CN113293133B - 一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株BPT‑1218，所述细胞保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:C2020137。本发明还公开了人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株作为研究肿瘤发生发展机理的细胞模型以及在筛选抗肿瘤药物中的应用。本发明的肿瘤细胞系可作为研究乳腺恶性叶状肿瘤的模型，对于了解人乳腺恶性叶状肿瘤病人的发病机制有很大的帮助。

Description

一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株及其应用

技术领域

本发明涉及医学技术领域，具体涉及一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株及其应用。

背景技术

乳腺叶状肿瘤是由乳腺间质和上皮组织两种成分组成的纤维上皮性肿瘤，约占乳腺肿瘤的0.3％～1％。根据叶状肿瘤的临床病理特征，WHO将其分为良性、交界性和恶性叶状肿瘤3类。其中，良性叶状肿瘤较交界性、恶性叶状肿瘤发病年龄小、病程长、生长缓慢，而交界性和恶性叶状肿瘤血供更丰富、肿瘤呈浸润性生长、细胞核异型性明显、核分裂活跃并伴有间质明显过度生长。

目前，在乳腺叶状肿瘤的临床诊断中，空心针穿刺活检阳性率可达83％～93％。然而，化疗、内分泌治疗、靶向治疗、免疫治疗等对乳腺叶状肿瘤的治疗效果均不佳，其主要治疗方式仍为手术治疗。因此，进一步提高乳腺叶状肿瘤术前诊断准确率对后续手术治疗方案的选择显得尤为重要。除此之外，精准化、个体化医疗的不断推广也使得科研工作者不得不探索效率更高、创伤更小、靶点更精准的乳腺叶状肿瘤相关治疗方案。

人乳腺叶状肿瘤的发生、发展机制的研究以及相关临床诊治方案的探索和改进一直都是热点问题，而建立良好的细胞实验模型是开展相关研究的基础之一。提供理想的细胞模型是人乳腺叶状肿瘤相关研究及探索道路中亟需解决的问题

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一株人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株，以填补目前国内外人群来源的叶状肿瘤细胞系的空缺，本发明的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株能用于研究乳腺叶状肿瘤发生发展机理及相关药物。本发明中的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞己保藏于中国典型培养中心，保藏日期为2020年12月18日:保藏地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2020137。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下几个方面:

在第一个方面，本发明提供了一株人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株BPT-1218，所述细胞系保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2020137。

在第二个方面，本发明提供了一种用于研究肿瘤发生发展机理的细胞模型，所述细胞模型为权利要求1所述的细胞系。

优选地，所述肿瘤为恶性肿瘤。

优选地，所述肿瘤为乳腺恶性叶状肿瘤。

在第三个方面，本发明提供了上所述细胞株在筛选抗肿瘤药物中的应用。

优选地，所述肿瘤为人乳腺恶性叶状肿瘤。

本发明的有益效果为：本发明的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系是从中国人来源建立的，建系时间短，生物遗传性稳定，且目前市面上缺乏人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系，以该人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系作为研究模型，对于了解乳腺叶状肿瘤病人的发病机制有很大的帮助。

附图说明

图1是本发明人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株的形态学观察示意图

图2是本发明人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株的STR检测结果观察示意图

图3是本发明人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株的免疫组化实验结果观察示意图

图4是本发明人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株的细胞爬片免疫组化结果观察示意图

具体实施方式

本发明涉及微生物动物细胞系领域，具体涉及一株人乳腺恶性叶状肿瘤细胞及其建立方法。本发明中的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞来源于患有恶性叶状肿瘤的的女病人的右乳肿物，命名为人乳腺恶性叶状肿瘤恶性细胞BPT-1218，己保藏于中国典型培养中心，保藏日期为2020年12月18日；保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2020137。

为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例1

本发明的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株通过以下方法获得：

一、原代组织的制备与检测

1、病人信息概述

该患者，女，诊断为恶性叶状肿瘤，在本次恶性叶状肿瘤组织切除手术之前经历过一次恶性叶状肿瘤切除手术，而此次复发的恶性叶状肿瘤除了本身巨大外，还伴有淋巴结转移，病理报告显示乳腺梭形细胞肿瘤，肿瘤边界不清，呈浸润性生长，细胞异型性明显，核分裂象多见，约27个/HPF，可见此例恶性叶状肿瘤侵袭性非常强恶性度非常高，因此本发明的恶性叶状肿瘤细胞系对研究恶性叶状肿瘤的转移和进展等具有非常重要的意义。

2、获得原代细胞的具体步骤

(1)获得新鲜的上述病例的临床手术切除的恶性叶状肿瘤标本，取材严格保证无菌。用组织块放置于10ml玻璃培养皿中，用含10％胎牛血DMEM F12双抗培养液漂洗，去除多余血液及周边结缔组织，用眼科剪将组织剪切成小块(每块约1mm³大小)。

(2)用5mL含10％胎牛血DMEM F12双抗培养液均匀润湿组织小块后，将组织小块用眼科剪剪碎后置于50mL离心管中，加入含1.5mg/mL胶原酶I、1.5mg/mL胶原酶II、6％胰酶的10％胎牛血DMEM F12双抗培养液，置于37℃温箱消化1.5h。

(3)将消化后的细胞悬液用100uM滤网过滤后离心，离心速度1000rpm，8min，升速9，降速9。

(4)离心后弃去上清，用含EGF20 ng/ml的20％胎牛血DMEM F12双抗培养液重悬后接种于25cm培养瓶中。加入含EGF20 ng/ml的20％胎牛血DMEM F12双抗培养液后将培养瓶瓶底朝上放置于37℃，5.0％CO₂温箱内静置培养。待细胞贴壁生长，密切观察细胞生长状况，换液。

二、人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株的建立

(1)传代

传代培养的具体步骤如下：

用0.25％胰酶消化原代细胞，待细胞变圆终止消化，1000rpm离心3min后，用完全培养基(含20％胎牛血清、EGF20ng/ml和胰岛素16iu/ml)重悬后放入培养瓶中，放置于37℃，5.0％CO₂温箱内静置培养。初期换液采用半换液方法培养，待细胞传代20代之后，采取全换液方法培养，密切观察细胞生长状况。

(2)筛选

待步骤(1)中的细胞生长稳定后，采用反复贴壁法并使用含20％胎牛血DMEM F12双抗培养液进行培养，其目的是为了促进上皮和间质细胞生长，抑制其中纤维细胞生长。之后经反复冻存，以稳定传代80代以上。稳定后用新鲜含20％胎牛血DMEM F12双抗培养液培养。得到本发明的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株。

实施例2人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株的鉴定

对实施例1得到的人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株进行鉴定，具体包括以下几种方法：

1.人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株细胞形态学鉴定，结果如图1所示。

2.人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株STR鉴定，结果如表1、2和图2所示。

表1：

表2：

3.人乳腺恶性叶状肿瘤组织HE染色，结果如图3所示。

4.人乳腺恶性叶状肿瘤组织免疫组化实验，检测标志物包括：ALK、CK、CK5-6、Ki67、ER、PR。结果如图4所示。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (4)

1.一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞株BPT-1218，其特征在于，所述细胞系保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2020137。

2.一种用于研究肿瘤发生发展机理的细胞模型，其特征在于，所述细胞模型为权利要求1所述的细胞系；所述肿瘤为乳腺恶性叶状肿瘤。

3.权利要求1所述的细胞株在筛选抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺恶性叶状肿瘤。

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