CN113324957A - 一种荧光免疫检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种荧光免疫检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行实施：S1：对人体样品进行预处理；S2：将处理好的样品滴入免疫层析试纸当中进行反应；S3：利用光源产生特定波长的平行光对免疫层析试纸进行照射；S4：在平移装置的驱动下免疫层析试纸的各个区域分别被平行光照射并激发出荧光，利用光电转换器对荧光进行接收并绘制荧光强度曲线；S5：将荧光强度曲线进行分析计算得出检测样品的浓度。本发明利用处理器对光电转换器接收到的荧光强度曲线进行分析计算，通过算法找出峰值和平滑点，然后根据检测线和控制线的峰值分别减去平滑点的值得出比值并代入特定的线性公式以得出相应的样品浓度。
Description
技术领域
本发明涉及毒品物质检测领域，尤其涉及一种荧光免疫检测方法。
背景技术
免疫荧光分析技术是新发展起来的精密的免疫标记检测技术，与传统的酶联免疫法及金标法相比，免疫荧光分析技术灵敏度高，特异性强，操作方便，不用放射性物质作为标记物，因此具有无放射性、标记物稳定、便于长期保存、试验重复性好、分析速度快、样品用量少及标准曲线量程宽等优点。荧光分析法是测定物质吸收了一定频率的光以后，物质本身所发射的光的强度。荧光的强度与物质数量之间存在正比关系，可通过测定荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的分析。免疫荧光分析技术是目前生物医学检验中常用的快速分析技术，在微生物、病毒抗原或抗体检测、激素检测、肿瘤标志物检测、毒品海洛因、吗啡、摇头丸、氯胺酮等检测领域具有广阔的应用前景。
目前的免疫荧光检测法在得到荧光强度曲线后进行准确的分析计算出被测物质的含量，通常需要对荧光强度曲线进行面积计算，结果处理时间较长，运算比较复杂，等待时间长。
发明内容
针对上述背景技术中的问题，本发明提供一种荧光免疫检测方法，按照如下步骤进行实施：
S1：对人体样品进行预处理；
S2：将处理好的样品滴入免疫层析试纸当中进行反应；
S3：利用光源产生特定波长的平行光对免疫层析试纸进行照射；
S4：在平移装置的驱动下免疫层析试纸的各个区域分别被平行光照射并激发出荧光，利用光电转换器对荧光进行接收并绘制荧光强度曲线；
S5：将荧光强度曲线进行分析计算得出检测样品的浓度，具体按照以下步骤计算样品浓度，先找波峰，在指定区间里找波峰，当其中一个点的坐标值比左右两侧相应点的坐标值都大并且该点值大于一定的数值，那么此点即为波峰值；其次找平滑点，起始点在波峰横坐标的左侧，左侧每相应点作差并取绝对值，将绝对值求和比较，找到最小值，即是最平部分，平滑坐标处左右找相应点坐标值和的平均值作为平滑值；通常荧光强度曲线上能够找出两个波峰，分别为检测线波峰和控制线波峰，利用检测线波峰值减去平滑值除以控制线减去平滑值得出AT/AC的比值，将AT/AC的比值代入特定的线性公式从而得出被测样品的浓度。
进一步的，所述免疫层析试纸具体为硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的某一带区上含有特异的荧光抗体，所述荧光抗体能够与被检测样品中的特异荧光抗体相结合。
进一步的，所述人体样品包括：唾液、血液、尿液、毛发。
进一步的，所述光源具体为LED灯光和光线过滤装置，利用光线过滤装置将LED灯光发出的光线过滤为波长范围一致的平行光。
进一步的，经所述光线过滤装置处理后的平行光与所述免疫层析试纸成90°夹角。
进一步的，所述光电转换器位于所述免疫，所述免疫层析试纸被激发出荧光后通过荧光过滤装置转换为平行光并通过光电转换器进行接收转换为电信号。
进一步的，所述光源发出平行光的波长和强度能够进行调节。
与现有技术相比，本发明提供一种多用途人体检测方法，具有以下有益效果：
本发明利用处理器对光电转换器接收到的荧光强度曲线进行分析计算，通过算法找出峰值和平滑点，然后根据检测线和控制线的峰值分别减去平滑点的值得出比值并代入特定的线性公式以得出相应的样品浓度。
附图说明
图1为一种荧光免疫检测方法的流程图。
具体实施方式
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明结合示意图进行详细描述，在详述本发明实施例时，为便于说明，表示器件结构的剖面图会不依一般比例作局部放大，而且所述示意图只是示例，其在此不应限制本发明保护的范围。此外，在实际制作中应包含长度、宽度及深度的三维空间尺寸。
同时在本发明的描述中，需要说明的是，术语中的“上、下、内和外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一、第二或第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。本发明中除非另有明确的规定和限定，术语“安装、相连、连接”应做广义理解，例如：可以是固定连接、可拆卸连接或一体式连接；同样可以是机械连接、电连接或直接连接，也可以通过中间媒介间接相连，也可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
本发明提供一种多用途人体检测方法，具体按照如下步骤进行实施：
S1：对人体样品进行预处理，所述人体样品包括：唾液、血液、尿液、毛发；
S2：将处理好的样品滴入免疫层析试纸当中进行反应，所述免疫层析试纸具体为硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的某一带区上含有特异的荧光抗体，所述荧光抗体能够与被检测样品中的特异荧光抗体相结合；
S3：利用光源产生特定波长的平行光对免疫层析试纸进行照射，所述光源具体为LED灯光和光线过滤装置，利用光线过滤装置将LED灯光发出的光线过滤为波长范围一致的平行光，经所述光线过滤装置处理后的平行光与所述免疫层析试纸成90°夹角，所述光源发出平行光的波长和强度能够进行调节；
S4：在平移装置的驱动下免疫层析试纸的各个区域分别被平行光照射并激发出荧光，利用光电转换器对荧光进行接收并绘制荧光强度曲线，所述光电转换器位于所述免疫，所述免疫层析试纸被激发出荧光后通过荧光过滤装置转换为平行光并通过光电转换器进行接收转换为电信号；
S5：将荧光强度曲线进行分析计算得出检测样品的浓度，先在荧光强度曲线上找到波峰，在指定区间里找波峰，当其中一个点的坐标值比前后的相应点的坐标值都大，并且该点值大于一定的数值，且之后的相应点的坐标值都相等，那么此处波峰达到最大值，其次找平滑点，起始点在波峰横坐标的左侧，左侧每相应点作差并取绝对值，将绝对值求和比较，找到最小值，即是最平部分。平滑坐标处左右找相应点坐标值和的平均值作为平滑值，通常荧光强度曲线上能够找出两个波峰，分别为检测线波峰和控制线波峰，利用检测线波峰值减去平滑值除以控制线减去平滑值得出AT/AC的比值，将AT/AC的比值代入特定的线性公式从而得出被测样品的浓度。
工作原理
将特异的荧光抗体先固体于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素的第一端滴加样品后，由于毛细管作用，样品将沿着硝酸纤维素膜向第二端移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该荧光体发生特异性结合，随着进一步的层析作用，用此抗原的另一个抗体对此复合物进行捕捉，多余的荧光抗体用其二抗进行捕捉，两次捕捉的位置分别称为质控线（C线）和检测线（T线）。当光源照射到检测卡上时，质控线和检测线分别激发出不同强度的荧光，光电转换器接收不同强度的荧光产生不同大小的电信号，电信号的强弱反映出待检测物的浓度，从而实现特异性的免疫诊断，通过计算荧光强度曲线上质控线（C线）和检测线（T线）的峰值的比值并代入线性公式计算出被测样品的含量。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (7)
1.一种荧光免疫检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行实施：
S1：对人体样品进行预处理；
S2：将处理好的样品滴入免疫层析试纸当中进行反应；
S3：利用光源产生特定波长的平行光对免疫层析试纸进行照射；
S4：在平移装置的驱动下免疫层析试纸的各个区域分别被平行光照射并激发出荧光，利用光电转换器对荧光进行接收并绘制荧光强度曲线；
S5：将荧光强度曲线进行分析计算得出检测样品的浓度，具体按照以下步骤计算样品浓度，先找波峰，在指定区间里找波峰，当其中一个点的坐标值比左右两侧相应点的坐标值都大并且该点值大于一定的数值，那么此点即为波峰值；其次找平滑点，起始点在波峰横坐标的左侧，左侧每相应点作差并取绝对值，将绝对值求和比较，找到最小值，即是最平部分，平滑坐标处左右找相应点坐标值和的平均值作为平滑值；通常荧光强度曲线上能够找出两个波峰，分别为检测线波峰和控制线波峰，利用检测线波峰值减去平滑值除以控制线减去平滑值得出AT/AC的比值，将AT/AC的比值代入特定的线性公式从而得出被测样品的浓度。
2.根据权利要求1所述的一种荧光免疫检测方法，其特征在于，所述免疫层析试纸具体为硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的某一带区上含有特异的荧光抗体，所述荧光抗体能够与被检测样品中的特异荧光抗体相结合。
3.根据权利要求1所述的一种荧光免疫检测方法，其特征在于，所述人体样品包括：唾液、血液、尿液、毛发。
4.根据权利要求1所述的一种荧光免疫检测方法，其特征在于，所述光源具体为LED灯光和光线过滤装置，利用光线过滤装置将LED灯光发出的光线过滤为波长范围一致的平行光。
5.根据权利要求1所述的一种荧光免疫检测方法，其特征在于，经所述光线过滤装置处理后的平行光与所述免疫层析试纸成90°夹角。
6.根据权利要求1所述的一种荧光免疫检测方法，其特征在于，所述光电转换器位于所述免疫，所述免疫层析试纸被激发出荧光后通过荧光过滤装置转换为平行光并通过光电转换器进行接收转换为电信号。
7.根据权利要求1所述的一种荧光免疫检测方法，其特征在于，所述光源发出平行光的波长和强度能够进行调节。
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