CN113288823B - 一种柚种皮果胶面膜精华及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种柚种皮果胶面膜精华及其制备方法。本发明提供的柚种皮果胶面膜精华由柚种皮果胶、桃果胶、甘油、透明质酸钠、海藻糖、尿囊素、山梨酸钾和去离子水组成。制得的柚种皮果胶面膜精华具有保湿，抗氧化，缓解衰老，清除毛孔中的污垢，防止色素沉着，预防皱纹等功效。而且本发明面膜的活性成分均是从食品废弃物中提取得到，可以提高农产品的利用率，将柚子核和桃渣等农产品废弃物进行可资源化利用，不仅可以减少环境污染，还可以提高面膜的安全性，降低生产成本，是一种较为理想的环保型保湿面膜。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种柚种皮果胶面膜精华及其制备方法。
背景技术
随着生活水平的提高，使用化妆品的人越来越多，尤其注重对皮肤的保养，面膜成为日常保养品。常用的面膜有撕拉型面膜、泥膏面膜、乳霜面膜、贴式面膜。面膜在生产过程中可能会有大量的化学物质残留，刺激皮肤。市面上主打美白、保湿、抗敏、祛痘面膜，面膜中常会添加重金属和激素是两类最重要的非法添加物。重金属能美白，改善皮肤状态；激素能够增加皮肤弹性，对皱纹有明显作用，防止皮肤老化，祛痘效果明显。消费者长期使用此类面膜会引发一系列皮肤问题，严重的会对身体造成伤害。为确保消费者的使用安全若能采用天然产物进行替代，将会减少有害物质的使用。
果胶是一种复杂的相对分子量在1～40万之间的多糖聚合物，具有良好的增稠、增香、乳化、稳定和胶凝的作用，在食品，医药品、化妆品等领域有着巨大的市场需求。近年来，果胶在化妆品领域的应用越来越热门。
专利文献CN108210370A公开了一种柑橘果胶成分的面膜精华液，该柑橘果胶成分的面膜精华液由柑橘果胶、透明质酸钠、海藻酸钠、甘油、牛油果树果脂、鲸蜡硬脂醇、烟酞胺、花青素提取物、维生素C、维生素E、氯化钠和去离子水组成。相比于传统配方，该面膜液有更好的补水保湿和提供营养的作用，有助于运动后皮肤大量失水和丢失营养后的恢复。
专利文献CN103315928A公开了一种红枣果胶面膜及其制备方法，该面膜由红枣果胶、甘油、NaCl、吐温-80、硬脂酸、1,3丁二醇、尼泊金甲酯、香精、聚乙二醇双硬脂酸酯和蒸馏水组成。该面膜中使用的红枣果胶其分子链上羧基很多，较易键合红枣中独特的抗氧化物质，因而制得的红枣果胶面膜具有较强的抗氧化性。
柚(Citrus grandis)是芸香科柑橘亚科柑橘属水果，在我国福建、江西、广东、广西等南方地区大量种植，柚子每果种子大约有60～120粒，约占柚子总重量的5％左右，种皮占种子总重量30％左右，种皮果胶含量大概为3.7～3.8％。随着柚子栽培面积的增大，柚子产量也不断上升，柚果的废弃物也相对增多，尤其是柚种子一般都是直接扔掉，未在工业生产中得到应用，不仅造成了大量的资源浪费，还会带来较大的环境污染。目前，对于柚子的资源化利用多集中于柚子的果皮、果肉和柚子幼果的开发和利用，对于柚子种子的资源化利用相对较少。
发明内容
本发明提供了一种柚种皮果胶面膜精华及其制备方法。本发明提供的柚种皮果胶面膜精华是以柚种皮果胶和桃果胶为活性成分，以甘油、海藻糖和透明质酸钠为保湿剂，以尿囊素为润肤剂制成。制得的柚种皮果胶面膜精华具有保湿，抗氧化，缓解衰老，清除毛孔中的污垢，防止色素沉着，预防皱纹等功效，其在抗氧化和保湿效果持续性方面尤为显著。
本发明提供了一种柚种皮果胶面膜精华，由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.2～1％、桃果胶0.2～1％、甘油1～9％、透明质酸钠0.2～1％、海藻糖0.4～0.6％、尿囊素0.1～0.3％、山梨酸钾0.1～0.2％，余量为去离子水。
进一步地，所述的柚种皮果胶面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.4％、桃果胶0.2％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水。
进一步地，所述柚种皮果胶的提取方法为：
取柚子核，加入水，所述柚子核与水的固液比为1g:3mL，加热到100℃，水浸提2～4h，在孔径20目，压力101.325kpa的条件下过滤60min，取滤液，将滤液在-80℃下冷冻12h后，在20℃条件下干燥48h，即得。
进一步地，所述桃果胶的提取方法为：
A将桃渣加入95％(v/v)的乙醇中进行分散混匀，得悬浮液；
B将步骤A得到的悬浮液进行抽滤，接着加入95％(v/v)的乙醇，混匀后抽滤，接着再加入丙酮，混匀后抽滤，取白色粉末状固体，于40℃烘箱中干燥至恒重，得桃粉；
C将步骤B得到的桃粉加入电解水溶液，超声提取2次，每次提取1h，离心，得残渣和上清液，将上清液合并后真空浓缩至原体积的1/3，按1:2.5的比例加入95％(v/v)的乙醇进行醇沉，静置2h，得粗果胶液；
D将步骤C得到的粗果胶液进行离心，收集固体果胶沉淀，用72％(v/v)的乙醇进行反复冲洗，冷冻干燥，即得。
进一步地，所述步骤A中桃渣与乙醇的固液比为1g:6.4mL。
进一步地，所述步骤B中桃渣与乙醇的固液比为1g:3.2mL，所述桃渣与丙酮的固液比为1g:3.2mL。
进一步地，所述步骤C中电解水溶液为使用0.5％(v/v)的草酸铵溶液加入水调节pH为3～7的电解水溶液，所述桃粉与电解水溶液的料液比为1g:(30～70)mL。
进一步地，所述步骤C中超声处理的条件为：所述超声提取功率为200W，超声提取时间为40～80min，所述超声提取温度为40～80℃。
另外，本发明还提供了所述的柚种皮果胶面膜精华的制备方法，包括以下步骤：
S1称取配方量中总体积50％去离子水，加热至70～80℃，加入尿囊素搅拌至完全溶解，接着加入柚种皮果胶、桃果胶、甘油、透明质酸钠和海藻糖，搅拌溶解后冷却至40～50℃，得混合液；
S2称取配方量中总体积10％去离子水，加入山梨酸钾搅拌均匀，接着加入步骤S1得到的混合液中，接着将剩余的去离子水加入，搅拌均匀，即得。
本发明提供的柚种皮果胶面膜精华中的活性成分是以柚子核和桃渣等食品废弃物为原料进行提取，从柚子核中提取得到的柚种皮果胶总半乳糖醛酸含量较高，杂质较少，水分含量低，灰分和二氧化硫等杂质含量较低，为酸性高酯果胶，安全性高，纯度较好，有抗氧化作用，胶凝性强，可以代替凝胶成分。从桃渣中提取得到的桃果胶含有丰富果酸，具有保湿功效，其还可以清除毛孔中的污垢，防止色素沉着，预防皱纹，桃果胶还含有大量的维他命B和C，促进血液循环，使面部肤色健康、红润。
本发明提供的柚种皮果胶面膜精华以柚种皮果胶作为胶凝剂，可以减少海藻酸钠等增稠剂的添加，而且柚种皮果胶耦合桃果胶相互协调可以增强柚种皮果胶的抗氧化作用，缓解皮肤衰老，同时也可以提高桃果胶的保湿，防止色素沉着，预防皱纹的作用，从而使制得的面膜具有保湿，抗氧化，缓解衰老，清除毛孔中的污垢，防止色素沉着，预防皱纹等功效，尤其是在抗氧化和保湿效果持续性方面表现的尤为突出。
与现有技术相比，本发明提供的柚种皮果胶面膜精华具有保湿，抗氧化，缓解衰老，清除毛孔中的污垢，防止色素沉着，预防皱纹等功效，其在抗氧化和保湿效果持续性方面表现的尤为突出。而且本发明面膜的活性成分均是从食品废弃物中提取得到，可以提高农产品的利用率，将柚子核和桃渣等农产品废弃物进行可资源化利用，不仅可以减少环境污染，还可以提高面膜的安全性，降低生产成本，是一种较为理想的环保型保湿面膜。
附图说明：
图1为电解水溶液的pH值对桃果胶提取的影响图；
图2为料液比对桃果胶提取的影响图；
图3为超声提取温度对桃果胶提取的影响图；
图4为超声提取时间对桃果胶提取的影响图；
图5为标准样品离子色谱图；
图6为实施例1制得的柚种皮果胶样品离子色谱图；
图7为柚种皮果胶的抗氧化性图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。本发明中所涉及的成分，均可通过市售或本领域常规技术手段获得。
一、桃果胶提取方法的摸索试验：
研究电解水溶液的pH值，电解水溶液的料液比，超声提取温度和超声提取时间对桃果胶提取效果的影响，结果采用origin8.0、Design-Expert软件进行数值分析。
本试验中桃果胶的提取方法为：
A将桃渣加入192mL体积浓度为95％的乙醇中进行分散混匀，得悬浮液；
B将步骤A得到的悬浮液进行抽滤，接着加入96mL体积浓度为95％的乙醇，混匀后抽滤，接着再加入96mL丙酮，混匀后抽滤，取白色粉末状固体，于40℃烘箱中干燥至恒重，得桃粉；
C将步骤B得到的桃粉加入电解水溶液，超声提取2次，每次提取1h，离心，得残渣和上清液，将上清液合并后真空浓缩至原体积的1/3，按1:2.5的比例加入乙醇进行醇沉，静置2h，得粗果胶液；
D将步骤C粗果胶液进行离心，收集固体果胶沉淀，用体积浓度为72％的乙醇进行反复冲洗，冷冻干燥，即得。
1、电解水溶液的pH值对桃果胶提取的影响：
1.1、试验方法：
称取桃粉20g，固定料液比1:30，超声功率200W，超声温度80℃，超声时间1h的条件下，pH分别为3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7，每个处理3个平行，计算桃果胶得率并测定特性，考查电解水溶液的pH值对桃果胶提取效果的影响。
1.2、试验结果：
试验结果如图1所示。由图1可知，电解水溶液的pH值由3升到5时，桃果胶的提取率由9.44％提高到12.28％，效果显著，然而电解水溶液的pH值继续提高，桃果胶的提取率开始下降，所以超声波辅助提取桃果胶的pH初步定为5。
2、料液比对桃果胶提取的影响：
2.1、试验方法：
称取桃粉20g，pH为5，超声功率200W，超声温度80℃，超声时间1h的条件下，固定料液分别为1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70，每个处理3个平行，计算果胶得率并测定特性，考查料液比对桃果胶提取效果的影响。
2.2、试验结果：
试验结果如图2所示。由图2可知，当料液比由1:10提高到1:50时，桃果胶的提取率由9.25％显著提高到18.53％，当料液比提高到1:70时，桃果胶的提取率为22.00％提升不显著，此结果表明，当料液比低时，提取液的量不够多，果胶质不能充分水解并转移于液相中，当料液比增加时，桃果胶的提取率提高不明显，且耗材料，综合考虑超声波辅助提取桃果胶的料液比初步定为1:50。
3、超声提取温度对桃果胶提取的影响：
3.1、试验方法：
称取桃粉20g，固定料液比1:30，pH为5，超声功率200W，超声时间60min的条件下，超声温度分别为40、50、60、70、80℃，每个处理3个平行，计算果胶得率并测定特性，考查超声提取温度对桃果胶提取效果的影响。
3.2、试验结果：
试验结果如图3所示。由图3可知，当提取温度由40℃升高到80℃时，桃果胶的提取率由8.03％提高到9.94％，提取率增加，因为升温可以促进果胶质水解产生果胶，所以超声波辅助提取桃果胶的温度初步定为：80℃。
4、超声提取时间对桃果胶提取的影响：
4.1、试验方法：
称取桃粉20g，固定料液比1:30，pH为5，超声功率200W，超声温度80℃的条件下，超声时间分别为0mim、20min、40min、60min、80min、100min，每个处理3个平行，计算果胶得率并测定特性，考查超声提取时间对桃果胶提取效果的影响。
4.2、试验结果：
试验结果如图4所示。由图4可知，随着提取时间由0min延长到60min，桃果胶的提取率由7.67％显著提升至11.14％，当提取时间为100min时，提取率并没有显著提高，此结果表明，适当的延长提取时间可使果胶质充分水解，从而提高桃果胶产量；当提取时间过长时，桃果胶提取率没有显著提高，可能因为果胶质基本水解完全。所以超声波辅助提取桃果胶的时间初步定为：60min。
二、柚种皮果胶面膜品质的摸索试验：
1、研究配料桃果胶、柚种皮果胶、甘油、透明质酸钠的添加量对柚种皮果胶面膜品质的影响
1.1、桃果胶的用量对柚种皮果胶面膜的影响
在柚种皮果胶0.8％、甘油5％、透明质酸钠0.8％的条件下，以桃果胶面膜用量为单因素，对质量分数分别为0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％的桃果胶进行试验，确定桃果胶的最佳用量A。
1.2、柚种皮果胶的用量对柚种皮果胶面膜的影响
在桃果胶A、甘油5％、透明质酸钠0.8％的条件下，以柚种皮果胶面膜用量为单因素，对质量分数分别为0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％的柚种皮果胶进行试验，确定柚种皮果胶的最佳用量B。
1.3、甘油的用量对柚种皮果胶面膜的影响
在桃果胶A、柚种皮果胶B、透明质酸钠0.8％的条件下，以甘油面膜用量为单因素，对质量分数分别为1.0％，3.0％，5.0％，7.0％，9.0％的甘油进行试验，确定甘油的最佳用量C。
1.4、透明质酸钠的用量对柚种皮果胶面膜的影响
在桃果胶A、柚种皮果胶B、甘油C的条件下，以透明质酸钠用量为单因素，对质量分数分别为0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％的透明质酸钠进行试验，确定透明质酸钠的最佳用量D。
2、感官测试：
感官评价方法参照QB/T 1857-2013润肤膏霜和QB/T2872-2017面膜标准。由10名健康志愿者组成感官评定小组，30min内不使用任何化妆品。取一定量的待测样品涂抹在受试皮肤上，以每秒1转的速度朝一个方向旋转涂抹，直至感到有阻力时停止，按照表1的标准进行评分
表1面膜的感官评价标准
3、柚种皮果胶面膜的感官评价的结果：
经感官测试后得出：
3.1、柚种皮果胶面膜中添加0.2％的桃果胶后，润肤感和粘稠感较好，且整体评价平均得分最高，为30.3分；
3.2、柚种皮果胶面膜中添加0.4％的柚种皮果胶后，润肤感和粘稠感较好，且整体评价平均得分最高，为28.2分；
3.3、柚种皮果胶面膜中添加5％的甘油后，清爽感和粘稠感较好，且整体评价平均得分最高，为27.9分；
3.4、柚种皮果胶面膜中添加0.4％的透明质酸钠后，外观和粘稠感较好，且整体评价平均得分最高，为27.5分。
因此，本发明的柚种皮果胶面膜的最优配方为：0.2％桃果胶，0.4％柚种皮胶，5.0％甘油，0.4％透明质酸钠。
实施例1、一种柚种皮果胶的提取方法
取100g柚子核，加入300mL水，加热到100℃，水浸提4h，在孔径20目，压力101.325kpa的条件下过滤60min，取滤液，将滤液在-80℃下冷冻12h后，在20℃条件下干燥48h，即得。
实施例2、一种桃果胶的提取方法
A将30g桃渣加入192mL体积浓度为95％的乙醇中进行分散混匀，得悬浮液；
B将步骤A得到的悬浮液进行抽滤，接着加入96mL体积浓度为95％的乙醇，混匀后抽滤，接着再加入96mL丙酮，混匀后抽滤，取白色粉末状固体，于40℃烘箱中干燥至恒重，得桃粉；
C将步骤B得到的桃粉加入电解水溶液，所述电解水溶液为pH值为5的体积浓度为0.5％的草酸铵水溶液，所述所述桃粉与电解水溶液的料液比为1g:50mL；超声提取2次，每次提取1h，所述超声提取条件为：所述超声提取功率为200W，超声提取时间为60min，所述超声提取温度为80℃；离心，得残渣和上清液，将上清液合并后真空浓缩至原体积的1/3，按1:2.5的比例加入体积浓度为95％的乙醇进行醇沉，静置2h，得粗果胶液；
D将步骤C粗果胶液进行离心，收集固体果胶沉淀，用体积浓度为72％的乙醇进行反复冲洗，冷冻干燥，即得。
实施例3、一种柚种皮果胶面膜精华
所述柚种皮果胶面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.2％、桃果胶0.4％、甘油3％、透明质酸钠0.2％、海藻糖0.4％、尿囊素0.1％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水；所述柚种皮果胶为实施例1制得的柚种皮果胶，所述桃果胶为实施例2制得的桃果胶。
制备方法：
S1称取配方量中总体积50％去离子水，加热至70～80℃，加入尿囊素搅拌至完全溶解，接着加入柚种皮果胶、桃果胶、甘油、透明质酸钠和海藻糖，搅拌溶解后冷却至40～50℃，得混合液；
S2称取配方量中总体积10％去离子水，加入山梨酸钾搅拌均匀，接着加入步骤S1得到的混合液中，接着将剩余的去离子水加入，搅拌均匀，即得。
实施例4、一种柚种皮果胶面膜精华
所述柚种皮果胶面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.4％、桃果胶0.2％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水；所述柚种皮果胶为实施例1制得的柚种皮果胶，所述桃果胶为实施例2制得的桃果胶。
制备方法如实施例3类似。
实施例5、一种柚种皮果胶面膜精华
所述柚种皮果胶面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.6％、桃果胶0.5％、甘油8％、透明质酸钠0.6％、海藻糖0.6％、尿囊素0.3％、山梨酸钾0.2％，余量为去离子水；所述柚种皮果胶为实施例1制得的柚种皮果胶，所述桃果胶为实施例2制得的桃果胶。
制备方法如实施例3类似。
对比例1、一种面膜精华
所述面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
柚皮果胶0.4％、桃果胶0.2％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水；所述柚皮果胶为市售产品(购于武汉康灿生物科技有限公司)，所述桃果胶为实施例2制得的桃果胶。
制备方法如实施例3类似。
与实施例4的区别在于：将柚种皮果胶替换为柚皮果胶。
对比例2、一种面膜精华
所述面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.6％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水；所述柚种皮果胶为实施例1制得的柚种皮果胶。
制备方法如实施例3类似。
与实施例4的区别在于：缺少了桃果胶。
对比例3、一种面膜精华
所述面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
桃果胶0.6％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水；所述桃果胶为实施例2制得的桃果胶。
制备方法如实施例3类似。
与实施例4的区别在于：缺少了柚种皮果胶。
对比例4、一种面膜精华
所述面膜精华由以下成分及其重量分数组成：
红枣果胶0.4％、桃果胶0.2％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水；所述桃果胶为实施例2制得的桃果胶。
制备方法如实施例3类似。
与实施例4的区别在于：将柚种皮果胶替换为红枣果胶。
试验例一、柚种皮果胶的性质测定试验
1、试验方法：
对实施例1制得的柚种皮果胶进行理化测定。
(1)果胶含量测定(半乳糖醛酸计)：
(a)四种果胶糖醛酸含量的测定：
采用咔唑硫酸法，称取标准半乳糖醛酸溶于水，配制成浓度为0.1mg/mL的半乳糖醛酸溶液待用。
线性回归方程的建立：分别吸取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1mL，半乳糖酸酸标准溶液于试管中，分别用蒸馏水补齐至1mL，分别加入硫酸溶液6mL，摇匀，然后于100℃水浴中反应20min，冷却至室温后加入1.5g/L咔唑无水乙醇溶液0.2mL，摇匀，在暗反应处放置30min，用分光光度计测定溶液在530nm处的吸光度值。以标准溶液半乳糖醛酸含量(mg)对所测的吸光值(A)作标准曲线，得到线性回归方程。
(b)果胶的糖酸酸含量测定：
将果胶配制成浓度为1mg/mL的溶液，准确吸取样品液0.2mL，用同样方法测定其吸光度，根据所得的回归方程计算果胶中糖醛酸的含量。
(2)酯化度的测定：
采用滴定法进行，称取0.5g果胶粉末与烧杯中加入一定量的混合试剂(5mL浓盐酸与100ml 60％异丙醇相混合)，搅拌10min，移入砂芯漏斗中，用混合试剂洗涤，每次15mL续以60％异丙醇洗涤样品，至滤液不含氟化物(可用硝酸盐溶液检验)为止，最后用20mL60％异丙醇洗涤，移入105℃烘箱中干燥1h，冷却后称重。
称取1/10经冷却的样品，移入250mLl锥形瓶中，用少量乙醇润湿，加100mL不含CO2蒸馏水，于40℃条件下搅拌2h至溶解，加2滴酚酞，用0.1mol/L的NaOH滴定，所用NaOH体积记为V1；之后，向该溶液中加入10mL 0.1mol/L的NaOH搅拌均匀，室温条件下静置2h，再向溶液加入10mL 0.1mol/L的HCl，混匀后形成混合液，最后，用0.1mol/L的NaOH进行滴定，至滴定终点所消耗的NaOH体积记为V2。按照公式(1)计算果胶的酯化度。
按公式DE/％＝V2/(V1+V2)*100,式中:V1，样品的初始滴定体积，mL；V2，样品溶液的皂化滴定体积，mL。
(3)果胶总糖测定：苯酚-硫酸法
(a)四种果胶总糖含量的测定：
采用苯酚-硫酸法，称取标准葡萄糖溶于水，配制成浓度为0.1mg/mL的葡萄糖溶液待用。
线性回归方程的建立：分别吸取0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1mL葡萄糖溶液于试管中，然后用蒸馏水分别补齐至2.0mL。在分别向试管中加入浓硫酸5mL和6％的苯酚1mL，于涡旋振荡混匀后在室温中静置20min左右。以分光光度计测定系列葡萄糖标准品在490nm处的吸光度值(A)，以测得的(A)值对系列葡萄糖标准含量(mg)作图得到线性回归方程。
(b)果胶总糖含量的测定：
将四种果胶都配制成浓度为1mg/mL的溶液，准确吸取配好的果胶溶液各0.1mL，用同样的方法测定其吸光度，根据得到的线性回归方程计算出各种果胶的总糖含量。
(4)果胶PH的测定：
浓度为1％的样品在25摄氏度下的pH值。按照QB2482-2000测定浓度为2.5％的样品在25摄氏度下的pH值。
(5)果胶中蛋白的测定：
称取牛血清蛋白(BSA)标准蛋白溶于水，配制成浓度为0.1mg/mL的蛋白标准溶液待用。
考马斯亮蓝溶液的配制：称取G250考马斯亮蓝于10mg于100mL容量瓶中，加入5mL95％乙醇混匀，再加入10mL 85％的磷酸，用水定容至100mL，过滤后待用。
线性回归方程的建立：分别吸取0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1mL标准蛋白溶液于试管中，加蒸馏水补齐至1.0mL，加入配好的考马斯亮蓝溶液5mL，混匀后室温静置5min用分光光度计测定系列标准蛋白溶液在595nm处的吸光值。以标准溶液鸡蛋白蛋白含量(对测得的吸光值)作标准曲线，得到线性回归方程。
样品测定：将四种果胶都配成浓度为2mg/mL的溶液，准确吸取样品液1mL，按上述相同方法测定处的吸光值，根据回归方程计算出果胶中的蛋白含量。
(6)果胶流变性(粘度)：
取0.5g将不同提取方式的桃果胶样品溶解在50mL去离子水中，使用磁力搅拌器搅拌，配制成质量分数为1％的果胶溶液。采用NDJ-8S数字式旋转粘度计测定果胶流变性，每次测量之前，使样品平衡2min，所有试验至少进行3次重复。
(7)乳化活力和乳化稳定性测定：
将100μL 1％桃果胶乳化液用质量分数为0.1％SDS溶液稀释250倍。以质量分数为0.1％SDS溶液为空白对照，测定在500nm波长下0min时的吸光值(A0)，再测定10min后的吸光值(A10)，其中乳化活力(emulsifying activity，EAI)用A0表示，乳化稳定性(emulsionstability，ESI)按照公式(1)计算
ESI＝(A0×ΔT)/(A0－A10)
式中:A0，0min时测得的样品吸光值；ΔT，2次测定的时间间隔，本次实验中取10min；A10，10min后测得样品吸光度值。
2、试验结果：
柚种皮果胶的理化指标结果如表2所示：
表2柚种皮果胶的理化指标
试验例二、柚种皮果胶的性质测定试验
1、试验方法：
对实施例1制得的柚种皮果胶进行单糖成分的定性和定量测定。1.1、试剂信息：
1.1.1、标准品与试剂：
表3标准品与试剂信息
1.1.2、标准品配制：
取干净的15mL EP管，加入8mL无菌水，依次加入岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、古罗糖醛酸、葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸、氨基半乳糖、氨基葡萄糖各100mg，溶解后用容量瓶定容至10mL，配制成10mg/mL的标准液母液。将上述混标母溶液先稀释100倍，制备成100μg/mL工作液，将取上述溶液按照以下梯度稀释，装入1.5mL的EP管中。
表4单糖混标梯度浓度信息(μg/mL)
1.2、样品前处理：
1.2.1、样品提取：
取干净的色谱瓶，精确称量多糖样品5mg(±0.05mg)，加入1mL 2.5M TFA酸溶液，121℃加热2小时。通氮气，吹干。加入甲醇清洗，再吹干，重复甲醇清洗2-3次。加入无菌水溶解，转入色谱瓶中待测。
1.3、仪器参数：
1.3.1、色谱参数：
色谱系统采用的是Thermo ICS5000+离子色谱系统(ICS5000+，(Thermo FisherScientific，USA)，采用DionexTMCarboPacTMPA10(250*4.0mm，10um)液相色谱柱，进样量为5ul。流动相A(0.1M NaOH)，流动相B(0.1M NaOH，0.2M NaAC)，柱温为30℃，利用电化学检测器对单糖组分进行分析检测。
表5流动相梯度
1.4、单糖组成定性与定量分析：
1.4.1、定性与定量原理：
多糖提取物经酸解后吹干，加无菌水溶解。纯化后的水溶液呈弱酸性，糖以阴离子形式存在。利用CarboPac柱进行分离，脉冲安培检测器，电极采用金电极。根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
2、试验结果：
2.2.1、柚种皮果胶的单糖组成定性结果如图5和图6所示，其中：图5为标准样品离子色谱图，图6为实施例1制得的柚种皮果胶样品离子色谱图。
2.2.2、柚种皮果胶的单糖组成定量结果如表6所示：
表6柚种皮果胶的单糖组成定量结果
| 单糖成分 | 各组分所占百分比(％) |
| 岩藻糖 | 0.18 |
| 鼠李糖 | 2.33 |
| 阿拉伯糖 | 4.57 |
| 氨基葡萄糖 | 0.07 |
| 半乳糖 | 3.53 |
| 葡萄糖 | 38.20 |
| 木糖 | 1.24 |
| 甘露糖 | 0.83 |
| 果糖 | 0.14 |
| 核糖 | 0.06 |
| 半乳糖醛酸 | 48.47 |
| 葡萄糖醛酸 | 0.39 |
由表6可知，本发明从柚子核提取得到的柚种皮果胶的主要成分为半乳糖醛酸(48.47％)和葡萄糖(38.20)，另外还含阿拉伯糖(4.57％)鼠李糖(2.33％)木糖(1.24)。
试验例三、柚种皮果胶的抗氧化性试验
1、试验方法：
对实施例1制得的柚种皮果胶进行抗氧化测定。
(1)总抗氧化能力(T-AOC)测定：
采用Solarbio总抗氧化能力检测试剂盒(Beijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd)。
(2)对DPPH自由基清除能力的测定：
配置2mL浓度为0.1、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mg/mL的果胶溶液，分别加入0.2mmol/L的DPPH乙醇溶液2mL，混合均匀后，暗处放置30min，以蒸馏水调零，在517nm处测吸光度。DPPH自由基清除率公式如(1.2)所示：
DPPH自由基清除率/％＝(1-(A2-A1)/A0)*100％
A0：蒸馏水代替样品时对照溶液的吸光度；
A1：DPPH用无水乙醇代替时样品溶液的吸光度；
A2：测试样品溶液的吸光度。
(3)对超氧自由基清除能力的测定：
将样品配成不同浓度(0.1mg/mL、2.0mg/mL、2.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL)。4.5mL的Tris-HCl缓冲溶液(0.05mol/L，pH8.2)和1mL超纯水混合，25℃水域保温20min，之后快速添加1mL样品和5mL的25mmol/L邻苯三酚溶液，25℃水域条件下放置5分钟，最后加入1mL的8mol/L的盐酸结束反应，在320nm处测吸光度。超氧自由基清率除公式如所示：
超氧自由基清率/％＝(1-(Ai-Aj)/A0)*100％
Ai:加入0.5mL 25mmol/L邻苯三酚溶液吸光度值；
Aj:蒸馏水代替邻苯三酚溶液；
A0:取1mL蒸馏水代替样液所测的吸光度；
2、试验结果：
2.1、柚种皮果胶的抗氧化性如表7所示：
表7柚种皮果胶的抗氧化性
由表7可知，本发明从柚子核提取得到的柚种皮果胶有较强的抗氧化性。在分别的抗氧化试验中浓度越高，抗氧化性越强。超氧自由基清除能力在8mg/mL的时候达到45.25％。
2.2、柚种皮果胶的抗氧化性如图7所示。
试验例四、柚种皮果胶面膜精华的保湿性试验
1、试验方法：
取一块75mm×75mm大小的玻璃板，在玻璃板上贴一层医用透气胶带，用万分之一电子天平分别精确称取0.2g(精确到0.0001g)实施例3、实施例4、实施例5、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4制得的柚种皮果胶面膜精华，然后将其分别均匀涂抹在玻璃板上的医用透气胶带，将该玻璃板分别放入盛有氯化钙饱和溶液的干燥器中，分别测定0h、1h、3h和6h的样品重量，同时计算保湿率，其中：
式中：Y为面膜保湿率，％；M1为放置前样品的质量，g；M2为放置后样品的质
2、试验结果：
试验结果如表8所示：
表8柚种皮果胶面膜精华的保湿性
由表8可知：
(1)本发明提供的柚种皮果胶面膜精华在6h内保湿效果均在97％以上，虽然在6h内保湿率略有降低，但是保湿率仍处于较高水平，保湿率下降缓慢，说明本发明提供的柚种皮果胶面膜精华具有较好的保湿性，而且该柚种皮果胶面膜精华的保湿效果持续性强；
(2)而缺少桃果胶的对比例2和缺少柚种皮果胶的对比例3，在1h内，保湿率为90～92％左右，且在3h后，保湿率下降到80％以下，说明对比例2和对比例3制得的面膜保湿效果较差；
(3)而将柚种皮果胶替换为柚皮果胶的对比例1和将柚种皮果胶替换为红枣果胶的对比例4，虽然在1h内，保湿率处于90％以上，但是3h后，保湿率下降显著，说明对比例1和对比例4制得的面膜保湿效果持续性较差。
基于本发明柚种皮果胶面膜精华保湿持续性的原理，本申请人推测是：面膜中以柚种皮果胶耦合桃果胶形成胶凝覆盖在皮肤表面，使桃果胶中的果酸充分发挥保湿作用，而且柚种皮果胶耦合桃果胶形成的难以吸收大分子凝胶不仅能减少皮肤水分的散失，还可以快速促进水分吸收，维持皮肤表面的湿润，充分发挥其保湿和抗氧化的作用，同时可以促进镶嵌在凝胶中的可吸收的海藻糖和透明质酸钠保湿剂渗透到真皮层，促进血液微循环，进一步促进皮肤对营养物质的吸收，从而进一步延长面膜的保湿性。
试验例五、柚种皮果胶面膜精华的抗氧化性试验
1、试验方法：
对实施例3、实施例4、实施例5、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4制得的柚种皮果胶面膜精华进行超氧自由基清除能力测试，测试方法参考试验例一，记录3次结果并计算其均值作为结果。
2、试验结果：
试验结果如表9所示：
表9柚种皮果胶面膜精华的抗氧化性
| 超氧自由基清除能力(％) | |
| 实施例3 | 48.26 |
| 实施例4 | 50.23 |
| 实施例5 | 48.08 |
| 对比例1 | 40.21 |
| 对比例2 | 23.83 |
| 对比例3 | 20.67 |
| 对比例4 | 42.79 |
由表9可知，本发明提供的柚种皮果胶面膜精华具有较好的抗氧化能力。
试验例六、柚种皮果胶面膜精华的稳定性试验
1、试验方法：
对实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华进行耐热、耐寒、冷热交替和离心测试，考察柚种皮果胶面膜精华的稳定性。
1.1、耐热试验：将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华于40℃放置24h，取出冷却至室温后，观察试验前后有无油水分离。
1.2、耐寒试验：将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华于-6℃放置24h，取出冷却至室温后，观察试验前后有无油水分离。
1.3、冷热交替试验：将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华于40℃放置24h，取出后放于室温12h，在于-6℃放置24h，观察试验前后有无油水分离。
1.4、离心试验：在20℃，3000r/min条件下分别离心将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华15min，观察试验前后有无油水分离。
2、试验结果：
2.1、耐热试验：将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华于40℃放置24h，取出冷却至室温后，柚种皮果胶面膜精华在试验前后无油水分离。
2.2、耐寒试验：将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华于-6℃放置24h，取出冷却至室温后，柚种皮果胶面膜精华在试验前后无油水分离。
2.3、冷热交替试验：将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华于40℃放置24h，取出后放于室温12h，在于-6℃放置24h，柚种皮果胶面膜精华在试验前后无油水分离。
2.4、离心试验：在20℃，3000r/min条件下分别离心将实施例3、实施例4和实施例5制得的柚种皮果胶面膜精华15min，柚种皮果胶面膜精华在试验前后无油水分离。
说明本发明提供的柚种皮果胶面膜精华具有较好的稳定性。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (7)
1.一种柚种皮果胶面膜精华，其特征在于，由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.2～1％、桃果胶0.2～1％、甘油1～9％、透明质酸钠0.2～1％、海藻糖0.4～0.6％、尿囊素0.1～0.3％、山梨酸钾0.1～0.2％，余量为去离子水；
所述柚种皮果胶的提取方法为：
取柚子核，加入水，所述柚子核与水的固液比为1g:3mL，加热到100℃，水浸提2～4h，在孔径20目，压力101.325kpa的条件下过滤60min，取滤液，将滤液在-80℃下冷冻12h后，在20℃条件下干燥48h，即得；
所述桃果胶的提取方法为：
A将桃渣加入95％(v/v)的乙醇中进行分散混匀，得悬浮液；
B将步骤A得到的悬浮液进行抽滤，接着加入95％(v/v)的乙醇，混匀后抽滤，接着再加入丙酮，混匀后抽滤，取白色粉末状固体，于40℃烘箱中干燥至恒重，得桃粉；
C将步骤B得到的桃粉加入电解水溶液，超声提取2次，每次提取1h，离心，得残渣和上清液，将上清液合并后真空浓缩至原体积的1/3，按1:2.5的比例加入95％(v/v)的乙醇进行醇沉，静置2h，得粗果胶液；
D将步骤C得到的粗果胶液进行离心，收集固体果胶沉淀，用72％(v/v)的乙醇进行反复冲洗，冷冻干燥，即得。
2.如权利要求1所述的柚种皮果胶面膜精华，其特征在于，由以下成分及其重量分数组成：
柚种皮果胶0.4％、桃果胶0.2％、甘油5％、透明质酸钠0.4％、海藻糖0.5％、尿囊素0.2％、山梨酸钾0.1％，余量为去离子水。
3.如权利要求1所述的柚种皮果胶面膜精华，其特征在于，所述步骤A中桃渣与乙醇的固液比为1g:6.4mL。
4.如权利要求1所述的柚种皮果胶面膜精华，其特征在于，所述步骤B中桃渣与乙醇的固液比为1g:3.2mL，所述桃渣与丙酮的固液比为1g:3.2mL。
5.如权利要求1所述的柚种皮果胶面膜精华，其特征在于，所述步骤C中电解水溶液为使用0.5％(v/v)的草酸铵溶液加入水调节pH为3～7的电解水溶液，所述桃粉与电解水溶液的料液比为1g:(30～70)mL。
6.如权利要求1所述的柚种皮果胶面膜精华，其特征在于，所述步骤C中超声处理的条件为：所述超声提取功率为200W，超声提取时间为40～80min，所述超声提取温度为40～80℃。
7.如权利要求1～6任一所述的柚种皮果胶面膜精华的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1称取配方量中总体积50％去离子水，加热至70～80℃，加入尿囊素搅拌至完全溶解，接着加入柚种皮果胶、桃果胶、甘油、透明质酸钠和海藻糖，搅拌溶解后冷却至40～50℃，得混合液；
S2称取配方量中总体积10％去离子水，加入山梨酸钾搅拌均匀，接着加入步骤S1得到的混合液中，接着将剩余的去离子水加入，搅拌均匀，即得。
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