CN113365609A - 颗粒形成和形态 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及能够形成可用于治疗的药学上相关的颗粒的组合物和方法。特别地，本文公开的方法允许受控地形成包含生物活性治疗剂的具有低内部空隙空间的圆形颗粒。

Description

颗粒形成和形态
相关申请
本申请要求2019年1月31日提交的第62/799,696号美国临时申请的权益。上述申请的全部教导内容以引用的方式并入本文。
技术领域
本公开涉及能够形成可用于治疗的药学上相关的颗粒的组合物和方法。特别地，本文公开的方法允许形成包含生物活性治疗剂的具有低内部空隙空间的圆形颗粒。
背景技术
材料科学和纳米技术的应用需要开发更有效、可重复和创新性技术来合成新型功能颗粒。生物活性颗粒的合成和受控组装的最新进展使得它们能够应用于治疗。目前的努力致力于开发通常表现出通过简单地调整颗粒的尺寸和形式无法获得的物理特性的非圆形微颗粒的新合成方法。然而，由于缺乏对通常难以获得的颗粒的尺寸均匀性、形状选择性、表面功能性和骨架密度的充分控制，这些技术应用于圆形颗粒受到了限制。因此，需要开发用于圆形颗粒制备的高度稳健和受控的方法。
发明内容
本文提供了包含剂的颗粒或包含许多包含剂的颗粒的组合物，其中颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
一方面，本公开提供了包含剂的颗粒，其中颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
另一方面，本公开提供了包含许多颗粒的组合物，所述颗粒包含悬浮在液体中的剂，其中颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
本公开还提供了形成颗粒的方法。
一方面，本公开提供了形成颗粒的方法，所述方法包括：
a)提供包含第一液体和剂的液滴；
b)使液滴与第二液体接触；
c)使液滴干燥；以及
d)移除第一和第二液体，
从而形成包含剂的颗粒，其中在移除第一和第二液体后，颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
本文还提供了控制颗粒的形态的方法。
一方面，本公开提供了控制颗粒的形态的方法，所述方法包括：
a)提供包含第一液体和剂的液滴；
b)使液滴与第二液体在指定的佩克莱特数(Peclet number)下接触；
c)使液滴干燥；以及
d)移除第一和第二液体，
其中指定的佩克莱特数控制颗粒的形态。
本公开在本文中还提供控制颗粒的表面特性的方法。
一方面，本公开提供了控制颗粒的表面特性的方法，所述方法包括：
a)提供包含第一液体、第一组分和第二组分的液滴，其中第一组分以比第二组分更接近其溶解度极限的量存在，第一组分具有比第二组分更高的佩克莱特数，或其组合；
b)使液滴与第二液体接触；
c)使液滴干燥；以及
d)移除第一和第二液体，
从而形成颗粒，其中第一组分相对于第二组分在颗粒的表面富集。
本发明组合物和方法可用于形成可用于治疗的药学上相关的颗粒。在优选的实施方案中，本文公开的方法可允许形成包含生物活性治疗剂的具有低内部空隙空间的圆形颗粒。
附图说明
从以下对如附图中所示的示例实施方案进行的更具体的描述中将显而易见前述的内容，其中相同的附图标记在不同的视图中指代相同的部分。附图不一定是按比例绘制的，而是将重点放在示出实施方案上。
图1A显示使用佩克莱特数基本上小于1的第二液体产生的人IgG颗粒的图像。
图1B显示使用佩克莱特数基本上高于1的第二液体产生的人IgG颗粒的图像。
图2A-2C显示通过本公开的方法使用相对于第一液体具有不同预饱和水平的几种第二液体形成的人IgG颗粒的图像。
图3A显示通过本公开的方法形成的人IgG颗粒表面的图像。
图3B显示被切开以展现内部截面的人IgG颗粒的图像。
图4显示在不同极性的第二液体中形成的颗粒的分散表面能分布的图示。
图5显示在不同极性和酸-碱特性的第二液体中形成的颗粒的酸-碱表面能分布的图示。
图6显示来自常见第一液体的固体蛋白质物质与标准冻干物质相比的X射线衍射分布图。
图7A-7C显示通过本公开的方法在不同电压下形成的人IgG颗粒的图像。
图8显示通过本公开的方法在不同电压下形成的人IgG颗粒的体积加权尺寸分布D10、D50和D90的图示。
图9显示通过本公开的方法在固定温度下形成的颗粒的颗粒质量与环境湿度之间的关系的图示。
图10显示用于测量通过本公开的方法形成的颗粒的玻璃化转变温度的差示扫描量热法测量的图示。
图11显示悬浮在包含各种拥挤剂的水溶液中的人IgG颗粒的几种悬浮液在储存后的溶解颗粒百分比的图示。
图12显示悬浮在非水悬浮介质中的人IgG颗粒的沉降和表面粘附特性的图形。
图13显示纯去离子水溶液和蛋白质以20mg/mL的浓度溶解在去离子水中的溶液的气-液界面的表面张力的图示。
图14A显示通过本公开的方法形成的人IgG颗粒表面的图像。
图14B显示被切开以展现内部截面的人IgG颗粒的图像。
具体实施方式
已经采用各种技术来产生颗粒。例如，可以通过产生包含溶解在溶剂中的活性剂的液体的液滴来实现颗粒的产生。然后可以通过将液滴沉积到其中溶剂而非活性剂可溶解的液体中而将溶剂从液滴中提取出来，从而留下固体颗粒。在液体蒸发之后进行颗粒的分离。然而，由于缺乏对通常难以获得的颗粒的尺寸均匀性、形状选择性、表面功能性和骨架密度的充分控制，这些技术应用于形成功能圆形颗粒受到了限制。本公开寻求通过提供用于颗粒制备的稳健且受控的方法来弱化与形成功能颗粒相关的控制问题。
本公开通常涉及包含剂的颗粒或包含许多包含悬浮在液体中的剂的颗粒的组合物，其中颗粒或许多颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
本公开还涉及形成颗粒的方法，所述方法包括：a)提供包含第一液体和剂的液滴；b)使液滴与第二液体接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，从而形成包含剂的颗粒，其中在移除第一和第二液体后，颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
在某些方面，本公开通常涉及控制颗粒的形态的方法，所述方法包括：a)提供包含第一液体和剂的液滴；b)使液滴与第二液体在指定的佩克莱特数下接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，其中指定的佩克莱特数控制颗粒的形态。
在某些其它方面，本公开通常涉及控制颗粒的表面特性的方法，所述方法包括：a)提供包含第一液体、第一组分和第二组分的液滴，其中第一组分以比第二组分更接近其溶解度极限的量存在，第一组分具有比第二组分更高的佩克莱特数，或其组合；b)使液滴与第二液体接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，从而形成颗粒，其中第一组分相对于第二组分在颗粒的表面富集。
如本文所述，本公开提供了制备包括一种或多种剂(例如，治疗剂或诊断剂)的颗粒的方法。可通过如下方式来形成颗粒，即产生第一液体(例如，包括剂)的液滴，并移除第一液体(例如，通过其在第二液体中的分散和/或蒸发)以固化液滴。如本文所述形成颗粒的方法显著改变了颗粒的结构或形态，并且可增强剂的稳定性。例如，颗粒储存的时间段可延长，而不会显著地损失活性或需要冷藏。这些颗粒可用于产生稳定的药物组合物、药物悬浮制剂、药物粉末制剂(例如，可吸入粉末、可注射粉末)、乳膏或其它外用糊剂、营养物或化妆品。如本文所用的术语“药物组合物”表示这样的组合物，其中治疗剂或诊断剂保留或部分保留其预期的生物活性或功能形式，并且其中仅包括药学上可接受的组分。
容易理解的是，如本文一般描述的方面和实施方案是示例性的。以下对各方面和实施方案更详细的描述并不旨在限制本公开的范围，而仅仅是各方面和实施方案的代表。此外，在不脱离本公开的范围的情况下，本领域技术人员可以改变本文公开的组合物和方法。除另有定义外，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。本文引用的所有出版物和专利均以引用的方式并入。
定义
出于本公开的目的，除另有明确说明外，将使用以下定义：
除非本文另有指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本公开的上下文中使用的术语“一个(种)”、“该(所述)”及类似的指代项应被解释为涵盖单数和复数。除非本文另有指示或不然与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可按任意合适的顺序进行。本文提供的任何及所有的实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明本公开，并不对本公开的范围构成另外要求保护的限制。本说明书中的任何语言都不应被解释为表明任何未要求保护的要素对于本公开的实施是必要的。
与给定数值如温度和时间段相关的术语“约”旨在包括指定值的10％以内的数值。
如本文所用，“烷基”基团或“烷烃”是完全饱和的直链或支链非芳族烃。通常，除另有定义外，直链或支链烷基具有1至约20个碳原子，优选1至约10个碳原子。直链和支链烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、叔戊基、新戊基、异戊基、仲戊基、3-戊基、仲异戊基、活性戊基、己基、庚基、辛基、乙基己基等。C1-8直链或支链烷基也被称为“低级烷基”。具有两个开放价的烷基有时被称为亚烷基，如亚甲基、亚乙基、亚丙基等。此外，如整个说明书、实施例和权利要求书中所用的术语“烷基”(或“低级烷基”)旨在包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”两者，后者是指具有置换烃主链的一个或多个碳上的氢的取代基的烷基部分。如果没有另外指明，这类取代基可包括例如烷基、卤素、羟基、羰基(如羧基和烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理解的是，在适当情况下，烃链上取代的部分本身可以被取代。比如，取代的烷基的取代基可包括取代和未取代形式的氨基、叠氮基、亚氨基、酰氨基、磷酰基(包括膦酸酯和次膦酸酯)、磺酰基(包括硫酸酯、磺酰胺、氨磺酰基和磺酸酯)和甲硅烷基以及醚、烷硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸酯和酯)、-CF3、-CN等。下面描述示例性的取代烷基。环烷基可以被烷基、烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、羰基取代的烷基、-CF3、-CN等进一步取代。在其它实施方案中，术语“烷基”可意指“环烷基”，其是指具有3至10个碳环原子的非芳族碳环状环，所述碳环原子是结合在一起形成环的碳原子。环可以是饱和的或具有一个或多个碳-碳双键。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基和环庚基，以及桥接和笼状饱和环基团，如降冰片基和金刚烷基。如本文所述，有机溶剂包括但不限于脂族烃溶剂、芳族烃溶剂、醇或烷基醇、烷基醚、亚砜、烷基酮、乙酸烷基酯、三烷基胺、甲酸烷基酯、三烷基胺或其组合。脂族烃溶剂可以是戊烷、己烷、庚烷、辛烷、环己烷等或其组合。芳族烃溶剂可以是苯、甲苯等或其组合。醇或烷基醇包括例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、庚醇、辛醇、癸醇、戊醇或其组合。烷基醚包括甲基、乙基、丙基、丁基等，例如二乙醚、二异丙醚或其组合。亚砜包括二甲基亚砜(DMSO)、癸基甲基亚砜、十四烷基甲基亚砜等或其组合。术语“烷基酮”是指被烷基取代的酮，例如丙酮、乙基甲基酮等或其组合。术语“乙酸烷基酯”是指被烷基取代的乙酸酯，例如乙酸乙酯、乙酸丙酯(乙酸正丙酯、乙酸异丙酯)、乙酸丁酯(乙酸正丁酯、乙酸异丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸叔丁酯)、乙酸戊酯(乙酸正戊酯、乙酸叔戊酯、乙酸新戊酯、乙酸异戊酯、乙酸仲戊酯、乙酸3-戊酯、乙酸仲异戊酯、乙酸活性戊酯)、乙酸2-乙基己酯等或其组合。术语“甲酸烷基酯”是指被烷基取代的甲酸酯，例如甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯等或其组合。术语“三烷基胺”是指被三个烷基取代的氨基，例如三乙胺。
如本文所用，“氨基酸”或“残基”是指本领域中已知的任何天然或非天然存在的氨基酸、任何氨基酸衍生物或任何氨基酸模拟物。包括相应氨基酸的L-以及D-形式，尽管L-形式通常是优选的。在一些实施方案中，该术语涉及20种天然存在的氨基酸中的任何一种：L形式的甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、半胱氨酸(Cys)、甲硫氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、谷氨酰胺(Gin)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)。在某些实施方案中，氨基酸侧链可以是Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Cys、Ser、Thr、Trp、Phe、Lys、Arg、His、Tyr、Asn、Gln、Asp、Glu或Pro的侧链。
如本文所用，除上下文另有要求外，术语“包含”及变化形式(comprise/comprising/comprises/comprised)并不旨在排除进一步的添加剂、组分、整体或步骤。术语“包括”和“包含”可互换使用。如本文所用，短语“选自由……组成的组”、“选自”等包括指定物质的混合物。在本文指出数值限制或范围的情况下，端点包括在内。另外，数值限制或范围内的所有值和子范围都明确地包括在内，如同明确地写出一样。除明确指出外，以单数形式提到某一要素并不旨在表示“一个(种)且仅一个(种)”，而是表示“一个(种)或多个(种)”。除明确另指出外，诸如“一些”的术语是指一个(种)或多个(种)，且诸如“一个(种)”和“该(所述)”的单数术语是指一个(种)或多个(种)。
术语“寡肽”用于指相较多肽或蛋白质具有较少氨基酸成员的肽。本文所述的寡肽通常由约两个至约四十个氨基酸残基组成。寡肽包括二肽(两个氨基酸)、三肽(三个氨基酸)、四肽(四个氨基酸)、五肽(五个氨基酸)、六肽(六个氨基酸)、七肽(七个氨基酸)、八肽(八个氨基酸)、九肽(九个氨基酸)、十肽(十个氨基酸)、十一肽(十一个氨基酸)、十二肽(十二个氨基酸)、二十肽(二十个氨基酸)、三十肽(三十个氨基酸)、四十肽(四十个氨基酸)等。寡肽也可根据分子结构分类：铜绿菌素类、氰肽素类、微囊藻素类、微绿木霉素类、microginin类、鱼腥藻肽类和环酰胺类等。同源寡肽是包含相同氨基酸的寡肽。在优选的实施方案中，同源寡肽包含10个氨基酸的聚缬氨酸、聚丙氨酸和聚甘氨酸六聚体。
术语“肽”的含义被定义为两个或更多个氨基酸通过一个的羧基与另一个的氨基连接的小蛋白质。因此，在基本水平上，任何类型的肽合成都包括彼此添加氨基酸或肽分子或向现有的肽链中添加氨基酸或肽分子的重复步骤。术语“肽”通常具有约2至约100个氨基酸，而多肽或蛋白质具有约100个或更多个氨基酸，直至可自基因翻译的全长序列。另外，如本文所用，肽可以是多肽或蛋白质的子序列或部分。在某些实施方案中，肽由4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基组成。在优选的实施方案中，肽的长度在约30至约100个氨基酸之间。在一些实施方案中，肽的长度在约40至约100个氨基酸之间。
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指当施用于受试者(优选人受试者)时是生理上可耐受的并且通常不产生过敏或类似的不良反应的组合物。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的管理机构批准或在美国药典或其它公认的药典中列出用于动物，更具体地说用于人。
如本文所用，术语“前药”旨在涵盖在生理条件下转化成本公开的治疗活性生物制剂的治疗性生物制剂。制备前药的常用方法是包括一个或多个在生理条件下水解以展现所需分子的选定部分。在其它实施方案中，通过宿主动物的酶活性转化前药。例如，酯或碳酸酯(例如，醇或羧酸的酯或碳酸酯)是本公开的优选前药。在某些实施方案中，上述组合物中的一些或所有分子可以用相应的合适前药替代，例如其中母体分子中的羟基以酯或碳酸酯形式存在，或者母体治疗性生物制剂中存在的羧酸以酯的形式存在。
术语“蛋白质”的含义定义为由约20种不同氨基酸构建的线型聚合物。蛋白质中氨基酸的类型和序列由产生它们的DNA确定。在某些实施方案中，序列可以是天然的和非天然的。氨基酸的序列决定蛋白质的整体结构和功能。在一些实施方案中，蛋白质可含有50个或更多个残基。在优选的实施方案中，蛋白质的长度可含有超过约101个残基。蛋白质的净电荷可由两个因素决定：1)酸性氨基酸对比碱性氨基酸的总计数；和2)暴露正或负残基的特定溶剂pH环境。如本文所用，“带净正电荷或净负电荷的蛋白质”是在非变性pH环境下具有净正电荷或净负电荷的蛋白质。一般而言，本领域技术人员将会认识到，所有的蛋白质不管它们的氨基酸组成如何，取决于它们的pH和/或溶剂环境，都可以被认为是“带净负电荷的蛋白质”。例如，根据溶剂pH，不同的溶剂可暴露负侧链或正侧链。蛋白质或肽优选地选自任何类型的酶或抗体或其显示出与相应的酶或抗体基本上相同的活性的片段。蛋白质或肽可作为结构性物质(例如角蛋白)、作为酶、作为激素、作为转运蛋白(例如血红蛋白)、作为抗体或作为基因表达的调节剂。蛋白质或肽是细胞、组织和器官的结构、功能和调节所需的。
如本文所用的术语“基本上”是指大多数或大部分，如至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％、99.99％或至少约99.999％或更多。
要理解的是，所公开的方法或过程中的步骤的具体顺序或层次是示例性方法的说明。基于设计偏好，要理解的是，可以重新安排方法或过程中的步骤的具体顺序或层次。一些步骤可以同时进行。所附方法权利要求以样品顺序呈现各步骤的要素，并不旨在限于所呈现的具体层次或顺序。诸如“实施方案”的短语并不意味着这种实施方案适用于主题技术的所有配置。与实施方案有关的公开内容可适用于所有实施方案或者一个或多个实施方案。诸如实施方案的短语可以指一个或多个实施方案，反之亦然。
颗粒
除另有定义外，本文使用的所有技术术语、符号及其它科学术语旨在具有本公开所属领域的技术人员通常所理解的含义。在一些情况下，为清楚起见和/或便于参考，本文定义了具有通常所理解的含义的术语，并且在本文中包括这类定义不一定应当被解释为表示与本领域中通常所理解的内容相比有实质性差异。本文描述或引用的技术和程序通常是本领域技术人员采用常规方法充分理解和普遍采用的。在适当情况下，除另指出外，涉及使用市售试剂盒和试剂的程序通常按照制造商限定的方案和/或参数进行。
在一些方面，本公开涉及包含剂的颗粒，其中颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
术语“颗粒”(particle/particles)或“微颗粒”(microparticle/microparticles)在本文中最广泛的意义上可互换使用，是指一个或多个离散体。本文所述的颗粒是圆形、球状的，并且具有受控的分散度，其特征尺寸从亚微米到几十微米，这与例如通常在常规冻干期间产生的多孔整体“饼”形成了对照。这种形态允许粉末不经后处理而可流动(如通过低豪斯纳(Hausner)比率所描述)。在一些实施方案中，术语“颗粒”是指一定量的一种或多种剂，其与液滴相比呈基本上是固体的物质状态或者呈凝胶形式。在其它实施方案中，颗粒可包括芯和壳，其中壳可被视为包封剂。还在其它实施方案中，颗粒不包括壳，在这种情况下，颗粒完全由芯组成。术语“原颗粒”是指颗粒形成的阶段，其中构成颗粒的一种或多种组分呈至少部分干燥的状态。原颗粒的总液体含量小于液滴的总液体含量，且大于形成的颗粒的总液体含量。类似地，溶质的平均浓度高于液滴的浓度，但通常低于形成的颗粒的浓度。术语“包封剂”是指可以在颗粒芯周围干燥或胶凝以形成壳的物质。
如本文所公开，剂可以是治疗剂或诊断剂。在一些实施方案中，剂不是诊断或治疗剂。在其它实施方案中，剂可以是金属或其它元素、二氧化硅、二氧化钛、金属盐、金属氧化物、金属氮化物、金属硫化物、金属醇盐、聚合物或其组合。示例性的治疗剂或诊断剂包括但不限于核酸、寡核苷酸、抗体或其片段、氨基酸、肽、蛋白质、细胞、细菌、基因治疗剂、基因组工程治疗剂、表观基因组工程治疗剂、碳水化合物、化学药物、造影剂、磁性颗粒、聚合物珠、金属纳米颗粒、金属微颗粒、量子点、抗氧化剂、抗生素剂、激素、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、类固醇、镇痛剂、局部麻醉剂、抗炎剂、抗微生物剂、化疗剂、外来体、外膜囊泡、疫苗、病毒、噬菌体、佐剂、维生素、矿物质、细胞器或其组合。在优选的实施方案中，治疗剂是治疗性生物制剂。治疗和诊断剂可具有约20至约200kDa的分子量，例如约40至约150kDa或约50至约100kDa。表1提供了治疗和诊断剂的列表以及药物组合物中一般类别的化合物的典型浓度范围。
表1
Figure BDA0003192505500000121
在其它实施方案中，颗粒可包括但不限于剂，如二氧化硅、二氧化钛、金属或其它元素、金属盐、金属氧化物、金属氮化物、金属硫化物、金属醇盐和/或聚合物。如本文所述的方法可提供溶胶-凝胶合成的替代方案，并且可提供用于不同系列应用的颗粒，包括半导体颗粒(例如，硫化铅)、表面等离振子共振(例如，金)、磁性(例如，氧化铁)、UV阻挡(例如，氧化锌)、成像剂(例如，硅)或激光应用(例如，聚(甲基丙烯酸甲酯)和二氧化硅混合物)。
治疗性生物制剂也称为生物医疗产品或生物药品，是按生物来源制造、从生物来源中提取或由生物来源半合成的任何药物产品。治疗性生物制剂可包括范围广泛的产品，如疫苗、血液和血液成分、过敏原、体细胞、基因疗法、组织和重组治疗性蛋白质。在一些实施方案中，生物制剂可由糖、蛋白质或核酸或这些物质的复杂组合组成，或者可以是活的实体，如细胞和组织。生物制剂可分离自多种天然来源，例如人、动物或微生物，并且可通过生物技术方法或其它技术产生。例如，基于基因的生物制剂和细胞生物制剂通常用于治疗没有其它治疗方法可用的多种医学病状。在本公开的优选实施方案中，治疗性生物制剂是抗体。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”在最广泛的意义上可互换使用，并且包括单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体和多特异性抗体，而不管它们是如何产生的(即，采用免疫、重组、合成方法)。抗体可以是见于脊椎动物的血液或其它体液中的丙种球蛋白蛋白质，其在免疫系统中的作用是结合抗原，从而识别和/或中和外物。抗体可分为不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，它们的重链分别命名为α、δ、ε、γ和μ。γ类基于序列和功能的差异进一步分成亚类，例如人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。在本公开的某些实施方案中，IgG抗体是IgG1抗体。在本公开的优选实施方案中，IgG1抗体是单克隆IgG1抗体。来自任何脊椎动物物种的L链可基于它们的恒定结构域的氨基酸序列归属于两种明显不同的类型之一，例如κ和λ。
公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及种种免疫球蛋白可变区基因。在一些实施方案中，轻链被分类为κ或λ。在其它实施方案中，重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，它们又分别定义免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在本公开的优选实施方案中，抗体是IgG抗体。
示例性抗体(免疫球蛋白)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条“轻”链(约sss25 kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N末端限定了主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。术语“可变轻”链、结构域、区和组分可互换使用，缩写为“VL”或“VL”，并且是指抗体或抗体片段的轻链。类似地，术语“可变重”链、结构域、区和组分可互换使用，缩写为“VH”或“VH”，并且是指抗体或抗体片段的重链。抗体通常是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。每条L链通过一个共价二硫键与H链连接。取决于H链同种型，两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接。每条H和L链还具有规则间隔的链内二硫桥。H和L链限定特定的Ig结构域。特别是，每条H链在N末端具有可变结构域(VH)，接着是α和γ链每一者的三个恒定结构域(CH)以及p和c同种型的四个CH结构域。每条L链在N末端具有可变结构域(VL)，接着是在其另一端的恒定结构域(CL)。VL与VH对齐，且CL与重链(CHL)的第一恒定结构域对齐。恒定结构域包括Fc部分，该部分包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能如ADCC由Fc区中的序列决定，Fc区也是由见于某些类型的细胞上的Fc受体(FcR)识别的部分。
如本文所公开，VH和VL配对在一起形成“可变区”或“可变结构域”，包括抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。V结构域含有“抗原结合位点”，其影响抗原结合，并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。V区跨越约110个氨基酸残基，并且由被称为框架区(FR)(通常约4个)的15-30个氨基酸的相对不变的延伸段组成，它们由被称为“高变区”(通常约3个)的极端可变性的较短区域分隔，每个区域通常为9-12个氨基酸长。FR主要采取p-片状构型，并且高变区形成环，所述环连接p-片状结构，并且在一些情况下形成p-片状结构的一部分。在某些实施方案中，“高变区”是指抗体可变结构域的序列高变和/或形成结构上限定的环的区域。一般地，抗体包含六个高变区；VH中三个(H1、H2、H3)，且VL中三个(L1、L2、L3)。“框架”或“FR”残基是除本文定义的高变区残基之外的那些可变结构域残基。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指基本上完整形式的抗体，而不是如上文所定义的抗体片段。该术语特别是指具有含Fc区的重链的抗体。全长抗体可以是天然序列抗体或抗体变体。在某些实施方案中，“完整”或“全”抗体是包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
如本文所公开，“包括可变结构域的全抗体片段”包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体、单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。“Fab片段”由整个L链连同H链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CHI)组成。就抗原结合而言，每个Fab片段是单价的，即其具有单个抗原结合位点。“Fab’片段”与Fab片段的不同之处在于在CHI结构域的羧基末端具有另外几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中对其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离硫醇基团的Fab’的名称。“F(ab’)2片段”大致对应于具有二价抗原结合活性并且仍然能够交联抗原的两个二硫键连接的Fab片段。“Fv”是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密、非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)种类中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可以以类似于双链Fv种类中的“二聚体”结构缔合。由这两个结构域的折叠产生六个高变环(H和L链各3个环)，它们为抗原结合贡献氨基酸残基，并且对抗体赋予抗原结合特异性。“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接形成单个多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。在优选的实施方案中，scFv多肽还包含在VH与VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。在一些实施方案中，“单个可变结构域”是具有识别和结合抗原的能力的Fv的一半(仅包含三个对抗原特异性的CDR)，尽管亲和力低于完整结合位点。
在一些实施方案中，“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，所述片段包含与同一多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过构建在VH与VL结构域之间具有短接头(约5-10个残基)的sFv片段来制备小抗体片段，从而实现V结构域的链间配对而非链内配对，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。在其它实施方案中，双抗体可以是二价的或双特异性的。在某些实施方案中，双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。三抗体和四抗体也是本领域中通常已知的。
如本文所述的抗体的“抗原结合片段”仅包含完整抗体的一部分，通常包括完整抗体的抗原结合位点，并因此保持结合抗原的能力。本定义涵盖的抗体片段的示例性实例包括但不限于：(i)具有VL、CL、VH和CH1结构域的Fab片段；(ii)Fab’片段，其是在CH1结构域的C末端具有一个或多个半胱氨酸残基的Fab片段；(iii)具有VH和CH1结构域的Fd片段；(iv)具有VH和CH1结构域以及在CH1结构域的C末端的一个或多个半胱氨酸残基的Fd’片段；(v)具有抗体的单臂的VL和VH结构域的Fv片段；(vi)由VH结构域组成的dAb片段；(vii)分离的CDR区；(viii)F(ab’)2片段，其为包括在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab’片段的二价片段；(ix)单链抗体分子(例如单链Fv；scFv)；(x)具有两个抗原结合位点的“双抗体”，其包含与同一多肽链中的轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)；(xi)“线性抗体”，其包含一对串联Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，它们与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区。在一些实施方案中，“抗原结合位点”通常是指包括对V结构域赋予抗原结合功能所需的至少高变区和框架区的分子。在本文所述的方法中，抗原结合位点可呈抗体或抗体片段(如dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2或scFv)的形式。
在一些实施方案中，术语“单链Fv”或“scFv”或“单链”抗体可以指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链中。一般地，Fv多肽还包含VH与VL结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成用于抗原结合的所需结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun，THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指由基本上同质的抗体群体获得的抗体，即除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变之外，构成群体的个体抗体是相同的。单克隆抗体(mAb)是高度特异性的，是针对抗原上的单个抗原位点或决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们的合成可以不被其它抗体污染。可以通过杂交瘤方法制备单克隆抗体。也可以采用分子工程技术自噬菌体抗体文库分离单克隆抗体。本公开的单克隆抗体可通过重组DNA方法产生，并且有时被称为“重组抗体”或“重组单克隆抗体”，如本文所述。在一些实施方案中，单克隆抗体是单一种类的抗体，其中每个抗体分子识别相同的表位，因为所有产生抗体的细胞均来源于单一B淋巴细胞细胞系。产生单克隆抗体(mAb)的方法的开始路线通常与制备多克隆抗体相同。在其它实施方案中，在产生单克隆抗体中使用啮齿动物，如小鼠和大鼠。在某些实施方案中，在产生单克隆抗体中使用兔、绵羊或蛙细胞。使用大鼠是熟知的，并且可以提供某些优点。常规上使用小鼠(例如，BALB/c小鼠)，并且通常给出高百分比的稳定融合体。还在本公开的其它实施方案中，抗体是单克隆抗体。在本公开的优选实施方案中，IgG抗体是单克隆的。
在其它实施方案中，可采用本领域中熟知的技术自噬菌体抗体文库分离重组抗体片段。参见例如Clackson等人，1991,Nature 352:624-628；Marks等人，1991,J.Mol.Biol.222:581-597。重组抗体片段可来源于通过在细菌中重组产生的大噬菌体抗体文库(Sblattero和Bradbury，2000,Nature Biotechnology 18:75-80；并且如本文所述)。采用本领域中已知的方法，编码抗体片段(即，scFv)的VH和VL组分的多核苷酸可用于产生重组全长免疫球蛋白(参见例如Persic等人，1997,Gene 187:9-18)。
“分离的抗体”是已经从其预先存在的环境的组分中确认、分离和/或回收的抗体。污染物组分是会干扰抗体的治疗用途的物质，并且可包括酶、激素及其它蛋白质或非蛋白质溶质。
如本文所用，“人抗体”是指具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体。人抗体可采用本领域中已知的各种技术(包括噬菌体展示文库)产生。可通过对转基因动物施用抗原来制备人抗体，所述转基因动物已经被修饰以响应抗原攻击而产生这类抗体，但其内源基因座已经失效。非人(例如，啮齿动物)抗体的“人源化”形式是含有来源于非人抗体的最小序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的高变区的残基被来自具有所需抗体特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的高变区的残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人残基取代。此外，人源化抗体可包含不见于受体抗体或供体抗体中的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个(且通常是两个)可变结构域，其中所有或基本上所有的高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有或基本上所有的FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。
“亲和力成熟”抗体是在其一个或多个高变区中具有一个或多个改变的抗体，与不具有这些改变的亲本抗体相比，所述改变导致抗体对抗原的亲和力提高。在一些实施方案中，亲和力成熟抗体对靶抗原可具有微摩尔的亲和力。在其它实施方案中，亲和力成熟抗体对靶抗原可具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。通过本领域中已知的程序产生亲和力成熟抗体。
“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物活性的抗体。在一些实施方案中，阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物活性。如本文所用的“激动剂抗体”是模拟所关注的多肽的至少一种功能活性的抗体。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除另指出外，如本文所用，“结合亲和力”是指固有的结合亲和力，其反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可由解离常数(Kd)表示。亲和力可通过本领域中已知的常用方法(包括本文所述的方法)测量。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原，并且倾向于容易解离，而高亲和力抗体通常较快地结合抗原，并且倾向于更长时间地保持结合。测量结合亲和力的多种方法是本领域中已知的，其中的任何一种都可用于本公开的目的。“表位”通常是指抗原的被抗体的抗原结合位点结合的部分。在一些实施方案中，就形成抗原结合位点的抗体CDR的高变环与如一级蛋白质结构中的氨基酸的序列结合的意义而言，表位可以是“线性的”。在其它实施方案中，表位是“构象表位”，即其中CDR的高变环与存在于三级或四级蛋白质结构中的残基结合的表位。
在任何前述物质组合物和方法的一些实施方案中，治疗性生物制剂是抗体。在其它实施方案中，抗体包括但不限于3F8、阿巴伏单抗、阿巴西普、阿昔单抗、阿比妥珠单抗、阿泽奇单抗(Abrezekimab)、阿布鲁单抗(Abrilumab)、阿西莫单抗(Acritumomab)、阿妥苏单抗(Actoxumab)、阿比妥珠单抗、阿达木单抗-adbm、阿达木单抗-atto、阿达木单抗-bwwb、阿德木单抗、Ado-曲妥珠单抗美坦辛、阿杜卡奴单抗、阿非西维单抗(Afasevikumab)、阿非莫单抗、阿柏西普、阿夫土珠单抗、培阿赛珠单抗、ALD518、阿法西普、阿仑单抗、阿利库单抗、三胺五乙酸阿妥莫单抗、阿麦妥昔单抗(Amatuximab)、马安那莫单抗(Anatumomabmafenatox)、安德西昔单(Andecaliximab)、雷星-阿奈妥单抗(Anetumab ravtansine)、阿尼弗洛单抗(Anifrolumab)、安芦珠单抗(Anrukinzumab)、阿泊珠单抗(Apolizumab)、Aprutumab ixadotin、阿西莫单抗、阿斯库昔单抗(Ascrinvacumab)、阿塞珠单抗、阿特珠单抗、Atidortoxumab、阿替努单抗(Atinumab)、阿特立单抗(Atlizumab)、阿托木单抗(Atorolimumab)、阿维鲁单抗(Avelumab)、维汀阿妥昔珠单抗(Azintuxizumab vedotin)、巴匹珠单抗(Bapineuzumab)、巴利昔单抗、巴维昔单抗(Bavituximab)、BCD-100、贝妥莫单抗、贝戈洛单抗(Begelomab)、贝兰他单抗莫福汀(Belantamab mafodotin)、贝拉西普、贝利木单抗、贝马妥珠单抗(Bemarituzumab)、贝那利珠单抗(Benralizumab)、Bermekimab、伯萨利单抗(Bersanlimab)、柏替木单抗、贝索单抗、贝伐珠单抗、贝伐珠单抗-awwb、贝佐洛单抗(Bezlotoxumab)、比西单抗、双马单抗(Bimagrumab)、贝美珠单抗(Bimekizumab)、泊特埃单抗(Birtamimab)、比伐珠单抗美登素(Bivatuzumab 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emtansine)、纳妥单抗(Narnatumab)、那他珠单抗、纳维昔单抗(Navicixizumab)、那韦伏单抗(Navivumab)、纳西达单抗(Naxitamab)、奈巴库单抗、耐昔妥珠单抗、奈莫利珠单抗(Nemolizumab)、NEOD001、奈瑞莫单抗(Nerelimomab)、奈西伐单抗(Nesvacumab)、尼塔奇单抗(Netakimab)、尼妥珠单抗、尼塞韦单抗(Nirsevimab)、纳武利尤单抗、巯诺莫单抗(Nofetumomabmerpentan)、奥比妥昔单抗(Obiltoxaximab)、奥比妥珠单抗(Obinutuzumab)、奥卡伦单抗(Ocaratuzumab)、奥克里昔单抗(Ocrelizumab)、奥度莫单抗、奥法木单抗、奥拉他单抗(Olaratumab)、奥来鲁单抗(Oleclumab)、奥仑达利珠单抗(Olendalizumab)、奥洛吉珠单抗(Olokizumab)、奥马珠单抗、Omburtamab、OMS721、阿那妥单抗(Onartuzumab)、恩妥昔单抗(Ontuxizumab)、奥瓦利单抗(Onvatilimab)、奥匹努单抗(Opicinumab)、莫奥珠单抗(Oportuzumab monatox)、奥戈伏单抗、奥替单抗(Orticumab)、奥利昔珠单抗(Otelixizumab)、奥替利(Otilimab)、奥特勒土珠单抗(Otlertuzumab)、欧西鲁单抗(Oxelumab)、奥扎尼珠单抗、奥左拉珠单抗(Ozoralizumab)、帕吉昔单抗、帕利珠单抗、帕莫乐单抗(Pamrevlumab)、帕尼单抗、潘可单抗(Pankomab)、潘诺巴库单抗(Panobacumab)、帕色妥珠单抗(Parsatuzumab)、帕斯卡丽珠单抗(Pascolizumab)、帕束妥昔珠单抗(Pasotuxizumab)、帕特克丽珠单抗(Pateclizumab)、帕特妥单抗(Patritumab)、PDR001、培非格司亭-jmdb、派姆单抗(Pembrolizumab)、培马单抗(Pemtumomab)、派拉克珠单抗(Perakizumab)、帕妥珠单抗、培克珠单抗、匹地利珠单抗(Pidilizumab)、维汀匹那妥珠单抗(Pinatuzumab 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vedotin)、萨皮利珠单抗(Sapelizumab)、萨里单抗(Sarilumab)、萨曲利珠单抗(SA237)、沙妥莫单抗喷地肽、苏金单抗、塞立路单抗(Selicrelumab)、塞里班妥单抗(Seribantumab)、塞托昔单抗(Setoxaximab)、塞曲苏单抗、司韦单抗、西罗珠单抗(Sibrotuzumab)、SGN-CD19A、SGN-CD33A、SHP647、西法木单抗、司妥昔单抗、辛图珠单抗(Simtuzumab)、西利珠单抗(Siplizumab)、维汀司曲妥单抗(Sirtratumab vedotin)、思鲁库单抗(Sirukumab)、维汀索菲妥珠单抗(Sofituzumabvedotin)、索拉珠单抗、索利托单抗(Solitomab)、索尼普西珠单抗(Sonepcizumab)、索土珠单抗、斯帕塔利单抗(Spartalizumab)、司他莫单抗(Stamulumab)、硫索单抗、苏塔韦单抗(Suptavumab)、苏替利单抗(Sutimlimab)、苏珠单抗(Suvizumab)、苏拉妥单抗(Suvratoxumab)、他布鲁单抗(Tabalumab)、替他珠单抗(Tacatuzumab tetraxetan)、他度珠单抗、他拉可妥珠单抗(Talacotuzumab)、他利珠单抗、他木弗单抗(Tamtuvetmab)、他尼珠单抗(Tanezumab)、帕他莫单抗(Taplitumomab paptox)、他瑞妥单抗(Tarextumab)、他韦利单抗(Tavolimab)、特非珠单抗(Tefibazumab)、阿替莫单抗、维汀特利索妥珠单抗(Telisotuzumab vedotin)、泰纳莫单抗(Tenatumomab)、替奈昔单抗(Teneliximab)、替利珠单抗(Teplizumab)、替泊地塔单抗(Tepoditamab)、泰普洛单抗(Teprotumumab)、特斯多鲁单抗(Tesidolumab)、特土洛单抗(Tetulomab)、特泽派单抗(Tezepelumab)、TGN1412、替布利珠单抗(Tibulizumab)、替西木单抗(Ticilimumab)、替卓珠单抗(Tildrakizumab)、替加珠单抗(Tigatuzumab)、替米古妥珠单抗(Timigutuzumab)、替莫单抗(Timolumab)、替古妥单抗(Tiragotumab)、替雷利珠单抗(Tislelizumab)、维汀替索图单抗(Tisotumabvedotin)、TNX-650、托珠单抗、托木妥昔单抗(Tomuzotuximab)、托利珠单抗(Toralizumab)、托萨妥单抗(Tosatoxumab)、托西莫单抗、托维突单抗(Tovetumab)、塔罗金单抗(Tralokinumab)、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-anns、曲妥珠单抗-dkst、曲妥珠单抗美坦辛、曲加利珠单抗(Tregalizumab)、曲美木单抗(Tremelimumab)、特里沃单抗(Trevogrumab)、西莫白介素单抗(Tucotuzumab celmoleukin)、妥韦单抗、乌妥昔单抗(Ublituximab)、尤洛库单抗(Ulocuplumab)、乌瑞鲁单抗(Urelumab)、乌珠单抗(Urtoxazumab)、优特克单抗、乌图木单抗(Utomilumab)、瓦他妥昔单抗他利林(Vadastuximab talirine)、瓦纳利单抗(Vanalimab)、维汀瓦多妥珠单抗(Vandortuzumabvedotin)、瓦替克土单抗(Vantictumab)、瓦努西珠单抗(Vanucizumab)、伐利昔单抗、瓦萨库单抗(Varisacumab)、瓦里木单抗(Varlilumab)、维特立珠单抗(Vatelizumab)、维多珠单抗(Vedolizumab)、维托珠单抗(Veltuzumab)、维帕莫单抗(Vepalimomab)、韦森库单抗(Vesencumab)、维西珠单抗(Visilizumab)、沃巴丽珠单抗(vobarilizumab)、沃洛昔单抗(Volociximab)、沃乐利珠单抗(Vonlerolizumab)、沃特利单抗(Vopratelimab)、沃斯妥珠单抗马佛多汀(Vorsetuzumab mafodotin)、伏妥莫单抗(Votumumab)、辛托珠单抗(Xentuzumab)、XMAB-5574、扎鲁姆单抗(Zalutumumab)、扎木单抗(Zanolimumab)、扎土西单抗(Zatuximab)、森库妥珠单抗(Zenocutuzumab)、齐拉木单抗(Ziralimumab)、佐贝妥昔单抗(IMAB362,克劳迪单抗)、Ziv-阿柏西普或阿佐莫单抗。
在任何前述物质组合物和方法的其它实施方案中，抗体是单克隆的。在某些实施方案中，单克隆抗体包括但不仅限于3F8、8H9、阿巴西普、阿巴伏单抗、阿昔单抗、阿比妥珠单抗、阿达木单抗-adbm、阿达木单抗-atto、阿达木单抗-bwwb、阿布鲁单抗、阿妥苏单抗、阿比妥珠单抗、阿泽奇单抗、阿布鲁单抗、阿妥苏单抗、阿达木单抗、阿德木单抗、Ado-曲妥珠单抗美坦辛、阿杜卡奴单抗、阿非西维单抗、阿非莫单抗,阿柏西普、阿夫土珠、培阿赛珠单抗、ALD518、阿法西普、阿仑单抗、阿利库单抗、三胺五乙酸阿妥莫单抗、阿麦妥昔单抗、马安那莫单抗、安德西昔单、雷星-阿奈妥单抗、阿尼弗洛单抗、安芦珠单抗(IMA-638)阿泊珠单抗、阿西莫单抗、阿斯库昔单抗、阿塞珠单抗、阿特珠单抗、Atidortoxumab、阿替努单抗、阿特立单抗(托珠单抗)、阿托木单抗、阿维鲁单抗、巴匹珠单抗、巴利昔单抗、贝伐珠单抗、贝伐珠单抗-awwb、BCD-100、贝妥莫单抗、贝戈洛单抗、贝拉西普、贝利木单抗、贝马妥珠单抗、贝那利珠单抗、Bermekimab、伯萨利单抗、柏替木单抗、贝索单抗、贝佐洛单抗、比西单抗、双马单抗、贝美珠单抗、泊特埃单抗、比伐珠单抗美登素、布来鲁单抗、博纳吐单抗、布隆妥维单抗、布索组单抗、博科齐单抗、布拉兹库单抗、本妥昔单抗瑞他汀、布里亚明单抗、溴达拉单抗、布洛赛珠单抗、博尼替妥珠单抗、布罗舒单抗、卡比拉单抗、卡瑞利珠单抗、卡那单抗、坎妥珠单抗美登素、坎妥珠单抗瑞伐坦、卡普赛珠单抗、卡罗单抗喷地肽、卡伦单抗、卡罗妥昔单抗、卡妥索单抗、西利珠单抗、西米普利单、赛妥珠单抗、西曲单抗、西妥昔单抗、赛必妥单抗、Cirmtuzumab、Ch.14.18、泊西他珠单抗、西妥木单抗、克拉扎珠单抗、克立昔单抗、克立瓦妥珠单抗特他坦、钴妥珠单抗、Cofetuzumab pelidotin、考土昔单抗瑞伐坦、康妥单抗、康昔单抗、考韦昔单抗、克伦单抗、CR6261、立赞利珠单抗、克洛特单抗、Cusatuzumab、达西珠单抗、达克珠单抗、达洛珠单抗、达比洛利珠单抗、Daratumuma、德克特单抗、登西珠单抗、地尼白介素、狄宁妥珠单抗、狄诺塞单抗、德尔罗妥单抗生物素、地莫单抗、迪扎米珠单抗、地努图希单抗、地利达莫单抗、多古珠单抗、阿托度莫单抗、多塔利单抗、曲齐妥单抗、杜里土单抗、度匹鲁单抗、度伐利尤单抗、度斯吉妥单抗、度妥昔珠单抗、依美昔单抗、依库丽单抗、埃巴单抗、依决洛单抗、依法珠单抗、依芬古单抗、依德鲁单抗、Elezanumab、埃格曼图姆单抗、埃罗妥珠单抗、艾西莫单抗、艾马珠单抗、依米妥珠单抗、艾美赛珠单抗、恩伐珠单抗、维汀恩福妥单抗、培恩莫单抗、恩比利珠单抗、依诺珠单抗、依诺替单抗、恩师妥昔单抗、西依匹莫单抗、阿法依泊汀、阿法依泊汀-epbx、依帕珠单抗、依普奈珠单抗、埃仑单抗、厄利珠单抗、厄马索单抗、依那西普、依那西普-szzs、埃达珠单抗、Etigilimab、依曲利珠单抗、依伐单抗、依伏库单抗、艾韦单抗、因子VIII Fc融合蛋白、因子IX Fc融合蛋白、法索单抗、法拉莫单抗、Faricimab、法鲁珠单抗、法辛单抗、FBTA05、泛维珠单抗、费扎尼单抗、菲巴珠单抗、非卡妥珠单抗、菲妥木单抗、非格司亭、非格司亭-sndz、福利木单抗、法兰妥单抗、福利替单抗、氟替珠单抗、芬特妥珠单抗、福拉木单抗、福韦单抗、弗瑞曼珠单抗、弗雷莫单抗、弗洛西单抗、夫卢维单抗、富拉单抗、伏妥昔单抗、加那珠单抗、加利昔单抗、加尼单抗、冈特莫单抗、加替普珠单抗、加维莫单抗、格迪伏单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、格伐克单抗、吉维单抗、瑾司鲁单抗、吉伦妥昔单抗、维汀格伦巴单抗、戈利木单抗、戈利木单抗、古苏兰单抗、古塞尔库姆单抗、伊巴珠单抗、IBI308、替伊莫单抗、伊鲁库单抗、伊达鲁单抗、伊波妥珠单抗、伊戈伏单抗、IMAB362、伊马单抗、依玛利单抗、英西单抗、伊马曲单抗、伊克拉单抗、吲妥昔单抗瑞伐坦、维汀英度妥单抗、依那利珠单抗、英利昔单抗、英利昔单抗-abda、英利昔单抗-dyyb、英利昔单抗-qbtx、英妥木单抗、伊诺莫单抗、英妥珠单抗奥佐米星、伊匹单抗、伊妥木单抗、伊沙妥昔单抗、Iscalimab、艾司妥单抗、伊托珠单抗、伊克珠单抗、凯利昔单抗、拉贝珠单抗、拉妥珠单抗、兰布利单抗、兰帕单抗、拉那利尤单抗、兰德珠单抗、拉韦昔单抗、利勃珠单抗、利马索单抗、棱德里珠单抗、Lenvervimab、仑齐鲁单抗、勒德利木单抗、莱罗单抗、来索伏单抗、来利珠单抗、来沙木单抗、利比韦卢单抗、维汀利伐妥珠单抗、利格珠单抗、利洛单抗-赛塔坦、林妥珠单抗、立鲁单抗、洛迪赛珠单抗、洛克韦单抗、洛伏妥珠单抗美登素、卢卡珠单抗、培戈-鲁利珠单抗、鲁昔单抗、鲁曲单抗、鲁替珠单抗、马帕木单抗、马格妥昔单抗、马斯塔昔单抗、马司莫单抗、马维里单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、美替木单抗、米拉珠单抗、明瑞莫单抗、米吉珠单抗、米维妥昔单抗-索拉素、米托单抗、莫多妥昔单抗、莫加单抗、莫纳利珠单抗、莫罗木单抗、Mosunetuzumab、莫它维珠单抗、帕西妥莫单抗、莫罗单抗-CD3、他那可单抗、纳霉单抗、埃托-那普妥莫单抗、纳妥单抗、那他珠单抗、纳维昔单抗、那韦伏单抗、纳西达单抗、奈巴库单抗、耐昔妥珠单抗、奈莫利珠单抗、NEOD001、奈瑞莫单抗、奈西伐单抗、尼塔奇单抗、尼妥珠单抗、尼塞韦单抗、纳武利尤单抗、巯诺莫单抗、奥比妥昔单抗、奥比妥珠单抗、奥卡伦单抗、奥克里昔单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗、奥拉他单抗、奥来鲁单抗、奥仑达利珠单抗、奥洛吉珠单抗、奥马珠单抗、Omburtamab、OMS721、阿那妥单抗、恩妥昔单抗、奥瓦利单抗、奥匹努单抗、莫奥珠单抗、奥戈伏单抗、奥替单抗、奥利昔珠单抗、奥替利、奥特勒土珠单抗、欧西鲁单抗、奥扎尼珠单抗、帕吉昔单抗、帕利珠单抗、帕莫乐单抗、帕尼单抗、潘可单抗、潘诺巴库单抗、帕色妥珠单抗、帕斯卡丽珠单抗、帕束妥昔珠单抗、帕特克丽珠单抗、帕特妥单抗、PDR001、培非格司亭-jmdb、派姆单抗、培马单抗、派拉克珠单抗、帕妥珠单抗、培克珠单抗、匹地利珠单抗、维汀匹那妥珠单抗、平妥莫单抗、普拉库鲁单抗、普罗扎立珠单抗、泊咖丽珠单抗、维汀波拉妥珠单抗、泊尼珠单抗、珀韦昔单抗、普拉辛珠单抗、普利扎丽珠单抗、普立昔单抗、普利托昔单抗、普托木单抗、PRO 140、奎丽珠单抗、特土洛单抗、雷克妥木单抗、雷德妥单抗、瑞非韦鲁单抗、拉潘西珠单抗、雷莫芦单抗、雷奈维单抗、兰尼单抗、瑞西巴库单抗、雷韦加利单抗、雷韦利珠单抗、瑞法珠单抗、瑞加韦单抗、瑞拉单抗、瑞妥鲁单抗、瑞利珠单抗、利纳西普、里乐木单抗、利诺库单抗、利散珠单抗-rzaa、利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs、利妥昔单抗-pvvr、罗妥木单抗、Rmab、洛乐杜单抗、洛米奇单抗、罗米司亭、罗姆珠单抗、罗塔里珠单抗、罗曼妥珠单抗、罗维珠单抗、罗诺利昔珠单抗、卢利珠单抗、赛果珠单抗戈维替康、萨马里珠单抗、萨里单抗、萨曲利珠单抗(SA237)、沙妥莫单抗喷地肽、苏金单抗、塞立路单抗、塞里班妥单抗、塞托昔单抗、塞曲苏单抗、司韦单抗、西罗珠单抗、SGN-CD19A、SGN-CD33A、SHP647、西法木单抗、司妥昔单抗、辛图珠单抗、西利珠单抗、思鲁库单抗、维汀索菲妥珠单抗、索拉珠单抗、索利托单抗、索尼普西珠单抗、索土珠单抗、斯帕塔利单抗、司他莫单抗、硫索单抗、苏塔韦单抗、苏替利单抗、苏珠单抗、苏拉妥单抗、他布鲁单抗、替他珠单抗、他度珠单抗、他拉可妥珠单抗、他利珠单抗、他木弗单抗、他尼珠单抗、帕他莫单抗、他瑞妥单抗、他韦利单抗、特非珠单抗、阿替莫单抗、泰纳莫单抗、替奈昔单抗、替利珠单抗、替泊地塔单抗、泰普洛单抗、特斯多鲁单抗、特土洛单抗(lilotomab)、特泽派单抗、TGN1412、替布利珠单抗、替西木单抗(曲美木单抗)、替卓珠单抗、替加珠单抗、替米古妥珠单抗、替莫单抗、替古妥单抗、替雷利珠单抗、TNX-650、托珠单抗(阿特立单抗)、托木妥昔单抗、托利珠单抗、托萨妥单抗、托西莫单抗、托维突单抗、塔罗金单抗、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-anns、曲妥珠单抗-dkst、曲妥珠单抗美坦辛、TRBS07、曲加利珠单抗、曲美木单抗、特里沃单抗、西莫白介素单抗、妥韦单抗、乌妥昔单抗、尤洛库单抗、乌瑞鲁单抗、乌珠单抗、优特克单抗、乌图木单抗、瓦纳利单抗、维汀瓦多妥珠单抗、瓦替克土单抗、瓦努西珠单抗、伐利昔单抗、瓦萨库单抗、瓦里木单抗、维特立珠单抗、维多珠单抗、维托珠单抗、维帕莫单抗、韦森库单抗、维西珠单抗、沃巴丽珠单抗、沃洛昔单抗、沃乐利珠单抗、沃特利单抗、沃斯妥珠单抗马佛多汀、伏妥莫单抗、辛托珠单抗、XMAB-5574、扎鲁姆单抗、扎木单抗、扎土西单抗、森库妥珠单抗、齐拉木单抗、佐贝妥昔单抗(IMAB362、克劳迪单抗)、Ziv-阿柏西普、阿佐莫单抗或来自人类患者的样品中的相应抗药物抗体。在优选的实施方案中，单克隆抗体是利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs或利妥昔单抗-pvvr
在一些实施方案中，单克隆抗体是生物类似物。在其它实施方案中，生物类似物包括但不限于阿达木单抗-adbm、阿达木单抗-atto、阿达木单抗-bwwb、贝伐珠单抗-awwb、阿法依泊汀-epbx、依那西普-szzs、英利昔单抗-abda、英利昔单抗-dyyb、英利昔单抗-qbtx、非格司亭-sndz、培非格司亭-jmdb、培非格司亭-bmez、利散珠单抗-rzaa、利妥昔单抗-abbs、利妥昔单抗-pvvr、曲妥珠单抗-anns或曲妥珠单抗-dkst。在某些实施方案中，活性生物类似物物质是阿达木单抗、贝伐珠单抗、依诺肝素钠、阿法依泊汀、泽塔依泊汀、依那西普、非格司亭、促卵泡素α、英利昔单抗、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、培非格司亭、利散珠单抗、利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs、利妥昔单抗-pvvr、促生长激素(Somatropin)、特立帕肽或曲妥珠单抗。在优选的实施方案中，生物类似物是利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs或利妥昔单抗-pvvr。
在其它实施方案中，靶向部分是来自完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、抗体片段、单链Fv(scFv)突变体、多特异性抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定簇部分的融合蛋白或包含抗原识别位点的其它修饰免疫球蛋白分子的抗体。
在一些实施方案中，治疗性生物制剂是免疫疗法。在其它实施方案中，免疫疗法是抗CD20抗体。在某些实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗。在某些其它实施方案中，治疗性生物制剂是抗CD20抗体。如本文所述，能够结合CD20抗原的任何抗体均可用于本公开的方法中。结合CD20抗原的抗体包括例如：C2B8(利妥昔单抗；RITUXAN.RTM.)(第5,736,137号美国专利，明确以引用的方式并入本文)；钇-[90]-标记的2138鼠抗体，命名为Y2B8(第5,736,137号美国专利，明确以引用的方式并入本文)；鼠IgG2a 131，任选用131 1标记以产生131 1-B1抗体(BEXXARTM.RTM.)(第5,595,721号美国专利，明确以引用的方式并入本文)；鼠单克隆抗体1F5(Press等人，Blood 69(2):584-591(1987))；嵌合2H7抗体(第5,677,180号美国专利，明确以引用的方式并入本文)；和单克隆抗体L27、G28-2、93-1 133、B--Cl或NU--B2，可得自International Leukocyte Typing Workshop(Valentine等人，于Leukocyte TypingIII(McMichael编，第440页，Oxford University Press(1987))。
在本公开的某些实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗。利妥昔单抗是基因工程化嵌合鼠/人单克隆抗体。利妥昔单抗是含有鼠轻链和重链可变区序列和人恒定区序列的IgG,κ免疫球蛋白。利妥昔单抗对CD20抗原的结合亲和力为大约8.0nM，并且可商购自例如Genentech(South San Francisco，Calif.)。
在一些实施方案中，治疗性生物制剂是免疫治疗剂。在其它实施方案中，免疫治疗剂是PD-1抑制剂如PD-1抗体、PD-L1抑制剂如PD-L1抗体、CTLA-4抑制剂如CTLA-4抗体、CSF-1R抑制剂、IDO抑制剂、A1腺苷抑制剂、A2A腺苷抑制剂、A2B腺苷抑制剂、A3A腺苷抑制剂、精氨酸酶抑制剂或HDAC抑制剂。还在其它实施方案中，免疫治疗剂是PD-1抑制剂(例如，纳武利尤单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、BMS 936559和MPDL328OA)。在一些实施方案中，免疫疗法是PD-L1抑制剂(例如，阿特珠单抗和MEDI4736)。在一些实施方案中，免疫治疗剂是CTLA-4抑制剂(例如，伊匹单抗)。在某些其它实施方案中，免疫治疗剂是CSF-1R抑制剂(例如，培西达替尼和AZD6495)。在某些实施方案中，免疫治疗剂是IDO抑制剂(例如，去甲哈尔满、迷迭香酸和α-甲基-色氨酸)。在一些实施方案中，免疫治疗剂是A1腺苷抑制剂(例如，8-环戊基-1,3-二甲基黄嘌呤、8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤、8-苯基-1,3-二丙基黄嘌呤、巴米茶碱、BG-9719、BG-9928、FK-453、FK-838、罗咯茶碱或N-0861)。在其它实施方案中，免疫治疗剂是A2A腺苷抑制剂(例如，ATL-4444、伊曲茶碱、MSX-3、瑞德南特、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、ST-1535、VER-6623、VER-6947、VER-7835、viadenant或ZM-241,385)。还在其它实施方案中，免疫治疗剂是A2B腺苷抑制剂(例如，ATL-801、CVT-6883、MRS-1706、MRS-1754、OSIP-339,391、PSB-603、PSB-0788或PSB-1115)。在某些其它实施方案中，免疫治疗剂是A3A腺苷抑制剂(例如，KF-26777、MRS-545、MRS-1191、MRS-1220、MRS-1334、MRS-1523、MRS-3777、MRE-3005-F20、MRE-3008-F20、PSB-11、OT-7999、VUF-5574和SSR161421)。在某些实施方案中，免疫治疗剂是精氨酸酶抑制剂(例如，精氨酸酶抗体、(2s)-(+)-氨基-5-碘乙酰氨基戊酸、NG-羟基-L-精氨酸、(2S)-(+)-氨基-6-碘乙酰氨基己酸或(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(哌啶-1-基)乙基)己酸。在一些实施方案中，免疫治疗剂是HDAC抑制剂(例如，丙戊酸、SAHA或罗米地辛)。在其它实施方案中，免疫治疗剂是toll样受体激活剂。还在其它实施方案中，免疫疗法是RIG-I样受体激活剂。在某些其它实施方案中，免疫治疗剂是干扰素基因刺激物(STING)途径激活剂。在某些实施方案中，免疫治疗剂是白介素-1受体激动剂，例如IL-R1拮抗剂。在一些实施方案中，免疫治疗剂是PTEN抑制剂，例如双过氧钒化合物。在其它实施方案中，免疫治疗剂是肿瘤坏死因子受体(TNFR)，例如TNFR-1或TNFR-2抑制剂。在某些实施方案中，免疫治疗剂是淋巴细胞激活基因3(LAG-3)抑制剂，例如GSK2831781。
在其它实施方案中，治疗性生物制剂是雷迪帕韦/索非布韦、甘精胰岛素、来那度胺、肺炎球菌13价缀合疫苗、氟替卡松/沙美特罗、埃替格韦/可比司他/恩曲他滨/替诺福韦艾拉酚胺、恩曲他滨、利匹韦林和替诺福韦艾拉酚胺、恩曲他滨/替诺福韦艾拉酚胺、格佐匹韦/艾尔巴韦、凝血因子VIIa重组体、阿法依泊汀、阿柏西普或依那西普。
在一些实施方案中，治疗剂或诊断剂是阿巴西普、阿波毒素A、半乳糖苷酶β、阿必鲁泰、阿地白介素、阿糖苷酶α、阿替普酶(cathflo活化酶)、阿那白滞素、Asfotase alfa、天冬酰胺酶、欧文氏菌绿原酸天冬酰胺酶、贝卡普勒明、贝拉西普、胶原酶、溶组织梭菌胶原酶、阿法达贝泊汀、地尼白介素、阿法链道酶、度拉糖肽、艾卡拉肽、依洛硫酸酯酶α、依那西普-szzs、非格司亭、非格司亭-sndz、加硫酶、羧肽酶、艾度硫酸酯酶、英可肉毒毒素A、干扰素α-2b、干扰素α-n3、干扰素β-1a、干扰素β-1b、干扰素γ-1b、拉罗尼酶、甲氧基聚乙二醇-依泊汀β、美曲普汀、奥克纤溶酶、奥那肉毒毒素A、奥普瑞白介素、帕利夫明、甲状旁腺激素、培门冬酶、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2a、与利巴韦林共包装的聚乙二醇干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b、聚乙二醇干扰素β-1a、培戈洛酶、拉布立酶、瑞替普酶、利纳西普、裂缝肉毒毒素B、罗米司亭、沙格司亭、塞贝脂酶α(Sebelipase alfa)、Tbo-非格司亭、替奈普酶或Ziv-阿柏西普。
在其它实施方案中，诊断剂是结核菌素纯化蛋白衍生物、促甲状腺素α、分泌素、可溶性转铁蛋白受体、肌钙蛋白、B型利钠肽、碘苄胍I 123、florbetapir F 18、全氟丙烷(perflutren)、钆特酸葡甲胺、氟比他班F 18、氟美他莫F 18、钆特酸葡甲胺、异硫蓝、瑞加德松、锝Tc 99m tilmanocep、氟比他班F 18、全氟丙烷、瑞加德松或氟美他莫F18。
颗粒中的治疗剂或诊断剂可具有每单位约0.5至约1.0的活性、每单位约0.75至约1.0活性或每单位约0.9至约1.0活性。活性是相对于颗粒形成之前的相同治疗剂或诊断剂测量的。在某些实施方案中，治疗剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。术语“活性”是指剂(例如，治疗剂或诊断剂)的功能或结构方面在两个时间点的比率。该比率的分母对应于在液滴形成之前即刻的进料溶液中的剂的功能或结构方面的量度。该比率的分子对应于在稍后的时间点(例如，在颗粒形成后即刻)的剂的功能或结构方面的相同量度。
在某些实施方案中，颗粒包括的治疗剂或诊断剂的负载量为约1至约100重量％，例如约50至约100重量％、约75至约100重量％、约90至约100重量％、约95至约100重量％、约99至约100重量％或约99.9至约100重量％。在这些负载量下，治疗剂或诊断剂在颗粒形成期间保持约0.5至约1.0的活性，例如约0.75至约1.0的活性、约0.9至约1.0的活性、约0.95至约1.0的活性、约0.99至约1.0的活性或约0.999至约1.0的活性。这包括通过初级干燥(即，利用第二液体的干燥)以及在一些情况下通过次级干燥保持的活性。
在一些实施方案中，颗粒具有小于约25％的内部空隙空间，例如小于约24％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的内部空隙空间。在某些实施方案中，颗粒可包括小于10％的内部空隙空间、小于5％的内部空隙空间、小于1％的内部空隙空间、小于0.1％的内部空隙空间或小于0.01％的内部空隙空间。在优选的实施方案中，颗粒基本上没有任何内部空隙空间。确定内部空隙空间的合适方法可通过采用聚焦离子束扫描电子显微镜法(FIB-SEM)来完成。例如，可使用以下公式来计算内部空隙空间：内部空隙空间＝Av/Ap，其中Av是空隙空间的总面积，且Ap是颗粒的总面积。
在其它实施方案中，颗粒可表现出约0至约50％的孔隙率，例如孔隙率为约0至约10％、约0至约5％、约0至约1％、约0至约0.5％、约0至约0.1％或约0至约0.01％。示例性孔径测量包括扫描电子显微镜法(SEM)、透射电子显微镜法(TEM)和共聚焦激光扫描显微镜分析。也可以通过氮吸附/解吸分析和BET吸附模型来研究多孔微球和纳米球的比表面积。在孔径足够大的某些实施方案中，可采用压汞孔隙率测定法。
根据本公开的颗粒是圆形的。圆形度可用作颗粒形状的指示。本文所述的颗粒可具有特征圆形度，例如具有基本上为圆形的相对形状。此特征基于颗粒的圆形度描述并限定其形式。当颗粒具有完全圆形的结构时，圆形度为1.0。如本文所述的颗粒可具有约0.8、0.9、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99；大于约0.80、大于约0.90或大于约0.95的圆形度。在一些实施方案中，颗粒的圆形度大于约0.88。在其它实施方案中，颗粒的圆形度大于约0.90。在某些实施方案中，颗粒的圆形度大于约0.93。在优选的实施方案中，颗粒的圆形度大于约0.97。可通过对在电子显微镜等或流动型颗粒图像分析仪下观察到的图像进行图像处理来确定颗粒的直径和圆形度。也可以通过对颗粒进行圆形度测量并对所得值取平均值来确定圆形度。例如，可以使用以下公式来计算圆形度(circ)：
Figure BDA0003192505500000361
如本文所用的术语“周长”是指闭合平面图的边界或二维图像的所有边界的总和。如本文所用，术语“面积”是指颗粒的二维图像的截面积。颗粒的圆形度也可以被描述为颗粒的最小直径与其最大直径的比率。对于完美的圆，该比率为1。可通过将圆形度乘以100来计算百分比圆形度。可例如通过使用适于处理图像(例如通过显微镜检查，特别是扫描电子显微镜检查(SEM)或透射电子显微镜检查(TEM)获得的图像)的任何软件测量纵横比来计算圆形度。在一些实施方案中，颗粒的圆形度为至少约10％，例如至少约20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或约100％。在其它实施方案中，颗粒的圆形度为至少约88％。在某些实施方案中，颗粒的圆形度为至少约90％。还在其它实施方案中，颗粒的圆形度为至少约93％。在优选的实施方案中，颗粒的圆形度为至少约97％。
在其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.10至约1.00，例如约0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在某些实施方案中，颗粒的圆形度为约0.88至约1.00。还在其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。在某些其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.93至约1.00。在优选的实施方案中，颗粒的圆形度为约0.97至约1.00。在一些实施方案中，测量颗粒圆形度的方法包括对颗粒的扫描电子显微照片进行图像分析，其中基于颗粒投影到图像平面上的截面形状来计算平均圆度。可以扩展这类圆度因子以确认相应的圆形度。
根据本公开的颗粒是球形的。颗粒的球形度系数是颗粒的最小直径与其最大直径的比率。对于完美球体，该比率为1。可通过使用适于处理图像(例如通过显微镜检查，特别是扫描电子显微镜检查(SEM)或透射电子显微镜检查(TEM)获得的图像)的任何软件测量纵横比来计算球形度系数。在一些实施方案中，颗粒的球形度为至少约50％，例如至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或约100％。在其它实施方案中，颗粒的球形度为约0.10至约1.00，例如约0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在优选的实施方案中，颗粒的球形度为约1.00。
在某些实施方案中，颗粒的球形度可在约0.10至约1.00的范围内，例如至少约0.20、约0.40、约0.60或约0.80至约1.00。在一些实施方案中，测量颗粒球形度的方法包括对颗粒的扫描电子显微照片进行图像分析，其中基于颗粒投影到图像平面上的截面形状来计算平均圆度。球形度(ψ)是物体圆度的量度。球形度是球体(其具有与被比较的颗粒相同的体积)的表面积与被测试的颗粒的表面的比率。可根据以下公式计算球形度：
Figure BDA0003192505500000371
其中Vp是球体的体积，且Ap是球体的表面积。如本文所用的术语“表面积”是指颗粒的外表面。
在其它实施方案中，可通过使用图像分析仪或用扫描电子显微镜(SEM)拍摄的电子显微镜照片来测定球形度(短轴/长轴)。例如，平均球形度可计算为通过基于视觉观察测定电子显微镜照片中随机选择的颗粒的短轴和长轴而计算的球形度值的平均值。
在本公开的一些实施方案中，可控制干燥操作以提供具有特定特征的颗粒，例如具有基本上平滑表面的颗粒。如本文所用的“表面粗糙度”意指具有许多皱纹或折缝的颗粒，例如脊状或起皱的。如本文所用的术语“凹坑”是指颗粒中的凹痕或裂缝，要么是二维图像中的凹陷或裂缝，要么是物体中的凹痕或裂缝。如本文所用的术语“刺突”是指从颗粒的质心指向外部的隆起、从二维图像的面心指向外部的隆起或从物体指向外部的尖锐隆起。
在本公开的优选实施方案中，如本文所述的颗粒具有平滑而不是嵴状或起皱的表面形态。颗粒的表面粗糙度可以通过控制形成如本文所述的颗粒的配方和/或工艺来降低。在某些实施方案中，可以选择干燥条件来控制颗粒形态，以便提高颗粒表面的平滑度。特别地，可以选择干燥条件以提供具有基本上平滑的表面的颗粒。在某些优选的实施方案中，颗粒具有基本上平滑的表面。本公开所属领域的普通技术人员采用常规和标准技术可以很容易地评估所公开的颗粒的表面形态。
在其它实施方案中，颗粒的直径在约0.1至约1000μm之间，例如约0.1至约900、800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、45、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3或约0.2μm。在某些实施方案中，颗粒的直径在约1至约100μm之间，例如约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50至约100μm。还在其它实施方案中，颗粒的直径在约4至约100μm之间。在某些其它实施方案中，颗粒的直径在约10至约100μm之间。在优选的实施方案中，颗粒的直径在约20至约50μm之间。在某些优选的实施方案中，有意地控制颗粒的直径。在一些实施方案中，颗粒的直径为约0.1至约1000μm，例如约1至约400μm、约1至约200μm、约1至约100μm、约1至约50μm、约1至约25μm、约1至约10μm、约10至约100μm、约50至约100μm、约50至约75μm或约75至约100μm。在其它实施方案中，颗粒的直径为约1至约100μm，例如约4至约100μm、约10至约100μm或约20至约50μm。
在某些实施方案中，颗粒的直径在约0.1至约100μm之间。在某些其它实施方案中，颗粒的直径在约0.5至约50μm之间。还在其它实施方案中，颗粒的直径在约20至约50μm之间。在某些优选的实施方案中，颗粒的直径在约1至约40μm之间。在优选的实施方案中，颗粒的直径在约2至约15μm之间。
在一些实施方案中，颗粒具有按质量计小于约10％，例如按质量计小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％的表面活性剂含量。在其它实施方案中，颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。在某些实施方案中，颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。还在其它实施方案中，颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。在某些其它实施方案中，颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。在一些实施方案中，颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。在优选的实施方案中，颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。在某些优选的实施方案中，颗粒基本上不含任何表面活性剂含量。
在其它实施方案中，颗粒的表面活性剂含量为0至10重量％，例如0至5重量％、0至3重量％、0至2重量％、0至1重量％、0至0.5重量％、0至0.2重量％、0至0.1重量％、0至0.01重量％或0至0.001重量％。测量表面活性剂含量的示例性方法包括在适当的介质(例如去离子水)中重构颗粒，并随后通过液相色谱法分析重构的溶液。色谱技术可包括使用带电气溶胶检测器(CAD)或蒸发光散射检测器(ELSD)。
在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、月桂醇聚醚硫酸钠、卵磷脂或其组合。在一些实施方案中，表面活性剂包括但不限于：(i)阳离子表面活性剂，如鲸蜡基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、双十八烷基二甲基溴化铵；(ii)阴离子表面活性剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、全氟辛烷磺酸盐、烷基醚磷酸盐；(iii)非离子表面活性剂，如烷基酚乙氧基化物(TritonX-100)、脂肪醇乙氧基化物、八乙二醇单十二烷基醚、椰油酰胺二乙醇胺、泊洛沙姆、单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇的脂肪酸酯(脱水山梨糖醇单月桂酸酯、吐温80、吐温20；和(iv)两性离子表面活性剂，如椰油酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱和3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)。在其它实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯或卵磷脂。在优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨酯20或聚山梨酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。还在其它实施方案中，表面活性剂是离子表面活性剂。
在其它实施方案中，颗粒表现出的骨架密度为约1.00至约6.00g/cm3，例如约1.00至约5.00g/cm3、约1.00至约3.00g/cm3、约1.00至约2.00g/cm3、约1.00至约1.50g/cm3、约1.30至约1.50g/cm3、约1.32至约1.50g/cm3或约1.10至约1.40g/cm3。在一些实施方案中，颗粒表现出的骨架密度为约0.10至约5.00g/cm3，例如约0.10至约2.50g/cm3、约0.10至约1.40g/cm3、约0.50至约1.40g/cm3或约1.00至约1.40g/cm3。在某些实施方案中，颗粒具有约0.09至约1.60g/cm3的骨架密度。还在其它实施方案中，颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。在优选的实施方案中，颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。骨架密度测量的示例性方法包括气体置换比重瓶测定法。
在某些实施方案中，颗粒具有约1000mg/mL至约1500mg/mL、约1050mg/mL至约1500mg/mL、约1100mg/mL至约1500mg/mL、约1150mg/mL至约1500mg/mL、约1200mg/mL至约1500mg/mL、约1250mg/mL至约1500mg/mL、约1300mg/mL至约1500mg/mL、约1310mg/mL至约1500mg/mL、约1320mg/mL至约1500mg/mL、约1330mg/mL至约1500mg/mL、约1340mg/mL至约1500mg/mL、约1350mg/mL至约1500mg/mL、约1360mg/mL至约1500mg/mL、约1370mg/mL至约1500mg/mL、约1380mg/mL至约1500mg/mL、约1390mg/mL至约1500mg/mL、约1400mg/mL至约1500mg/mL、约1410mg/mL至约1500mg/mL、约1420mg/mL至约1500mg/mL、约1430mg/mL至约1500mg/mL、约1440mg/mL至约1500mg/mL、约1450mg/mL至约1500mg/mL、约1460mg/mL至约1500mg/mL、约1470mg/mL至约1500mg/mL、约1480mg/mL至约1500mg/mL或约1490mg/mL至约1500mg/mL的骨架密度。
在一些实施方案中，颗粒的特征可在于玻璃化转变温度为约0℃至约250℃，例如约34℃至约200℃、约50℃至约200℃、约60℃至约200℃、约40至约160℃、约50至约110℃、约60至约100℃或约75至约80℃。如本文所用的术语“玻璃化转变”是指以比热容和模量的阶跃变化为特征的无定形材料的热力学转变。在高于玻璃化转变温度的温度下，分子迁移率增加，物理和化学变化的速率也增加。测定玻璃化转变温度的示例性分析方法包括差示扫描量热法和动态迁移率分析。在其它实施方案中，颗粒具有约40至约160℃的玻璃化转变温度。还在其它实施方案中，颗粒具有约50至约110℃的玻璃化转变温度。在某些实施方案中，颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。在优选的实施方案中，颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。
在某些实施方案中，颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。在某些其它实施方案中，颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。在某些优选的实施方案中，颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
在其它实施方案中，颗粒被加热到颗粒在干燥期间的玻璃化转变温度的约±30℃，例如约±20、±10、±5、±1℃。
在一些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。在某些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或其组合。
在其它实施方案中，碳水化合物可来自单糖、二糖、寡糖或多糖家族。在一些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖、淀粉、海藻酸盐、黄原胶、半乳甘露聚糖(galactomanin)、琼脂、琼脂糖或其组合。在某些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖、羟丙基β-环糊精或其组合。在优选的实施方案中，碳水化合物是海藻糖、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。基于葡萄糖单体的数目，环糊精可以三种不同的形式α、β和γ获得。α、β和γ环糊精中的葡萄糖单体的数目可以分别为6、7或8。
在一些实施方案中，pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸(glyclyglycine)、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。在其它实施方案中，pH调节剂是柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐、琥珀酸盐、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。在某些实施方案中，pH调节剂是盐酸或柠檬酸。
在其它实施方案中，盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。在优选的实施方案中，盐是氯化钠。
在一些实施方案中，螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸、喷替酸或其组合。在其它实施方案中，矿物质是钙、锌、二氧化钛或其组合。在某些实施方案中，聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或其组合。
在其它实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、月桂醇聚醚硫酸钠、卵磷脂或其组合。在一些实施方案中，表面活性剂包括但不限于：(i)阳离子表面活性剂，如鲸蜡基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、双十八烷基二甲基溴化铵；(ii)阴离子表面活性剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、全氟辛烷磺酸盐、烷基醚磷酸盐；(iii)非离子表面活性剂，如烷基酚乙氧基化物(TritonX-100)、脂肪醇乙氧基化物、八乙二醇单十二烷基醚、椰油酰胺二乙醇胺、泊洛沙姆、单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇的脂肪酸酯(脱水山梨糖醇单月桂酸酯、吐温80、吐温20；和(iv)两性离子表面活性剂，如椰油酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱和3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯或卵磷脂。在优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨酯20或聚山梨酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。
在一些实施方案中，蛋白质稳定剂是乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸、海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇或其组合。在某些实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、糖类、羟丙基β-环糊精或其组合。在优选的实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。如本文所述与术语“稳定剂”同义使用的稳定剂可以是盐、碳水化合物、糖类或氨基酸，优选权威认可作为药物组合物中的合适添加剂或赋形剂的碳水化合物或糖。术语“赋形剂”是指制剂(preparation/formulation)的添加剂，其可用于实现对制剂的特征进行所需的改变。这类改变包括但不限于物理稳定性、化学稳定性和治疗功效。示例性赋形剂包括但不限于碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、抗菌剂、抗氧化剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、镇痛剂和/或营养培养基。
适用于颗粒的乳化剂的实例包括但不限于HLB小于7的亲脂性剂，如混合脂肪酸甘油单酯；混合脂肪酸甘油二酯；脂肪酸甘油单酯和甘油二酯的混合物；亲脂性聚甘油酯；甘油酯，包括单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸及其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；以及它们的混合物单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸及其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；或其组合。在一些实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。在优选的实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。在某些优选的实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、脱水山梨糖醇单油酸酯或其组合。
在其它实施方案中，抗菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、苄索氯铵、戊二醛、β-丙内酯或其组合。
在某些实施方案中，氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其各种盐(精氨酸盐酸盐、谷氨酸精氨酸等)或其组合。在优选的实施方案中，氨基酸是L-精氨酸、组氨酸、脯氨酸或其组合。
在一些实施方案中，抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸、甲硫氨酸或其组合。在其它实施方案中，蛋白质是鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、明胶或其组合。在某些实施方案中，有机溶剂是二甲亚砜、N-甲基-2-吡咯烷酮或其组合。还在其它实施方案中，防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、甲醛、蓖麻油或其组合。对羟基苯甲酸酯可以是对羟基苯甲酸酯(parahydroxybenzoate)。在一些实施方案中，杀细菌剂是苯扎氯铵(阳离子表面活性剂)、次氯酸盐、过氧化物、醇类、酚类化合物(例如石炭酸)、苯甲酸苄酯或其组合。在优选的实施方案中，杀细菌剂是苯甲酸苄酯。
在其它实施方案中，杀真菌剂是阿拉酸式苯(acibenzolar)、2-苯基苯酚、敌菌灵(anilazine)、香芹酮(carvone)、那他霉素、叠氮化钾或其组合。在优选的实施方案中，杀真菌剂是苯甲酸苄酯。在某些实施方案中，维生素是硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、生物素、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、抗坏血酸、钙化醇、视黄醇、醌类或其组合。还在其它实施方案中，防腐剂是硝酸钠、二氧化硫、山梨酸钾、山梨酸钠、苯甲酸钠、苯甲酸、羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、甲醛、蓖麻油或其组合。在优选的实施方案中，防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、甲醛、蓖麻油或其组合。
许多营养培养基(优选无血清的)可单独或组合地用于本公开，包括市售的培养基或本领域中熟知的其它培养基。这类培养基(全没有血清或已移除血清)的实例包括ADC-1、LPM(无牛血清白蛋白)、F10(HAM)、F12(HAM)、DCCM1、DCCM2、RPMI 1640、BGJ培养基(Fitton-Jackson改良)、伊格尔基础培养基(BME-添加有厄尔盐基)、杜氏改良伊格尔培养基(DMEM-无血清)、格拉斯哥改良伊格尔培养基(GMEM)、Leibovitz L-15培养基、McCoy's 5 A培养基、培养基M199(M199E-具有厄尔盐基)、培养基M199(M199H-具有汉克盐基)、伊格尔最低必需培养基(MEM-E-具有厄尔盐基)、伊格尔最低必需培养基(MEM-H-具有汉克盐基)和伊格尔最低必需培养基(MEM-NAA-具有非必需氨基酸)等等。此外，含血清的营养培养基也可用于根据本公开的组合物中，但使用含血清的培养基是不太优选的，因为血清有可能会被微生物剂污染，并且因为患者可能会对血清中所含的某些抗原组分产生免疫反应。
在一些实施方案中，寡肽是三亮氨酸。在其它实施方案中，生物赋形剂是核酸、寡核苷酸、抗体或其片段、氨基酸、聚氨基酸、肽、蛋白质、细胞、细菌、基因治疗剂、基因组工程治疗剂、表观基因组工程治疗剂、激素、核蛋白、糖蛋白、脂蛋白、外来体、外膜囊泡、疫苗、病毒、噬菌体、细胞器、营养培养基或其组合。在某些实施方案中，化学赋形剂是化学药物、造影剂、染料、磁性颗粒、聚合物珠、金属纳米颗粒、金属微颗粒、量子点、抗氧化剂、抗生素剂、类固醇、镇痛剂、局部麻醉剂、抗炎剂、对羟基苯甲酸酯类、抗微生物剂、化疗剂、维生素、矿物质、杀细菌剂、抗菌剂或其组合。
在其它实施方案中，颗粒具有小于20％的治疗性生物制剂的聚集或小于20％的治疗性生物制剂的片段化，例如小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在一些实施方案中，颗粒具有小于10％的治疗性生物制剂的聚集或小于10％的治疗性生物制剂的片段化，例如小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，颗粒具有约3％至约1％的治疗性生物制剂的聚集。在某些其它实施方案中，颗粒具有约1％至约0.5％的治疗性生物制剂的聚集。在优选的实施方案中，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何聚集。还在其它实施方案中，颗粒具有小于约1％的治疗性生物制剂的片段化。在某些优选的实施方案中，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何片段化。测量生物制剂的聚集和片段化的合适方法可通过采用尺寸排阻色谱法(SEC)来完成。
在一些实施方案中，与颗粒形成之前的治疗剂或诊断剂相比，颗粒形成的过程在诊断或治疗剂(例如，抗体或抗体片段)群体中提供小于50％的电荷变体的变化(例如，小于40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％或1％)。电荷变体可以是酸性的、碱性的或中性的，并且变化可以是由末端氨基酸的翻译后修饰引起的，如天冬酰胺脱酰胺或赖氨酸糖化。例如，电荷变体包括通过失去C末端赖氨酸残基而失去正电荷、两个赖氨酸残基的胺部分通过还原糖共价键合或通过N末端谷氨酰胺的环化使N末端胺转化为中性酰胺。蛋白质(例如，抗体)上的负电荷可通过经由脱酰胺反应使天冬酰胺残基转化为天冬氨酸和/或异天冬氨酸残基而出现。测量电荷变体的示例性方法包括阳离子交换色谱法(CIEX)，其中通过将对应于变体(例如，酸性、碱性或中性群体)的峰下面积除以样品光谱中的所有峰下面所含有的累积面积来对变体进行定量。两个样品(例如，样品A和样品B)之间的电荷变体群体百分比的变化被计算为相应群体变体百分比的数值差，即通过从样品A的特定变体(例如，酸性)百分比中减去样品B的特定变体(例如，酸性)百分比，或者反过来。在某些实施方案中，可以类似地对群体内的所有变体扩展分析。
在某些实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，颗粒具有小于约50％的治疗性生物制剂的电荷变体的变化，例如小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％。在优选的实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。测量生物制剂的电荷变体的变化的合适方法可通过采用阳离子交换色谱法(CIEX)来完成。
在其它实施方案中，干组分的残留水分或溶剂含量按重量计小于约7％，例如按重量计小于约6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在一些实施方案中，颗粒具有按重量计小于约7％的残留水分。还在其它实施方案中，颗粒具有按重量计小于约5％的残留水分。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计小于约3％的残留水分。在优选的实施方案中，颗粒具有按重量计小于约1％的残留水分。
在一些实施方案中，颗粒具有按重量计约1％至约7％的残留水分。还在其它实施方案中，颗粒具有按重量计约1％至约5％的残留水分。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计约1％至约3％的残留水分。在优选的实施方案中，颗粒按重量计基本上不含任何残留水分。
测量水分含量的示例性方法包括化学滴定法，例如涉及真空烘箱的卡尔费休滴定法。还可以采用涉及热激发的失重法来测量包括水在内的多种溶剂。示例性方法包括利用红外光谱法的热重分析(TGA-IR)。
在一些实施方案中，颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂，例如按重量计超过约65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％的治疗性生物制剂。在其它实施方案中，颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。还在其它实施方案中，颗粒具有按重量计超过约98重量％的治疗性生物制剂。在优选的实施方案中，颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。在某些优选的实施方案中，颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
包含至少一种本文所述的治疗性生物制剂的颗粒可按多种方式制备，以及按例如PCT/US2017/063150、PCT/US2018/043774、PCT/US2019/033875和US62/799,696中公开的形成颗粒的任何方法制备，上述文献中的每一者特此以全文引用的方式并入。
如本文所用，术语“分散指数”(DI)是表征颗粒的尺寸分布的不均匀程度的参数。术语“多分散指数”(PDI)是表征给定样品内的颗粒尺寸分布的宽度的参数。PDI的数值范围从0.0(对于颗粒尺寸完全均匀的样品)至1.0及更大(对于具有多个颗粒尺寸群体的高度多分散样品)。该值减小时，颗粒具有更窄分布的颗粒尺寸，并且许多颗粒具有更大的均匀性。可以利用显微镜检查(FlowCAM、SEM)以及激光衍射来收集颗粒直径。
在一些实施方案中，用于动态光散射(DLS)测量的多分散指数(PDI)计算为：来自DLS的多分散指数＝(标准偏差的平方)/(平均直径的平方)。在其它实施方案中，PDI计算可以为：颗粒的统计特征，即数均直径(Dn)、重均直径(Dw)和多分散指数(PDI)，其中可使用以下等式完成计算，其中di表示微球的直径，且n是颗粒的数目：
Figure BDA0003192505500000501
Figure BDA0003192505500000502
Figure BDA0003192505500000503
还在其它实施方案中，可通过变异系数来表示多分散性，变异系数计算为：变异系数(CV＝(标准偏差x 100)/平均值)。
在某些实施方案中，颗粒可包括一种或多种剂，例如治疗性生物制剂。在其它实施方案中，颗粒的直径可以为约0.1至约1000μm，例如约0.1至约90μm、约90至约230μm或约0.1至约1μm。还在其它实施方案中，颗粒的尺寸分散度可以为约0至约0.9，例如约0至约0.7、约0至约0.5或约0至约0.2。测量颗粒尺寸和分布的方法包括颗粒的扫描电子显微照片的成像流式细胞术和图像分析，其中可基于颗粒投影到图像平面上的截面积来计算平均球半径或直径。在本公开的某些其它实施方案中，颗粒可具有约0.1至约1000μm之间的直径、约1.00至约6.00g/cm3的骨架密度和约0至约250℃的玻璃化转变温度。
虽然本公开的每个要素在本文中被描述为含有多个实施方案，但是应当理解的是，除另指出外，本公开的给定要素的每个实施方案能够与本公开的其它要素的每个实施方案一起使用，并且每个这种使用旨在形成本公开的不同实施方案。
相关领域的普通技术人员将要理解的是，基于普通技术人员已知的信息，对本文所述的组合物和方法进行的其它合适的修改和适应从本文所包含的公开内容的描述中是显而易见的，并且可以在不脱离本公开或其任何实施方案的范围的情况下进行。
药物组合物
在某些实施方案中，本公开涉及包含许多颗粒的组合物，所述颗粒包含悬浮在低粘度液体中的前述剂中的任一种。在某些优选的实施方案中，本公开涉及包含许多颗粒的药物组合物，所述颗粒包含悬浮在低粘度药学上可接受的液体中的前述治疗性生物制剂中的任一种。
在根据如本文所述的公开内容的优选实施方案中，与包含单体形式的治疗性生物制剂的水性组合物相比，包含许多颗粒的组合物的治疗性生物制剂稳定性提高。
在其它方面，本公开涉及包含许多颗粒的组合物，所述颗粒包含悬浮在液体中的剂，其中颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。如本文所公开，剂可以是治疗剂或诊断剂。在某些实施方案中，治疗剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
在一些实施方案中，本公开提供了含有许多颗粒的组合物，所述颗粒包括剂，例如治疗剂或诊断剂，其中相对于剂在第一液体中的储存稳定性，剂在颗粒中的储存稳定性提高。在其它实施方案中，储存条件由时间(例如，超过约2年、超过约1年、超过约6个月、超过约3个月、超过约1个月或超过约1周)和温度(例如，约-80℃至约100℃、约-80℃至约60℃、约-20℃至约60℃、约4℃至约60℃)以及可能的其它变量来限定。还在其它实施方案中，储存时间为约3天、约7天、约30天、约90天、约180天、约1年或约2年。在某些其它实施方案中，此温度为约-80℃、约-40℃、约-20℃、约4℃、约25℃、约40℃或约40至约60℃。在某些实施方案中，相对于治疗剂或诊断剂的第一液体的储存稳定性，治疗剂或诊断剂在颗粒中的储存稳定性提高。
在其它实施方案中，颗粒具有小于约25％的内部空隙空间，例如小于约24％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的内部空隙空间。在某些实施方案中，颗粒可包括小于10％的内部空隙空间、小于5％的内部空隙空间、小于1％的内部空隙空间、小于0.1％的内部空隙空间或小于0.01％的内部空隙空间。在优选的实施方案中，颗粒基本上没有任何内部空隙空间。在其它实施方案中，颗粒可表现出约0至约50％的孔隙率，例如孔隙率为约0至约10％、约0至约5％、约0至约1％、约0至约0.5％、约0至约0.1％或约0至约0.01％。示例性孔径测量包括扫描电子显微镜法(SEM)、透射电子显微镜法(TEM)和共聚焦激光扫描显微镜分析。使用镓聚焦离子束(FIB)将其中一个颗粒切成两半以展示颗粒内部的截面。也可以通过氮吸附/解吸分析和BET吸附模型来研究多孔微球和纳米球的比表面积。在孔径足够大的某些实施方案中，可采用压汞孔隙率测定法。
在一些实施方案中，颗粒的圆形度为至少约10％，例如至少约20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或约100％。在其它实施方案中，颗粒的圆形度为至少约88％。在某些实施方案中，颗粒的圆形度为至少约90％。还在其它实施方案中，颗粒的圆形度为至少约93％。在优选的实施方案中，颗粒的圆形度为至少约97％。
在其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.10至约1.00，例如约0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在某些实施方案中，颗粒的圆形度为约0.88至约1.00。还在其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。在某些其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.93至约1.00。在优选的实施方案中，颗粒的圆形度为约0.97至约1.00。
在某些实施方案中，颗粒的圆形度可在至少约0.10至约1.00的范围内，例如至少约0.88、约0.90、约0.93或约0.97至约1.00。
在一些实施方案中，颗粒的球形度为至少约50％，例如至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或约100％。在其它实施方案中，颗粒的球形度为约0.10至约1.00，例如约0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在优选的实施方案中，颗粒的球形度为约1.00。
在某些实施方案中，颗粒的球形度可在约0.10至约1.00的范围内，例如至少约0.20、约0.40、约0.60或约0.80至约1.00。
在优选的实施方案中，颗粒具有基本上平滑的表面。
在一些实施方案中，颗粒的直径在约0.1至约1000μm之间，例如约0.1至约900、800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、45、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3或约0.2μm。在某些实施方案中，颗粒的直径在约1至约100μm之间，例如约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50至约100μm。还在其它实施方案中，颗粒的直径在约4至约100μm之间。在某些其它实施方案中，颗粒的直径在约10至约100μm之间。在优选的实施方案中，颗粒的直径在约20至约50μm之间。在某些优选的实施方案中，有意地控制颗粒的直径。在一些实施方案中，颗粒的直径为约0.1至约1000μm，例如约1至约400μm、约1至约200μm、约1至约100μm、约1至约50μm、约1至约25μm、约1至约10μm、约10至约100μm、约50至约100μm、约50至约75μm或约75至约100μm。在其它实施方案中，颗粒的直径为约1至约100μm，例如约4至约100μm、约10至约100μm或约20至约50μm。
在某些实施方案中，颗粒的直径在约0.1至约100μm之间。在某些其它实施方案中，颗粒的直径在约0.5至约50μm之间。还在其它实施方案中，颗粒的直径在约20至约50μm之间。在某些优选的实施方案中，颗粒的直径在约1至约40μm之间。在优选的实施方案中，颗粒的直径在约2至约15μm之间。
在一些实施方案中，颗粒具有按质量计小于约10％，例如按质量计小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％的表面活性剂含量。在其它实施方案中，颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。在某些实施方案中，颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。还在其它实施方案中，颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。在某些其它实施方案中，颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。在一些实施方案中，颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。在优选的实施方案中，颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。在某些优选的实施方案中，颗粒基本上不含任何表面活性剂含量。
在其它实施方案中，颗粒的表面活性剂含量为0至10重量％，例如0至5重量％、0至3重量％、0至2重量％、0至1重量％、0至0.5重量％、0至0.2重量％、0至0.1重量％、0至0.01重量％或0至0.001重量％。
在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯或卵磷脂。在优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨酯20或聚山梨酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。还在其它实施方案中，表面活性剂是离子表面活性剂。
在其它实施方案中，颗粒表现出的骨架密度为约1.00至约6.00g/cm3，例如约1.00至约5.00g/cm3、约1.00至约3.00g/cm3、约1.00至约2.00g/cm3、约1.00至约1.50g/cm3、约1.30至约1.50g/cm3、约1.32至约1.50g/cm3或约1.10至约1.40g/cm3。在一些实施方案中，颗粒表现出的骨架密度为约0.10至约5.00g/cm3，例如约0.10至约2.50g/cm3、约0.10至约1.40g/cm3、约0.50至约1.40g/cm3或约1.00至约1.40g/cm3。在某些实施方案中，颗粒具有约0.09至约1.60g/cm3的骨架密度。还在其它实施方案中，颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。在优选的实施方案中，颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
在某些实施方案中，颗粒具有约1000mg/mL至约1500mg/mL、约1050mg/mL至约1500mg/mL、约1100mg/mL至约1500mg/mL、约1150mg/mL至约1500mg/mL、约1200mg/mL至约1500mg/mL、约1250mg/mL至约1500mg/mL、约1300mg/mL至约1500mg/mL、约1310mg/mL至约1500mg/mL、约1320mg/mL至约1500mg/mL、约1330mg/mL至约1500mg/mL、约1340mg/mL至约1500mg/mL、约1350mg/mL至约1500mg/mL、约1360mg/mL至约1500mg/mL、约1370mg/mL至约1500mg/mL、约1380mg/mL至约1500mg/mL、约1390mg/mL至约1500mg/mL、约1400mg/mL至约1500mg/mL、约1410mg/mL至约1500mg/mL、约1420mg/mL至约1500mg/mL、约1430mg/mL至约1500mg/mL、约1440mg/mL至约1500mg/mL、约1450mg/mL至约1500mg/mL、约1460mg/mL至约1500mg/mL、约1470mg/mL至约1500mg/mL、约1480mg/mL至约1500mg/mL或约1490mg/mL至约1500mg/mL的骨架密度。
在其它实施方案中，颗粒的特征可在于玻璃化转变温度为约0℃至约250℃，例如约34℃至约200℃、约50℃至约200℃、约60℃至约200℃、约40至约160℃、约50至约110℃、约60至约100℃或约75至约80℃。在其它实施方案中，颗粒具有约40至约160℃的玻璃化转变温度。还在其它实施方案中，颗粒具有约50至约110℃的玻璃化转变温度。在某些实施方案中，颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。在优选的实施方案中，颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。还在其它实施方案中，颗粒被加热到颗粒在干燥期间的玻璃化转变温度的约±30℃，例如约±20、±10、±5、±1℃。
在某些实施方案中，颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。在某些其它实施方案中，颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。在某些优选的实施方案中，颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
在一些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。在某些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或其组合。
在某些实施方案中，液体是非水性的或水性的。在其它实施方案中，液体是非水性的。还在其它实施方案中，液体是水性的。
在其它实施方案中，非水性液体是有机溶剂或离子液体。在一些实施方案中，有机溶剂是苯甲酸苄酯、椰子油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化植物油、橄榄油、棕榈籽油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、核桃油、丙酮、乙酸乙酯、乳酸乙酯、二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、糖原质、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、简单醇如乙醇、辛醇、己醇、癸醇、丙醇和丁醇；γ-丁内酯、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨酸酯、乙醇胺、丙酸、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯、丙酮缩甘油、异山梨醇二甲醚、甲酸乙酯和乙酸乙基己酯或其组合。在优选的实施方案中，有机溶剂是油酸乙酯、月桂酸乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、癸酸乙酯、琥珀酸二乙酯、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯或其组合。在某些优选的实施方案中，有机溶剂是油酸乙酯。本公开的示例性离子液体含有(i)阳离子，如吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍；和(ii)阴离子，如卤离子、硫酸根、磺酸根、碳酸根、磷酸根、碳酸氢根、硝酸根、乙酸根、PF6-、BF4-、三氟甲烷磺酸根、全氟丁基磺酸根、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸根、七氟丁酸根、卤代铝酸根或其组合。在某些实施方案中，离子液体包含吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍、卤离子、硫酸根、磺酸根、碳酸根、磷酸根、碳酸氢根、硝酸根、乙酸根、PF6-、BF4-、三氟甲烷磺酸根、全氟丁基磺酸根、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸根、七氟丁酸根、卤代铝酸根或其组合。
在某些实施方案中，有机溶剂是乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、枯烯、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二噁烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、甲基异丁基酮、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢呋喃、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯、二甲苯、乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲乙酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯、三乙胺、1,1-二乙氧基丙烷、1,1-二甲氧基甲烷、2,2-二甲氧基丙烷、异辛烷、异丙醚、甲基异丙基酮、甲基四氢呋喃、石油醚、三氯乙酸、三氟乙酸、癸醇、乙酸2-乙基己酯、乙酸戊酯或其组合。
在一些实施方案中，水性液体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、缓冲液、右旋糖5％或其组合。在优选的实施方案中，水性液体是水。本公开的示例性缓冲液可包括乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲盐水、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、二甲胂酸盐缓冲液、甲酸铵缓冲液、尿素溶液或其组合。
短语“药学上可接受的”在本文中用来指在合理的医学判断范围内适合与人和动物的组织接触使用而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症、与合理的益处/风险比相称的那些治疗性生物制剂、物质、组合物和/或剂型。术语“药学上可接受的”可以指当适当地施用于哺乳动物(如人)时不产生不利的过敏或其它不良反应的颗粒和包含许多颗粒的组合物。根据本公开，包含抗体或另外的活性成分的药物组合物的制备是本领域技术人员已知的。此外，对于哺乳动物(例如，人)施用，要理解的是，制剂应满足FDA生物标准办公室要求的无菌性、热原性、一般安全性和纯度标准。
短语“药学上可接受的液体”包括任何及所有的水性溶剂(例如，水、醇/水溶液、盐水溶液、肠胃外媒介物，如氯化钠、林格氏右旋糖等)、非水溶剂(例如，丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯，如油酸乙酯)、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌或抗真菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、药物、药物稳定剂、凝胶、粘结剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、流体和营养补充剂、本领域普通技术人员已知的这类物质及其组合。根据熟知的参数调节药物组合物中各种组分的pH和确切浓度。在某些优选的实施方案中，许多颗粒悬浮在药学上可接受的液体中。在优选的实施方案中，液体是药学上可接受的液体。
可以通过多种施用途径中的任一种对受试者施用如本文所公开的药物组合物(制剂)，所述施用途径包括例如肠胃外(包括肌内、静脉内、皮下或鞘内，例如作为无菌溶液或悬浮液)；腹膜内；或皮下。在某些实施方案中，组合物可以简单地悬浮在非水液体载体中。适当的施用途径及其合适的组合物的细节可见于例如6,110,973；5,763,493；5,731,000；5,541,231；5,427,798；5,358,970和4,172,896号美国专利以及其中引用的专利中。术语“悬浮制剂”是指包括固体颗粒的液体制剂，所述固体颗粒置于它们在适当的时间尺度上不溶于其中的载液内。颗粒可随时间的推移而沉降，即悬浮液的物理稳定性不是无限期的，但可采用某种形式的搅动或激发再悬浮。
“治疗量”是指产生所需效果所需的治疗剂或诊断剂的量。如本文所用，术语“治疗(treat/treated/treating)”意指治疗性处理和预防性或防范性措施，其中的目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理病状、病症或疾病，或者获得有益或期望的临床结果。有益或期望的临床结果包括但不限于症状的缓和；病状、病症或疾病程度的减轻；病状、病症或疾病状态稳定(即，不恶化)；病状、病症或疾病发作延迟或进展减缓；病状、病症或疾病状态改善或缓解(无论是部分的还是全部的)，无论是可检测到的还是检测不到的；至少一个可测量的物理参数的改善，患者不一定可觉察到；或病状、病症或疾病的改进或改善。治疗包括在没有过度副作用水平的情况下引起临床上显著的反应。治疗还包括与不接受治疗的预期生存期相比延长生存期。
在某些实施方案中，液体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、镇痛剂或其组合。在优选的实施方案中，液体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或其组合。在某些优选的实施方案中，水性液体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或其组合。
在其它实施方案中，碳水化合物可来自单糖、二糖、寡糖或多糖家族。在一些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖、淀粉、海藻酸盐、黄原胶、半乳甘露聚糖、琼脂、琼脂糖或其组合。在某些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖、羟丙基β-环糊精或其组合。在优选的实施方案中，碳水化合物是海藻糖、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。基于葡萄糖单体的数目，环糊精可以三种不同的形式α、β和γ获得。α、β和γ环糊精中的葡萄糖单体的数目可以分别为6、7或8。
在一些实施方案中，pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸(glyclyglycine)、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。在其它实施方案中，pH调节剂是柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐、琥珀酸盐、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。在某些实施方案中，pH调节剂是盐酸或柠檬酸。
在其它实施方案中，盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。在优选的实施方案中，盐是氯化钠。
在一些实施方案中，螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸、喷替酸或其组合。在其它实施方案中，矿物质是钙、锌、二氧化钛或其组合。在某些实施方案中，聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或其组合。
在其它实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、月桂醇聚醚硫酸钠、卵磷脂或其组合。在一些实施方案中，表面活性剂包括但不限于：(i)阳离子表面活性剂，如鲸蜡基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、双十八烷基二甲基溴化铵；(ii)阴离子表面活性剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、全氟辛烷磺酸盐、烷基醚磷酸盐；(iii)非离子表面活性剂，如烷基酚乙氧基化物(TritonX-100)、脂肪醇乙氧基化物、八乙二醇单十二烷基醚、椰油酰胺二乙醇胺、泊洛沙姆、单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇的脂肪酸酯(脱水山梨糖醇单月桂酸酯、吐温80、吐温20；和(iv)两性离子表面活性剂，如椰油酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱和3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯或卵磷脂。在优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，蛋白质稳定剂是乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸、海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇或其组合。在某些实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、糖类或其组合。在优选的实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。如本文所述与术语“稳定剂”同义使用的稳定剂可以是盐、碳水化合物、糖类或氨基酸，优选权威认可作为药物组合物中的合适添加剂或赋形剂的碳水化合物或糖。术语“稳定剂”是指使剂(例如，治疗剂或诊断剂)的物理和/或化学性质稳定的赋形剂或赋形剂的混合物。在一些实施方案中，稳定剂防止例如在液滴形成、颗粒物质的干燥和/或储存期间治疗剂或诊断剂的降解。示例性稳定剂包括但不限于糖、盐、疏水盐、清洁剂、还原剂、环糊精、多元醇、羧酸和氨基酸。如本文所述的“稳定”制剂是指其中治疗剂或诊断剂在可接受的时间段内保持其基本的物理、化学或生物特性的可接受部分的制剂。例如在蛋白质和肽的情况下，评估稳定性的示例性方法综述于(i)Peptide and Protein DrugDelivery，247-301，Vincent Lee编，Marcel Dekker,Inc.，New York，NY，1991和(ii)Jones,A.，Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)中。在某些实施方案中，通过测量样品在若干阶段的尺寸分布来评估蛋白质的化学稳定性。这些包括例如在颗粒形成前(进料溶液的评估)、紧接在颗粒形成之后以及在储存一段时间之后再次，其中储存发生在悬浮制剂载体介质内或不存在悬浮制剂载体介质的情况下。在某些其它实施方案中，通过尺寸排阻色谱法(SEC-HPLC)来评估尺寸分布。
适用于液体的乳化剂的实例包括但不限于HLB小于7的亲脂性剂，如混合脂肪酸甘油单酯；混合脂肪酸甘油二酯；脂肪酸甘油单酯和甘油二酯的混合物；亲脂性聚甘油酯；甘油酯，包括单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸及其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；以及它们的混合物单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸及其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；或其组合。在一些实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。在优选的实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、脱水山梨糖醇单油酸酯或其组合。
在其它实施方案中，抗菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、苄索氯铵、戊二醛、β-丙内酯或其组合。
在某些实施方案中，氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其组合。在优选的实施方案中，氨基酸是L-精氨酸、组氨酸、脯氨酸或其组合。
在一些实施方案中，抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸、甲硫氨酸或生育酚或其组合。在其它实施方案中，蛋白质是鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、明胶或其组合。在某些实施方案中，有机溶剂是二甲亚砜、N-甲基-2-吡咯烷酮或其组合。还在其它实施方案中，防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、甲醛、蓖麻油或其组合。在某些其它实施方案中，防腐剂是硝酸钠、二氧化硫、山梨酸钾、山梨酸钠、苯甲酸钠、苯甲酸、羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、甲醛、蓖麻油或其组合。对羟基苯甲酸酯可以是对羟基苯甲酸酯(parahydroxybenzoate)。在一些实施方案中，杀细菌剂是苯扎氯铵(阳离子表面活性剂)、次氯酸盐、过氧化物、醇类、酚类化合物(例如石炭酸)或其组合。
在其它实施方案中，杀真菌剂是阿拉酸式苯、2-苯基苯酚、敌菌灵、香芹酮、那他霉素、叠氮化钾或其组合。在某些实施方案中，维生素是硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、生物素、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、抗坏血酸、钙化醇、视黄醇、醌类或其组合。
许多营养培养基(优选无血清的)可单独或组合地用于本公开，包括市售的培养基或本领域中熟知的其它培养基。这类培养基(全没有血清或已移除血清)的实例包括ADC-1、LPM(无牛血清白蛋白)、F10(HAM)、F12(HAM)、DCCM1、DCCM2、RPMI 1640、BGJ培养基(Fitton-Jackson改良)、伊格尔基础培养基(BME-添加有厄尔盐基)、杜氏改良伊格尔培养基(DMEM-无血清)、格拉斯哥改良伊格尔培养基(GMEM)、Leibovitz L-15培养基、McCoy's 5A培养基、培养基M199(M199E-具有厄尔盐基)、培养基M199(M199H-具有汉克盐基)、伊格尔最低必需培养基(MEM-E-具有厄尔盐基)、伊格尔最低必需培养基(MEM-H-具有汉克盐基)和伊格尔最低必需培养基(MEM-NAA-具有非必需氨基酸)等等。此外，含血清的营养培养基也可用于根据本公开的组合物中，但使用含血清的培养基是不太优选的，因为血清有可能会被微生物剂污染，并且因为患者可能会对血清中所含的某些抗原组分产生免疫反应。
在一些实施方案中，镇痛剂是对乙酰氨基酚、组胺受体拮抗剂(例如，H1或H2阻滞剂)、NSAID、COX-2抑制剂、塞来昔布、罗非昔布、伐地昔布、帕瑞昔布、罗美昔布、依托昔布、非洛昔布、醋氨酚、阿片类药物、右丙氧芬、可待因、曲马多、阿尼利定、哌替啶、氢可酮、吗啡、羟考酮、美沙酮、二乙酰吗啡、氢吗啡酮、羟吗啡酮、左啡诺、丁丙诺啡、芬太尼、舒芬太尼、埃托啡、卡芬太尼、二氢吗啡、二氢可待因、蒂巴因、罂粟碱、地普喹酮、氟吡汀、三环抗抑郁药、醋氨酚或利多卡因或其组合。在某些实施方案中，镇痛剂是醋氨酚或利多卡因。
在某些实施方案中，液体还包含至少一种药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或其组合。在某些其它实施方案中，液体还包含第二剂。在其它实施方案中，液体还包含第二诊断或治疗剂。
在一些实施方案中，颗粒具有小于20％的治疗性生物制剂的聚集或小于20％的治疗性生物制剂的片段化，例如小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在其它实施方案中，颗粒具有小于10％的治疗性生物制剂的聚集或小于10％的治疗性生物制剂的片段化，例如小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，颗粒具有约3％至约1％的治疗性生物制剂的聚集。在某些其它实施方案中，颗粒具有约1％至约0.5％的治疗性生物制剂的聚集。在优选的实施方案中，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何聚集。还在其它实施方案中，颗粒具有小于约1％的治疗性生物制剂的片段化。在某些优选的实施方案中，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何片段化。
在某些实施方案中，本文所述的方法可还包括将颗粒悬浮在药学上可接受的介质中，例如重构干燥的颗粒。在一些实施方案中，与处理之前第一液体中的治疗剂或诊断剂相比，颗粒的溶解或重构使诊断或治疗剂(例如，蛋白质)的聚集体增加小于约10％(例如，小于约8％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％)。测量聚集体的示例性方法包括尺寸排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)，其中通过将对应于聚集体群体的峰下面积除以样品光谱中的所有峰下面所含有的累积面积来对聚集体群体进行定量。两个样品(例如，样品A和样品B)之间的聚集体百分比的变化被计算为相应聚集体百分比的数值差，即通过从样品A的聚集体百分比中减去样品B的聚集体百分比，或者反过来。在某些其它实施方案中，与处理之前第一液体中的治疗剂或诊断剂相比，颗粒的溶解或重构使诊断或治疗剂(例如，蛋白质)的片段增加小于约10％(例如，小于约8％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％)。测量片段的示例性方法包括尺寸排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)，其中通过将对应于片段群体的峰下面积除以样品光谱中的所有峰下面所含有的累积面积来对片段群体进行定量。两个样品(例如，样品A和样品B)之间的片段百分比的变化被计算为相应片段百分比的数值差，即通过从样品A的片段百分比中减去样品B的片段百分比，或者反过来。
在其它实施方案中，与颗粒形成之前的治疗剂或诊断剂相比，颗粒形成的过程在诊断或治疗剂(例如，抗体或抗体片段)群体中提供小于50％的电荷变体的变化(例如，小于40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％或1％)。在某些实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，颗粒具有小于约50％的治疗性生物制剂的电荷变体的变化，例如小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％。在优选的实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
在一些实施方案中，干组分的残留水分或溶剂含量按重量计小于约7％，例如按重量计小于约6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在其它实施方案中，颗粒具有按重量计小于约7％的残留水分。还在其它实施方案中，颗粒具有按重量计小于约5％的残留水分。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计小于约3％的残留水分。在优选的实施方案中，颗粒具有按重量计不到约1％的残留水分。
在其它实施方案中，颗粒具有按重量计约1％至约7％的残留水分。还在其它实施方案中，颗粒具有按重量计约1％至约5％的残留水分。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计约1％至约3％的残留水分。在优选的实施方案中，颗粒按重量计基本上不含任何残留水分。
在一些实施方案中，颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂，例如按重量计超过约65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％的治疗性生物制剂。在其它实施方案中，颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。还在其它实施方案中，颗粒具有按重量计超过约98重量％的治疗性生物制剂。在优选的实施方案中，颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。在某些优选的实施方案中，颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
治疗性生物制剂在组合物中的浓度通常为约20mg/mL至约650mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625mg/mL至约650mg/mL。组合物中的治疗性生物制剂可具有每单位约0.5至约1.0活性、每单位约0.75至约1.0活性或每单位约0.9至约1.0活性。活性是相对于颗粒形成之前的相同治疗性生物制剂测量的。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
在一些实施方案中，本文所述的组合物在组合物中采用的治疗性生物制剂的浓度为约20mg/mL至约650mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625mg/mL至约650mg/mL；约20mg/mL至约625mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600mg/mL至约625mg/mL；约20mg/mL至约600mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575mg/mL至约600mg/mL；约20mg/mL至约575mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550mg/mL至约575mg/mL；约20mg/mL至约550mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525mg/mL至约550mg/mL；约20mg/mL至约525mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500mg/mL至约525mg/mL；约20mg/mL至约500mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475mg/mL至约500mg/mL；约20mg/mL至约475mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450mg/mL至约475mg/mL；约20mg/mL至约450mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425mg/mL至约450mg/mL；约20mg/mL至约425mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400mg/mL至约425mg/mL；约20mg/mL至约400mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375mg/mL至约400mg/mL；约20mg/mL至约375mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350mg/mL至约375mg/mL；约20mg/mL至约350mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325mg/mL至约350mg/mL；约20mg/mL至约325mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300mg/mL至约325mg/mL；或约20mg/mL至约300mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275mg/mL至约300mg/mL。在其它实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约30mg/mL至约500mg/mL。在某些实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约100mg/mL至约500mg/mL。还在其它实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约200mg/mL至约400mg/mL。在其它实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约300mg/mL至约400mg/mL。在某些优选的实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约350mg/mL至约400mg/mL。
在其它实施方案中，组合物具有小于约200mPa·s、小于约150mPa·s、小于约125mPa·s、小于约100mPa·s、小于约75mPa·s、小于约75mPa·s、小于约70mPa·s、小于约65mPa·s、小于约60mPa·s、小于约55mPa·s、小于约50mPa·s、小于约45mPa·s、小于约40mPa·s、小于约35mPa·s、小于约30mPa·s、小于约25mPa·s、小于约20mPa·s、小于约19mPa·s、小于约18mPa·s、小于约17mPa·s、小于约16mPa·s、小于约15mPa·s、小于约14mPa·s、小于约13mPa·s、小于约12mPa·s、小于约11mPa·s、小于约10mPa·s、小于约9.5mPa·s、小于约9mPa·s、小于约8.5mPa·s、小于约8mPa·s、小于约7.5mPa·s、小于约7mPa·s、小于约6.5mPa·s、小于约6mPa·s、小于约5.5mPa·s、小于约5mPa·s、小于约4.5mPa·s、小于约4mPa·s、小于约3.5mPa·s、小于约3mPa·s、小于约2.5mPa·s、小于约2mPa·s、小于约1.5mPa·s、小于约1mPa·s、小于约0.5mPa·s、小于约0.1mPa·s、小于约0.05mPa·s或小于约0.01mPa·s(一毫帕斯卡-秒)的粘度。在其它实施方案中，组合物具有约0.01mPa·s至约10,000mPa·s，例如约0.01mPa·s至约1,000mPa·s、约0.01mPa·s至约100mPa·s、约0.01mPa·s至约50mPa·s、约0.01mPa·s至约25mPa·s、约0.01mPa·s至约10mPa·s、约0.01mPa·s至约5mPa·s或约0.01mPa·s至约1mPa·s的粘度。在某些实施方案中，组合物具有可在约0.27mPa·s至约200mPa·s的范围内，例如约0.27mPa·s至约50mPa·s、约1mPa·s至约30mPa·s或约20mPa·s至约50mPa·s的粘度。还在其它实施方案中，组合物的粘度在约0.27mPa·s至约200mPa·s的范围内，例如约0.27mPa·s至约100mPa·s、约0.27mPa·s至约50mPa·s、约0.27mPa·s至约30mPa·s、约1mPa·s至约20mPa·s或约1mPa·s至约15mPa·s。术语“粘度”用于描述流体用来抵抗剪切流动的特性。出于本公开的目的，可以使用流变仪，例如配有锥和板(2°/40mm)的AR-G2流变仪(TAInstruments，USA)，在25℃和指定的剪切速率下测定粘度。在某些实施方案中，在牛顿体系中的剪切速率下测量粘度。术语“牛顿体系”意指在每一点与局部应变速率成线性比例或几乎成线性比例的一系列剪切速率。在一些实施方案中，在约100s-1或更大(例如，在约1000s-1或大于约1000s-1)的剪切速率下测量粘度。组合物可包括按体积计约5％至约90％的颗粒，例如约20％至约90％、约40％至约80％、约50％至约60％或约70％至约90％的颗粒。组合物的治疗性生物制剂的浓度可以为约0.0001至约1000mg/mL，例如约100至约900、约150至约800或约200至约700mg/mL。控制粘度的方法包括温度调节和粘度调节添加剂。液体的混合物也可用于控制粘度。单位“mPa·s”和“cP”在本文中在最广泛的意义上可互换使用。
在一些实施方案中，组合物具有小于约50mPa·s的粘度。在其它实施方案中，组合物具有小于约30mPa·s的粘度。还在其它实施方案中，组合物具有小于约20mPa·s的粘度。在某些其它实施方案中，组合物具有小于约10mPa·s的粘度。在某些实施方案中，组合物具有小于约5mPa·s的粘度。在优选的实施方案中，组合物具有小于约3mPa·s的粘度。在某些优选的实施方案中，组合物具有小于约2.5mPa·s的粘度。
在本文所述的组合物的其它实施方案中，许多颗粒的多分散指数为约0.002至约1.000，例如约0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.020、0.030、0.040、0.050、0.060、0.070、0.080、0.090、0.100、0.200、0.300、0.400、0.500、0.600、0.700、0.800、0.900至约1.000。在某些实施方案中，许多颗粒的多分散指数为约0.002至约0.900。
在本文所述的公开内容的某些实施方案中，治疗性生物制剂在颗粒中的高浓度和颗粒在液体中的高浓度是可能的。在一些实施方案中，后者可通过混合各种尺寸的颗粒来实现。
在根据如本文所述的公开内容的优选实施方案中，与包含单体形式的治疗性生物制剂的水性组合物相比，包含许多颗粒的组合物的治疗性生物制剂稳定性提高。
在其它实施方案中，本公开的颗粒可悬浮在水性液体载体、非水性液体载体(例如，有机液体)、离子液体载体、凝胶载体或其组合中以形成悬浮组合物。用于悬浮的介质可还包括例如碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、抗菌剂、抗氧化剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、镇痛剂和/或营养培养基。在一些实施方案中，其它组分中的每一者可独立地占培养基的约0.0001至约99％(w/v)，例如占约0.0001至约90％(w/v)、占约0.0001至约50％(w/v)、占约0.0001至约10％(w/v)、占约0.0001至约1％(w/v)或占约0.0001至约0.1％(w/v)。在某些实施方案中，本公开提供了悬浮在液体中的本文所述的许多颗粒。液体可以是有机溶剂、离子液体、水性液体或其组合。液体可还包括第二诊断或治疗剂。
在一些实施方案中，在水性液体中溶解时持续存在的特征尺寸大于或等于约100μm的不溶性颗粒物质被称为可见颗粒(VP)。在本文所述的公开内容的优选实施方案中，组合物基本上不含可见颗粒(VP)。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。在其它实施方案中，在规定的光照条件下肉眼可见的不溶性颗粒物质在本公开的颗粒重构为液体药物组合物后持续存在。这种类型的不溶性颗粒物有时被称为可见颗粒(VP)，并且尺寸通常大于约100μm。VP以约0至约1个/约1mL的量存在，例如约0至约0.01个/约1mL、约0至约0.001个/约1mL或约0至约0.0001个/约1mL。测量VP的示例性方法包括在将治疗剂或诊断剂重构和稀释至标准浓度(例如，约100mg/mL或约1mg/mL)后，根据USP<790>在约2000与约3750勒克斯之间的光照下通过以黑白为背景目视检查5秒钟来分析治疗剂或诊断剂。在一些实施方案中，根据USP<790>，10,000个中少于65个样品(0.65％)被剔除。根据USP<1790>，替代性检查策略是遮光、自动光学成像系统或X射线成像。
在其它实施方案中，在水性液体中溶解时持续存在的特征尺寸为约1μm至约100μm的不溶性颗粒物质被称为亚可见颗粒(SvP)。SvP以约0至约100,000,000个/约1mL的量存在，例如约0至约10,000,000个/约1mL、约0至约1,000,000个/约1mL、约0至约500,000个/约1mL、约0至约100,000个/约1mL、约0至约50,000个/约1mL、约0至约10,000个/约1mL、约0至约6,000个/约1mL、约0至约1,000个/约1mL、约0至约600个/约1mL、约0至约250个/约1mL、约0至约100个/约1mL、约0至约60个/约1mL或约0至约10个/约1mL。在其它实施方案中，特征尺寸大于或等于10μm的颗粒的计数为约0至约6,000个/约1mL，例如约0至约1,000个/约1mL、约0至约100个/约1mL、约0至约10个/约1mL、约0至约5个/约1mL、约0至约3个/约1mL或约0至约1个/约1mL。在某些实施方案中，特征尺寸大于或等于25μm的颗粒的计数为约0至约600个/约1mL，例如约0至约100个/约1mL、约0至约10个/约1mL、约0至约3个/约1mL、约0至约1个/约1mL、约0至约0.5个/约1mL或约0至约0.1个/约1mL。测量SvP的示例性方法包括在将治疗性生物制剂重构和稀释至标准浓度(例如，约100mg/mL或约1mg/mL)后，用Coulter计数器、HIAC Royco或微流成像系统分析治疗性生物制剂。还在其它实施方案中，在水性液体中溶解时，组合物具有约0个/约1mL至约100,000,000个/约1mL的大于约10μm颗粒的不溶性亚可见颗粒的浓度。在某些实施方案中，在水性液体中溶解时，组合物具有约0个/约1mL至约6000个/约1mL的大于约10μm颗粒的不溶性亚可见颗粒的浓度。在优选的实施方案中，在水性液体中溶解时，组合物具有约0个/约1mL至约600个/约1mL的大于约25μm颗粒的不溶性亚可见颗粒的浓度。在某些优选的实施方案中，在水性液体中溶解时，组合物基本上不含不溶性亚可见颗粒。在优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
在一些实施方案中，在水性液体中溶解时持续存在的特征尺寸为约100nm至约1μm的不溶性颗粒物质被称为亚微米颗粒(SMP)，并且有时被称为纳米颗粒。定量地，SMP以约0至5×1012个/约1mL的量存在，例如约0至约0.5×1012个/约1mL、约0至约50×109个/约1mL、约0至约10×109个/约1mL、约0至约5×109个/约1mL、约0至约0.5×109个/约1mL、约0至约50×106个/约1mL、约0至约1×106个/约1mL、约0至约500,000个/约1mL、约0至约200,000个/约1mL、约0至约100,000个/约1mL、约0至约10,000个/约1mL、约0至约5000个/约1mL或约0至约1000个/约1mL。定量测量SMP的示例性方法包括在将治疗性生物制剂重构和稀释至标准浓度(例如，约100mg/mL、约1mg/mL或约1μg/mL)后，用NanoSight、微流成像系统、与多角度激光散射耦合的不对称场流分级(AF4 MALS)或动态光散射(DLS)分析治疗性生物制剂。定性地，SMP在与起始单体治疗性生物制剂溶液相当的范围内。在优选的实施方案中，在水性液体中溶解时，组合物基本上不含亚微米颗粒(SMP)。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。定性地，如本文所述，SMP在与进料溶液相当的范围内。
在某些实施方案中，悬浮液包括小于或等于1μm的不溶性颗粒物质。悬浮液的特征尺寸大于或等于约100nm的不溶性颗粒在悬浮液中的浓度可以为约1至5x1012个/约1mL，或特征尺寸小于或等于约1μm的不溶性颗粒在悬浮液中的浓度可以为约1至5x1012个/约1mL。还在其它实施方案中，颗粒的悬浮液可包括尺寸大于或等于约1μm的不溶性颗粒物质。在某些其它实施方案中，不溶性颗粒的数量为约0至约100,000,000个/约1mL，例如小于约10,000,000、1,000,000、100,000、10,000、1000、100、10或约1个/约1mL。例如，大于约10μm的不溶性颗粒的数量为约0至约6,000个/约1mL，例如小于约5,000、约4,000、约3,000、约2,000、约1,000、约500、约100、约10或约1个/约1mL，和/或大于约25μm的不溶性颗粒的数量为约0至约600个/约1mL，例如小于约500、约400、约300、约200、约100、约50、约10或约1个/约1mL。
在一些实施方案中，本公开提供了含有许多颗粒的组合物，例如悬浮液或干燥形式，所述颗粒包括剂，例如治疗剂或诊断剂。组合物优选在悬浮液中或在重构后具有约0与约100,000,000个/约1mL之间的不溶性颗粒(例如，SvP)的浓度。在其它实施方案中，在悬浮液中或在重构后不溶性颗粒的浓度在约0与约1,000,000个/约1mL之间。还在其它实施方案中，在悬浮液中或在重构后不溶性颗粒的浓度在约0与约10,000个/约1mL之间。在某些其它实施方案中，在悬浮液中或在重构后特征尺寸大于或等于约10μm的不溶性颗粒的浓度在约0至约6,000个/约1mL之间。在某些实施方案中，在悬浮液中或在重构后特征尺寸大于或等于约25μm的不溶性颗粒的浓度在约0至约600个/约1mL之间。
在其它实施方案中，在储存之后进行颗粒的溶解或重构后，SvP以约0至约100,000,000个/约1mL的量存在，例如约0至约10,000,000个/约1mL、约0至约1,000,000个/约1mL、约0至约500,000个/约1mL、约0至约100,000个/约1mL、约0至约50,000个/约1mL、约0至约10,000个/约1mL、约0至约6,000个/约1mL、约0至约1,000个/约1mL、约0至约600个/约1mL、约0至约250个/约1mL、约0至约100个/约1mL、约0至约60个/约1mL或约0至约10个/约1mL。在一些实施方案中，特征尺寸大于或等于约10μm的颗粒的计数为约0至约6,000个/约1mL，例如约0至约1,000个/约1mL、约0至约100个/约1mL、约0至约10个/约1mL、约0至约5个/约1mL、约0至约3个/约1mL或约0至约1个/约1mL。在某些实施方案中，特征尺寸大于或等于约25μm的颗粒的计数为约0至约600个/约1mL，例如约0至约100个/约1mL、约0至约10个/约1mL、约0至约3个/约1mL、约0至约1个/约1mL、约0至约0.5个/约1mL或约0至约0.1个/约1mL。还在其它实施方案中，在储存之后进行颗粒的溶解或重构后，治疗剂或诊断剂保留约0.5至约1.0活性，例如约0.75至约1.0活性、约0.9至约1.0活性、约0.95至约1.0活性、约0.99至约1.0活性或约0.999至约1.0活性。在某些其它实施方案中，与处理之前第一液体中的剂相比，在储存之后进行颗粒的溶解或重构使剂(例如，蛋白质)的聚集体增加小于约10％(例如，小于约8％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％)。在某些实施方案中，与处理之前第一液体中的治疗剂或诊断剂相比，在储存之后进行颗粒的溶解或重构使剂(例如，蛋白质)的片段增加小于约10％(例如，小于约8％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％)。在一些实施方案中，与颗粒形成之前的治疗剂或诊断剂相比，在储存之后进行颗粒的溶解或重构在剂(例如，抗体或抗体片段)群体中提供小于约50％的电荷变体的变化(例如，小于约40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％或约1％)。
还在其它实施方案中，在储存之后进行颗粒的溶解或重构后，SvP以约0至约100,000,000个/约1mL的量存在，例如约0至约10,000,000个/约1mL、约0至约1,000,000个/约1mL、约0至约500,000个/约1mL、约0至约100,000个/约1mL、约0至约50,000个/约1mL、约0至约10,000个/约1mL、约0至约6,000个/约1mL、约0至约1,000个/约1mL、约0至约600个/约1mL、约0至约250个/约1mL、约0至约100个/约1mL、约0至约60个/约1mL或约0至约10个/约1mL。在某些实施方案中，特征尺寸大于或等于约10μm的颗粒的计数为约0至约6,000个/约1mL，例如约0至约1,000个/约1mL、约0至约100个/约1mL、约0至约10个/约1mL、约0至约5个/1mL、约0至约3个/约1mL或约0至约1个/约1mL。在某些其它实施方案中，特征尺寸大于或等于约25μm的颗粒的计数为约0至约600个/约1mL，例如约0至约100个/约1mL、约0至约10个/约1mL、约0至约3个/约1mL、约0至约1个/约1mL、约0至约0.5个/约1mL或约0至约0.1个/约1mL。在一些实施方案中，与处理之前第一液体中的治疗剂或诊断剂相比，在储存之后进行颗粒的溶解或重构使诊断或治疗剂(例如，蛋白质)的聚集体增加小于约10％(例如，小于约8％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％)。在其它实施方案中，与处理之前第一液体中的治疗剂或诊断剂相比，在储存之后进行颗粒的溶解或重构使诊断或治疗剂(例如，蛋白质)的片段增加小于约10％(例如，小于约8％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％)。在某些其它实施方案中，与颗粒形成之前的治疗剂或诊断剂相比，在储存之后进行颗粒的溶解或重构在诊断或治疗剂(例如，抗体或抗体片段)群体中提供小于约50％的电荷变体的变化(例如，小于约40％、约30％、约20％、约10％、约8％、约5％、约4％、约3％或约1％)。
在某些实施方案中，本公开的颗粒可悬浮在水性液体、有机液体、离子液体、凝胶或其组合中以形成悬浮制剂。用于悬浮的介质可还包括例如碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、抗菌剂、抗氧化剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、镇痛剂和/或营养培养基。在一些实施方案中，其它组分中的每一者独立地占培养基的约0.0001至约99％(w/v)，例如占约0.0001至约90％(w/v)、占约0.0001至约50％(w/v)、占约0.0001至约10％(w/v)、占约0.0001至约1％(w/v)或占约0.0001至约0.1％(w/v)。
对于水性悬浮制剂，高浓度海藻糖溶液可稳定悬浮液中的颗粒，并且防止过早溶解。糖如果吸附到颗粒表面上，则起到空间稳定剂的作用，但如果不吸收，则也可能起“拥挤”分子的作用。拥挤分子可通过增强消耗斥力而起作用。对于水中的其它拥挤剂也已描述了这种稳定效果，如(i)聚合物，例如PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸和羟乙基淀粉等(注意这些可单独或组合使用)；(ii)有机分子，例如N-甲基-2-吡咯烷酮(Miller等人，J.Pharm.Sci.,2012,101,3763-3778)，和(iii)糖类及糖醇类，如山梨糖醇、蔗糖和甘露糖醇等等。其它“拥挤剂”包括可以竞争水合水的盐，如硫酸铵，以及可以降低溶剂介电常数并产生排除体积效应的水溶性有机液体，如N-甲基吡咯烷酮(NMP)。在优选的实施方案中，拥挤剂是PEG 3350、葡聚糖40k或葡聚糖6k。
在一些实施方案中，悬浮液体(水性和非水性)中的表面活性剂充当电荷稳定剂。表面活性剂吸附在颗粒的表面上以控制它们之间的静电相互作用。在一些实施方案中在向悬浮液中添加表面活性剂时产生的排斥静电力足以阻止颗粒的显著聚集。表面活性剂还可阻止附着到容器上。在其它实施方案中，可将聚合物添加到悬浮液体中以充当空间稳定剂。
在某些实施方案中，治疗剂或诊断剂具有每单位约0.5至约1.0活性，例如每单位约0.75至约1.0活性或每单位约0.9至约1.0活性(例如，每单位约0.99活性)。
在某些优选的实施方案中，如本文所述的本公开涉及包含许多颗粒的高度浓缩的组合物，所述颗粒包含悬浮在低粘度药学上可接受的液体载体中的至少一种治疗性生物制剂，其中组合物在水、缓冲液或其它生理相关的水性液体(例如，患者体内的生物流体)中溶解时，与包含单体治疗性生物制剂的类似水性组合物相比具有基本上类似的浊度。术语“浊度”意指由在水、缓冲液或其它生理相关的水性液体(例如，患者体内的生物流体)中以所需浓度溶解后仍不溶的个别颗粒引起的流体的浑度或雾度。如本文所用，可应用在哺乳动物或人体内可能遇到的“生理相关”条件。技术人员将能够根据本文所述的组合物的最终应用确定最适合进行测试的条件组。在一些实施方案中，与包含单体治疗性生物制品的水性组合物相比，所述组合物在水性液体中溶解时具有基本上类似的浊度。在优选的实施方案中，组合物在水性液体中溶解时基本上没有浊度。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
在一些实施方案中，本公开的颗粒可重构成液体药物组合物以评估浊度或混浊性(USP<855>)。浊度可以以FTU(福尔马肼浊度单位)为单位进行测量。这是通过将样品的浊度与福尔马肼悬浮液的浊度进行比较来完成的。浊度也可以按比浊法(Nephelometric)浊度单位(NTU)进行测量，其中1NTU＝1FTU。在其它实施方案中，当将10mg颗粒溶解在1mL液体中时，浊度可在约0至约4000FTU、约0至约1000FTU、约0至约500FTU、约0至约50FTU、约0至约20FTU、约0至约10FTU、约0至约5FTU、约0至约1FTU、约0至约0.1FTU或约0至约0.01FTU之间。在某些实施方案中，组合物具有约0至约4000福尔马肼浊度单位(FTU)之间的浊度。在某些其它实施方案中，与包含单体形式的治疗性生物制剂的水性组合物相比，所述组合物在水性液体中溶解时具有基本上类似的浊度。在优选的实施方案中，组合物在水性液体中溶解时基本上没有浊度。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
在其它实施方案中，本公开涉及低浊度的高度浓缩组合物，其在非水性液体载体中包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸和许多包含治疗性生物制剂的颗粒。在优选的实施方案中，本公开涉及低浊度的高度浓缩组合物，其在油酸乙酯中包含海藻糖、精氨酸盐酸盐、琥珀酸钠、琥珀酸、柠檬酸、柠檬酸钠、组氨酸、组氨酸盐酸盐、氯化钠、羟丙基β-环糊精聚山梨醇酯、聚山梨醇酯80或脱水山梨糖醇单油酸酯以及许多包含抗体的颗粒。在某些优选的实施方案中，组合物在水、水性缓冲液或任何生理相关的水性液体中溶解时基本上没有浊度。
可以按多种方式以及例如PCT/US2017/063150、PCT/US2018/043774、PCT/US2019/033875和US62/799,696中公开的形成颗粒的任何方法来制备包含许多包含至少一种本文所述的治疗性生物制剂的颗粒的组合物，上述文献中的每一者特此以全文引用的方式并入。
本公开的方法
本文所述的方法通常提供用于形成颗粒，方法包括：a)提供包含第一液体和剂的液滴；b)使液滴与第二液体接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，从而形成包含剂的颗粒，其中在移除第一和第二液体后，颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。如本文所公开，剂可以是治疗剂或诊断剂。在某些实施方案中，治疗剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。在某些优选的实施方案中，治疗剂是治疗性生物制剂。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。在其它实施方案中，第一液体含有产生用于非治疗或非诊断用途的颗粒的剂。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于约25％的内部空隙空间，例如在移除第一和第二液体后，内部空隙空间小于约24％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒可包括小于10％的内部空隙空间、在移除第一和第二液体后包括小于5％的内部空隙空间、在移除第一和第二液体后包括小于1％的内部空隙空间、在移除第一和第二液体后包括小于0.1％的内部空隙空间或在移除第一和第二液体后包括小于0.01％的内部空隙空间。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒的圆形度为至少约10％，例如在移除第一和第二液体后圆形度为至少约20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或约100％。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为至少约88％。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为至少约90％。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为至少约93％。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为至少约97％。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒的圆形度为约0.10至约1.00，例如在移除第一和第二液体后圆形度为约0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.88至约1.00。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.93至约1.00。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.97至约1.00。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒的球形度为至少约50％，例如在移除第一和第二液体后球形度为至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或约100％。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒的球形度为约0.10至约1.00，例如在移除第一和第二液体后球形度为约0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的球形度为约1.00。
在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的球形度可在约0.10至约1.00的范围内，例如在移除第一和第二液体后球形度为至少约0.20、约0.40、约0.60或约0.80至约1.00。
在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有基本上平滑的表面。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径在约0.1至约1000μm之间，例如在移除第一和第二液体后颗粒的直径为约0.1至约900、800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、45、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3或约0.2μm。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径在约1至约100μm之间，例如在移除第一和第二液体后颗粒的直径为约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50至约100μm。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径在约4至约100μm之间。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径在约10至约100μm之间。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径在约20至约50μm之间。在某些优选的实施方案中，有意地控制颗粒的直径。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径为约0.1至约1000μm，例如在移除第一和第二液体后颗粒的直径为约1至约400μm、约1至约200μm、约1至约100μm、约1至约50μm、约1至约25μm、约1至约10μm、约10至约100μm、约50至约100μm、约50至约75μm或约75至约100μm。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径为约1至约100μm，例如在移除第一和第二液体后颗粒的直径为约4至约100μm、约10至约100μm或约20至约50μm。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约10％的表面活性剂含量，例如在移除第一和第二液体后表面活性剂含量按质量计小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有任何表面活性剂含量。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒的表面活性剂含量为0至10重量％，例如在移除第一和第二液体后表面活性剂含量为0至5重量％、0至3重量％、0至2重量％、0至1重量％、0至0.5重量％、0至0.2重量％、0至0.1重量％、0至0.01重量％或0至0.001重量％。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒表现出的骨架密度为约1.00至约6.00g/cm3，例如在移除第一和第二液体后骨架密度为约1.00至约5.00g/cm3、约1.00至约3.00g/cm3、约1.00至约2.00g/cm3、约1.00至约1.50g/cm3、约1.30至约1.50g/cm3、约1.32至约1.50g/cm3或约1.10至约1.40g/cm3。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒表现出的骨架密度为约0.10至约5.00g/cm3，例如在移除第一和第二液体后骨架密度为约0.10至约2.50g/cm3、约0.10至约1.40g/cm3、约0.50至约1.40g/cm3或约1.00至约1.40g/cm3。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约0.09至约1.60g/cm3的骨架密度。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒具有约1000mg/mL至约1500mg/mL的骨架密度，例如在移除第一和第二液体后骨架密度为约1050mg/mL至约1500mg/mL、约1100mg/mL至约1500mg/mL、约1150mg/mL至约1500mg/mL、约1200mg/mL至约1500mg/mL、约1250mg/mL至约1500mg/mL、约1300mg/mL至约1500mg/mL、约1310mg/mL至约1500mg/mL、约1320mg/mL至约1500mg/mL、约1330mg/mL至约1500mg/mL、约1340mg/mL至约1500mg/mL、约1350mg/mL至约1500mg/mL、约1360mg/mL至约1500mg/mL、约1370mg/mL至约1500mg/mL、约1380mg/mL至约1500mg/mL、约1390mg/mL至约1500mg/mL、约1400mg/mL至约1500mg/mL、约1410mg/mL至约1500mg/mL、约1420mg/mL至约1500mg/mL、约1430mg/mL至约1500mg/mL、约1440mg/mL至约1500mg/mL、约1450mg/mL至约1500mg/mL、约1460mg/mL至约1500mg/mL、约1470mg/mL至约1500mg/mL、约1480mg/mL至约1500mg/mL或约1490mg/mL至约1500mg/mL。
在一些实施方案中，颗粒的特征可在于在移除第一和第二液体后，玻璃化转变温度为约0℃至250℃，例如在移除第一和第二液体后，玻璃化转变温度为约34℃至200℃、约50℃至200℃、约60℃至200℃、约40至约160℃、约50至约110℃、约60至约100℃或约75至约80℃。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约40至约160℃的玻璃化转变温度。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约50至约110℃的玻璃化转变温度。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。还在其它实施方案中，颗粒被加热到颗粒在干燥期间的玻璃化转变温度的约±30℃，例如约±20、±10、±5、±1℃。
在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
在其它实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。在某些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或其组合。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于20％的治疗性生物制剂的聚集或小于20％的治疗性生物制剂的片段化，例如在移除第一和第二液体后，治疗性生物制剂的聚集或片段化小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于10％的治疗性生物制剂的聚集或小于10％的治疗性生物制剂的片段化，例如在移除第一和第二液体后，治疗性生物制剂的聚集或片段化小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约3％至约1％的治疗性生物制剂的聚集。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约1％至约0.5％的治疗性生物制剂的聚集。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何聚集。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于约1％的治疗性生物制剂的片段化。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何片段化。
在其它实施方案中，与颗粒形成之前的治疗剂或诊断剂相比，在移除第一和第二液体后，颗粒形成的过程在诊断或治疗剂(例如，抗体或抗体片段)群体中提供小于50％的电荷变体的变化(例如，在移除第一和第二液体后，电荷变体的变化小于40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％或1％)。在某些实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于约50％的治疗性生物制剂的电荷变体的变化，例如在移除第一和第二液体后，电荷变体的变化小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％。在优选的实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约3％残留的第一和第二液体，例如在移除第一和第二液体后，按质量计剩下小于约2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％或0.001％残留的第一和第二液体。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约3％的残留水分。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约2％的残留水分。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约1％的残留水分。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.1％残留的第一和第二液体。在一些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.01％残留的第一和第二液体。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.001％残留的第一和第二液体。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒按质量计基本上没有任何残留的第一和第二液体。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂，例如在移除第一和第二液体后，治疗性生物制剂按重量计超过约65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
如本文所述，颗粒可包括核和壳两者。在一些实施方案中，颗粒不包括壳。在一些实施方案中，当不存在壳时，核是凝胶核或干固态核，但当颗粒包括凝胶壳或干固态壳时，核可以以液态存在。在其它实施方案中，颗粒的形态为近似球形、蘑菇状或葡萄干状，以及可能的其它形态，这取决于颗粒形成的条件。在某些实施方案中，颗粒表面可具有皱纹或锯齿状部分。当使用具有核-壳结构的颗粒时，单独的层可包括相同或不同的剂，例如治疗剂或诊断剂，或者根本没有剂。此外，具有相同剂(例如，治疗剂或诊断剂)的层可以包括或可以不包括相同浓度的剂。
在一些实施方案中，干燥后的颗粒中的第一液体的残留量按重量计为约0至1约0％，例如按重量计约0至约5％、按重量计约0至约3％、按重量计约0至约1％、按重量计约0.01至约5％、按重量计约0.01至约3％或按重量计约0.01至约1％。测量残留溶剂含量的示例性方法包括卡尔费休滴定法、顶空气相色谱质谱法和各种失重方法。在其它实施方案中，干燥后的颗粒中的第二液体的残留量按重量计为约0至约10％，例如按重量计约0至约5％、按重量计约0至约3％、按重量计约0至约1％、按重量计约0.01至约5％、按重量计约0.01至约3％或按重量计约0.01至约1％。测量残留溶剂含量的示例性方法包括卡尔费休滴定法、顶空气相色谱质谱法和各种失重方法。在某些实施方案中，干燥后的颗粒中的一种或多种壳液体的残留量按重量计为约0至约10％，例如按重量计约0至约5％、按重量计约0至约3％或按重量计约0至约1％。测量残留溶剂含量的示例性方法包括卡尔费休滴定法、顶空气相色谱质谱法和各种失重方法。
在其它实施方案中，颗粒具有任一极性的残留净电荷，即净正电荷或净负电荷。就量值而言，颗粒可具有约0至约100亿电荷，例如约0至约1亿电荷、约0至约1百万电荷、约0至约1万电荷或约0至约100电荷。电荷的量值被定义为由电子携带的电荷的量值，即基本电荷1.6x10-19库仑。测量颗粒电荷的示例性方法包括涉及分析颗粒响应于外部施加的电场的运动(例如，电迁移率)的方法。在一些实施方案中，测量可以在颗粒悬浮于诸如油的绝缘液体中时进行。在某些实施方案中，治疗剂或诊断剂具有约-90至约90mV的ζ电位；例如约-60至约60mV、约-40至约40mV、约-20至约20mV或约-5至约5mV。测量ζ电位的示例性方法包括通过将颗粒溶解在水中来重构治疗剂或诊断剂，并通过电泳光散射来分析溶液，类似于在正电场或负电场存在下进行的动态光散射(DLS)测量。
在某些实施方案中，颗粒的主要组分(例如，剂)在颗粒形成过程期间的特征在于佩克莱特数为约0至约10，例如约0至约9、约0至约8、约0至约7、约0至约6、约0至约5、约0至约4、约0至约3、约0至约2、约0至约1、约0至约0.5、约0至约0.25或约0至约0.1。在某些其它实施方案中，颗粒的主要组分(例如，剂)在颗粒形成过程期间的特征可在于剂的平均扩散率为约0至约10,000μm2/s，例如约0至约1,000μm2/s、约0至约100μm2/s、约0至约50μm2/s、约0至约25μm2/s、约0至约10μm2/s、约0至约5μm2/s、约0至约2.5μm2/s或约0至约1μm2/s。
在一些实施方案中，颗粒可以是可流动的。豪斯纳比率可以为约1.0至大于约3.0，例如约1.0至约3.0、约1.0至约2.0、约1.0至约1.70(例如，非常差)、约1.0至约1.59、约1.0至约1.35、约1.0至约1.25或约1.0至约1.11(例如，极好)。测量粉末的流动性的示例性方法包括振实密度法(Carr R.L.Chem.Eng.，1965；72:163-168)。可首先通过将已知质量的粉末添加到量筒中来获得堆积密度。密度可以被计算为质量/体积。然后可以将同一样品机械振实，直至观察不到进一步的体积变化。然后可以将振实密度计算为粉末的质量除以最终体积。振实密度和堆积密度的比较可用于衡量粉末流动的能力。在其它实施方案中，豪斯纳比率(未沉降的表观体积或堆积体积V0除以最终的振实体积Vf)是产品沉降能力的量度，并且允许评估颗粒间相互作用的相对重要性。这些相互作用在自由流动的粉末中不那么显著。这类自由流动粉末的堆积密度和振实密度值接近，使得豪斯纳比率接近于约1.0。
在其它实施方案中，颗粒具有以下特征中的一项或多项：尺寸为约1至约50μm；固体核；凝胶或固体壳；密度为约1至约1.5g/cm3；残留溶剂含量为约0至约5重量％；孔隙率为约0至约10％；约0至约100万电荷的任一极性的净电荷，即正电荷或负电荷；ζ电位为约-60至约60mV的治疗或诊断组分；重构时SvP为每mL约0至约1,000,000个；治疗剂或诊断剂负载量为约50至约100重量％，其中重构后治疗剂或诊断剂的活性为约0.9至约1.0；表面活性剂负载量为约0至约3重量％；颗粒形成过程期间主要组分(例如，剂)的佩克莱特数为约1或更小；颗粒形成过程期间主要组分(例如，剂)的扩散率为约500μm2/s或更小；重构后聚集体小于约10％；重构后片段小于约10％；和/或豪斯纳比率在约1.0与约1.35之间或约1.0与约1.11之间。
术语“核-壳形态”是指具有包含不同组分和/或组分浓度的多个层的形态。包括一种或多种剂的“干”颗粒组分(即，干核或干壳)已经历干燥步骤或一系列干燥步骤，使得其水分或溶剂含量相对于任何干燥之前显著减少。如本文所述，颗粒可具有核-壳形态，其中壳可包括多个层。在某些实施方案中，核是固体、凝胶或液体。在一些实施方案中，壳是凝胶，特别是水凝胶、离子凝胶或有机凝胶。在其它实施方案中，壳是结晶的或半结晶的。在优选的实施方案中，颗粒具有包括核和壳的形态。
在一些实施方案中，颗粒具有包括核和壳的形态，其中壳可包括多个层。在某些实施方案中，核是固体、凝胶或液体。在一些实施方案中，壳是凝胶，特别是水凝胶、离子凝胶或有机凝胶。示例性的水凝胶、离子凝胶和有机凝胶包括胶原水凝胶、壳聚糖水凝胶、甲基纤维素水凝胶、葡聚糖水凝胶、海藻酸盐水凝胶、琼脂糖水凝胶、聚(甲基丙烯酸甲酯)水凝胶、聚(酰胺胺)水凝胶、聚(乙烯亚胺)水凝胶、聚环氧乙烷水凝胶、明胶水凝胶、透明质酸水凝胶、4-叔丁基-1-芳基环己醇有机凝胶、L-赖氨酸衍生物有机凝胶、聚(乙二醇)有机凝胶、聚碳酸酯有机凝胶、聚酯有机凝胶、聚烯烃有机凝胶、草酰胺衍生物有机凝胶或其组合。
颗粒核：每个颗粒的核通常包括一种或多种治疗剂或诊断剂。当不存在壳时，核是固态干核或凝胶，但当颗粒包括凝胶壳或固态干壳时，核可以以液态存在。当存在壳时，壳可以包括治疗剂或诊断剂，而核可以不包括。
颗粒壳：一般地，任何赋形剂均适合作为壳物质。示例性赋形剂包括但不限于糖、盐和氨基酸。治疗剂、诊断剂和生物相容性聚合物也可用于形成壳。这包括小分子药物。亲水生物相容性聚合物的非限制性实例包括聚(乙烯醇)、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酰胺)、聚(环氧乙烷)或它们中的任意两种或更多种的共聚物或组合。可以对亲水聚合物进行改性以调节它们的特性。壳组分可替代地或另外地包括一种或多种生物相容性疏水聚合物。可以对疏水性聚合物进行改性以调节它们的特性。疏水聚合物的非限制性实例包括聚己内酰胺、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚己内酯、PLGA或它们中任意两种或更多种的共聚物或组合。在一些实施方案中，PLGA(50:50)聚合物用作壳以包封治疗剂，例如抗体或抗体片段，其量刚好低于其溶解度极限。聚合物也可根据各种乳酸-乙醇酸比率的PLGA制备，以及为与其它聚合物(例如，壳聚糖、纤维素等)的共聚物。
在一些实施方案中，颗粒壳的厚度可在颗粒的直径的约0至约90％范围内。壳不必是均匀完全成形的以用于包封。在其它实施方案中，壳与核之间的界面部分混杂，使得不存在清晰的分界线。如本文所述的一种或多种治疗剂或诊断剂可包括在颗粒壳中。还在其它实施方案中，治疗剂或诊断剂可以与核中的那些相同或不同。在某些其它实施方案中，壳中的治疗剂或诊断剂的浓度可在约0.0001至约2000mg/mL的范围内(或治疗剂或诊断剂的结晶密度，如果更高的话)。
核-壳比：对于其中颗粒包括壳的那些实施方案，预期核-壳体积比在约1:99体积％与约99:1％之间最有用，例如约10:90体积％或约90:10体积％或约95:5体积％。充分包封并不总是需要完全覆盖。在某些实施方案中，例如对于高度浓缩的核，厚壳可能是有益的。在一些实施方案中，核-壳比可用于调节一种或多种治疗剂或诊断剂的释放动力学。在其它实施方案中，具有多分散体系可能是有利的，例如用于降低包含颗粒的药物悬浮制剂的粘度。在这种情况下，多种核-壳比可值得关注。
液滴
可通过本领域中已知的若干技术中的任一种来形成如本文所述的液滴。这些包括旋转雾化、气动雾化、超声雾化、声波雾化、振动网雾化、喷射雾化、微流体液滴生成、流动聚焦、膜乳化、电喷雾或均质化。术语“液滴(droplet/droplets/drops)”是指具有液体外表面的物质。在某些实施方案中，步骤a)的液滴通过电喷雾、超声雾化器或微流体装置形成。在优选的实施方案中，步骤a)的液滴在微流体装置中形成。在某些优选的实施方案中，在微流体装置中形成的液滴在微流体装置中规则地间隔开。
术语“进料溶液”是指治疗剂或诊断剂在第一液体中的制剂，其为溶液、浆液或一些其它液体形式。在一些实施方案中，制剂含有赋形剂。在其它实施方案中，制剂还含有缓冲剂。
在一些实施方案中，第一液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶或其组合。在其它实施方案中，第一液体是水性的。在某些实施方案中，第一液体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、缓冲液、右旋糖5％或其组合。在某些其它实施方案中，缓冲液是乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲盐水、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、二甲胂酸盐缓冲液、甲酸铵缓冲液、尿素溶液或其组合。在优选的实施方案中，第一液体是水。
在其它实施方案中，有机液体是丙酮、乙腈、无环烷烃(例如，己烷、庚烷、戊烷)、乙酸戊酯、丁醇、乙酸丁酯、氯苯、氯仿、枯烯、环己烷、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、二乙醚、二甲氧基乙烷、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、1,4-二噁烷、乙醇、2-乙氧基乙醇、乙酸乙酯、硝酸乙酯、乙二醇、肼、异丙醇、甲醇、乙酸甲酯、2-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、甲基乙基酮、甲基吡咯烷酮、甲基叔丁基醚、硝基甲烷、丙醇、乙酸丙酯、环丁砜、丙二醇、四氢呋喃、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烷、三乙胺、二甲苯、苯甲酸苄酯、乳酸乙酯、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、糖原质、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯、乙酸辛酯、乙醇、丁醇、辛醇、癸醇、二甘醇二甲醚、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、甘油三酯、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨醇酯、乙醇胺、丙酸、三醋精、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、甲酸乙酯、乙酸乙基己酯、丁香酚、丁香花蕾油、二乙二醇单醚、异山梨醇二甲醚、乙酸异丙酯、甲基异丁基酮、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、2-吡咯烷酮、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、己酸、辛酸、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、碳酸亚丙酯、辛醇、己醇、脱水山梨糖醇单油酸酯、n-乙酰色氨酸、丙酮缩甘油、乙酸烷基酯、乙酸芳基酯、乙酸芳基烷基酯、乙酸甲苯酯、乙酸苄酯、聚山梨醇酯80、乙酸苯乙酯、乙酸苯酯、甘油或其组合。在其它实施方案中，第一液体是油。在某些实施方案中，油是椰子油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化植物油、莱姆油(lime oil)、橄榄油、棕榈籽油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、核桃油、硅油、矿物油或其组合。还在其它实施方案中，第一液体是离子液体。在某些其它实施方案中，离子液体含有(i)阳离子，如吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍；和(ii)阴离子，如卤离子、硫酸根、磺酸根、碳酸根、磷酸根、碳酸氢根、硝酸根、乙酸根、PF6-、BF4-、三氟甲烷磺酸根、全氟丁基磺酸根、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸根、七氟丁酸根、卤代铝酸根或其组合。
在某些实施方案中，第一液体是水凝胶、离子凝胶或其组合。示例性水凝胶由聚合物制备，如胶原、壳聚糖、甲基纤维素、葡聚糖、海藻酸盐、琼脂糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(酰胺胺)、聚(乙烯亚胺)、聚环氧乙烷、明胶、透明质酸或其组合，并且可以含有水、水溶液和其它极性溶剂。示例性有机凝胶由有机胶凝剂制备，如4-叔丁基-1-芳基环己醇、L-赖氨酸衍生物、聚(乙二醇)、聚碳酸酯、聚酯、聚烯烃、含有烷基酯基团的草酰胺衍生物或低分子量化合物如脂肪酸和正烷烃，并且含有非极性溶剂相。离子凝胶类似于有机凝胶，不同之处在于溶剂相是离子液体。
在一些实施方案中，如本文所述的第一液体中的治疗剂的浓度为约10mg/mL至约650mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625mg/mL至约650mg/mL；约20mg/mL至约625mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600mg/mL至约625mg/mL；约20mg/mL至约600mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575mg/mL至约600mg/mL；约20mg/mL至约575mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550mg/mL至约575mg/mL；约20mg/mL至约550mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525mg/mL至约550mg/mL；约20mg/mL至约525mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500mg/mL至约525mg/mL；约20mg/mL至约500mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475mg/mL至约500mg/mL；约20mg/mL至约475mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450mg/mL至约475mg/mL；约20mg/mL至约450mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425mg/mL至约450mg/mL；约20mg/mL至约425mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400mg/mL至约425mg/mL；约20mg/mL至约400mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375mg/mL至约400mg/mL；约20mg/mL至约375mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350mg/mL至约375mg/mL；约20mg/mL至约350mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325mg/mL至约350mg/mL；约20mg/mL至约325mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300mg/mL至约325mg/mL；或约20mg/mL至约300mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275mg/mL至约300mg/mL。在其它实施方案中，第一液体中的治疗剂的浓度为约10mg/mL至约500mg/mL。在某些实施方案中，第一液体中的治疗剂的浓度为约10mg/mL至约100mg/mL。在优选的实施方案中，第一液体中的治疗剂的浓度为约20mg/mL至约100mg/mL。在本公开的其它实施方案中，第一液体中的治疗剂或诊断剂的浓度为约0.0001至约1000mg/mL，例如约100至约800、约200至约700、约200至约600或约300至约700mg/mL。还在其它实施方案中，颗粒具有约1％至约100％的治疗剂或诊断剂质量负载量。
在其它实施方案中，第一液体具有小于约200mPa·s、小于约150mPa·s、小于约125mPa·s、小于约100mPa·s、小于约75mPa·s、小于约75mPa·s、小于约70mPa·s、小于约65mPa·s、小于约60mPa·s、小于约55mPa·s、小于约50mPa·s、小于约45mPa·s、小于约40mPa·s、小于约35mPa·s、小于约30mPa·s、小于约25mPa·s、小于约20mPa·s、小于约19mPa·s、小于约18mPa·s、小于约17mPa·s、小于约16mPa·s、小于约15mPa·s、小于约14mPa·s、小于约13mPa·s、小于约12mPa·s、小于约11mPa·s、小于约10mPa·s、小于约9.5mPa·s、小于约9mPa·s、小于约8.5mPa·s、小于约8mPa·s、小于约7.5mPa·s、小于约7mPa·s、小于约6.5mPa·s、小于约6mPa·s、小于约5.5mPa·s、小于约5mPa·s、小于约4.5mPa·s、小于约4mPa·s、小于约3.5mPa·s、小于约3mPa·s、小于约2.5mPa·s、小于约2mPa·s、小于约1.5mPa·s、小于约1mPa·s、小于约0.5mPa·s、小于约0.1mPa·s、小于约0.05mPa·s或小于约0.01mPa·s(一毫帕斯卡-秒)的粘度。在其它实施方案中，第一液体具有约0.01mPa·s至约10,000mPa·s，例如约0.01mPa·s至约1,000mPa·s、约0.01mPa·s至约100mPa·s、约0.01mPa·s至约50mPa·s、约0.01mPa·s至约25mPa·s、约0.01mPa·s至约10mPa·s、约0.01mPa·s至约5mPa·s或约0.01mPa·s至约1mPa·s的粘度。在某些实施方案中，第一液体具有可在约0.27mPa·s至约200mPa·s的范围内，例如约0.27mPa·s至约50mPa·s、约1mPa·s至约30mPa·s或约20mPa·s至约50mPa·s的粘度。还在其它实施方案中，第一液体具有在约0.27mPa·s至约200mPa·s的范围内，例如约0.27mPa·s至约100mPa·s、约0.27mPa·s至约50mPa·s、约0.27mPa·s至约30mPa·s、约1mPa·s至约20mPa·s或约1mPa·s至约15mPa·s的粘度。控制粘度的方法包括温度调节和粘度调节添加剂。液体的混合物也可用于控制粘度。
在一些实施方案中，第一液体具有约0.01至约10,000mPa·s的粘度。在其它实施方案中，第一液体具有小于约100mPa·s的粘度。还在其它实施方案中，第一液体具有小于约10mPa·s的粘度。在某些其它实施方案中，第一液体具有小于约3mPa·s的粘度。在某些实施方案中，第一液体具有小于约0.9mPa·s的粘度。在优选的实施方案中，第一液体具有小于约0.5mPa·s的粘度。
在某些实施方案中，第一液体还包含表面活性剂。
在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯或卵磷脂。在优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨酯20或聚山梨酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。
在其它实施方案中，第二液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶、蛋白质稳定剂或其组合。在一些实施方案中，第二液体是水性的。在优选的实施方案中，第二液体是有机溶剂。
在一些实施方案中，有机溶剂是苄醇、苯甲酸苄酯、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化棕榈籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、植物油、核桃油、聚乙二醇、糖原质、丙酮、二甘醇二甲醚、二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚、乳酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、甲基异丁基酮、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、2-吡咯烷酮、甘油三酯、四氢糠醇、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯(例如，
Figure BDA0003192505500000961
810和
Figure BDA0003192505500000962
812N)、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯(例如，
Figure BDA0003192505500000963
840)、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯或其组合。在某些实施方案中，有机溶剂是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
还在其它实施方案中，有机溶剂是丙酮、乙腈、无环烷烃(例如，己烷、庚烷、戊烷)、乙酸戊酯、丁醇、乙酸丁酯、氯苯、氯仿、枯烯、环己烷、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、二乙醚、二甲氧基乙烷、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、1,4-二噁烷、乙醇、2-乙氧基乙醇、乙酸乙酯、硝酸乙酯、乙二醇、肼、异丙醇、甲醇、乙酸甲酯、2-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、甲基乙基酮、甲基吡咯烷酮、甲基叔丁基醚、硝基甲烷、丙醇、乙酸丙酯、环丁砜、丙二醇、四氢呋喃、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烷、三乙胺、二甲苯、苯甲酸苄酯、乳酸乙酯、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、糖原质、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯、乙酸辛酯、乙醇、丁醇、辛醇、癸醇、二甘醇二甲醚、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、甘油三酯、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨醇酯、乙醇胺、丙酸、三醋精、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、甲酸乙酯、乙酸乙基己酯、丁香酚、丁香花蕾油、二乙二醇单醚、异山梨醇二甲醚、乙酸异丙酯、甲基异丁基酮、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、2-吡咯烷酮、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、己酸、辛酸、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、碳酸亚丙酯、辛醇、己醇、脱水山梨糖醇单油酸酯、n-乙酰色氨酸、丙酮缩甘油、乙酸烷基酯、乙酸芳基酯、乙酸芳基烷基酯、乙酸甲苯酯、乙酸苄酯、聚山梨醇酯80、乙酸苯乙酯、乙酸苯酯、甘油或其组合。
在某些实施方案中，有机溶剂是乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、枯烯、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二噁烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、甲基异丁基酮、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢呋喃、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯、二甲苯、乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲乙酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯、三乙胺、1,1-二乙氧基丙烷、1,1-二甲氧基甲烷、2,2-二甲氧基丙烷、异辛烷、异丙醚、甲基异丙基酮、甲基四氢呋喃、石油醚、三氯乙酸、三氟乙酸、癸醇、乙酸2-乙基己酯、乙酸戊酯或其组合。
在一些实施方案中，第二液体是离子液体。在某些实施方案中，第二液体是蛋白质稳定剂。
在其它实施方案中，第二液体具有小于约200mPa·s、小于约150mPa·s、小于约125mPa·s、小于约100mPa·s、小于约75mPa·s、小于约75mPa·s、小于约70mPa·s、小于约65mPa·s、小于约60mPa·s、小于约55mPa·s、小于约50mPa·s、小于约45mPa·s、小于约40mPa·s、小于约35mPa·s、小于约30mPa·s、小于约25mPa·s、小于约20mPa·s、小于约19mPa·s、小于约18mPa·s、小于约17mPa·s、小于约16mPa·s、小于约15mPa·s、小于约14mPa·s、小于约13mPa·s、小于约12mPa·s、小于约11mPa·s、小于约10mPa·s、小于约9.5mPa·s、小于约9mPa·s、小于约8.5mPa·s、小于约8mPa·s、小于约7.5mPa·s、小于约7mPa·s、小于约6.5mPa·s、小于约6mPa·s、小于约5.5mPa·s、小于约5mPa·s、小于约4.5mPa·s、小于约4mPa·s、小于约3.5mPa·s、小于约3mPa·s、小于约2.5mPa·s、小于约2mPa·s、小于约1.5mPa·s、小于约1mPa·s、小于约0.5mPa·s、小于约0.1mPa·s、小于约0.05mPa·s或小于约0.01mPa·s(一毫帕斯卡-秒)的粘度。在其它实施方案中，第二液体具有约0.01mPa·s至约10,000mPa·s，例如约0.01mPa·s至约1,000mPa·s、约0.01mPa·s至约100mPa·s、约0.01mPa·s至约50mPa·s、约0.01mPa·s至约25mPa·s、约0.01mPa·s至约10mPa·s、约0.01mPa·s至约5mPa·s或约0.01mPa·s至约1mPa·s的粘度。在某些实施方案中，第二液体具有可在约0.27mPa·s至约200mPa·s的范围内，例如约0.27mPa·s至约50mPa·s、约1mPa·s至约30mPa·s或约20mPa·s至约50mPa·s的粘度。还在其它实施方案中，第二液体具有在约0.27mPa·s至约200mPa·s的范围内，例如约0.27mPa·s至约100mPa·s、约0.27mPa·s至约50mPa·s、约0.27mPa·s至约30mPa·s、约1mPa·s至约20mPa·s或约1mPa·s至约15mPa·s的粘度。控制粘度的方法包括温度调节和粘度调节添加剂。液体的混合物也可用于控制粘度。
在某些实施方案中，第二液体还包含表面活性剂。还在其它实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
在一些实施方案中，第二液体具有约0.01至约10,000mPa·s的粘度。在其它实施方案中，第二液体具有小于约10mPa·s的粘度。还在其它实施方案中，第二液体具有小于约5mPa·s的粘度。在某些其它实施方案中，第二液体具有小于约2mPa·s的粘度。在某些实施方案中，第二液体具有小于约0.70mPa·s的粘度。在优选的实施方案中，第二液体具有小于约0.40mPa·s的粘度。
如本文所述的液滴可包括第一液体和一种或多种剂，例如治疗和/或诊断剂。在某些实施方案中，治疗剂是治疗性生物制剂。还在其它实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。在某些其它实施方案中，第一液体中的剂(例如，治疗剂或诊断剂)的浓度可在约0.0001至约1000mg/mL的范围内，例如约100至约900mg/mL、约200至约800mg/mL、约200至约700mg/mL、约200至约600mg/mL或约300至约500mg/mL。
在一些实施方案中，第一液体是水性或有机溶剂，且第二液体是油、水性或离子液体。在其它实施方案中，第一液体和/或第二液体具有约0.01mPa·s至约10,000mPa·s的粘度。在某些实施方案中，第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物，其中混合物包括与第一液体具有不同溶解度的液体。还在其它实施方案中，第一液体或第二液体还包括碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基或其组合。术语“极性(polarity/polarities)”是指溶剂的总体溶剂化能力(溶剂化力)，其又取决于溶质离子或分子与溶剂分子之间的所有可能的非特异性和特异性分子间相互作用的作用，然而不包括导致溶质分子的离子发生明确的化学变化的那些相互作用(Chem.Rev.，1994，94，2319-2358)。溶剂极性的预测可根据它们的介电常数进行。具有高介电常数的溶剂被认为是极性较大的，而具有低介电常数的那些被认为是极性较小或非极性的(<～15)。
在其它实施方案中，其它组分中的每一者独立地为第一液体的约0.0001至约99％(w/v)，例如约0.0001至约90％(w/v)、约0.0001至约50％(w/v)、约0.0001至约10％(w/v)、约0.0001至约1％(w/v)或约0.0001至约0.1％(w/v)。在某些实施方案中，第一液体、第二液体或培养基中存在的另外的化合物(即，赋形剂)的量如表2中所示。
表2
Figure BDA0003192505500001001
Figure BDA0003192505500001011
在一些实施方案中，第二液体中的液滴表面上的内聚力(例如，界面张力)将液滴拉成球形，该球形在干燥过程期间得以保持。在其它实施方案中，颗粒的球形度在约0.1至约1的范围内，例如至少约0.2、约0.4、约0.6或约0.8。在某些实施方案中，过程可产生具有高球形度(约>0.9)和圆度或圆形度的均匀颗粒。测量颗粒球形度的方法包括对颗粒的扫描电子显微照片进行图像分析，其中基于颗粒投影到图像平面上的截面形状来计算平均圆度。可以扩展这类圆度或圆形度因子以确认相应的球形度。
在其它实施方案中，液滴具有核-壳形态，其中第一液体(液滴“核”)被一个或多个另外液体的同心层(液滴“壳”)包围，其中的每一层可以或可以不由独特的组分组和/或独特的组分浓度限定。每种壳液体可以是水性液体、有机液体、油、离子液体或其组合，并且包括一种或多种剂，例如治疗剂或诊断剂。壳液体中的剂(例如，治疗剂或诊断剂)的浓度可以在约0.0001至约1000mg/mL的范围内，例如约100至约900mg/mL、约200至约800mg/mL、约200至约700mg/mL、约200至约600mg/mL或约300至约500mg/mL。壳液体可还包括例如碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、抗菌剂、抗氧化剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、镇痛剂和/或营养培养基。
在一些实施方案中，第一液体和/或壳液体中的表面活性剂阻止液滴聚结。在其它实施方案中，寡肽赋形剂、蛋白质赋形剂和/或剂本身(例如，治疗剂或诊断剂)充当表面活性剂。在其它实施方案中，一个或多个壳层是水凝胶、离子凝胶、有机凝胶或其一些组合。
在某些实施方案中，液滴是带电荷的。作为瑞利极限的一部分，液滴可平均带电约0至约1，例如约0.1至约1.0、约0.2至约1.0、约0.3至约1.0、约0.4至约1.0或约0.5至约1.0。在一些实施方案中，带电有助于化解液滴聚结和/或控制所关注的各种颗粒特性。这些包括但不限于选定组分的形态、表面化学和结晶度。术语“瑞利极限”是指对应于库仑斥力克服液滴中的表面张力的结合力、导致库仑裂变或电荷通过一些其它机制从液滴中脱除的点的比电荷，例如以库仑/千克为单位。
在一些实施方案中，步骤a)的液滴在微流体装置中形成，例如其中形成的液滴规则地间隔开。液滴流过装置的时间可足以使颗粒形成。
在其它实施方案中，第二液体的密度介于液滴的密度与颗粒的密度之间。液滴漂浮在第二液体上，但形成的颗粒不在第二液体上漂浮。第一液体蒸发以干燥液滴。在某些实施方案中，第二液体的密度大于液滴的密度。形成的液滴和颗粒漂浮在第二液体上。第一液体蒸发以干燥液滴。还在其它实施方案中，第二液体的密度低于液滴的密度，并且液滴不在第二液体上漂浮。第一液体分散到第二液体中以干燥液滴。
颗粒的形成
可通过将包括第一液体的液滴放置成与促成移除第一液体的第二液体接触来形成如本文所述的颗粒。在一些实施方案中，液滴在单独的介质中形成，之后放置成与第二液体接触，例如通过将它们滴入到第二液体中或喷射到第二液体之上。在其它实施方案中，液滴在第二液体内形成，使得它们立即发生接触。当在第一液体被移除时，液滴的至少一小部分组分开始经历沉淀或相分离时，颗粒形成开始发生。在优选的实施方案中，在使液滴与第二液体接触后，液滴被干燥。
在一些实施方案中，在第一液体例如通过扩散过程分散在整个第二液体中之后形成颗粒。在其它实施方案中，第二液体可与第一液体具有不同程度的混溶性，并且相对于颗粒的组分或颗粒的一小部分组分(例如，治疗剂或诊断剂)代表弱的或可忽略的增溶介质。在制备的时间框架内或在制备条件下，剂(例如，治疗剂或诊断剂)相对于第一液体而言在第二液体中通常难溶，例如难溶至少约5、10、100或约1000倍。还在其它实施方案中，第二液体是水性液体、有机液体、油、离子液体或其组合。第二液体可还包括碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、抗菌剂、抗氧化剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、镇痛剂、营养培养基或其组合。示例性水性液体可含有稳定剂，例如拥挤剂。在某些实施方案中，这些溶液包括赋形剂，如盐(例如，氯化钠)、糖类和糖醇类(例如，山梨糖醇、葡聚糖40、葡聚糖6000或海藻糖)、聚合物(例如，PEG 3350、PEG 300、PEG 8000、PEG 20k、聚蔗糖400、聚蔗糖70或聚乙烯吡咯烷酮，例如聚维酮)、蛋白质(例如，人血清白蛋白或牛血清白蛋白)或其组合。还在其中第一和第二液体是水性的其它实施方案中，经由液滴的渗透干燥获得颗粒。在某些实施方案中，用于干燥颗粒的第二液体包括高浓度的溶质，例如至少约0.03osmol、至少约0.2osmol、至少约1.0osmol或至少约1.2osmol。
在其它实施方案中，第二液体中的表面活性剂有助于阻止液滴聚结。在某些实施方案中，寡肽赋形剂、蛋白质赋形剂、剂本身(例如，治疗剂或诊断剂)或其组合充当表面活性剂。
可以通过考虑第一液体在第二液体中的分散来理解颗粒形成过程，如扩散方程
Figure BDA0003192505500001031
所述，其中c1(x，t)是第一液体在位置x和时间t的浓度，并且D12是第一液体在第二液体中的扩散率。对于球对称分散(仅沿球半径r的梯度)，微分关系变为
Figure BDA0003192505500001032
受限于边界条件c1(ri，t)＝c1，s和c1(r→∞，t)＝c1，0。在液滴边缘r＝ri处的第一液体的初始浓度c1，s是第一液体在第二液体中的溶解度极限，而远离液滴的浓度是某个初始饱和水平c1，0。初始条件是c1(r，0)＝c1，0。在使用
Figure BDA0003192505500001033
和Fo＝tD12/ri 2对方程进行无量纲化后，变量
Figure BDA0003192505500001034
的变化可用于将问题映射到笛卡尔空间，其中Fo是傅立叶数。如本文所用，傅立叶数(Fo)或傅立叶模量被称为无量纲数，其用于表征热传导。这给出了
Figure BDA0003192505500001041
受限于
Figure BDA0003192505500001042
和
Figure BDA0003192505500001043
其形式是传热和传质的半无限问题，采用拉普拉斯变换方法很容易以闭合形式求解。这些方法产生解答
Figure BDA0003192505500001044
其描述了在所有时间Fo在液滴外部所有位置处第一液体在第二液体中的浓度。由此得出在液滴的表面处第一液体进入第二液体的无量纲通量为
Figure BDA0003192505500001045
包含给定液滴的全部第一液体的分散所需的时间的第一近似值为Fo*＝ρ1/3c1，s(1-c1，0/c1，s)，其中ρ1是第一液体的密度。在一些实施方案中，比值ρ1/c1，s远大于一，因此特征分散时间Fo*大。因此在颗粒形成时，可以看出来自液滴表面的第一液体的通量接近稳态。在这些条件下，表面通量可与液滴质量的时间变化率相关，以描述液滴尺寸的时间演变，并因此按以下方式描述颗粒形成的时间量程。液滴的质量m＝4πri 3ρi/3以速率dm/dt＝4πri 2j分散在第二液体中。由于d(4πri 3ρi/3)/dt＝4πri 2ρi(dri/dt)，因此液滴半径以相关速率dri/dt＝-j/ρ演变。在用
Figure BDA0003192505500001046
和Fo＝tD12/ri，0 2重新调整问题后，代入通量j得到
Figure BDA0003192505500001047
解析解
Figure BDA0003192505500001048
对长傅立叶时间
Figure BDA0003192505500001049
有效(F.Incropera等人，Fundamentals of Heat andMass Transfer，第6版，2007)。因此颗粒形成的大致时间量程是Fo＝1.5Fo*。实际时间将作为液滴中的溶质浓度及其密度的函数而变化。例如，形成的颗粒的体积与初始液滴的体积之比为Vp/VD＝(rp/rD)3。颗粒体积可写成mp/ρp，即颗粒质量除以颗粒密度，因此这种关系意味着rp/rD＝(csol/ρp)1/3，其中csol是液滴中溶质(溶解固体)的浓度。因此Csol/ρp＝1/8的液滴将产生rp/rD≈1/2的颗粒。根据等式6，在这种情况下Fo≈(9/8)Fo*。由于随着溶质的浓度、溶质的沉淀和/或相分离开始发生而在液滴中发生的变化，实际的干燥(drying/desiccation)时间可能类似地变化。根据选定的处理条件，颗粒的干燥可在几纳秒至数天的时段内发生。在其中第一液体是水性的且其中第二液体是有机溶剂的某些实施方案中，干燥时间例如在约1μs与约1000s之间变化，这取决于溶剂化学性质。
在其它实施方案中，颗粒形成过程期间液滴内溶质的分布是相关的。在球对称空间中，这种分布由(R.Vehring，J.Aerosol Sci.，2007，38，728-746)描述
Figure BDA0003192505500001051
其中cn是液滴中第n种溶质的浓度，Dn是其在液滴中的特征扩散率，例如，随着颗粒形成，扩散率可作为时间(浓度)的函数而变化，并且R＝ri/ri，0是无量纲的径向坐标。当ri(dri/dt)是常数时，存在方程7的解析解。这意味着ri 2＝f(t)。根据等式6，只要特征傅立叶数Fo*足够长，在某些实施方案中就是这样。强加这个条件给出
Figure BDA0003192505500001052
其中
Figure BDA0003192505500001053
是在给定时间在液滴体积上平均的溶质的平均浓度，Pen是第n种溶质的佩克莱特数，即第一液体离开液滴的传输速率与液滴内的溶质传输速率之比。其有时被定义为Pen＝-ri/Dn(dri/dt)。基于等式6，佩克莱特数可采取形式
Figure BDA0003192505500001054
在一些实施方案中，等式8提供了对在颗粒形成过程期间液滴和颗粒的组分的径向分布的有用估计。溶质的表面浓度(R＝1)在一些情况下特别受到关注，因为其可控制颗粒形成过程的重要方面。其通常是通过对等式8中的分母进行数值积分来计算的。然而，对于适度低的佩克莱特数(Pe＜20)，其可通过以下近似到±1％的精度
Figure BDA0003192505500001061
其中En是表面富集因子。
在其它实施方案中，第二液体在颗粒形成的时间量程上和在颗粒形成的条件下分散在整个液滴中。类似于等式3，该过程可由下式描述
Figure BDA0003192505500001062
受限于对r∈(0，ri)的边界条件
Figure BDA0003192505500001063
和c2(ri，t)＝c2，s。这里c2(r，t)是在时间t在液滴(半径ri)内部的第二液体的浓度，且D21是其在第一液体中的扩散率。初始条件c2(r，0)＝c2，0描述液滴内第二液体的初始浓度。在使用
Figure BDA0003192505500001064
和Fo＝tD21/ri 2对方程进行无量纲化后，变量
Figure BDA0003192505500001065
的变化可用于将问题映射到笛卡尔空间，如本文先前所述。这得到
Figure BDA0003192505500001066
受限于
Figure BDA0003192505500001067
和
Figure BDA0003192505500001068
分离变量后，搜索形式
Figure BDA0003192505500001069
的乘积解，得到
Figure BDA00031925055000010610
其中
Figure BDA00031925055000010611
是浓度的重新调整形式。从等式12可以看出，液滴中第二液体饱和的时间量程为Fo2 *＝t2 *D21/ri 2～1/3。因此t2 *与特征颗粒形成时间tp *之比为
Figure BDA00031925055000010613
其中颗粒形成时间由Fo*＝tp *D12/ri 2＝ρ1/3c1，s(1-c1，0/c1，s)导出。在某些实施方案中，t2 */tp *小，意味着在如本文所述的颗粒形成的时间量程上和在如本文所述的颗粒形成的条件下与第二液体饱和或将近饱和。在其它实施方案中，t2 */tp *大，意味着在所公开的颗粒形成的时间量程上和在在所公开的颗粒形成的条件下液滴不与第二液体饱和或接近饱和。
在一些实施方案中，第二液体具有小于约1.500的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约60秒内干燥。在其它实施方案中，第二液体具有小于约1.000的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约60秒内干燥。还在其它实施方案中，第二液体具有小于约0.500的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约60秒内干燥。在某些其它实施方案中，第二液体具有小于约0.208的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约5秒内干燥。技术人员一旦获知要为傅立叶数设定的范围，就将能够在没有过度负担的情况下相应地调节过程参数。
在如本文所述的其它实施方案中，步骤b)还包括将第二液体的温度降低到第一液体的冰点的约±30℃。在一些实施方案中，第二液体在大气压下的沸点为约0℃至约200℃。在某些实施方案中，步骤b)还包括将第二液体的温度降低到第一液体的冰点的约30℃以内的温度。在某些其它实施方案中，第二液体在大气压下的沸点为约0至约200℃。还在其它实施方案中，第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物。在某些优选的实施方案中，混合物包含具有不同溶解度的液体
第二液体与第一液体的比率：可以设计在颗粒形成过程期间第二液体与第一液体的比率以控制本文所述的颗粒形成过程的实施方案。为了完全或接近完全分散第一液体，选择第二液体与第一液体的比率V＝V2/V1为
Figure BDA0003192505500001072
高于或低于V0的比率分别导致更快或更慢的干燥。在前一种情况下，第二液体具有足够的容量来接受所有的第一液体，且随着V/V0变大，等式5-7变得越来越精确。在后一种情况下，第二液体对于第一液体的容量不足，使得初级干燥导致液滴的部分但不是完全的干燥。在这种情况下，随后的洗涤和/或二次干燥步骤可用于减少液滴中第一液体的量并完成颗粒形成过程。在一些实施方案中，液体比率在约0至约1000倍V0范围内，例如约O至约100倍V0、约0至约10倍V0、约0至约5倍V0、约0至约2.5倍V0、约0至约1倍V0、约0至约0.5倍V0、约0至约0.25倍V0或约O至约0.1倍V0。
术语“初级干燥”是指将包含第一液体的液滴放置成与第二液体接触，并被第二液体干燥(dried/desiccated)，例如通过第一液体在第二液体中分散和/或通过蒸发。
术语“二次干燥”是指后处理步骤，例如在移除第一和第二液体后，颗粒的残留水分和/或溶剂含量通过该步骤改变。二次干燥的示例性方法包括施加或不施加热的真空干燥、冻干、流化床干燥、盘式干燥、带式干燥或浆液喷雾干燥。二次干燥也可用于移除用于将颗粒与第二液体分离的任何洗涤液体。在优选的实施方案中，通过离心、过筛、过滤、磁性收集、溶剂交换或倾析移除第一和第二液体。
在某些实施方案中，如本文所述的方法包括通过离心、过筛、过滤、磁性收集、溶剂交换、惯性分离、旋液分离器分离或倾析从第二液体中移除颗粒。
在其它实施方案中，如本文所述的方法还包括在步骤d)后用洗涤流体(例如，有机液体、超临界流体、低温液体或其组合)洗涤颗粒。在某些实施方案中，洗涤流体是有机液体、超临界流体、低温液体或其组合。
可通过如本文所述的方法进行颗粒的干燥，例如移除第一和第二液体以产生干颗粒。这些包括但不限于温热气体蒸发、冷冻干燥、临界点干燥、乳液溶剂蒸发、乳液溶剂扩散或其组合。在某些实施方案中，通过冻干或真空干燥进一步干燥颗粒。在某些其它实施方案中，干燥后颗粒中第一和第二液体的残留量按重量计为约0至约10％，例如按重量计约0至约5％或按重量计约0至约3％，或者优选为按重量计约0至约1％。还在其它实施方案中，干燥后颗粒具有按重量计小于10％的第一液体或第二液体。
在某些其它实施方案中，方法还包括用第三液体洗涤颗粒。在优选的实施方案中，第三液体是有机溶剂。也可以通过蒸发、真空干燥或冻干(例如施加或不施加热的真空干燥)、冻干、流化床干燥、盘式干燥、带式干燥或浆液喷雾干燥来移除第三液体。在优选的实施方案中，通过冻干或真空干燥进一步干燥颗粒。
在一些实施方案中，采用温热气体蒸发来进一步干燥颗粒。在其它实施方案中，通过使颗粒与气流接触来进一步干燥颗粒。在某些实施方案中，气体的温度为约-80至约200℃。在某些其它实施方案中，气体的温度为约10至约40℃。还在其它实施方案中，气体的相对湿度为约0至约100％。
在某些实施方案中，颗粒可以或可以不包括如本文所述残留的第一和/或第二液体。
充电及其它形式的控制：如本文所述，可以在电场的存在下形成颗粒。在电场存在下产生的颗粒的平均直径可小于或等于在不存在电场情况下产生的颗粒的直径。在某些实施方案中，颗粒包括充分地使颗粒聚结最小化的净电荷。
本公开的液滴可在电场中形成，并且在一些情况下携带电荷。在某些实施方案中，液滴在其中形成的介质(例如，第二液体)通常是介电介质。在一些实施方案中，液滴上的电场和/或电荷使得自由电荷和/或极性分子由于库仑效应而移动到第一液体的液滴的表面上。前一种现象即自由电荷在第一液体与液滴在其中形成的介电介质之间的界面处的局域化产生表面电荷层。在其它实施方案中，利用这类效应来影响液滴和/或颗粒的结构和/或表面特性。这包括这样的情况，其中表面电荷用于在它们以其它方式将不容易达到(即，高佩克莱特数)的条件下实现球形颗粒形态。还在其它实施方案中，可以是极性的第一液体在液滴表面附近的配位促成第二液体更快地移除第一液体。其还可以化解剂(例如，治疗剂或诊断剂)间的表面相关的降解事件，并且相对于在不存在电场的典型情况下，减少干燥后颗粒中第一液体的残留量。
在一些实施方案中，基于库仑效应，电场和/或电荷使得自由电荷和/或极性分子移动到第一液体的液滴的表面上，并且液滴的一种或若干种组分结晶，例如治疗剂、诊断剂或液滴可能包含的各种赋形剂中的任一种。可以控制剂或其它液滴组分的晶体成核以获得所需的多晶型物(A.Ziabicki,L.Jarecki,Macromolecular Symposia,1996,104,65-87)。在其它实施方案中，结晶沿优先方向进行，例如沿着电场线。
核-壳颗粒也可以通过净电荷或电场的作用由仅包括第一液体的液滴(即，在不存在任何壳液体的情况下)产生。在一些实施方案中，这是通过当液滴携带净电荷和/或当施加外部电场时利用某些极性分子和自由电荷倾向于将它们自身排列在液滴的表面上来实现的。在其它实施方案中，这产生了治疗剂或诊断剂朝向液滴的核或其表面的局域化，其可在干燥期间得以保持。在某些实施方案中，这涉及各种剂(例如，治疗剂、诊断剂、赋形剂)在颗粒的整个厚度中的确定性分层。还在其它实施方案中，非治疗性组分例如盐(例如，氯化钠)或糖(例如，蔗糖)优先被电场驱动到表面，以在颗粒周围形成结晶或其它形式的薄壳。这种壳可具有保护作用，或者提供控制药代动力学的措施。在某些其它实施方案中，部分液滴组分在颗粒表面局域化，不必形成均匀或连续的壳。
在其它实施方案中，颗粒在电场的存在下形成。在一些实施方案中，在电场的存在下形成的颗粒的平均直径小于或等于在不存在电场情况下产生的颗粒的直径。在某些实施方案中，颗粒包含净电荷。
聚结：对于获得所需的颗粒尺寸分布，在颗粒形成过程期间控制聚结程度可能是重要的。可按多种方式实现聚结的控制。这些包括使用表面活性剂、使液滴带电、受控的液滴蔓延、混合或其组合。在一些实施方案中，后面的方法是优选的，因为它们有助于减少在颗粒形成的时间量程上和在颗粒形成的条件下稳定液滴所需的表面活性剂的量。这种减少可能是有利的，因为其限制了可能存在于颗粒中的表面活性剂的量，从而提高了颗粒(包括剂，例如治疗剂或诊断剂)的其它组分的重量分数。在其它实施方案中，颗粒中表面活性剂的重量分数为约0至约50％，例如约0至约10％、约0至约5％、约0至约3％、约0至约1％、约0至约0.5％、约0至约0.01％或约0至约0.001％。量化聚结程度的示例性方法包括测量体积加权平均颗粒尺寸，并将其与基于初始液滴尺寸分布(即，发生任何聚结之前的液滴尺寸分布)估计的体积加权平均尺寸进行比较。测量的平均尺寸为估计的平均尺寸的约1至约5倍，例如估计的平均尺寸的约1至约3倍、估计的平均尺寸的约1至约2倍、估计的平均尺寸的约1至约1.5倍、估计的平均尺寸的约1至约1.2倍或估计的平均尺寸的约1至约1.1倍。
如本文所述，使用表面活性剂可以是稳定液-液体系的方法。在一些实施方案中，通过向第一和/或第二液体中添加适当的表面活性剂在颗粒形成的时间量程上和在颗粒形成的条件下稳定液滴。就临界胶束浓度(CMC)而言，表面活性剂的浓度为CMC的约0.01至约100倍，例如CMC的约0.1至约10倍、CMC的约1至约5倍或CMC的约1至约3倍。在其它实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.0001至约100mg/mL，例如约0.001至约10mg/mL、约0.01至约10mg/mL或约0.01至约1mg/mL。如本文所用，术语“临界胶束浓度”或“CMC”是指液体中表面活性剂的浓度，在该浓度以上形成胶束，并且在该浓度以上添加到体系中的所有另外的表面活性剂都进入胶束。
在一些实施方案中，液滴上的电荷化解聚结。在其它实施方案中，利用该效果替代可添加到第一液体和/或第二液体中的表面活性剂。在某些实施方案中，这种效果以减少所需稳定化所需的浓度的方式补充在第一液体和/或第二液体中使用的表面活性剂。就临界胶束浓度(CMC)而言，表面活性剂的浓度为CMC的约0至约10倍，例如CMC的约0至约3倍、CMC的约0至约1倍、CMC的约0至约0.5倍、CMC的约0至约0.1倍、CMC的约0至约0.01倍或CMC的约0至约0.001倍。在某些其它实施方案中，表面活性剂的浓度为约0至约10mg/mL，例如约0至约1mg/mL、约0至约0.1mg/mL、约0至约0.01mg/mL或约0至约0.001mg/mL。
在某些实施方案中，液滴在具有至少一个通道的装置中形成，例如微流体装置，其中单个通道的特性被设计成控制液滴在通道中的停留时间。在一些实施方案中，液滴在行列中流动，并在通道中经历有限的液滴-液滴相互作用。可以设计停留时间，使得一旦液滴和/或颗粒从通道中被收集起来，或者液滴行列另外以增强液滴-液滴相互作用的方式被破坏，则无论第一液体或第二液体的表面活性剂含量如何，聚结都得以化解。在其它实施方案中，停留时间大约为或长于根据等式6的特征颗粒形成时间，例如约0.5Fo*至约150Fo*、约0.5Fo*至约15Fo*、约0.5Fo*至约7.5Fo*、约0.5Fo*至约4.5Fo*、约0.5Fo*至约3.0Fo*或约0.5Fo*至约1.5Fo*。在某些其它实施方案中，颗粒基本上是在单独的通道中停留期间形成的。还在其它实施方案中，停留时间短于根据等式6的特征颗粒形成时间，但仍足以形成原颗粒，例如约0.0001Fo*至约0.5Fo*、约0.001Fo*至约0.5Fo*、约0.01Fo*至约0.5Fo*、约0.05Fo*至约0.5Fo*或约0.1Fo*至约0.5Fo*。原颗粒具有表面特性，例如富集溶质的薄层，其阻止聚结，尽管在颗粒形成过程期间可能发生潜在的液滴-液滴相互作用。
在一些实施方案中，具有佩克莱特数Pem的溶质m用于设计原颗粒形成所需的停留时间。溶质以初始浓度cm，0加载在液滴中，并将在其达到临界表面富集cm *时有效阻止聚结。根据等式8，在R＝1时，
Figure BDA0003192505500001121
液滴中的平均浓度
Figure BDA0003192505500001122
可以被计算为
Figure BDA0003192505500001123
根据等式6，这意味着将在大约以下时间左右达到临界表面富集
Figure BDA0003192505500001124
在其它实施方案中，即使当与通道相关联的液滴产生频率非常高时，聚结也被控制。与通道相关联的液滴产生频率可以为约1Hz至约10MHz，例如约10Hz至约10MHz、约100Hz至约10MHz、约1kHz至约10MHz或约10kHz至约10MHz。在某些实施方案中，向第一液体和/或第二液体中添加适当的表面活性剂进一步有助于控制聚结。就临界胶束浓度(CMC)而言，表面活性剂的浓度为CMC的约0至约10倍，例如CMC的约0至约3倍、CMC的约0至约1倍、CMC的约0至约0.5倍、CMC的约0至约0.1倍、CMC的约0至约0.01倍或CMC的约0至约0.001倍。在某些其它实施方案中，表面活性剂的浓度为约0至约10mg/mL，例如约0至约1mg/mL、约0至约0.1mg/mL、约0至约0.01mg/mL或约0至约0.001mg/mL。比如在连续搅拌釜反应器或线性流动通道中采用搅拌或使第二液体运动也可用于在干燥期间化解聚结。在优选的实施方案中，净电荷基本上使颗粒聚结最小化。
无菌性：无菌性是药物组合物的关键方面，因为其影响可施用组合物的安全性。例如，许多颗粒制剂(特别是微颗粒制剂)实现无菌性可能具有挑战性，因为常见的灭菌技术(例如，无菌过滤)并不相容。无菌过滤步骤通常涉及只有过滤液体的例如尺寸为200nm或更小的那些组分可以通过的膜。因此固体尺寸大于200nm的颗粒制剂被过滤而不被灭菌。在一些实施方案中，本公开的制剂在使用或施用之前经历最终灭菌的替代过程。这些灭菌方案和减少生物负荷的方法的有效性可按照监管指南进行评估，例如USP Chapter<71>、Ph.Eur.Chapter,Sterility:2.6.1、21CFR 610.12、ICH Q4B ANNEX 8(R1)、ICH Q5A等中列出的那些。证明合规性的示例性方法包括将约1mL药物产品/容器在适当的生长培养基(大豆-酪蛋白消化培养基、胰蛋白酶大豆肉汤、流体硫乙醇酸盐培养基)中温育约14天的时段，以确保在约1/约10亿单位药物产品或约1/约100万单位药物产品中没有微生物生长。如本文所公开，“无菌”制剂是无菌的或没有活微生物及其孢子。
在一些实施方案中，最终灭菌步骤包括伽马辐照。在其它实施方案中，灭活至少约2-4log10的病毒微生物污染物所需的灭菌步骤为约10kGy、约20kGy、约40kGy、约60kGy或约100kGy。在某些实施方案中，颗粒包含抗氧化剂或清除剂以减轻由于灭菌步骤而产生的任何降解产物的有害影响。
在其它实施方案中，最终灭菌步骤涉及瞬时热处理。在一些实施方案中，使制剂暴露于约60至约200℃的温度，例如约60至约180℃、约60至约160℃、约60至约140℃、约60至约130℃、约60至约120℃或约60至约110℃。在某些实施方案中，暴露进行约1至约144小时的时段，例如约1至约120小时、约1至约100小时、约1至约90小时、约1至约72小时、约1至约48小时、约1至约36小时或约1至约24小时。例如，干热灭菌可在约80℃的温度下进行约72小时，在约160℃的温度下进行约两小时，或者在约170℃的温度下进行约一小时。在某些其它实施方案中，巴氏杀菌在约60℃下进行约10小时。
在一些实施方案中，通过对制剂采用β辐射、X射线灭菌、蒸汽灭菌、溶剂-清洁剂灭活步骤、超临界CO2介导的灭菌、低pH保持、紫外C暴露或环氧乙烷介导的灭菌来确保灭菌。在其它实施方案中，最终灭菌步骤在约-100至约60℃的低温下进行。在某些实施方案中，超临界CO2还包括旨在有效灭活微生物(包括细菌孢子)的添加剂(例如，过氧化氢、水、乙酸酐等)。
在其它实施方案中，选择第二液体，使得在颗粒形成期间其在液滴中的存在有助于促进过程无菌性。在一些实施方案中，第二液体是抗微生物剂，或含有这种化合物，其含在颗粒内。即使在二次干燥步骤之后，这种化合物也可留在颗粒内部。可用作具有抗微生物活性的第二液体的有机液体可包括但不限于乙酸酯(例如，乙酸乙酯)和醇类(例如，乙醇、苯酚)等。第二液体还可含有抗微生物赋形剂，例如酚类物质、苯扎氯铵、芳樟醇、香豆素、过氧化物、活性氯、碱或其组合。
在一些实施方案中，将纳滤膜用于入口工艺流，例如用于颗粒形成之前的第一液体和/或第二液体，有助于减少工艺上的生物负荷。在其它实施方案中，采用前述无菌措施的组合以达到适当的生物负荷水平。
如本文所述，颗粒可在形成之后进行灭菌，例如通过辐照、巴氏杀菌、冷冻或通过伽马辐射辐照。在某些实施方案中，如本文所述的方法还包括在移除第一和第二液体后对颗粒进行灭菌。在某些优选的实施方案中，通过辐照、巴氏杀菌或冷冻进行灭菌。在优选的实施方案中，辐照是通过伽马辐射进行的。
颗粒特性的控制
可以通过调节液滴的干燥速率、液滴组分的佩克莱特数、液滴组分的浓度、液滴内溶质沉淀或相分离之后的颗粒形成动力学、液滴上的电荷和/或液滴可置于其中的电场的特性来控制颗粒特性。在某些实施方案中，调节影响颗粒的尺寸、形态、密度、孔隙率、组成、表面能特性，并且有助于确立颗粒内的组分的分布，并调节当在没有第二液体的情况下进行干燥(例如在空气中，如常规的喷雾干燥)时可能难以处理的重要物理化学特性。这些特性包括颗粒的溶解速率及其流动特性(R.Vehring,Pharmaceutical Res.,2008,25,999-1022)。
本文所述的方法通常用于控制颗粒的形态，所述方法包括：a)提供包含第一液体和剂的液滴；b)使液滴与第二液体在指定的佩克莱特数下接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，其中指定的佩克莱特数控制颗粒的形态。
一方面，本公开提供了控制颗粒的形态的方法，所述方法包括：a)提供包含第一液体和剂的液滴；b)使液滴与包含具有指定的佩克莱特数的塑化剂的第二液体接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，其中塑化剂控制颗粒的形态。
另一方面，本公开提供了控制颗粒的形态的方法，所述方法包括：a)提供包含第一液体和剂的液滴；b)使液滴与第二液体接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，其中第二液体的佩克莱特数控制颗粒的形态。
如本文所公开，剂可以是治疗剂或诊断剂。在某些实施方案中，治疗剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。在某些优选的实施方案中，治疗剂是治疗性生物制剂。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
在其它实施方案中，第一或第二液体还包含控制颗粒的形态的塑化剂。示例性塑化剂包括蔗糖、木糖醇、山梨糖醇、果糖、甘油三酯、果胶、甘油、柠檬酸三乙酯、乙酸乙酯、柠檬酸、油酸、羟丙基纤维素、甲基吡咯烷酮聚乙二醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯80、邻苯二甲酸二乙酯及其它邻苯二甲酸酯衍生物、蓖麻油、三醋精、水、氯苯吡胺、1-丁基-3-甲基咪唑鎓磺基琥珀酸二辛酯、乙酸己酯、水、乙酸2-乙基己酯、柠檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、苄醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺、各种水性液体、有机液体、油、离子液体、多糖、糖类、二醇、多元醇、脂肪酸、脂肪酸酯、酯、表面活性剂或其组合。在某些实施方案中，塑化剂是蔗糖、木糖醇、山梨糖醇、果糖、甘油三酯、果胶、甘油、柠檬酸三乙酯、乙酸乙酯、柠檬酸、油酸、羟丙基纤维素、甲基吡咯烷酮聚乙二醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、山梨糖醇的脂肪酸酯、邻苯二甲酸二乙酯及其它邻苯二甲酸酯衍生物、蓖麻油、三醋精、水、氯苯吡胺、1-丁基-3-甲基咪唑鎓磺基琥珀酸二辛酯、乙酸己酯、乙酸2-乙基己酯、柠檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、苄醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺或其组合。在优选的实施方案中，塑化剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，塑化剂是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒可包括小于10％的内部空隙空间、在移除第一和第二液体后包括小于5％的内部空隙空间、在移除第一和第二液体后包括小于1％的内部空隙空间、在移除第一和第二液体后包括小于0.1％的内部空隙空间或在移除第一和第二液体后包括小于0.01％的内部空隙空间。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.88至约1.00。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.93至约1.00。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的圆形度为约0.97至约1.00。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的球形度可在约0.10至约1.00的范围内，例如在移除第一和第二液体后球形度为至少约0.20、约0.40、约0.60或约0.80至约1.00。
在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有基本上平滑的表面。
在一些方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒的直径为约1至约100μm，例如在移除第一和第二液体后颗粒的直径为约4至约100μm、约10至约100μm或约20至约50μm。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒表现出的骨架密度为约1.00至约6.00g/cm3，例如在移除第一和第二液体后骨架密度为约1.00至约5.00g/cm3、约1.00至约3.00g/cm3、约1.00至约2.00g/cm3、约1.00至约1.50g/cm3、约1.30至约1.50g/cm3、约1.32至约1.50g/cm3或约1.10至约1.40g/cm3。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒表现出的骨架密度为约0.10至约5.00g/cm3，例如在移除第一和第二液体后骨架密度为约0.10至约2.50g/cm3、约0.10至约1.40g/cm3、约0.50至约1.40g/cm3或约1.00至约1.40g/cm3。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约0.09至约1.60g/cm3的骨架密度。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后颗粒具有约1000mg/mL至约1500mg/mL的骨架密度，例如在移除第一和第二液体后骨架密度为约1050mg/mL至约1500mg/mL、约1100mg/mL至约1500mg/mL、约1150mg/mL至约1500mg/mL、约1200mg/mL至约1500mg/mL、约1250mg/mL至约1500mg/mL、约1300mg/mL至约1500mg/mL、约1310mg/mL至约1500mg/mL、约1320mg/mL至约1500mg/mL、约1330mg/mL至约1500mg/mL、约1340mg/mL至约1500mg/mL、约1350mg/mL至约1500mg/mL、约1360mg/mL至约1500mg/mL、约1370mg/mL至约1500mg/mL、约1380mg/mL至约1500mg/mL、约1390mg/mL至约1500mg/mL、约1400mg/mL至约1500mg/mL、约1410mg/mL至约1500mg/mL、约1420mg/mL至约1500mg/mL、约1430mg/mL至约1500mg/mL、约1440mg/mL至约1500mg/mL、约1450mg/mL至约1500mg/mL、约1460mg/mL至约1500mg/mL、约1470mg/mL至约1500mg/mL、约1480mg/mL至约1500mg/mL或约1490mg/mL至约1500mg/mL。
在一些实施方案中，颗粒的特征可在于在移除第一和第二液体后，玻璃化转变温度为约0℃至约250℃，例如在移除第一和第二液体后，玻璃化转变温度为约34℃至约200℃、约50℃至约200℃、约60℃至约200℃、约40至约160℃、约50至约110℃、约60至约100℃或约75至约80℃。
在其它实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。在某些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或其组合。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于20％的治疗性生物制剂的聚集或小于20％的治疗性生物制剂的片段化，例如在移除第一和第二液体后，治疗性生物制剂的聚集或片段化小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于10％的治疗性生物制剂的聚集或小于10％的治疗性生物制剂的片段化，例如在移除第一和第二液体后，治疗性生物制剂的聚集或片段化小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约3％至约1％的治疗性生物制剂的聚集。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有约1％至约0.5％的治疗性生物制剂的聚集。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何聚集。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于约1％的治疗性生物制剂的片段化。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何片段化。
在其它实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，在移除第一和第二液体后，颗粒具有小于约50％的治疗性生物制剂的电荷变体的变化，例如在移除第一和第二液体后，电荷变体的变化小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％。在优选的实施方案中，与颗粒形成之前的起始生物制剂相比，在移除第一和第二液体后，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
在一些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约3％的残留水分。在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约2％的残留水分。在某些其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约1％的残留水分。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.1％残留的第一和第二液体。在一些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.01％残留的第一和第二液体。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按质量计小于约0.001％残留的第一和第二液体。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒按质量计基本上没有任何残留的第一和第二液体。
在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。在某些实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。还在其它实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。在优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。在某些优选的实施方案中，在移除第一和第二液体后，颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
在一些实施方案中，第一液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶或其组合。在其它实施方案中，第一液体是水性的。在某些实施方案中，第一液体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、缓冲液、右旋糖5％或其组合。在某些其它实施方案中，缓冲液是乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲盐水、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、二甲胂酸盐缓冲液、甲酸铵缓冲液、尿素溶液或其组合。在优选的实施方案中，第一液体是水。
在其它实施方案中，第一液体中的治疗剂的浓度为约10mg/mL至约500mg/mL。在某些实施方案中，第一液体中的治疗剂的浓度为约10mg/mL至约100mg/mL。在优选的实施方案中，第一液体中的治疗剂的浓度为约20mg/mL至约100mg/mL。
在一些实施方案中，第一液体具有小于约200mPa·s、小于约150mPa·s、小于约125mPa·s、小于约100mPa·s、小于约75mPa·s、小于约75mPa·s、小于约70mPa·s、小于约65mPa·s、小于约60mPa·s、小于约55mPa·s、小于约50mPa·s、小于约45mPa·s、小于约40mPa·s、小于约35mPa·s、小于约30mPa·s、小于约25mPa·s、小于约20mPa·s、小于约19mPa·s、小于约18mPa·s、小于约17mPa·s、小于约16mPa·s、小于约15mPa·s、小于约14mPa·s、小于约13mPa·s、小于约12mPa·s、小于约11mPa·s、小于约10mPa·s、小于约9.5mPa·s、小于约9mPa·s、小于约8.5mPa·s、小于约8mPa·s、小于约7.5mPa·s、小于约7mPa·s、小于约6.5mPa·s、小于约6mPa·s、小于约5.5mPa·s、小于约5mPa·s、小于约4.5mPa·s、小于约4mPa·s、小于约3.5mPa·s、小于约3mPa·s、小于约2.5mPa·s、小于约2mPa·s、小于约1.5mPa·s、小于约1mPa·s、小于约0.5mPa·s、小于约0.1mPa·s、小于约0.05mPa·s或小于约0.01mPa·s(一毫帕斯卡-秒)的粘度。
在其它实施方案中，第一液体还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯或卵磷脂。在优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，表面活性剂是聚山梨酯20或聚山梨酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60或司盘80。
在一些实施方案中，第二液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶、蛋白质稳定剂或其组合。在其它实施方案中，第二液体是水性的。在优选的实施方案中，第二液体是有机溶剂。
在其它实施方案中，有机溶剂是苄醇、苯甲酸苄酯、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化棕榈籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、植物油、核桃油、聚乙二醇、糖原质、丙酮、二甘醇二甲醚、二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚、乳酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、甲基异丁基酮、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、2-吡咯烷酮、甘油三酯、四氢糠醇、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯(例如，
Figure BDA0003192505500001221
810和
Figure BDA0003192505500001222
812N)、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯(例如，
Figure BDA0003192505500001223
840)、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯或其组合。在某些实施方案中，有机溶剂是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
在某些实施方案中，有机溶剂是乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、枯烯、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二噁烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、甲基异丁基酮、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢呋喃、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯、二甲苯、乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲乙酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯、三乙胺、1,1-二乙氧基丙烷、1,1-二甲氧基甲烷、2,2-二甲氧基丙烷、异辛烷、异丙醚、甲基异丙基酮、甲基四氢呋喃、石油醚、三氯乙酸、三氟乙酸、癸醇、乙酸2-乙基己酯、乙酸戊酯或其组合。
在一些实施方案中，第二液体是离子液体。在某些实施方案中，第二液体是蛋白质稳定剂。
在其它实施方案中，第二液体具有小于约200mPa·s、小于约150mPa·s、小于约125mPa·s、小于约100mPa·s、小于约75mPa·s、小于约75mPa·s、小于约70mPa·s、小于约65mPa·s、小于约60mPa·s、小于约55mPa·s、小于约50mPa·s、小于约45mpa·s、小于约40mPa·s、小于约35mPa·s、小于约30mPa·s、小于约25mPa·s、小于约20mPa·s、小于约19mPa·s、小于约18mPa·s、小于约17mPa·s、小于约16mPa·s、小于约15mpa·s、小于约14mPa·s、小于约13mPa·s、小于约12mPa·s、小于约11mPa·s、小于约10mPa·s、小于约9.5mpa·s、小于约9mPa·s、小于约8.5mPa·s、小于约8mPa·s、小于约7.5mPa·s、小于约7mpa·s、小于约6.5mPa·s、小于约6mPa·s、小于约5.5mPa·s、小于约5mPa·s、小于约4.5mPa·s、小于约4mPa·s、小于约3.5mPa·s、小于约3mPa·s、小于约2.5mPa·s、小于约2mPa·s、小于约1.5mPa·s、小于约1mPa·s、小于约0.5mPa·s、小于约0.1mPa·s、小于约0.05mPa·s或小于约0.01mPa·s(一毫帕斯卡-秒)的粘度。
形态：对于颗粒形成中的某些应用，例如本文所述的浓缩药物悬浮制剂，颗粒的形态可能是重要的考虑因素。为了在给定的颗粒浓度下使悬浮液的表观粘度最小化，有利的是使颗粒包含内部空隙空间(例如，孔隙率)或表现出不规则形状的程度最小化。考虑Krieger-dougherty方程(Y Papir和I.Krieger，J.Colloid Interface Sci.，第34卷，第1期，1970)，其公开了悬浮液的相对粘度
Figure BDA0003192505500001231
这里，η是悬浮液的表观粘度与不存在颗粒时的悬浮介质的粘度之比。φ是固体的有效体积分数，φm是固体的最大堆积分数，即在η变得无界时φ可取的最大值，且B是描述颗粒-颗粒相互作用的系数。B的最小值即所谓的Einstein值2.5对应于非相互作用的硬球。对于孔隙率α的颗粒，固体的实际体积分数通过φact＝(1-α)φ与有效体积分数φ相关，表明任何非零孔隙率往往会限制给定粘度下的浓度。类似地，不规则形状的颗粒在某些实施方案中往往使φm相对于其球形颗粒的值减小，和/或增加相互作用系数B，这两者的典型特征是对悬浮液的浓度与粘度关系曲线的不利影响。对于其它应用，例如可吸入的药物组合物，高孔隙率和/或低颗粒密度对于实现促进有利的药代动力学的某些空气动力学特性是可取的。也可以通过使用具有粗糙或带小面的表面特征的颗粒来促进粉末在空气中的分散性(R.Vehring，J.Aerosol Sci.，2007，38，728-746)。控制各种形态特性(例如，球形度、表面特征、孔隙率等)对于如本文所述的颗粒的实际应用可能是重要的。
在一些实施方案中，为了控制颗粒形态而调节佩克莱特数。术语“佩克莱特数”是指液滴或颗粒外部的溶剂质量传输过程的速率与液滴或颗粒内部的溶质质量传输过程的速率之比。在干燥时段期间如本文所述的示例性佩克莱特数为约1或更小，表明与后退的液滴表面的径向速度相比，液滴内溶质的传输是快的状态。这类佩克莱特数往往与规则的球形颗粒形态相关联。对于约1或更大的佩克莱特数，液滴表面往往相对于溶质快速移动，从而导致在液滴表面附近产生溶质的富集层(等式10)。这种类型的情况通常与不规则的颗粒形态相关联，即相比与较低佩克莱特数相关的形态不太平滑、不太呈球形和/或更具多孔性的形态。这类形态可包含葡萄干样特征(高粗糙度)和/或中心空隙空间。可按若干不同的方式来调节佩克莱特数。根据等式9，可以调节液-液体系的各种特性。这类特性至少包括第一液体在第二液体中的溶解度c1，s以及第二液体的初始饱和水平c1，0。此外，可以控制扩散率D12和Dn。影响这些特性并易受外部控制的参数包括第一液体和/或第二液体的温度、粘度和/或极性以及第一液体与第二液体之间的界面处的表面张力。
在其它实施方案中，步骤b)的佩克莱特数小于约500。在一些实施方案中，步骤b)的佩克莱特数小于约10。在某些实施方案中，步骤b)的佩克莱特数小于约5。还在其它实施方案中，步骤b)的佩克莱特数小于约3。在某些其它实施方案中，步骤b)的佩克莱特数小于约2。在优选的实施方案中，步骤b)的佩克莱特数小于约1。
在一些实施方案中，可以控制第一液体在第二液体中的溶解度c1，s。在其它实施方案中，第一液体在第二液体中的溶解度在约0g/L至完全混溶的范围内，例如约0至约250g/L、约0至约100g/L、约0至约50g/L、约0至约25g/L、约0至约10g/L、约0至约9g/L、约0至约8g/L、约0至约7g/L、约0至约6g/L、约0至约5g/L、约0至约4g/L、约0至约3g/L、约0至约2g/L或约0至约1g/L。如本文所述控制溶解度的方法可包括温度调节。在某些实施方案中，使用液体的混合物来控制溶解度。还在其它实施方案中，将第一液体放置成与第二液体接触，之后通过改变第二液体的组成，例如通过调节第二液体的组分的相对比率来调节溶解度。
在其它实施方案中，控制第一液体在第二液体中的饱和水平c1，0。饱和水平在约0至约100％范围内，例如约0至约50％、约0至约10％、约0至约5％或约0至约1％。
在一些实施方案中，可以控制第一和/或第二液体的温度。第一液体和第二液体可以保持在相同的温度或不同的温度下。在其它实施方案中，每种液体的温度独立地为约-100至约300℃，例如约-20至约180℃、约0至约100℃、约0至约50℃、约0至约40℃、约0至约30℃、约0至约20℃、约0至约10℃或约0至约5℃。在优选的实施方案中，每种液体的温度为约0至约20℃、约0至约10℃或约0至约5℃。
在其它实施方案中，控制第一和/或第二液体的粘度。在一些实施方案中，第一液体和/或第二液体的粘度影响第一液体在第二液体中的扩散或分散系数，例如D12，从而调节干燥速率和佩克莱特数。每种液体的粘度可独立地为约0.01mPa·s至约10,000mPa·s，例如约0.01至约1,000mPa·s、约0.01至约100mPa·s、约0.01至约50mPa·s、约0.01至约25mPa·s、约0.01至约10mPa·s、约0.01至约5mPa·s或约0.01至约1mPa·s。控制粘度的方法可包括温度调节和粘度调节添加剂，例如聚合物。液体的混合物也可用于控制粘度。
在一些实施方案中，控制第一液体和/或第二液体的溶剂极性。在其它实施方案中，第一液体的介电常数为约1至约200，例如约1至约180、约10至约140、约30至约120、约50至约100或约70至约80。还在其它实施方案中，第二液体的介电常数为约1至约200，例如约1至约10、约1至约80、约1至约50、约1至约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约1至约7、约1至约5或约1至约3。各种液体的混合物可用于控制极性。
在其它实施方案中，控制第一液体与第二液体之间的界面处的表面张力。在一些实施方案中，表面张力为约0至约100mN/m，例如约0至约70mN/m、约0至约60mN/m、约0至约50mN/m、约0至约40mN/m、约0至约30mN/m、约0至约20mN/m、约0至约10mN/m、约0至约9mN/m、约0至约8mN/m、约0至约7mN/m、约0至约6mN/m、约0至约5mN/m、约0至约4mN/m、约0至约3mN/m、约0至约2mN/m或约0至约1mN/m。
在一些实施方案中，第二液体是两种或更多种液体的混合物。在其它实施方案中，使用混合物来调整第二液体的粘度和/或极性。在某些实施方案中，使用混合物来调整第一液体在第二液体中的溶解度。由于这类特性可影响与干燥过程相关的速率和佩克莱特数，因此它们可用于通过简单调节构成混合物的液体的相对比率来直接控制各种颗粒特性(例如，尺寸、形态、密度等)。例如，由两部分组成的混合物，第一液体在一种组分(组分A)中比在另一组分(组分B)中易溶。在某些其它实施方案中，增加组分B的相对量将产生比不然仅使用组分A可获得的更平滑、更呈球形和/或多孔性更低的颗粒。还在其它实施方案中，对于由两部分组成的混合物，一种液体在混合物中的浓度为约0至约99.9999体积％，例如约0至约99体积％、约0至约95体积％、约0至约90体积％、约0至约75体积％、约0至约50体积％、约0至约25体积％、约0至约10体积％、约0至约5体积％、约0至约1体积％或约0至约0.0001体积％。示例性的由两部分组成的混合物包括但不限于苯甲酸苄酯/丙酮(例如，约5-30％的苯甲酸苄酯，如约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75或约30:70)、异丙醇/芝麻油(例如，约35-65％的异丙醇，如约35:65、约40:60、约45:55、约50:50、约55:45、约60:40或约65:35)、己烷/乙醇(例如，约10-35％的己烷，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、甲苯/乙腈(例如，约10-35％的甲苯，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、棉籽油/乙酸丁酯(例如，约10-35％的棉籽油，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、甲苯/乙酸乙酯(例如，约10-35％的甲苯，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、二乙醚/异丙醇(例如，约5-30％的二乙醚，如约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75或约30:70)、四氢呋喃/戊烷(例如，约35-65％的THF，如约35:65、约40:60、约45:55、约50:50、约55:45、约60:40或约65:35)、红花油/甲醇(例如，约25-55％的红花油，如约25:75、约30:70、约35:65、约40:60、约45:55、约50:50或约55:45)和莱姆油/丙酮(约5-30％的莱姆油，如约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75或约30:70)。如本文所述，选择适当的液体组合及比率(例如，第二液体的组分)可控制颗粒干燥速度和佩克莱特数。
包含第二液体的混合物还可包括表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂有助于在第一与第二液体之间建立界面，并且在其它实施方案中调节干燥速度和佩克莱特数。在某些实施方案中，表面活性剂限制液滴在干燥过程期间的聚结和/或化解对第一液体与第二液体之间的界面处的剂(例如，治疗剂或诊断剂)的破坏。第二液体中的表面活性剂的浓度在约0至约100体积％范围内，例如约0至约50体积％、约0至约25体积％、约0至约10体积％、约0至约5体积％、约0至约1体积％、约0至约0.1体积％、约0至约0.01体积％、约0至约0.001体积％或约0至约0.0001体积％。第二液体和表面活性剂的示例性混合物包括但不限于聚山梨醇酯80/乙酸乙酯(例如约0.5:95.5，如约0.1:99.9、约1:99、约2.5:97.5、约5:95、约10:90、约20:80)、司盘20/乙酸乙酯(约0.5:95.5，如约0.1:99.9、约1:99、约2.5:97.5、约5:95、约10:90、约20:80)、聚山梨醇酯20/乙酸乙酯(例如约0.5:95.5，如约0.1:99.9、约1:99、约2.5:97.5、约5:95、约10:90、约20:80)、聚山梨醇酯80/乙酸丁酯(例如约0.5:95.5，如约0.1:99.9、约1:99、约2.5:97.5、约5:95、约10:90、约20:80)、聚山梨醇酯80/异丙醇(例如约0.5:95.5，如约0.1:99.9、约1:99、约2.5:97.5、约5:95、约10:90、约20:80)或聚山梨醇酯80/棉籽油/乙酸乙酯(例如约0.5:20:79.5，如约0.1:20:79.9、约1:30:69、约2.5:10:87.5、约5:5:90、约10:5:75、约20:20:60)。
仔细选择第一液体中的溶质混合物或浓度也可用于影响最终颗粒形态。在其它实施方案中，液滴的组分的典型特征是在第一液体中的扩散率Dn(相应的佩克莱特数Pen)和/或溶解度极限，这使其在颗粒形成过程期间相对于液滴的其它组分在液滴的表面处发生沉淀或相分离。为了产生翘曲以形成带小面或“葡萄干样”颗粒(高粗糙度)的壳，可以利用这种现象来过早地富集表面(等式10)。这类形态可以是高佩克莱特数颗粒形成过程的典型特征，并且可有助于促进颗粒分散特性的增强(R.Vehring,J.Aerosol Sci.,2007,38,728-746)。在某些实施方案中，选定组分在液滴表面的富集导致壳不会随后在颗粒形成过程期间翘曲(低粗糙度)。在某些其它实施方案中，尽管选定的一种或多种组分有过早的表面富集，但仍可恢复球形颗粒形态(典型的低佩克莱特数过程)。
如本文所公开，通过考虑可进一步理解的是，随着第一液体持续扩散出原颗粒，壳的演变在很大程度上取决于壳的机械特性和作用于其上的界面力。在一些实施方案中，壳是刚性的，并且能够承受在界面力下变形，使得尽管选定的一种或多种组分有表面富集，但仍会恢复球形颗粒形态(典型的低佩克莱特数过程)。在其它实施方案中，壳在界面力下塑性变形，导致壳翘曲以及随后的低密度、基本上平滑的表面颗粒形态。在某些其它实施方案中，不仅通过调整佩克莱特数，而且还通过控制机械特性或界面力来改变最终颗粒形态。可以通过改变液滴内的溶质及其浓度、改变壳被第一或第二液体塑化的程度、包含塑化剂或反塑化剂或通过控制颗粒形成期间的处理温度来改变原颗粒壳的机械特性。可以通过改变第一液体或第二液体的组成、在第一液体或第二液体内包含表面活性剂或通过控制颗粒形成期间的处理温度来改变第一液体与原颗粒壳之间的界面处或第二液体与原颗粒壳之间的界面处的界面力。
在一些实施方案中，有效塑化需要在约为或高于塑化剂的玻璃化转变温度的温度下在第一液体和/或第二液体中使用塑化剂。控制颗粒形成过程期间的塑化剂温度可以最容易地通过控制第一液体和/或第二液体的温度来实现。在其它实施方案中，在第一液体的组分(例如，剂)的典型特征是佩克莱特数大于1且在如果不存在有效塑化时将导致颗粒形态更具有高佩克莱特数过程的特征的情况下，利用有效塑化来实现更加平滑、更呈球形和/或多孔性更低的颗粒形态。在某些实施方案中，尽管事实上第一液体的组分(例如，剂)的典型特征是佩克莱特数小于1，但也观察到具有高佩克莱特数过程的特征的颗粒形态。在某些其它实施方案中，利用有效塑化来恢复更平滑、更呈球形和/或多孔性更低的颗粒形态。因此，无论组分的佩克莱特数如何，塑化都可能是获得更平滑、更呈球形和/或多孔性更低的颗粒的潜在可行机制。
在其它实施方案中，各种水性液体、有机液体、油、离子液体、多糖、糖类、二醇、多元醇、脂肪酸、脂肪酸酯、酯、表面活性剂或其组合在适当的处理条件下用作有效的塑化剂。示例性塑化剂包括但不限于蔗糖、木糖醇、山梨糖醇、果糖、甘油三酯、果胶、甘油、柠檬酸三乙酯、乙酸乙酯、柠檬酸、油酸、羟丙基纤维素、甲基吡咯烷酮聚乙二醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯80、邻苯二甲酸二乙酯或其它邻苯二甲酸酯衍生物、蓖麻油、三醋精、水、氯苯吡胺、1-丁基-3-甲基咪唑鎓磺基琥珀酸二辛酯、乙酸己酯、水、乙酸2-乙基己酯、柠檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、苄醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺或其组合。
像塑化一样，在颗粒形成的动力学使得表面翘曲有可能在标称溶质浓度下占优势的情况下，增加第一液体的总溶质负载可用于获得更平滑、更呈球形和/或多孔性更低的颗粒。类似地，当如果其在标称溶质负载下可能不占优势时，可利用减少第一液体的溶质负载来引起或促进翘曲。
在一些实施方案中，利用向第一液体的液滴中引入第二液体的速率来控制颗粒形成过程的实施方案。例如，可以将具有低特征干燥时间Fo*(并因此具有高的相应佩克莱特数)放置成以受控的速率与第一液体接触，以实现较低的有效佩克莱特数。这种控制在某些实施方案中可用于用第二液体获得所需形态，例如连续球形形态，否则将不利于必要的佩克莱特方案。在其它实施方案中，第一液体的液滴在分散第一液体的容量有限的介质(即V小于V0)中形成。之后可逐渐添加具有低特征Fo*的第二液体，直到从颗粒中移除足够的第一液体。
有目的性地整合颗粒孔隙率对于选定的应用可能是有利的。在一些实施方案中，在颗粒形成的时间量程上和在颗粒形成的条件下进行相分离或乳化之前，将第二液体至少部分地分散在第一液体中。在某些实施方案中，在第一液体分散在整个第二液体中时，液滴中的任何组分(包括任何分散的第二液体)的浓度通常增加。在某些其它实施方案中，相分离或乳化是由于在浓度接近饱和极限c2，s时液滴中的第二液体不能扩散开。发生相分离或乳化的程度可随剂(例如，治疗剂或诊断剂)和/或赋形剂的选择而不同。还在其它实施方案中，该现象与表层的形成有关，即富集的表面层(等式10)，其包含截留或包封至少一部分第二液体的液滴的一种或多种组分。随后移除截留的第二液体可产生具有内部空隙空间和孔隙率的颗粒。
对于某些应用，例如浓缩的药物悬浮液，采用本文公开的一种或多种方法可获得表现出令人满意的平滑度、球形度和/或孔隙率的颗粒形态。这可以通过确保第一液体的一种或多种主要组分(例如，剂)的典型特征是佩克莱特数足够低而促成。佩克莱特数可以为约0至约10，例如约0至约9、约0至约8、约0至约7、约0至约6、约0至约5、约0至约4、约0至约3、约0至约2、约0至约1、约0至约0.5、约0至约0.25或约0至约0.1。
在某些实施方案中，即使在第一液体的一种或多种组分(例如，剂)的特征在于低扩散率的情况下，审慎地控制所公开的方法也可用于实现低佩克莱特数。由于替代的干燥方法(例如，常规的喷雾干燥)局限于高干燥速率的方案，因此低扩散率组分的相应佩克莱特数往往较大，意味着可能无法获得所关注的某些形态。因此，本文所述的方法可以为选定组分(例如，大生物分子)提供独特的佩克莱特数控制。根据处理条件，当组分的扩散率为约0至约10,000μm2/s时可实现低佩克莱特数，例如扩散率为约0至约1,000μm2/s、约0至约100μm2/s、约0至约50μm2/s、约0至约25μm2/s、约0至约10μm2/s、约0至约5μm2/s、约0至约2.5μm2/s或约0至约1μm2/s。
表面特性：颗粒的表面特性对于如本文所述的方法的某些应用也可能是重要的。例如，表面粗糙度和表面化学对于促进分散性(R.Vehring,J.Aerosol Sci.,2007,38,728-746)和/或调节溶解的动力学可能是重要的。表面能对于确保颗粒在给定的介质(例如，药物悬浮制剂的连续相)中润湿也可能是重要的，使得它们分散而不是表现出强絮凝倾向(M.Bowen等人，J.Pharm.Sci.，第101卷，第12期，2012)。
一方面，本公开提供了控制颗粒的表面特性的方法，所述方法包括：a)提供包含第一液体、第一组分和第二组分的液滴，其中第一组分以比第二组分更接近其溶解度极限的量存在，第一组分具有比第二组分更高的佩克莱特数，或其组合；b)使液滴与第二液体接触；c)使液滴干燥；以及d)移除第一和第二液体，从而形成颗粒，其中第一组分相对于第二组分在颗粒的表面富集。
在一些实施方案中，利用在颗粒形成过程期间易受外部控制的各种参数来影响颗粒的表面化学和/或表面能。这些包括但不限于第一和/或第二液体的温度、粘度、表面张力和/或极性。在其它实施方案中，第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物。在某些实施方案中，混合物包含具有不同溶解度的液体。
在其它实施方案中，当液滴在颗粒形成期间分散在整个第二液体中时，液滴被第一液体的晕圈包围。根据等式4，第一液体在第二液体中的分布
Figure BDA0003192505500001321
在长傅立叶时间Fo在液滴外部接近
Figure BDA0003192505500001322
。在一些实施方案中，在颗粒形成的条件下，液滴的一种或多种组分可溶于晕圈，例如治疗剂或诊断剂和/或赋形剂。与诸如喷雾干燥(R.Vehring,J.AerosolSci.,2007,38,728-746)的颗粒形成方法不同，本文所述的方法在颗粒形成期间促进液滴与第二液体之间的界面外部的选定组分的协调。在某些实施方案中，利用这种现象来以选定的组分装饰颗粒的表面。在某些其它实施方案中，表面装饰用于使表面功能化和/或调节其能量等。
类似于如本文所述的形态学方法，仔细选择溶质混合物和浓度可用于影响表面组成和能量。在一些实施方案中，液滴的组分的典型特征是在第一液体中的扩散率Dn(相应的佩克莱特数Pen)和/或溶解度极限，这使其在颗粒形成过程期间优先相对于液滴的其它组分在液滴的表面处发生沉淀或相分离。在其它实施方案中，利用这种现象来以选定的组分装饰颗粒的表面。在某些实施方案中，表面装饰用于使表面功能化和/或调节其能量。在某些其它实施方案中，当高佩克莱特数组分围绕具有较低佩克莱特数的一种或多种组分的内核形成壳时，产生了核-壳结构。
在一些实施方案中，核-壳液滴用来产生包含旨在控制表面粗糙度、化学性质和/或能量的核-壳结构的颗粒。壳在药代动力学中也可以发挥重要作用。如本文所述的本公开的液滴可包括一个或多个壳层，每一个壳层可以或可以不以独特的溶剂为典型特征，并且具有独特的溶质组成，例如治疗剂、诊断剂或赋形剂。当液滴包括一个或多个液体(壳)层时，颗粒形成需要干燥至少液滴的最外层，但也可能涉及干燥一个或多个内层。在其它实施方案中，通过本公开的方法干燥核-壳液滴的最外层以产生具有固体壳和非固体(即，液体或凝胶样)内层的颗粒。在某些实施方案中，通过本公开的方法干燥核-壳液滴的所有层以产生具有固体层的颗粒。
在其它实施方案中，颗粒具有包括核和壳的形态。在其它实施方案中，壳包括一个或多个层。还在其它实施方案中，壳是凝胶。在某些实施方案中，凝胶是水凝胶、离子凝胶或有机凝胶。在某些其它实施方案中，壳是结晶的或半结晶的。在某些优选的实施方案中，核是固体、凝胶或液体。
在一些实施方案中，结晶或半结晶的壳可用于本文所述的一些方法，因为结晶或半结晶表面物质的典型特征是能态低于相应的无定形物质。例如，结晶表面物质可有助于减轻颗粒-颗粒相互作用并提高分散性。在其它实施方案中，壳不必是连续的或完全包封的，而是可以包括离散的结晶表面域。在某些实施方案中，液滴的一种或多种组分以一定的方式受控，使得它们驻留在颗粒表面，所述组分的选择是基于它们在如本文所述的颗粒形成条件下的易结晶性。
在其它实施方案中，第二液体是例如两种或更多种不同极性的液体的混合物。在一些实施方案中，第一液体在混合物的一种组分中的溶解度不同于第一液体在混合物的另一种或多种组分中的溶解度。还在第一液体分散到第二液体中的其它实施方案中，可通过调节混合物中液体的比率来控制产生的颗粒的形态。例如，包括较高体积％的较低溶解度的混合物可得到更圆或圆形的颗粒。混合物中的一种液体可以为约1至约99体积％，例如约1-10体积％、约5-25体积％、约10-30体积％、约15-50体积％、约20-60体积％、约30-75体积％、约40-80体积％、约50-99体积％或约75-99体积％，余量是一种或多种其它液体。示例性混合物有苯甲酸苄酯/丙酮(例如，约5-30％的苯甲酸苄酯，如约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75或约30:70)、异丙醇/芝麻油(例如，约35-65％的异丙醇，如约35:65、约40:60、约45:55、约50:50、约55:45、约60:40或约65:35)、己烷/乙醇(例如，约10-35％的己烷，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、甲苯/乙腈(例如，约10-35％的甲苯，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、棉籽油/乙酸丁酯(例如，约10-35％的棉籽油，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、甲苯/乙酸乙酯(例如，约10-35％的甲苯，如约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70或约35:65)、二乙醚/异丙醇(例如，约5-30％的二乙醚，如约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75或约30:70)、四氢呋喃/戊烷(例如，约35-65％的THF，如约35:65、约40:60、约45:55、约50:50、约55:45、约60:40或约65:35)、红花油/甲醇(例如，约25-55％的红花油，如约25:75、约30:70、约35:65、约40:60、约45:55、约50:50或约55:45)和莱姆油/丙酮(约5-30％的莱姆油，如约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75或约30:70)。在某些其它实施方案中，第一液体或第二液体具有约0.01mPa·s至约10,000mPa·s，例如约0.01至约1,000mPa·s、约0.01至约100mPa·s、约0.01至约50mPa·s、约0.01至约25mPa·s、约0.01至约10mPa·s、约0.01至约5mPa·s或约0.01至约1mPa·s的粘度。在某些优选的实施方案中，第一液体或第二液体还包含表面活性剂。
组成和降解产物：在一些实施方案中，将组分添加到第一液体中，以在颗粒形成的条件下限制第二液体的流入。限制第二液体的渗透可用于例如最小化形成之后颗粒中残留的第二液体的量和/或减轻由于第一液体与第二液体的组分之间的相互作用而形成不需要的降解产物的程度。在其它实施方案中，添加组分以降低液滴中第二液体的扩散率D21，从而加强相对于D12的差异。在某些实施方案中，添加组分以限制溶解度c2，s。还在其它实施方案中，添加组分以实现这类效果的组合。
在其它实施方案中，选择第二液体，使得在颗粒形成期间其在液滴中的存在有助于稳定剂，例如治疗剂或诊断剂。治疗剂或诊断剂可通过两个或更多个分子的不可逆缔合而经历分子大小的变化。在一些实施方案中，在颗粒形成期间第二液体在液滴中的存在在整个过程的各个阶段通过若干潜在的机制降低治疗剂或诊断剂经历这种不可逆自缔合的倾向，这些机制包括但不限于增加不可逆自缔合反应的速率限制步骤的过渡态的活化能或改变治疗剂或诊断剂在气-液、液-固或液-液界面的界面活性等。例如，在给定的溶剂中，可能在热力学上有利的是埋没治疗剂或诊断剂表面上的暴露的疏水或带电区域以阻止自缔合。由于添加第二液体引起治疗剂或诊断剂的自缔合倾向变化可能是由于第二液体分子与治疗剂或诊断剂的易缔合区域的直接相互作用，导致这些易缔合区域的暴露减少。在某些实施方案中，第二液体影响第一液体与治疗剂的相互作用和/或第一液体与自身的相互作用，从而影响治疗或诊断分子之间的自缔合倾向。与治疗剂或诊断剂相比，对第二液体分子的界面吸附亲和力的差异也可通过竞争性抑制治疗剂或诊断剂的界面吸附或限制在界面处吸附的治疗剂或诊断剂的可逆或不可逆自缔合来影响界面介导的不可逆自缔合治疗剂或诊断剂的形成。在某些其它实施方案中，在整个过程中使用第二液体来稳定治疗剂或诊断剂，接着移除第二液体，这样可减少最终粉末或悬浮制剂中的赋形剂负担。赋形剂负担的减少将进一步增加治疗剂或诊断剂的剂量，同时使递送体积最小化、缩短施用时间和/或减轻疼痛。
在一些实施方案中，液滴中的赋形剂在颗粒形成的条件下可溶于第二液体。在其它实施方案中，在由液滴形成颗粒时，这导致赋形剂的浸出和组分的相对比率变化，例如，由于赋形剂损失，液滴具有比颗粒更高的赋形剂与剂比率(H.C Shum,Biomicrofluidics,2012,6(1),012808)。为了抵消这种活性，可以将赋形剂以适当的浓度添加到第二液体中。这可有助于防止浓度梯度和/或在一些实施方案中可能导致浸出的其它驱动力。在某些实施方案中，第二液体包括例如碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、抗菌剂、抗氧化剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、镇痛剂和/或营养培养基或其组合。
对于选定的应用，例如浓缩的药物悬浮制剂，赋形剂或液滴的其它组分的浸出可能是有利的。选定的组分可用于颗粒形成过程，但从稳定性、颗粒组成或各种其它观点来看不太可取。例如，可观浓度的表面活性剂可能有利于化解颗粒形成期间的聚结，但不利的是其降低颗粒中剂(例如，治疗剂或诊断剂)的重量分数。当由颗粒形成浓缩药物悬浮制剂或以各种其它方式应用它们时，使剂的重量分数最大化是可取的。在一些实施方案中，液滴的一小部分组分(例如，表面活性剂)至少微溶于第二液体。在其它实施方案中，利用第二液体从液滴或颗粒中提取这些组分的至少一部分。
也可以设计如本文所述的颗粒形成条件(包括液滴的总干燥时间)，以提供液滴的一种或多种组分之间晶体形成的充分条件。在一些实施方案中，构成颗粒的大部分物质呈结晶状态，而在其它实施方案中，仅一小部分物质结晶。在某些实施方案中，剩余物质呈半结晶或无定形状态。在某些其它实施方案中，构成颗粒的所有物质是半结晶的、无定形的或其某种组合。协调结晶域的位置对于如本文所述的某些方法可能是有利的。例如，颗粒表面的结晶域可用于使颗粒-颗粒相互作用最小化并提高分散性。还在其它实施方案中，表面的结晶域的典型特征可以是能态低于相应的无定形物质。在某些优选的实施方案中，控制要结晶的物质的佩克莱特数，使得其优先存在于颗粒表面。
液滴和颗粒处理方法
可以按若干方式之一将本公开的液滴放置成与第二液体接触。在一些实施方案中，液滴在第二液体内形成，使得它们彼此立即接触。在其它实施方案中，液滴在单独的介质中形成，之后放置成与第二液体接触，例如通过将它们滴入到第二液体中或喷射到第二液体之上。此介质可以是例如空气、惰性气体、真空或第三液体，其中第一液体在颗粒形成的条件下至少部分不混溶。在某些实施方案中，第二液体包含在收集液滴的容器中。术语“容器”是指用于第二液体的容器。示例性实施方案包括开放式浴槽、封闭式浴槽或微流体连接件，即在其内并通过其可进行微流体液滴产生的管道或通道。
本文所述的液滴和颗粒可具有不同的密度，例如固体颗粒可具有比液滴更高的密度。液滴和颗粒的密度可以比第二液体更高、更低或与第二液体基本上相同。在一些实施方案中，第二液体包含在容器中，并被选择为使得其密度在液滴的密度与固体颗粒的密度之间。在某些实施方案中，液滴分散在介质(例如，空气、惰性气体或真空)中，并与第二液体一起收集。液滴在第二液体与它们分散在其中的介质之间的界面上漂浮，使得颗粒的形成至少部分地由第一液体蒸发到介质中来辅助。还在其它实施方案中，可以调节温度、压力和蒸气含量(第一液体的)以及液滴分散在其中的介质的蒸气含量以控制蒸发特性。蒸发期间的介质温度为约-100至约300℃，例如约-100至约200℃、约-100至约150℃、约-100至约100℃、约-75至约75℃、约-40至约40℃、约-30至约30℃、约-20至约20℃、约-10至约10℃或约-4至约4℃。蒸发期间的介质压力可以为约10-6atm至约10atm，例如约10-6atm至约1atm、约10-5atm至约1atm、约10-4atm至约1atm或约10-3atm至约1atm。相对于饱和点，蒸发期间的蒸气含量(第一液体的)和介质的蒸气含量可以为约0至约100％，例如约0至约50％、约0至约25％、约0至约10％、约0至约5％、约0至约2％、约0至约1％、约0至约0.5％、约0至约0.1％或约0至约0.01％。在某些其它实施方案中，液滴密度可在蒸发期间增加，导致颗粒下沉到第二液体中。
在一些实施方案中，步骤a)的液滴通过电喷雾、超声雾化器、微流体装置形成。在其它实施方案中，步骤a)的液滴在微流体装置中形成。在某些实施方案中，在微流体装置中形成的液滴在微流体装置中规则地间隔开。
在某些实施方案中，使用电场和/或磁场引导或控制带电和/或磁性液滴进入和通过第二液体。当将液滴喷射到介质(例如，空气)中并将它们收集在第二液体的容器中时，这类技术是特别有用的。在某些其它实施方案中，电场和/或磁场可用于克服浮力和/或表面张力效应。与电场和/或磁场相关的力使得液滴可以在第二液体的表面张力和/或密度原本难以将其驱动到第二液体中的情况下被驱动到第二液体中。
在一些实施方案中，液滴是带电的。在其它实施方案中，液滴或颗粒上的电荷在干燥之前、期间或之后通过例如使液滴或颗粒与电极接触而全部或部分消散。在某些实施方案中，通过防止电极与液滴或颗粒之间的直接接触而有意地完全或部分保留液滴或颗粒上的电荷。
在其它实施方案中，使用微流体装置形成液滴。在一些实施方案中，微流体源产生液滴，其中第一液体与至少部分不混溶的液体(即，第三液体)共流以形成液滴。液滴可以被收集在含有第二液体的容器中，它们在其中干燥以形成颗粒。在某些实施方案中，第一液体和第三液体不同但可混溶。还在其它实施方案中，第一液体直接与第二液体共流，从而省去中间液体。液滴可通过如下方法形成，其中在微流体系统中的流动保持为斯托克式(Stokesian)，典型特征是低雷诺数，或者通过惯性微流体技术(J.Zhang等人，LabChip.2016,16,10-34)。
在一些实施方案中，将表面活性剂添加到第二液体中以降低表面张力。当液滴首先分散在介质中，然后用第二液体的容器收集时，这类效果对于促进液滴进入第二液体是有用的。
在其它实施方案中，在使液滴与第二液体接触之后干燥液滴。在一些实施方案中，第二液体包括干燥物质(即干燥剂)或与干燥物质(即干燥剂)接触，以吸收第一液体或以其它方式将其隔离(例如，通过反应)。这类物质可用于确保在干燥期间第一液体在第二液体中的均匀、稳态饱和度。示例性干燥剂包括但不限于硅藻土、分子筛、五氧化二磷、硫酸镁、二氧化硅、氯化钙、活性炭或碳酸钾。
在一些实施方案中，第二液体具有小于约1.500的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约60秒内干燥。在其它实施方案中，第二液体具有小于约1.000的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约60秒内干燥。还在其它实施方案中，第二液体具有小于约0.500的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约60秒内干燥。在某些其它实施方案中，第二液体具有小于约0.208的傅立叶数(Fo)，从而允许液滴在约5秒内干燥。
在如本文所述的其它实施方案中，步骤b)还包括将第二液体的温度降低到第一液体的冰点的约30℃以内的温度。在某些其它实施方案中，第二液体在大气压下的沸点为约0至约200℃。还在其它实施方案中，第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物。在某些优选的实施方案中，混合物包含具有不同溶解度的液体。
后处理
在一些实施方案中，经由离心、过筛、过滤、磁性收集、溶剂交换、惯性分离、旋液分离器分离或倾析从第二液体中移除颗粒或原颗粒。在其它实施方案中，通过溶剂交换洗涤程序从第二液体中移除颗粒。在移除大部分第二液体后(例如，在离心和上清液倾析后)，可添加另一种液体，其是挥发性的，可与第二液体混溶，且颗粒在洗涤条件下不溶于其中。还在其它实施方案中，可用更容易移除的挥发性洗涤液体代替第二液体。另外的浓缩、上清液移除和用洗涤液体回填的循环可导致第二液体的含量显著减少。随后可以蒸发洗涤液体，例如通过施加热和/或真空或经由冻干移除。在某些实施方案中，洗涤液体是有机液体。在某些其它实施方案中，洗涤液体是超临界流体(例如，超临界CO2)、低温流体(例如，液氮)或这些液体之一和有机液体的混合物。在一些实施方案中，洗涤液体在大气压下的沸点为约-200至约200℃，例如约-200至约100℃、约-200至约75℃或约-200至约50℃。在某些优选的实施方案中，通过离心、过筛、过滤、磁性收集、溶剂交换或倾析移除第一和第二液体。
在其它实施方案中，液滴的一小部分组分(例如，表面活性剂)至少微溶于洗涤液体。在某些实施方案中，利用洗涤液体从液滴或颗粒中提取这些组分的至少一部分。选定的组分在颗粒形成过程期间可能是有用的，但从稳定性、颗粒组成或各种其它观点来看不太可取。例如，可观浓度的表面活性剂可能有利于化解颗粒形成期间的聚结，但不利的是其降低颗粒中剂(例如，治疗剂或诊断剂)的重量分数。当由颗粒形成浓缩药物悬浮制剂或以各种其它方式应用它们时，使剂的重量分数最大化是可取的。
在一些实施方案中，如本文所述的方法还包括在步骤d)后用洗涤流体(例如，有机液体、超临界流体、低温液体或其组合)洗涤颗粒。在某些实施方案中，洗涤流体是有机液体、超临界流体、低温液体或其组合。
颗粒在与第二液体分离后可经历一个或多个二次干燥步骤。这类步骤可用来移除洗涤液体和/或调节颗粒中第一液体的残留量。在一些实施方案中，在初级干燥后，残留量的第二液体保留在颗粒中。在其它实施方案中，二次干燥可用于将数量减少到所需水平。二次干燥的示例性方法包括施加或不施加热的真空干燥、冻干、流化床干燥、浆液喷雾干燥、盘式干燥、带式干燥或在滤膜上的空气干燥。
在一些实施方案中，通过使干燥气体流过过滤元件顶部的颗粒床来实现二次干燥。在某些实施方案中，干燥气体是氦气、空气、氮气或氩气。在优选的实施方案中，干燥气体是氦气或空气。在干燥时间期间可控制干燥气体的温度、压力、流速或蒸气含量，以实现所需的干燥速率、相对于玻璃化转变温度的所需温差或在二次干燥步骤结束时第一液体或第二液体的所需平衡含量。在其它实施方案中，实现所需干燥水平所需的时间低于与替代的二次干燥技术例如冻干、喷雾干燥或流化床干燥所对应的时间。类似地，物质回收的百分比可能更大。
在其它实施方案中，通过相对于颗粒的玻璃化转变温度调节颗粒的温度来促进初级干燥步骤、洗涤步骤和/或二次干燥步骤。在某些条件下，一定量的第一液体、第二液体、洗涤液体和/或液滴或颗粒的各种组分(例如，表面活性剂)在颗粒形成期间截留在“玻璃状”基质中(Richardson,H.等人，The European Physical Journal E,12,no.1(2003):87-91)。这会使各种液体或液滴或颗粒组分的提取具有挑战性。在一些实施方案中，可通过使液滴或颗粒的温度接近玻璃化转变温度达一段时间来促进各种截留液体或液滴或颗粒组分的移除。接近玻璃化转变提高了液滴或颗粒内的流动性，并且允许截留的液体或液滴或颗粒组分以相对于通常在远低于转变的温度下所见显著提高的速率释放。关于玻璃化转变温度，在此步骤期间液滴或颗粒的温度可以在约±30℃内、约±20℃内、约±10℃内、约±5℃内、约±2℃内或约±1℃内。样品必须保持这种接近的持续时间可根据要提取的液体或组分的流动性和提取条件(例如，干燥气体的温度、流速和湿度)而变化，但可以为约0至约24小时、约0至约12小时、约0至约6小时、约0至约3小时、约0至约1小时、约0至约0.5小时、约0至约0.25小时或约0至约0.1小时。
第二液体的挥发性可有助于在初级干燥后可以将其从颗粒中移除的容易和方便性。在一些实施方案中，为了使在后处理期间达到第二液体的所需残留量所需的时间和能量最小化，选择具有高挥发性的第二液体。在其它实施方案中，第二液体在大气压下的沸点为约0至约100℃，例如约0至约80℃或约0至约75℃。在某些实施方案中，控制进行初级干燥的条件，使得干燥时间和佩克莱特数为颗粒提供所关注的特征，例如所需的形态。这类条件包括至少第二液体的温度及其相对于第一液体的初始饱和水平c1，0。例如，可将挥发性第二液体充分冷却，例如冷却到大约第一液体的冰点或略高，以降低饱和水平c1，s，并达到约1或更低左右的佩克莱特数状态。可以产生规则球形形态的颗粒，此后在后处理期间移除第二液体，与沸点高得多的替代第二液体相比相对容易。
在一些实施方案中，在通过喷雾干燥法进行二次干燥后将壳添加到颗粒中。可以将干颗粒悬浮在壳物质溶解在其内的介质中以形成处理浆液。通过雾化浆液并用干燥气体蒸发介质来对处理浆液进行喷雾干燥。在移除介质时，溶解的壳物质在颗粒的表面上凝结以形成壳层。在其它实施方案中，控制雾化浆液的微观结构以实现最终包覆粉末的所需颗粒尺寸分布。在某些实施方案中，选择壳溶质和干颗粒的浓度以实现所需的平均壳厚度和壳与核质量比。
在其它实施方案中，针对特定的一种或多种应用定制颗粒壳(原生的或在后处理步骤中添加的)。例如，PLGA颗粒可以用聚(乙二醇)(PEG)进行官能化。这导致颗粒表面对单核吞噬细胞系统几乎是不可见的(Acta Biomater.,73,2018,38-51)。在一些实施方案中，聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)壳用羧基官能化，从而允许共价连接蛋白质、抗体、肽和小分子。
在一些实施方案中，通过冻干或真空干燥进一步干燥颗粒。
在其它实施方案中，采用温热气体蒸发来进一步干燥颗粒。还在其它实施方案中，通过使颗粒与气流接触来进一步干燥颗粒。在某些实施方案中，气体的温度为约-80至约200℃。在某些其它实施方案中，气体的温度为约10至约40℃。在一些其它实施方案中，气体的相对湿度为约0至约100％。
在一些实施方案中，颗粒在电场的存在下形成。在其它实施方案中，在电场的存在下形成的颗粒的平均直径小于或等于在不存在电场情况下产生的颗粒的直径。在某些实施方案中，颗粒包含净电荷。
在其它实施方案中，净电荷基本上使颗粒聚结最小化。
在一些实施方案中，如本文所述的方法还包括在移除第一和第二液体后对颗粒进行灭菌。在某些实施方案中，通过辐照、巴氏杀菌或冷冻进行灭菌。在某些优选的实施方案中，辐照是通过伽马辐射进行的。
使用方法
可以按合适的剂量施用包括本公开的悬浮液或干燥形式的药物组合物，所述剂量可根据需要调节，这取决于临床反应。组合物也可用于化妆品。药物组合物的剂量可根据多种因素而变化，如治疗剂或诊断剂的药代动力学；施用的方式；接受者的年龄、健康状况和体重；症状的性质和程度；治疗的频率，和同期治疗的类型(如果有的话)；以及治疗剂或诊断剂在要治疗的动物中的清除率。施用可以每天、每周、每两周、每三周、每月或以任何其它合适的间隔进行。一般而言，当以例如约0.01mg/kg与约70mg/kg之间的剂量(以固体形式测量)对人施用治疗剂或诊断剂时，可以获得令人满意的结果。在一些实施方案中，剂量可在约0.01mg/kg至约1mg/kg范围内。剂量范围包括例如约30mg与约5000mg之间。在其它实施方案中，施用至少约30、约100、约500、约1000、约2000或约5000mg的化合物。优选的剂量范围包括例如约1-30mg/kg或约1-10mg/kg之间。
递送量将取决于适应症和递送途径。在一些实施方案中，施用剂量大于约0.5mL(例如大于约2mL)的粘度小于约50mPa·s(例如小于约30mPa·s)的药物组合物，例如注射到动物的皮肤中。在其它实施方案中，施用剂量大于约1.5mL(例如大于约5mL)的粘度小于约50mPa·s(例如小于约30mPa·s)的药物组合物，例如注射到动物的皮肤中。
可以通过任意合适的方法施用药物组合物，例如通过耳、口腔、结膜、皮肤、牙齿、电渗、子宫颈内、窦内、气管内、肠内、硬膜外、羊膜外、体外、浸润、间质、腹内、羊膜内、动脉内、关节内、胆管内、支气管内、囊内、前房内、心内、软骨内、尾部内、海绵窦内、腔内、脑内、脑池内、角膜内、冠内、冠状动脉内、阴茎海绵体内、皮内、椎间盘内、导管内、十二指肠内、硬膜内、表皮内、食管内、胃内、齿龈内、回肠内、病灶内、管腔内、淋巴内、髓内、脑膜内、肌内、眼内、卵巢内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、窦内、脊柱内、滑膜内、腱内、睾丸内、鞘内、胸内、小管内、肿瘤内、鼓室内、子宫内、血管内、静脉内、静脉内推注、静脉内滴注、心室内、膀胱内、玻璃体内、离子渗透、灌洗、经喉、经鼻、经鼻胃、封闭敷料技术、眼部、口服、口咽、肠胃外、经皮、关节周围、硬膜外、神经周围、牙周、直肠、吸入、眼球后、软组织、蛛网膜下、结膜下、皮下、舌下、粘膜下、外用、透皮、经粘膜、经胎盘、经气管、经鼓室、输尿管、尿道或阴道施用。
在一些实施方案中，形成药物悬浮制剂以改善某些治疗剂或诊断剂的可注射性。具体地，悬浮液可表现出比相当的治疗剂或诊断剂负载量的水溶液更低的粘度，从而降低用标准注射器装置施用悬浮液所需的力，即脱离力和滑动力。在其它实施方案中，悬浮液中的颗粒提供了以较少麻烦的影响(例如，排除体积影响)替换常规溶液(例如，水溶液)中占优势的分子间相互作用的手段。在某些其它实施方案中，这允许悬浮液的性能近似服从溶液粘度的爱因斯坦方程(E.W.J.Mardles，Nature，1940，145，970)：
η＝η0(1+2.5φ) 等式15
其中η是悬浮液的表观粘度，η0是悬浮载体介质的粘度，且φ是溶质或颗粒的体积分数。在某些实施方案中，特别是涉及高体积分数φ的那些实施方案中，悬浮液的性能近似服从其它方程，如Krieger-Dougherty方程或Frankel-Acrivos方程(S.Mueller，E.W.Llewellin，H.M.Mader，Proc.Royal Soc.A，2010，466，1201-1228)等等。还在其它实施方案中，悬浮制剂提供了例如与水性制剂相比在给定浓度下增强某些治疗剂或诊断剂的稳定性并同时改善可注射性的手段。在注射性不一定改善的某些优选实施方案中，悬浮制剂增强了给定浓度下的治疗剂或诊断剂的稳定特性。在一些实施方案中，例如与水性制剂相比，粉末制剂增强了某些治疗剂或诊断剂的稳定性。术语“粉末制剂”是指在不存在载液的情况下包括固体颗粒的固体制剂。在其它实施方案中，粉末制剂适于粉末注射，例如用Portal PRIME装置。
在某些实施方案中，颗粒可悬浮在非水或水性液体中，从而形成非水或水性悬浮液。在某些其它实施方案中，用治疗剂或诊断剂产生非水或水性悬浮液的过程不会显著改变剂的结构或生物活性。此外，本公开允许递送较高剂量的治疗剂或诊断剂，同时最小化递送体积、缩短施用时间和/或减轻疼痛。
术语“可注射性”是指通过使用注射装置可对受试者施用液体制剂的相对容易性。在一些实施方案中，通过在各种剪切速率下测量制剂的粘度来确定可注射性。在其它实施方案中，通过测量致动由注射器筒、柱塞和任选针头组成的标准注射装置所需的脱离力和/或滑动力来确定可注射性。在某些实施方案中，悬浮制剂的可注射性优于具有大致相同浓度的治疗剂或诊断剂的水性制剂的可注射性。术语“注射脱离力”是指在注射器的内容物可以以稳定的速率排出之前克服标准注射装置的注射器筒与柱塞之间的摩擦所需的力。该力在注射器柱塞轴的朝外端施加，并且方向沿着注射器筒的轴线。注射器的内容物任选通过规定规格和长度的注射器针头排出。在一些实施方案中，在致动期间通过放置在注射器柱塞的朝外端的测压元件(load cell)测量注射脱离力。术语“注射滑动力”是指保持标准注射装置的内容物稳定排出所需的力。该力在注射器柱塞轴的朝外端施加，并且方向沿着注射器筒的轴线。注射器的内容物任选通过规定规格和长度的注射器针头的尖端排出。在一些实施方案中，在致动期间通过放置在注射器柱塞的朝外端的测压元件测量注射滑动力。
在一些实施方案中，制备和收集颗粒用于无针注射器或吸入或其它鼻递送系统。在其它实施方案中，颗粒以干粉末形式储存。在某些实施方案中，在施用其中治疗剂或诊断剂溶解在水性或非水溶液中的制剂之前不久重构干粉末。这种范例在一些情况下有益于避免以水性或非水溶液形式而不是干粉末形式储存的某些治疗剂或诊断剂的相对不稳定性或降解。
无针注射系统可涉及施用液体、悬浮液、粉末或抛射物。示例性无针注射系统包括由Portal Instruments和PharmaJet(Stratis)制造的那些等。粉末适于长期储存，并且无需使用这类系统重构或进行大量的使用者准备程序即可在家中注射。包含粉末的无针注射系统往往需要填充有固体药物的注射室和用于将固体药物颗粒喷射到皮肤中的喷嘴。在一些实施方案中，颗粒与气流一起离开喷嘴并撞击皮肤表面。这导致产生颗粒沉积在其中的小穿孔或孔洞。它们穿透角质层，之后完全分布到角质层和有活力的表皮中。用于无针注射的颗粒的密度可以为约0.1至约5g/cm3(在包含磁性纳米颗粒的情况下)，例如约0.1至约2.5g/cm3、约0.1至约1.4g/cm3、约0.5至约1.4g/cm3或约1.0至约1.4g/cm3。较大颗粒的平均直径可以为约1至约100μm，例如约4至约100μm、约10至约100μm或约20至约50μm。
在一些实施方案中，经由双室注射器装置如LYOTWISTTM施用颗粒。颗粒在装置的一个室中以干粉末形式存在，而第二室被水性或非水载液占据。两个室的组分在施用前短暂混合。
在其它实施方案中，含有粉末的装置(例如，双室装置)的室填充有包含本公开的颗粒的浆液。颗粒悬浮在与冻干相容的连续相中，使得随后可以通过这种方式将其从装置中移除。这提供了将所需量的粉末计量到每个装置中的方法，该方法在一些实施方案中比替代的粉末填充方法更容易。
在一些实施方案中，施用装置与药物悬浮制剂发生接触的表面(例如，注射器室的内壁)表现出阻碍被颗粒粘附的表面能。在其它实施方案中，表面具有油涂层，例如硅油涂层，其有助于赋予这种效果。通过颗粒减轻表面粘附对于使施用后的剂量恢复最大化等是有用的。
在其它实施方案中，在转移到容器封闭系统后的一段时间内，颗粒将沉降或沉积出悬浮介质。也可能发生絮凝。可能需要再悬浮和/或逆转絮凝以促进制剂的适当使用或施用。在一些实施方案中，容器封闭件的手动搅动可足以达到此目的。在某些实施方案中，可以通过外部方式(例如，涡旋或声波搅动)来搅动容器封闭系统以供使用。还在其它实施方案中，容器封闭系统本身可结合用于涡旋、声处理或以其它方式搅动制剂的装置，其方式使得絮凝物减少和/或颗粒充分再悬浮以供适当使用。
在某些实施方案中，组合物还包含至少一种药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或其组合。在某些实施方案中，一种或多种治疗剂或诊断剂可以在颗粒中和/或颗粒外部，即在悬浮介质中。包括在悬浮介质中的治疗剂或诊断剂可以与颗粒中使用的相同或不同。一种或多种治疗剂或诊断剂可在施用期间减轻疼痛或炎症。颗粒外部的药物组合物中治疗剂的浓度可以在例如约0.0001至约1000mg/mL的范围内。
术语“可注射性(injectability/syringeability)”是指通过使用注射装置可对受试者施用液体组合物或制剂的相对容易性。在一些实施方案中，通过在各种剪切速率下测量组合物或制剂的粘度来确定可注射性。在其它实施方案中，通过测量致动由筒、柱塞和针头组成的标准注射装置所需的脱离力和/或滑动力来确定可注射性。在优选的实施方案中，包含许多包含至少一种如本文所述的治疗性生物制剂的颗粒的组合物的可注射性优于具有大致相同浓度的水性单体治疗性生物制剂的水性组合物或制剂的可注射性。
术语“注射脱离力”是指在注射器的内容物可以以稳定的速率排出之前克服标准注射装置的注射器筒与柱塞之间的摩擦所需的力。该力在注射器柱塞轴的朝外端施加，并且方向沿着注射器筒的轴线。注射器的内容物通过规定规格和长度的注射器针头排出。在某些实施方案中，在致动期间通过放置在注射器柱塞的朝外端的测压元件测量注射脱离力。
术语“注射滑动力”或“注射器力”是指保持标准注射装置的内容物稳定排出所需的力。该力在注射器柱塞轴的朝外端施加，并且方向沿着注射器筒的轴线。注射器的内容物通过规定规格和长度的注射器针头排出。在某些实施方案中，在致动期间通过放置在注射器柱塞的朝外端的测压元件测量注射脱离力。术语“牛顿体系”或“N”意指在每一点与局部应变速率成线性比例或几乎成线性比例的一系列剪切速率。
在一些实施方案中，组合物能够使用约2N至约80N的注射器力进行分配。在其它实施方案中，组合物能够使用约2N至约40N的注射器力进行分配。
在其它实施方案中，组合物能够使用约3N至约80N的注射器力进行分配。在其它实施方案中，组合物能够使用约3N至约40N的注射器力进行分配。
通过参考以下实施例将会更容易理解一般性描述的本公开内容，这些实施例仅出于说明本公开的某些方面和实施方案的目的而包括，并不旨在进行限制。
示例
缩写
Figure BDA0003192505500001481
埃
aa 氨基酸
BSA 牛血清白蛋白
℃ 摄氏度
cm 厘米
d 天
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMA N,N-二甲基苯胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DTE 二硫赤藓糖醇
DTT 二硫苏糖醇
EDT 1,2-乙二硫醇
EDTA 乙二胺四乙酸
Eq. 等式
eq. 当量
Et 乙基
g 克
h 小时
HPLC 高效液相色谱法
Hz 赫兹
IV 静脉内
kJ 千焦
LC-MS 液相色谱质谱法
m 间
mAb 单克隆抗体
MALDI-MS 基质辅助激光解吸电离质谱法
Me 甲基
MHz 兆赫
min 分钟
μg 微克
μL 微升
μm 微米
μM 微摩尔
mg 毫克
mL 毫升
mm 毫米
mM 毫摩尔
mol 摩尔
nm 纳米
NMP N-甲基吡咯烷酮
p 对
PBS 磷酸盐缓冲盐水
PEG 聚乙二醇
PEGA 聚乙二醇聚丙烯酰胺
ppm 百万分率
ps 皮秒
RP-HPLC 反相-高效液相色谱法
rpm 每分钟转数
s 秒
SC 皮下
sec 秒
SEM 扫描电子显微镜
t 叔
tert 叔
UHMW 超高分子量聚乙烯
ug 微米
UTW 超薄壁
UV 紫外
V 伏
vol％ 体积％
wt％ 重量％
材料
罗氏的利妥昔单抗的生物类似物购自一家供应商，该供应商提供与FDA标签一致的水性组合物中的抗体，所述标签定义为10mg/mL利妥昔单抗、9mg/mL氯化钠、7.35mg/mL二水合柠檬酸钠和0.7mg/mL聚山梨醇酯80。用于处理颗粒的定制“进料溶液”的组合物是通过修改FDA标签制剂产生的，方式是通过脱盐，接着浓缩并添加所需的赋形剂。颗粒组合物中使用的所有赋形剂均已在现有批准的生物制剂注射剂中使用过。
人IgG(IRHUGGF-LY，>97％)和牛IgG(IRBVGGF)作为冻干粉末或水溶液获自Innovative Research。在水溶液中获得抗体产物(mAb1、mAb2、mAb3、mAb4)。后三种mAb按原样使用，而mAb1基于所关注的条件重新配制。浓缩柱购自Millipore Sigma(
Figure BDA0003192505500001501
Ultra 15mL过滤器，用于蛋白质纯化和3kDa截止的浓缩)，并在必要时用于：(i)达到所需的蛋白质浓度，和(ii)在颗粒形成前交换缓冲液/赋形剂。在某些情况下Zeba脱盐柱(ThermoFisher Scientific 87773)也用于从溶液中移除盐。通常，脱盐溶液中的残留盐与剂的比率(wt/wt)<1％。所有赋形剂均购自Sigma-Aldrich，并且按原样使用。
适当情况下使用干燥液体，即第二液体，包括苯甲酸苄酯、各种醇、各种乙酸酯、油、离子液体、表面活性剂和包含不同形式的聚乙二醇(PEG)的水性介质。苯甲酸苄酯是一种有机液体，在很大程度上与水不混溶，其表现出的密度(d＝1.12g/cm3)通常介于液体进料溶液的密度(在水的情况下d≈1g/cm3)与固体蛋白质的密度(即干蛋白质粉末的密度d≈1.25-1.35g/cm3)之间。因此其用作一种介质，液滴漂浮在其上，同时经由第一液体在苯甲酸苄酯中分散和第一液体在周围介质(例如，空气)中蒸发(典型地大约几秒或更短)而经历初级干燥。干燥的颗粒之后下沉，使得在湿进入液滴与处理颗粒之间产生空间分离。这种分离有助于化解颗粒聚结等现象。剩余液体通常表现出的密度小于或接近进料溶液的密度。液滴不倾向于漂浮，因此初级干燥主要由第一液体在第二液体中的分散驱动。除了离子液体以外，所有干燥(“第二”)液体均购自Sigma Aldrich，并按原样使用，例如乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、枯烯、1,2-二氯乙烯、二氯甲烷、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二噁烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、甲基异丁基酮、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢呋喃、四氢化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯、二甲苯、乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲乙酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯、三乙胺、1,1-二乙氧基丙烷、1,1-二甲氧基甲烷、2,2-二甲氧基丙烷、异辛烷、异丙醚、甲基异丙基酮、甲基四氢呋喃、石油醚、三氯乙酸、三氟乙酸、癸醇、乙酸2-乙基己酯、乙酸戊酯。离子液体购自TCI America，并按原样使用。
方法
颗粒形成：除另有说明外，使用电喷雾装置来形成用于干燥和颗粒形成的液滴。在大多数情况下，此装置包括由Matsusada EQ-30P1-LCt或EQ-30N1-LCt高电压DC电源充电的Sono-Tek 120kHz超声雾化器，而在其它情况下，其被小钝一次性注射器针头(VWRInternational)替代。Harvard装置33型双通道注射器泵用来泵送进料溶液。收集由装置产生的液滴，用于通常在连续搅拌的条件下通过含有第二液体的容器进行干燥。在选定样品的制备中利用第二液体的热管理。容器中第二液体的表面与液滴源的尖端之间的距离通常为10-20cm。
冷干：将冻干样品(即，标记为已经历了涉及冷冻干燥的二次干燥步骤的样品)的颗粒装入微量离心机或15mL锥形管中，并通过在液氮中浸没大约10分钟进行快速冷冻。然后将样品松散地覆盖，并转移到Virtis Advantage或Labconco FreeZone冻干机中，在大约10-50mTorr的压力下保持大约24小时。
FlowCam：使用动态图像分析仪FlowCam测量颗粒大小。将样品在异丙醇中稀释至约1mg/mL，并通过细通道。记录颗粒的图像并根据尺寸和形状进行分析。
ImageJ测量：对SEM图像采用ImageJ分析测量颗粒直径。对600X图像进行分析。对图像运行ImageJ颗粒分析工具，根据每个对象轮廓识别圆形度>0.8且尺寸>0.5um的对象。目视检查这些轮廓是否适配良好。手动剔除任何错误识别的颗粒，并使用ImageJ直径工具手动包括并测量任何遗漏的颗粒。
加速储存方案：将所有样品转移到Wheaton E-Z提取圆底玻璃小瓶中进行老化(2mL或4mL体积，取决于样品)。将玻璃小瓶用石蜡膜密封，置于40℃烘箱中，并在老化期间每天进行目视检查以确保完整性。
粘度测量：使用AR-G2流变仪(TA Instruments)和25mm板在25℃下测量表观悬浮液粘度。以1000s-1(由于边缘效应造成的实验限制)进行测量，其低于27号针经历的剪切速率，但对于悬浮液是在牛顿体系中。每个测量重复三次(重复之间的间隔约60s)以评估悬浮液的短期物理稳定性。在每次测量之前，记录校准标准以确认仪器设置。
可注射性测量：使用定制的力传感器装置和带有27号超薄壁针(TSK)的1-mLNorm-ject模型注射器，在以0.1mL/s排出1mL悬浮液(400mg/mL颗粒)期间测量注射器力。
卡尔费休：采用卡尔费休分析进行水分含量的测试。将大约100mg颗粒在烘箱中加热到105℃，并通过库仑法测定释放的水。
骨架密度：通过气体比重测定法测量骨架密度。气体为氮气，且颗粒质量为0.0413g。
颗粒溶解：将磷酸盐缓冲盐水(PBS)添加到干颗粒样品中以产生10mg/mL的最终浓度(颗粒质量/mL溶液)。将样品放置在速度设定为“35”和角度设定为“15”的VWR角形摇床上。在1、10、20、30、40、50、60、90和120分钟时，从样品小瓶中取出10μL等分试样，测量并记录280nm处的吸光度。将所有样品的mAb浓度对时间作图。
盐含量：通过采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)测量钠含量来记录盐含量。使用钠标准物(ICPTraceCERT，1000mg/L)准备校准曲线。使用100ppm钠的稀释标准溶液完成质量控制。然后分析溶解在2体积％硝酸(10mL)中的颗粒样品(～15mg)，得到的强度低于～0.5ppm的钠仪器检测限。这表明钠含量小于0.034重量％，且总盐含量(假设柠檬酸钠和氯化钠已被同等地移除)小于0.1重量％。
尺寸排阻色谱法(SEC)测量：通过尺寸排阻色谱法确定选定样品中的尺寸变体的定量。分析使用在HPLC系统(1260Infinity II，Agilent)上运行的AdvanceBio SEC-3柱，7.8mm ID x 30cm，3μm(Agilent)。流动相为25mM磷酸钾和0.25M氯化钾，pH 6.8。色谱法以1.0mL/min的流速等度运行15分钟。将柱温保持在环境25℃下，并在280nm处监测洗脱液吸光度。将每种单克隆抗体用其各自的制剂缓冲液稀释至1mg/mL。注射体积为10μL。20μL样品注射液(1mg/mL)在Agilent AdvanceBio SEC(300mm x 2.7um，
Figure BDA0003192505500001531
柱)上以在SEC缓冲液(25mM磷酸盐、250mM NaCl pH 6.8)中为1mL/min的流速运行15分钟。使用以下参数通过自动积分进行峰分析：斜率灵敏度＝0.5，峰宽＝0，高度剔除＝0，面积剔除＝0，肩偏，面积百分比剔除0，标准正切掠过模式，高级基线校正，前峰掠过高度比0，尾峰掠过高度比0，峰谷比0，掠过谷比0。
差示扫描荧光测定法(DSF)测量：使用QuantStudio 6Flex仪器评估配制之前和之后以及在40℃储存的各个时间点的蛋白质的解链温度。将透析后制备的五微升(5μL)样品(1mg/mL)一式四份装载到96孔热循环仪板上。向每个孔中添加12.5μL超纯去离子水和2.5μL的
Figure BDA0003192505500001541
Orange染料(8x)。温育5分钟后，将样品以0.05℃/s的攀升速率从25℃运行至99℃。采用Boltzmann拟合，使用蛋白质热移位软件(Thermo Fisher，1.3版)计算解链温度。
圆二色性(CD)测量：使用Jasco J-815仪器评估配制之前和之后以及在40℃储存的各个时间点的蛋白质的二级结构(α螺旋和β折叠)的保留程度。将透析后制备的四百微升(400μL)样品(0.5mg/mL)装载到石英比色皿(1mm路径长度)中。在190-260nm范围内扫描样品。稀释缓冲液用作每个样品的空白扣除。采用以下仪器设定：
光度测定模式：CD、HT
测量范围：260-190nm
数据间距：0.5nm
灵敏度：标准
D.I.T.：4秒
带宽：1.00nm
启动模式：立即
扫描速度：100nm/min
快门控制：自动
基线校正：无
CD检测器：PMT
PMT电压：自动
阳离子交换色谱法(CIEX)测量：使用Agilent BioMAb NP5，4.6×250mm，PEEK离子交换柱，在加速储存条件下在第0、7和30天对每个样品进行电荷变体分析。在水中过夜透析后，以1mg/mL浓度制备样品。缓冲液A制备为：30mM磷酸盐，pH：6.3，和NaCl：0mM。缓冲液B制备为：缓冲液A：30mM磷酸盐，pH 6.3加NaCl：175mM。样品以梯度方式运行，以100％缓冲液A开始，经20分钟过程攀升至100％缓冲液B，此后将梯度设定为在接下来的1分钟内返回至100％缓冲液A和0％缓冲液B。在注射下一个样品之前，将系统在100％缓冲液A中再平衡10分钟。以手动掠过峰模式进行积分以反映以下方案中的Agilent数据：https://www.agilent.com/cs/library/applications/5991-5557EN.pdf。
单克隆抗体结合测定(流式细胞术)：利用表达适当细胞表面受体的细胞评估来自选定样品的单克隆抗体的细胞结合能力。将细胞在4℃下与相应浓度的单克隆抗体一起温育30分钟，然后以2000rpm旋转，接着用PBS洗涤三次。然后将细胞与用PE荧光标记的二级山羊抗人Fab抗体一起在4℃下温育30分钟。然后将细胞以2000rpm旋转，接着用PBS洗涤三次。然后将细胞再悬浮，然后在Attune流式细胞仪(Invitrogen)上进行分析。将100万个Raji细胞(100μL/孔)铺板在96孔“V形底”板中的每个孔中，并将10μL起始浓度为200μL的mAb标记、颗粒或悬浮液添加到孔中。mAb标记、颗粒和悬浮液的稀释因子为3X。将板在4℃下温育30分钟。将板以2000rpm离心5分钟，并用PBS洗涤3次。以1:200稀释度添加100μL的PE缀合山羊抗人IgG作为二级抗体。将板以2000rpm离心5分钟，并用PBS洗涤3次。然后将细胞再悬浮于200μL冷PBS中，以在Life Technologies Attune NXT流式细胞仪上进行分析。
扫描电子显微镜检查：用Hitachi TM3030Plus或TM1000桌面显微镜收集选定样品的电子显微照片。将样品固定在导电胶带上，并在低真空防带电环境中进行检查，无需进行样品准备。
图像分析：基于(i)最小的颗粒重叠，(ii)颗粒与背景之间良好的对比度，和(iii)提供至少10个像素的颗粒占有率的分辨率，选择选定的显微镜图像用于进一步分析。这允许很容易地识别颗粒并减小基于分辨率的误差。应用二元阈值将颗粒与背景分离，并应用分水岭分割算法来确保单独的颗粒被分开测量。然后将ImageJ工具“Analyze Particles”应用于具有以下参数的二元图像：0.5与1.0之间的圆形度；5与无穷大平方微米之间的尺寸；在边缘上排除；填充孔。将所识别的颗粒的轮廓覆盖到原始图像上。然后弃去被错误识别的颗粒，如被识别为单个颗粒的簇或轮廓与颗粒不匹配的颗粒。通过手动追踪颗粒的轮廓并使用ImageJ的测量工具来测量遗漏颗粒。
密度分析：通过用AccuPyc II 1340气体置换比重测定系统检查大约0.1g粉末来测定来自选定样品的颗粒的骨架密度。
水含量分析：通过将大约0.1g粉末置于具有卡尔费休滴定仪的真空烘箱中并加热样品来测定来自选定样品的颗粒中的残留水分。
ELISA测定：对选定的样品采用ELISA测定，从而以变性敏感的方式检测人抗体。首先将人IgG在PBS中铺板1小时，接着持续4分钟用洗涤缓冲液(PBS+0.05％吐温20)洗涤三次，接着用在洗涤缓冲液中的2％BSA(Sigma)封闭45分钟，接着与稀(20μg/mL)蛋白A-HRP(Abcam)一起温育45分钟，接着持续3分钟用洗涤缓冲液洗涤三次，接着与TMB(Abcam)一起温育10分钟，最后接着用STOP溶液(Abcam)淬灭反应。在Thermo Multiskan Spectrum上进行比色读数。
亚可见颗粒(SvP)分析：用Fluid Imaging Technologies FlowCam PV-100系统分析亚可见颗粒(SvP)。将用于分析的样品在无菌离心管中用过滤水(Milli-Q)重构至所关注的浓度。此后研究了三组样品。这些包括(i)用于重构的稀释液样品，(ii)用于颗粒形成过程的进料溶液的等分试样，即第一液体的样品，和(iii)重构的物质。
加速储存：选定样品在加速条件下进行储存，方式是通过在温育箱或烘箱中将它们在高温(40℃)下保持限定的时间段。将样品保存在2mL或4mL的Wheaton玻璃小瓶中，并用石蜡膜密封。
氦离子显微镜检查(HIM)：使用HIM仪器收集选定样品的离子显微照片。源能量、工作距离和孔口尺寸通常分别为29keV、9mm和10微米。对于选定的样品，使用聚焦镓离子束来切割颗粒以分析内部结构。对倾斜的样品进行烧蚀，源电流、停留时间和切割间距分别为300pA、0.5-1μs和2-5nm。
X-射线光电子能谱法(XPS)：将少量粉末沉积到附着于一件硅晶片的烃带上，并轻轻按压以形成致密均匀床层。通过轻轻敲击晶片件的边缘移除过量的松散粉末。在临分析前制备样本。使用单色Al KαX-射线(1486.6eV)，用Kratos Axis Ultra光谱仪进行XPS测量。对于每个样品，从测定表面元素组成的大约2mm×1mm(通能＝160eV；225W功率)的区域获取测量光谱。使用磁聚焦电子束作为泛电流来实现电荷补偿。用于分析的标准光电子出射角为90°，给出的采样深度在5-8nm范围内。使用假设探测样品体积均匀的定量模型分析表面元素组成。
反相气相色谱法(IGC)：采用反相气相色谱法分析粉末样品。用200至300mg粉末样品填充圆柱形柱以构成固定相。在惰性气体吹扫之后，将一系列气体探针注射到柱上。测定每个探针的保留体积能够评价每个样品的表面能的分散和极性分量。
X射线衍射(XRD)：将样品装入0.7mm直径的玻璃毛细管中。在装备有入射束聚焦镜和X’Celerator检测器的PANalytical Empyrean衍射仪上测量粉末图。使用Mo Ká辐射测量图(1-50°2θ，0.0167113°步长，4秒/步长，1/4°发散狭缝，0.02弧度索勒狭缝)。如果静电效应(对于评价冻干对照的情况，这在研钵和研杵中研磨后发生)阻止将样品装入毛细管中，则在配备有LynxEye位敏检测器的Bruker D2 Phase衍射仪上由平板样本测量其粉末图。使用Cu Kα辐射从5-100° 2θ以0.0202144°步长测量图，计数1.0秒/步长。采用标准仪器设置(30kV，10mA，0.6mm发散狭缝，2.5°索勒狭缝和3mm散射屏高度)。
微流颗粒大小(MPS)：使用FlowCam PV-100进行用于颗粒尺寸分析的流动成像显微镜检查。为了研究颗粒的尺寸和分散性，经由声处理将5mg粉末分散在10mL无水异丙醇中。异丙醇连续相阻止颗粒溶解，即阻止重构。将0.3mL注射到细胞中，并采用0.15mL/分钟的流速拍摄颗粒的图像。分析中报告了圆形度大于0.9的颗粒，并从分析中去剔除了重像，得到在1至100μm范围内的颗粒的尺寸分布和分散度。
动态蒸气吸附(DVS)：采用动态水蒸气吸附分析粉末。将大约50mg粉末样品装载到仪器的微量天平盘中。将样品等温保持在22°，并在整个测量过程中监测样品质量。在0％RH吹扫以移除表面水之后，样品室中的相对湿度(RH)以每小时4％RH的恒定速率攀升至90％RH。将样品在90％RH下保持一小时，然后将RH作为阶跃变化降低至0％。将样品在0％RH下保持一小时，此后终止测量。
动态扫描量热法(DSC)：采用动态扫描量热法分析粉末样品。将质量为5至10mg的粉末样品装载到铝坩埚中并密闭密封。将坩埚装载到仪器中，并监测进入样品的热流，同时使温度以5℃/分钟的恒定速率从30℃攀升至250℃。
抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)：使用基于ADCC荧光素酶的试剂盒(Promega-G7015)，将靶细胞铺板在96孔板中(25μL/孔；12,500个细胞/25μL)。向每个孔中添加25μL抗体溶液(2μg/mL起始浓度)，此后进行3X连续稀释。添加效应细胞(25μL/孔；75,000个细胞/25μL)，并将板在37℃温育箱中温育6h。然后将板在RT下平衡15分钟，之后向每个孔中添加30μL荧光素试剂。将25μL体积的Raji细胞按12,500个细胞/孔铺板在96孔板中，接着添加25μL起始浓度为2μg/mL的mAb，并在其上进行3X连续稀释。按75,000个细胞/孔添加25μL体积的效应细胞，并将板在37℃温育箱中温育6h。然后将板在RT下平衡15分钟。将30μL荧光素试剂添加到每个孔中。使用Thermo Scientific Varioskan LUX光度计测量发光。
USP<790>：根据USP<790>标准，在大于2000lux的光照条件下，以白色和黑色为背景目视观察溶解颗粒的样品。背景选择哑光高密度聚乙烯板以减少眩光。用照度计(Dr.Meter，LX1330B)确认观察点的照度。将样品打旋，之后举到背景上并观察5秒钟。
实施例
本文公开的方法已经在单独的情况下用于制备包括若干种剂(例如，全人IgG或牛IgG或若干种单克隆抗体之一)中的至少一种的颗粒。应用各种分析技术来评估颗粒本身的物理特性以及处理的剂的结构和功能特性。采用扫描电子显微镜检查和相关的图像分析分别研究颗粒形态和尺寸分布。通过控制第一液体和/或第二液体的特性实现组分的各种形态和分布。在一些情况下，处理条件赋予高球形度的平滑颗粒和/或在宽范围内容易控制平均颗粒尺寸且分散度低。在某些情况下，颗粒表面也以受控的方式用组分(例如，赋形剂)进行装饰。密度和水含量测量表明，颗粒接近结晶填充效率，并且在后处理后保留非常低水平的残留水分。如对重构物质进行的ELISA和结合测定所证实，剂的功能特性也得以保留。尺寸排阻HPLC分析证实了这一点，表明处理对蛋白质间缔合程度具有最小或甚至补救性的影响。最后，对重构后不溶性颗粒群体的研究显示不溶性伪影非常少，特别是与替代的颗粒形成程序相比。
实施例1
制备氯化钠(30mg/mL)和表面活性剂(0.1％w/w)的溶液，并使用旋转膜乳化系统进行处理。该系统由多孔玻璃膜组成，该多孔玻璃膜的中值孔径为5微米，外径为10mm，内径为9mm，且总长度为4mm，经由管状轴和旋转结合配件与液体泵连接。使用顶置式混合器对膜施加旋转运动。将膜浸入300mL第二液体中，在玻璃容器内使用磁力搅拌棒对其进行搅拌。将膜以大约900rpm旋转，同时以1.5mL/min将3.0mL进料溶液泵送通过膜。使用0.5微米膜滤器使脱水颗粒与第二液体分离并真空干燥以移除残留溶剂。SEM图像显示有可识别的颗粒物质。
实施例2
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约60mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(12mg/mL)、碳水化合物(3mg/mL)、盐(2.1mg/mL)和表面活性剂(1.8mg/mL)。利用流动聚焦装置在乙酸乙酯流中形成溶液滴。流动聚焦装置包括套管式组件，即同轴组件，其中内管沿外管的轴线放置。内管分别具有大约100微米和360微米的内径和外径。外管分别具有大约1/32”和1/16”的内径和外径。套管式组件以一定方式与聚焦毛细管连接，使得内管的出口和聚焦毛细管的入口间隔大约1mm的轴向距离。聚焦管的内径和外径分别为大约100微米和360微米，长度为大约10cm。将乙酸乙酯以大约3mL/min的速率泵送通过外管，同时将溶液以大约0.03mL/min的速率泵送通过内管。将来自聚焦管出口的液流收集在容器中，所述容器含有大约200mL乙酸乙酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质。
实施例3
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。制备包含用于化解聚结的适当浓度的适当表面活性剂的乙酸乙酯溶液。将人IgG溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积5V0的乙酸乙酯溶液，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将人IgG溶液的第二样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积V0的乙酸乙酯溶液，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将人IgG溶液的第三样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积0.5V0的乙酸乙酯溶液，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将人IgG溶液的第四样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积0.1V0的乙酸乙酯溶液，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集所有样品并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有所有样品的可识别的颗粒物质。
实施例4
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约60mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(4mg/mL)、碳水化合物(1mg/mL)、盐(0.7mg/mL)和表面活性剂(0.6mg/mL)。将溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体A)。佩克莱特数小于1。圆形度经计算为0.896，粗糙度为4.637。将溶液的第二样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体B)。佩克莱特数大于1。圆形度经计算为0.925，粗糙度为6.991。在初级干燥后，收集来自两个样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，且佩克莱特数提供了对颗粒形态的一定程度的控制。较低的佩克莱特数与平滑球状颗粒相关(图1A)，而较高的佩克莱特数与包含内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关(图1B)。
实施例5
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐。制备两个乙酸乙酯溶液，一个是纯的(第二液体A)，另一个以50mg/mL的浓度包含一定量的PLGA(第二液体B)。PLGA用作粘度调节添加剂。将人IgG溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器包含体积大于V0的第二液体A，在温和搅拌的条件下保持在室温。将人IgG溶液的第二样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器包含体积大于V0的第二液体B，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自两个样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，且粘度调节添加剂提供了对颗粒形态的一定程度的控制。第二液体A与包含内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。第二液体B与包含较小程度的内部空隙空间和较小程度的表面皱纹的颗粒相关。
实施例6
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约20mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(4mg/mL)、碳水化合物(1mg/mL)、盐(0.7mg/mL)和表面活性剂(0.6mg/mL)。制备三个乙酸乙酯溶液，一个是纯的(第二液体A)，一个以10mg/mL的浓度包含去离子水(第二液体B)，另一个以15mg/mL的浓度包含去离子水(第二液体C)。将人IgG溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体A，在温和搅拌的条件下保持在室温。将人IgG溶液的第二样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体B，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将人IgG溶液的第三样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体C，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，且第二液体的预饱和提供了对颗粒形态的一定程度的控制。第二液体A与圆形度为0.900且粗糙度为4.306的包含内部空隙空间(图2A)的颗粒相关。第二液体B与圆形度为0.970且粗糙度为2.510的包含较小程度的内部空隙空间(图2B)的颗粒相关。第二液体C与圆形度为0.884且粗糙度为2.186的包含还更小程度的内部空隙空间(图2C)的颗粒相关。
实施例7
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约10mg/mL来制备人IgG的溶液(第一液体A)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约30mg/mL来制备人IgG的第二溶液(第一液体B)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约100mg/mL来制备人IgG的第三溶液(第一液体C)。将所有三种溶液脱盐。将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸乙酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。佩克莱特数为约1左右或更高。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明第一液体的溶质浓度提供了对颗粒形态的一定程度的控制。第一液体A与高度起皱的葡萄干样颗粒相关。第一液体B与包含内部空隙空间和起皱程度较小的表面的颗粒相关。与第一液体B相比，第一液体C与包含较小程度的内部空隙空间和较小程度的表面皱纹的颗粒相关。
实施例8
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。制备包含一定量的表面活性剂的乙酸乙酯溶液，所述表面活性剂足以在颗粒形成的时间量程上和在颗粒形成的条件下稳定第一液体的液滴。将第一液体的样品(样品A)雾化，并收集在不锈钢容器中，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸乙酯溶液，在温和搅拌的条件下保持接近室温。佩克莱特数为约1左右或更高。将第一液体的第二样品(样品B)雾化，并收集在不锈钢容器中，所述不锈钢容器含有体积小于V0的乙酸乙酯溶液，在温和搅拌的条件下保持接近室温。以受控的速率向容器中添加额外体积的乙酸乙酯以实现约1左右或更小的有效佩克莱特数。在初级干燥后，收集来自两个样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明引入乙酸乙酯的速率提供了对颗粒形态的一定程度的控制。样品A与包含内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。样品B与具有较小程度的内部空隙空间和较小程度的表面皱纹的包含平滑球状形态的颗粒相关。
实施例9
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约60mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(4mg/mL)、碳水化合物(1mg/mL)、盐(0.7mg/mL)和表面活性剂(0.6mg/mL)。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。HIM图像显示有可识别的颗粒物质。颗粒的横截面表明存在许多圆形孔(空隙分数为10.8％)，直径为大约100nm(图3A-3B)，具有0.872的圆形度和9.904的粗糙度。
孔由液滴内乳化事件产生，其特征在于：
1.在液滴寿命的早期，第二液体扩散进入第一液体，浓度接近饱和极限。
2.在液滴寿命的后期，第二液体在液滴内的过饱和及纳米液滴成核。纳米微滴形成孔的模板。
3.第二液体在洗涤、二次脱水或样品制备期间扩散流出，导致产生孔隙率。
实施例10
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的溶液(第一液体A)。将溶液脱盐。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第二溶液。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸，其浓度为溶解度极限的至少90％，即氨基酸接近其溶解度极限比人IgG接近其溶解度极限更甚(第一液体B)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为50mg/mL来制备人IgG的第三溶液。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸，所述氨基酸的特征在于佩克莱特数大于人IgG的佩克莱特数(第一液体C)。将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明第一液体中的氨基酸的浓度、溶解度和佩克莱特数提供了对颗粒形态的一定程度的控制。第一液体A与在很大程度上没有内部空隙空间的平滑球状颗粒相关。第一液体B和C与高度起皱的葡萄干样颗粒相关。形态的转变可能与氨基酸赋形剂的过早表面富集或沉淀和结晶有关。
实施例11
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约20mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。添加一定量的氨基酸(4mg/mL)、碳水化合物(1mg/mL)、盐(0.7mg/mL)和表面活性剂(0.6mg/mL)。将溶液的样品(样品A)直接冻干。将溶液的第二样品(样品B)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥，直至残留水分含量类似于样品A。通过XPS分析两个样品。结果表明在两个样品中表面元素组成有差异，且因此组分相对于平均组成的表面分布有差异。
Figure BDA0003192505500001651
实施例12
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约20mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。添加一定量的氨基酸(4mg/mL)、碳水化合物(1mg/mL)、盐(0.7mg/mL)和表面活性剂(0.6mg/mL)。将溶液的样品(样品1)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体A)，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将溶液的第二样品(样品2)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体B)，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥。IGC分析显示，与样品2相比，样品1具有显著较大的分散表面能(图4)。结果表明，可通过选择第二液体来改变颗粒的表面能。这对颗粒在药物悬浮制剂中的行为有影响，因为表面能将影响胶体稳定性、相对粘度、再分散性以及与容器封闭组件的粘合相互作用。
实施例13
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约20mg/mL来制备人IgG的溶液(样品1)。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(4mg/mL)、碳水化合物(1mg/mL)、盐(0.7mg/mL)和表面活性剂(0.6mg/mL)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至浓度为大约20mg/mL来制备人IgG的第二溶液(样品2)。将溶液脱盐，并添加一定量的盐(6.3mg/mL)。将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。IGC分析显示，与样品2相比，样品1具有显著较低的极性表面能(图5)。此结果表明，可以通过改变所用赋形剂的类型或数量来改变颗粒的表面能。
实施例14
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将一定量的赋形剂(10mg/mL)添加到溶液中，此后将其雾化并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。第一液体在第二液体中的溶解度极限为c1，s。赋形剂在第一液体于第二液体中的饱和混合物(即其中第一液体处于或接近溶解度极限的溶液)中的溶解度极限大于人IgG的溶解度极限。这允许其在颗粒形成期间在围绕液滴的饱和第二液体中溶解，使得其优先留存在表面上。XPS分析显示相对于人IgG的定量，表面上有大量的赋形剂。
实施例15
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的溶液(第一液体A)。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(4mg/mL)，其浓度与其溶解度相差甚远，即与其溶解度极限相差比人IgG与其溶解度极限相差甚远。氨基酸的佩克莱特数类似于人IgG的佩克莱特数。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第二溶液。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸，其浓度为溶解度极限的至少90％，即接近其溶解度极限比人IgG接近其溶解度极限更甚(第一液体B)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为50mg/mL来制备人IgG的第三溶液。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸，所述氨基酸的特征在于佩克莱特数大于人IgG的佩克莱特数(第一液体C)。将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。XPS测量显示，第一液体中的氨基酸的浓度、溶解度和佩克莱特数提供了对颗粒形态的一定程度的控制。与第一液体A相比，第一液体B和C与它们的氨基酸的大得多的表面富集相关。增加的表面富集是氨基酸接近其在第一液体(第一液体B)中的溶解度极限或相对于第一液体(第一液体C)中的其它组分高的佩克莱特数的副产品。
实施例16
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将PLGA以大约50mg/mL的浓度或低于溶解度极限的另一浓度溶解在乙酸乙酯中。使用同轴雾化器产生核-壳滴剂，其核包含人IgG溶液，且壳包含PLGA溶液。用不锈钢容器收集液滴，所述不锈钢容器包含体积大于V0(相对于壳液体测量)的去离子水，在温和搅拌的条件下保持接近室温。壳液体分散在去离子水中以形成包含PLGA壳的颗粒。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质。
实施例17
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约60mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(12mg/mL)、碳水化合物(3mg/mL)、盐(2.1mg/mL)和表面活性剂(1.8mg/mL)。将溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。XRD分析显示没有可辨别的布拉格峰(图6)，表明不存在结晶物质，尽管有若干种赋形剂有时易于结晶。
实施例18
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约60mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(12mg/mL)、碳水化合物(3mg/mL)、盐(2.1mg/mL)和表面活性剂(1.8mg/mL)。将溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。基于特征干燥时间选择第二液体，所述特征干燥时间相对于替代液体如乙酸2-乙基己酯的干燥时间较长，例如Fo*更大。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。XRD分析显示了布拉格峰，表明存在结晶物质。结晶物质可能存在是由于颗粒形成时间相对于替代的第二液体(例如，乙酸2-乙基己酯)可能提供的时间拖长。
实施例19
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约60mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的氨基酸(浓度等于溶解度极限的95％，约12mg/mL)、碳水化合物(3mg/mL)、盐(2.1mg/mL)和表面活性剂(1.8mg/mL)。基于结晶的倾向性和相对低的溶解度极限选择氨基酸，后者将导致其在液滴干燥过程的早期沉淀。将溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。XRD分析显示布拉格峰与氨基酸一致，表明存在结晶氨基酸。进一步分析显示，结晶物质优先位于颗粒的表面附近，这可能是由于在颗粒形成过程期间结晶域不能有效扩散。
实施例20
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并以50mg/mL相等浓度添加一定量的两种赋形剂(赋形剂A和B)。溶液的三种组分的佩克莱特数的顺序是这样的，人IgG<赋形剂A<赋形剂B，即人IgG具有最低的佩克莱特数，而赋形剂B具有最高的佩克莱特数。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。使用镓聚焦离子束(FIB)将其中一个颗粒切成两半以展示颗粒内部的截面。采用俄歇电子能谱法(AES)沿着在截面的中心与边缘之间延伸的线r对截面的组成进行采样。XPS显示人IgG在截面的中心具有最高的局部丰度，赋形剂A在线r的中途点具有最高的局部丰度，而赋形剂B在截面的边缘具有最高的局部丰度。丰度的分布可以反映溶质的佩克莱特数。
实施例21
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液的样品(样品A)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体A)，在温和搅拌的条件下保持接近室温。第二液体A没有已知的使人IgG稳定或不稳定的倾向。将溶液的第二样品(样品B)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体B)，在温和搅拌的条件下保持接近室温。基于稳定人IgG的已知倾向选择第二液体B。这种稳定可通过如下方式来实现，降低治疗剂或诊断剂偏离其功能或天然状态的倾向；降低治疗剂或诊断剂可逆或不可逆自缔合的倾向；和/或降低治疗剂或诊断剂吸附于各种界面(包括气-液、液-固和液-液等)的能力。在初级干燥后，收集来自两个样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。然后将来自两个样品的颗粒在适当的介质中重构，用于SEC和SvP分析。SEC分析显示样品B具有比样品A更少的聚集体和/或片段。SvP分析显示样品B具有比样品A更少的不溶性伪影。
实施例22
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的赋形剂(1mg/mL)。制备若干种第二液体，每种都包含乙酸乙酯与以0mg/mL与溶解度极限之间的各种浓度溶解的一定量赋形剂。将人IgG溶液的样品雾化，并用不锈钢容器收集，每个容器含有体积大于V0的若干种第二液体之一。第二液体在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥。重构样品以确定颗粒中人IgG与赋形剂的质量比。具有0mg/mL赋形剂的第二液体可对应于具有比预期更少的赋形剂的颗粒，而具有处于溶解度极限的赋形剂的第二液体可对应于比预计更多的赋形剂。结果可用于校准第二液体中的赋形剂浓度，以保持人IgG与赋形剂的所需比率。
实施例23
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约25mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加一定量的碳水化合物(6mg/mL)和表面活性剂(1mg/mL)。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。使用乙酸乙酯(表面活性剂可溶于其中的洗涤液体)洗涤所得颗粒。使用蒸发光散射检测器(ELSD)测定颗粒中剩余的表面活性剂的量。颗粒中表面活性剂的重量分数小于基于第一液体组成的预期。
实施例24
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液的样品(样品A)在不施加电压的情况下雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将溶液的第二样品(样品B)用外加电压雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的相同第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在两种情况下，佩克莱特数均为约1或更高。然而样品B的液滴被充电到瑞利极限的高分数。在初级干燥后，收集来自样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明液滴电荷提供了对颗粒形态的一定程度的控制。样品A与包含内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。样品B与较小程度的内部空隙空间和起皱表面相关。
实施例25
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约5mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液的样品(样品A)在不施加电压的情况下雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将溶液的第二样品(样品B)用外加电压雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的相同第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。样品B的液滴被充电到瑞利极限的高分数。在初级干燥后，收集来自样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明液滴电荷提供了对颗粒形态的一定程度的控制。样品A与包含起皱表面的颗粒相关，这可能是由于颗粒形成过程期间的表面翘曲。样品B与较小程度的表面翘曲相关，这可能是由于库仑效应，其起到保持更呈球形形态的作用。
实施例26
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的溶液(第一液体A)。将溶液脱盐。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第二溶液(第一液体B)。将溶液脱盐，并添加一定量的赋形剂(10mg/mL)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第三溶液(第一液体C)。将溶液脱盐，并以较高的浓度(50mg/mL)添加一定量相同的赋形剂。第一液体B和C中的赋形剂的选择是基于其在溶液中携带净电荷的事实。用施加的电压将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自样品的颗粒，洗涤并真空干燥。XPS分析显示赋形剂在由第一液体B和C产生的颗粒的表面上有高局部丰度。该丰度高于基于任一溶液中人IgG与赋形剂的比率所预期。这表明液滴上的表面电荷层可能主要由赋形剂组成。SEM分析进一步显示，对于由第一液体C产生的颗粒，赋形剂的表面丰度使得在颗粒周围形成连续的壳。
实施例27
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液的样品(样品A)在-12.5kV的电压下超声雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将溶液的第二样品(样品B)在-6.3kV的电压下超声雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将溶液的第三样品(样品C)在0kV的电压下超声雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。将溶液的第四样品(样品D)在+12.5kV的电压下超声雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸2-乙基己酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明带更高电荷的样品是更加单分散的(图7A-7C)。图7A的颗粒具有0.921的圆形度和6.372的粗糙度。图7B的颗粒具有0.898的圆形度和5.587的粗糙度。图7C的颗粒具有0.921的圆形度和5.385的粗糙度。MPS分析证实了此结果(图8)，显示了在不同电压下通过本公开的方法形成的人IgG颗粒的体积加权尺寸分布。显示了尺寸分布的D10、D50和D90值。发现在较高电压下产生的样品具有较小的平均颗粒尺寸，以及较窄的颗粒尺寸分布，如由每个样品的累积体积分布的第10、第50和第90个百分位直径所证明的那样。较小的平均颗粒尺寸可归因于高电场将初始液滴尺寸减小到低于对单独的超声雾化器是普遍的值。较窄的分布可归因于液滴上的电荷阻止聚结的倾向。
实施例28
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。使用在大于10,000Hz的频率下产生10微米液滴的微流体连接件处理溶液的样品(样品A)。连接件下游的通道确保溶液的液滴在离开系统前在行列中传播一段时间，该段时间为颗粒的特征干燥时间的大约10％。使用在大于10,000Hz的频率下产生10微米液滴的第二微流体连接件处理溶液的第二样品(样品B)。连接件下游的通道确保溶液的液滴在行列中传播一段时间，该段时间为颗粒在离开系统之前的特征干燥时间的大约100％。使用在大于10,000Hz的频率下产生10微米液滴的第三微流体连接件处理溶液的第三样品(样品C)。连接件下游的通道确保溶液的液滴在行列中传播一段时间，该段时间为颗粒在离开系统之前的特征干燥时间的大约500％。对于所有样品，在液滴或颗粒离开系统时将它们收集在小烧杯中(不搅拌)，并提供足够的第二液体以促进完全干燥，即提供大于V0的体积。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质。MPS分析表明样品B和C与较低的平均颗粒尺寸相关。这有可能归因于在微流体通道中延长的停留时间。一旦液滴或颗粒离开通道，液滴或颗粒行列被破坏，并且液滴-液滴或颗粒-颗粒相互作用的频率会增加。如果液滴或颗粒事先没有充分干燥，这会导致增强的聚结。
实施例29
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。添加一定量的赋形剂。基于大于1且相对于人IgG的佩克莱特数大的高佩克莱特数选择赋形剂，使得其在颗粒形成期间将在表面富集。当达到临界表面浓度时，赋形剂起到有效阻止聚结的作用。在所关注的颗粒形成条件下达到此临界浓度的时间量程是大约τ。使用在大于10,000Hz的频率下产生10微米液滴的微流体连接件处理溶液的样品(样品A)。连接件下游的通道确保溶液的液滴在离开系统前在行列中传播一段时间，该段时间为τ的大约10％。使用在大于10,000Hz的频率下产生10微米液滴的第二微流体连接件处理溶液的第二样品(样品B)。连接件下游的通道确保溶液的液滴在离开系统前在行列中传播一段时间，该段时间为τ的大约100％。使用在大于10,000Hz的频率下产生10微米液滴的第三微流体连接件处理溶液的第三样品(样品C)。连接件下游的通道确保溶液的液滴在离开系统前在行列中传播一段时间，该段时间为τ的大约500％。对于所有样品，在液滴或颗粒离开系统时将它们收集在小烧杯中(不搅拌)，并提供足够的第二液体以促进完全干燥，即提供大于V0的体积。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质。MPS分析表明样品B和C与较低的平均颗粒尺寸相关。这有可能归因于在微流体通道中延长的停留时间。一旦液滴或颗粒离开通道，液滴或颗粒行列被破坏，并且液滴-液滴或颗粒-颗粒相互作用的频率会增加。如果液滴或颗粒在相互作用时没有表现出化解聚结的赋形剂的足够的表面富集，这会导致聚结增强。
实施例30
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。使用位于容器中的膜乳化装置形成来自溶液的液滴，该容器含有最初用水饱和的一定体积的第二液体。水饱和有助于防止膜乳化装置在液滴形成期间堵塞。一旦形成了液滴，则向容器中添加体积大于V0的不饱和第二液体以形成颗粒。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥。SEM图像显示有可识别的颗粒物质。
实施例31
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约20mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并添加盐(6mg/mL)。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。对50mg颗粒进行DVS测量，同时以每小时4％的恒定速率使RH攀升。测量在约22℃下等温进行。在大约1450分钟的运行时间，当RH为大约55％时，观察到由大约10％的总样品质量的不可逆损失构成的质量损失事件(图9)。在运行到最后达到0％RH的一步时，样品质量比在干燥空气中调节的初始样品质量少大约10％。这表明损失的质量由非水挥发性组分构成，即残留的第二液体。结果表明，接近玻璃化转变温度可加快液体移除。根本原因如下。
1.在液滴凝固成颗粒时，残留的第二液体截留在玻璃状无定形相内。尽管干燥气体中挥发性第二液体的损失在热力学上是有利的，但随着溶剂损失的进行，由于玻璃需要收缩，这一过程被延缓(Richardson,H.等人，The European Physical Journal E,12,no.1(2003):87-91)。这就施加了刚性玻璃所承受的压缩应力，并且即使在干燥空气中，溶剂损失的速率也接近可忽略。
2.随着接近玻璃化转变，分子流动性增加，无定形玻璃变成橡胶状，并且该物质不再能够支撑由第二液体的损失所施加的压缩应力。第二液体的损失以可检测到的速率进行。
在(图9)中呈现的蒸气吸附数据的背景下，在RH攀升方法期间进行水吸收。因此，随着RH增加，玻璃化转变温度持续降低。在大约55％RH下，样品充分塑化，使得玻璃化转变温度接近测量温度(22℃)，并且第二液体的损失进行得很快。
实施例32
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒并分离成两个样品(样品A和B)。洗涤样品A并真空干燥24小时的时段以移除残留液体。洗涤样品B，然后用干燥气体(氦气、空气、氮气或氩气，优选氦气或空气)进行处理。干燥气体具有可忽略的RH，并且在与样品A在真空干燥期间的温度相当的温度下操作。设定气体以每分钟50标准升的速率流过样品B的颗粒3小时，同时将它们固定在过滤器上。卡尔费休分析显示，样品B中第一液体的残留量少于样品A中第一液体的残留量，尽管处理时间缩短。结果表明，空气干燥可用来加速颗粒后处理。
实施例33
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液的样品(样品A)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体#1)，在温和搅拌的条件下保持接近室温。佩克莱特数为约1左右或更低，且第二液体#1的沸点高于约180℃。将溶液的第二样品(样品B)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体#1)，在温和搅拌的条件下保持接近4℃。佩克莱特数低于对应于样品A的佩克莱特数。将溶液的第三样品(样品C)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体#2)，在温和搅拌的条件下保持接近室温。佩克莱特数高于1，且第二液体#2的沸点为约80℃左右。将溶液的第四样品(样品D)雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体(第二液体#2)，在温和搅拌的条件下保持接近4℃。佩克莱特数为约1左右或更低。在初级干燥后，收集来自所有样品的颗粒，洗涤并在相当的条件下真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明佩克莱特数为约1左右或更低的样品(A、B、D)与包含平滑球形形态的颗粒相关。佩克莱特数为约1左右或更高的样品C与包含内部空隙空间和更粗糙表面的颗粒相关。带有火焰离子化检测器的气相色谱(GC-FID)分析进一步显示，样品C和D与第二液体的较低残留量相关，这可能是由于第二液体#2的挥发性较高。结果表明，更易挥发的第二液体的佩克莱特数调节可用于获得所关注的形态，例如球形形态，同时保持易于进行后处理。
实施例34
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。将所得颗粒以约0.02左右的体积分数再悬浮于含有0.5重量％聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA，50:50，Mw＝10,000)和0.001重量％油红染料的乙酸乙酯溶液中。将悬浮液搅拌1小时以使聚合物与颗粒表面结合，此后用常规的喷雾干燥装置将悬浮液喷雾干燥。入口温度为130℃左右。如通过热重分析(失重)和共聚焦显微镜检查所确定，所得喷雾干燥的颗粒具有带PLGA薄涂层的核-壳结构。收集SEM图像。
实施例35
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约25mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。将干燥粉末的样品密闭密封在铝坩埚中，并采用动态扫描量热法(5℃升温速率)进行分析。观察到以比热容变化为特征的玻璃化转变(图10)。这种转变的开始温度为约79℃左右。
实施例36
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约25mg/mL的蛋白质浓度并脱盐。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。将样品在去离子水中重构至人IgG浓度为大约25mg/mL。目视检查显示没有可见的不溶性颗粒物(VP)，而用NanoSight分析显示每mL有100个亚微米颗粒(SMP)。溶液的浊度与处理之前第一液体的浊度相当。
实施例37
将人IgG颗粒悬浮在包含各种质量分数的拥挤剂PEG 3350、葡聚糖40k或葡聚糖6k的各种水溶液中。将悬浮液在室温下储存三天的时段，之后记录溶解颗粒的分数。通过使用分光光度计对于每个悬浮液收集人IgG在连续水相中的浓度来促进测量。结果表明，对于每种拥挤剂存在拥挤剂质量分数，高于该质量分数时，在储存期间颗粒的溶解可以基本上被最小化(图11)。
实施例38
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约50mg/mL的蛋白质浓度。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，在温和搅拌的条件下保持接近40℃。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。此后制备第一悬浮液(悬浮液A)，其中将颗粒负载到媒介物中至体积分数为0.2。媒介物仅包含油酸乙酯。制备第二悬浮液(悬浮液B)，其中将颗粒负载到第二媒介物中至体积分数为0.2。第二媒介物包含在油酸乙酯中的磺基琥珀酸二辛酯钠盐(1mg/mL)。制备第三悬浮液(悬浮液C)，其中将颗粒负载到第三媒介物中至体积分数为0.2。第三媒介物包含在油酸乙酯中的磺基琥珀酸二辛酯钠盐(10mg/mL)。将悬浮液置于玻璃小瓶中并观察一段时间，同时沉降发生(图12)。结果表明盐起到化解颗粒粘附于小瓶壁和延长沉降时间的作用。后者可能是由于静电颗粒相互作用(排斥)促进絮凝减少。
实施例39
将包含氨基酸(颗粒的大约10重量％)和表面活性剂(小于颗粒的1重量％)的人IgG颗粒以0.2左右的体积分数悬浮在乙酸乙酯中。在通过真空干燥移除乙酸乙酯之前，使用一mL悬浮液填充注射器系统的室。结果是室装载了粉末。该室可以回填药学上可接受的悬浮介质以产生药物产品。
实施例40
制备人IgG颗粒的悬浮液，其中将颗粒负载到油酸乙酯中至体积分数为0.2。将悬浮液样品(样品A)装载到没有硅油涂层的玻璃小瓶中。将悬浮液样品(样品B)装载到具有硅油涂层的玻璃小瓶中。观察悬浮液一段时间，同时沉降发生。结果表明硅油起到化解颗粒粘附于小瓶壁的作用。
实施例41
制备人IgG颗粒的悬浮液，其中将颗粒负载到油酸乙酯中至体积分数为0.2。将悬浮液装载到1mL玻璃注射器系统中并储存一段时间，该时间段相对于颗粒的特征沉降时间是长的。在施用之前，将注射器系统在声浴中搅动5秒钟以再悬浮颗粒。施用导致超过预期剂量的95％。
实施例42
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约25mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，并掺入100个菌落形成单位的大肠杆菌，此后将其雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸戊酯和苯酚的混合物(体积比10:1)，在温和的搅拌下保持接近室温。选择苯酚是因为其具有抗微生物特性。在初级干燥后，收集颗粒进行无菌性检查。将10mg干燥的颗粒溶解在1mL无菌去离子水中，并在流体硫乙醇酸盐培养基中温育14天的时段，以确保没有微生物生长。
实施例43
在单克隆抗体(60mg/mL)和30mg/mL抗坏血酸盐在去离子水中的溶液中掺入100个菌落形成单位的大肠杆菌。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的没有已知灭菌特性的第二液体。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥，之后置于苯甲酸苄酯的悬浮液中，蛋白质负载量为300mg/mL。将悬浮液装载到2.25mL玻璃注射器中。然后使用MDS Nordian Gammacell 220以1.5kGy/小时的剂量率对注射器进行伽马辐照，总辐照量为14kGy。辐照后，将颗粒与悬浮液连续相分离，并溶解在DI水中。ELISA测定确定了抗原结合活性的保留。将粉末溶解在1mL去离子水中后，将1mL溶解的粉末在流体硫乙醇酸盐培养基中温育14天的时段，以确保没有微生物生长。
实施例44
将Taq聚合酶(300mg)、氯化钠(105mg)和聚乙二醇(PEG)3350(60mg)溶解在去离子水(5mL)中。将100个菌落形成单位的大肠杆菌掺入到此溶液中。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的没有已知灭菌特性的第二液体。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥。然后通过使用干热对颗粒进行灭菌：在160℃下2小时。在其它情况下，将颗粒在80℃下储存72小时。将10mg粉末在1mL去离子水中进行溶解。通过使用经处理的Taq聚合酶对DNA成功地进行聚合酶链反应确认蛋白质功能的保留。将1mL溶解的粉末在流体硫乙醇酸盐培养基中温育14天的时段，以确保没有微生物生长。
实施例45
将牛血清白蛋白(0.1g)溶解在DI水(4mL)中，并将100个菌落形成单位的大肠杆菌掺入到溶液中。将溶液雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的没有已知灭菌特性的第二液体。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥。然后将颗粒置于箔袋中，并转移到配备有入口和出口阀、压力表和安全阀的750mL钢制高压釜中。高压釜装有scCO2(300g液体CO2)，并通过加热高压釜(38℃，8.5MPa)将其转变为超临界(sc)状态。使颗粒经受scCO2处理30分钟左右，之后将高压釜降压，并收集无菌粉末。将10mg粉末溶解在1mL去离子水中后，将1mL溶解的粉末在流体硫乙醇酸盐培养基中温育14天的时段，以确保没有微生物生长。
实施例46
在去离子水中制备蛋白质的溶液(20mg/mL)。使用配有Wilhelmy板的Kruss K11张力计测量此溶液的表面张力(空气-水)。记录表面张力，直至达到平衡。与纯去离子水相比，溶液表现出大约10mN/m的降低。这证明了表面活性剂作为表面活性剂的能力(图13)。
实施例47
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第一溶液(第一液体A)。将溶液脱盐。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第二溶液(第一液体B)。将溶液脱盐，并添加一定量的塑化剂(5mg/mL)。将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，保持在温和搅拌的条件下。在这两种情况下，在颗粒形成过程期间第一液体和第二液体的温度保持高于第一液体B中塑化剂赋形剂的玻璃化转变温度。在这两种情况下，对于第一液体中的人IgG，这些导致佩克莱特数大于1。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明塑化剂提供了对颗粒形态的控制。第一液体A与包含内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。第一液体B与包含较小程度的内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。
实施例48
通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第一溶液(第一液体A)。将溶液脱盐。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约50mg/mL来制备人IgG的第二溶液(第一液体B)。将溶液脱盐，并添加一定量的表面活性剂(2mg/mL)。将溶液单独雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的第二液体，保持在温和搅拌的条件下。在这两种情况下，在颗粒形成过程期间第一液体和第二液体的温度保持高于第一液体B中表面活性剂赋形剂的玻璃化转变温度。在这两种情况下，对于第一液体中的人IgG，这导致佩克莱特数大于1。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。SEM图像显示有可识别的颗粒物质，并表明表面活性剂提供了对颗粒形态的控制。第一液体A与包含内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。第一液体B与包含较小程度的内部空隙空间和起皱表面的颗粒相关。除了化解第二液体与液滴/颗粒之间的界面处的力之外，这可能还与表面活性剂在颗粒形成过程期间有效地塑化液滴和颗粒有关。将由第一液体A产生的颗粒的样品悬浮在非水介质中，其方式使得人IgG在制剂中的平均浓度为大约400mg/mL(样品A)。将由第一液体B产生的颗粒的样品悬浮在单独体积的相同非水介质中，使得人IgG在制剂中的平均浓度为大约400mg/mL(样品B)。通过在去离子水中将人IgG粉末重构至蛋白质浓度为大约400mg/mL来制备用于比较的样品(样品C)。非水介质和去离子水(无蛋白质负载)的固有粘度分别为大约6mPa·s和1mPa·s。使用流变仪测试所有三个样品的粘度。就粘度增加而言，结果表明样品B<样品A<样品C，即来自第一液体B的颗粒在所关注的浓度下提供最低的制剂粘度。这可能是它们更平滑、更呈球形形态的副产品。
实施例49
将人IgG粉末在去离子水中重构至大约24mg/mL的蛋白质浓度。将溶液脱盐，此后将其雾化，并用不锈钢容器收集，所述不锈钢容器含有体积大于V0的乙酸丁酯，在温和搅拌的条件下保持接近室温。在初级干燥后，收集颗粒，洗涤并真空干燥以移除残留液体。HIM图像显示有可识别的颗粒物质。与图3A的颗粒相比，颗粒的截面显示没有孔(基本上没有任何内部空隙空间)和相应低的颗粒孔隙率(图14A-14B)。与图3A的颗粒相比，发现颗粒具有0.900的圆形度和2.342的粗糙度。
讨论
如示例性物质中所证明的那样，通过在受控的颗粒形成期间改变第一液体和第二液体的组成和特性来以不同和广泛的方式控制颗粒形态。除了审慎地执行后处理步骤之外，这些参数也类似地用于控制颗粒组成、组分分布和表面特性。在含有单克隆抗体的颗粒制剂的情况下，生理化学分析表明紧接处理后的剂活性以及在热应力下(在40℃下7天)的稳定性基本上得以保持。除了表现出有利的分散特性之外，基于颗粒的悬浮制剂还在高剂负载量下表现出低粘度。基于无菌措施，生物负荷是低的。
以引用的方式并入
本文提到的所有出版物和专利特此以全文引用的方式并入，如同每个单独的出版物或专利被具体和单独地指出以引用的方式并入。在有冲突的情况下，以本申请(包括本文中的任何定义)为准。
等效方案
虽然已经讨论了本公开的具体方面和实施方案，但以上说明书是说明性而非限制性的。在阅读本说明书和以下权利要求后，本公开的许多变化形式对本领域技术人员而言将变得显而易见。应通过参考权利要求以及其等同方案的全部范围和说明书以及这类变化形式来确定本公开的全部范围。

Claims (569)

1.一种包含剂的颗粒，其中所述颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且所述颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
2.如权利要求1所述的颗粒，其中所述剂是治疗剂。
3.如权利要求1所述的颗粒，其中所述剂是诊断剂。
4.如权利要求2所述的颗粒，其中所述治疗剂是治疗性生物制剂。
5.如权利要求4所述的颗粒，其中所述治疗性生物制剂是抗体。
6.如权利要求5所述的颗粒，其中所述抗体是抗CD20抗体。
7.如权利要求5或6所述的颗粒，其中所述抗体是IgG抗体。
8.如权利要求7所述的颗粒，其中所述IgG抗体是IgG1抗体。
9.如权利要求8所述的颗粒，其中所述IgG1抗体是单克隆IgG1抗体。
10.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒中的所述治疗剂或诊断剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
11.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒包含小于约10％的内部空隙空间。
12.如权利要求11所述的颗粒，其中所述颗粒包含小于约5％的内部空隙空间。
13.如权利要求11-12中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒包含小于约1％的内部空隙空间。
14.如权利要求11-13中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒包含小于约0.1％的内部空隙空间。
15.如权利要求11-14中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒包含小于约0.01％的内部空隙空间。
16.如权利要求11-15中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
17.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的圆形度为约0.80至约1.00。
18.如权利要求17所述的颗粒，其中所述颗粒的圆形度为约0.85至约1.00。
19.如权利要求17-18中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。
20.如权利要求17-19中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的圆形度为约0.95至约1.00。
21.如权利要求17-20中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的圆形度为约0.98至约1.00。
22.如权利要求17-20中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的圆形度为约1.00。
23.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的球形度为约0.80至约1.00。
24.如权利要求23所述的颗粒，其中所述颗粒的球形度为约0.85至约1.00。
25.如权利要求23-24中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的球形度为约0.90至约1.00。
26.如权利要求23-25中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的球形度为约0.95至约1.00。
27.如权利要求23-26中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的球形度为约0.98至约1.00。
28.如权利要求23-27中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的球形度为约1.00。
29.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有基本上平滑的表面。
30.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的直径在约0.1至约100μm之间。
31.如权利要求30所述的颗粒，其中所述颗粒的直径在约0.5至约50μm之间。
32.如权利要求30-31中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的直径在约20至约50μm之间。
33.如权利要求30-31中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的直径在约1至约40μm之间。
34.如权利要求30-31中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒的直径在约2至约15μm之间。
35.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约10％的表面活性剂含量。
36.如权利要求35所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。
37.如权利要求35-36中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。
38.如权利要求35-37中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。
39.如权利要求35-38中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。
40.如权利要求35-39中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。
41.如权利要求35-40中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。
42.如权利要求35-41中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒基本上没有任何表面活性剂含量。
43.如权利要求35-42中任一项所述的颗粒，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
44.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约1.00至约6.00g/cm3的骨架密度。
45.如权利要求44所述的颗粒，其中所述颗粒具有约0.90至约1.60g/cm3的骨架密度。
46.如权利要求44-45中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。
47.如权利要求44-46中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
48.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。
49.如权利要求48所述的颗粒，其中所述颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。
50.如权利要求48-49中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
51.如权利要求48-50中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。
52.如权利要求48-50中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。
53.如前述权利要求中任一项所述的颗粒，其还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。
54.如权利要求53所述的颗粒，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或其组合。
55.如权利要求53所述的颗粒，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。
56.如权利要求53所述的颗粒，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。
57.如权利要求53所述的颗粒，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。
58.如权利要求53所述的颗粒，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。
59.如权利要求53所述的颗粒，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其组合。
60.如权利要求4-59中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的聚集。
61.如权利要求4-60中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
62.如权利要求4-61中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的聚集。
63.如权利要求4-62中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
64.如权利要求4-63中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
65.如权利要求4-64中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何聚集。
66.如权利要求4-59中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约3％至约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
67.如权利要求4-59中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有约1％至约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
68.如权利要求4-67中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的片段化。
69.如权利要求4-68中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的片段化。
70.如权利要求4-69中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的片段化。
71.如权利要求4-70中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的片段化。
72.如权利要求4-71中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何片段化。
73.如权利要求4-72中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约50％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
74.如权利要求4-73中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约30％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
75.如权利要求4-74中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约25％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
76.如权利要求4-75中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约15％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
77.如权利要求4-76中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
78.如权利要求4-77中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
79.如权利要求4-78中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
80.如权利要求4-79中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
81.如权利要求4-80中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
82.如权利要求4-81中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计小于约7％的残留水分。
83.如权利要求4-82中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计小于约5％的残留水分。
84.如权利要求4-83中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计小于约3％的残留水分。
85.如权利要求4-84中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计小于约1％的残留水分。
86.如权利要求4-81中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计约1％至约7％的残留水分。
87.如权利要求4-81中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计约1％至约5％的残留水分。
88.如权利要求4-81中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计约1％至约3％的残留水分。
89.如权利要求4-88中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂。
90.如权利要求4-89中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约70％的治疗性生物制剂。
91.如权利要求4-90中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约80％的治疗性生物制剂。
92.如权利要求4-91中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。
93.如权利要求4-92中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。
94.如权利要求4-93中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。
95.如权利要求4-94中任一项所述的颗粒，其中所述颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
96.一种包含许多颗粒的组合物，所述颗粒包含悬浮在液体中的剂，其中所述颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且所述颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
97.如权利要求96所述的组合物，其中所述剂是治疗剂。
98.如权利要求96所述的组合物，其中所述剂是诊断剂。
99.如权利要求97所述的组合物，其中所述治疗剂是治疗性生物制剂。
100.如权利要求99所述的组合物，其中所述治疗性生物制剂是抗体。
101.如权利要求100所述的组合物，其中所述抗体是抗CD20抗体。
102.如权利要求100或101所述的组合物，其中所述抗体是IgG抗体。
103.如权利要求102所述的组合物，其中所述IgG抗体是IgG1抗体。
104.如权利要求103所述的组合物，其中所述IgG1抗体是单克隆IgG1抗体。
105.如权利要求96-104中任一项所述的组合物，其中所述颗粒中的所述治疗剂或诊断剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
106.如权利要求96所述的组合物，其中所述颗粒包含小于约10％的内部空隙空间。
107.如权利要求106所述的组合物，其中所述颗粒包含小于约5％的内部空隙空间。
108.如权利要求106-107中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含小于约1％的内部空隙空间。
109.如权利要求106-108中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含小于约0.1％的内部空隙空间。
110.如权利要求106-109中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含小于约0.01％的内部空隙空间。
111.如权利要求106-110中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
112.如权利要求96-111中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的圆形度为约0.80至约1.00。
113.如权利要求112所述的组合物，其中所述颗粒的圆形度为约0.85至约1.00。
114.如权利要求112-113中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。
115.如权利要求112-114中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的圆形度为约0.95至约1.00。
116.如权利要求112-115中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的圆形度为约0.98至约1.00。
117.如权利要求112-116中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的圆形度为约1.00。
118.如权利要求96-117中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的球形度为约0.80至约1.00。
119.如权利要求118所述的组合物，其中所述颗粒的球形度为约0.85至约1.00。
120.如权利要求118-119中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的球形度为约0.90至约1.00。
121.如权利要求118-120中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的球形度为约0.95至约1.00。
122.如权利要求118-121中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的球形度为约0.98至约1.00。
123.如权利要求118-122中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的球形度为约1.00。
124.如权利要求96-123中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有基本上平滑的表面。
125.如权利要求96-124中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的直径在约0.1至约100μm之间。
126.如权利要求125所述的组合物，其中所述颗粒的直径在约0.5至约50μm之间。
127.如权利要求125-126中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的直径在约20至约50μm之间。
128.如权利要求125-126中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的直径在约1至约40μm之间。
129.如权利要求125-126中任一项所述的组合物，其中所述颗粒的直径在约2至约15μm之间。
130.如权利要求96-129中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约10％的表面活性剂含量。
131.如权利要求130所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约5％的表面活性剂含量。
132.如权利要求130-131中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约3％的表面活性剂含量。
133.如权利要求130-132中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约1％的表面活性剂含量。
134.如权利要求130-133中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。
135.如权利要求130-134中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。
136.如权利要求130-135中任一项所述的组合物，其中所述颗粒包含按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。
137.如权利要求130-136中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有任何表面活性剂含量。
138.如权利要求130-137中任一项所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
139.如权利要求96-138中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1.00至约6.00g/cm3的骨架密度。
140.如权利要求139所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.90至约1.60g/cm3的骨架密度。
141.如权利要求139-140中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。
142.如权利要求139-141中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
143.如权利要求96-142中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。
144.如权利要求143所述的组合物，其中所述颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。
145.如权利要求143-144中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
146.如权利要求145所述的组合物，其中所述颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。
147.如权利要求145所述的组合物，其中所述颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。
148.如权利要求96-147中任一项所述的组合物，其中所述颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。
149.如权利要求148所述的组合物，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或其组合。
150.如权利要求148所述的组合物，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。
151.如权利要求148所述的组合物，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。
152.如权利要求148所述的组合物，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。
153.如权利要求148所述的组合物，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。
154.如权利要求148所述的组合物，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其组合。
155.如权利要求96所述的组合物，其中所述液体是有机溶剂或离子液体。
156.如权利要求155所述的组合物，其中所述有机溶剂包括苯甲酸苄酯、椰子油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化植物油、橄榄油、棕榈籽油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、核桃油、丙酮、乙酸乙酯、乳酸乙酯、二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、糖原质、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、简单醇如乙醇、辛醇、己醇、癸醇、丙醇和丁醇；γ-丁内酯、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨酸酯、乙醇胺、丙酸、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯、丙酮缩甘油、异山梨醇二甲醚、甲酸乙酯和乙酸乙基己酯或其组合。
157.如权利要求155或156所述的组合物，其中所述有机溶剂是油酸乙酯、月桂酸乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、癸酸乙酯、琥珀酸二乙酯、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯或其组合。
158.权利要求155-157任一项的组合物，其中所述有机溶剂是油酸乙酯。
159.如权利要求155所述的组合物，其中所述离子液体包含吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍、卤离子、硫酸根、磺酸根、碳酸根、磷酸根、碳酸氢根、硝酸根、乙酸根、PF6 -、BF4 -、三氟甲烷磺酸根、全氟丁基磺酸根、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸根、七氟丁酸根、卤代铝酸根或其组合。
160.如权利要求96所述的组合物，其中所述液体是水性液体。
161.如权利要求160所述的组合物，其中所述水性液体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、右旋糖5％或缓冲液。
162.如权利要求96-161中任一项所述的组合物，其中所述液体是药学上可接受的液体。
163.如权利要求96-162中任一项所述的组合物，其中所述液体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、镇痛剂或其组合。
164.如权利要求163所述的组合物，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或其组合。
165.如权利要求163所述的组合物，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。
166.如权利要求163所述的组合物，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。
167.如权利要求163所述的组合物，其中所述螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸或喷替酸。
168.如权利要求163所述的组合物，其中所述矿物质是钙、锌或二氧化钛。
169.如权利要求163所述的组合物，其中所述聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或其组合。
170.如权利要求163所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯、离子表面活性剂或其组合。
171.如权利要求163所述的组合物，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。
172.如权利要求163所述的组合物，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。
173.如权利要求163所述的组合物，其中所述抗菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、苄索氯铵、戊二醛或β-丙内酯。
174.如权利要求163所述的组合物，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其组合。
175.如权利要求163所述的组合物，其中所述抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸或甲硫氨酸。
176.如权利要求163所述的组合物，其中所述有机溶剂是二甲亚砜或N-甲基-2-吡咯烷酮。
177.如权利要求163所述的组合物，其中所述防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、对羟基苯甲酸酯类、甲醛或蓖麻油。
178.如权利要求163所述的组合物，其中所述对羟基苯甲酸酯是对羟基苯甲酸酯。
179.如权利要求163所述的组合物，其中所述杀细菌剂是苯扎氯铵或苯甲酸苄酯。
180.如权利要求163所述的组合物，其中所述镇痛剂是醋氨酚或利多卡因。
181.如权利要求96-180中任一项所述的组合物，其中所述液体还包含第二剂。
182.如权利要求99-181中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的聚集。
183.如权利要求99-182中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
184.如权利要求99-183中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的聚集。
185.如权利要求99-184中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
186.如权利要求99-185中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
187.如权利要求99-186中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何聚集。
188.如权利要求99-181中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约3％至约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
189.如权利要求99-181中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1％至约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
190.如权利要求99-189中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的片段化。
191.如权利要求99-190中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的片段化。
192.如权利要求99-191中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的片段化。
193.如权利要求99-192中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的片段化。
194.如权利要求99-193中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何片段化。
195.如权利要求99-194中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约50％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
196.如权利要求99-195中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约30％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
197.如权利要求99-196中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约25％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
198.如权利要求99-197中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约15％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
199.如权利要求99-198中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
200.如权利要求99-199中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
201.如权利要求99-200中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
202.如权利要求99-201中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
203.如权利要求99-202中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
204.如权利要求99-203中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计小于约7％的残留水分。
205.如权利要求99-204中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计小于约5％的残留水分。
206.如权利要求99-205中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计小于约3％的残留水分。
207.如权利要求99-206中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计小于约1％的残留水分。
208.如权利要求99-203中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计约1％至约7％的残留水分。
209.如权利要求99-203中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计约1％至约5％的残留水分。
210.如权利要求99-203中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计约1％至约3％的残留水分。
211.如权利要求99-210中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂。
212.如权利要求99-211中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约70％的治疗性生物制剂。
213.如权利要求99-212中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约80％的治疗性生物制剂。
214.如权利要求99-213中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。
215.如权利要求99-214中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。
216.如权利要求99-215中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。
217.如权利要求99-216中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
218.如权利要求99-217中任一项所述的组合物，其中所述组合物中所述治疗性生物制剂的浓度为约20mg/mL至约650mg/mL。
219.如权利要求99-218中任一项所述的组合物，其中所述组合物中所述治疗性生物制剂的浓度为约30mg/mL至约500mg/mL。
220.如权利要求99-219中任一项所述的组合物，其中所述组合物中所述治疗性生物制剂的浓度为约100mg/mL至约500mg/mL。
221.如权利要求99-220中任一项所述的组合物，其中所述组合物中所述治疗性生物制剂的浓度为约200mg/mL至约400mg/mL。
222.如权利要求99-221中任一项所述的组合物，其中所述组合物中所述治疗性生物制剂的浓度为约300mg/mL至约400mg/mL。
223.如权利要求99-222中任一项所述的组合物，其中所述组合物中所述治疗性生物制剂的浓度为约350mg/mL至约400mg/mL。
224.如权利要求99-223中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约200mPa·s的粘度。
225.如权利要求99-224中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约150mPa·s的粘度。
226.如权利要求99-225中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约50mPa·s的粘度。
227.如权利要求99-226中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约30mPa·s的粘度。
228.如权利要求99-227中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约20mPa·s的粘度。
229.如权利要求99-228中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约10mPa·s的粘度。
230.如权利要求99-229中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约5mPa·s的粘度。
231.如权利要求99-230中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约3mPa·s的粘度。
232.如权利要求99-231中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有小于约2.5mPa·s的粘度。
233.如权利要求99-232中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.002至约1.000的多分散指数。
234.如权利要求99-233中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.002至约0.900的多分散指数。
235.如权利要求99-234中任一项所述的组合物，其中与包含单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比，所述组合物的所述治疗性生物制剂的稳定性提高。
236.如权利要求99-235中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解时基本上不含可见颗粒。
237.如权利要求99-235中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解时具有约0个/mL至约100,000,000个/mL的特征尺寸大于约10μm的不溶性亚可见颗粒的浓度。
238.如权利要求99-235中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解时具有约0个/mL至约6000个/mL的特征尺寸大于约10μm的不溶性亚可见颗粒的浓度。
239.如权利要求99-235中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解时具有约0个/mL至约600个/mL的特征尺寸大于约25μm的不溶性亚可见颗粒的浓度。
240.如权利要求99-235中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解时基本上不含不溶性亚可见颗粒。
241.如权利要求236-240中任一项所述的组合物，其中所述水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
242.如权利要求99-241中任一项所述的组合物，其中所述组合物的浊度在约0至约4000福尔马肼浊度单位(FTU)之间。
243.如权利要求99-242中任一项所述的组合物，其中与包含单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比，所述组合物在水性液体中溶解时具有基本上类似的浊度。
244.如权利要求99-243中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解时基本上没有浊度。
245.如权利要求242-244中任一项所述的组合物，其中所述水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
246.如权利要求99-245中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或其组合。
247.一种形成颗粒的方法，所述方法包括：
a)提供包含第一液体和剂的液滴；
b)使所述液滴与第二液体接触；
c)使所述液滴干燥；以及
d)移除所述第一和第二液体，
从而形成包含剂的颗粒，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约25％的内部空隙空间，并且所述颗粒的圆形度为约0.10至约1.00。
248.如权利要求247所述的方法，其中所述剂是治疗剂。
249.如权利要求247所述的方法，其中所述剂是诊断剂。
250.如权利要求248所述的方法，其中所述治疗剂是治疗性生物制剂。
251.如权利要求250所述的方法，其中所述治疗性生物制剂是抗体。
252.如权利要求251所述的方法，其中所述抗体是抗CD20抗体。
253.如权利要求251或252所述的方法，其中所述抗体是IgG抗体。
254.如权利要求253所述的方法，其中所述IgG抗体是IgG1抗体。
255.如权利要求254所述的方法，其中所述IgG1抗体是单克隆IgG1抗体。
256.如权利要求247-255中任一项所述的方法，其中所述颗粒中的所述治疗剂或诊断剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
257.如权利要求247-256中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约10％的内部空隙空间。
258.如权利要求257所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约5％的内部空隙空间。
259.如权利要求257-258中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约1％的内部空隙空间。
260.如权利要求257-259中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约0.1％的内部空隙空间。
261.如权利要求257-260中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约0.01％的内部空隙空间。
262.如权利要求257-261中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
263.如权利要求247-262中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.80至约1.00。
264.如权利要求263所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.85至约1.00。
265.如权利要求263-264中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。
266.如权利要求263-265中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.95至约1.00。
267.如权利要求263-266中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.98至约1.00。
268.如权利要求263-267中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约1.00。
269.如权利要求247-268中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.80至约1.00。
270.如权利要求269所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.85至约1.00。
271.如权利要求269-270中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.90至约1.00。
272.如权利要求269-271中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.95至约1.00。
273.如权利要求269-272中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.98至约1.00。
274.如权利要求269-273中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约1.00。
275.如权利要求247-274中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有基本上平滑的表面。
276.如权利要求247-275中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约0.1至约1000μm之间。
277.如权利要求276所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约1至约100μm之间。
278.如权利要求276-277中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约4至约100μm之间。
279.如权利要求276-278中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约10至约100μm之间。
280.如权利要求276-279中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约20至约50μm之间。
281.如权利要求247-280中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约10％的表面活性剂含量。
282.如权利要求281所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。
283.如权利要求281-282中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。
284.如权利要求281-283中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。
285.如权利要求281-284中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。
286.如权利要求281-285中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。
287.如权利要求281-286中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。
288.如权利要求281-287中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有任何表面活性剂含量。
289.如权利要求281-288中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
290.如权利要求247-289中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1.00至约6.00g/cm3的骨架密度。
291.如权利要求290所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约0.90至约1.60g/cm3的骨架密度。
292.如权利要求290-291中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。
293.如权利要求290-292中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
294.如权利要求247-293中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。
295.如权利要求294所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。
296.如权利要求294-295中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
297.如权利要求294-296中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。
298.如权利要求294-296中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。
299.如权利要求247-298中任一项所述的方法，其中所述颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。
300.如权利要求299所述的方法，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或其组合。
301.如权利要求299所述的方法，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。
302.如权利要求299所述的方法，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。
303.如权利要求299所述的方法，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。
304.如权利要求299所述的方法，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。
305.如权利要求299所述的方法，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其组合。
306.如权利要求250-305中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的聚集。
307.如权利要求250-306中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
308.如权利要求250-307中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的聚集。
309.如权利要求250-308中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
310.如权利要求250-309中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
311.如权利要求250-310中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何聚集。
312.如权利要求250-305中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约3％至约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
313.如权利要求250-305中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1％至约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
314.如权利要求250-313中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的片段化。
315.如权利要求250-314中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的片段化。
316.如权利要求250-315中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的片段化。
317.如权利要求250-316中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的片段化。
318.如权利要求250-317中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何片段化。
319.如权利要求250-318中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约50％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
320.如权利要求250-319中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约30％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
321.如权利要求250-320中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约25％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
322.如权利要求250-321中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约15％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
323.如权利要求250-322中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
324.如权利要求250-323中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
325.如权利要求250-324中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
326.如权利要求250-325中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
327.如权利要求250-326中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
328.如权利要求250-327中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约3％残留的第一和第二液体。
329.如权利要求250-328中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约2％残留的第一和第二液体。
330.如权利要求250-329中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约1％残留的第一和第二液体。
331.如权利要求250-330中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.1％残留的第一和第二液体。
332.如权利要求250-331中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.01％残留的第一和第二液体。
333.如权利要求250-332中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.001％残留的第一和第二液体。
334.如权利要求250-333中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒按质量计基本上不含任何残留的第一和第二液体。
335.如权利要求250-334中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂。
336.如权利要求250-335中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约70％的治疗性生物制剂。
337.如权利要求250-336中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约80％的治疗性生物制剂。
338.如权利要求250-337中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。
339.如权利要求250-338中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。
340.如权利要求250-339中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。
341.如权利要求250-340中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
342.如权利要求247所述的方法，其中所述第一液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶或其组合。
343.如权利要求342所述的方法，其中所述第一液体是水性的。
344.如权利要求343所述的方法，其中所述第一液体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、缓冲液、右旋糖5％或其组合。
345.如权利要求344所述的方法，其中所述第一液体是水。
346.如权利要求344所述的方法，其中所述缓冲液是乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液或二甲胂酸盐缓冲液。
347.如权利要求248所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约0.0001mg/mL至约1000mg/mL。
348.如权利要求347所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约10mg/mL至约500mg/mL。
349.如权利要求347-348中任一项所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约10mg/mL至约100mg/mL。
350.如权利要求347-349中任一项所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约20mg/mL至约100mg/mL。
351.如权利要求347-350中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有约0.01至约10,000mPa·s的粘度。
352.如权利要求347-350中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约100mPa·s的粘度。
353.如权利要求352所述的方法，其中所述第一液体具有小于约10mPa·s的粘度。
354.如权利要求352-353中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约3mPa·s的粘度。
355.如权利要求352-354中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约0.9mPa·s的粘度。
356.如权利要求352-355中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约0.5mPa·s的粘度。
357.如权利要求347-356中任一项所述的方法，其中所述第一液体还包含表面活性剂。
358.如权利要求357所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
359.如权利要求247所述的方法，其中所述第二液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶、蛋白质稳定剂或其组合。
360.如权利要求359所述的方法，其中所述第二液体是水性的。
361.如权利要求359所述的方法，其中所述第二液体是有机溶剂。
362.如权利要求361所述的方法，其中所述有机溶剂是苄醇、苯甲酸苄酯、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化棕榈籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、植物油、核桃油、聚乙二醇、糖原质、丙酮、二甘醇二甲醚、二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚、乳酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、甲基异丁基酮、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、2-吡咯烷酮、甘油三酯、四氢糠醇、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯(例如，
Figure FDA0003192505490000311
810和
Figure FDA0003192505490000312
812N)、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯(例如，
Figure FDA0003192505490000313
840)、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯或其组合。
363.如权利要求361或362所述的方法，其中所述有机溶剂是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
364.如权利要求359所述的方法，其中所述第二液体是离子液体。
365.如权利要求359所述的方法，其中所述第二液体是蛋白质稳定剂。
366.如权利要求247-365中任一项所述的方法，其中所述第二液体还包含表面活性剂。
367.如权利要求366所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
368.如权利要求359-367中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有约0.01至约10,000mPa·s的粘度。
369.如权利要求359-367中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约10mPa·s的粘度。
370.如权利要求369所述的方法，其中所述第二液体具有小于约5mPa·s的粘度。
371.如权利要求369-370中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约2mPa·s的粘度。
372.如权利要求369-371中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约0.70mPa·s的粘度。
373.如权利要求369-372中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约0.40mPa·s的粘度。
374.如权利要求247所述的方法，其中步骤a)的液滴通过电喷雾、超声雾化器或微流体装置形成。
375.如权利要求247所述的方法，其中步骤a)的液滴在微流体装置中形成。
376.如权利要求375所述的方法，其中在所述微流体装置中形成的所述液滴在所述微流体装置中规则地间隔开。
377.如权利要求247所述的方法，其中在使所述液滴与第二液体接触后干燥所述液滴。
378.如权利要求247所述的方法，其中步骤b)还包括将所述第二液体的温度降低到所述第一液体的冰点的约30℃以内的温度。
379.如权利要求247所述的方法，其中所述第二液体在大气压下的沸点为约0至约200℃。
380.如权利要求247所述的方法，其中所述第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物。
381.如权利要求380所述的方法，其中所述混合物包含具有不同溶解度的液体。
382.如权利要求247-381中任一项所述的方法，其中通过离心、过筛、过滤、磁性收集、溶剂交换或倾析移除所述第一和第二液体。
383.如权利要求247-382中任一项所述的方法，还包括在步骤d)后用洗涤流体洗涤所述颗粒。
384.如权利要求383所述的方法，其中所述洗涤流体是有机液体、超临界流体、低温液体或其组合。
385.如权利要求247-384中任一项所述的方法，其中通过冻干或真空干燥进一步干燥所述颗粒。
386.如权利要求247-385中任一项所述的方法，其中通过使所述颗粒与气体流接触来进一步干燥所述颗粒。
387.如权利要求386所述的方法，其中所述气体的温度为约-80至约200℃。
388.如权利要求386或387所述的方法，其中所述气体的温度为约10至约40℃。
389.如权利要求386-388中任一项所述的方法，其中所述气体的相对湿度为约0至约100％。
390.如权利要求386-389中任一项所述的方法，其中所述气体是氦气、空气、氮气或氩气。
391.如权利要求247-390中任一项所述的方法，其中在电场存在下形成所述颗粒。
392.如权利要求391所述的方法，其中在所述电场存在下形成的所述颗粒的平均直径小于或等于在不存在电场情况下产生的颗粒的直径。
393.如权利要求391或392所述的方法，其中所述颗粒包含净电荷。
394.如权利要求391-393中任一项所述的方法，其中所述净电荷基本上使颗粒聚结最小化。
395.如权利要求247-394中任一项所述的方法，还包括在移除所述第一和第二液体后对所述颗粒进行灭菌。
396.如权利要求395所述的方法，其中所述灭菌通过辐照、巴氏杀菌或冷冻进行。
397.如权利要求396所述的方法，其中所述辐照是通过伽马辐射。
398.一种控制颗粒的形态的方法，所述方法包括：
a)提供包含第一液体和剂的液滴；
b)使所述液滴与第二液体在指定的佩克莱特数下接触；
c)使所述液滴干燥；以及
d)移除所述第一和第二液体，
其中所述指定的佩克莱特数控制所述颗粒的形态。
399.如权利要求398所述的方法，其中所述第一或第二液体还包含控制所述颗粒的形态的塑化剂。
400.如权利要求399所述的方法，其中所述塑化剂是蔗糖、木糖醇、山梨糖醇、果糖、甘油三酯、果胶、甘油、柠檬酸三乙酯、乙酸乙酯、柠檬酸、油酸、羟丙基纤维素、甲基吡咯烷酮聚乙二醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、山梨糖醇的脂肪酸酯、邻苯二甲酸二乙酯及其它邻苯二甲酸酯衍生物、蓖麻油、三醋精、水、氯苯吡胺、1-丁基-3-甲基咪唑鎓磺基琥珀酸二辛酯、乙酸己酯、乙酸2-乙基己酯、柠檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、苄醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺或其组合。
401.如权利要求398所述的方法，其中所述剂是治疗剂。
402.如权利要求398所述的方法，其中所述剂是诊断剂。
403.如权利要求401所述的方法，其中所述治疗剂是治疗性生物制剂。
404.如权利要求403所述的方法，其中所述治疗性生物制剂是抗体。
405.如权利要求404所述的方法，其中所述抗体是抗CD20抗体。
406.如权利要求404或405所述的方法，其中所述抗体是IgG抗体。
407.如权利要求406所述的方法，其中所述IgG抗体是IgG1抗体。
408.如权利要求407所述的方法，其中所述IgG1抗体是单克隆IgG1抗体。
409.如权利要求398-408中任一项所述的方法，其中所述颗粒中的所述治疗剂或诊断剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
410.如权利要求398-409中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约10％的内部空隙空间。
411.如权利要求410所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约5％的内部空隙空间。
412.如权利要求410-411中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约1％的内部空隙空间。
413.如权利要求410-412中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约0.1％的内部空隙空间。
414.如权利要求410-413中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒包含小于约0.01％的内部空隙空间。
415.如权利要求410-414中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
416.如权利要求398-415中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.80至约1.00。
417.如权利要求416所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.85至约1.00。
418.如权利要求416-417中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。
419.如权利要求416-418中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.95至约1.00。
420.如权利要求416-419中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约0.98至约1.00。
421.如权利要求416-420中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的圆形度为约1.00。
422.如权利要求398-421中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.80至约1.00。
423.如权利要求422所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.85至约1.00。
424.如权利要求422-423中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.90至约1.00。
425.如权利要求422-424中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.95至约1.00。
426.如权利要求422-425中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约0.98至约1.00。
427.如权利要求422-426中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的球形度为约1.00。
428.如权利要求398-427中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有基本上平滑的表面。
429.如权利要求398-428中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约0.1至约1000μm之间。
430.如权利要求429所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约1至约100μm之间。
431.如权利要求429-430中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约4至约100μm之间。
432.如权利要求429-431中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约10至约100μm之间。
433.如权利要求429-432中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒的直径在约20至约50μm之间。
434.如权利要求398-433中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约10％的表面活性剂含量。
435.如权利要求434所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约5％的表面活性剂含量。
436.如权利要求434-435中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约3％的表面活性剂含量。
437.如权利要求434-436中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约1％的表面活性剂含量。
438.如权利要求434-437中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.1％的表面活性剂含量。
439.如权利要求434-438中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.01％的表面活性剂含量。
440.如权利要求434-439中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.001％的表面活性剂含量。
441.如权利要求434-440中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有任何表面活性剂含量。
442.如权利要求434-441中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
443.如权利要求398-442中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1.00至约6.00g/cm3的骨架密度。
444.如权利要求443所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约0.90至约1.60g/cm3的骨架密度。
445.如权利要求443-444中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1.30至约1.58g/cm3的骨架密度。
446.如权利要求443-445中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1.32至约1.50g/cm3的骨架密度。
447.如权利要求398-446中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有高于约160℃的玻璃化转变温度。
448.如权利要求447所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有高于约90℃的玻璃化转变温度。
449.如权利要求447-448中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有高于约50℃的玻璃化转变温度。
450.如权利要求447-446中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约60至约100℃的玻璃化转变温度。
451.如权利要求447-446中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约75至约80℃的玻璃化转变温度。
452.如权利要求398-451中任一项所述的方法，其中所述颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、抗菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂或其组合。
453.如权利要求452所述的方法，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或其组合。
454.如权利要求452所述的方法，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酰乙醇胺、氨丁三醇、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸单钠、氢氧化钠、氢氧化钾或其组合。
455.如权利要求452所述的方法，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾或其组合。
456.如权利要求452所述的方法，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、PEG 200、PEG 300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精或其组合。
457.如权利要求452所述的方法，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-单-二-三甘油酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、泊洛沙姆或其组合。
458.如权利要求452所述的方法，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、L-精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或其组合。
459.如权利要求403-458中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的聚集。
460.如权利要求403-459中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
461.如权利要求403-460中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的聚集。
462.如权利要求403-461中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
463.如权利要求403-462中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
464.如权利要求403-463中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何聚集。
465.如权利要求403-458中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约3％至约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
466.如权利要求403-458中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有约1％至约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
467.如权利要求403-466中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的片段化。
468.如权利要求403-467中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的片段化。
469.如权利要求403-468中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的片段化。
470.如权利要求403-469中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的片段化。
471.如权利要求403-470中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何片段化。
472.如权利要求403-471中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约50％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
473.如权利要求403-472中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约30％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
474.如权利要求403-473中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约25％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
475.如权利要求403-474中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约15％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
476.如权利要求403-475中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约10％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
477.如权利要求403-476中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约5％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
478.如权利要求403-477中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约3％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
479.如权利要求403-478中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有小于约1％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
480.如权利要求403-479中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
481.如权利要求403-480中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约3％残留的第一和第二液体。
482.如权利要求403-481中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约2％残留的第一和第二液体。
483.如权利要求403-482中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约1％残留的第一和第二液体。
484.如权利要求403-483中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.1％残留的第一和第二液体。
485.如权利要求403-484中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.01％残留的第一和第二液体。
486.如权利要求403-485中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按质量计小于约0.001％残留的第一和第二液体。
487.如权利要求403-486中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒按质量计基本上不含任何残留的第一和第二液体。
488.如权利要求403-487中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约60％的治疗性生物制剂。
489.如权利要求403-488中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约70％的治疗性生物制剂。
490.如权利要求403-489中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约80％的治疗性生物制剂。
491.如权利要求403-490中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约90％的治疗性生物制剂。
492.如权利要求403-491中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约95％的治疗性生物制剂。
493.如权利要求403-492中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约98％的治疗性生物制剂。
494.如权利要求403-493中任一项所述的方法，其中在移除所述第一和第二液体后，所述颗粒具有按重量计超过约99％的治疗性生物制剂。
495.如权利要求398所述的方法，其中所述第一液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶或其组合。
496.如权利要求495所述的方法，其中所述第一液体是水性的。
497.如权利要求496所述的方法，其中所述第一液体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、缓冲液、右旋糖5％或其组合。
498.如权利要求497所述的方法，其中所述第一液体是水。
499.如权利要求497所述的方法，其中所述缓冲液是乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液或二甲胂酸盐缓冲液。
500.如权利要求401所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约0.0001mg/ml至约1000mg/mL。
501.如权利要求500所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约10mg/mL至约500mg/mL。
502.如权利要求500-501中任一项所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约10mg/mL至约100mg/mL。
503.如权利要求500-502中任一项所述的方法，其中所述第一液体中所述治疗剂的浓度为约20mg/mL至约100mg/mL。
504.如权利要求495-503中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有约0.01至约10,000mPa·s的粘度。
505.如权利要求495-503中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约100mPa·s的粘度。
506.如权利要求505所述的方法，其中所述第一液体具有小于约10mPa·s的粘度。
507.如权利要求505-506中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约3mPa·s的粘度。
508.如权利要求505-507中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约0.9mPa·s的粘度。
509.如权利要求505-508中任一项所述的方法，其中所述第一液体具有小于约0.5mPa·s的粘度。
510.如权利要求495-509中任一项所述的方法，其中所述第一液体还包含表面活性剂。
511.如权利要求510所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
512.如权利要求398所述的方法，其中所述第二液体是水性的、有机溶剂、离子液体、水凝胶、离子凝胶、蛋白质稳定剂或其组合。
513.如权利要求512所述的方法，其中所述第二液体是水性的。
514.如权利要求512所述的方法，其中所述第二液体是有机溶剂。
515.如权利要求514所述的方法，其中所述有机溶剂是苄醇、苯甲酸苄酯、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化棕榈籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、植物油、核桃油、聚乙二醇、糖原质、丙酮、二甘醇二甲醚、二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲醚、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚、乳酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、甲基异丁基酮、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、2-吡咯烷酮、甘油三酯、四氢糠醇、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯(例如，
Figure FDA0003192505490000441
810和
Figure FDA0003192505490000442
812N)、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯(例如，
Figure FDA0003192505490000443
840)、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯或其组合。
516.如权利要求514或515所述的方法，其中所述有机溶剂是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
517.如权利要求512所述的方法，其中所述第二液体是离子液体。
518.如权利要求512所述的方法，其中所述第二液体是蛋白质稳定剂。
519.如权利要求398-518中任一项所述的方法，其中所述第二液体还包含表面活性剂。
520.如权利要求519所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、鲸蜡基三甲基溴化铵、双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或其组合。
521.如权利要求512-520中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有约0.01至约10,000mPa·s的粘度。
522.如权利要求512-520中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约10mPa·s的粘度。
523.如权利要求522所述的方法，其中所述第二液体具有小于约5mPa·s的粘度。
524.如权利要求522-523中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约2mPa·s的粘度。
525.如权利要求522-524中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约0.70mPa·s的粘度。
526.如权利要求522-525中任一项所述的方法，其中所述第二液体具有小于约0.40mPa·s的粘度。
527.如权利要求398所述的方法，其中步骤b)的佩克莱特数小于约500。
528.如权利要求398或527所述的方法，其中步骤b)的佩克莱特数小于约10。
529.如权利要求398和527-528中任一项所述的方法，其中步骤b)的佩克莱特数小于约5。
530.如权利要求398和527-529中任一项所述的方法，其中步骤b)的佩克莱特数小于约3。
531.如权利要求398和527-530中任一项所述的方法，其中步骤b)的佩克莱特数小于约2。
532.如权利要求398和527-531中任一项所述的方法，其中步骤b)的佩克莱特数小于约1。
533.如权利要求398所述的方法，其中步骤a)的液滴通过电喷雾、超声雾化器、微流体装置形成。
534.如权利要求398所述的方法，其中步骤a)的液滴在微流体装置中形成。
535.如权利要求534所述的方法，其中在所述微流体装置中形成的所述液滴在所述微流体装置中规则地间隔开。
536.如权利要求398所述的方法，其中在使所述液滴与第二液体接触后干燥所述液滴。
537.如权利要求398所述的方法，其中步骤b)还包括将所述第二液体的温度降低到所述第一液体的冰点的约30℃以内的温度。
538.如权利要求398所述的方法，其中所述第二液体在大气压下的沸点为约0至约200℃。
539.如权利要求398所述的方法，其中所述第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物。
540.如权利要求539所述的方法，其中所述混合物包含具有不同溶解度的液体。
541.如权利要求398-540中任一项所述的方法，其中通过离心、过筛、过滤、磁性收集、溶剂交换或倾析移除所述第一和第二液体。
542.如权利要求398-541中任一项所述的方法，还包括在步骤d)后用洗涤流体洗涤所述颗粒。
543.如权利要求542所述的方法，其中所述洗涤流体是有机液体、超临界流体、低温液体或其组合。
544.如权利要求398-543中任一项所述的方法，其中通过冻干或真空干燥进一步干燥所述颗粒。
545.如权利要求398-544中任一项所述的方法，其中通过使所述颗粒与气体流接触来进一步干燥所述颗粒。
546.如权利要求545所述的方法，其中所述气体的温度为约-80至约200℃。
547.如权利要求545或546所述的方法，其中所述气体的温度为约10至约40℃。
548.如权利要求545-547中任一项所述的方法，其中所述气体的相对湿度为约0至约100％。
549.如权利要求545-548中任一项所述的方法，其中所述气体是氦气、空气、氮气或氩气。
550.如权利要求398-549中任一项所述的方法，其中在电场存在下形成所述颗粒。
551.如权利要求550所述的方法，其中在所述电场存在下形成的所述颗粒的平均直径小于或等于在不存在电场情况下产生的颗粒的直径。
552.如权利要求550或551所述的方法，其中所述颗粒包含净电荷。
553.如权利要求550-552中任一项所述的方法，其中所述净电荷基本上使颗粒聚结最小化。
554.如权利要求398-553中任一项所述的方法，还包括在移除所述第一和第二液体后对所述颗粒进行灭菌。
555.如权利要求554所述的方法，其中所述灭菌通过辐照、巴氏杀菌或冷冻进行。
556.如权利要求555所述的方法，其中所述辐照是通过伽马辐射。
557.一种控制颗粒的表面特性的方法，所述方法包括：
a)提供包含第一液体、第一组分和第二组分的液滴，其中所述第一组分以比所述第二组分更接近其溶解度极限的量存在，所述第一组分具有比所述第二组分更高的佩克莱特数，或其组合；
b)使所述液滴与第二液体接触；
c)使所述液滴干燥；以及
d)移除所述第一和第二液体，
从而形成颗粒，其中所述第一组分相对于所述第二组分在所述颗粒的表面富集。
558.如权利要求557所述的方法，其中所述第一组分是剂。
559.如权利要求557所述的方法，其中所述第二组分是剂。
560.如权利要求558或559所述的组合物，其中所述剂是治疗剂。
561.如权利要求558或559所述的颗粒，其中所述剂是诊断剂。
562.如权利要求557-561中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有包括核和壳的形态。
563.如权利要求562所述的方法，其中所述壳包括一个或多个层。
564.如权利要求562所述的方法，其中所述壳是凝胶。
565.如权利要求564所述的方法，其中所述凝胶是水凝胶、离子凝胶或有机凝胶。
566.如权利要求563或564所述的方法，所述壳是结晶或半结晶的。
567.如权利要求562所述的方法，其中所述核是固体、凝胶或液体。
568.如权利要求557所述的方法，其中所述第二液体是两种或更多种不同极性的液体的混合物。
569.如权利要求568所述的方法，其中所述混合物包含具有不同溶解度的液体。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022523510A (ja) 2019-01-31 2022-04-25 エレクトロフィ，インコーポレイテッド 粒子形成及び形態構造
US11634485B2 (en) 2019-02-18 2023-04-25 Eli Lilly And Company Therapeutic antibody formulation
EP4027978A1 (en) 2019-09-13 2022-07-20 Elektrofi, Inc. Compositions and methods for the delivery of therapeutic biologics for treatment of disease
US20230065628A1 (en) * 2020-02-19 2023-03-02 Elektrofi, Inc. Droplet Formation and Particle Morphology
AU2021257476A1 (en) 2020-04-17 2022-11-03 Elektrofi, Inc. Methods of forming particles by continuous droplet formation and dehydration
KR20230121797A (ko) * 2020-12-17 2023-08-21 아스트라제네카 아베 항-il5r 항체 제형
US20240255517A1 (en) 2021-06-04 2024-08-01 Elektrofi, Inc. Methods For Screening Particle Formulations Comprising Proteins
WO2023212721A1 (en) 2022-04-29 2023-11-02 Elektrofi, Inc. Injectable suspensions

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160128944A1 (en) * 2013-06-04 2016-05-12 Vyome Biosciences Pvt. Ltd. Coated particles and compositions comprising same
US20160250329A1 (en) * 2013-10-29 2016-09-01 Albumedix A/S Antibody composition
WO2018098376A1 (en) * 2016-11-22 2018-05-31 Elektrofi, Inc. Particles comprising a therapeutic or diagnostic agent and suspensions and methods of use thereof
US20180333493A1 (en) * 2017-05-16 2018-11-22 Bhami's Research Laboratory, Pvt. Ltd. High concentration protein formulations with reduced viscosity

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3013007A (en) 1960-08-08 1961-12-12 Upjohn Co Neomycin salt of higher fatty acids
USB724600I5 (zh) 1968-04-26
US4172896A (en) 1978-06-05 1979-10-30 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. Methane-sulfonamide derivatives, the preparation thereof and composition comprising the same
US4531056A (en) 1983-04-20 1985-07-23 Yale University Method and apparatus for the mass spectrometric analysis of solutions
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5639441A (en) 1992-03-06 1997-06-17 Board Of Regents Of University Of Colorado Methods for fine particle formation
GB9217295D0 (en) 1992-08-14 1992-09-30 Wellcome Found Controlled released tablets
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5541231A (en) 1993-07-30 1996-07-30 Glaxo Wellcome Inc. Stabilized Pharmaceutical
US5358970A (en) 1993-08-12 1994-10-25 Burroughs Wellcome Co. Pharmaceutical composition containing bupropion hydrochloride and a stabilizer
GB9315856D0 (en) 1993-07-30 1993-09-15 Wellcome Found Stabilized pharmaceutical
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
GB9416841D0 (en) 1994-08-19 1994-10-12 Finnfeeds Int Ltd An enzyme feed additive and animal feed including it
US5840731A (en) 1995-08-02 1998-11-24 Virginia Commonwealth University Pain-alleviating drug composition and method for alleviating pain
WO1999011196A1 (en) 1997-09-04 1999-03-11 Point Biomedical Corporation Injectable tissue reconstruction material
AU2483599A (en) 1998-01-29 1999-08-16 Sepracor, Inc. Pharmaceutical uses of optically pure (-)-bupropion
US6331317B1 (en) 1999-11-12 2001-12-18 Alkermes Controlled Therapeutics Ii Inc. Apparatus and method for preparing microparticles
US20030055010A1 (en) 1999-12-21 2003-03-20 De Haan Ben Rudolf Preserving active fungicide in an aqueous solution
US20080026068A1 (en) 2001-08-16 2008-01-31 Baxter Healthcare S.A. Pulmonary delivery of spherical insulin microparticles
CN1750811A (zh) 2001-10-19 2006-03-22 巴克斯特国际公司 在冷冻水基质中包括颗粒的稳定组合物
WO2003035301A1 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Victaulic Company Of America Crimping jaw having energy efficient crimping dies
US7008644B2 (en) * 2002-03-20 2006-03-07 Advanced Inhalation Research, Inc. Method and apparatus for producing dry particles
US20060147400A1 (en) 2002-12-02 2006-07-06 L'oreal Composition, especially a cosmetic composition, containing at least one alkyl para-hydroxybenzoate and at least one lipophilic amino acid derivative
WO2004052607A1 (en) * 2002-12-10 2004-06-24 Cps Orocel Llc Method of preparing biologically active formulations
US20050186183A1 (en) 2003-12-08 2005-08-25 Deangelo Joseph Stabilized products, processes and devices for preparing same
US8728525B2 (en) 2004-05-12 2014-05-20 Baxter International Inc. Protein microspheres retaining pharmacokinetic and pharmacodynamic properties
RU2007128983A (ru) 2005-02-16 2009-03-27 Ново Нордиск А/С (DK) Инсулинотропные агенты, конъюгированные со структурно определенными разветвленными полимерами
EP1863451A2 (en) * 2005-03-31 2007-12-12 Rafael-Armament Development Authority Ltd. Spherically shaped substances
US8293819B2 (en) 2006-11-24 2012-10-23 Canon Kabushiki Kaisha Method for producing particles and particles
US20090022727A1 (en) 2007-01-26 2009-01-22 Alza Corp. Injectable, nonaqueous suspension with high concentration of therapeutic agent
JP5488948B2 (ja) 2007-03-26 2014-05-14 国立大学法人東京農工大学 マグネタイト微粒子の制御方法
EP2578248B1 (en) 2007-04-10 2021-05-19 Zimmer, Inc. An antioxidant stabilized crosslinked ultra-high molecular weight polyethylene for medical device applications
US20090035381A1 (en) 2007-08-01 2009-02-05 Stankus John J Electrospraying method for fabrication of particles and coatings and treatment methods thereof
WO2009086062A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Lyotropic Therapeutics, Inc. Stabilized formulations of peptides and proteins
RU2496482C2 (ru) 2008-03-05 2013-10-27 Бакстер Интернэшнл Инк. Композиции и способы для доставки лекарственных средств
US8962026B2 (en) 2008-09-26 2015-02-24 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same
CN106539756A (zh) 2008-10-15 2017-03-29 精达制药公司 高浓缩药物颗粒、制剂、混悬剂及其应用
WO2010056657A2 (en) 2008-11-16 2010-05-20 Board Of Regents, The Univesity Of Texas System Low viscosity highly concentrated suspensions
RU2011124527A (ru) 2008-11-17 2012-12-27 Дженентек, Инк. Способ и композиция для уменьшения агрегации макромолекулы в физиологических условиях
CN102470111A (zh) 2009-06-29 2012-05-23 麦克内尔-Ppc股份有限公司 含充液胶囊的药物片剂
US9072668B2 (en) * 2010-03-09 2015-07-07 Janssen Biotech, Inc. Non-aqueous high concentration reduced viscosity suspension formulations of antibodies
NZ602955A (en) 2010-04-20 2015-02-27 Cipla Ltd Pharmaceutical composition comprising efavirenz
US8939388B1 (en) 2010-09-27 2015-01-27 ZoomEssence, Inc. Methods and apparatus for low heat spray drying
GB201016436D0 (en) 2010-09-30 2010-11-17 Q Chip Ltd Method of making solid beads
HUE044633T2 (hu) 2011-10-27 2019-11-28 Genmab As Heterodimer fehérjék elõállítása
GB201122408D0 (en) 2011-12-23 2012-02-08 Univ Strathclyde Method for preparing dry protein formulations
JP2013166100A (ja) 2012-02-14 2013-08-29 Kobe Univ マイクロカプセル
JP2014058466A (ja) * 2012-09-18 2014-04-03 Nitto Denko Corp ゼラチン粒子およびその用途、ならびに生理活性物質投与用デバイス
EP2906337A2 (en) 2012-10-09 2015-08-19 Csir Production of particles
US9555007B2 (en) 2013-03-14 2017-01-31 Massachusetts Institute Of Technology Multi-layer hydrogel capsules for encapsulation of cells and cell aggregates
US9832972B2 (en) 2013-03-15 2017-12-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Electrosprayer for arthropod tagging
US20140262694A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Interroll Holding Ag Conveyor having a catenary in the return path
BR112016005770B1 (pt) 2013-09-19 2021-07-27 Terumo Corporation Partículas de polímero
US9782442B2 (en) 2013-12-09 2017-10-10 Versitech Limited Core-shell capsules for encapsulation of particles, colloids, and cells
WO2015138844A1 (en) 2014-03-13 2015-09-17 Eleven Biotherapeutics, Inc. Methods for production of stable chimeric cytokine protein formulations in blow fill seal containers
US20160074515A1 (en) 2014-06-20 2016-03-17 Reform Biologics, Llc Viscosity-reducing excipient compounds for protein formulations
CN106659324A (zh) 2014-07-21 2017-05-10 雅培制药有限公司 含有具有体积流动性性质的营养粉末的营养粉末荚式容器
WO2016089309A1 (en) 2014-12-02 2016-06-09 Nanyang Technological University Method of preparing hollow microparticles and hollow microparticles prepared thereof
US9968558B2 (en) 2015-03-20 2018-05-15 Saint Louis University Fabrication of hydrogel microsphere delivery vehicles through electrospraying and timed gelation
CN107920997A (zh) * 2015-06-17 2018-04-17 比奥根Ma公司 富马酸二甲酯颗粒和其药物组合物
WO2017106716A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of manufacturing protein microparticles
WO2019023392A1 (en) 2017-07-25 2019-01-31 Elektrofi, Inc. FORMATION OF PARTICLES COMPRISING AGENTS
WO2019226969A1 (en) 2018-05-24 2019-11-28 Elektrofi, Inc. Particles comprising a therapeutic or diagnostic agent and suspensions and methods of use thereof
BR112021004126A2 (pt) 2018-09-05 2021-05-25 Ventria Bioscience Inc. formulação profilática e/ou terapêutica estabilizada e método profilático ou terapêutico
JP2022523510A (ja) 2019-01-31 2022-04-25 エレクトロフィ，インコーポレイテッド 粒子形成及び形態構造
EP4027978A1 (en) 2019-09-13 2022-07-20 Elektrofi, Inc. Compositions and methods for the delivery of therapeutic biologics for treatment of disease
WO2021158959A2 (en) 2020-02-07 2021-08-12 Elektrofi, Inc. Peptide particles and methods of formation
US20230065628A1 (en) 2020-02-19 2023-03-02 Elektrofi, Inc. Droplet Formation and Particle Morphology
AU2021257476A1 (en) 2020-04-17 2022-11-03 Elektrofi, Inc. Methods of forming particles by continuous droplet formation and dehydration
US20240255517A1 (en) 2021-06-04 2024-08-01 Elektrofi, Inc. Methods For Screening Particle Formulations Comprising Proteins

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160128944A1 (en) * 2013-06-04 2016-05-12 Vyome Biosciences Pvt. Ltd. Coated particles and compositions comprising same
US20160250329A1 (en) * 2013-10-29 2016-09-01 Albumedix A/S Antibody composition
WO2018098376A1 (en) * 2016-11-22 2018-05-31 Elektrofi, Inc. Particles comprising a therapeutic or diagnostic agent and suspensions and methods of use thereof
US20180333493A1 (en) * 2017-05-16 2018-11-22 Bhami's Research Laboratory, Pvt. Ltd. High concentration protein formulations with reduced viscosity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
郭辉等: "多肽蛋白质类药物微球制备方法研究进展", 《医药导报》 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20210315827A1 (en) 2021-10-14
JP2022523510A (ja) 2022-04-25
US11717488B2 (en) 2023-08-08
AU2020214626A1 (en) 2021-09-16
US20240293332A1 (en) 2024-09-05
WO2020160323A2 (en) 2020-08-06
US20230338299A1 (en) 2023-10-26
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