CN113337474A - 一株副溶血性弧菌裂解性噬菌体vB_VpP_DE17及其应用 - Google Patents

一株副溶血性弧菌裂解性噬菌体vB_VpP_DE17及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_DE17，其对副溶血性弧菌具有强烈的裂解作用，并且能够感染11种O抗原中的10种副溶血性弧菌。该噬菌体可以通过特异性宿主进行扩增，产生效价高的发酵产物，并且能够耐受60℃高温、耐受pH 5.0~pH 10.0。其最佳侵染复数（MOI）较广，在MOI为1~0.1的范围内，具有较强的防控副溶血性弧菌效果。因而，该副溶血性弧菌噬菌体可用于防控在水产养殖过程中由副溶血性弧菌引起的急性肝胰腺坏死综合症，具体较高的应用价值。

Description

一株副溶血性弧菌裂解性噬菌体vB_VpP_DE17及其应用
技术领域
本发明涉及疾病防治领域，具体涉及副溶血性弧菌裂解性噬菌体及其应用。
背景技术
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐性的革兰氏阴性菌，属于弧菌科，弧菌属，是一种人畜共患病原菌。人被副溶血性感染后，主要引起的症状有腹泻、发烧、肠胃炎等，严重可致死。副溶血性弧菌主要广泛分布在海水及鱼、虾、蟹、贝等水产品中，也是多数水产养殖过程中需要重点防控的病原菌。
20世纪初至今，水产养殖过程中依旧是使用抗生素对副溶血性弧菌进行防控而长期使用、滥用抗生素导致病原菌的耐药性不断增强，抗生素的广谱消杀的特性对原生微生物生态系统造成不可逆伤害，抗生素的残留问题最终也会对人体健康造成威胁。
随着以上问题日益严重，科研人员将再次着眼于利用噬菌体治疗对抗病原菌。噬菌体是一种特殊的细菌病毒，被认为是对抗多药耐药细菌的替代品。自从20世纪初发现噬菌体以来，已经报道了一些使用噬菌体疗法成功治疗细菌感染的方法案例(林业杰等，副溶血性弧菌噬菌体的生物学特性研究，海峡预防医学杂志，1998年第1期)。一些经FDA(U.S.Food and Drug Administration)批准的噬菌体类产品，已经被用投入生产应用。噬菌体分为2个大类：温和噬菌体和烈性噬菌体。其中烈性噬菌体通过特异性侵染宿主，在利用宿主细胞的营养物质进行繁殖，最终使细胞裂解来杀死宿主，只需通过4次感染周期，一个噬菌体颗粒就可以使十亿个宿主细胞裂解死亡，具有潜在应用价值。
目前噬菌体的应用主要受到以下几个方面的限制。
首先，噬菌体特异性侵染菌株的特性，是其能够有效在生产中应用的主要限制因素。一个病症的发生，通常并不是由单单一株病原菌引起的，会是多种病原菌共同导致，而且对于不同环境或者个体中发生的相同病原菌感染，可能存在病原菌的菌株差异。
其次，一些噬菌体具有溶源能力，在溶源噬菌体，即温和噬菌体的生命周期中，其DNA 主要是以整合到细菌的染色体上的方式，与细菌一起共同繁殖，只有在遇到逆境胁迫的情况下，才会进入裂解周期。这将带来两个问题，第一是不能快速的杀死病原菌，第二会引起基因水平转移，可能将细菌致病基因整合到噬菌体基因组上，从而导致致病基因在菌株间传播。
最后，噬菌体制剂的稳定性也会影响其实际应用，一方面是噬菌体制剂在运输与销售过程中，必须保持噬菌体效价在有效范围内，另一方面是噬菌体在所投放应用的环境中，能够稳定存活，并起到有效作用。
目前缺乏能够同时解决以上应用缺陷并且遗传信息和理化性质清晰的副溶血性弧菌噬菌体。
发明内容
本发明是针对现有的不足，通过研究筛选提供一种新型的副溶血性弧菌噬菌体，该噬菌体具有较广的宿主谱，能够裂解多种O抗原副溶血性弧菌，并对副溶血性弧菌具有较好的消杀与预防作用，不含有溶源性基因和毒力基因，能够用于虾添加剂、水体消毒剂的研发。
本发明提供一种具有宽裂解谱的副溶血性弧菌噬菌体(Vibrioparahaemolyticus bacteriophage)，菌株的保藏编号为GDMCC No：61188-B1。该噬菌体采用沉降-过滤方法从广州黄沙水产市场下水道水样中分离得到，所述副溶血性弧菌噬菌体具有SEQ ID NO.1 的核苷酸序列表示的基因组，其pH的耐受范围是pH 5～pH 10，可耐受60℃高温，被命名为vB_VpP_DE17(以下简写为DE17)。
本发明提供含有噬菌体作为活性成分的药物组合物，进一步还包含药物上可接受的助剂。优选地，在药物组合物中的噬菌体效价≥105pfu/mL。所述药物可以用于人或动物，如优选地鱼、虾、蟹、贝等水产动物，以防治副溶血性弧菌感染的疾病。具体地，所述疾病为南美白对虾急性肝胰腺坏死病。本发明的副溶血性弧菌噬菌体可以为控制由副溶血性弧菌感染引起的急性肝胰腺坏死综合症提供环保新药。
对应的，本发明还提供所述新副溶血性弧菌噬菌体在制备预防或治疗副溶血性弧菌引起的疾病的药物中的用途。
本发明还提供一种用于防治副溶血性弧菌感染的杀菌组合物，其含有上述副溶血性弧菌噬菌体作为活性成分。优选地，所述杀菌组合物是水体消毒剂，其有效成分为上述副溶血性弧菌噬菌体，优选地，其浓度为≥105pfu/mL。在此浓度下，水体消毒剂的消毒效果最佳。优选地，所述水体消毒剂还包含其他相配合的杀菌活性成为或助剂。
本发明还提供所述副溶血性弧菌噬菌体用于制备防控细菌污染的制剂中的用途，优选地，所述场景为水产品养殖、运输及保存的过程中。
本发明还提供一种包括上述副溶血性弧菌噬菌体的水产动物如对虾的饲料添加剂。该噬菌体作为添加剂加入南美白对虾的饲料中，以有效提高虾苗成活率。优选地，饲料中副溶血性弧菌噬菌体的含量在105pfu/mL以上。
本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明的副溶血性弧菌噬菌体对副溶血性弧菌具有强烈的裂解作用。它能够裂解44株副溶血性弧菌，裂解率为32％，其中对O4抗原的裂解率达到64％，对O6抗原也具有潜在强裂解能力(3/4)。该噬菌体可以通过特异性宿主进行扩增，发酵产物效价高，并且该噬菌体能够耐受60℃高温、耐受pH 5.0～pH 10.0，并紫外灯照射下20分钟后失活，具有较强的稳定性，对运输与保存的要求低，并且能够在不同条件的环境中适用。该副溶血性弧菌噬菌体具有较广的最佳侵染复数(MOI)，MOI从 0.1～0.0001范围内都能产生最高效价噬菌体滴度，具有高效扩增特性。并且在MOI为1～0.1 的范围内，都具有较强的防控副溶血性弧菌的效果。因而，该副溶血性弧菌噬菌体可用于制备抗副溶血性弧菌的药物，用于防控在水产养殖过程中由副溶血性弧菌引起的急性肝胰腺坏死综合症，具体较高的应用价值。
本发明的具有宽裂解谱的副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_DE17，于2020年9月14日在广东省微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏编号为GDMCC No:61188-B1，分类学名称为Vibrio parahaemolyticus bacteriophage；保藏单位的地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1噬菌体DE17电镜图。
图2噬菌体DE17基因热图。
图3噬菌体DE17 MOI。
图4噬菌体DE17温度稳定性。
图5噬菌体DE17的pH稳定性。
图6噬菌体DE17紫外耐受性。
图7噬菌体DE17一步生长曲线。
图8噬菌体DE17防控效果图。
具体实施方式
以下将结合本发明实施例中的附图，进一步对本发明做进一步详细说明，所描述的实施例仅为关键的实施例，并非全部的实施例。所述实施例并不构成对本发明的限制。
实施例1噬菌体的分离培养
(一)宿主菌活化与培养
本研究使用的食源性副溶血弧菌由广东省微生物研究所提供，将干粉管从4℃供冰箱取出，敲碎管口，用无菌枪头取出加到3％氯化钠碱性蛋白胨水中，并置于37℃，200rpm/min 摇床中培养24小时，再经过弧菌显色平板划线鉴定后，挑取单菌落接种于5mLTSB液体培养基中，37℃，200rpm/min，培养24小时，得到单一的悬浊液。
(二)噬菌体的分离与纯化
2019年4月10日从广州黄沙水产市场下水道采集水样，污水样品在室温条件下，经8000g离心10min，上清液经0.45μm过滤器过滤，在加入固体无水硫酸镁至终浓度为50mM，混匀，室温静置10-20min，使用抽滤装置，将混合液通过0.45μm纤维素滤膜，取滤膜放入噬菌体洗脱液中超声洗脱，再将洗脱液经过0.45μm过滤器过滤，将滤液于4℃保存备用。取一定量上述滤液和对数期宿主悬浊液，混合加入含4mM CaCl2的双料TSB中，培养 24小时后通过0.45μm过滤器，得到噬菌体过滤培养液。再用双层平板法鉴定噬菌体过滤培养液中是否含有噬菌体，挑取含有目标宿主噬菌体的过滤培养液，利用双层平板法进行多次纯化，最终在培养基上形成大小形态一致的噬菌斑即纯化完成。本研究经双层平板法，一共筛选到副溶血弧菌噬菌体55株，挑选其中宿主范围最广的两株烈性噬菌体用于后续实验，其中一株噬菌体命名为vB_VpP_DE17(以下简写为DE17),保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:61188-B1。另一株另外提出专利申请。
实施例2噬菌体的菌体鉴定
(一)噬菌体形态鉴定
取15μl的1×1010pfu/mL的噬菌体样品滴加到微孔铜网上，自然沉降15min，用滤纸吸收多余的液体，滴加10μl磷钨酸(2％)染色5min，用滤纸吸收多余的液体，自然干燥之后使用透射电镜寻找噬菌体颗粒，观察其形态，并拍照记录，具体图片参见图1，噬菌体DE17的具有二十面体头部和短且收缩尾巴组成，其头部长度、头部宽度和尾部长度分别为47、46、17nm。根据其形态特征与ICTV的正式分类守则结合，噬菌体DE17符合 CaudoviricetesPodoviridae的典型特征。
(二)噬菌体的分子生物学鉴定
1)噬菌体DE17的基因组提取
使用PEG-NaCl法浓缩噬菌体，4℃过夜静置。次日，12000×g,20min离心。用SMbuffer 重悬沉淀。浓缩得到的噬菌体用苯酚，氯仿和异戊醇提取噬菌体DNA，-20℃保存备用。
2)噬菌体DE17全基因组测序及全基因组特征分析
使用荧光定量仪Qubit 3.0Fluorometer测定所提取的DNA浓度，取100ng上述DNA样品，使用自动聚焦超声波破碎仪Covaris M220对噬菌体基因组进行打断处理，之后经过末端修复、接头连接、缺口修复和文库纯化，接头文库筛选和文库扩增等处理后，得到噬菌体DE17的DNA文库，最后利用Ion Torrent S5平台进行测序，得到测序文库数据。使用SPAdes软件对测序文库进行序列组装和拼接，得到的噬菌体全基因组序列见SEQ ID No.1。将最终拼接结果在NCBI上进行序列比对，噬菌体DE17与弧菌噬菌体vB_VpP_FE11(MT178448.1)、vB_VpaP_MGD1(MT501516.1)、OWB(MN974282.1)、vB_Vc_SrVc9(LR794124.1)、vB_VpaP_KF1(NC_048035.1)、VP93(FJ896200.1)和vB_VpaP_KF2 (NC_048036.1)的相似度分别为94.05％、92.28％、89.68％、93.63％、94.91％、92.17％和94.27％，其覆盖度分别是99％、98％、98％、95％、99％、96％和99％。噬菌体DE17与已知的核酸序列相似性<95％，可以初步鉴定为新型噬菌体。再选以上相似度高的噬菌体计算其与噬菌体DE17的ANI(Average Nucleotide Identity)，热图见图2，进一步证明噬菌体 DE17具有新颖性。
表1中简要的说明了噬菌体DE17的特性，噬菌体DE17一共注释到48个ORF，其中42％ORF(20/40)能够注释到已知功能的蛋白，这些ORF可以分为结构功能域、核酸代谢功能域、包装功能域、裂解功能域和其他功能域。
结构功能域包括：尾纤维蛋白、非收缩行尾管蛋白、主要衣壳蛋白、支架蛋白和头尾连接蛋白。
核酸代谢功能域包括：RNA聚合酶、脱氧核苷单磷酸激酶、核酸内切酶、DNA结合蛋白、 DNA聚合酶A和DNA解旋酶。其中脱氧核苷单磷酸激酶是脱氧胸腺嘧啶核苷酸(dTMP)其中一条合成途径中所需要的酶，补充了生物体对脱氧核酸的需求。
包装功能域包括：末端酶大亚基和末端酶小亚基，不具备穴蛋白或前额蛋白酶，一般认为，末端酶大亚基参与DNA切割，而末端酶小亚基参与识别和结合多联体DNA。
裂解功能域包括：肽酶和糖基水解酶。其中糖基水解酶参与纤维素和半纤维素的降解，在细胞壁降解过程中起到作用。
其他功能域包括：细菌Ig样结构域家族蛋白、肽聚糖裂解性外转糖基化酶和内部病毒粒子蛋白。噬菌体DE17不存在毒力因子和溶源基因，因此可以安全用于食品领域噬菌体治疗。
表1噬菌体DE17全基因组开放阅读框功能分类
Figure RE-GDA0003172546170000061
实施例3噬菌体DE17生物学特性检测 (一)噬菌体DE17效价测定
噬菌体效价的测定采用双层平板法测定，首先对纯化后的噬菌体扩培液进行连续10倍倍比稀释，选取适当的稀释度，分别吸取100μL噬菌体稀释液和100μL培养至对数期的副溶血弧菌O4-12菌液，同时加入冷却至于45℃左右的TSB(含0.2％技术琼脂，2mM CaCl2)中，充分混匀，倒入TSA平板上，每个稀释度做3个平行重复。待软琼脂凝固后，置于37℃恒温培养箱培养5～8h，观察并统计噬菌斑数目为30～300之间的平板，计算得到噬菌体DE17 的效价为1.27×1010pfu/mL。
(二)噬菌体DE17最佳感染复数(MOI)测定
按照常规方法增殖噬菌体DE17和其副溶血弧菌O4-12，测定噬菌体和宿主菌效价，并配置成不同比例的(100，10，1，0.1，0.01，0.001和0.0001)噬菌体-对数期副溶血弧菌菌液，其中均为宿主菌浓度为108cfu/mL，再按照以上比例加入到TSB培养液(含2mM CaCl2)中，置于37℃，200rpm/min的摇床中培养，10h后将培养液通过0.45μm过滤器过滤，最后选取适当梯度的噬菌体稀释液，用双层平板法测定噬菌体效价，并进行三次独立实验。结果显示MOI在0.1、0.01、0.001和0.0001四个比例下，没有显著性差异，而与MOI为1，10，100表现为极其显著，故噬菌体DE17最佳MOI为0.1，0.01，0.001，0.0001，噬菌体效价为8.5×109pfu/mL，由此可知，噬菌体DE17在较低滴度情况下，都能够对副溶血弧菌表现出潜在的较强的裂解效果，具体情况参考图3。
(三)噬菌体DE17的宿主谱
根据抗原不同，用11组O抗原副溶血弧菌，共135株来确定分离噬菌体DE17的宿主范围。将100μL对数期菌液与0.4％软琼脂混合，倒入TSA平板上，然后在软琼脂上滴入2μL噬菌体DE17培养液，每个宿主菌平板上，做五个梯度的噬菌体DE17稀释液(1010， 109，108，107，106，105pfu/mL)，并做上标记，放置于37℃培养箱中培养，5h后观察并记录是否出现噬菌斑，从而确认噬菌体DE17宿主谱。最终确定，DE17能够裂解44株副溶血性弧菌(44/135)，裂解率为32％，其中对O4抗原的裂解率达到64％(9/14)，对O6 抗原也具有潜在强裂解能力(3/4)。具体对O抗的裂解情况见如下参考表2。
表2噬菌体DE17宿主谱
Figure RE-GDA0003172546170000071
Figure RE-GDA0003172546170000081
(四)噬菌体DE17对温度、pH、UA稳定性检测
在1.5mL EP管中管中各加入1mL噬菌体悬浮液(1×108pfu/mL)，分别置于不同的水浴温度(4、20、37、40、50、60和70℃)孵育1h，结束后马上冷却至室温，通过双层平板法检测噬菌体悬浮液效价，并进行三次独立实验。具体结果参考图4噬菌体DE17 在4℃到50℃下温育1小时后，效价基本保持不变，在60℃条件下温育1小时，效价降低了3个lg值，70℃条件下，噬菌体DE17完全失活。因此，噬菌体DE17的热稳定性较好。
对于噬菌体pH的测定，通过配置成不同pH值(4，5，6，7，8，9，10，11，12)的 TSB液体培养基，再将1mL噬菌体悬浮液(1×108pfu/mL)加入9mL具有特定pH值的TSB 液体培养基，置于37℃水浴1h，通过双层平板法检测噬菌体效价，并进行三次独立实验。具体结果参考图5，噬菌体DE17在pH值为5到10范围内能够稳定存在，当pH＝4，过酸时，噬菌体全部失活，当pH＝11时，噬菌体DE17效价迅速下降，当pH＝12时，噬菌体完全失活。噬菌体DE17在pH为5-10之间保持稳定，能够适应一定范围的酸性和碱性环境。
在噬菌体UV 245耐受能力检测中，将噬菌体悬浮液(1×108pfu/mL)加入无菌培养皿中，并在生物安全柜内使用紫外灯，样品距离紫外灯15cm，从0min开始，每隔5min吸取100μL样品液，通过双层平板法测定噬菌效价，并进行三次独立实验。具体结果参考图6，噬菌体DE17对紫外比较敏感，每隔5min，噬菌体的效价就变化的很快。紫外照射 5min时，效价大幅度下降3个lg值，10min时总共下降5个lg值，20min后噬菌体已经杀灭。噬菌体DE17在紫外照射20min后被灭活，具有较好的安全性。
(五)噬菌体DE17一步生长曲线
将100μL副溶血弧菌过夜培养物接种至5mL TSB，置于恒温摇37℃，200rpm/min 摇床中培养至OD600＝0.2，并将细菌细胞悬浮液稀释至1×108cfu/mL，具体步骤为，先用移液枪吸取1mL细菌培养液，通过12000g离心5min，吸走上清，注意避免吸走细菌沉淀，重悬于1mL SM缓冲液中，制备成1×108cfu/mL菌悬液备用。然后向0.79mL SM 缓冲液中依次加入100μL 1×107pfu/mL噬菌体悬浮液、100μL 1×107cfu/mL菌悬液、10μL 0.2M CaCl2，最后将其充分混匀，将混合物在37℃下静置10min后，12000 g离心2min，除去上清液中游离噬菌体，并将细菌宿主沉淀物重新悬浮在1mL TSB中备用，再向9.8mL TSB中加入100μL上一步重悬液和100μL 0.2M CaCl2充分混匀后，将混合物置于恒温摇床，在37℃和200rpm/min条件下振荡培养，从0min开始，每隔10min，吸取一定量样品液通过0.45μm过滤器过滤，并采用双层平板法测定噬菌体滴度。最终测得噬菌体DE17的潜伏期为0-5min，裂解期为5-25min，裂解量为80pfu/cell。具体结果参考图7，噬菌体DE17具有较短的潜伏期，能够快速的裂解宿主菌，并产生一定量的子代噬菌体。
(六)噬菌体DE17防控实验
将100μL副溶血性弧菌O4-12的过夜培养物接种至5mL TSB，置于37℃，200 rpm/min恒温摇床中温育至对数期，并根据OD600与菌浓度数量关系，吸取一定菌液，在 1.5mL EP管中，将细菌细胞悬浮液稀释至1×108cfu/mL，再用移液枪吸取100μL上述细菌培养液至5mL TSB液体培养基(含2mM CaCl2)，实验组根据MOI 1和MOI 0.1添加噬菌体稀释悬浮液，充分混匀，吸取200μL混合液添加至96孔板，空白组不加细菌培养液和噬菌体悬浮液，对照组不需添加噬菌体悬浮液，放置Microplate Reader酶标仪 37℃，150rpm/min培养，从0h开始，每隔1h检测每个样品孔OD600吸光值。由参考图 8可知，O4-12副溶血性弧菌在6h达到稳定期，而噬菌体DE17在MOI为1的条件下，能够抑制前6h副溶血性弧菌的生长，MOI为0.1的抑制时间为5h。在24h时，处理组(MOI 1，0.1)分别比对照组的OD600数值低0.3、0.21。具有较好的对副溶血性弧菌的防控效果，能够在病原菌爆发的前5-6前，将病原菌杀死，起到提前杀灭病原菌的作用，具体效果见参考图8。
<110>华南农业大学；广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）
<120>一株副溶血性弧菌裂解性噬菌体vB_VpP_DE17及其应用
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<170> PatentIn Version 3.1
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<212>DNA
<213>副溶血性弧菌裂解性噬菌体
<400> 1
aaaaaaggca agcgcagagc acagccgcgc cgcccacgca gccgcaagca atcgcatgga 60
tagcacaagg cttccccgtc gctttcccac ggatagccac acgcacgcac gcgcacgcgc 120
tggatagtcc atgtacgcac acgccagcgc acgcacgcca gcgcacacac acgcacccct 180
acgggggtaa cgcgcgcgtg gatgggggag aaccccctcg cctgagtata acatttttct 240
tgtgcagggt tttgcgctgg attgccaatg gctttcacag gctttcccca tgttaccact 300
ggctttccat tagctttcca cttctctaca catggacact tcgtgtcaag ggcttaaccc 360
tcgtacaccg cattgtgttc agcttgcttc gtttcacttc gctgcgcttc accacgaact 420
gccattgcta agaacgtacg ctctttctct agctcagcct catacagctt ctgcttcatc 480
aggtacgctt caagaggcca cactttcttc atggcatcta ccttagccca atgctctcca 540
accgctttgt cgaagttctc tgggtcaaca caagctgact cacctgtgac agtgaagcca 600
ttctctagtg tcaacacaca gaacgttaga gtagtacccg gtacaaccac gtactgctca 660
gacttaacct tggactctac gagttcctgt gttaccttat gttcagacat ccattttccc 720
cattgcttgc ttgtacttgt cagagcggta atcccatcgg gctttctcac cgcgtgtatc 780
aacgtgtaca ccccagtcgt acagaccgac accaccatta gggttcagag ctaaagccac 840
gtcatatagc ttctggagct tctggaagtt ccctcggtct ttgttcagca ggtgcaagtc 900
cactgcatca ccatgtaagt gacgagagtt ctcagcgcct cctacggcct tgttgtgtgt 960
tgggcagcga taaccggatt caacctttag cggttctccg aagtgctccc gtagcatttg 1020
taccagcata agtagggcta ggtctagttt caaagcccca cagtgctgac acgcgaactt 1080
cacaatcttg aaattcgcag tgtctttaat tagcatagtt acctctattg agttggttta 1140
cggacaatct gcatgaatcc acgtgggatt aatacggtag tcggttggtc agcacttagc 1200
ttaacactga atgtatcagc agcgcctgtc actgtaggta gagcatctaa ctggatgatt 1260
acagggctgt tagcaccgtc tagacgcact tgactctgta cagtggtagg ttggtcattg 1320
atgtacaacg tcgctgttac aatccggttc tggacacctg taatagtaca tacgaagtgg 1380
aactcgtgcc accagccagc ctgtgcatac gcagtgactg agcctagcgc agcgttgaaa 1440
tccataccat cgtctttata gttagctgtc cagttcaaca caggagtagc ggttgcactc 1500
agtgattgct caactgtgtt gttagtcata tcgagtacgc ccttggcgtc aataacactg 1560
accatgatgt tgtcatacag ctcacgtgcc gaagctggca cgataaagcc ctcgttgttg 1620
tcaggcatta acgactgaat atcagccgct agtgcactta atttcttgac cgtagccatt 1680
atacctccgg tgtcaatgta atgcccacag gtgagcctac gaatggtttt aatgcattat 1740
acaggttatc agcagcaggg ccagttggcg agtcgtagcg gttgccagag cgagccatac 1800
ggatgctgat accagcgtat tccacagtaa ccgctgtcca tgtcacagca gggtctactg 1860
gtgttagtcg aacgaagtta cttgagctgt tcacctcgaa tgcgtacaat gcccaaccat 1920
ctaagtccgg tggcgtgatg ctaccatttg acgggttaaa gcctagcacg gttgcagtca 1980
agtcagccga tgttaactca tgtgtgtacg ttggtggcgg tgcacctgta ccgaatccat 2040
ctgaccaacc atctgaccaa ggcgaaccct cagcaggttc tgggtcaggc caaggccaac 2100
caaggataag ttcaacttga cccggacgca gcgcagggta gcgtgagtac atttcctgac 2160
gaaatgcctc acggtctgcc cacagcactg tgtcgagtcg tgagaactgc tgcacagcgt 2220
tagtgcgtac agcagctcgt aaccaaggaa tcactggtaa tcccggaatg cgatacggaa 2280
ttacgatttg catacaatct cctacattgc agctagttta gtagcgacgt taacggcagt 2340
ctctaaaagc ttaccatctc cacccactag gtacacagca ccaacacctg ctaagaagta 2400
cagtgtcttc ttaaccacag gtgcaacttc cttaaaggtc ttcaacattt ctgcggagtc 2460
ttcacgcatt tgcttcaaac tatctgcaag ttctttctgt gtctgttcca tagcgaataa 2520
ccgtcgttcg tggtctaaaa ggatttctcg tgtagatttg tcctcaaagt cctgcatgaa 2580
gacagtatct ttctctgcca ttagcagctc cttacattac ttgtttttgc gacgtaggat 2640
aaagtcagca attgtacgta gaagaccgaa ccagtcttcg cgtttaaatg agtctagtcg 2700
tttgttcata gtctacctcg tttacggtgt cgtgagttca gacgagacaa tgtgcctgta 2760
cctactccga taccagttcg tttatgaagt ggcttgccag ctaccgatag gcggcttgca 2820
gtgcctttgt tgcgtgggcg cgtgtctacg ccttggtaag ccatagggtt cagaatgaac 2880
tcggctacac gcatttgtag tgctttctca gcggctgaac gttcgtcctc aactaagtgg 2940
gcgttcagtt cttgaaccag catagcgata gcatctgcgc ggtcatcctt agccagacag 3000
cctttgtcgt acgtaatgtc ctgtagttgc aggaacgcac tgtactgcca gcgtcggtca 3060
cgtggatacg acatacaaca ctcgatgtcc atgtctaatg cagacgtatg gacaactagg 3120
cggtgacgac gagtaaccgg agaaatagtg tcgatgatac ggcgctcttt ctgcgtactg 3180
ttacgtaagt cgcgcacacc gatgtgtgca atgtcacgtt gcgctagggc gttctggaac 3240
agcattgtaa ctgtaccatg acccatgttg ctctcgataa cgatgtcctt aacttcgaag 3300
tcctcagcta agtcaatcaa gcggttcatg ttttcctcag atacaccacc ttggaaacca 3360
cctgtgccga ataagtgcac gtacgcacta gcagcaccac cgattgcaaa ggagatttca 3420
tcaccaccac aaccagcagg gtcgattacc atgattttgt gcttgtacgg gataatctca 3480
gtcccaatgc tcaaaggagt gtacaagcgt gcaccaagga caccatcatg cacctctggg 3540
tagagggcgc gtttatccgc tgtccaactg aacatatccg gtgcagagtt cgaatcacca 3600
gcatggataa tcatatcaga cagtttaata cgcgtacgca tcgcatctga taaggttgtg 3660
tccagcatgt actgtaatgc gaaaccctct gggccgaagt ccagttcttt ctctatcaac 3720
gcttcctcgt cgtaacgctg agggtcagta gtttctccaa gcgtaccatc aacgccaaag 3780
ccagtgcgtc gtgcgccctg ctcaatcagc atcttgatgt acggggctaa tgtgtcgccg 3840
tacttttcct cttgttctac agacgggata cgtccacacc acactcgtac ttcaaaacca 3900
cgcgagggca gtgtcttgta gatactatct ttagtctgag gtgtacccag ataaagtgta 3960
tcaccgtgcg tgttaattgc cgcaaagtct ttcgagattg tcagcaagtg ctcacgctgt 4020
gtttgagtca gaccgttctt ggttgtctca atatcatcgg ggattagcaa gtcagcacgc 4080
ttaccctgta gctgagcggt aatacccaca catgctacgg atggtgcttt ctctagcggt 4140
ttcaagtcac agtggacatc ataaccctcg tacgaggtac ggtcgccacg agcagggtca 4200
gcacgtagcc aacacaacaa gtcccaagtc tcaatcaaac ggataacaag ggttgcaacc 4260
tcagatgcct gtttctcacc accggataca attagtacac gtgtgctctg gtcttggata 4320
agacgccaca cgctatataa cgcagcaagc gtactctttg cctcaccacg ctgcgcacac 4380
accatcttct tacgagggcc gtgctgcatg tactgggcaa tgtctgcttg catgtctgtt 4440
aagtcgaacc caaggaatcg cataccaacg tacgcgaagt cctcgaagtt tcggaatgtg 4500
attgcgaaca tcaacgccag ctcctgacgt gtgtccactg ggatgctacg tggattctca 4560
gcaagctttt tacagcgttg tgctaacaac tttaatcgtg taatcacctg tacagataaa 4620
cccacgataa cctccttagt taataatacc tgctaactcg tcgtcaccat cttggagacg 4680
gcctagcagt tcttgtttac gtgcctcacg gcgttgcgcg agttcatcct cgaactcatc 4740
ggctagttca cccatagcct catcatctgc atcagcagaa atgttgttat ctttgaggaa 4800
cttagcaatc actgacttat cagcggctgg aagtggaatt tcttcctcac gagactgctt 4860
caactcatca atcaaagcat cagtgaatgc agcgtgcaac gccgctagac gcgaacgact 4920
agcagctttt gccatgttta ctccttaaat acgctctaac cggatgtcag tcagaccctc 4980
gtatttattg tctgttgtgt tgcggcgtag ggctacccgt tgctgacctt gcgcaatgaa 5040
agtcaactca taggtgtcac cctcgaacat tgggatgtcg attacatcat tacccggctc 5100
gaacgtcacc aactgcaaac cagcggcttg cgtggaagta cgcgccacct tgattgtcat 5160
cttgtaacga gcgccttgca ctaagttcaa gaactggaat tcaccgtttc ctgagccttg 5220
caacttacgg tcattacgcc actccaatcg gtacggtgtg atgtactgtg gtgggttctt 5280
acctgcggct aggtatgacg ttggcaacca cgttccctcg gcatctttcg gcatatcatc 5340
atcatacggc ttaggcagct cgtacggcgg tggtagctcg ttatagaaac cggagaagaa 5400
gttctcccac ttccagtctc gccatacgtc agcagggtat gtttcaccta actggcgcac 5460
tggttcatct gggaacggga tgtagtggaa gtagtcaacg tcaatcgagt catagatgta 5520
gtcagcacta tgaccagccc aacggttgcc cggtgcgcgt ggataccata gggcaatcca 5580
tagacgaccc ggaatgtcag ggatgtgcgt ggtgttagtc catttcaaca caccgtcaac 5640
atagaagtcc acacgtttcg caggtagccc tgctggtggg ttctgttctc cagtatgcca 5700
gtcgaaacga atctcgtgcc acttaccgtc actcaacgcc tcatccaccc acttctcaaa 5760
gaagtcggtg tattccgaga agtagttcgg gtcactctct ggtaaatccc aagtacgcag 5820
ctcaccctcc caagtgttca gacgtgcttt atcagccgag acatcctcca tatccacagc 5880
atctttcaat gcggttgggt actcaatgtc aatctcgtgg ttacgcacaa tgtagtaacc 5940
atcgtcctca ttaccttggg catgtaaacc ctcgtccaag aagctctgcc aacgtgggtc 6000
gttctcgtag atttcctcgt agtggaatgt ccacaaggct gtcgctgcac ctttccggta 6060
cggagagcgt aacttacagc ggaaactacc cggccctaag tattcacgtg taaccagtgc 6120
tgagcctacc tcagtcttac gaccatcagg ggcagggtgt ccgatacggt caacaccgat 6180
aacatcaccg tcgtagtacg taccatgacc acgtaaacgc agaacacctt ttacagcatt 6240
cgctacgtct gagtagtctg ggtacacctc tacgttctca cgcacaacac cgccgttcag 6300
tagggcagtt tggttgccca caacgccagt accaccccat tgcttatgtg caacgagcca 6360
gttctcacgc atttcaatca agtcagagaa gtcggaatac aactcagtct tgcggctaat 6420
gtcacccttg atgcgcactg gtagcgtgtt actcacacca tagttggtct tgtaccggat 6480
aaagtactga ccatcaggca catcaggtag cgtgtaaata catcggcggt tctcctgctc 6540
atgcggccag ttcactagag agcttgatac atcctgccac gtactgctgc cctcagcttg 6600
aatctcaatg ttcaagtacg gctgctcgta atagcgtggg actaagttct cgttgaacgt 6660
agcgtgtgtg tcgatgtaga aacgacgtat gtcaatgtta ccaatccacg acttgtcgta 6720
aacatcagta atagggacgc cagtcgtgcc cacacactca gggccgcagt tgaataatac 6780
actgtcaaac tgtttacccc acagcttcaa tgagcacgaa gctgactgtt cattcggcgt 6840
acctttatca actgtaatcg tgcagttgtg gttcgcgtcc tgcgttagtt gcacttgatg 6900
ccaaccactc agacttgcta attgcacacg tgcgtacacg taagtactgt tgaatcgacg 6960
gtagtacatc aactcaccag agcgcgatac atgcgcacca aaactaatct gagcactctt 7020
ttggatacca gtgccttgtt ctgtccaagt tacattagag ccgccataca gcaaccacat 7080
gcggtcttga ccatcaacga agtcacccaa tcggaattgc agcgaccaaa tgttcgggta 7140
gattgcagta gggattgtcc ccacgaatgc acctacaccc cagttatagc cctcttgacc 7200
gggacgagta actgtgtaaa gatactgagc atttgcttga cgtagcttac acatacggta 7260
aatgttgtcg ataccatacg ggttagctgt accctcgtaa ccgaagttaa catagttctc 7320
aagcgtgtca gcaccattac tgtaaagctt gtattgtgag cctgtgaaga atgggagtgg 7380
gtctggtagt tctttcagac cgtcaccaaa caaggctacg tcgccacgat aaggcgcacc 7440
tgtgaagtaa cgcgcgttat caagacttac tgtgcctaca gagtcaggat tgttactata 7500
ggccaagtac cagcggttgt tgttaccaat ccagcggtaa agcacttcgc ggtactgata 7560
cactgggttg tcttcttcac cgacgttcac cgcaatgtac tgtttgccat tctcgtacca 7620
aacctgattc tgaccgtggt aatgcttagg gggcaaaccc tctagtacat cagccataga 7680
tacctctact cttggtcttt atcgttagat gagttaacga atgcaccgtt gtccacatca 7740
ccaatcatca cccattcctc gtactgaacc ggaacggtgt caggggattg tgtggagatt 7800
gtgattgggc ctcggcggtt cgtaccctta atgttctcaa ttgcggttac acggtctgca 7860
acctctttca attggaggaa cgttacagcg tctcggtttt ccgtaccttg cgccatgttg 7920
cgcactcggt agcggtgcat atccaagtca ccatagaaat cgctaatgcc agaaccctca 7980
gtcatttctt gacttaggta cagcaactgc ttgtgcatat cgtctaggtt ggctcgtgtg 8040
aactcagccc cctcagagaa gatatggcgc aatgcagagc ggttagtacg ccgtgtaagc 8100
gtaacctcta ccccattagc taacggggcg ttaataaagt taatctgtgt tcgaccctgc 8160
caagtgtaat ctgtaccctc gattgcaggt gtctcatcaa gcgtaacgaa gatgtcacgc 8220
gtgtcaaaga attcaatgct gaggacgatg ttggtcatag taccgtcgct cgtagcacgt 8280
tgtacactta atgccataaa gcctctttaa agggggatta ctcccccatg ttgttgataa 8340
ctgcacgtag tggcatgaac tcttgcgcga acggaagaat cttgctcata cgttgtgtgt 8400
ccatacgacc atcgctgacc atatcctgca ccgccccgat gctctgcgtc acgtaaccta 8460
gtgaggtcag tgagtggcgc ggagattcac caaggaacag cggcgacagt aaagtgatac 8520
caccaatagc tgacatgttc atcgcagtgt tagtgattaa gtcacgtggg ctttgtgcct 8580
ctttaccatc caacgccagc ttagcatgag tagccataag catgagaggg aactggtaca 8640
tcatcagcat cgcaagacct gcgtaatcac cgttctgcgt gtatcggcgc agtagtttgt 8700
tagtagctgc aatcgcaaag gattggtagc caatcacaat cttacctacc ggactgaact 8760
gtgcaaagtg cgatgtctca ccagtacgga tgttctgcat cactgagtcc atagcacgtg 8820
ttgatacaat ctccaactca cgttggattt cgtacgggaa cacgccagtt ggattctcag 8880
cataagcagc acgtagcttc tgtgtcaact caggtgtcag accatgctca attagagcgc 8940
ggcttgtacc gcctttcaac acacgctcaa cctcatcaca aatgatacca gcgttcaagt 9000
tcgccattaa gcggtgaacc atgctgaaac cgtttgctag tcgagctgct tgtgacaggt 9060
tctgagttgt ctggaatgca gcactcgtgt ttgtcaggtc aaggttatcg tcagcgtatg 9120
tgtggatgtg acggtatcgt gcttcgttct ggtacgcacc attcaagatg ctgtacagac 9180
gttcacgaga gccagtatcc gcaacaactg cgtcagcctt acgtaacaaa ccagtacttg 9240
ccaaaccacg tagtacacga gctaaaccga actctttcat tgcgatacta atgtcagtca 9300
tctggtataa accggagttc tttagcatca cagtgttagc taggttgctt gcaccacgca 9360
taagctcagg gatgtcagtg ccgactgggt agcctaacag atggtcgatt gtgtcgtcca 9420
ccgccttacc ccattcctca gcaccctctg ccatacctag tcgagtctca gtgattgaac 9480
ggtcaagtgc acgtaaatca gtgataccac ggttagcaaa cgccacgcga cctgacatac 9540
ggtttgtgta accttgcatc aagccaagtg tgttcgtctc taggatgtca gacaaacgta 9600
gtacatcacc gtcaatgtca aactctttgt tcaagttcaa gtcaagacgg ttacgcaagt 9660
tcttcactgg tgcagtgcta cctgtctttg gtacgttcac acgtaggaac tcattgattt 9720
tgtcgtcttc aacgccagca tcacgcagag ccatgaacaa ctcatcgtta tccatacctt 9780
gcatcaagtt cttccattgt gggccaccgt taccagagac accgttcaca atgcggttgt 9840
accaagagtc agcgacacgc gcagccagct taccatccat gttagtgtaa gtatcttgca 9900
gcgcagagcg tagcagtttc ttaactttag gtggttcaat gttacgcact ttctcgtagc 9960
tgtattgacg agggatgtag tacttcgagc gtgggaactc gtctgcactg atagtaccgg 10020
atttcacaag gtgttcatgc caagactcag cccaaccaga atcggtgtaa gctttcacca 10080
aacgctcaat gtcggctggt ggtgttggga tttcacgccc tgctttctca gcgctgtatg 10140
cttcatgtag gtacttagtc agcttatctt cttccacact acgggctgta cgagccttag 10200
cgcggttaaa gaacatatca aaggtgttaa cgccatgctt ctcacgcata gcagccacaa 10260
tcgcatcctc aacagcagca gcacgtaggt tctgctcaag agtcaagtta cgcttatggt 10320
ctaccacact ggtagcccgt tcacccatac gggtagcatc agatacaagc aggttcgcta 10380
ggtcttcact accacgagcg atgttatccc agagtgcgaa tgactgcttc aatgatttac 10440
ggacaccttg ctcaagacgt ttagcacgct caaccgcagt agcaccacgg tttgcgtcat 10500
ctgcaaggtc agccatgcta tcagagaaga aagcattcac tttatctagg ttatcagctt 10560
ggtagttagc aaccttaaca aaggcatcaa ccgcttcatc aagagctgag tctgtacctt 10620
tgaagcctaa cattttcaga atcttctcag ccacagcttg caaagcgttc tgacctgcac 10680
ggacacccgg taacttcgct aggtctttca ccatttccgg tttagacgcc aactctgcta 10740
ggaactcacg gttgttagtc atagcgtagc tgtacttacg agcgaactca cggttatttt 10800
tcagtgaggc atgtaaagca tcaaggtcac ggatagcatc tgcaatctca ggggcaacgt 10860
tacctttact tgcttggaat aaagtcttcg atgtcgcagc atgaataagc tcatgcacag 10920
caacgtctgc atctacgtgg ttcaacatat cgcccacggt cttaaacact gtgccgtctt 10980
tcgctgtaga gcgtagtttc agaaattcag tgttagcacc aaaggtgtaa gatgagcgac 11040
gaccagtagc attcattaaa cgcacttcca taccagagat agtatctggt agtgcatcca 11100
taagagcacg agctgagtct gacaaactat ccatagtacg gaggtgtgtc actaagtctt 11160
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tgacagtaca cacgcactgg acaacgctca tatgggtagt cagtcatgca tgagcctggg 38580
ccgttctcgt acacaaagtg ccagatacgg tcgtactcag gctcagccgg aatgattgtt 38640
gtgtggattg gagagtttag tgctttcatt gcttgcagtg catcgcggta gtcagaaccg 38700
tcagcgtaca agcgtgggat tggcaggtcg ttaatgataa tacggatttg cacacgaccc 38760
tcagcagtca ctacagcggt aggtttagca gtgatttgtt tcacttcgct ttcaccgtcc 38820
cagattagac cgacaggtgt cacaccttgg ttctggaaga agcagttcca agcacgcagg 38880
aagcgaacaa ccaagtcgtc aaggttttgc atgtgcggtg tacctaagtg taggtcgtaa 38940
tctctgtacc aacactcgtg catcacttgg gctaggcgga tacctttaca gatactatct 39000
gcacctaaga agataaggtt tgcacagtat tcttcggcaa aggctagtaa cttggggtgt 39060
gtgaacccta aaaacttagc ggcttctaat acgtaagtac tcaattggtg cacttgcatt 39120
tcgtacgaca tttcagtatc gaagtccaca cttttaatta cattaccttt agcttgaatt 39180
aacttattca tatctgcgtg acgggcattc atgaatagga cgtcaggggc ggcagtacca 39240
ttaacattcg gttgaacact ctcgtaacca ccgtcagcca tgttcgagta gttagttgca 39300
gcatgtagtc gggcaatgcg ttgacatgct ttgaataccc aaccgcggtg agtgccctcg 39360
tacatttcga acttctcacg tagtagtgtg gtacgtggag agatagcttt gccgccacgg 39420
ttccagccaa agttcatcca accagcgaat gagtcaaaca aaccgcgttg gtggtgtgct 39480
gttagaactt gcgtgctgta ccagtcagga catagaccag tcactagagc ttcaagctta 39540
cggtcatcac agccacgttg gttcgtaatg aaatgacgca gtgcgatagt ctctttaccg 39600
attgctgagg tcacatcaat atcttcacct tgaggtgagt tcttaccgta gcgtggtaag 39660
tgctcgtaca ccttgccgct tgcaccgatg aagtccacat tctcagaggc aatacggctg 39720
tagaaagctg gcattacagt gaatcgctca gctatgtgct cagcctgctc agctagtaac 39780
ttgtaaccat cagggtcatt aacgccgaac agttggattg cttcgaatgg ttggaaaaac 39840
ttagacattt ggaactcctt acatgagtag tatttgatta gtcaagcatg tcagattgcc 39900
atgcatttgc tatacgttgg gttgcctcga acagtgcgtt gaatgcctgc tcttgaccgt 39960
tggttagctc agtcagtaaa tcgtattgac cgtgctcttt gagtagtttg agagtacgct 40020
tagcgtacgt ctcagagtag aaacgcaccg tgtctagtac ctgagtacca tcagtcaagg 40080
tgcggtgaca cagtttgcgc tcaagtggta acagcttgcg cagtttagga tgtaccagtt 40140
gcagttcttg gtacgataac cggaaagact tttgttcact cagcataaac cagatgagtg 40200
cggttgaatc acgcagggtt aacttctcgc cttgctcaag attctttcgg atgatgcggt 40260
ggatgtgccc actgttgaag ttacgcgcta ccatttgata gattcgcatc taattctcct 40320
ttgaacagaa caccacggat attgaaacgc ttgcagtaag tgacaagaga caagcccact 40380
acacgagcac gctctgaata aatctcacgt agcttctctt gacgtttacg ttggtgtccg 40440
tggtacttgt ggaaagcatc ttgcagtttc aagtgctcat tctttaggta ctcagcgtgc 40500
tcctgagcat tcatataacc cttggttaaa gttgccatgt taaaacccca acgcccactt 40560
gtaaaacatc aactcaagtg ctttgagtcc ccaaccgata gccactacca ctgttaccat 40620
gccgacgagc accgccgtaa acatgatgcg ttcaatgtgg cggttaaacc actgctttaa 40680
tttactcata gtacctccta gtacgggata tgattgtgtg cagcgtacac acgattcacg 40740
tgttgcggtg tgatgcccag catatcagca atgacttgac ttgacacacc tttatgcttc 40800
atcttgataa gcttacgctt actctcagta ttgagctttg aaccggagcg ttttgcattg 40860
cctttgatgc cattgtaacg gatagcgtga ctaatctcgt tgtacgtcac accaagataa 40920
tcacacagtt ctttcttaga gagacgcccg taattgttac ggacgtactc aagttgttta 40980
gagttaagtg ccatgattac ttcgcctttg gtagaatatc tttaccgtca cgagcacgct 41040
tgagcatggt ttcaacttcg ccgtatgaca agccagcctc agcccattgt cccaacaaac 41100
gcgccatttg acctttcagc ttgccttgtt tctggtctag agtcagttcc tcagactttt 41160
tcttctctga gttttcaatc cagtactgct caaggattgg gtaaaactct gggtaagtca 41220
tttcacggtt tacacctagt ttacccatga tttcatcggc tttcttagtg tcacgcttgt 41280
agtgaccttt gatgcccttg ctaggctcag gattaaccca cttagtcggg catagaacac 41340
gtagagtggc gtcaagcatc gctgcgtcag tacgcgacca gttatccatc cacgcaacgt 41400
tagatttcac tagcgcatgg tacagtgcag agattgtcac attacggcgc atagtctcag 41460
ctttgataag ttgagtacgg atttgtttta cagacgttag ttttggcgct ttgtttgttg 41520
ttacagttga catagtttag ccctcatttg gcagttgtag attagtatgc agattgcatt 41580
gattgaccac cgtcgaacag tgatacatta gtgagtgaca gcttatagtt gcgtacattg 41640
ttgatataac taacgtgacg cgctagacca taagcctcat tgcgagttct cgcacacact 41700
tgaaagtgtt tcttttggat acgacgcaga ctgtcacggt agaccacttc aaagtgatat 41760
acacgacgcg gtctaatgaa agtcaagtag aaactctttg acagttgctt taagcgtttg 41820
aacatagttc acctcaataa aataagcggt gaaacaagct accctatcag cgcattgcac 41880
acaaataccc atagactttg accactggtt aaaagattgc gcttaatagg actgttacac 41940
cgcttcgtgc taggttgcac aagattacat tggataggac tcagcgaaca tatcgtgtca 42000
gcaataagtt aatgaataca ctaagcccta tcgaatgtcc tatgctttcg ggataggatg 42060
ccgctggctc agttgttgcc agtacatcgt aagcggaaaa ctgtatacgg atttcaagcc 42120
tgactacttt acacttacaa ttcaccggac gcagcgagta tcaatcgcgt tgcccgtcgt 42180
ctaactctta cttttaactc tactcgcttc gcttctcgct gactccttac agacacaact 42240
aggttgtacc ttgcagatag tggcaataac tgctctcgct tgagtgttag accgtttacc 42300
agattgttaa agaacgatgc cctactgggc tgtgactcgc tgacttgtgc cgttgtgctc 42360
tgcaatacct cgcaaggttt cagagtatcc cgcaggattg gcgattgcct tgagtcgtta 42420
gctctcgcta acatgctttc caatgtatca ctaagttgtt caacctgtca agcgttttgt 42480
gattcagtgt tgagtcagtc ggtcacgctg taagcggtaa ttccaacact ttacaactaa 42540
gccaacagac gccgctctga attgttgaac cctagcatca agggcactta gttgtgactc 42600
actgagtacg ctatttaagc tatactacct agtgattcat tgtcaagcat atttttaaag 42660
agcagtgagt cgcatgtttc tattgctggt tgctcaccca accctaccag ccctacagta 42720
cattaacgct tatagcgccg tgcctacgcc gtaggagcga attttatact cttgtctgag 42780
ttgtctgagt ggctagtgcc tctcgacggg attaactatc ccatagctag acctaggaat 42840
caagcggtac gactagaaat gtgagctgta tcacaataaa agcggtatat acagtggtta 42900
tacagtggtc tagcaatgag ttatccacaa ccaatagcct agtctcacga tgttctatcc 42960
ggtataatgg tttagtcccc tgacaggagg cgaccgacac ggagcgaagc gaagtgtccc 43020
ctgtcgccgt atgtccactg actaacacta gcaagtattc cctattgtag cgacggagcg 43080
aagcgaagcg agagcgacaa agcgtaaatc aataggatag caactggata gcagcacgat 43140
agcaagtgct aacaagtgga tagcagacgg atagcgtagc gcatcgcaga tgccatatgt 43200
taacaagtgg atagccaata gatagccaca cgctaacagg tggagagcat gagcatacag 43260
cacgacgaaa aaaggcaagc gcagagcaca gccgcgccgc ccacgcagcc gcaagcaatc 43320
gcatggatag cacaaggctt ccccgtcgct ttcccacgga tagccacacg cacgcacgcg 43380
cacgcgctgg atag 43394

Claims (10)

1.一株副溶血性弧菌裂解性噬菌体，其特征在于，其于2020年9月14日在广东省微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏编号为GDMCC No：61188-B1。
2.含有如权利要求1所述噬菌体作为活性成分的药物组合物。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，进一步还包含药物上可接受的助剂，优选地，在药物组合物中的噬菌体效价≥105pfu/mL。
4.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物用于人或动物，例如鱼、虾、蟹、贝水产动物，以防治副溶血性弧菌感染的疾病。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述疾病为南美白对虾急性肝胰腺坏死病。
6.如权利要求1所述的噬菌体在制备预防或治疗副溶血性弧菌引起的疾病的药物中的用途。
7.一种用于防治副溶血性弧菌感染的杀菌组合物，其特征在于，其含有权利要求1所述的噬菌体作为活性成分。
8.如权利要求7所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物是水体消毒剂。
9.如权利要求8所述的杀菌组合物，其特征在于,所述水体消毒剂还包含其他相配合的杀菌活性成为或助剂，所述噬菌体的效价≥105pfu/mL。
10.一种包含如权利要求1所述的噬菌体的水产动物饲料添加剂，优选地其用于对虾饲料的添加剂。
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