CN113336823A - 一种用于抗体偶联药物连接子lnd1067的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法。该合成方法包括：将LND1067‑L1与LND1029在溶剂中反应，反应液过反相柱，纯化得到LND1067‑1；将LND1067‑1与二乙胺在DMF中反应，反应液减压除去二乙胺，过反相柱，纯化得到LND1067‑2；将LND1067‑2、LND1067‑L2和N，N‑二异丙基乙胺在反应溶剂中反应，反应液过反相柱纯化，得到用于抗体偶联药物连接子LND1067。本发明的合成方法的收率高，易于放大生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物的合成方法，尤其涉及一种抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法，属于药物化学合成技术领域。
背景技术
抗体药物偶联物(Antibody drug conjugate，简称ADC)是一类新型的抗肿瘤药物，其原理是将细胞毒素连接在抗体上，通过抗体对癌细胞表面特定抗原的识别，通过内吞作用进入癌细胞，从而将细胞毒素运输到靶点，达到靶向性治疗恶性肿瘤的目的。ADC与传统的小分子抗肿瘤药物相比，因能借助抗体的靶向识别性与毒素的高活性，故更具备特异性和有效性。
ADC包括三个不同的组成部分，即抗体、连接子和细胞毒素。抗体实现靶向性，连接子保证ADC在血液转运过程中的稳定性，而到达作用靶点后，细胞毒素发挥对癌细胞的杀伤作用。根据作用机制的不同，适用于ADC的毒素分为微管类抑制剂(Microtubuleinhibitors)，DNA损伤剂(DNA damaging agents)，RNA聚合酶抑制剂(RNA polymeraseinhibitors)等。
目前，市场上销售和临床试验中的ADC所采用的毒素主要为微管类抑制剂，主要包括DNA拓扑异构酶I(topoisomerase I)抑制剂设计的化合物，比如Dxd，以及基于美登素(Maytansine-based)设计的化合物，比如DM1和DM4。连接子方面，主要为不可裂解型，如甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-瓜氨酸(GGFG-Acid)和4-(4-马来酰亚胺基苯基)丁酸琥珀酰亚胺酯(LND1067-L2)，经过溶酶体水解后，药物仍然具有活性，并通过连接区与某个氨基酸残基结合在一起。
LND1067作为用于抗体偶联药物的连接子，结构式如下：
目前LND1067的合成方法都需要经过中间体LND1067-2的合成步骤，而LND1067-2的主要合成方法为：
上述合成方法中的中间体LND1067-2-1合成收率较低，直接影响LND1067-2的合成，进而影响LND1067的合成收率。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种收率高、易于放大生产的LND1067的合成方法。
为了实现上述技术目的，本发明提供了一种用于抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法，该合成方法包括以下步骤：
将LND1067-L1与LND1029(DX8951)在溶剂中反应，反应液过反相柱，纯化得到LND1067-1；
将LND1067-1与二乙胺(DEA)在DMF中反应，反应液减压除去二乙胺，过反相柱，纯化得到LND1067-2；
将LND1067-2、LND1067-L2和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)在反应溶剂中反应，反应液过反相柱纯化，得到用于抗体偶联药物连接子LND1067。
本发明的用于抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法，包括如下反应步骤：
本发明的合成方法中包括制备LND1067-1的步骤。
在本发明的一具体实施方式中，制备LND1067-1时，包括以下步骤：
将LND1029溶于溶剂中，室温下搅拌5min-10min；加入LND1067-L1，降温到-5℃至5℃搅拌3min-5min；加入HATU，在0℃-5℃下反应1h-3h，得到LND1067-1。
在本发明的一具体实施方式中，LND1029与LND1067-L1混合摩尔当量比为1.0eq：1.2eq-2.0eq(优选为1.0eq：1.4eq)。
本发明的合成方法中包括制备LND1067-2的步骤。
在本发明的一具体实施方式中，制备LND1067-2时，包括以下步骤：
将LND1067-1溶于DMF中，室温搅拌3min-5min；
降温至0℃-5℃搅拌3min-5min；加入二乙胺，保温0℃-5℃反应0.5h-1h，得到LND1067-2。
在本发明的一具体实施方式中，LND1067-1与二乙胺的混合摩尔当量比为leq：10eq-20eq。
本发明的合成方法中包括制备LND1067的步骤。
在本发明的一具体实施方式中，制备LND1067时，包括以下步骤：
将LND1067-2溶于溶剂中，加入LND1067-L2降温到-5℃至0℃搅拌3min-5min，加入N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，在-5℃至0℃下反应0.5h-1h，得到用于抗体偶联药物连接子LND1067。
在本发明的一具体实施方式中，LND1067-2、LND1067-L2、N，N-二异丙基乙胺的混合摩尔当量比为1.0eq：1.0eq-1.5eq：1.5eq-2.5eq(优选1.0eq：1.0eq：2.0eq)。
在本发明的一具体实施方式中，采用的溶剂为DCM、THF或DMF。
在本发明的一具体实施方式中，本发明的用于抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法包括以下步骤。
LND1067-1的合成
取LND1029于反应瓶中，无水DMF和DIPEA，室温下搅拌5-10min；LND1067-L1加入反应瓶，然后反应体系转移至低温反应器中，降温到-5至5℃搅拌3-5min；取HATU加入反应体系，保温0-5℃反应1-3h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：反应体系直接中压反相纯化(0.1％TFA水/乙腈体系纯化，70-80％乙腈比例出产品)；收集产品冻干，得到黄色固体LND1067-1。
LND1067-2的合成
取LND1067-1与无水于反应瓶中，室温搅拌3-5min；将反应体系降温到0-5℃搅拌3-5min；取DEA加入反应体系，保温0-5℃反应0.5-1h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：反应体系浓缩除去DEA；醋酸溶于少量DMF中加入反应体系摇匀；反应体系直接中压反相纯化(0.1％TFA水/乙腈体系纯化)；收集产品冻干，得到黄色固体LND1067-2。
LND1067 MPB-GGFG-Dxd的合成
取LND1067-2、无水DMF，LND1067-L2加入反应瓶中；降温-5至0℃搅拌3-5min，DIPEA加入反应体系，保温-5至0℃反应约0.5-1h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：-5至0℃下，向反应体系加入AcOH；反应体系直接中压反相纯化(0.1％AcOH水/乙腈体系纯化，80～90％乙腈比例出产品)收集产品冻干，得到类黄色固体粗产品LND1067-C；中压反相精制得到浅黄色固体LND1067。
本发明的用于抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法，避开了中间体LND1067-2-1的合成，实现了LND1067的高效合成，易于放大，便于商业化生产。
附图说明
图1为本发明实施例的LND1067-1的HPLC谱图。
图2为本发明实施例的LND1067-1的LCMS谱图。
图3为本发明实施例的LND1067-1的HNMR谱图。
图4为本发明实施例的LND1067-2的HPLC谱图。
图5为本发明实施例的LND1067-2的LCMS谱图。
图6为本发明实施例的LND1067-2的HNMR谱图。
图7为本发明实施例的LND1067的HPLC谱图。
图8为本发明实施例的LND1067的LCMS谱图。
图9为本发明实施例的LND1067的HNMR谱图。
图10为本发明实施例的LND1067的CNMR谱图。
具体实施方式
实施例
本实施例提供了一种用于抗体偶联药物连接子LND1067-2的合成方法，具体包括以下步骤。
LND1067-1的合成
取LND1029(1.0eq/2.0g)于反应瓶中，无水DMF(10V/20ml)和DIPEA 1.64g，室温下搅拌10min；LND1067-L1(3.83g/1.4eq)加入反应瓶，然后反应体系转移至低温反应器中，降温-5℃搅拌5min；取HATU(2.58g，)加入反应体系，保温5℃反应1-3h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：反应体系直接中压反相纯化(0.1％TFA水/乙腈体系纯化，70-80％乙腈比例出产品)；收集产品冻干，得到黄色固体4.05g，HPLC纯度93.3％，收率90％。
其中，LND1067-1的HPLC谱图如图1所示，LCMS谱图(如图2所示)和HNMR谱图(如图3所示)。
LND1067-2的合成
取LND1067-1(1.0eq/4.0g)无水DMF(8V/32ml)于反应瓶中，室温搅拌5min；将反应体系降温0℃搅拌3min；取DEA(2.75g，3.9ml)加入反应体系，保温0℃反应0.5h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：反应体系浓缩除去DEA；醋酸0.45g溶于少量DMF中加入反应体系摇匀；反应体系直接中压反相纯化(0.1％TFA水/乙腈体系纯化)；收集产品冻干，得到黄色固体2.87g，HPLC纯度93.2％，收率89％。
其中，LND1067-2的HPLC的谱图如图4所示，LCMS谱图(如图5所示)和HNMR谱图(如图6所示)。
LND1067 MPB-GGFG-Dxd的合成
取LND1067-2(1.0eq/24.01g)无水DMF 8V/192m1)，LND1067-L2(1.0eq/8.96g)加入反应瓶中；降温-5℃搅拌3min，DIPEA(7.38g/2.0eq)加入反应体系，保温-5℃反应约1h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：0℃下，向反应体系加入AcOH 4.8mL；反应体系直接中压反相纯化(0.1％AcOH水/乙腈体系纯化，80-90％乙腈比例出产品)收集产品冻干，得到类黄色固体粗产品LND1067-C；中压反相精制得到浅黄色固体LND106716.47g，HPLC纯度97.9％，收率53％，LCMS：1082.64[M+H]+。
其中，LND1067的HPLC谱图如图7所示(表明该化合物为纯品)，LCMS谱图(如图8所示)，HNMR谱图(如图9所示)和CNMR谱图(如图10所示)。
LND1067分子式C56H56FN9O13：H NMR(400MHz，DMSO)δ8.64(t，J＝6.6Hz，1H)，8.51(d，J＝8.9Hz，1H)，8.32(t，J＝5.7Hz，1H)，8.15(dd，J＝9.4，7.0Hz，2H)，8.03(t，J＝5.6Hz，1H)，7.74(d，J＝10.9Hz，1H)，7.28(d，J＝7.2Hz，3H)，7.22(t，J＝7.6Hz，6H)，7.16(s，3H)，5.59(dd，J＝14.0，5.9Hz，1H)，5.50-5.34(m，2H)，5.15(q，J＝18.9Hz，2H)，4.64(d，J＝6.5Hz，2H)，4.47(td，J＝8.8，4.6Hz，1H)，4.03(s，2H)，3.81-3.55(m，6H)，3.09(ddd，J＝19.8，18.1，5.5Hz，3H)，2.78(dd，J＝13.7，9.7Hz，1H)，2.60(t，J＝7.5Hz，2H)，2.50(s，2H)，2.33(d，J＝15.8Hz，3H)，2.16(t，J＝7.3Hz，4H)，1.87-1.75(m，4H)，0.86(t，J＝7.3Hz，3H)。
LND1067分子式C56H56FN9O13：13C NMR(101MHz，DMSO)δ172.57，172.45，171.43，170.20，170.05，169.54，169.27，168.98，162.82，160.35，156.68，152.28，149.99，147.92，147.78，145.12，141.56，140.50，137.82，136.35，136.30，134.64，129.29，129.16，128.80，128.11，126.68，126.31，125.28，123.74，123.55，121.62，119.11，109.93，109.71，96.75，72.39，69.81，67.04，65.27，54.27，49.63，44.64，42.17，41.90，37.29，34.53，34.21，30.41，27.85，26.72，23.71，21.08，10.96，10.91，7.78。
对比例
本对比例提供了一种用于抗体偶联药物连接子LND1067-2的合成方法，具体包括以下步骤。
LND1067-1的合成
取LND1029(3.0g)于反应瓶中，无水DMF(10V/20mL)和DIPEA 2g，室温下搅拌5-10min；LND1067-L1(1g)加入反应瓶，然后反应体系转移至低温反应器中，降温5℃搅拌3min；取HATU(2.58g，)加入反应体系，保温0℃反应1h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：反应体系直接中压反相纯化；收集产品冻干，得到黄色固体，收率60％。
LND1067-2的合成
取LND1067-1(1.0eq/4.0g)无水DMF(8V/32ml)于反应瓶中，室温搅拌5min；将反应体系降温5℃搅拌3min；取DEA(2.75g，3.9m1)加入反应体系，保温10℃反应2h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：反应体系浓缩除去DEA；醋酸0.45g溶于少量DMF中加入反应体系摇匀；反应体系直接中压反相纯化(0.1％TFA水/乙腈体系纯化)；收集产品冻干，得到黄色固体收率56％。
LND1067 MPB-GGFG-Dxd的合成
取LND1067-2(12g)无水DMF 8V/192m1)，LND1067-L2(5g)加入反应瓶中；降温5℃搅拌3min，DIPEA(7.38g/2.0eq)加入反应体系，保温5℃反应约1h；HPLC检测反应体系，反应完全后处理：0℃下，向反应体系加入AcOH 4.8mL；反应体系直接中压反相纯化(0.1％AcOH水/乙腈体系纯化，80～90％乙腈比例出产品)收集产品冻干，得到类黄色固体粗产品LND1067-C；中压反相精制得到浅黄色固体LND1067，收率32％。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种用于抗体偶联药物连接子LND1067的合成方法，该合成方法包括以下步骤：
将LND1067-L1与LND1029在溶剂中反应，反应液过反相柱，纯化得到LND1067-1；
将所述LND1067-1与二乙胺在DMF中反应，反应液减压除去二乙胺，过反相柱，纯化得到LND1067-2；
将所述LND1067-2、LND1067-L2和N，N-二异丙基乙胺在溶剂中反应，反应液过反相柱，纯化得到所述用于抗体偶联药物连接子LND1067。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其中，所述制备LND1067-1时，包括以下步骤：
将LND1029溶于溶剂中，室温下搅拌5min-10min；加入LND1067-L1，降温到-5℃至5℃搅拌3min-5min；加入HATU，在0℃-5℃下反应1h-3h，得到所述LND1067-1。
3.根据权利要求1或2所述的合成方法，其中，所述LND1029与LND1067-L1混合摩尔当量比为1.0eq∶1.2eq-2.0eq。
4.根据权利要求1所述的合成方法，其中，制备LND1067-2时，包括以下步骤：
将所述LND1067-1溶于DMF中，室温搅拌3min-5min；
降温至0℃-5℃搅拌3min-5min；加入二乙胺，保温0℃-5℃反应0.5h-1h，得到LND1067-2。
5.根据权利要求1或4所述的合成方法，其中，LND1067-1与二乙胺的混合摩尔当量比为1eq∶10eq-20eq。
6.根据权利要求1所述的合成方法，其中，制备LND1067时，包括以下步骤：
将所述LND1067-2溶于溶剂中，加入LND1067-L2降温到-5℃至0℃搅拌3min-5min，加入N，N-二异丙基乙胺，在-5℃至0℃下反应0.5h-1h，得到所述用于抗体偶联药物连接子LND1067。
7.根据权利要求1或6所述的合成方法，其中，所述LND1067-2、LND1067-L2、N，N-二异丙基乙胺的混合摩尔当量比为1.0eq∶1.0eq-1.5eq∶1.5eq-2.5eq。
8.根据权利要求1所述的合成方法，其中，所述溶剂为DCM、THF或DMF。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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