CN113337469B - 星形胶质细胞亚群及其分离纯化方法和应用 - Google Patents

星形胶质细胞亚群及其分离纯化方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种星形胶质细胞亚群及其分离纯化方法和应用，涉及生物医学技术领域。本发明提供的星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，将神经胶质细胞依次进行贴壁培养和震荡培养，去除悬浮的少突胶质细胞和小胶质细胞，将贴壁生长的细胞进行消化，收集第0～2min内消化得到的悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap‑星形胶质细胞亚群；收集第2～4min内消化得到的悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群。本发明的分离纯化方法能够快速、高效、经济的实现对星形胶质细胞的分离纯化和两种细胞亚群分选，并且获得的星形胶质细胞亚群的细胞活性高，可更精准的应用于不同星形胶质细胞异常类疾病药物筛选。

Description

星形胶质细胞亚群及其分离纯化方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，尤其是涉及一种星形胶质细胞亚群及其分离纯化方法和应用。
背景技术
星形胶质细胞是哺乳动物脑内分布最广的一类细胞，在中枢神经系统发挥重要作用，近年研究表明，在不同的发育阶段和不同的脑区中，传统星形细胞标志物Gfap和一种较新的公认标志物Aldh1l1表达模式有差异，提示不同星形胶质细胞亚群的功能差异性。目前，获取星形胶质细胞的方法存在各种弊端，通过常规的震荡法获取的细胞纯度较低，并且不能区分不同亚群；流式细胞分选的方法成分十分高昂。因此，开发一种高效、便捷、低成本的分离方法以获取星形胶质细胞，并进行亚群分选，对神经系统相关研究，尤其是星形胶质细胞相关研究具有重要意义。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，该方法能够快速、高效、经济的实现对星形胶质细胞的分离纯化和亚群分选，以解决上述问题中的至少一种。
本发明的第二目的在于提供一种Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群，采用上述分离纯化方法得到。
本发明的第三目的在于提供一种Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群，采用上述分离纯化方法得到。
本发明的第四目的在于提供一种上述Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群和Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群在星形胶质细胞异常类疾病药物筛选中的应用。
第一方面，本发明提供了一种星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，包括以下步骤：将神经胶质细胞依次进行贴壁培养和震荡培养，将震荡培养后的贴壁细胞进行消化，收集第0～2min内消化得到的悬浮细胞，获得Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群；收集第2～4min内消化得到的悬浮细胞，获得Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群。
作为进一步技术方案，所述神经胶质细胞来源于小鼠大脑皮层；
优选地，所述小鼠的品系包括C57BL/6J、C57BL/6N、DBA/2或BALB/c。
作为进一步技术方案，所述神经胶质细胞由出生后1-3天小鼠大脑皮层经消化后制备得到；
优选地，采用0.25％胰酶和0.5mg/ml DNase消化小鼠大脑皮层。
作为进一步技术方案，所述贴壁培养的培养基中含有胎牛血清和/或青链霉素；
优选地，所述贴壁培养的培养基为高糖型DMEM；
优选地，所述高糖型DMEM为GIBCO，货号：11995073；
优选地，所述培养基中胎牛血清的体积浓度为8％～12％，优选为10％。
作为进一步技术方案，将神经胶质细胞在多聚赖氨酸包被的培养容器中进行贴壁培养；
所述贴壁培养的时间为8～10天。
作为进一步技术方案，所述震荡培养的温度为36～38℃，优选为37℃；
所述震荡培养的转速为200～300rpm，优选为260rpm；
所述震荡培养的时间为3～5h，优选为4h。
作为进一步技术方案，所述消化为采用胰酶消化；
优选地，所述胰酶的浓度为0.25wt％。
第二方面，本发明提供了一种Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群。
第三方面，本发明提供了一种Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群。
第四方面，本发明提供了一种Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群或者Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群在星形胶质细胞异常类疾病药物筛选中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，将神经胶质细胞进行贴壁培养，获得贴壁生长的神经胶质细胞，然后进行震荡培养，去除悬浮的少突胶质细胞和小胶质细胞，将贴壁生长的细胞进行消化，收集第0～2min内消化得到的悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群；收集第2～4min内消化得到的悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群。本发明的分离纯化方法能够快速、高效、经济的实现对星形胶质细胞亚群的分离纯化和亚群分选，获得的Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群和Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群的细胞活性高、且具有不同增殖能力，能够用于星形胶质细胞异常类疾病药物的筛选，为星形胶质细胞的相关生理、病理研究提供了一种新的途径。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中震荡培养后杂细胞群鉴定结果；
图2为实施例1中胰酶时间梯度消化后星形胶质细胞亚群检测结果；
图3为实施例1中两种星形胶质细胞亚群增殖能力检测结果。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明中，Aldh1l1+是指免疫组化结果乙醛脱氢酶1蛋白家族L1(Aldh1l1)阳性；Aldh1l1-是指免疫组化结果乙醛脱氢酶1蛋白家族L1(Aldh1l1)阴性；Gfap是传统星形胶质细胞活化的标志物，Gfap+是指免疫组化结果胶质纤维酸性蛋白(Gfap)阳性；Gfap-是指免疫组化结果胶质纤维酸性蛋白(Gfap)阴性。
第一方面，本发明提供了一种星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，包括以下步骤：将神经胶质细胞进行贴壁培养，获得贴壁生长的神经胶质细胞，然后进行震荡培养，去除悬浮的少突胶质细胞和小胶质细胞，将贴壁生长的细胞进行消化，收集第0～2min内消化得到的悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群；收集第2～4min内消化得到的悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群。
本发明的分离纯化方法能够快速、高效、经济的实现对星形胶质细胞亚群的分离纯化和亚群分选，获得的Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群和Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群的细胞活性高、增殖能力强，能够用于星形胶质细胞异常类疾病药物的筛选，为星形胶质细胞的相关生理、病理研究提供了一种新的途径。
作为进一步技术方案，所述神经胶质细胞来源于出生后1-3天小鼠大脑皮层；
优选地，所述小鼠的品系包括但不限于C57BL/6J、C57BL/6N、DBA/2或BALB/c，或者本领域技术人员所熟知的其他品系的小鼠。
作为进一步技术方案，所述神经胶质细胞由小鼠大脑皮层经消化后制备得到。
优选地，采用0.25％胰酶和0.5mg/ml DNase消化小鼠大脑皮层。
本发明对于消化的方法不做具体限制，例如可以采用胰酶进行消化。一种可选的消化方法为：将小鼠大脑皮层采用0.25wt％胰酶在37℃条件下消化30min，然后采用0.5mg/mL的DNase在室温条件下吹打2min，制备得到神经胶质细胞。
作为进一步技术方案，所述贴壁培养的培养基中含有胎牛血清和/或青链霉素。培养基中含有胎牛血清，有助于神经胶质细胞的培养；培养基中含有青链霉素有助于抑制其他菌的生长，避免细菌污染。
优选地，所述贴壁培养的培养基为高糖型DMEM。采用该培养基体系不适于神经元培养，故几乎不含有存活神经元。
优选地，所述高糖型DMEM为GIBCO，货号：11995073；
优选地，所述培养基中胎牛血清的体积浓度为8％～12％，例如可以为，但不限于8％、9％、10％、11％或12％，优选为10％。
作为进一步技术方案，将神经胶质细胞在多聚赖氨酸包被的培养容器中进行贴壁培养。神经胶质细胞表面带负电荷，多聚赖氨酸带正电荷，将神经胶质细胞在多聚赖氨酸包被的培养容器中培养，有助于促进神经胶质细胞的贴壁生长。本发明中对于培养容器不作具体限制，例如可以为培养皿、培养板等。
所述贴壁培养的时间为8～10天，例如可以为，但不限于8天、9天、或8～10天。通过对神经胶质细胞进行贴壁培养后，获得贴壁生长的神经胶质细胞。
本发明对于震荡培养的设备不做具体限制，例如可以采用摇床对神经胶质细胞进行震荡培养。
作为进一步技术方案，所述震荡培养的温度为36～38℃，例如可以为，但不限于36℃、36.4℃、36.8℃、37.2℃、37.6℃或38℃，优选为37℃。
所述震荡培养的转速为200～300rpm，例如可以为，但不限于200rpm、220rpm、240rpm、260rpm、280rpm或300rpm，优选为260rpm。
所述震荡培养的时间为3～5h，例如可以为，但不限于3h、3.4h、3.8h、4.2h、4.6h或5h，优选为4h。
在本发明中，通过对震荡培养条件的进一步优化和调整，充分去除神经胶质细胞中悬浮的少突胶质细胞和小胶质细胞，避免上述两种细胞的干扰。
作为进一步技术方案，所述消化为采用胰酶消化。
本发明中，采用胰酶对经过震荡培养后的贴壁细胞进行消化，使得Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群和Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群从贴壁细胞中分离出来，从而分别获得高纯度的上述两种细胞。
优选地，所述胰酶的浓度为0.25wt％。
第二方面，本发明提供了一种Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群，该细胞采用本发明提供的分离纯化方法得到，细胞活性高，增殖能力强。
第三方面，本发明提供了一种Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群，该细胞采用本发明提供的分离纯化方法得到，细胞活性高。
第四方面，本发明提供了一种Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群或者Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群在星形胶质细胞异常类疾病药物筛选中的应用。
在药物筛选过程中，须经过细胞实验观察药物的作用，依据不同药物对细胞功能影响的机制进行筛选。本发明提供的Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群和Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群的细胞活性高、具有不同增殖能特性，能够用于星形胶质细胞异常类疾病药物的筛选，为星形胶质细胞的相关生理、病理研究提供了一种新的途径。
一种用于筛选星形胶质细胞异常类疾病药物的方法例如可以为：使用药物A对星形胶质细胞进行干预，观察小鼠星形胶质细胞功能的变化，相关细胞功能指标包括细胞增殖能力检测(包括但不限于CCK-8实验)、细胞迁移能力检测(包括但不限于细胞划痕实验)、细胞凋亡水平检测(包括但不限于Tunel染色实验)。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
一种星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，步骤如下：
(1)分离纯化星形胶质细胞
分离1-4天新生小鼠大脑皮质，用0.25％胰酶在37℃条件下消化30min，300g离心5min，用含有0.5mg/mlDNase的DMEM培养液重悬，再次离心；用含10％FBS和青链霉素的DMEM重悬后接种于40μg/ml多聚赖氨酸包被的培养板中。每隔2-3天换液，待细胞生长至融合(约8-10天)，将培养板置于摇床，在37℃条件下以260rpm振荡4小时，去除小胶质细胞和少突胶质细胞。分别对震荡培养前后的贴壁细胞群进行流式分析和荧光染色检测，用CNPase和Pdgfr分别标记不同阶段的少突胶质细胞，用Tmem119标记小胶质细胞。结果如图1中的A所示，震荡摇晃后，少突胶质细胞和小胶质细胞均显著降低，剩余杂细胞数量约为10％以内。对摇晃下来的细胞染色，可见其中几乎均为少突胶质细胞和小胶质细胞(图1中的B)。此外，对摇晃前的贴壁细胞进行神经元标志物NeuN标记(图1中的C)，可见该体系中几乎不含有神经元。
(2)获得纯化的星形胶质细胞亚群
将上述振荡后的贴壁细胞消化2min，收集悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap-细胞亚群；继续消化2min，收集悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap+细胞亚群1；继续消化2min，收集悬浮细胞，获得高纯度的Aldh1l1+Gfap+细胞亚群2。弃去剩余贴壁细胞。将获得的细胞亚群通过免疫荧光染色鉴定。即对细胞用4％多聚甲醛固定后，用0.3％Triton-X100破膜10min，10％正常山羊血清室温封闭30min。加入mouse anti-Gfap antibody和rabbit anti-Aldh1l1 antibody在4℃孵育过夜，二抗室温孵育1h后，用DAPI标记细胞核，在荧光显微镜下观察。染色结果如图2中的A所示，图2中的B为未孵育一抗，直接孵育二抗的阴性对照。统计结果如图2中的C所示，消化2 min后收集到的主要细胞群为Aldh1l1+Gfap-细胞，占比90％以上，而继续消化2 min(2-4min组)后和再次继续消化2 min(4-6min组)后，分别收集到的主要细胞群均为Aldh1l1+Gfap+细胞。此外，可见在消化4-6min组收集到的细胞卷缩，形态异常，提示该消化时间严重影响细胞形态和活性。
(3)细胞亚群的增殖能力鉴定
将待检测细胞以5×104个/孔的密度种植于96板中，培养24小时后以CCK-8工作液在37℃条件下孵育4小时，以酶标仪在450nm处检测。同时，对两种细胞亚群进行EdU染色，将EdU工作液(10μM)加入2-4min组细胞中，37℃条件下孵育4小时，用4％多聚甲醛固定，0.3％Triton-X100破膜，并采用Click-iT EdU Imaging Kits染色。随后采用Gfap和Aldh1l1抗体标记细胞，具体方法同(2)所述。DAPI标记细胞核后在英国显微镜下观察。检测结果如图3所示，其中图3中的A为观察到的染色结果，图3中的B为CCK-8检测结果，CCK-8结果显示，0-2min组(即主要细胞群为Aldh1l1+Gfap-细胞)细胞活性最高，其次为2-4min组(即主要细胞群为Aldh1l1+Gfap+细胞)，活性最差为4-6min组(主要细胞群为Aldh1l1+Gfap+细胞)，与上述(2)中观察到的4-6min组细胞形态异常结果相符。EdU结果显示(图3中的B)，对于Aldh1l1+Gfap-和Aldh1l1+Gfap+两种细胞亚群，Aldh1l1+Gfap-细胞亚群的增殖能力显著高于Aldh1l1+Gfap+细胞亚群，提示二者不同的细胞生物学特性。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (3)

1.一种星形胶质细胞亚群的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：将神经胶质细胞依次进行贴壁培养和震荡培养，将震荡培养后的贴壁细胞进行消化，收集第0~2 min内消化得到的悬浮细胞，获得Aldh1l1+Gfap-星形胶质细胞亚群；收集第2~4 min内消化得到的悬浮细胞，获得Aldh1l1+Gfap+星形胶质细胞亚群；
所述贴壁培养为：分离1-3天新生小鼠大脑皮质，用0.25%胰酶在37℃条件下消化30min，300 g离心5 min，用含有0.5 mg/ml DNase的DMEM培养液重悬，再次离心；用含10%FBS和青链霉素的DMEM重悬后接种于40 μg/ml多聚赖氨酸包被的培养板中进行贴壁培养;
所述贴壁培养的时间为8~10天;
所述震荡培养的温度为36~38℃；
所述震荡培养的转速为260 rpm；
所述震荡培养的时间为4 h。
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述小鼠的品系包括C57BL/6J、C57BL/6N、DBA/2或BALB/c。
3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述震荡培养的温度为37℃。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1340098A (zh) * 1999-01-05 2002-03-13 阿文蒂斯药物股份有限公司 人类成年星形胶质细胞,它们的制备及应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050214940A1 (en) * 2002-01-23 2005-09-29 Rao Mahendra S Pure populations of astrocyte restricted precursor cells and methods for isolation and use thereof
US10093898B2 (en) * 2015-05-19 2018-10-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Purification of functional human astrocytes
WO2019113535A1 (en) * 2017-12-07 2019-06-13 President And Fellows Of Harvard College Methods for generating astrocytes and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1340098A (zh) * 1999-01-05 2002-03-13 阿文蒂斯药物股份有限公司 人类成年星形胶质细胞,它们的制备及应用

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