CN113295782B - 一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法 - Google Patents

一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法，采用甲醇浸泡和分次研磨的方式破坏凝胶层和背衬层，使得利多卡因完全溶于甲醇中，再过滤，取续滤液以混合流动相进行稀释制备供试品溶液进行高效液相色谱分析，在色谱分析的过程中，采用1～10％冰醋酸水溶液和甲醇作为混合流动相进行等度洗脱，优化冰醋酸水溶液中冰醋酸的含量和pH，以及等度洗脱时流动相的比例，提高了待测样品中利多卡因的稳定性和排除溶剂效应带来的干扰，可以准确测定利多卡因凝胶贴膏中利多卡因的含量，专属性强，重复性好，灵敏度高。

Description

一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法。
背景技术
带状疱疹是由长期潜伏在脊髓后根神经节或颅神经节内的水痘-带状疱疹病毒(varicella.Zoster virus，vzv)经再激活引起的感染性皮肤病。带状疱疹是皮肤科常见病，发病率呈显著上升趋势。带状疱疹后遗神经痛(postherpetic neuralgia，PHN)是常见的并发症。PHN发病率占带状疱疹患者的5％～30％，我国约有400万PHN患者。PHN多见于高龄、免疫功能低下患者，疼痛部位通常比疱疹区域有所扩大，常见于单侧胸部、三叉神经(主要是眼支)或颈部。疼痛性质多样，可为烧灼样、电击样、刀割样、针刺样或撕裂样。一种疼痛为主，或多样疼痛并存，明显扰乱患者的睡眠、情绪，影响工作和日常生活，严重可导致精神障碍和抑郁。30％～50％的患者疼痛持续超过1年，部分病程可达10年或更长。《带状疱疹中国专家共识》中指出带状疱疹后神经痛的一线治疗药物包括利多卡因凝胶贴膏，其规格为每贴(14.0cm×10.0cm)含膏量14g，每贴含利多卡因(C14H22N2O)700mg。
由于利多卡因凝胶贴膏的膏体比较硬，现有的提取方式很难将主成分完全提取出来，检测方法分离度低，使得利多卡因的含量不能准确测定，因此，探索快速、准确的测定利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的方法非常重要。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：
色谱柱为Inertsustion C18；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中，流动相A和流动相B的体积比为30～40:70～60，流动相A为1～10％冰醋酸水溶液，以氢氧化钠溶液调节其pH值至5.0-6.0；流动相B为甲醇；
在一种优选方案中，供试品溶液的制备包括如下步骤：取利多卡因凝胶贴膏，除去盖衬层，折叠剪碎后置于研钵中，先加入甲醇浸泡，将得到的浸出液转移至500ml量瓶中，再向研钵中加入甲醇充分研磨使利多卡因溶解，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后过滤；精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
由于利多卡因凝胶贴膏中背衬层与凝胶层紧密相连，提取利多卡因含量时，很难将渗透至背衬层中的利多卡因提取出来。本发明采用甲醇浸泡和分次研磨的方式破坏凝胶层和背衬层，使得利多卡因完全溶于甲醇中，再过滤，取续滤液以混合流动相进行稀释制备供试品溶液进行高效液相色谱分析，在色谱分析的过程中，采用1～10％冰醋酸水溶液和甲醇作为混合流动相进行等度洗脱，优化冰醋酸水溶液中冰醋酸的含量和pH，以及等度洗脱时流动相的比例，提高了待测样品中利多卡因的稳定性和排除溶剂效应带来的干扰，可以准确测定利多卡因凝胶贴膏中利多卡因的含量，专属性强，重复性好，灵敏度高。
对于本发明而言，流动相A为1～10％冰醋酸水溶液以氢氧化钠溶液调节其pH值至5.0-6.0，是指冰醋酸水溶液中添加冰醋酸的百分含量为1～10％，在配制的过程中加入以氢氧化钠溶液调节其pH值至5.0-6.0。其中，在流动相A中，冰醋酸的百分含量可以但不局限于1％、1.5％、2％、2.5％、2.8％、3％、3.2％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、8％或10％，进一步地，在流动相A中，冰醋酸的百分含量为2～5％。在配制的过程中，采用氢氧化钠溶液调节其pH值，具体的pH值可以但不局限于5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0。在调节pH时，氢氧化钠溶液的浓度可以但不局限于2mol/L、3mol/L、3.5mol/L、4mol/L、4.5mol/L、5mol/L或6mol/L。
在一种优选方案中，流动相A为2～5％冰醋酸水溶液，以2～6mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至5.3-5.7。
在一种更优选方案中，流动相A为3％冰醋酸水溶液，以4mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至5.5。
本发明提供的检测方法，采用色谱柱为Inertsustion C18，以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，色谱柱的长度可以根据需要进行选择，在一种优选方案中，色谱柱的长度为150～250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm，例如，Inertsustion C18(250×4.6mm，5μm)，Inertsustion C18(150×4.6mm，5μm)。
对于本发明而言，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中，流动相A和流动相B的体积比为30～40:70～60，具体而言，流动相A和流动相B的体积比可以但不局限于30:70、31:69、32:68、33:67、34:66、35:65、36:64、37:63、38:62、39:61或40:60，进一步地，流动相A和流动相B的体积比为33～37:67～63。
在本发明提供的检测方法中，色谱条件还包括：
检测波长为225～235nm；优选为228～232nm；更优选为230nm。
流速为0.5～1.5ml/min；优选为0.9～1.1ml/min；更优选为1.0ml/min。
进样量为5～50μl；优选为10～30μl；更优选为20μl。
柱温为20～30℃，优选为25℃。
本发明提供的检测方法，可以配制如下溶液，混合流动相中流动相A和流动相B的体积比为30～40:70～60，优选地，流动相A和流动相B的体积比为33～37:67～63，特别优选地，流动相A和流动相B的体积比为35:65。
利多卡因凝胶贴膏，其规格为每贴(14.0cm×10.0cm)含膏量14g，每贴含利多卡因(C14H22N2O)700mg。在制备供试品溶液时，贴膏的贴量可以一般为1贴，在制备的供试品溶液中，利多卡因的理论含量为0.1mg/ml。为了更加准确的测定利多卡因的含量，可以选择10贴，具有批次的代表作用，按照同样的方法进行检索，可以计算得到的平均含量作为利多卡因凝胶贴膏中的利多卡因含量。
供试品溶液的制备包括如下步骤：取本品(利多卡因凝胶贴膏)1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小，将得到的浸出液转移至500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次研磨使利多卡因溶解，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，即可。
对照品溶液的制备包括如下步骤：取利多卡因对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加混合流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即可。
采用本发明的技术方案，优势如下:
本发明采用甲醇浸泡和分次研磨的方式对利多卡因凝胶贴膏中利多卡因进行完全提取，再过滤，取续滤液以混合流动相进行稀释制备供试品溶液进行高效液相色谱分析，在色谱分析的过程中，采用1～10％冰醋酸水溶液和甲醇作为混合流动相进行等度洗脱，优化冰醋酸水溶液中冰醋酸的含量和pH，以及等度洗脱时流动相的比例，提高了待测样品中利多卡因的稳定性和排除溶剂效应带来的干扰，可以准确测定利多卡因凝胶贴膏中利多卡因的含量，专属性强，重复性好，灵敏度高。
附图说明
图1是实施例1中供试品溶液的色谱图；
图2是实施例1中空白辅料溶液色谱图；
图3是实施例1中对照品溶液的色谱图；
图4是利多卡因的线性图；
图5是对比例2中空白辅料溶液色谱图；
图6是对比例2中供试品溶液色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
实施例1
高效液相色谱条件：
仪器：高效液相色谱仪，检测器：紫外检测器(VWD)。
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱填充，型号为Inertsustion C18(250×4.6mm，5μm)，以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中，流动相A为3％冰醋酸水溶液，以4mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至5.5，流动相B为甲醇，在混合流动相中流动相A和流动相B的体积比为35:65。检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温25℃。
供试品溶液的制备包括如下步骤：取本品(利多卡因凝胶贴膏)1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小，将得到的浸出液转移至500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次研磨使利多卡因溶解，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，即可。
空白辅料溶液的制备包括如下步骤：取空白贴1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。
对照品溶液的制备包括如下步骤：取利多卡因对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加混合流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即可。
取上述溶液各20μl，进样分析，记录色谱图，具体谱图见图1、图2和图3。
由色谱图可见，空白辅料产生的峰不干扰主成分出峰且分离效果较好，利多卡因峰响应较好，检测灵敏度高。
对实施例1中的检测方法进行验证，如下：
1、系统适用性、专属性试验
1.1、空白干扰及分离试验
取利多卡因凝胶贴膏与空白贴(除不包含利多卡因以外，其他辅料与利多卡因凝胶贴膏相同)按照表1配制如下溶液。
表1干扰试验溶液配制
Figure BDA0003038139590000051
精密量取上述空白辅料溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察空白辅料与主成分之间的出峰情况，结果见表2。
表2干扰试验结果
Figure BDA0003038139590000052
Figure BDA0003038139590000061
由上述试验结果可以看出：空白辅料产生的峰不干扰主成分出峰且分离效果较好。详见图1供试品溶液，图2空白辅料溶液。
1.2、强制降解试验
取表1中配制的空白辅料贮备液、供试品贮备液按照表3配制如下溶液。
表3强制降解试验溶液配制
Figure BDA0003038139590000062
Figure BDA0003038139590000071
精密量取上述各破坏溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察各破坏条件下主成分峰纯度，结果见表4。
表4强制降解试验结果
Figure BDA0003038139590000072
Figure BDA0003038139590000081
由上述试验结果可以看出：本品在氧化、光照、酸、碱、高温各破坏条件下主峰纯度均大于980，表明无其他成分干扰主峰出峰。
1.3、滤膜吸附
本发明的检测方法中采用针式滤器进行样品处理，现考察使用不同品牌针式滤器与离心处理的样品对利多卡因含量的测定是否有影响。
供试品溶液：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取10ml离心备用，另使用不同针式滤器过滤3ml、5ml、8ml备用，取离心处理及滤器处理的续滤液各2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述各供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表5。
表5滤膜吸附考察结果
Figure BDA0003038139590000082
注：针式滤器A信息：来源为上海安谱实验科技股份有限公司，规格为13mm 0.45μm，批号为M8061642；针式滤器B信息：来源为上海安谱实验科技股份有限公司，规格为13mm0.22μm，批号为S0321609；
从上述实验结果可以看出，供试品溶液制备时使用针式滤器过滤对利多卡因含量的测定无影响。
1.4、线性及范围
利多卡因贮备液：称取利多卡因对照品10mg，置10ml量瓶中，加混合流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
线性溶液：精密量取利多卡因贮备液0.8ml、0.9ml、1ml、1.1ml、1.2ml分别置10ml、10ml、10ml、10ml、10ml量瓶中，作为杂质线性80％、90％、100％、110％、120％的溶液。
设进样浓度(mg/ml)为横坐标(X轴)，峰面积为纵坐标(Y轴)，利多卡因及杂质的线性范围及线性方程见表6，具体线性图如图4所示。
表6利多卡因的线性范围及线性方程
Figure BDA0003038139590000091
从上述实验结果可以看出，利多卡因在浓度0.082mg/ml～0.123mg/ml范围内呈良好线性，回归系数0.9995＞0.999，Y轴截距偏差为0.95％＜2.0％，残差平方和为43.1。
1.5、溶液稳定性试验
供试品溶液：取本品1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照品溶液：取利多卡因对照品，加混合流动相制成每1ml中约含0.1mg的溶液。
分别于配制后0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、18h、20h测定，考察供试品溶液与对照品溶液的稳定性，结果见表7。
表7利多卡因凝胶贴膏供试品溶液稳定性数据统计
Figure BDA0003038139590000101
从上述实验结果可以看出，对照品溶液在20小时内11次进样峰面积RSD为0.32％＜2.0％，保留时间RSD为1.19％＜2.0％，供试品溶液在20小时内11次进样峰面积RSD为0.69％＜2.0％，保留时间RSD为1.22％＜2.0％，表明对照品溶液与供试品溶液在20小时内稳定性良好。
1.6、精密度试验
1.6.1、重复性试验
供试品溶液：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照品溶液：取利多卡因对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加混合流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述供试品溶液与对照品溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算本品的重复性结果见表8。
表8重复性结果汇总表
Figure BDA0003038139590000111
从上述实验结果可以看出，10份供试品检测结果均符合质量标准要求，在90.0％～110.0％范围内，平均为100.1％，RSD为0.18％＜2.0％，重复性结果良好。
1.6.2、中间精密度试验
取利多卡因凝胶贴膏(批号：201124321)10贴，照重复性试验项下方法，由不同分析人员使用不同的仪器在不同时间进行检测，结果见表9。
表9利多卡因凝胶贴膏含量中间精密度试验结果
Figure BDA0003038139590000112
Figure BDA0003038139590000121
注：重复性检测使用仪器编号：200104A，试验人员：NYB，试验时间：2021.02.23；中间精密度检测使用仪器编号：100156A，试验人员：BM，试验时间：2021.02.24。
以上结果表明，由不同分析人员使用不同的仪器在不同时间进行检测，20份供试品检测结果均符合质量标准要求，在90.0％～110.0％范围内，平均为100.5％，RSD为1.17％＜2.0％，中间精密度结果良好。
1.6.3、进样精密度试验
取线性项下100％的对照品溶液20μl连续进样6次，考察进样精密度，结果见表10。
表10进样精密度考察结果(以峰面积计)
Figure BDA0003038139590000122
从上述实验结果可以看出，各对照品溶液的进样精密度RSD均小于2.0％，进样精密度良好。
1.7、准确度试验
对照品溶液的配制：照线性100％配制方法进行操作。
回收率溶液(80％)配制：取空白贴膏除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，再精密称取利多卡因原料药560mg，也置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀(平行3份)。
回收率溶液(100％)配制：取空白贴膏除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，再精密称取利多卡因原料药560mg，也置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入700ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀(平行3份)。
回收率溶液(120％)配制：取空白贴膏除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，再精密称取利多卡因原料药560mg，也置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入840ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀(平行3份)。
精密量取上述对照品溶液与各回收率溶液20μl，注入液相色谱仪，回收率结果见表11。
表11准确度试验结果
Figure BDA0003038139590000131
从上述实验结果可以看出，本品回收率在100.3％～100.8％范围内，平均回收率为100.6％，9份回收率RSD为0.24％＜2.0％，回收率在98％～101％范围内，符合验证要求。
1.8、耐用性试验
为考察本发明的检测方法对色谱条件发生微小变化的耐受程度，取供试品溶液及对照品溶液进行了耐用性试验，考察因素包括流动相不同比例(混合流动相中流动相B的体积含量为63％～67％)、流动相A其pH值(5.3～5.7)、检测波长(228nm～232nm)、流速(0.9～1.1ml/min)、不同色谱柱长度，考察各条件下利多卡因的含量的测定情况。
供试品溶：取本品1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀。
对照品溶液：取利多卡因对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加混合流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
1.8.1、流动相初始有机相比例的变化
分别考察了混合流动相中流动相B的体积含量为63％、65％、67％的条件下的耐用性，测定结果见表12。
表12耐用性考察(混合流动相中流动相B的体积含量)
Figure BDA0003038139590000141
注：拟定条件采用重复性1的数据(下同)。
从上述实验结果可以看出，混合流动相中流动相B的体积含量在63％～67％范围内变化时，利多卡因含量的测定结果基本一致。
1.8.2、流动相A其pH值的变化
分别考察流动相A中其pH值在5.3、5.5、5.7范围内的变化，测定结果见表13。
表13耐用性考察(流动相A其pH值变化)
Figure BDA0003038139590000142
Figure BDA0003038139590000151
从上述实验结果可以看出，流动相A其pH值在5.3～5.7范围内变化时，利多卡因含量的测定结果基本一致。
1.8.3、检测波长的变化
分别考察检测波长在228nm、230nm、232nm范围内的变化，测定结果见表14。
表14耐用性考察(检测波长)
Figure BDA0003038139590000152
Figure BDA0003038139590000161
从上述实验结果可以看出，检测波长在228nm～232nm范围内变化时，利多卡因含量的测定结果基本一致。
1.8.4流速的变化
分别考察流速在0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min范围内的变化，测定结果见表15。
表15耐用性考察(流速)
Figure BDA0003038139590000162
从上述实验结果可以看出，流速在0.9ml/min～1.1ml/min范围内变化时，利多卡因含量的测定结果基本一致。
1.8.5更换色谱柱
分别考察了不同色谱柱对本品的检测情况。检测结果见表16。
表16耐用性考察(色谱柱)
Figure BDA0003038139590000163
Figure BDA0003038139590000171
注：柱1为Inertsustion C18(4.6mm×250mm 5μm)，S/N：8KR98234；柱2为Inertsustion C18(4.6mm×150mm 5μm)；S/N：2B0093282；
从上述实验结果可以看出，更换不同长度的色谱柱，利多卡因含量的测定结果基本一致。
对比例1
色谱条件与实施例1相同，区别在于在供试品溶液时主成分利多卡因的提取方式不同，提取方式具体如下：
浸泡提取：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪成小条，置干燥的锥形瓶中，向锥形瓶中加入甲醇250ml，超声1小时，过滤，精密量取续滤液1ml置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀。另取利多卡因凝胶贴膏1贴，重复浸泡提取操作。
匀浆提取：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，贴膏刮取膏体0.6g，置离心管中，加甲醇进行匀浆(匀浆转速15000转/分钟)至膏体破碎，将所得溶液转移至500ml量瓶中，用甲醇多次洗涤匀浆机刀头及离心管，合并洗液后用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取量瓶中配制好的溶液2ml至10ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀。另取利多卡因凝胶贴膏1贴，重复匀浆提取操作。
纯甲醇震荡转移提取：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，折叠后剪碎，置干燥的锥形瓶中，向锥形瓶中加入甲醇90ml，震荡30分钟，借助漏斗，转移至500ml量瓶中，重复操作五次，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml置10ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为震荡处理的供试品溶液；将残留碎膏体的锥形瓶中加入100ml甲醇，作为震荡处理后残留样品溶液，备用。另取利多卡因凝胶贴膏1贴，重复纯甲醇震荡转移提取操作。
65％甲醇震荡转移提取：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，折叠后剪碎，置干燥的锥形瓶中，加65％甲约90ml，震荡30分钟，借助漏斗，转移液体至500ml量瓶中，重复操作五次，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml置10ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为震荡处理的供试品溶液；将残留碎膏体的锥形瓶中加入100ml甲醇，作为震荡处理后残留样品溶液，备用。另取利多卡因凝胶贴膏1贴，重复65％甲醇震荡转移提取操作。
研磨提取：取利多卡因凝胶贴膏1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
精密量取上述各提取方式下获得的供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察各供试品溶液中主成分利多卡因的含量，结果见表17。
表17提取方式的选择检测结果
Figure BDA0003038139590000181
由上述实验结果可见，研磨提取能够直接将主成分提取完全，通过取整贴进行含量均匀度进行测定，两次测定的含量基本相同，重复性好，可以准确测定利多卡因凝胶贴膏中利多卡因的含量。
对比例2
高效液相色谱条件：
仪器：高效液相色谱仪，检测器：紫外检测器(VWD)。
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱填充，型号为Inertsustion C18(250×4.6mm，5μm)，以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中，流动相A为3％冰醋酸水溶液，以4mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至5.5，流动相B为甲醇，在混合流动相中流动相A和流动相B的体积比为20:80。检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温25℃。
供试品溶液的制备包括如下步骤：取本品(利多卡因凝胶贴膏)1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小，将得到的浸出液转移至500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次研磨使利多卡因溶解，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，即可。
空白辅料溶液的制备包括如下步骤：取空白贴1贴，除去盖衬层，折叠后用剪刀剪碎，置研钵中，先加入100ml甲醇浸泡1小时，将得到的浸出液转入500ml量瓶中，再向研钵中加入200ml甲醇分次充分研磨，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。
取上述溶液各20μl，进样分析，记录色谱图，具体谱图见图5和图6。
试验结果发现，主峰与辅料峰重合，无法准确测定利多卡因凝胶贴膏中利多卡因的含量。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (1)

1.一种利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量的检测方法，其特征在于，该检测方法采用高效液相色谱对利多卡因凝胶贴膏中利多卡因含量进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：
色谱柱为Inertsustion C18，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中，流动相A和流动相B的体积比为35:65，所述流动相A为3%冰醋酸水溶液，以4mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至5.5；所述流动相B为甲醇；检测波长为230nm；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；
供试品溶液的制备包括如下步骤：取利多卡因凝胶贴膏，除去盖衬层，折叠剪碎后置于研钵中，先加入甲醇浸泡，将得到的浸出液转移至500ml量瓶中，再向研钵中加入甲醇充分研磨使利多卡因溶解，并转移至上述500ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后过滤；精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用所述混合流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
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