CN113318224B - 双轮状纳米颗粒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种双轮状纳米颗粒，是由单体分子自组装形成的球状结构，所述单体分子包括依次连接的疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子，所述疏水性佐剂分子分布于所述球状结构的内侧，所述亲水性药物分子分布于所述球形结构的外侧。本发明公开了一种双轮状纳米颗粒的制备方法。

Description

双轮状纳米颗粒及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物技术领域，特别是涉及双轮状纳米颗粒及其制备方法。
背景技术
肿瘤是目前影响人类健康与生命的重要难题之一，单一的治疗方法常常达不到良好的治疗效果，为了延长肿瘤患者的生存期，提高其生活质量，联合治疗已成为肿瘤治疗的趋势。但是目前肿瘤治疗多采用系统给药的方式，全身的毒副作用比较大。纳米载体，在给药方面具有独特的优势，不仅可以增加药物在肿瘤局部的聚集，增强药物的治疗效果，同时降低全身的不良反应。尤其，在肿瘤联合治疗方面，纳米给药更可以实现不同疗法之间的协同治疗作用。
但是目前纳米载体多是采用纳米医用材料制备而成，纳米载体粒子尺寸小、比表面积大、表面态丰富、化学活性高，具有许多块体及普通粉末所没有的特殊性质，如有些无机纳米材料可能会造成细胞死亡、形态改变及染色体损伤，部分有机高分子纳米材料则存在降解和代谢困难等问题。因此传统的纳米载体材料具有潜在的安全性问题。而且，纳米载体的有限药物负载量及复杂的制备过程均限制了纳米载体药物的临床应用。
发明内容
基于此，有必要针对传统纳米载体药物安全性差、载药量低、制备过程复杂的问题，提供一种双轮状纳米颗粒及其制备方法。
一种双轮状纳米颗粒，是由单体分子自组装形成的球状结构，所述单体分子包括依次连接的疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子，所述疏水性佐剂分子分布于所述球状结构的内侧，所述亲水性药物分子分布于所述球状结构的外侧。
在其中一些实施例中，所述亲水性药物分子为化疗药物。
在其中一些实施例中，所述单体分子中的所述环境响应性连接分子为一个或多个。
在其中一些实施例中，同一单体分子中多个所述环境响应性连接分子为同一种类或不同种类。
在其中一些实施例中，所述环境响应性连接分子选自基质金属蛋白酶响应性多肽、酶解α-乳白蛋白多肽、谷胱甘肽响应性分子、H2O2响应性分子中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR的多肽分子。
在其中一些实施例中，所述疏水性佐剂分子选自脂质体佐剂、咪喹莫特、皂甙及维生素E中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述双轮装纳米颗粒中的所述单体分子的种类为一种或多种。
在其中一些实施例中，所述疏水性佐剂分子选自单磷脂酰A，所述抗原选自人前列腺特异膜抗原，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR的多肽分子，所述亲水性药物选自盐酸阿霉素。
一种所述的双轮状纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
a、将抗原与环境响应性连接分子连接形成第一产物；
b、将所述第一产物与所述亲水性药物分子反应得到第二产物；
c、将所述第二产物与所述疏水性佐剂分子反应。
在其中一些实施例中，步骤b在20℃～30℃下搅拌进行，反应时间为20小时～28小时；步骤c在20℃～30℃下搅拌进行，反应时间为10小时～14小时。
在其中一些实施例中，所述抗原选自前列腺特异性膜抗原，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR的多肽分子，所述亲水性药物分子选自盐酸阿霉素，所述盐酸阿霉素与所述环境响应性连接分子的质量比为(0.1～1)：1，所述疏水性佐剂分子选自单磷脂酰A，所述第二产物与所述单磷脂酰A的质量比为(4.5～5.5):1。
本发明设计了一种由疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子自身构建的肿瘤微环境响应性的免疫疗法与化疗/光动力疗法等疗法协同作用的双轮状纳米颗粒，该纳米颗粒到达肿瘤局部后，在肿瘤微环境的作用下连接分子断裂而致双轮状纳米颗粒解体，游离的化疗药物/光敏等亲水性药物作用于局部的肿瘤细胞，不仅诱导肿瘤细胞凋亡，而且可引起免疫原性细胞死亡，增强肿瘤细胞免疫原性、诱导机体产生抗原特异性免疫保护反应；内部由佐剂和抗原构建的纳米颗粒仍保持自组装状态，作为纳米制剂刺激肿瘤局部的免疫细胞，激活患者自身的免疫系统，诱导机体产生抗原特异性免疫应答。而且，肿瘤免疫原性死亡可进一步促进肿瘤免疫效应的产生，而免疫治疗同时进一步增强化疗药物等对肿瘤的敏感性。
本发明的双轮状纳米颗粒采用分阶段解体的方式，外层的亲水性药物解体一步后，内核是抗原与佐剂构成的自载体纳米颗粒，仍然具有纳米的优势，如提高免疫细胞对抗原和免疫佐剂的内吞量，增强免疫效应等纳米材料的特性。通过亲水性药物与抗原、佐剂的分阶段解体释放，达到智能程序性释放的特性，由内核的抗原和佐剂的诱导产生的免疫效应将大大增强，增强免疫疗法与化疗/光动力疗法等疗法的协同效果。
该纳米颗粒是由具有治疗功能的药物分子通过自组装构建而成，并且不涉及其它非功能纳米材料，具有良好的生物安全性。同时该纳米颗粒解体具有肿瘤微环境响应性，药物仅在肿瘤局部释放，不仅降低了药物的全身毒副反应，还增强了不同疗法的协同治疗作用。
附图说明
图1为本发明一实施例的双轮状纳米颗粒结构示意图；
图2A为本发明一实施例的MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒动态光散射粒径检测结果图；
图2B为本发明一实施例的MPLA-PSMA纳米颗粒动态光散射粒径检测结果图；
图3A为本发明一实施例的MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒透射电子显微镜图；
图3B为本发明一实施例的MPLA-PSMA纳米颗粒透射电子显微镜图；
图4为本发明一实施例的纳米颗粒作用于DC后的细胞活力检测图；
图5A为本发明一实施例的纳米颗粒对CD40细胞的促成熟情况图；
图5B为本发明一实施例的纳米颗粒对CD80细胞的促成熟情况图；
图6A为本发明一实施例的DC细胞与纳米颗粒共孵育后细胞因子TNF-α的分泌情况图；
图6B为本发明一实施例的DC细胞与纳米颗粒共孵育后细胞因子IL-6的分泌情况图；
图7为本发明一实施例的荷瘤小鼠肿瘤体积变化曲线图；
图8为本发明一实施例的荷瘤小鼠体重变化曲线图；
图9为本发明一对比例的MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒动态光散射粒径检测结果图；
图10为本发明另一对比例的MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒动态光散射粒径检测结果图；
图11为本发明再一对比例的MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒动态光散射粒径检测结果图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
如图1所示，本发明实施例提供一种双轮状纳米颗粒，是由单体分子自组装形成的球状结构，所述单体分子包括依次连接的疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子，所述疏水性佐剂分子分布于所述球状结构的内侧，所述亲水性药物分子分布于所述球状结构的外侧。
本发明设计了一种由疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子自身构建的肿瘤微环境响应性的免疫疗法与化疗/光动力疗法等疗法协同作用的双轮状纳米颗粒，该纳米颗粒到达肿瘤局部后，在肿瘤微环境的作用下连接分子断裂而致双轮状纳米颗粒解体，游离的化疗药物/光敏等亲水性药物作用于局部的肿瘤细胞，不仅诱导肿瘤细胞凋亡，而且可引起免疫原性细胞死亡，增强肿瘤细胞免疫原性、诱导机体产生抗原特异性免疫保护反应；内部由佐剂和抗原构建的纳米颗粒仍保持自组装状态，作为纳米制剂刺激肿瘤局部的免疫细胞，激活患者自身的免疫系统，诱导机体产生抗原特异性免疫应答。而且，肿瘤免疫原性死亡可进一步促进肿瘤免疫效应的产生，而免疫治疗同时进一步增强化疗药物等对肿瘤的敏感性。
本发明的双轮状纳米颗粒采用分阶段解体的方式，外层的亲水性药物解体一步后，内核是抗原与佐剂构成的自载体纳米颗粒，仍然具有纳米的优势，如提高免疫细胞对抗原和免疫佐剂的内吞量，增强免疫效应等纳米材料的特性。通过亲水性药物与抗原、佐剂的分阶段解体释放，达到智能程序性释放的特性，由内核的抗原和佐剂的诱导产生的免疫效应将大大增强，增强免疫疗法与化疗/光动力疗法等疗法的协同效果。
该纳米颗粒是由具有治疗功能的药物分子通过自组装构建而成，并且不涉及其它非功能纳米材料，具有良好的生物安全性。同时该纳米颗粒解体具有肿瘤微环境响应性，药物仅在肿瘤局部释放，不仅降低了药物的全身毒副反应，还增强了不同疗法的协同治疗作用。
“双轮状”意为该纳米颗粒为双轮结构，外轮为亲水性药物分子形成的功能端，当环境响应性连接分子在特定环境下发生断裂之后，外轮的亲水性药物分子从双轮结构上脱离，留下自组装的内轮结构，内轮结构的外侧为抗原，疏水性佐剂分子分布于内侧。
亲水性药物分子可以为抗肿瘤药物，例如为对肿瘤细胞有杀灭作用的药物。在一些实施方案中，所述亲水性药物分子为化疗药物。
在一些实施方案中，所述单体分子中的所述环境响应性连接分子为一个或多个。在环境响应性连接分子的种类确定时，连接分子的数量决定了纳米颗粒的粒径，而纳米颗粒的粒径与其呈递和转移又具有密切的联系。
在一些实施方案中，单体分子中的所述环境响应性连接分子为多个时，同一单体分子中多个所述环境响应性连接分子为同一种类或不同种类。可根据实验目的(是单环境响应还是多个环境响应)来设计是需要一种还是多种连接分子。同一单体分子中多个所述环境响应性连接分子为同一种类时，则该纳米颗粒的分阶段解体释放专一性更强，只有当一种特定的环境刺激时，相应的单体分子才会发生响应，避免误解体释放现象的发生。同一单体分子中多个所述环境响应性连接分子为同一种类时，则该纳米颗粒的分阶段解体释放灵活性更强，单体分子可对多环境刺激发生响应，对特定部位环境变化的要求降低。
根据自身体系的设计和作用原理来选择相符的环境响应性连接。例如根据药物释放的靶点要求进行选择。在一些实施方案中，所述环境响应性连接分子选自基质金属蛋白酶响应性多肽、酶解α-乳白蛋白多肽、谷胱甘肽响应性分子、H2O2响应性分子中的至少一种。其中，谷胱甘肽响应性分子可选自叶酸、生物素、微生物B2、微生物B12等中的任意一种或多种。
在一些实施方案中，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR的多肽分子。
疏水性佐剂分子用于增强免疫反应。在一些实施方案中，所述疏水性佐剂分子可选自脂质体佐剂、咪喹莫特、皂甙及维生素E中的至少一种。
抗原用于激活机体的特异性免疫反应。抗原的具体种类根据该纳米颗粒的靶细胞种类决定。抗原一般为纳米颗粒作用位点或作用细胞对应的特异性识别蛋白。在一些实施方案中，该双轮状纳米颗粒的靶点为前列腺。抗原例如可以为人前列腺特异膜抗原(PSMA)，但当然不限于该抗原，要根据实际目的确定。
在一实施方案中，亲水性药物为化疗药物，该纳米颗粒在进入到肿瘤组织内部后，连接抗原与化疗药物的连接分子在肿瘤微环境响应下断裂，释放化疗药物，从而使得化疗药物以较高的浓度诱导肿瘤细胞凋亡，并减少全身的毒副作用；而该纳米颗粒在释放化疗药物后，仍然是一个由疏水性佐剂分子与抗原构建的具有佐剂功能的自载体纳米颗粒，能实现抗原佐剂共递送，激活机体的抗原特异免疫反应。同时肿瘤细胞免疫原性死亡后产生的自抗原也能被抗原提呈细胞摄取，增加了抗肿瘤免疫的特异性，从而在化疗与免疫协同作用的治疗下，抗肿瘤效果有了显著提升。
在一些实施方案中，所述双轮装纳米颗粒中的所述单体分子的种类为一种或多种。不同的单体分子上的亲水性药物分子可以相同或不同。不同的单体分子上的环境响应性连接分子的个数可以相同或不同。不同的单体分子上的环境响应性连接分子的种类可以相同或不同。不同的单体分子上的抗原可以相同或不同。不同的单体分子上的疏水性佐剂分子可以相同或不同。
在一些实施例中，双轮状纳米颗粒的粒径可为130nm～140nm。具体可以为130nm、132nm、134nm、136nm、138nm、140nm。抗原和疏水性佐剂分子形成的自组装颗粒的粒径可为110nm～125nm。具体可以为110nm、112nm、114nm、116nm、118nm、120nm、122nm、125nm。
本发明实施例还提供一种所述的双轮状纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
a、将抗原与环境响应性连接分子连接形成第一产物；
b、将所述第一产物与所述亲水性药物分子反应得到第二产物；
c、将所述第二产物与所述疏水性佐剂分子反应。
疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子之间的连接反应可以为羟基与羧酸形成酯的反应、酰胺化反应等等，这里不作限制。可根据连接的各分子的基团类型选择合适的反应类型。
本发明为一体自组装的方式形成该双轮状纳米颗粒，连接制备过程中各步骤的反应时间和温度对于是否能够自组装成预期的球形双轮状结构具有重要影响。
在一些实施方案中，步骤b在20℃～30℃下搅拌进行，反应时间为20小时～28小时。具体的，搅拌温度可以为20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃。
反应时间可以为20小时、22小时、24小时、26小时、28小时。优选的，搅拌温度为24℃～26℃。反应时间为23小时至25小时。
在一些实施方案中，步骤c在20℃～30℃下搅拌进行，反应时间为10小时～14小时。具体的，搅拌温度可以为20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃。
反应时间可以为20小时、22小时、24小时、26小时、28小时。优选的，搅拌温度为24℃～26℃。反应时间为23小时至25小时。
本发明为一体自组装的方式形成该双轮状纳米颗粒，因此，单体分子上各分子的含量对于是否能够自组装成预期的球形双轮状结构具有重要影响。
一些实施方案中，所述抗原选自前列腺特异性膜抗原，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGM-GPQGIAGQR(MMP-9)的多肽分子，所述亲水性药物分子选自盐酸阿霉素(DOX)。所述盐酸阿霉素与所述环境响应性连接分子的质量比为(0.1～1):1，例如可以为0.1:1、0.2:1、0.3:1、0.4:1、0.5:1、0.6:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1、1:1。所述疏水性佐剂分子选自单磷脂酰A，所述第二产物与所述单磷脂酰A的质量比为(4.5～5.5):1。
一些实施方案中，疏水性佐剂分子先进行活化反应，再与所述第二产物反应。在一实施例中，疏水性佐剂分子选自单磷脂酰A，活化剂选自N,N'-羰基二咪唑，活化质量比单磷脂酰A：N,N'-羰基二咪唑优选为1：(1～2)。活化温度优选为20℃～30℃。活化时间优选为2小时～3小时。
以下为具体实施例。
实施例
具体步骤包括：将PSMA-MMP-9多肽分子(ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR)与1,2-二氯乙烷和N-羟基丁二酰亚胺按照质量比一定的比例混合，室温搅拌反应2h，再加入盐酸阿霉素，其与多肽分子的质量比为0.1-1:1，室温搅拌反应24h，采用透析袋进行透析，收集分子量较大的物质，冻干，得到PSMA-MMP-9-DOX；将单磷脂酰A与N,N'-羰基二咪唑按照质量比1:1混合，室温搅拌反应2h，再加入单磷脂酰A 5倍质量的PSMA-MMP-9-DOX，混合后，室温搅拌反应12h，采用透析袋进行透析，收集分子量较大的物质，得到MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒。如图2A、图2B所示，MPMD NPs(MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒)的粒径为133.5～135.1nm。连接分子断裂之后的M-P NPs(MPLA-PSMA纳米颗粒)的粒径为118.0～119.8nm。如图3A、图3B所示，透射电镜下MPMD NPs(MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒)与连接分子断裂之后的M-P NPs(MPLA-PSMA纳米颗粒)的形态均成球形。
将制备的纳米颗粒进行如下实验：
1、细胞活力实验：
取6～8周龄的C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone Marrow DerivedDendritic Cell,BMDC)，置于5％CO2的37℃培养箱中进行培养，第七天，轻柔吹打培养液，收集悬浮细胞及疏松贴壁生长的细胞，接种于96孔板中，培养箱中过夜，每孔分别加入含有PSMA抗原浓度为0、1、5、10、15、20、40μg/ml的MPLA-PSMA纳米颗粒，继续培养24小时，每孔加入10μl CCK-8检测液，培养箱中继续培养1～4h，利用多功能全波长酶标仪(ThermoVarioskan Flash3001)测定450nm处吸光度。结果表明，如图4所示，M-P NPs(MPLA-PSMA纳米颗粒)对树突状细胞无毒性，在低浓度时还能促进细胞增殖。
2、纳米颗粒对BMDCs成熟的影响：
①流式细胞术检测纳米颗粒对于BMDCs细胞促成熟情况，BMDC与MPLA-PSMA纳米颗粒共孵育8小时，同时为模拟体内化疗免疫联合应用的情况，另设置一组BMDC与MPLA-PSMA纳米颗粒同化疗药处理过的肿瘤细胞碎片共孵育8小时(两组均按照PSMA的浓度5μg/ml计算给药量)，收集细胞，标记CD11C、CD40及CD80等流式抗体，用流式细胞仪进行检测。用PBS、同浓度的游离PSMA作对照。结果表明，MPLA-PSMA纳米颗粒能够较好地促进BMDCs的成熟。(其中Free PSMA用Free P表示，MPLA-PSMA NPs用M-P表示，添加了肿瘤细胞碎片的MPLA-PSMA NPs组用M-P+表示)。如图5A、图5B，M-P NPs(MPLA—PSMA纳米颗粒)能够促进树突状细胞表面CD40和CD80的表达。
②ELISA法测定纳米颗粒对BMDCs细胞因子分泌的影响：收集BMDCs，接种于96孔板中。BMDC与MPLA-PSMA纳米颗粒共孵育24小时(按照PSMA的浓度5μg/ml计算给药量)后，离心后取上清培养基，按照ELISA试剂盒说明书方法对BMDCs上清液进行细胞因子IL-6(Interleukin-6，白细胞介素-6)和TNF-α(Tumor Necrosis Factor-α，肿瘤坏死因子-α)的含量测定。使用酶标仪测定450nm处的吸光度OD值，根据标准品吸光度与浓度绘制标准曲线，计算样品浓度。用PBS、同浓度的游离PSMA作对照。结果表明，如图6A、图6B所示，M-P NPs(MPLA-PSMA纳米颗粒)能够有效促进BMDCs分泌IL-6和TNF-α。
3、抑瘤效果：
制备6～8周龄的C57BL/6RM-1荷瘤小鼠模型，在肿瘤体积达到100mm3左右时，将荷瘤小鼠随机分为四组，每组4只，对四组小鼠分别给予PBS、FREE DOX、M-P NPs、和MPMD NPs进行治疗(按照PSMA 20ug/只，DOX 100ug/只计算给药量)，每5天给药一次，共给药3次。从给药当日起，每两天测量肿瘤体积和小鼠体重，记录数据并绘制肿瘤体积及小鼠体重变化曲线。结果表明MPMD NPs能够有效地抑制肿瘤的生长，且与游离DOX组相比，纳米颗粒能够减轻化疗药物对机体的毒害作用。如图7所示，MPMD NPs(MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒)能够有效地抑制RM-1荷瘤小鼠的肿瘤生长。
如图8所示，结果表明MPMD NPs(MPLA-PSMA-MMP-9-DOX纳米颗粒)能够减轻化疗药物对机体的毒害作用。
对比例1
对比例1与实施例的区别在于：单磷脂酰A与N,N'-羰基二咪唑活化剂按照质量比1:0.5混合，室温搅拌反应2h进行活化。
结果如图9所示。说明若活化剂投放不足量，最终产物MPMD的粒径则不稳定。
对比例2
对比例2与实施例的区别在于：单磷脂酰A与N,N'-羰基二咪唑按照质量比1:1混合，室温搅拌反应1h进行活化。
结果如图10所示。说明若活化时间不足，最终产物MPMD的粒径则不稳定。
对比例3
对比例3与实施例的区别在于：单磷脂酰A与4倍质量的PSMA—MMP-9—DOX反应。
结果如图11所示。说明若投入的单磷脂酰A过多，则生成的最终产物MPMD易发生聚集。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国医学科学院生物医学工程研究所
<120> 双轮状纳米颗粒及其制备方法
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Glu Ser Trp Thr Lys Lys Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Gly
1 5 10 15
Pro Gln Gly Ile Ala Gly Gln Arg
20

Claims (4)

1.一种双轮状纳米颗粒，其特征在于，是由单体分子自组装形成的球状结构，所述单体分子包括依次连接的疏水性佐剂分子、抗原、环境响应性连接分子和亲水性药物分子，所述疏水性佐剂分子分布于所述球状结构的内侧，所述亲水性药物分子分布于所述球状结构的外侧；所述疏水性佐剂分子选自单磷脂酰A，所述抗原选自人前列腺特异膜抗原，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR的多肽分子，所述亲水性药物选自盐酸阿霉素。
2.一种如权利要求1所述的双轮状纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、将抗原与环境响应性连接分子连接形成第一产物；
b、将所述第一产物与所述亲水性药物分子反应得到第二产物；
c、将所述第二产物与所述疏水性佐剂分子反应。
3.根据权利要求2所述的双轮状纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤b在20℃~30℃下搅拌进行，反应时间为20小时~28小时；步骤c在20℃~30℃下搅拌进行，反应时间为10小时~14小时。
4.根据权利要求3所述的双轮状纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述抗原选自前列腺特异性膜抗原，所述环境响应性连接分子选自序列为ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR的多肽分子，所述亲水性药物分子选自盐酸阿霉素，所述盐酸阿霉素与所述环境响应性连接分子的质量比为（0.1~1）：1，所述疏水性佐剂分子选自单磷脂酰A，所述第二产物与所述单磷脂酰A的质量比为（4.5~5.5）:1。
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Nanoparticle-Based Drug Delivery in Cancer Therapy and Its Role in Overcoming Drug Resistance;Yihan Yao等;《Frontiers in Molecular Biosciences》;20200831;第7卷;第1-14页 *

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