞瘤细胞系U-87的活力(图1),并在公认的癌症干细胞亚群培养程序下抑制来自人成胶质细胞瘤的神经胶质球(gliosphere)的形成和扩张(图2)。另外,发明人已显示,ICI 118,551降低成胶质细胞瘤中的干细胞性生物标志物的表达,并增加神经分化标志物(图3)并延迟小鼠异种移植模型中的肿瘤进展(图4)。
因此,本发明涉及用于治疗和/或预防神经胶质瘤用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂。
附图说明
图1.-ICI 118,551作为抗肿瘤剂具有活性,其降低成胶质细胞瘤细胞系且包括干细胞亚群中的细胞活力。A:如使用针对人β2肾上腺素能受体的单克隆抗体(Abcam)通过共聚焦显微镜所示,U-87细胞系表达2型β-肾上腺素能受体。B:当在液体悬浮液中作为肿瘤球体(oncospheres)(神经胶质球、干细胞)或在黏着物(adhesion)中生长时,ICI-118551降低人成胶质细胞瘤细胞系U-87的活力。使用来自Promega的ATP-Glo试剂盒通过发光定量活力。C.通过在3D培养物中作为神经胶质球的定量PCR进行mRNA表达确认人成胶质细胞瘤细胞系U87中β2-肾上腺素能受体的表达(HUVEC作为β2-肾上腺素能受体表达的阳性对照)。
图2.-ICI 118,551抑制来自人成胶质细胞瘤细胞系U-87的神经胶质球的形成和扩张。A:药物治疗72小时后神经胶质球形成的照片。U-87细胞在用于神经胶质球形成的培养基中培养,并用媒介物(对照,左侧)、或用10至100μM不同浓度下的ICI 118,551和普萘洛尔处理。当用β阻断剂处理细胞时,神经胶质球形成逐渐受到抑制,这从10μM开始是专利的。B:在不同浓度的ICI 118,551和普萘洛尔存在下,对肿瘤球体形成的有限稀释测定实验(ELDA)。从图中可以清楚地看出,与对照相比,在用ICI118,551和普萘洛尔处理后,稀释因子增加。这很可能是U-87干细胞对ICI 118,551和普萘洛尔的干细胞敏感性的结果。
图3.-ICI 118,551和普萘洛尔降低U-87成胶质细胞瘤细胞系中干细胞性生物标志物的表达,但增加神经分化标志物。A:在48小时内用ICI-118,551和普萘洛尔处理U-87降低干细胞性相关基因(如GD3合酶、ALDH1、Prominin(CD133)、Sox2和Nanog)的表达,而B:有利于参与神经细胞分化的基因(MAP2、GFAP和Nestin)的表达。通过RT-qPCR测量相应mRNA的表达。
图4.-ICI 118,551和普萘洛尔在NSG免疫抑制小鼠中延迟U-87异种移植物的肿瘤进展。A使用U-87贴壁(adherent)细胞的异种移植物:小鼠(n=30)在侧腹接种106个U-87成胶质细胞瘤细胞系的细胞作为异种移植物。每3天测量肿瘤体积。在A中,当肿瘤达到约100mm3体积时,将小鼠分成3组(n=9-10)。一组每天用普萘洛尔以10mg/Kg体重处理,另一组用相同剂量的ICI118,551处理,而第三组仅用媒介物(DMSO)处理。药物经腹膜内注射。没有观察到不良反应。B使用U-87神经胶质球的异种移植物:用来自成胶质细胞瘤细胞系U-87的105个球体接种小鼠。将小鼠分成3组,每组9-10只动物,并在异种移植后立即用3mg/Kg体重的普萘洛尔、或ICI 118,551、或仅媒介物连续处理5天。这些肿瘤是从它们大到足以确定大小的那一刻开始测量的。
图5.U87细胞在DMEM-10%FCS中培养,并用增加量的ICI孵育48小时和普萘洛尔孵育48小时。当与普萘洛尔相比时,用ICI孵育后mRNA-21表达显著降低(左)。此外,ICI增加mRNA-21目标,如PDCD4-促凋亡剂1(中)和PTEN-成胶质细胞瘤抑制因子(右)的表达水平。
具体实施方式
本发明涉及用于治疗和/或预防神经胶质瘤用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂。
可选地,本发明涉及β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂在制备用于治疗和/或预防神经胶质瘤的药物中的用途。
可选地,本发明涉及治疗和/或预防患者中神经胶质瘤的方法,其包括向所述患者给予治疗有效量的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂。
如本文所用,术语“β2-肾上腺素能受体”或“β2AR”指代A类G蛋白偶联受体(GPCR),其响应可扩散的激素和神经递质并且主要存在于平滑肌中。有两大类肾上腺素能受体,α和β,具有若干亚型:
-α受体具有亚型α1(Gq偶联受体)和α2(Gi偶联受体)。
-β受体具有亚型β1、β1和β3。所有三个都与Gs蛋白相连,而Gs蛋白又与腺苷酸环化酶相连。激动剂与这些受体的结合导致第二信使cAMP的胞内浓度升高。
激动剂与β2-肾上腺素能受体结合导致平滑肌松弛。
如本文所用,术语“β2-肾上腺素能受体拮抗剂”指代结合β2-肾上腺素能受体并且缺乏激活受体本身的任何实质能力的化合物。术语“β2-肾上腺素能受体拮抗剂”包括中性拮抗剂和反向激动剂。“中性拮抗剂”是阻断激动剂作用但对内在或自发受体活性没有影响的化合物。“反向激动剂”能够阻断激动剂对受体的作用并减弱受体的组成活性。术语“拮抗剂”还包括竞争性拮抗剂,其是与天然配体结合相同位点的药物;非竞争性拮抗剂,其与天然配体在受体上结合不同的位点;可逆拮抗剂,其以受体-配体动力学确定的速率结合和解离受体;和不可逆拮抗剂,其通过与活性位点形成共价键或仅通过紧密结合以至于分离速率实际上为零而与受体永久结合。
如本文所用,术语“选择性“β2-肾上腺素能受体拮抗剂”意指对β2-肾上腺素能受体的选择性高于β1-肾上腺素能受体的拮抗剂。在特定实施方式中,选择性β2-肾上腺素能受体拮抗剂与β2-肾上腺素能受体结合比与β1-肾上腺素能受体结合表现出至少10倍的效力,即具有至少10的β2/β1选择性比。更优选地,选择性β2受体拮抗剂将具有至少50的β2/β1选择性比。仍更优选地,选择性β2受体拮抗剂将具有至少123的β2/β1选择性比。可以通过评价含有大部分β2受体的组织和/或细胞亚型(例如,兔睫状突、大鼠肝脏、猫脉络丛或肺)、含有大部分β1受体的组织(例如,猫和豚鼠心脏)、以及含有混合物的组织(例如,豚鼠气管)来确定各种活性剂对β2-肾上腺素能受体和β1-肾上腺素能受体的亲和力。O'Donnell和Wanstall,Naunyn-Schmiedeberg's Arch.Pharmaco.,308,183-190(1979),Nathanson,Science.204,843-844(1979),Nathanson,Life Sciences,26,1793-1799(1980),Minneman等人,Mol.Pharmacol.,15,21-33(1979a)和Minneman等人,Journal of Pharmacology andExperimental Therapeutics,211,502-508(1979)中广泛公开了确定这些不同类型组织的相对结合选择性的方法。
适用于本发明的大量具有选择性β2-肾上腺素能受体拮抗剂活性的化合物是已知的。在特定实施方式中,选择性β2-肾上腺素能受体拮抗剂是式I的烷醇胺衍生物
其中R1是在α-碳原子处分支的上至6个碳原子的烷基,
其中R2是上至3个碳原子的烷基,
其中R3是氢、卤素、或上至3个碳原子的烷基并且
其中n是1或2,
或其药学上可接受的酸加成盐。
如本文所用,术语“烷基”指代可衍生自烷烃,且通过去除氢原子而具有式--CnH2n+1的无环直链和支链基团。
如本文所用,术语“卤素”是指选自氟、氯、溴和碘的原子。
R1可以是例如异丙基或叔丁基。在特定实施方式中,R1是异丙基。
R2可以是例如甲基或乙基。在特定实施方式中,R2是甲基。
R3可以是例如氢、氯、溴、甲基或乙基。在特定实施方式中,R3是甲基。
在特定实施方式中,n是1。
在特定实施方式中,R1是异丙基并且R2是甲基。在特定实施方式中,R1是异丙基并且R3是甲基。在特定实施方式中,R1是异丙基并且n是1。在特定实施方式中,R2是甲基并且R3是甲基。在特定实施方式中,R2是甲基并且n是1。在特定实施方式中,R3是甲基并且n是1。
在特定实施方式中,R1是异丙基并且R2和R3是甲基。在另一特定实施方式中,R1是异丙基,R2是甲基并且n是1。在另一特定实施方式中,R1是异丙基,R3是甲基并且n是1。在特定实施方式中,R2和R3是甲基并且n是1。
在更特定的实施方式中,R1是异丙基、R2和/或R3是甲基并且n是1。
在甚至更特定的实施方式中,烷醇胺衍生物具有式II:
这种式II化合物也称为ICI 118,551,且其化学名称为赤型-D,L-1(甲基茚-4-基氧基)-3-异丙基氨基丁-2-醇。如Life Sciences,27,671(1980)和Bilski等人,J.Cardiovasc.Pharmacol.,5,430-437(1983)中所确定和报道,ICI 118,551具有至少123的β2/β1选择性比。
将观察到,式I的烷醇胺衍生物具有两个不对称碳原子,即-CHOH-基团和-CHR2-基团的碳原子,因此其可以以两种外消旋非对映异构体形式(苏型(threo)和赤型(erythro)形式),以及四种旋光形式,其是外消旋形式中的每种的(+)和(-)异构体存在。应理解,本发明涵盖具备如上定义的选择性β2-肾上腺素能受体拮抗活性的这些异构体形式中的任一种,如何可以分离任何特定异构体以及如何可以测量其可能具有的任何选择性β2-肾上腺素能受体阻断活性是公知常识。
应理解,通常具有-CHOH-基团的{S)-绝对构型的旋光异构体作为β2肾上腺素能阻断剂比具有{R)-绝对构型的相应异构体更具活性。还已知通常赤型异构体比相应的苏型异构体更具β2-选择性,但本发明化合物的苏型和赤型异构体均具有所需的选择性。
术语“药学上可接受的酸加成盐”指代任何酸加成盐,其在给予接受者后能够(直接或间接)提供如本文所述的化合物。优选地,如本文所用,术语“药学上可接受的盐”意指经联邦或州政府的管理机构批准、或在美国药典或其它普遍认可的药典中列出的用于动物,且更具体地用于人。盐的制备可以通过本领域已知的方法进行。式I的烷醇胺衍生物的药学上可接受的酸加成盐的示例性非限制性实例是例如衍生自无机酸的盐,例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐,或衍生自有机酸的盐,例如草酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、β-萘甲酸盐、己二酸盐或l,l-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐),或衍生自酸性合成树脂的盐,例如磺化聚苯乙烯树脂。在特定实施方式中,药学上可接受的酸加成盐是盐酸盐。在更特定的实施方式中,β2肾上腺素能受体拮抗剂的选择性拮抗剂是式II化合物的盐酸盐。
在另一特定实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂选自包含以下化合物的列表:
-布他沙明,对应于具有化学名称DL-赤型-α-(2,5-二甲氧基苯基)-β-叔丁基氨基丙醇盐酸盐的化合物。O'Donnell和Wanstall,Naunyn-Schmiedeberg's Arch.Pharmaco.,308,183-190(1979)中报道了布他沙明的β2选择性的确定,其中报道β2/β1选择性比至少为17。
-H35/25,对应于1-(4’-甲基苯基)-b 2,2-1-异丙基氨基丙醇。
-普瑞特罗,具有结构式
Johansson和Waldeck,J.Pharm.Pharmacol.,1988,32(9),659-660中描述了选择性β2肾上腺素能受体拮抗活性。
-Crooks等人,J.Med.Chem.,22(2),210-214(1979)描述的各种4-和5-[2-羟基-3-(异丙基氨基)丙氧基]苯并咪唑。
-Imbs等人,Br.J.Pharmacol.60(3),357-362(1977)描述的1-(叔丁基-氨基-3-醇-2-丙基)肟基-9芴。
-Jain等人,J.Med.Chem.,21(1),68-72(1978)描述的各种2-(α-羟基芳基甲基)-3,3-二甲基氮丙啶。
如本文所用,术语“治疗”指代任何过程、动作、应用、疗法等,其中向包括人类的对象(或患者)提供医疗援助,其目的是直接或间接地改善对象的状况、或减缓对象的状况或障碍的进展、或减轻正在治疗的疾病或障碍的至少一种症状。
如本文所用,术语“预防”指代在疾病的初始或早期阶段给予本发明的化合物,或还预防其发作。
如本文所用,术语“神经胶质瘤”是起源于脑的常见类型的肿瘤。神经胶质瘤起源于围绕和支持大脑中的神经元的神经胶质细胞,包括星形胶质细胞、少突神经胶质细胞和室管膜细胞。神经胶质瘤可以根据与其共享组织学特征,但不一定来自它们的特定细胞类型进行分类。神经胶质瘤的主要类型是:
-室管膜细胞瘤:室管膜细胞。
-星形细胞瘤:星形胶质细胞(多形性成胶质细胞瘤是恶性星形细胞瘤,和成人中最常见的原发性脑肿瘤)。
-少突神经胶质细胞瘤:少突神经胶质细胞。
-脑干神经胶质瘤:在脑干中发展。
-视神经胶质瘤:在视神经内或周围发展。
混合神经胶质瘤,如少突星形细胞瘤,其含有来自不同类型神经胶质的细胞。
如本文所用,术语“神经胶质瘤”涵盖所有类型的神经胶质瘤,包括室管膜细胞瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤、脑干神经胶质瘤、视神经胶质瘤和少突星形细胞瘤。在特定实施方式中,神经胶质瘤包含癌症干细胞亚群。如本文公开,癌症干细胞(CSC)是肿瘤内具有自我更新、分化和致瘤能力的细胞的小亚群。本领域已知可使用不同的生物标志物来鉴定CSC,如CD-44、Gremlin 1、Id-1、TGFb2、BMP、OLIG2、SOX-2、ZEB1、Wnt5a、Pax-6、miRNSA-451、GD3S、ALDH1。
在特定实施方式中,神经胶质瘤是星形细胞瘤。根据世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分类,术语“星形细胞瘤”包括I、II、III和IV级星形细胞瘤。在更特定的实施方式中,星形细胞瘤是IV级星形细胞瘤,也称为“神经胶质瘤”或“多形性成胶质细胞瘤”。
神经胶质瘤还可以根据其等级进一步分类,等级由肿瘤的病理评估确定。根据世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分类进行脑肿瘤样本的神经病理学评估和诊断。根据他们的等级,其可以分类为:
·低等级神经胶质瘤[WHO II级]分化良好(非间变性);这些趋向于表现出良性倾向,且预示患者预后较好。
·高等级[WHO III-IV级]神经胶质瘤是未分化或间变性的;这些是恶性的且预后较差。
在特定实施方式中,神经胶质瘤是高等级神经胶质瘤。
神经胶质瘤可以是原发性肿瘤或复发性肿瘤。如本文所用,术语“原发性”或“非复发性”指代对象中首次出现的肿瘤,即之前未被检测和治疗的肿瘤。如本文所用,术语“复发性”指代在无病期、治疗后和未检测到癌症的时间段后出现的肿瘤。在特定实施方式中,神经胶质瘤是原发性或非复发性神经胶质瘤。
在优选的实施方式中,神经胶质瘤的特征在于,与参考值相比,具有增加的β2-肾上腺素能受体的表达。
如本文所用,“参考值”涉及用作从样品获得的值/数据的参考的实验室值。参考值(或参考水平)可以是绝对值、相对值、具有上限和/或下限的值、一系列值、平均值、中值、平均值、或通过参考对照或参考值表示的值。参考值可以基于从单个样品获得的值,如例如,从研究样品获得但在先前时间点获得的值。参考值可以基于大量样品,如在样品群体中获得的值或者基于包括或不包括待测试样品的样品池。在特定实施方式中,参考值是健康对象中β2-肾上腺素能受体的表达。在另一特定实施方式中,参考值是未患神经胶质瘤的对象中β2-肾上腺素能受体的表达。
相对于参考值,β2-肾上腺素能受体表达的增加可以是至少2%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%。
适用于确定β2-肾上腺素能受体表达的方法包括但不限于用于确定mRNA表达水平的标准测定,如qPCR、RT-PCR、RNA保护分析、Northern印迹、RNA点印迹、原位杂交、微阵列技术,基于标签的方法,如基因表达系列分析(SAGE),包括诸如LongSAGE和SuperSAGE的变体、微阵列、荧光原位杂交(FISH),包括诸如Flow-FISH、qFiSH和双融合FISH(D-FISH)的变体等。
如本文所用,术语“患者”或“对象”指代任何动物,优选地哺乳动物,且包括但不限于家养和农场动物、灵长类动物和人类,例如人、非人灵长类动物、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物。在优选的实施方式中,对象是任何年龄或种族的人。在本发明中,患者患有神经胶质瘤,更具体地患有星形细胞瘤,甚至更具体地患有成胶质细胞瘤。
如本文所用,术语“患有神经胶质瘤的患者”意指该患者已被诊断患有神经胶质瘤。神经胶质瘤的诊断可以涉及:
·病史和体检,其包括有关患者症状、个人和家庭健康史的问题。
·神经系统检查:这项检查测试视力、听力、语言、力量、感觉、平衡、协调、反射以及思考和记忆的能力。它还可以包括检查患者的眼睛,以寻找因将眼睛连接至大脑的视神经受压而引起的任何肿胀。
·脑部扫描:磁共振成像(MRI)和计算机断层扫描(CT或CAT扫描),其使用计算机创建大脑的详细图像,是用于诊断脑肿瘤的最常见扫描。
·活组织检查:这是去除肿瘤的小样品以用于在显微镜下检查的程序。根据肿瘤的位置,活组织检查和肿瘤去除可以同时进行。
对于其给予患者,本发明的选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐,可以配制成药物组合物。
如本文所用,术语“药物组合物”指代包含治疗有效量的本发明的选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐,以及至少一种药学上可接受的赋形剂或载体的组合物。
如本文所用,术语“治疗有效量”指代提供期望效果,并且通常将由化合物本身的特性和要达到的治疗效果等原因确定的化合物的足够量。其也将取决于要治疗的对象、所述对象所患疾病的严重程度、选择的剂型、给药途径等。为了这个原因,本发明中提及的剂量必须仅被视为对本领域技术人员的指导,他们必须根据前述变量调整剂量。
即使个体需要不同,根据本发明使用的化合物的治疗有效量的最佳范围的确定属于本领域技术人员的共同经验。总体上,如果使用系统药物递送,且如果该化合物作为药物组合的一部分给予,提供有效治疗所需的剂量(其可由本领域的一位专家调整)将根据年龄、健康、适合度(fitness)、性别、饮食、体重、受体的改变程度、治疗频率、损伤的性质和状况、损害或疾病的性质和程度、对象的医疗状况、给药途径、药理学考虑,如所使用的特定化合物的活性、功效、药代动力学和毒理学特征变化。在预防和/或治疗对象中的局部缺血/再灌注损伤中治疗有效的根据本发明所述用途的化合物的量可以通过常规临床技术来确定(参见,例如,The Physician's Desk Reference,Medical Economics Company,Inc.,Oradell,NJ,1995和Drug Facts and Comparisons,Inc.,St.Louis,MO,1993)。
在特定实施方式中,治疗有效量产生神经胶质瘤的一种或多种症状的减轻。在特定实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐以约0.2mg/kg/天至约5mg/kg/天,优选地约0.5mg/kg/天、约0.7mg/kg/天、约1mg/kg/天、约1.5mg/kg/天、约1.7mg/kg/天、约1.9mg/kg/天、约2.1mg/kg/天、约2.2mg/kg/天、约2.5mg/kg/天、约2.7mg/kg/天、约2.9mg/kg/天至约4.9mg/kg/天、约4.7mg/kg/天、约4.5mg/kg/天、约4.3mg/kg/天、约4.1mg/kg/天、约3.9mg/kg/天、约3.7mg/kg/天、约3.5mg/kg/天、约3.3mg/kg/天、3.1mg/kg/天、约3mg/kg/天的剂量给予。在更特定的实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐以2mg/kg体重/天和3mg/kg体重/天之间的剂量给予。在甚至更特定的实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐以2.4mg/kg体重/天的剂量给予。
本发明化合物的剂量可以以每kg体重的mg拮抗剂或每平方米的体表的mg拮抗剂表达。技术人员知道如何根据小鼠中实验测定的剂量确定用于特定动物的剂量,具体地用于人的剂量。例如,Reagan-Shaw S.等人的文章(Reagan-Shaw S.等人“Dose translationfrom animal to human studies revisited”.FASEB J 2008,22(3):659-661)提供了用于将mg/kg转换为mg/m2的标准转换因子。
剂量(mg/kg)x Km=剂量(mg/m2)
文章还解释,这种转换是将第一个动物物种中的剂量转换为第二个动物物种中的剂量(异速生长剂量转换(allometric dose translation))的基础。因此,可以使用下式将以mg/kg计的动物剂量(AD)转换为以mg/kg计的人等效剂量(HED):
其中每个物种的Km显示于表1(数据摘自Reagan-Shaw S.等人“Dose translationfrom animal to human studies revisited”.FASEB J 2008,22(3):659-661)中。
表1.用于将AD转换为HED的Km因子
因此,小鼠中30mg/kg剂量的实验对应于人2.4mg/kg的一般剂量。
在另一特定实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐在人中以下列剂量给予,其中每次给予范围为0.2mg/kg至5mg/kg,优选地约0.2mg/kg/天、约0.25mg/kg/天、约0.3mg/kg/天、约0.35mg/kg/天、约0.4mg/kg/天、约0.45mg/kg/天、约0.50mg/kg/天、约0.55mg/kg/天、约0.6mg/kg/天、约0.65mg/kg/天、约0.7mg/kg/天、约0.75mg/kg/天、约0.8mg/kg/天、约0.85mg/kg/天、约0.90mg/kg/天、约0.95mg/kg/天、约1mg/kg/天、约1.2mg/kg/天、约1.4mg/kg/天、约1.6mg/kg/天、约1.8mg/kg/天、约2mg/kg/天、约2.2mg/kg/天、约2.4mg/kg/天、约2.6mg/kg/天、约2.8mg/kg/天、约3mg/kg/天、约3.2mg/kg/天、至约3.4mg/kg/天、约3.6mg/kg/天、约3.8mg/kg/天、约4mg/kg/天、约4.5mg/kg/天、约5mg/kg/天。在更优选的实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐以2mg/kg体重/天和3mg/kg体重/天之间的剂量给予。在仍更优选的实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐以2.4mg/kg体重/天的剂量给予。
在另一特定实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐,每天被给予,优选地一天1次、一天2次、一天3次。在更优选的实施方式中,每天给予1次。在另一特定实施方式中,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐,在2天、3天、4天、5天、7天、9天、10天、15天、20天、25天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或超过12个月期间,优选地在5天期间,甚至更优选在连续5天期间给予。
术语“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”指代在所采用的剂量和浓度下,对对象基本上无毒并且与药物组合物的其它组分相容的任何化合物或化合物的组合。因此,赋形剂是与药物组合物的活性成分(即,选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐)一起配制的无活性物质,用于辅助(bulking-up)含有所述活性成分的组合物的目的。辅助允许在生产剂型时方便和准确地分配原料药。赋形剂还可用于各种增强治疗的目的,如促进化合物(药物)吸收或溶解、或其它药代动力学考虑。赋形剂在制造过程中也可以是有用的,以辅助处理相关活性物质,如通过促进粉末流动性或不粘性质,以及帮助体外稳定性,如在预期保质期内防止变性。合适赋形剂的选择取决于给药途径和剂型,以及活性成分和其它因素。赋形剂可以是任何常规类型的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或制剂助剂。赋形剂或载体的示例性非限制性实例包括水、盐(盐水)溶液、醇、右旋糖、植物油、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、表面活性剂、硅酸、粘性石蜡、香料油、脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯、脂肪酸酯石油醚(fatty acid esters petroetrals)、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。
本发明的选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐可以通过任何合适的给药途径给予,如但不限于肠胃外、口服、局部、鼻、直肠、玻璃体内途径。在特定实施方式中,本发明的选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐被腹膜内、静脉内、皮下、皮内、肌肉内或玻璃体内给予。在优选的实施方式中,本发明的选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐被口服或静脉内或玻璃体内给予。在更优选的实施方式中,本发明的选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂,优选地式I的烷醇胺衍生物,更优选地式II的烷醇胺衍生物,或其药学上可接受的酸加成盐被腹膜内给予。
在优选的实施方式中,β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂与抗肿瘤化合物一起给予。如本文所用,术语“肿瘤”或“癌症”指代涉及不受调控的细胞生长并且也被称为恶性瘤的一大类疾病。该术语通常应用于以不受控制的细胞分裂(或以存活或细胞凋亡抗性的增加),和以所述细胞侵入其它邻近组织(侵入)并通过淋巴和血管扩散到细胞通常不位于(转移)的身体其它区域,通过血流循环,以及然后侵入身体中其它部位的正常组织的能力为特征的疾病。在特定实施方式中,癌症表现为良性肿瘤,即,不能通过侵入或转移扩散的肿瘤,即,它们仅在局部生长。在另一特定实施方式中,癌症表现为恶性肿瘤,即,能够通过侵入和转移扩散的肿瘤。
如本文所用,术语“抗肿瘤剂”、“抗癌剂”或“抗瘤剂”(在本说明书中不区别地使用)总体上指代抑制或阻抑癌细胞生长和增殖的物质。抗肿瘤剂还可以包括破坏癌细胞或干扰细胞分裂的化合物、阻断参与癌症的某些激素的化合物、抑制或防止新血管生长的化合物(例如血管生成抑制剂)、损伤DNA的试剂(例如烷基化剂,如顺铂、卡铂和奥沙利铂(oxaloplatin);抗代谢物;和拓扑异构酶抑制剂),以及具有抗癌性质的化合物(例如,紫杉烷、长春花生物碱、和植物生物碱)。术语“抗肿瘤剂”还包括放射疗法。抗肿瘤剂还可以包括对癌细胞的失调蛋白具有特异性的试剂。在优选的实施方式中,抗肿瘤化合物选自来普霉素B(leptomycin B)(LMB,CAS号87081-35-4)、替莫唑胺(CAS号85622-93-1)、卡培他滨(capecitabine)(CAS号154361-50-9)和烷基化、插入(intercalating)或DNA损伤剂。在更优选的实施方式中,抗肿瘤化合物是普萘洛尔(CAS号:525-66-6)。
如本文所公开,“烷基化剂”是将烷基连接至DNA分子的鸟嘌呤碱基,阻止双螺旋链按照它们应该的方式连接并导致DNA链断裂,从而影响癌细胞繁殖的能力的化合物。
如本文所公开,“插入剂”是将自身插入细胞的DNA结构中并与DNA结合,导致DNA损伤的化合物。在癌症治疗中,DNA插入剂可以通过损伤癌细胞的DNA并阻止其分裂来杀死癌细胞。
如本文所公开,“DNA损伤剂”是通过影响双螺旋的一级结构来损伤DNA的试剂;即,碱基本身被化学修饰。损伤剂的非限制性实例包括:活性氧物种、紫外线辐射、x射线和γ射线。
术语“与抗肿瘤化合物一起给予”意指β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂可以与抗肿瘤化合物同时或顺序给予。当同时给予β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂和抗肿瘤化合物时,它们可以存在于单一药物组合物中,或不同药物组合物中。当顺序给予β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂和抗肿瘤化合物时,它们可以以任何顺序给予,即,β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂的给予可以在抗肿瘤化合物的给予之前开始,或者抗肿瘤化合物的给予可以在β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂的给予之前开始。
在优选的实施方式中,β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂在一线疗法(firstline of therapy)后给予由于疾病复发或太严重的继发效应而不再易于继续一线疗法的患者。在优选的实施方式中,β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂作为二线疗法给予。如本文所公开,“二线疗法”指代对先前已接受第一疗法(称为“一线疗法”)的患者给予的治疗。一线疗法通常是一组标准治疗的一部分,如手术后化学疗法和放射。也称为诱导疗法、初级疗法和初级治疗。如本文所公开,可以使用任何一线疗法。用于神经胶质瘤的一线疗法的非限制性实例包括:最大手术切除、单独使用的放射疗法、或放射疗法加替莫唑胺(TMZ)的伴随和维持治疗。神经胶质瘤一线疗法的其它实例包括如上定义的抗癌化合物,如损伤DNA的试剂,如烷基化剂(例如顺铂、卡铂和奥沙利铂);抗代谢物;拓扑异构酶抑制剂、其它具有抗癌性质的化合物(例如紫杉烷、长春花生物碱和植物生物碱)。在优选的实施方式中,抗肿瘤化合物选自来普霉素B(LMB,CAS号87081-35-4)、替莫唑胺(CAS号85622-93-1)、卡培他滨(CAS号154361-50-9)和烷基化、插入或DNA损伤剂。在更优选的实施方式中,抗肿瘤化合物是普萘洛尔(CAS号:525-66-6)。
在特定实施方式中,给予β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂作为一线疗法,即,作为神经胶质瘤的第一治疗。
在优选的实施方式中,在无病期期间给予β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂。如本文所用,术语“无病期”指代治疗期间和/或治疗之后,其中患者患有未恶化的疾病的时间段。在优选的实施方式中,β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂在用一线疗法治疗后发生的无病期期间给予,尽管本发明还考虑在患者在不同线疗法后(在二线疗法后、在三线疗法或进一步线疗法后)可能经历的其它无病期期间进行β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂的给予。在另一实施方式中,一旦患者因疾病复发或太严重的继发效应而不再易于继续线疗法时,就在二线疗法后、三线疗法后或任何线疗法后给予β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂。
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本发明将通过以下实施例进行描述,这些实施例被认为仅是示例性的而不是对本发明范围的限制。
实施例
材料和方法
肿瘤球体培养物和极端有限稀释测定(ELDA)
根据其它地方描述的方案(Diaz-Guerra,E.;Lillo,M.A.;Santamaria,S.;Garcia-Sanz,J.A.,Intrinsic cues and hormones control mouse mammary epithelialtree size.FASEB J 2012,26(9),3844-53)。用胰蛋白酶(Invitrogen)将细胞从平板上分离并接种在补充有B27(Gibco)、10ng/ml表皮生长因子(EGF:Invitrogen)和10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF:Millipore)的完全培养基(具有GlutaMAX的DMEM/F-12培养基)中,并将其在5%CO2中保持在37℃下。对于ELDA测定,用胰蛋白酶将细胞解离为单个细胞,并根据Ponti,D等人(Cancer Res 2005,65(13),5506-11.)中所述的以下程序以不同稀释度(对于U-87细胞为100至10)接种于球体(sphere)完全培养基中。14天时,对最终球体数量进行定量,并用ELDA软件(http://bioinf.wehi.edu.au/software/limdil/index.html和(Hu,Y.等人J Immunol Methods 2009,347(1-2),70-8)获得最终数据和统计显著性。
RNA提取以及miRNA和mRNA的相对定量
使用Direct-zol RNA MiniPrep试剂盒(ZymoResearch)从用PBS洗涤的U-87细胞中分离RNAt,刮下平板并离心。在按照说明使用MiniPrep试剂盒之前,将沉淀用Tri试剂处理并在室温下均质化5min。通过使用ND-1000分光光度计(NanoDrop Technologies,Wilmington,DE,USA)测量260、230和280nm处的吸光度评估RNAt的质量和浓度。在所有情况下,获得纯RNA可接受的期望的260/280(约2.0)和260/230(2.0-2.2)比率值。为检测两个目标miR,在双安培平台(amperometric platform)上测量之前,将从细胞提取的0.5μg RNAt用于杂交。
qScript microRNA定量系统(Quanta BioSciences,Inc.,Gaithersburg,MD,USA)用于评估miR-21和miR-205表达。简而言之,使用qScript microRNA cDNA合成试剂盒合成cDNA,每次PCR反应使用10ng初始RNA。PCR条件由以下组成:在50℃下初始激活2min,然后在LightCycler 480实时PCR系统(Roche)中进行40个循环:在95℃下5s和在60℃下30s。将每个引物的Ct(阈值循环)值标准化为RNU6的值。为评估基因表达,使用转录子第一链cDNA合成试剂盒(Roche)在以下PCR条件下合成cDNA:40个扩增循环:在95℃下10秒、在60℃下30秒和在72℃下30秒。ACTB用作参考基因用于标准化,并且对于miRNA使用PerfeCTa SYBRGreen SuperMix(Quanta BioSciences)和对于基因表达使用FastStart Universal SYBRGreen Master(Roche),重复进行三次实时PCR反应。通过相对标准曲线法确定每个基因的表达水平,目的基因的引物序列获自Universal ProbeLibrary Assay Design Center(https://qpcr.probefinder.com/organism.jsp)。
共聚焦显微镜
将细胞接种在P-24孔板中的盖玻片上,并在含有10%FBS的DMEM中生长。生长至少24小时后,将细胞在3.5%PFA/PBS中于4℃下固定在盖玻片中1小时。接下来,将细胞在室温下用0.2%Triton X-100在PBS中透化30min。之后,将针对β2人肾上腺素能受体的单克隆兔一抗(Abcam)在PBS中以1:50的稀释度孵育60分钟,然后用PBS洗涤3次,并与在PBS中以1:100稀释的Alexa-488抗兔二抗(Alexa-488anti-rabbit secondary)一起孵育1小时。盖玻片用带有4,6-二脒基-2-苯基吲哚的Prolong Gold(Invitrogen)固定,并用光谱共聚焦显微镜Leica TCS SP2(Leica Microsystems,Inc.,Wetzlar,Germany)观察。
U-87成胶质细胞瘤细胞和神经胶质球的异种移植物
雄性7-8周龄NOD scid gamma(NSG)小鼠在背侧注射共计106个U-87细胞系的细胞(A)、或105个来自解聚神经胶质球的细胞(B)。在A的情况下,当肿瘤大小达到100mm3体积时,将小鼠随机分成3组,每组9/10只小鼠。一组通过每天腹膜内注射10mg/Kg体重的普萘洛尔来处理,另一组用相同量的ICI118,551处理,且最后对照组注射媒介物。每2-3天用卡尺测量肿瘤大小。当对照组的肿瘤体积平均值达到根据我们的伦理程序确定的终点时,处死小鼠。
在B的情况下,将小鼠分为3组,每组10只小鼠,并在异种移植物建立后的前5天以3mg/Kg体重用普萘洛尔或ICI118,551、或媒介物腹膜内注射进行处理。追踪小鼠直到肿瘤出现并且相当大。从这一刻起,在4周内每2-3天测量肿瘤大小,然后处死小鼠。
统计分析
显示的值是平均值±SEM或±SD,并使用GraphPad Prism 5通过t检验比较来自两组的数据。单向方差分析(ANOVA)用于确定多个成对比较的平均值的差异,其中p<0.05被认为是显著的。
结果
ICI 118,551在体外降低U-87细胞(人成胶质细胞瘤)的活力并增加其凋亡
由于ICI 118,551是选择性β2-阻断剂,首先要测试的是U-87细胞系中2型β-肾上腺素能受体的表达。如图1A中所示,将共聚焦显微镜与针对人β2-肾上腺素能受体的单克隆抗体(Abcam)一起使用表明U-87表达这种类型的肾上腺素能受体(图1A,染色的细胞),从而使药物能够在这种成胶质细胞瘤细胞模型中发挥其作用机制。β2肾上腺素能受体mRNA表达也通过3D培养物中神经胶质球的定量PCR确认(图1C)。
一旦在U-87中证实ICI 118,551的机制,就以不同的剂量处理细胞,且明显的是此药物降低这种人成胶质细胞瘤细胞系模型的活力,当在液体悬浮液中生长为肿瘤球体(神经胶质球、干细胞)或黏着物中生长时(图1B),使用来自Promega的ATP-Glo试剂盒通过发光进行定量。从图1B中,结果显示当3D神经胶质球的处理液体培养物与黏着物中生长的2D U-87细胞相比时,ICI 118,551以不同方式降低U-87的活力。对药物的差异敏感性显示于图1B中,黏着物中生长的细胞比悬浮液中形成的3D神经胶质球更敏感。后者是大多数抗癌药物中的一般行为,但相关的是ICI 118,551在低μM浓度下强烈影响癌症干细胞的活力,这是肿瘤疾病的转移和复发过程的基础。
ICI 118,551抑制人成胶质细胞瘤细胞系U-87中神经胶质球的形成和扩张,在公认的癌症干细胞的培养程序下。
U-87神经胶质球在其它地方描述的具体条件下培养(Gupta,P.B.等人2009.Cell,138,645;Seymour,T.等人2015.Front.Oncol.5:159.doi:10.3389/fonc.2015.00159;等人2009.Cancer Cell 15,315–327;-Lee,J.等人2006.Cancer Cell 9,391–403)。如图2A中所示,U-87形成圆形的成熟神经胶质球,其显示出明确的结构。U-87细胞培养在用于神经胶质球形成的培养基中,并用媒介物(对照,左侧)、10至100μM不同浓度下的ICI 118,551和普萘洛尔处理。当用β受体阻断剂处理细胞时,对神经胶质球的形成存在剂量依赖性抑制,这在两种药物普萘洛尔和ICI-118,551中从10μM开始是专利的。B:在不同浓度的ICI 118,551和普萘洛尔存在下,对肿瘤球体形成的有限稀释测定实验(ELDA)。从图表中可以清楚地看出,与对照相比,用ICI-118,551和用普萘洛尔处理后,稀释因子增加。这是U-87干细胞对ICI 118,551和普萘洛尔的干细胞敏感性的结果。
ICI 118,551和普萘洛尔降低U-87成胶质细胞瘤细胞系中干细胞性生物标志物表达的mRNA表达。
当在48小时内用ICI-118,551和普萘洛尔处理U-87细胞时,干细胞性相关基因GD3合酶、ALDH1、prominin(CD 133)、Sox2和nanog的表达显著降低(图3A)。然而,来自参与神经细胞分化的基因(如MAP2、GFAP和Nestin)的mRNA的表达增加(图3B)。通过RT-qPCR测量相应mRNA的表达。结论是,虽然所选择的干细胞性生物标志物的表达正在减少,但与细胞分化相关的那些正在增加,这些中的所有均是剂量依赖性方式,并且总体上表明ICI-118,551在细胞命运中的作用。
ICI 118,551和普萘洛尔延迟NSG免疫抑制小鼠中U-87异种移植物的肿瘤进展。
使用U-87贴壁细胞制备异种移植物:小鼠(n=30)在腹侧接种106个U-87成胶质细胞瘤细胞系的细胞作为异种移植物。每3天测量肿瘤体积。当肿瘤达到约100mm3体积时,将小鼠分成3组(n=9-10)。一组每天用普萘洛尔以10mg/Kg体重处理,另一组用相同剂量的ICI118,551处理,而第三组仅用媒介物(DMSO)处理。药物被腹膜内注射。没有观察到不良反应。如图4A中所示,在用10mg/Kg体重的普萘洛尔或ICI118,551处理的小鼠组中,肿瘤体积显著减小,约30%。
另一方面,也使用利用U-87神经胶质球的异种移植物。这些神经胶质球富含CSC(癌症干细胞)。用105个来自成胶质细胞瘤细胞系U-87的球体接种小鼠。将小鼠分成3组,每组9-10只动物,并在异种移植后立即用3mg/Kg体重的普萘洛尔、或ICI 118,551、或仅媒介物连续处理5天。从其大到足以确定大小的那一刻开始测量肿瘤。从图4B中可以看出,在前5天中,处理小鼠与媒介物处理小鼠之间的肿瘤生长速率存在显著延迟。
在U87成胶质细胞瘤细胞系中,ICI 118,551诱导mRNA-21表达的降低比普萘洛尔更大
miR-2对肿瘤发生影响的潜在机制仍不清楚,尤其是因为仅通过实验验证此miR的少数目标。已知oncomiR miR-21在恶性细胞中对PDCD4施加转录控制,并且其内源性蛋白通过miR-21抑制被上调3.5倍。PDCD4表达在若干肿瘤类型中下调或丧失,使其成为治疗一些癌症的有希望的分子目标(Frankel,L.B.等人,.J Biol Chem,2008.283(2):p.1026-33)。miR-21的再表达已与乳腺癌和成胶质细胞瘤中上皮-间质转化的获得有关(Zhou Q,Liu J,Quan J,Liu W,Tan H,Li W.Cancer Sci.2018Sep;109(9):2651-2659)。
U87细胞在DMEM-10%FCS中培养,并用增加量的ICI孵育48小时和普萘洛尔孵育48小时。与普萘洛尔相比,在与ICI孵育后,mRNA-21表达显著降低(图5左)。此外,ICI增加mRNA-21目标,如PDCD4-促凋亡剂1(中)和PTEN-成胶质细胞瘤抑制因子(右)的表达水平。
Claims (18)
1.用于治疗和/或预防神经胶质瘤用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂。
2.根据权利要求1所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述神经胶质瘤的特征在于,与参考值相比,具有增加的所述β2-肾上腺素能受体的表达。
4.根据权利要求1至3中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述拮抗剂与选自替莫唑胺、来普霉素B、卡培他滨和烷基化、插入或DNA损伤剂的抗肿瘤化合物一起给予。
5.根据权利要求1至4中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述抗肿瘤化合物是普萘洛尔。
6.根据权利要求1至5中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述神经胶质瘤包含癌症干细胞的亚群。
7.根据权利要求1至6中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述神经胶质瘤为高等级神经胶质瘤。
8.根据权利要求1至7中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述神经胶质瘤为非复发性神经胶质瘤。
9.根据权利要求1至8中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤。
10.根据权利要求9所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述星形细胞瘤为成胶质细胞瘤。
11.根据权利要求1至10中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中n是1。
12.根据权利要求1至11中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中R1是异丙基、R2是甲基和/或R3是甲基。
14.根据权利要求3至13中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述药学上可接受的酸加成盐是盐酸盐。
15.根据权利要求1至114中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述烷醇胺衍生物或其药学上可接受的酸加成盐以1mg/kg体重/天和4.5mg/kg体重/天之间的剂量给予。
16.根据权利要求15所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述烷醇胺衍生物或其药学上可接受的酸加成盐以2mg/kg体重/天和3mg/kg体重/天之间的剂量给予。
17.根据权利要求16所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述烷醇胺衍生物或其药学上可接受的酸加成盐以2.4mg/kg体重/天的剂量给予。
18.根据权利要求1至17中任一项所述用途的β2-肾上腺素能受体的选择性拮抗剂,其中所述拮抗剂作为一线疗法或在一线疗法之后给予患者。
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