CN113355284A - 用于模拟细胞内渗的Transwell小室及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于检测肿瘤细胞发生向血管或淋巴管内转移能力的模拟实验技术领域,公开了一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室及使用方法,Transwell小室包括:肿瘤细胞、Matrigel、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞;所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。本发明将两小室拼接,有利于接种内皮细胞,较直接滴于单独小室背面,细胞悬液的体积限制较小,接种>400ul细胞悬液;Matrigel铺于A室中,观察细胞时内皮细胞与肿瘤细胞所处平面不受Matrigel干扰,有利于荧光显微镜下观察采图。
Description
技术领域
本发明属于检测肿瘤细胞发生向血管或淋巴管内转移能力的模拟实验技术领域,尤其涉及一种用于模拟细胞穿透血管或淋巴管壁(含内皮细胞和胞外基质)的Transwell小室及其使用方法。
背景技术
肿瘤细胞除了局部蔓延扩散,血行转移和淋巴道转移也是非常重要的转移方式,在模拟实验中,如何逼真地模拟肿瘤细胞穿透血管壁或淋巴管壁进入血管或淋巴管却是一件不容易的事情,最基本的穿壁过程的模型至少应该包含对血管内皮/淋巴管内皮细胞以及胞外基质的穿透。
通过上述分析,现有技术存在的问题及缺陷为:常规Transwell侵袭实验仅模拟了细胞穿透细胞外基质的过程,而无法满足实验的目的和需求。现有技术中关于用于模拟肿瘤细胞内渗的小室/模型尚未见报道。
解决以上问题及缺陷的难度为:常规单向Transwell小室仅能模拟肿瘤细胞穿越Matrigel基质的简单过程,而无法同时均匀载入血管或淋巴管内皮细胞的铺垫,因其膜面积过小,即使考虑培养基表面张力,仍无法承载超过150ul的液体,常规Transwell小室适用的24孔板也无法支持细胞悬液滴加后的继续培养。
解决以上问题及缺陷的意义为:通过改进Transwell小室为双向小室,使其可以通过A面或B面分别进行Matrigel的铺加和内皮细胞的种植,可以较为充分的模拟肿瘤细胞穿过细胞外及血管外基质和排列紧密的内皮细胞的过程(即肿瘤细胞血管内渗的过程),且内皮细胞通过B面铺于小室膜上,生长于同一平面上,更有利于后续的图片采集。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室及其使用方法。
本发明是这样实现的,一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室自上而下为小室B,小室A;小室B,小室A在使用前粘合为一;小室A、小室B的中间部分自上而下依次为肿瘤细胞、Matrigel、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞。
进一步,所述血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞为人脐静脉内皮细胞HUVEC、人肺动脉内皮细胞HPAEC或人真皮淋巴管细胞HDLEC中的一种。
进一步,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室可拆分为A、B两个transwell小室;A室具有完整Transwell膜,膜上孔径为8um;B室无此膜。
本发明的另一目的在于提供一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。
进一步,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法包括以下步骤:
步骤一,A室朝上,于A室中均匀平整铺入Matrigel并37℃静置使其凝固,以此模拟血管或淋巴管外基质;
步骤二,待Matrigel凝固后,于超净台中将小室翻转,B室朝上,均匀铺入内皮细胞;
步骤三,置于无菌密闭容器内,放置于细胞培养箱中培养过夜,待内皮细胞满度超过90%时,将此模型小室取出,拆分为两个独立小室,弃B室;
步骤四,将A室置于常规24孔细胞培养板中,向孔板中加入全血清培养基,A室中加入无血清培养基稀释的肿瘤细胞,即可模拟肿瘤细胞进入淋巴或血管时先后穿过基质和内皮的过程。
本发明的另一目的在于提供一种模拟肿瘤细胞向血管或淋巴管内转移的方法,所述模拟肿瘤细胞向血管或淋巴管内转移的方法使用所述的用于模拟细胞内渗的Transwell小室。
结合上述的所有技术方案,本发明所具备的优点及积极效果为:本发明提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室,将两小室拼接,有利于接种内皮细胞,较直接滴于单独小室背面,细胞悬液的体积限制较小,可接种>400ul细胞悬液;Matrigel铺于A室中,最终观察细胞时内皮细胞与肿瘤细胞所处平面不受Matrigel干扰,有利于荧光显微镜下观察采图。
附图说明
图1是本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室结构示意图;
图中:1、肿瘤细胞;2、Matrigel;3、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞。
图2是本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的具体操作示意图。
图3是本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法流程图。
图4是本发明实施例提供的内渗模型小室侧面示意图。
图5是本发明实施例提供的CDFA SE标记的人脐静脉内皮细胞HUVEC,CMTPX标记的人卵巢癌细胞SKOV3;比例尺为50um示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种用于模拟细胞内渗的Transwell小室及其使用方法,下面结合附图对本发明作详细的描述。
如图1所示,本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室包括:肿瘤细胞1、Matrigel 2、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞3。自上而下为小室B(无基底膜),小室A(具有完整基底膜),二小室在使用前粘合为一。使用时具有完整基底膜的A室在上,向小室A中铺Matrigel(此时该模型中仅有一层基底膜,一层基质胶),待其凝固后翻转小室,B室朝上,向其内铺血管或淋巴管内皮细胞,置于无菌容器中培养过夜。次日将二小室拆开,A室置于24孔板中,加入肿瘤细胞悬液,后续处理如常规Transwell侵袭实验。
本发明实施例提供的血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞为人脐静脉内皮细胞HUVEC、人肺动脉内皮细胞HPAEC或人真皮淋巴管细胞HDLEC中的一种。
如图2所示,本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室可拆分为A、B两个transwell小室;A室具有完整Transwell膜,膜上孔径为8um;B室无此膜。
本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。
如图3所示,本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法包括以下步骤:
S101,A室朝上,于A室中均匀平整铺入Matrigel并37℃静置使其凝固,以此模拟血管或淋巴管外基质;
S102,待Matrigel凝固后,于超净台中将小室翻转,B室朝上,均匀铺入内皮细胞;
S103,置于无菌密闭容器内,放置于细胞培养箱中培养过夜,待内皮细胞满度超过90%时,将此模型小室取出,拆分为两个独立小室,弃B室;
S104,将A室置于常规24孔细胞培养板中,向孔板中加入全血清培养基,A室中加入无血清培养基稀释的肿瘤细胞,即可模拟肿瘤细胞进入淋巴或血管时先后穿过基质和内皮的过程。
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。
如图1所示,本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室包括:
1:肿瘤细胞;
2:Matrigel;
3:血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞(如人脐静脉内皮细胞HUVEC、人肺动脉内皮细胞HPAEC或人真皮淋巴管细胞HDLEC)。
该内渗模型需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。
如图2所示,本发明实施例提供的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的具体操作:该内渗模型小室可拆分为A、B两个transwell小室。A室具有完整Transwell膜(膜上孔径为8um),B室无此膜。
如图3所示,使用时首先A室朝上,于A室中均匀平整铺入Matrigel并37度静置使其凝固,以此模拟血管或淋巴管外基质。待Matrigel凝固后,于超净台中将小室翻转,B室朝上,均匀铺入内皮细胞(如HUVEC、HPAEC或HDLEC)。置于无菌密闭容器内,放置于细胞培养箱中培养过夜,待内皮细胞满度超过90%时,将此模型小室取出,拆分为两个独立小室,弃B室,A室置于常规24孔细胞培养板中,向孔板中加入全血清培养基,A室中加入无血清培养基稀释的肿瘤细胞,即可模拟肿瘤细胞进入淋巴或血管时先后穿过基质→内皮的过程。示意图中自上而下为小室B(无基底膜),小室A(具有完整基底膜),二小室在使用前粘合为一。使用时具有完整基底膜的A室在上,向小室A中铺Matrigel(此时该模型中仅有一层基底膜,一层基质胶),待其凝固后翻转小室,B室朝上,向其内铺血管或淋巴管内皮细胞,置于无菌容器中培养过夜。次日将二小室拆开,A室置于24孔板中,加入肿瘤细胞悬液,后续处理如常规Transwell侵袭实验。
创新之处:
①两小室拼接,有利于接种内皮细胞,较直接滴于单独小室背面,细胞悬液的体积限制较小,可接种>400ul细胞悬液。
②Matrigel铺于A室中,最终观察细胞时内皮细胞与肿瘤细胞所处平面不受Matrigel干扰,有利于荧光显微镜下观察采图。
内渗模型小室侧面图如图4所示。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种用于模拟肿瘤细胞内渗的Transwell小室,其特征在于,所述用于模拟肿瘤细胞内渗的Transwell小室自上而下为小室B,小室A;小室B,小室A在使用前粘合为一;小室A、小室B的中间部分自上而下依次为肿瘤细胞、Matrigel、血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞。
2.如权利要求1所述的用于模拟细胞内渗的Transwell小室,其特征在于,所述血管内皮细胞或淋巴管内皮细胞包括为人脐静脉内皮细胞HUVEC、人肺动脉内皮细胞HPAEC或人真皮淋巴管细胞HDLEC中的一种。
3.如权利要求1所述的用于模拟细胞内渗的Transwell小室,其特征在于,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室可拆分为A、B两个transwell小室;A室具有完整Transwell膜,膜上孔径为8um;B室无此膜。
4.一种应用如权利要求1~3任意一项所述的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法,其特征在于,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室需配合高度超过常规24孔板高度2倍的无菌密闭容器使用。
5.如权利要求4所述的用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法,其特征在于,所述用于模拟细胞内渗的Transwell小室的使用方法包括以下步骤:
步骤一,A室朝上,于A室中均匀平整铺入Matrigel并37℃静置使其凝固,以此模拟血管或淋巴管外基质;
步骤二,待Matrigel凝固后,于超净台中将小室翻转,B室朝上,均匀铺入内皮细胞;
步骤三,置于无菌密闭容器内,放置于细胞培养箱中培养过夜,待内皮细胞满度超过90%时,将此模型小室取出,拆分为两个独立小室,弃B室;
步骤四,将A室置于常规24孔细胞培养板中,向孔板中加入全血清培养基,A室中加入无血清培养基稀释的肿瘤细胞,即可模拟肿瘤细胞进入淋巴或血管时先后穿过基质和内皮的过程。
6.一种模拟肿瘤细胞向血管或淋巴管内转移的方法,其特征在于,所述模拟肿瘤细胞向血管或淋巴管内转移的方法使用权利要求1~3任意一项所述的用于模拟细胞内渗的Transwell小室。
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齐墨词等: "抗氧化蛋白Prx1在尼古丁诱导的口腔癌淋巴转移中的作用", 《北京口腔医学》 * |
齐墨词等: "抗氧化蛋白Prx1在尼古丁诱导的口腔癌淋巴转移中的作用", 《北京口腔医学》, no. 01, 28 February 2017 (2017-02-28), pages 6 - 10 * |
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