CN110664679B - 一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法和应用，所述中药组合物的制备原料包括牡丹皮、赤芍、川芎、青蒿、益母草和龙胆草。本发明首次将上述组分组合在一起，各组分之间可以通过君臣佐使的原则相互配合，协同增效，使得到的中药组合物兼具美白、抗衰老两大功效，同时对人体肌肤安全、温和无刺激。本发明还提供了一种包括上述中药组合物的化妆品，该化妆品能有效延缓皮肤衰老、增加皮肤弹性和光亮度、减少皱纹，最大程度发挥了美白淡斑、抗衰保湿等功效。

Description

一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着饮食文化的发展、人们生活压力的增加、环境污染问题加剧等诸多因素，许多人的皮肤开始出现淡黄、暗沉、色斑等一系列的问题，护肤品也逐渐受到重视，人们在护肤品的选择上也逐渐从仅仅关注其功效性到更注重其安全性。而随着近年来化妆品科技的发展，具有清洁、保湿、美白、抗炎修复等功效的化妆品也是层出不穷，市场需求也逐年增大，而在此之中，美白与抗衰仍旧是人们最为看重的两大功效。最早用于美白化妆品中发挥美白功效的成分有汞化合物、激素、氢的活性成分，尽管其在很短时间内就能看到明显效果，但这些化合物在体内积聚不易分解，对人体有毒性。目前市场上广泛使用的美白剂大都含有维生素Ｃ及衍生物，具有安全性低、稳定性差等缺点，而把中草药活性成分当作添加剂，加入到化妆品中会提升安全性和稳定性。
而在这个对健康日益看重的时代，人们越发看重天然、无刺激、无危害的护肤品。而中国，作为一个具有极其丰富的中草药和天然产物资源的国家，对许多中草药及植物成分有着多年的研究与开发，并有着深厚的中医治疗基础。
CN106074285A公开了一种补水美白祛痘的化妆品，所述化妆品的制备原料由以下质量百分含量的组分组成：黄芩3-50%、野菊花3-50%、栀子3-50%、芦荟10-25%、牡丹皮3-50%、赤芍3-50%，该发明的中药组合物虽然在一定程度上起到了美白补水的作用，但是抗氧化抗衰能力较弱。
CN109700748A公开了一种美白祛斑霜的制备方法，所述化妆品的制备原料含百利、泽泻、白茯苓、白蔹、赤芍、川芎、牡丹皮、珍珠粉、乳化剂、白醋、离子抗菌剂、玻尿酸、核桃油、仙人掌、百合花等，该发明的所用药材虽对美白祛斑霜的制备方法进行了阐述，但中药成分较为复杂，且未研究其功效及应用。
因此，以广阔的中医药理论为背景，探索中医药材在化妆品中的广阔应用，必将开阔其在化妆品领域的发展，增大我国在化妆品领域的竞争力。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题，本发明提供了一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法和应用。所述中药组合物首次选择天然中草药牡丹皮、川芎、赤芍、青蒿、益母草和龙胆草为制备原料，各组分协同增效，补气蕴本，在保证安全、天然、稳定的同时，还具备美白、抗衰老两大功效，对日常生活中导致的皱纹增多、皮肤泛黄、暗沉色斑等症状具有良好的效果。
第一方面，本发明提供了一种具有美白抗衰老功效的中药组合物，所述中药组合物的制备原料包括如下组分：牡丹皮、川芎、赤芍、青蒿、益母草和龙胆草。
本发明首次将上述各制备原料复配，各组分之间协同增效、补气蕴本，在保证安全、天然、稳定的同时，还具备美白、抗衰老两大功效，同时对人体肌肤安全、温和无刺激。
本发明中所述中药组合物中各制备原料的性味和功效如下：
牡丹皮：性微寒，味苦、辛。能够抑制皮肤色素合成，消瘀化斑，还有抗炎、抗菌等功效。
川芎：性温，味辛。活血行气、祛风止痛，可抑制酪氨酸酶活性，清除人体自由基，具有较好的祛斑美容功效。
赤芍：性微寒，味苦。清热凉血、散瘀止痛，与丹皮复配，可以增强两者功效，促进血液微循环，加速新陈代谢。
青蒿：性寒，味苦、辛。清热解毒，与丹皮复配具有相使作用，具有抗菌、消炎、保湿等作用。
益母草：性微寒，味苦、辛。活血调经、利尿消肿，可抑制酪氨酸酶活性，促进皮肤新陈代谢。
龙胆草：味苦，性寒。是极品中药美容药材，具有舒缓、镇静及滋润肌肤的功效，可调和方中诸药，兼具美白与保湿的功效。
本发明所述中药组合物是根据君臣佐使的原则进行遣方用药的。牡丹皮为君药，可发挥美白、抗氧化、抗菌抗炎等功效，通过抑制炎症因子的释放，间接减少黑色素的生成，还有较好的祛斑解热作用。赤芍和川芎为臣药，与丹皮复配，能够辅助君药发挥其功效，且其内含芍药苷、藁本内酯、阿魏酸等活性物，具有较好的美白抗衰作用，促进其功效的发挥。益母草和青蒿作为佐药，清热解毒，促进皮肤吸收，可以配合君、臣药以加强治疗作用。龙胆草为使药，能够舒缓、镇静及滋润肌肤，调和方中诸药。
作为本发明的优选技术方案，所述中药组合物的制备原料包括如下重量百分比的组分：牡丹皮1-30%、川芎1-30%、赤芍1-30%、青蒿1-30%、益母草1-30%和龙胆草1-30%。
本发明所述中药组合物以中医药理论为指导，参考各类药物的习性与功效得出，各中药组分中药在上述特定比例下合理配比，可协同增效，补气蕴本，发挥其美白抗衰功效，适用于日常生活中导致的皱纹增多、皮肤泛黄、暗沉色斑等症状。
本发明中，所述牡丹皮1-30%，例如可以是1%、2%、5%、8%、10%、12%、15%、18%、20%、22%、25%、28%或30%等。
川芎1-30%，例如可以是1%、3%、5%、9%、10%、13%、15%、17%、20%、23%、25%、28%或30%等。
赤芍1-30%，例如可以是1%、2%、3%、5%、8%、9%、10%、13%、15%、16%、17%、20%、21%、23%、25%、26%、28%或30%等。
青蒿1-30%，例如可以是1%、2%、4%、6%、8%、9%、10%、12%、15%、16%、19%、20%、21%、24%、25%、27%、28%或30%等。
益母草1-30%，例如可以是1%、3%、4%、5%、7%、9%、10%、11%、13%、16%、18%、20%、23%、24%、25%、26%、28%或30%等。
龙胆草1-30%，例如可以是1%、2%、5%、8%、9%、10%、12%、13%、16%、18%、20%、23%、24%、25%、26%、28%或30%等。
优选地，所述中药组合物的制备原料包括如下重量百分比的组分：牡丹皮15-30%、川芎15-30%、赤芍15-30%、青蒿10-20%、益母草10-20%和龙胆草10-20%。
优选地，所述中药组合物的制备原料包括如下重量百分比的组分：牡丹皮16.7%、川芎16.7%、赤芍16.7%、青蒿16.7%、益母草16.7%和龙胆草16.7%。
优选地，所述中药组合物的制备原料包括如下重量百分比的组分：牡丹皮28.6%、川芎14.3%、赤芍14.3%、青蒿14.3%、益母草14.3%和龙胆草14.3%。
优选地，所述中药组合物的制备原料包括如下重量百分比的组分：牡丹皮22.2%、川芎22.2%、赤芍22.2%、青蒿11.1%、益母草11.1%和龙胆草11.1%。
第二方面，本发明还提供了一种如第一方面所述的具有美白抗衰老功效的中药组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
（1）将制备原料和溶剂混合进行提取，得到提取液；
（2）对步骤（1）得到的提取液利用大孔吸附树脂进行提纯，得到所述中药组合物。
优选地，步骤（1）中所述制备原料在和溶剂混合前先进行预处理。
优选地，所述预处理包括将所述制备原料进行粉碎和混合。
优选地，步骤（1）中所述溶剂为水和/或乙醇。
优选地，步骤（1）中所述溶剂与所述制备原料的质量比(液料比)为(5-20):1，例如可以是5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1等。
优选地，步骤（1）中所述提取的温度为40-90℃，例如可以是40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃或90℃等。
优选地，步骤（1）中所述提取的时间为1-3 h。例如可以是1 h、1.2 h、1.5 h、1.8h、2 h、2.3 h、2.5 h、2.8 h或3 h等。
优选地，步骤（1）中所述提取的次数为至少3次。
优选地，步骤（2）中所述对得到提取液利用大孔吸附树脂进行提纯前先进行分离和浓缩。
优选地，所述分离的方式为离心或过滤，优选为离心。
优选地，所述浓缩的方式为减压浓缩。
优选地，步骤（2）中所述大孔吸附树脂选自AB-8型大孔吸附树脂和/或D101型大孔吸附树脂。
优选地，步骤（2）中所述利用大孔吸附树脂进行提纯包括：将得到的提取液加入大孔吸附树脂中进行吸附、洗脱和回收。
优选地，所述洗脱包括：利用体积浓度为10-90%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液。
所述体积浓度为10-90%的乙醇水溶液，例如可以是10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%等。
优选地，所述回收包括：将得到的洗脱液进行旋蒸浓缩，加入丁二醇溶解、过滤，得到中药组合物。
第三方面，本发明还提供了一种化妆品，所述化妆品包括如第一方面所述的具有美白抗衰老功效的中药组合物。
本发明将所述中药组合物添加于化妆品中，能够使化妆品具有美白、抗衰老两大功效，缓解皮肤出现皱纹增多、泛黄、暗沉色板等问题。
优选地，所述化妆品包括面膜、乳液、护肤霜、柔肤水、精华液、补水霜、化妆水或BB霜中的任意一种。
本发明对于美白抗衰老化妆品的剂型没有特别限制，可以为水剂、乳液、面膜、膏霜、精华等。
优选地，在所述化妆品中，所述中药组合物的质量百分含量为0.05-30%，例如可以是0.05%、0.07%、0.09%、0.1%、0.2%、0.5%、0.8%、1%、2%、5%、8%、10%、12%、15%、18%、20%、22%、25%、27%、28%或30%等，优选为0.1-15%。
与现有技术方案相比，本发明至少具有以下有益效果：
（1）本发明首次将上述组分组合在一起，各组分之间可以通过君臣佐使的原则相互配合，协同增效，使得到的中药组合物兼具美白、抗衰老两大功效的中药组合物，同时所述中药组合物具有纯天然、无刺激、安全无毒的优点，能实现安全护肤的需求；
（2）本发明所述包括上述中药组合物的化妆品可以有效缓解皮肤粗糙、皱纹明显、皮肤暗沉、色素沉着等症状，同时还具有抗炎、保湿的功效，能真正意义上满足有效护肤的需求。
附图说明
图1为实施例1-11和对比例1-12在相同浓度下对酪氨酸酶相对抑制率的曲线图。
图2为实施例1制得的中药组合物和对比例1的单一牡丹皮提取物对酪氨酸酶活性影响的曲线图。
图3为实施例2制备得到的中药组合物对B16细胞黑色素抑制率和细胞相对增殖率影响的曲线图。
图4为应用例1和应用例2制成的护肤品用于人体30天后皮肤变化示意图。
具体实施方式
下面对本发明进一步详细说明。但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。
为更好地说明本发明，便于理解本发明的技术方案，本发明的典型但非限制性的实施例如下：
实施例1
本实施例提供了一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法。
其中，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮20 g、川芎20 g、赤芍20 g、青蒿20g、益母草20 g、龙胆草20 g。
本实施例所述中药组合物的制备方法如下：
（1）将上述制备原料粉碎、混合，再和体积分数为50%的乙醇水溶液按液料比为20:1再混合，85℃下提取1 h，重复3次，得到提取液，；
（2）对步骤（1）得到的提取液先进行离心分离、减压浓缩，得到浓缩液，对浓缩液利用AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，再利用体积分数为70%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，将得到的洗脱液经减压浓缩至与全部中药的质量比为1:1（即将洗脱液浓缩至120 g），再加入120 g丁二醇溶解，过滤，得到所述中药组合物。
实施例2
本实施例提供了一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法。
其中，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮34.28 g、川芎17.14 g、赤芍17.14g、青蒿17.14 g、益母草17.14 g、龙胆草17.14 g。
本实施例所述中药组合物的制备方法如下：
（1）将上述制备原料粉碎、混合，再和体积分数为70%的乙醇水溶液按液料比为10:1再混合，80℃下提取2 h，重复3次，得到提取液，；
（2）对步骤（1）得到的提取液先进行离心分离、减压浓缩，得到浓缩液，对浓缩液利用D101型大孔吸附树脂进行吸附，再利用体积分数为50%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，将得到的洗脱液经减压浓缩至与全部中药的质量比为1:1（即将洗脱液浓缩至120 g），再加入120 g丁二醇溶解，过滤，得到所述中药组合物。
实施例3
本实施例提供了一种具有美白抗衰老功效的中药组合物及其制备方法。
其中，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮26.66 g、川芎26.66 g、赤芍26.66g、青蒿13.33 g、益母草13.33 g、龙胆草13.33 g。
本实施例所述中药组合物的制备方法如下：
（1）将上述制备原料粉碎、混合，再和水溶液按液料比为15:1再混合，80℃下提取3h，重复3次，得到提取液，；
（2）对步骤（1）得到的提取液先进行离心分离、减压浓缩，得到浓缩液，对浓缩液利用AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，再利用体积分数为50%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，将得到的洗脱液经减压浓缩至与全部中药的质量比为1:1（即将洗脱液浓缩至120 g），再加入120 g丁二醇溶解，过滤，得到所述中药组合物。
实施例4
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮12 g、川芎21.6g、赤芍21.6 g、青蒿21.6 g、益母草21.6 g、龙胆草21.6 g。
实施例5
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮13.33 g、川芎13.33 g、赤芍13.33 g、青蒿26.66 g、益母草26.66 g、龙胆草26.66 g。
实施例6
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮40 g、川芎16 g、赤芍16 g、青蒿16 g、益母草16 g、龙胆草16 g。
实施例7
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮16 g、川芎40 g、赤芍16 g、青蒿16 g、益母草16 g、龙胆草16 g。
实施例8
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮16 g、川芎16 g、赤芍40 g、青蒿16 g、益母草16 g、龙胆草16 g。
实施例9
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮16 g、川芎16 g、赤芍16 g、青蒿40 g、益母草16 g、龙胆草16 g。
实施例10
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮16 g、川芎16 g、赤芍16 g、青蒿16 g、益母草40 g、龙胆草16 g。
实施例11
与实施例1的区别在于：所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮16 g、川芎16 g、赤芍16 g、青蒿16 g、益母草16 g、龙胆草40 g。
对比例1
本对比例提供了一种单一牡丹皮提取液及其制备方法。
其中，所述单一牡丹皮提取物的制备原料包括：牡丹皮120 g。
本对比例所述单一牡丹皮提取物的制备方法如下：
（1）将上述制备原料粉碎，再和体积分数为50%的乙醇水溶液按液料比为20:1混合，85℃下提取1 h，重复3次，得到提取液，；
（2）对步骤（1）得到的提取液先进行离心分离、减压浓缩，得到浓缩液，对浓缩液利用AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，再利用体积分数为70%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，将得到的洗脱液经减压浓缩至与全部中药的质量比为1:1（即将洗脱液浓缩至120 g），再加入120 g丁二醇溶解，过滤，得到所述单一牡丹皮提取液。
对比例2
本对比例提供了一种单一赤芍提取液及其制备方法，与对比例1的区别仅在于，使用赤芍120 g替代牡丹皮120 g。
对比例3
本对比例提供了一种单一川芎提取液及其制备方法，与对比例1的区别仅在于，使用川芎120 g替代牡丹皮120 g。
对比例4
本对比例提供了一种单一益母草提取液及其制备方法，与对比例1的区别仅在于，使用益母草120 g替代牡丹皮120 g。
对比例5
本对比例提供了一种单一青蒿提取液及其制备方法，与对比例1的区别仅在于，使用青蒿120 g替代牡丹皮120 g。
对比例6
本对比例提供了一种单一龙胆草提取液及其制备方法，与对比例1的区别仅在于，使用龙胆草120 g替代牡丹皮120 g。
对比例7
本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法，与实施例1的区别在于，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮24g、川芎24g、赤芍24g、青蒿24g、益母草24g。
对比例8
本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法，与实施例1的区别在于，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮24g、川芎24g、赤芍24g、青蒿24g、龙胆草24g。
对比例9
本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法，与实施例1的区别在于，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮24g、川芎24g、赤芍24g、益母草24g、龙胆草24g。
对比例10
本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法，与实施例1的区别在于，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮24g、川芎24g、青蒿24g、益母草24g、龙胆草24g。
对比例11
本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法，与实施例1的区别在于，所述中药组合物的制备原料包括：牡丹皮24g、赤芍24g、青蒿24g、益母草24g、龙胆草24g。
对比例12
本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法，与实施例1的区别在于，所述中药组合物的制备原料包括：川芎24g、赤芍24g、青蒿24g、益母草24g、龙胆草24g。
应用例1
本应用例提供了一种具有美白、抗衰老功效面膜，所述面膜包括实施例2制备得到的中药组合物，其具体配方见表1：
表1
组分 质量分数/%
去离子水 73.4
卡波姆 0.3
1,3-丁二醇 5
甘油 10
EDTA二钠 0.1
尿囊素 0.2
DL-泛醇 0.4
对羟基苯乙酮 0.3
三乙醇胺 0.3
中药组合物 10
本应用例所述具有美白、抗衰老功效面膜的制备方法如下：将上述卡波姆、丁二醇、甘油、EDTA二钠、尿囊素、DL-泛醇加入去离子水中，在80℃搅拌至完全溶解，降温至45℃，加入三乙醇胺搅拌均匀后，再加入对羟基苯乙酮和中药提取物，搅拌均匀，即得到具有美白、抗衰老功效的面膜。
应用例2
本应用例提供了一种具有美白、抗衰老功效啫喱，所述啫喱包括实施例2制备得到的中药组合物，其具体配方见表2：
表2
物质名称 质量分数/%
去离子水 81.4
卡波姆 0.7
尿囊素 0.2
泛醇 0.3
甘油 4
丙二醇 4
海藻糖 2
水溶霍霍巴油 0.5
10%氢氧化钠水溶液 1.5
中药组合物 5
对羟基苯乙酮 0.4
本应用例所述具有美白、抗衰老功效啫喱的制备方法如下：将上述卡波姆、尿囊素、泛醇、甘油、丙二醇、海藻糖、水溶霍霍巴油加入到去离子水中，80℃搅拌，使其充分溶解后降温至45℃，再加入氢氧化钠溶液搅拌均匀，最后加入对羟基苯乙酮、中药组合物，搅拌均匀，即可得美白抗衰老啫喱。
性能测试：
1、美白功效研究——酪氨酸酶活性抑制试验：以实施例和对比例制得的中药组合物进行试验。
具体试验如下：
以0.5 g/L的L-酪氨酸为底物，按表3顺序加入PBS溶液及提取液后，放入37℃恒温水浴锅中恒温，再加入0.4 mL的100 U/mL的酪氨酸酶水溶液，立刻混匀，37℃温育反应10min，迅速移入比色皿中，测定溶液在475 nm处的吸光度。
对酪氨酸酶抑制率计算公式为：
抑制率/%=[(Aa-Ab)-(Ac-Ad)]/(Aa-Ab)×100%；
式中，Aa为含底物、酪氨酸酶测活体系吸光度；Ab为含底物测活体系吸光度；Ac为含底物、酪氨酸酶、中药组合物测活体系吸光度；Ad为含底物、中药组合物测活体系吸光度。
表3
组别 提取液/mL PBS溶液/mL L-酪氨酸溶液/mL 酪氨酸酶溶液/mL
1 0 1.8 0.8 0
2 0 1.4 0.8 0.4
3 0.2 1.6 0.8 0
4 0.2 1.2 0.8 0.4
图1是实施例1-11和对比例1-12在相同浓度下对酪氨酸酶的相对抑制率比较图，图2是实施例1制得的中药组合物和对比例1的牡丹皮提取物在不同浓度下对酪氨酸酶活性的影响示意图。
由图1可以看出，本发明实施例1-3制备得到的中药组合物对酪氨酸酶的相对抑制率均高于对比例1-6得到的单一提取物以及对比例7-12得到的中药组合物对酪氨酸酶的相对抑制率，这说明本发明所述的中药组合物具有比任何单一提取物以及任意其中五种原料制备的中药组合物都更好的美白功效，这说明表明中药组合物各组分之间可以起到协同增效的作用，进一步验证了中药配伍的合理性。
由图2可以看出，随着提取物加入量的增加，抑制率逐渐增强，并且在等质量浓度时，实施例1的酪氨酸酶抑制率要高于对比例1。另外，通过测试吸光度与浓度曲线，可得出实施例1中药组合物物酪氨酸酶半抑制率为53.4 mg/L，而对照品曲酸的半抑制率为6.9mg/L，其曲酸当量为7.739＜10，表明该中药组合物具有很好的美白功效。
2、抗氧化功效研究——DPPH自由基清除实验：以实施例和对比例制得的中药组合物进行试验。
具体试验如下：
准确称取DPPH试剂47.7 g，定容至100 mL棕色容量瓶，取其中5 mL用无水乙醇定容至50 mL棕色容量瓶，得到DPPH测试液（47.7 mg/L）。分别移取2mL DPPH测试液，按表4所示分别加入0.1 mL实施例1-11及对比例1-12中制得的中药组合物和单一提取物，再加入适量无水乙醇，使其总质量相等。充分混合后在暗处静置30 min，以无水乙醇为空白对照，于517 nm处测定其吸光度，并设置维生素C为对照，按照以下公式计算各提取液对DPPH的清除率：
DPPH清除率(%)=[1-(As-Ar)/A0]×100%；
式中：As为提取液与DPPH反应体系的吸光度；Ar为提取液-无水乙醇的吸光度；A0为空白对照无水乙醇的吸光度。
表4
吸光度 提取液加入量(mL) DPPH测试液(mL) 无水乙醇(mL)
A0 0 2 1
Ar 0.1 0 2.9
As 0.1 2 0.9
DPPH自由基清除率一定程度上反映了其抗氧化能力，其清除率越高，表明其抗氧化程度越好，抗衰老效果也越好，所以可以通过组合物对清除DPPH自由基能力的研究来判断其抗衰老效果。维生素C是化妆品行业公认的高效抗氧化剂，本次实验以维生素C为对照，考察其抗氧化能力。
经过多组实验得出各实施例以及对比例的半抑制浓度，如表5所示，从图中可以看出，对照品维生素C的DPPH半抑制浓度(IC50)为37.533 μg/mL，而实施例2半抑制浓度(IC50)为45.336 μg/mL，两者的IC50相差无几，表明本发明所述中药组合物拥有良好的DPPH清除能力，同时，由表5可以看出，实施例1-3的DPPH半抑制浓度IC50明显低于对比例1-6中单一中药组分，这说明实施例1-3拥有比对比例1-6更好的抗氧化能力，这表明本发明所述中药组合物的抗氧化能力要优于单一提取物，同时，实施例1-3的DPPH的半抑制浓度IC50要低于其他实施例，更加验证了组方配伍的合理性。另外，从表5中还可以看出，实施例1-3的DPPH半抑制浓度IC50明显低于对比例7-12中含任意五种原料制备得到的中药组合物，这也说明本发明所述中药组合物的抗氧化能力要由于缺少任一组分的中药组合物，这六种组分相互配合，协同增效，缺一不可。
表5美白抗衰组合物DPPH自由基清除实验结果
样品名称 DPPH半抑制浓度IC50(μg/mL)
维生素C 37.533
实施例1 52.158
实施例2 45.336
实施例3 55.236
实施例4 68.159
实施例5 70.125
实施例6 64.156
实施例7 80.126
实施例8 72.134
实施例9 108.941
实施例10 92.315
实施例11 95.189
对比例1 68.175
对比例2 82.367
对比例3 90.872
对比例4 125.298
对比例5 147.398
对比例6 139.594
对比例7 91.425
对比例8 102.459
对比例9 109.654
对比例10 124.364
对比例11 145.898
对比例12 196.424
3、抗氧化能力研究——·OH自由基清除实验：以实施例和对比例制得的中药组合物进行试验。
具体试验如下：
采用Fenton反应产生羟自由基。反应体系中先加入1.0 mL H2O2溶液(9 mmol/L)、1mL水杨酸-乙醇溶液(9 mmol/mL)、1 mL实施例和对比例制得的中药组合物和单一提取物，再加入1 mL H2O2 (8.8mmol/mL)，于37℃水浴反应30 min，以无水乙醇为空白对照，于510nm处测定其吸光度，并设置维生素C为对照，按照以下公式计算各提取液对·OH的清除率：
·OH清除率（%）=[(A0-Ax-Ax0)/A0]×100%
式中：Ax为提取液反应体系的吸光度；Ax0为不加H2O2的样品的吸光度（以无水乙醇代替H2O2）；A0为空白对照无水乙醇的吸光度。
表6 组合物对·OH自由基清除能力实验结果
样品名称 对·OH的清除率(%)
维生素C 83.5
实施例1 80.3
实施例2 82.6
实施例3 77.5
实施例4 60.4
实施例5 62.1
实施例6 67.2
实施例7 64.6
实施例8 58.9
实施例9 56.3
实施例10 58.2
实施例11 61.3
对比例1 73.2
对比例2 66.3
对比例3 63.4
对比例4 58.9
对比例5 46.7
对比例6 53.4
对比例7 63.5
对比例8 59.8
对比例9 50.1
对比例10 46.2
对比例11 41.6
对比例12 35.4
以维生素C作为阳性对照，考察其·OH自由基清除能力，结果如上表6所示，当加入同质量的组合物或单一提取物时，实施例1-3拥有与维生素C相近的·OH自由基清除率，这表明本发明所述中药组合物拥有良好的·OH自由基清除能力。且实施例1-3的对·OH自由基的清除率比对比例1-6和实施例4-11更高，表明该中药组合物具有比对比例的单一提取物更好的抗氧化能力，具有协同增效的效果，组方配伍合理，进一步表明该中药组合物具有良好的抗氧化、抗衰老能力。另外，实施例1-3的对·OH自由基的清除率比对比例7-12更高，这也说明本发明所述中药组合物中缺少任意一种制备原料得到的中药组合物的抗氧化能力均比实施例1-3差，这说明本发明所述的中药组合物的六种制备原料协同增效，缺一不可。
4、B16细胞黑色素合成和细胞增殖实验：
样品处理：将实施例2制得的中药组合物用RPMI-1640不完全培养基分别稀释为20mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L、100 mg/L的样品溶液，并用0.22 μm的无菌滤头过滤后备用。
（1）B16细胞黑色素含量的测定
将培养的第3代B16细胞以1×104个/mL密度接孔于6孔板，24 h后换液。添加含不同质量浓度样品的培养基，每一质量浓度设3个复孔。对照组以RPMI-1640培养基代替样品溶液，在37℃，5% CO2孵育72 h后，弃去上清液。每孔加入2.5 g/L胰蛋白酶消化液1 mL，于室温下消化5 min，再加入4 mL培养基中止消化，并吹打成单细胞悬液。取0.5 mL作细胞计数，其余细胞悬液于1500 r/min离心10 min，弃上清液，加入1 mL的1 mol/L的NaOH溶液，并在90℃水浴中孵育2 h后，在酶标仪490 nm处测其吸光度。按下列公式计算样品对黑色素合成的抑制率：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
（2）MTT法测定B16细胞的增殖
以质量浓度为100 mg/L的熊果苷作为阳性对照样品。选择对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后，以RPMI-1640培养基配成密度为1×105个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔100 μL，于37℃，5% CO2培养箱内培养。贴壁24 h后，分别加入含不同质量浓度样品的培养液，对照组加等体积的细胞悬液，并设空白对照组加等体积的培养基，每孔100 μL。每一质量浓度设3个复孔，37℃，5% CO2培养箱内培养72 h后，MTT法于酶标仪570nm处测定吸光度。按下列公式计算细胞相对增殖率：
细胞相对增殖率＝(A-C)/(B-C)×100%；
式中A为加入组合物各浓度平均吸光度；B为对照组平均吸光度；C为空白组平均吸光度。
图3是实验过程中得到的中药组合物对B16细胞黑色素抑制率和细胞相对增殖率的影响示意图。从图3中可知，在30-150 mg/L浓度范围内，随着中药组合物浓度的升高，细胞黑色素合成抑制率不断提高，当浓度为150mg/L时，对细胞黑色素合成抑制率达到了40%以上，表明该组合物在细胞水平具有良好的美白功效。同时，由图3还可以看出，在所述中药组合物30-150 mg/L浓度范围内，细胞的相对增值率普遍在90%以上，表明该组合物对黑素细胞具有非常好的安全性。
5、红细胞溶血实验
通过红细胞溶血实验评价酶解提取物的刺激性。红细胞溶血实验是兔眼刺激性实验（Draize test）替代方法之一，基本原理是通过测定血红蛋白溶出量及变性程度来评价化学品对眼组织细胞的损伤。国际上主要将RBC实验用于评价化妆品及原料等化学品的眼刺激性研究。
表7 ECVAM化妆品产品RBC实验刺激性分级标准
L/D 分级
﹥100 无刺激性
10﹤L/D≤100 微刺激性
1﹤L/D≤10 轻度刺激性
0.1﹤L/D≤1 中度刺激性
L/D≤0.1 重度刺激性
对美白抗衰组合物提取液进行红细胞溶血实验的结果如下表8，其中HD50为50%红细胞发生溶血时的样品浓度，DI为蛋白质变性指数，L/D为HD50与DI的比值。
由表8可得，实施例1的中药组合物测试所得HD50值为346000 mg/L，DI值为0.58%，说明该组合物提取液在较高浓度下才会对红细胞造成溶血现象且极少引起蛋白质变性；同时L/D值大于100，刺激性分级为无刺激，说明该组合物提取液具有温和无刺激的特点。同时，由表8数据可得出，实施例1-3发生溶血时，样品浓度HD50比对比例1-11和实施例4-11要高，蛋白质变性指数DI却与之相比较小，表明本发明所述中药组合物要比单一提取物具有更温和、无刺激的特点，也表明中药组合物的复配可以降低单一提取物的毒副作用，使其更加天然温和、无刺激。
表8 组合物提取液红细胞溶血实验结果
样品名称 HD50(mg/L) DI(%) L/D
实施例1 346000 0.58 ﹥100
实施例2 462000 0.42 ﹥100
实施例3 398000 0.53 ﹥100
实施例4 323000 0.68 ﹥100
实施例5 289000 0.64 ﹥100
实施例6 296000 0.72 ﹥100
实施例7 342000 0.59 ﹥100
实施例8 276000 0.62 ﹥100
实施例9 302000 0.77 ﹥100
实施例10 213000 0.79 ﹥100
实施例11 276000 0.65 ﹥100
对比例1 242000 0.76 ﹥100
对比例2 256000 0.68 ﹥100
对比例3 272000 0.74 ﹥100
对比例4 305000 0.79 ﹥100
对比例5 178000 0.66 ﹥100
对比例6 239000 0.65 ﹥100
对比例7 182000 0.69 ﹥100
对比例8 104000 0.82 ﹥100
对比例9 172000 0.75 ﹥100
对比例10 164000 0.63 ﹥100
对比例11 217000 0.81 ﹥100
对比例12 156000 0.77 ﹥100
6、人体重复性体外评价实验
将应用例1和2制得的美白抗衰面膜和啫喱水各用于随机选取的30位志愿者脸部皮肤（健康、皮肤正常、无化妆品过敏史，年龄35-45岁），连续使用30天，并使用Visia面部检测仪等检测仪器追踪志愿者面部皮肤变化情况，以皮肤弹力、皱纹、光滑度为指标来评价抗衰面膜和啫喱的抗衰老效果。试验研究结果如图4所示。
人体皮肤衰老的主要表现为皮肤开始松弛、出现皱纹、变得粗糙等现象的出现，由图4可得，30位志愿者在使用添加了美白抗衰面膜和啫喱水30天后的皮肤弹性平均增加26.7%，皱纹平均减少16.9%。皮肤光滑度平均提高23.8%，皮肤衰老情况明显改善，且皮肤光亮度也有大幅提升，说明本项目研制的组合物物具备优良的美白抗衰老功效。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细结构特征，但本发明并不局限于上述详细结构特征，即不意味着本发明必须依赖上述详细结构特征才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用部件的等效替换以及辅助部件的增加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (21)

1.一种具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物，其特征在于，所述具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物的制备原料按重量份数计，由以下原料组成：牡丹皮20份、川芎20份、赤芍20份、青蒿20份、益母草20份和龙胆草20份；
或者，所述具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物的制备原料按重量份数计，由以下原料组成：牡丹皮34.28份、川芎17.14份、赤芍17.14份、青蒿17.14份、益母草17.14份和龙胆草17.14份；
或者，所述具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物的制备原料按重量份数计，由以下原料组成：牡丹皮26.66份、川芎26.66份、赤芍26.66份、青蒿13.33份、益母草13.33份和龙胆草13.33份。
2.一种根据权利要求1所述的具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）将制备原料和溶剂混合进行提取，得到提取液；
（2）对步骤（1）得到的提取液利用大孔吸附树脂进行提纯，得到所述中药组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述制备原料在和溶剂混合前先进行预处理。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述预处理包括将所述制备原料进行粉碎和混合。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述溶剂为水和/或乙醇。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述溶剂与所述制备原料的质量比为(5-20):1。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述提取的温度为40-90℃。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述提取的时间为1-3 h。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述提取的次数为至少3次。
10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述对得到提取液利用大孔吸附树脂进行提纯前先进行分离和浓缩。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述分离的方式为离心或过滤。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述分离的方式为离心。
13.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩的方式为减压浓缩。
14.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述大孔吸附树脂选自AB-8型大孔吸附树脂和/或D101型大孔吸附树脂。
15.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述利用大孔吸附树脂进行提纯包括：将得到的提取液加入大孔吸附树脂中进行吸附、洗脱和回收。
16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱包括：利用体积浓度为10-90%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液。
17.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述回收包括：将得到的洗脱液进行浓缩，加入丁二醇溶解、过滤，得到中药组合物。
18.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括根据权利要求1所述的具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物。
19.根据权利要求18所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品包括面膜、乳液、护肤霜、柔肤水、精华液、补水霜、化妆水或BB霜中的任意一种。
20.根据权利要求18或19所述的化妆品，其特征在于，在所述化妆品中，所述具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物的质量百分含量为0.05-30%。
21.根据权利要求20所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中，所述具有美白抗衰老功效的用于化妆品的外用中药组合物的质量百分含量为0.1-15%。
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