CN113318026A - 一种增强酪氨酸酶活力的中药护发液配方 - Google Patents
一种增强酪氨酸酶活力的中药护发液配方 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种增强酪氨酸酶活力的中药护发液配方,具体涉及高浓度乙醇对何首乌、女贞子、人参三味药材复方的提取,获得低粘度、高渗透脂溶性成分的高浓度乙醇溶液后,回收乙醇至低浓度乙醇溶液,再加入透皮促渗剂薄荷油,组成中药护发液配方,制得的护发液明显增强酪氨酸酶的激活能力,其中80%醇提的配方达到198%,明显大于非三味药材复方的酪氨酸酶激活能力,促进乌发功能的有效改善。将本发明所涉及的中药护发液配方应用于开发头部的护发液,将快速提升提取物的促渗透皮,为解决现有中药口服乌发制剂带来的肝脏首过效应大、生物利用度低以及头皮药物蓄积浓度小,以及外用制剂中水溶性提取物激活酪氨酸酶能力弱等问题提供了有效途径。
Description
技术领域
本发明专利属于药物制剂的透皮系统领域,具体涉及一种增强酪氨酸酶活力的中药护发液配方。
背景技术
本发明中药复方涉及何首乌、女贞子和人参三味药材共同组成,具有滋补肝肾,乌发护发的作用。
何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根,味苦、甘、涩,性温,归肝、心、肾经。《本草纲目》称其能“养血益肝,固精益肾,健筋骨,乌髭发”,在民间验方中,何首乌多用于治疗须发早白、脱发、斑秃等,药效物质为大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类脂溶性有效成分。
女贞子为木犀科植物女贞的干燥成熟果实,其最早记录在《神农本草经》,性凉,味甘、苦,归肺、肝、肾经,《本草纲要》称女贞子能“补肝肾,安五脏,强腰筋,明耳目,乌须发”,药效物质为齐墩果酸和熊果酸等脂溶性成分。
人参为五加科植物人参的干燥根和根茎,在医疗和皮肤与头发护理方面应用广泛。《神农本草经》记载人参:“补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智,久服轻身延年”,药效物质为人参皂苷等脂溶性成分。
关于上述三味药材单一的高浓度醇提物(如90%乙醇浓度)测定酪氨酸酶活力的文献已有报道,但高浓度乙醇提取三味药材复方获得脂溶性成分高浓度乙醇溶液,经由乙醇回收获得低浓度乙醇溶液,再加上透皮促渗剂薄荷油,构成三味药材复方的脂溶性成分低浓度乙醇护发液,还未见报道。因此,本专利获得上述三味药材复方中的脂溶性高浓度乙醇溶液,转化为低浓度乙醇溶液后,再加上透皮促渗剂薄荷油,制得能够增强酪氨酸酶激活能力的专供头部使用的脂溶性成分低浓度乙醇护发液,具有很好的新颖性、创造性和实用性。
本发明专利在何首乌单方制剂基础上,添加补益类药材女贞子和人参,组成三味乌发药材的复方。另外,药材提取过程,随着提取溶剂乙醇浓度的增大,提取物的脂溶性也增大,因为乙醇浓度为50%~60% 时,可将多糖、淀粉等沉淀析出,乙醇浓度达到75%~80%时,则可将淀粉、多糖、蛋白质等水溶性物质去除,脂溶性进一步提升,生物药剂学与药物动力学知识也提及脂溶性越高的物质透过表皮等生物膜的能力越强,而透皮促渗剂的加入又能快速促进物质对头皮的渗透。市场上的乌发类制剂,不管口服还是外用,一般采用水煎煮提取工艺的为多,即使采用乙醇提取或水提醇沉工艺的,往往也是选用70%或其以下浓度的乙醇,所以获得的药效物质仍偏向水溶性。头发发白主要是由黑素细胞干细胞耗竭引起,也可能是由于毛囊中的氧化应激引起的黑素细胞功能异常所致,而酪氨酸酶是黑素合成过程的主要限速酶,其活性和表达是决定黑素生成产量和速度的重要因素,因此,酪氨酸酶活性降低是大多数人白发的主要原因,活性降低,则黑素合成减少,导致毛发变白。
综上所述,找到一种能够有效增强酪氨酸酶活性的配方并制成护发液,具有重要意义,对白发转黑发的治疗提供有效手段,也为中药乌发的机制提供依据。
发明内容
本发明旨在寻找一种能够显著激活酪氨酸酶活力的配方,为头部专用的乌发制剂研发奠定基础。通过三味药材各自对酪氨酸酶激活能力的比较,确定高浓度乙醇提取的三味药材复方中脂溶性成分高浓度乙醇溶液,经回收乙醇转为脂溶性成分低浓度乙醇溶液,再与透皮促渗剂薄荷油组成中药护发液配方,制得的护发液对酪氨酸酶具有显著的激活作用。
一种增强酪氨酸酶活力的中药护发液配方,其特征在于:所述的中药护发液配方是将何首乌、女贞子、人参三味药材复方用高浓度乙醇提取,获得脂溶性成分高浓度乙醇的溶液后,回收乙醇至低浓度乙醇溶液,再加上透皮促渗剂薄荷油配制而成;三味药材的主要用量比例为1∶1∶0.1,但也可以其它比例构成,无特定限制。
如权利要求1所述的中药护发液配方,涉及高浓度乙醇对三味药材复方中脂溶性成分的提取和低浓度乙醇溶液的转化,具体提取工艺为:用浓度为80%~100%的高浓度乙醇5~15倍量,回流提取何首乌、女贞子、人参三味药材复方,提取次数为1~3次,每次提取时间为0.5h~2h,过滤,合并滤液,回收乙醇至15%~30%的低浓度乙醇溶液,所得溶液即为脂溶性成分的低浓度乙醇溶液。
如权利要求1所述的中药护发液配方,涉及所得的脂溶性成分低浓度乙醇溶液中再加入透皮促渗剂薄荷油,薄荷油用量为溶液体积总量的0.05%~0.5%,共同组成中药护发液配方。
如权利要求1所述的中药护发液配方,涉及配方制得的护发液专门用于头部,主要为液体类剂型,包括溶液型、喷雾型或泡沫型等。
有益效果
1. 当何首乌、女贞子和人参三味药材按照不同组合进行水煎煮时,浓缩至相当于1g生药材的提取液,所测得的水溶性成分酪氨酸酶激活率数据见表1,数据显示对酪氨酸酶的激活能力不强,部分甚至有抑制作用。
表1 三味药材不同组合水煎煮浓缩后的酪氨酸酶激活数据
2. 当何首乌、女贞子和人参三味药材按照不同组合分别用50%和80%乙醇提取后,回收乙醇至体积浓度为25%乙醇的脂溶性溶液,以及25%乙醇的脂溶性溶液加透皮促渗剂薄荷油组,所测得的酪氨酸酶激活率数据见表2、表3,数据显示高浓度乙醇提取的三味药材复方加薄荷油组对酪氨酸酶的激活能力最强。
表2 三味药材不同组合50%醇提处理后的酪氨酸酶激活数据
表3 三味药材不同组合80%醇提处理后的酪氨酸酶激活数据
3. 醇提物对酪氨酸酶的激活能力远强于水溶性成分的溶液,而80%及以上高浓度乙醇提取获得的三味药材复方中脂溶性成分提取物,转化为脂溶性成分的低浓度乙醇溶液,和透皮渗透剂薄荷油组成的中药护发液配方,激活酪氨酸酶的能力最强。
酪氨酸酶激活的实验方法
1 仪器与试药
Infinite200PRO多功能酶标仪(TECAN);DHP-9052电热恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司);AR2140十万分之一电子天平(梅特勒-托利多)
L-多巴(批号S22N11Z130082,大连美仑生物技术有限公司);酪氨酸酶(批号M0311AS,源叶生物)
2 溶液的配制
2.1 磷酸缓冲液(PBS)
取1/4袋PBS粉加入500 ml三重蒸馏水(使用说明为一袋加入2 L蒸馏水),配制pH为6.8-7.2的PBS缓沖液。
2.2 酪氨酸酶的配制
精密称取酪氨酸酶(1560U/mg)0.80 mg至10 mL容量瓶中,加入超纯水使溶解,定容,配制成浓度约为125 U/mL的酪氨酸酶溶液。
2.3 多巴溶液的配制
精密称取3mg多巴至10 mL容量瓶中,加入超纯水使溶解,定容,即得0.3 mg/ml的多巴溶液。
2.4 待测样品溶液的配制
分别称取何首乌、女贞子和人参三味药材,同种药材重量相同,按照一种、两种和三种药材的组合模式,分别混合均匀,加入8倍量水煎煮2次,每次1h,合并滤液,浓缩至每ml含1g生药材的浓度,制成各种水溶性成分的不同组合溶液(见表1);另称取不同组合的三味药材,用浓度为50%的乙醇8倍量回流提取,提取次数2次,每次提取时间1h,合并滤液,回收乙醇,制成各种指溶性成分的25%乙醇不同组合溶液,最后一份加入0.4%的薄荷油,混合均匀,作为脂溶性溶液加透皮促渗剂薄荷油组(见表2);同法,制得80%乙醇提取再处理的各种指溶性成分的25%乙醇不同组合溶液,最后一份加入0.4%的薄荷油,混合均匀,作为脂溶性溶液加透皮促渗剂薄荷油组(见表3)。
3 酪氨酸酶激活测试
按每孔100 μl将样品溶液加入到96孔培养板,然后加入酪氨酸酶50 μl,37℃温育10分钟。再向每个孔加入多巴溶液50 μl,37 ℃温育5分钟,用酶标仪在475 nm下测吸光度值。设置A、B、C、D四个组,详见表4。
表4 酪氨酸酶实验反应液的组成
药品 | A组 | B组 | C组 | D组 |
pH 6.8 PBS缓冲液V/ml | 0.1 | 0.15 | 0.05 | |
样品溶液V/ml | 0.1 | 0.1 | ||
酪氨酸酶V/ml | 0.05 | 0.05 | ||
0.03% L-多巴V/ml | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
总体积V/ml | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
酪氨酸酶的激活率按下面的公式计算:
酪氨酸酶激活率(%)=[(C-D)-(A-B)]/ (A-B)×100%
A:475nm测得的吸光度值(有酶无测试物)
B:475nm测得的吸光度值(无酶无测试物)
C:475nm测得的吸光度值(有酶有测试物)
D:475nm测得的吸光度值(无酶有测试物)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明,所述的是对本发明的解释而不是限定。
实 施 例1:
何首乌90g 女贞子90g人参9g 20%乙醇 0.3%薄荷油
称取处方量何首乌、女贞子和人参,混合均匀,用90%乙醇5倍量回流提取2次,每次45min,过滤,合并滤液,浓缩至乙醇浓度剩为20%的溶液,加入0.3%的薄荷油,混合均匀,包装,即为溶液型头部护理液。
实 施 例2:
何首乌90g 女贞子120g人参12g 10%乙醇 0.4%薄荷油 AES适量
称取处方量何首乌、女贞子和人参,混合均匀,用82%乙醇6倍量回流提取2次,每次1.5h,过滤,合并滤液,浓缩至乙醇浓度剩为15%的溶液,加入0.4%的薄荷油和适量乳化剂AES,混合均匀,包装,即为泡沫型头部护理液。
Claims (4)
1.一种增强酪氨酸酶活力的中药护发液配方,其特征在于:所述的中药护发液配方是将何首乌、女贞子、人参三味药材复方用高浓度乙醇提取,获得脂溶性成分高浓度乙醇的溶液后,回收乙醇至低浓度乙醇溶液,再加上透皮促渗剂薄荷油配制而成;三味药材的较优用量比例为1∶1∶0.1,但不限于此比例。
2.如权利要求1所述的中药护发液配方,涉及高浓度乙醇对三味药材复方中脂溶性成分的提取和低浓度乙醇溶液的转化,具体提取工艺为:用浓度为80%~100%的高浓度乙醇5~15倍量,回流提取何首乌、女贞子、人参三味药材复方,提取次数为1~3次,每次提取时间为0.5h~2h,过滤,合并滤液,回收乙醇至15%~30%的低浓度乙醇溶液,所得溶液即为脂溶性成分的低浓度乙醇溶液。
3.如权利要求1所述的中药护发液配方,涉及所得的脂溶性成分低浓度乙醇溶液中再加入透皮促渗剂薄荷油,薄荷油用量为溶液体积总量的0.05%~0.5%,共同组成中药护发液配方。
4.如权利要求1所述的中药护发液配方,涉及配方制得的护发液专门用于头部,主要为液体类剂型,包括溶液型、喷雾型或泡沫型等。
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