CN1133641C - 一种含有3'叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有3’叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制备方法，其化合物的结构为右式：其制备方法为将原料(芳香基取代)二氯硫磷溶于四氢呋喃(THF)中，加入氨基酸甲酯盐酸盐，再滴加缚酸剂，再将3’叠氮胸苷溶液加入上述溶液中，再加入缚酸剂，过滤，旋转蒸馏，用硅胶柱进行柱层析分离，即得到3’叠氮胸苷-5′-(芳香基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物。用本发明的方法制备的化合物，具有抗爱兹病毒药物活性。
Description
本发明涉及一种硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制备方法，尤其涉及含有3’叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制备方法，该类化合物具有良好的生物活性和抗病毒、抗肿瘤、抗爱兹病毒等药物活性，可在临床应用中发展成为一种核苷类抗病毒、抗肿瘤、抗爱兹病毒前药(prodrugs)。
硫代磷酸在磷原子上含有一个硫取代氧的结构，虽然这个结构仍然保留着原来的电荷，保留着高水溶性的性质，但硫代磷酸的寡聚脱氧核糖核酸(S-oligos)的其他理化特性和生物学属性均与天然的磷酸二酯原型有很大的差别。最显著的差别之一是硫代磷酸对核酸酶具有抵抗性。由于细胞内外核酸酶的存在，很快消化掉了加入的磷酸二酯类反义寡聚核苷酸，使其丧失作用功能。通过合成具有抵抗核酸酶的硫代磷酸类化合物，对于今后应用合成的寡聚脱氧核糖核酸用于治疗目的，无疑是开辟了一条希望之路。
本发明的目的是提出一种含有3’叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制备方法，用于开发抗病毒、抗肿瘤、抗爱兹病毒活性药物。
本发明制备的含有3’叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物，化合物的结构式为：上述结构式中R＝H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；
X＝H，Cl，NO2。
上述化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃的条件下，将原料(芳香基取代) 二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成浓度为0.8～1.0mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入与原料相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂，缚酸剂的加入量是原料物质的量的2倍。
3)跟踪上述反应进程，待原料全部反应完毕以后，将与原料相同物质的量的已溶于四氢呋喃中的3’叠氮胸苷溶液慢慢滴入第二步的溶液中，搅拌均匀后继续滴加与原料相同物质的量的缚酸剂。
4)监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，即得到含有3’叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物。
用本发明的方法制备的含有3’叠氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物，是一类全新的具有抗爱兹病毒药物活性的化合物，通过合成不同种类的核苷-氨基酸缀合物，并进行活性实验，初步得到了满意的结果，为进一步研制和开发新型抗爱兹病毒药物提供了基础研究成果。经CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验发现均有不同程度的活性。
以下介绍本发明的实施例：
实施例1：制备3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R＝H，X＝H。
化合物的结构式为：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为77.1％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ71.70，72.10；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.80(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 173.24(
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MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 9×10-6μM (CD50 206μM)
CEM-SS 4×10-5μM (CD50 118μM)
MT4 5×10-5μM (CD50 70μM)实施例2：制备3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R为CH3，X为H。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为67.3％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ 70.20，71.70；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.81(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.34(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.56(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.40(3H，d，Ala-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ178.24(
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爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 6××10-3μM (CD50 188μM)
CEM-SS 6××10-2μM (CD50 49μM)
MT4 4××10-2μM (CD50 69μM)
实施例3：制备3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R为C6H5CH2，X为H。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.215g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.266g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为69.6％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ70.70，71.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.88(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1 H，m，H-2′)，2.32(2H，m，H-β)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ174.39(
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爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 8×10-3μM (CD50 112μM)
CEM-SS 3×10-2μM (CD50 29μM)
MT4 6×10-2μM (CD50 44μM)
实施例4：制备3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物，其中R为(CH3)2CH2，X为H。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为87.3％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ 71.70，72.40；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.80(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.67(1H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 174.24(
COOMe)，165.70(C-2)，150.63(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，129.91(m，Ph-para)，125.52(m，Ph-ortho)，120.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，26.86(CH3)，26.40(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 553(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 551(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 6×10-3μM (CD50 77μM)
CEM-SS 1×10-2μM (CD50 48μM)
MT4 2×10-2μM (CD50 62μM)
实施例5：制备3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R为(CH3)2CHCH2，X为H。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.184g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为68.3％。波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ 70.6，71.8；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.80(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 173.24(
COOMe)，163.70(C-2)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，129.91(m，Ph-para)，125.52(m，Ph-ortho)，120.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 567(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 565(M-H)-.
该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 8×10-3μM (CD50 79μM)
CEM-SS 9×10-2μM (CD50 78μM)
MT4 5×10-2μM (CD50 23μM)
实施例6：制备3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R为H，X为CI。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.262g)的(对氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对氯苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为77.1％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ71.32，72.11；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.80(1H，sb，NH)，6.82-7.25(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1 H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ173.24(
COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 547(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 545(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 8×10-3μM (CD50 186μM)
CEM-SS 5×10-2μM (CD50 218μM)
MT4 5×10-2μM (CD50 60μM)
实施例7：制备3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R为CH3，X为CI。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.262g)的(对氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对氯苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为71.3％。波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ70.20，71.70；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.81(1H，sb，NH)，6.82-7.28(5H，m，Ph，H-6)，6.36(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.11(1H，m，Ala-NH)，3.86(3H，s，OCH3)，3.66(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.40(3H，d，Ala-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ177.24(
COOMe)，161.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，116.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，35.46(C-2′)，19.86(d，Ala-Me，J＝5Hz)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 560(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 558(M-H)-.
该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 9×10-3μM (CD50 188μM)
CEM-SS 5×10-2μM (CD50 123μM)
MT4 6×10-2μM (CD50 98μM)
实施例8：制备3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R为C6H5CH2，X为CI。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.262g)的(对氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.215g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对氯苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.266g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为70.8％。波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ71.70，72.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.81(1H，sb，NH)，6.82-7.25(5H，m，Ph，H-6)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.32(2H，m，H-β)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ174.39(
COOMe)，163.66(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，56.82(C-β)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 636(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 634 M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 8×10-3μM (CD50 185μM)
CEM-SS 5×10-2μM (CD50 65μM)
MT4 6×10-2μM (CD50 122μM)
实施例9：制备3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物，其中R为(CH3)2CH2，X为CI。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.262g)的(对氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对氯苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为67.3％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ71.60，72.50；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.56(1H，sb，NH)，6.82-7.35(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.69(1H，m，H-α)，3.55(1H，m，H-β)，2,56(1H，m，H-2′)，2.12(3H，s，5-Me)，1.51(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ175.24(
COOMe)，165.70(C-2)，161.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，26.86(CH3)，26.40(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 587(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 585(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 6×10-3μM (CD50 77μM)
CEM-SS 1×10-2μM (CD50 48μM)
MT4 2×10-2μM (CD50 62μM)
实施例10：制备3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R为(CH3)2CHCH2，X为CI。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.262g)的(对氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.184g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对氯苯基取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对氯苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为66.3％。波谱数据如下∶31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ71.8，72.3；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.85(1H，sb，NH)，6.82-7.21(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ173.24(
COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 602(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 600(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 7×10-3μM (CD50 159μM)
CEM-SS 9×10-2μM (CD50 68μM)
MT4 6×10-2μM (CD50 21μM)
实施例11：制备3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R为H，X为NO2。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.273g)的(对硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对硝基苯取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为66.1％。波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ71.32，72.11；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.80(1H，sb，NH)，6.82-7.21(5H，m，Ph，H-6)，6.41(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.85(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 173.24(
COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，118.08(m，Ph-meta)，113.52(C-5)，84.64(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，38.46(C-2′)，12.55(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 558(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 556(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 9×10-3μM (CD50 286μM)
CEM-SS 7×10-2μM (CD50 118μM)
MT4 5×10-2μM (CD50 60μM)
实施例12：3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH3，X为NO2。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.273g)的(对硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对硝基苯取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为71.3％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ70.60，71.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.82(1H，sb，NH)，6.82-7.28(5H，m，Ph，H-6)，6.36(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.11(1H，m，Ala-NH)，3.86(3H，s，OCH3)，3.66(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.40(3H，d，Ala-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 177.24(
COOMe))，161.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，116.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，35.46(C-2′)，19.86(d，Ala-Me，J＝5Hz)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 572(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 570(M-H)-.
该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 9×10-3μM (CD50 168μM)
CEM-SS 6×10-2μM (CD50 183μM)
MT4 7×10-2μM (CD50 98μM)
实施例13：制备3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R为C6H5CH2，X为NO2。化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.273g)的(对硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.215g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对硝基苯取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.266g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为61.8％。波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ 71.70，72.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.81(1H，sb，NH)，6.82-7.25(5H，m，Ph，H-6)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.32(2H，m，H-β)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 174.39(
COOMe)，163.66(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，56.82(C-β)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 636(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 634(M-H)-该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50 抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 8×10-3μM (CD50 185μM)
CEM-SS 6×10-2μM (CD50 157μM)
MT4 6×10-2μM (CD50 122μM)
实施例14：制备3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物，其中R为(CH3)2CH2，X为NO2。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.273g)的(对硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对硝基苯取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为62.3％。
波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ 71.60，72.50；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.56(1H，sb，NH)，6.82-7.35(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.69(1H，m，H-α)，3.55(1H，m，H-β)，2,56(1H，m，H-2′)，2.12(3H，s，5-Me)，1.51(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ176.24(
COOMe)，165.70(C-2)，161.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，26.86(CH3)，26.40(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 598(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 596(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 9×10-3μM (CD50 178μM)
CEM-SS 5×10-2μM (CD50 48μM)
MT4 8×10-2μM (CD50 162μM)
实施例15：制备3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R为(CH3)2CHCH2，X为NO2。
化合物的结构式：
化合物的合成步骤如下：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃，将1mmol(0.273g)的(对硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.184g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待(对硝基苯取代)二氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’叠氮胸苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到产物3’叠氮胸苷-5′-(对硝基苯取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为65.3％。波谱数据如下：31P NMR(DMSO-d6，δ：ppm，J：Hz)：δ 71.8，72.3；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 9.85(1H，sb，NH)，6.82-7.21(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ 173.24(
COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)：m/z 612(M+H)+；ESI-MS(neg.)：m/z 610(M-H)-.该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗爱兹病毒-1活性实验
爱兹病毒＝Human immunodeficiency virus
MT-4＝Human leukenia T cell
CEM＝Human lymphoblastoid T cell
ED50＝抗病毒活性指标
CD50＝细胞毒性指标
ED50 CEM-TK- 8×10-3μM (CD50 159μM)
CEM-SS 6×10-2μM (CD50 88μM)
MT4 4×10-2μM (CD50 121μM)
Claims (2)
1、一种3’叠氮胸苷-5′-(芳香基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，该化合物的结构式为：上述结构式中R为H、CH3、C6H5CH2、(CH3)2CH2或(CH3)2CHCH2中的任何一种，X为H、Cl或NO2中的任何一种。
2、一种如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)在氮气保护下，冰盐浴冷却至-4～-8℃的条件下，将原料(芳香基取代)二氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成浓度为0.8～1.0mol/L的溶液；
2)向上述溶液中加入与原料相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂，缚酸剂为三乙胺，缚酸剂的加入量是原料物质的量的2倍；
3)跟踪上述反应进程，待原料全部反应完毕以后，将与原料相同物质的量的已溶于四氢呋喃中的3’叠氮胸苷溶液慢慢滴入第二步的溶液中，搅拌均匀后继续滴加与原料相同物质的量的缚酸剂，
4)监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，用硅胶柱进行柱层析分离，即得到3’叠氮胸苷-5′-(芳香基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物。
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